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QUMICA ANALTICA AVANZADA (UDC)

QUMICA ANALTICA AVANZADA (PARTE DE SO

LEDAD)

MUNIATEGUI, SOLEDAD 09-10

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Qumica Analtica Avanzada 5

(Parte de Soledad)

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ndice
TEMA 5: INTRODUCCIN AL ANLISIS DE TRAZAS........................................................ 4
5.1 Concepto de anlisis de trazas: ........................................................................... 4
Tcnicas de determinacin: .................................................................................... 5
Etapas del anlisis de trazas .................................................................................. 5
Dificultados en el anlisis de trazas: ..................................................................... 5
Seleccin de un mtodo de anlisis. ..................................................................... 6
5.2 Fuentes de contaminacin de la muestra y su control: ..................................... 6
Fuentes de contaminacin en el laboratorio: material ......................................... 9
Fuentes de contaminacin en el laboratorio: almacenamiento ........................ 11
Fuentes de contaminacin: Reactivos ................................................................. 12
Caractersticas del agua de laboratorio ................................................................... 12
TEMA 6: ASEGURAMIENTO DE CALIDAD EN EL ANLISIS DE TRAZAS ....................... 15
Definicin: .............................................................................................................. 15
6.1 Garanta de calidad, control de calidad y evaluacin de calidad: ................... 15
Propiedades analticas: ......................................................................................... 17
6.2 Trazabilidad: ........................................................................................................ 18
Tipo y jerarqua de patrones y su trazabilidad..................................................... 19
Tipos y jerarqua de patrones y su utilidad .......................................................... 20
6.3 Materiales de referencia: ................................................................................... 20
6.4 Validacin del mtodo analtico ......................................................................... 22

Caractersticas de un mtodo analtico (es lo que se garantiza) ............. 22

Cuando es necesario validar? .................................................................... 22

Proceso de desarrollo, validacin y uso de un mtodo analtico............. 23

procedimiento de validacin ...................................................................... 24
TEMA 7: OPERACIONES PREVIAS EN EL ANLISIS DE TRAZAS .................................. 30
7.1 Conceptos bsicos de la metodologa ............................................................... 30
Tipos de mtodos de anlisis: .............................................................................. 30
7.2 etapas del anlisis de trazas: ............................................................................ 31
Definicin del problema: ....................................................................................... 31
Toma y preparacin de muestras: ........................................................................ 31
7.3 Pasos a seguir en la preparacin de la muestra .............................................. 38
Etapas de preparacin de muestras .................................................................... 38
7.4 Mtodos de preparacin de muestras para la determinacin de analitos
inorgnicos ................................................................................................................. 40
Muestras lquidas .................................................................................................. 40
Muestras gaseosas ............................................................................................... 41
Muestras slidas ................................................................................................... 42

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7.5 Mtodos de preparacin de muestras para la determinacin de analitos

orgnicos .................................................................................................................... 54
Extraccin: .............................................................................................................. 55
Procesos de extraccin: ........................................................................................ 56
7.6 Especiacin ......................................................................................................... 66
Tratamiento de la muestra para determinacin de especies ............................ 66
Importancia de la especiacin en el medio ambiente ........................................ 67
Principales problemas ........................................................................................... 67
Diferenciacin de formas orgnicas e inorgnicas. ............................................ 68
Especiacin de Arsnico ....................................................................................... 68
Tcnicas hbridas: .................................................................................................. 69
Tema 8: Tcnicas cromatogrficas en el anlisis de trazas....................................... 70
Clasificacin de los procesos cromatogrficos ....................................................... 70
Cromatogramas ......................................................................................................... 71
Fenmenos de difusin: ........................................................................................ 73
Cromatografa de gases ............................................................................................ 75
Detectores: ................................................................................................................. 79
Cromatografa de lquidos ......................................................................................... 79

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TEMA 5: INTRODUCCIN AL ANLISIS DE TRAZAS

Qumica analtica: ciencia metrolgica que desarrolla, optimiza y aplica
herramientas de amplia y variada naturaleza, que se concretan en procesos de
medida encaminados a obtener informacin bioqumica de la calidad, tanto parcial
(presentacin/concentracin/estructura) en muestras de especies-analitos
(bio)qumicos, como global sobre materiales o sistemas de amplia naturaleza
(bioqumica, qumica y biolgica) en el espacio y en el tiempo para poder resolver
problemas cientficos, tcnicos, econmicos y sociales.

