Eleonora Porcu, Maria Dirodi, Giuseppe Damiano, Antonia Bazzocchi,StefanoVenturoli
La aneuploida como consecuencia de la criopreservacin de embriones
A pesar de que no existen evidencias de que la criopreservacin de embriones aumente
la frecuencia de problemas en el nacimiento, siendo la incidencia de anomalas cromosmicas, tales como el sndrome de Down, y de malformaciones congnitas leves parecida a la encontrada en ciclos estndar de fecundacin in vitro (FIV), es posible que alteraciones cromosmicas an ms graves, como la aneuploida, deriven de mtodos de criopreservacin y que stas no sean clnicamente evidentes en cuanto a causa de adherencia fallida o aborto muy precoz.
La incidencia de la tetraploida en tejidos humanos abortivos y en nios nacidos
concebidos espontneamente est comprendida entre 4% y 8% (64, 65) y es debida probablemente a una duplicacin genmica en ausencia de precedente divisin mittica (65); al contrario, en los embriones congelados/descongelados el principal mecanismo generador de aneuploida parece ser la fusin espontnea de blastmeros.
La fragilidad de los embriones en el estadio inicial y su sensibilidad a numerosos
factores exgenos como virus, polietilenglicoles o campos elctricos, es bien conocida (66, 67); por tanto, es fcil suponer que tambin el proceso de congelacin- descongelacin pueda determinar daos celulares, de particular modo en las fases iniciales del desarrollo embrionario. Roturas en la zona pelcida y daos en la membrana celular o en los componentes intracelulares han sido indicadas en numerosos estudios como consecuencia de la criopreservacin (68, 69).
El primer estudio sobre la fusin celular de blastmeros como causa de aneuploida
celular fue llevado a cabo en 1984 (70) y no mostr diferencias entre los diferentes crioprotectores utilizados a la hora de generar daos celulares (excepto el glicerol que fue rpidamente abandonado a causa de su peligrosidad); en cambio atribuy ms importancia a la baja calidad embrionaria. Sin embargo, el uso del propanodiol como crioprotector ha sido relacionado con la formacin de clulas poliploides a travs del mecanismo de fusin espontnea de los blastmeros, como pone en relieve un estudio llevado a cabo en 1991 (71), mientras que algunos mtodos de congelacin rpida (vitrificacin) podran causar un aumento de entrecruzamiento mittico (72, 73) y de los daos cromosmicos (68, 69).
Los crioprotectores contribuyen probablemente a determinar la fusin espontnea de los
blastmeros causando la deshidratacin celular y la hinchazn osmtica, los puentes citoplasmticos podran ser otro factor importante en introducir el proceso de fusin, pero no se reconocen nunca en el examen con microscopio electrnico de los embriones humanos en fase inicial (75, 76).
En 1998 se llev a cabo un estudio mediante FISH (hibridacin in situ) sobre la
aneuploida y sobre el mosaico de cromosomas X, Y y 1 en embriones humanos congelados en el segundo y tercer da de su desarrollo que evidenci que el 57% de los embriones descongelados que presentaban parada en la divisin en las primeras 24 horas mostraban anomalas cromosmicas (77). En el 2000, un estudio evidenci la presencia de fusin espontnea de los blastmeros, generalmente poliploida y mosaicismo cromosmico, en un grupo de 1141 embriones congelados en el da 2 y 873 embriones congelados en el da 3 mediante la tcnica estndar con propandiol (78). El proceso de fusin se observ con una frecuencia de 4,6% en el primer grupo (da 2) y de 11,5% en el segundo grupo (da 3), esto significa que los embriones humanos en fase precoz de desarrollo son ms susceptibles al crio-dao con respecto a los embriones ms viejos, ya que la fluidez y otras propiedades de la membrana celular cambian durante el desarrollo celular. La fusin de dos o ms blastmeros implica la formacin de clulas hbridas multinucleares, clara seal de alteracin de la ploida, y de embriones o internamente poliploides (tetraploides, hexaploides, o con mutaciones ms complejas) o mosaicos con clulas poliploides o normales. Los cambios del nmero de cromosomas en los embriones humanos descongelados fueron demostrados en mosaicos utilizando la FISH con sondas de ADN que caracterizaban secuencias unvocas sobre los cromosomas 9, 15, 17 y 22, que indic la presencia de seales de fluorescencia ya sean tetraploides o diploides en los ncleos interfsicos. Entre los embriones alterados los enteramente poliploides (16%) fueron menos frecuentes que los mosaicos (84%). Adems, el 70% de los embriones alterados result ser morfolgicamente bueno, a diferencia de lo extrado en los estudios precedentes.