Metrologa

Problemas cientfico-tcnicos
econmicos y sociales

Trazabilidad informacin
(Objetivo)

Problemas Analticos

Calidad Propiedades analticas

Proceso analtico

Objetivo: resolver problemas para lo cual necesitamos informacin de calidad.

5.1 Concepto de anlisis de trazas:

La cantidad del analito va a ser muy baja, y cuando hablamos de concentracin
baja nos referimos a:
El componente mayoritario (1-100% de la concentracin)
El componente minoritario (por convenio cuando se encuentra en un rango
de 0,01-1%)
Elemento traza, compuesto donde el analito tiene una concentracin de
0,01% (o 100 ppm)
Elemento ultratraza (1ppb= 1ng/kg)

No es fcil asignar un valor numrico lmite al anlisis de trazas, de forma general

se considera que cuando la concentracin del analito es lo suficientemente baja
como para producir dificultades para obtener resultados vlidos. Vamos a
determinar concentraciones en nivel traza (ppm=11g/g= 1mg/L)

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La cantidad de muestra para el anlisis es otro factor determinante en el anlisis.

Anlisis clnicos o forenses: microanlisis
El anlisis de trazas est limitado por el tipo de muestra (es decir la cantidad que
contenga) y el tipo de compuesto que sea.
Ejemplo:
Anlisis de una muestra en la que se ha disuelto un grano de sal de mesa
(aproximadamente 0,2mg) en un barril de 200L de agua. La concentracin de sal
resultante sera de 1ppb
El grano de sal y la disolucin contienen la misma cantidad de sodio y cloro, sin
embargo los mtodos de anlisis son totalmente distintos.
Grano de sal: muestras pequeas y concentradas (microanlisis)
Disolucin: muy baja concentracin (anlisis trazas)

Tcnicas de determinacin:
Tcnicas clsicas: disolucin de la muestra, eliminacin de especies
interferentes por precipitacin o agentes complejantes, volumetras,
gravimetras, colorimetras
Tcnicas instrumentales: AAS con atomizacin electrotrmica, tcnicas
cromatogrficas, fluorescencia de RX, tcnicas que permiten determinar
concentraciones cada vez ms bajas de analitos y separar mezclas cada vez
ms complejas.
Aplicaciones:
- Industria: control de calidad
- Medio ambiente: compuestos txicos
- Proteccin del consumidor. Alimentos
- Ciencia forense: caracterizacin de compuestos materiales y medios
biolgicos
- Anlisis clnicos: anlisis de parmetros qumicos en medios biolgicos.
- Etc

Etapas del anlisis de trazas

1. Definicin del problema
2. Toma de muestra
3. Separacin del analito de inters de la matriz (si la separacin es selectiva
el paso 4 no hace falta)
4. Eliminacin o limpieza (clean up) de las sustancias interferentes
5. Concentracin de analito (tenemos trazas, concentracin baja, asique
adecuamos la concentracin analtica para determinacin posterior)
6. Determinacin analtica
7. Proceso de los datos e interpretacin de los resultados
8. Resolucin del problema

Dificultados en el anlisis de trazas:

En cualquier caso requiere un conocimiento amplio y una gran experiencia
analtica.
Riesgo de contaminacin de reactivos, aparatos o del medio de laboratorio puede
afectar a los resultados

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Prdidas de analito por adsorcin, degradacin o durante las operaciones

analticas (son ms crticas cuanto menor sea la concentracin) pueden impedir la
deteccin de sustancias que estn presentes en la matriz en concentraciones del
lmite de deteccin
Los constituyentes de la matriz pueden interferir con los sistemas de deteccin
empleados (valores anormalmente altos: necesaria una purificacin ms
exhaustiva o detectores ms selectivos)
Los resultados obtenidos con tcnicas instrumentales son menos precisos que los
obtenidos con los procedimientos clsicos.
Es difcil comprobar la aplicabilidad del mtodo debido a que son escasos los
materiales de referencia disponibles para el enorme rango de aplicaciones del
anlisis de trazas.

Seleccin de un mtodo de anlisis.

Factores que influyen en la metodologa para resolver un problema:
Informacin requerida
o Informacin cualitativa o cuantitativa
o Informacin sobre el contenido total o determinacin de especies
o Exactitud y precisin
o Tiempo para dar resultados: inmediato, tiempo real, no prioritario
Muestra
o Estado fsico
o Estabilidad Almacenamiento y conservacin
o Homogeneidad Tamao de la muestra
o Cantidad disponible etapas de tratamiento
o Tipo de matriz
Analitos:
o Uno o varios, complejidad
o Naturaleza orgnica o inorgnica
o Macroconstituyentes, microconstituyentes o trazas
Recursos instrumentales y humanos
Coste
Variables a tener en cuenta en un laboratorio:
o Condiciones ambientales tipo y calidad del material
o Reactivos limpieza
o Contenedores y material de vidrio
o Patrones y su preparacin
o Equipos instrumentales: mantenimiento y calibracin
o Frecuencia de calibrado

5.2 Fuentes de contaminacin de la muestra y su control:

Anlisis de blancos: reactivos y material empleado en el procedimiento
Son necesarios mltiples blancos en todas las tandas de anlisis
Fuentes de contaminacin:
o Ambiente del laboratorio
o Material de laboratorio
o Reactivos
Fuentes de contaminacin en el laboratorio:
o El aire del laboratorio

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o Contaminantes ambiente del laboratorio: en forma gaseosa,

particulada, lquida o aerosoles
o Compuestos de naturaleza inorgnica y orgnica
o Origen:
 Generados en el propio laboratorio
 Procedentes de la construccin del edificio (pinturas,
muebles, suelos, etc)
 Ambiente atmosfrico exterior del edificio: ambiente rural,
urbano o industrial
o Concentracin de partculas en ambiente exterior varan con las
condiciones atmosfricas (lluvia, viento...)

Edificios modernos ventilacin forzada. En ocasiones

no es suficiente
Caractersticas y origen de las partculas encontradas frecuentemente en el
laboratorio.
Forma %polvo Tamao Origen
Esfrica 10 0.01-300 Condensacin de lquidos y formacin de gotas
Cbica 30 0.1-1000 Fragmentacin de materiales cristalinas
Fibra 15 0,1-500
hojuela 45 0.1-100

Concentraciones en g/g (ppm) de algunos metales en polvo de laboratorio.

Cd Co Cu Fe Mn Ni Pb Zn
76 147 406 48300 393 380 2360 2400
Es importante conocer estas concentraciones porque podemos dar falsos
resultados
Influencia humana:
o Lpidos huellas dactilares
o Productos de higiene personal (champs, jabones, pueden
contaminar blancos de Se, Mg, Zn)
o Toser, estornudar: 6 millones de gotas > 0,5 m(micras)
o Piel (clulas muertas, fragmentos de clulas de 20 40 micras de
dimetro)
Materiales de laboratorio:
Material Zn Fe Sb Otros
papel 49 1 - Cr(0,5)
cinta plstica 3000 67 - -
cinta adhesiva 1,5 5 - -
tubo PVC 7 270 2,7 Cu (0,6)
Tubera de Cr(420),
4000 - 0,36
goma Co(7,5)

Para conseguir un ambiente limpio en el laboratorio:

Se puede enfocar de varias formas:
- Controlar el aire que est en contacto con mi muestra (el aire entra
filtrado)
- Proteger el tratamiento de la muestra

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Campanas/cabinas de extraccin:
Hay diversos tipo de campanas, las que tenemos en el laboratorio no se
consideran porque protege al analista y al laboratorio de lo que se est
haciendo dentro,

Filtro Eficacia
Prefiltro 80-95% hay normas oficiales para hablar de la calidad
HEPA > 99.97% del aire en el laboratorio.
ULPA > 99,997%

Cabinas de flujo laminar: su funcin es la de mantener el rea libre de

partculas. Esto se consigue con un dispositivo que fuerza el paso del aire a
travs de un filtro HEPA situado o bien en el techo o en un lateral con una
eficacia del 99.999% retiene partculas menores de 0,2. Los diferentes
tipos de cabina de flujo laminar se disean con diferentes propsitos:
o Proteccin personal
o Proteccin del producto, experimento o cultivo que est en el interior
de la cabina de los contaminantes exteriores o de la contaminacin
cruzada con otros productos que estn dentro de la misma cabina
o Proteccin ambiental.
A veces es necesario tener un laboratorio en condiciones de atmsfera
limpia (sera como una campana gigante para todo el laboratorio) para
determinados procesos como por ejemplo una molienda.
Sala blanca: laboratorio limpio
Materiales apropiados para guantes en un anlisis inorgnico de trazas:
o Neopreno/PVC: manipulacin de tanques de cidos y disolventes
o Goma/latex: manipulacin de cidos dbiles. Permeable para
disolventes aromticos y alifticos
o Polietileno: manipulacin de piezas crticas de equipos. Proteccin de
aparatos y muestras frente al analista.
Vestimenta en ambientes limpios:
o Campana de flujo unidireccional en laboratorio convencional: bata de
laboratorio, guantes de polietileno (cubrir partes del cuerpo con ropa
no contaminada)
o Clase 100.000: ropa mnimamente especializada, bata, gorro, funda
para zapatos
o Clase 10.000-1000: ropa limpia, guantes, mascarilla, sin cosmticos
y sin movimientos rpidos.
o Clase 100 a 10: cambio completo de ropa, guantes especiales,
fundas para pies, contacto mnimo con equipo crtico
o < clase 10: sistema robtico, si es posible no humano.
Mantenimiento de ambientes limpios:
o Materiales y caractersticas de construccin
o Sistemas de lavado de alta presin, agitacin ultrasonidos, disolvente
hidrofbicos...
o Un mtodo simple y efectivo es el uso de un tejido empapado en
etanol o acetona. El tejido no debe producir fibras.
Almacenamiento de la muestra:
La prediccin de la estabilidad puede realizarse fcilmente en las
disoluciones patrn, pero en el caso de muestras no es tan sencillo que

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pueda influir la complejidad de la matriz en la que se encuentran los

compuestos a analizar. Condiciones de almacn:
Condiciones Muestras adecuadas Muestras inadecuadas

muestras con gran frutas y vegetales frescos

Congelacin actividad enzimtica
(-20C) Muestras que se lican
Analitos poco sensibles tras la congelacin

suelos y minerales
Refrigeracin a Muestras con posible
frutas y vegetales
4C actividad enzimtica
muestras acuosas
Muestras secas en polvo
alimentos frescos
temperatura granuladas
ambiente minerales
fluidos biolgicos
analitos estables
muestras ms
Desecador muestras higroscpicas higroscpicas que el
desecante

Mtodos fsicos y qumicos de conservacin de muestras:

Mtodo ejemplos aspectos crticos

muestras slidas No adecuado para
liofilizacin
muestras lquidas analitos voltiles
Muestras acuosas Comprobar la estabilidad
Irradiacin
muestras biolgicas del analito
Comprobar la estabilidad
del analito
antioxidantes Lquidos y disoluciones
comprobar
interferencias

sangre y muestras comprobar

Anticoagulantes
clnicas interferencias especficas

esterilizacin de fluidos Comprobar la estabilidad

Autoclavado
biolgicos del analito

Fuentes de contaminacin en el laboratorio: material

Pueden introducir contaminantes traza en la muestra
Presenta una superficie activa en la que el analito puede adsorberse. La
vigorosidad microscpica de la superficie de lso materiales puede
comportarse como centros o ncleos de precipitacin de los materiales de la
disolucin.
Vidrio: es el elemento ms frecuente en el laboratorio. Aunque parece inerte
es una superficie altamente activa (grupos cidos Si-Cl) Tambin hay vidrios
borosilicatados, da problemas en disoluciones con pH altos (en disolucin)
pH bajos (disolv y adsorcin del metan en la superficie del vidrio). Adems la

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superficie del vidrio es muy reactiva qumicamente, los grupos SiOH de

naturaleza cida se comporta como intercambiadores de iones. En el
anlisis de cationes es frecuente que se produzca la reaccin:

Vidrio SiOH + H+ Vidrio-SiOH + H+

El numero de sitios activos vara en cada tipo de vidrio y est afectado por es
uso que se le da al material (calentamiento: disminucin de la actividad
cambiadora de iones; tratamiento cido o alcalino: aumento de sitios
activos)
Tipos: soda lima A, soda lima B, borosilicatos A, borosilicatos B, resistente a
lcalis de resistencia qumica, slica fuerte, slica vidrio.
Plsticos:
1. Polietilenos de baja densidad (pdpe): formadas por la polimerizacin a
elevada presin del etileno y baja la densidad (2%) le da una estructura
abierta, no reactiva a temperatura ambiente, pero es atacado fcilmente
por los agentes oxidantes fuertes y algunos disolventes oxigenados.
Puede emplearse hasta 80 C no aporta fuerte importante de
contaminacin metlica
2. Polietilenos de alta densidad (HdPE): su estructura es ms empaquetada
que la LDPE y por tanto presenta menor densidad y resistencia qumica.
Se puede emplear hasta 110 C puede presentar riesgo de
contaminacin de metales como Al, Si, Ti, V, zn empleado en su
formacin.
3. Polipropileno (PP): preparado catalticamente a partir de propileno, las
cadenas metiladas ramificadas lo hace ms susceptible al ataque de
agentes oxidantes fuertes que el anterior. Pero puede emplearse a mas
de 130 C
4. Polietilpenano
5. Poliestireno (Ps): es un polmero rgido, duro y transparente que por su
estabilidad es muy utilizado, es estable en disoluciones acuosas, pero
soluble en disolventes aromticos y halogenados. T mxima 60 C
6. Policarbonato (PC): Ester lineal de cido policarbnico, con estabilidad y
amplio rango de temperaturas se emplea con frecuencia en la
fabricacin de material de laboratorio como los desecadores a vaco. El
polmero puede ser afectado por cidos y bases fuertes y es soluble en
numerosos disolventes orgnicos
7. Polimetil-metacrilato (acrlico): plstico rgido transparente y resistente a
los cidos y bases inorgnicas pero atacado por numerosos disolventes
orgnicos (T=70 C)
8. Cloruro de polivinilo (PVC): La estructura es parecida a la del polietileno
donde un Cl sustituye un H en carbonos alternos. PVC es duro, rgido
pero se puede hacer suave y manejable
9. Politetra-fluoroetileno (PTFE): no se altera con disolventes orgnicos pero
es permeable a los gases, disolventes y cidos. Se puede emplear a
temperaturas superiores entre 250 y 300 C. Tiene baja conductividad
trmica lo que es una ventaja en algunas aplicaciones, pero puede ser
un problema en los aparatos tales como vasijas de digestin que tienen
que ser calculadas. El riesgo de contaminacin metlico es bajo.
10. Perfluoro-alcoxy-Fluorocarbono (PFA): son copolmeros translucidos
termoplsticos de PTFE y un perfluoro aquil vinil ter. Tienen
caractersticas similares al PTFE, el PFA no absorbe en UV y parte del Vis

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y tienen un punto de fusin mayor de 320 C. La resistencia qumica es

similar al PTFE y cubre el rango de temperaturas 260-270 C. Es
resistente a la absorcin por encima de 200 C hacindolo muy
adecuado para el almacenamiento de disoluciones de trazas y digestin
de muestras.
11. Polietilen-terftalato (PET): es un plstico verstil ampliamente empleado
en la industria alimentaria. Tiene un punto de fusin de 234 C. La
resistencia a productos qumicos y disolventes es elevada. La
contaminacin por metales traza posible es Ti, Ge y Sb.
Siliconas: la silicona tiene tres grandes aplicaciones en el laboratorio, como
sustituto de la goma natural, en grasas y como agente antiespumante.
o A diferencia de la goma natural, no contiene plastificantes y/o
sulfatos y tiene excelentes propiedades trmicas entre 70 y 260 C
o Tiene una gran aplicacin en tubos de conexiones, sistemas de
sellado
o Las grasas de silicona han sustituido a las grasas hidrocarbonada en
el laboratorio, son intrnsecamente ms puras, pero si contaminan el
material de vidrio pueden necesitar lavados con H2SO4
o Como agente antiespumante ofrecen ventajas
Metales:
o Pt: material inerte, elevado pf, elevada conductividad trmica
o Acero: til en equipos, resistente a la corrosin
o Al: proteccin de distintos materiales o muestras de oxigeno al aire,
la luz
o Titanio: pf 1860 C, excelente resistencia a la corrosin, H2SO4

Fuentes de contaminacin en el laboratorio: almacenamiento

Prevenir las prdidas o ganancias de humedad

Prevenir la degradacin fotoqumica: almacenamiento en la oscuridad o en
contenedores de vidrio protegidos por papel de aluminio
Muestras con compuestos voltiles: recipientes de cierre hermtico y
almacenadas en frio para reducir la presin de vapor de los compuestos
Todo tipo de envase debe estar limpio y seco. Agentes de limpieza
residuales: puede contaminar la muestra si no se eliminan completamente
durante el lavado. Los detergentes pueden contener boratos y fosfatos y
algunos disolventes impuros pueden contener residuos orgnicos
El tipo de limpieza depender de la aplicacin en la que el envase se
emplee.
Envase de almacenamiento:
o Proteger la muestra de la degradacin por agentes externos y
contaminacin del laboratorio
o No deben contribuir con analitos de extraos a la muestra y no deben
absorber analitos u otros constituyentes de la muestra
o Los envases de vidrio son adecuados para la mayora de muestras
o Cuando las muestras son sensibles a la luz, deben emplearse vidrios
mbar o bien proteger el envase con papel de aluminio
o El envase se debe rellenar completamente con la muestra slida
evitar oxidacin de la superficie

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o Los envases de PTFE y polietileno, tambin pueden emplearse en

slidos, efectos electrostticos, en muestras lquidas o semilquidas
de naturaleza orgnica, interferencias
o Lquidos. Llenado: debe permitir la mezcla si la muestra no es
homognea (rellenar con gas inerte)
o Problemas posteriores de la desorcin de elementos traza presentes
en vidrio (prevencin: limpieza) deben lavarse en medio acido para
desorber cualquier elemento metlico de su superficie. Se
recomienda acidificar hasta pH = 1
o Una vez lavados los envases de vidrio deben mantenerse inmersos
en agua destilada o secos protegidos con papel para evitar
contaminacin del laboratorio.
o Para hidrocarburos aromticos y pesticidas se puede producir la
adsorcin a la superficie de los envases de vidrio. Envases deben
enjuagarse con los solventes de extraccin

Fuentes de contaminacin: Reactivos

En anlisis de trazas: necesidad de reactivos de elevada pureza
Seguridad en su manejo. Riesgos potenciales
Tendencia a emplear reactivos que minimizan los riesgos potenciales sobre
el trabajador, sus compaeros, ambiente y medioambiente
Coste de reactivos
Calidades
o Grado tcnico
o Reactivo de calidad analtica
o Alta pureza o para anlisis de trazas
Grado de pureza de un lote (comprobar siempre)
o Anlisis de blancos
Precauciones de manejos de reactivos:
o No introducir pipetas o esptulas en el reactivo original
o No devolver el exceso a la botella original
o Almacenar disoluciones o productos slidos segn las instrucciones
del fabricante
o Todas las disoluciones tienen que estar etiquetadas (nombre,
concentracin y condiciones de preparacin) cuanto ms diluida hay
que tener ms cuidado
o Etiqueta indeleble o protegida para que no se deteriore
o Disoluciones diluidas no se deben almacenar ms de 6 meses,
incluso aunque se consideren estables
o Cuidado con muestras almacenadas, riesgo de contaminacin
cruzada
o No abrir botellas de reactivos puros en atmosferas contaminadas.
Usar campanas extractoras
o Reducir la cantidad de reactivos utilizados

Caractersticas del agua de laboratorio:

Parmetros para caracterizar el agua de laboratorio: dureza, conductividad y
resistividad, pH
Accin de diversas tecnologas para purificar el agua:

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 13

o Procedimiento: contaminantes eliminados

o Destilacin: parcialmente todos los contaminantes
o Desionizacin por intercambio inico: sales
o Adsorcin: materia orgnica disuelta y cloro libre
o Microfiltracin: partculas y bacterias
o Ultrafiltracin: macromolculas tamao > 10000D (patgenos
endotoxinas bacterias) y virus
o smosis inversa: Parcialmente todos los contaminantes
o Electro-desionizacin: sales.
o Foto-oxidacin: trazas de materia orgnica (tambin elimina
patgenos, virus)
Estas tcnicas se pueden utilizar combinadas o aisladas, para obtener un agua de
mayor calidad hay que combinar la mayor parte de estas.
Normativa ISO del agua: complementa los siguientes tres niveles de calidad
del agua:
o Calidad1:
Agua fundamentalmente libre de contaminantes disueltos o inicos
coloidales y orgnicos. Esta agua es adecuada para los requisitos
analticos ms exigentes, incluyendo los de la cromatografa lquida
de alto rendimiento. Debe producirse mediante el tratamiento
adicional del agua de calidad 2, por ejemplo, mediante smosis
inversa o intercambio inico, seguido de filtracin a travs de un filtro
de membrana de poro de 0,2m para eliminar las partculas o
efectuar una redestilacin
o Calidad2:
Agua con muy bajo nivel de contaminantes inorgnicos, orgnicos,
coloidales y adecuada para fines analticos sensibles, incluyendo
espectrometra de adsorcin atmica y para la determinacin de
constituyentes en cantidades traza. Se puede producir mediante
destilacin mltiple, intercambio inico u osmosis inversa, seguida
de destilacin.
o Calidad3:
Adecuada para la mayora de los trabajos

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 14

Tratamiento dado a los distintos tipos de calidad de agua y algunas

aplicaciones:
Patrn de agua Tratamientos Aplicaciones
Anlisis cualitativo, determinacin de
compuestos minoritarios o
Tipo III-IV: grado de carbn activo, filtros de mayoritarios, enjuague de material de
laboratorio fibra, smosis inversa vidrio, medios de cultivo
bacteriolgico, produccin del agua
de grado reactivo o superior

carbn activo, filtracin, soluciones o reactivos para anlisis,

smosis inversa, electro- patrones, tampones, medios de
tipo II: Grado analtico desionizacin o resinas cultivo microbiolgicos, agua de uso
intercambiadoras de farmacutico
iones

carbn activo, filtracin, Anlisis de trazas: HPLC, GC.

tipo I: grado de reactivo smosis inversa, resinas Enzimologa, ingeniera gentica
de intercambio,
microfiltracin

carbn activo, filtracin,

smosis inversa, resinas Anlisis de ultratrazas, medios para
Tipo superior a I:
de intercambio, cultivo celular y fertilizacin in vitro.
ultratrazas
microfiltracin, Produccin de anticuerpos.
fotooxidacin

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 15

TEMA 6: ASEGURAMIENTO DE CALIDAD EN EL ANLISIS DE TRAZAS

Pretendemos adoptar los criterios de calidad al funcionamiento del laboratorio
porque el laboratorio debe tener datos de calidad: exactitud adecuada, precisin,
etc

Importancia de la calidad de los resultados analticos:

Qumico analtico

Informacin verdadera

De calidad

Importantes aplicaciones

De ellos va a depender la informacin que se desprenda despus, el no seguir esas

pautas nos lleva a datos errneos que conllevan:
Coste humano, social, econmico y prdida de confianza
Fuentes:
Procesos de muestreo
Tratamiento previo
Tratamiento de la muestra
Mtodo de anlisis
Expresin de resultados
Tenemos errores sistemticos (se pueden controlar) y aleatorios (siempre
acompaan las medidas)
Variabilidad ~dispersin error.

La calidad hace disponer de herramientas que controlan las fuentes de error y

hacen que ese error sea mnimo.

Definicin:
Real academia de la lengua: propiedad o conjunto de propiedades
inherentes a una cosa que permite apreciarla como igual, mejor o peor
que las restantes de sus especies
ISO: la totalidad de los rasgos y caractersticas de un producto, proceso o
servicio que inciden en la capacidad de satisfacer necesidades reguladas o
implcitas.

6.1 Garanta de calidad, control de calidad y evaluacin de calidad:

calidad:
Garanta de calidad:
Conjunto general de actividades diseadas, ejecutadas y contrastadas para
proporcionar al ente pblico o privado, o al cliente/usuario la seguridad de
que un producto, sistema o servicio posee unos requisitos (denominados de
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 16

calidad) perfectamente definidos y con un determinado margen de

confianza.
En un laboratorio analtico se refiere al conjunto de actividades diseadas,
ejecutadas y contrastadas para asegura que la informacin analtica
(resultados) que genera tenga el nivel de calidad que se ha establecido
previamente.

Control de calidad
Garanta de calidad

Evaluacin de la calidad

o Gua Iso 17025: concreta para el laboratorio

o Buenas prcticas de laboratorio
o Procedimientos normalizados de trabajo
o Acreditacin de un laboratorio
o Validacin de los mtodos de anlisis
Control de calidad:
Conjunto especfico de actividades planificadas y efectuadas para
proporcionar un producto, sistema o servicio con un nivel definido de calidad
que sea satisfactorio, adecuado y econmico.
En un laboratorio analtico se concreta en una serie de acciones, diferencias
de trabajo ordinario, planificadas y ejecutadas para proporcionar una
informacin analtica con un nivel definido de calidad que satisfaga los
requisitos impuestos.
Parmetros de calidad: exactitud, representatividad, lmites de deteccin y
cuantificacin, precisin, selectividad
Grficos de control: grficos Shewart, grficos de recorrido medio, grficos
Cusum
Tcnicas de control de exactitud y precisin:
Grficos de control: respuesta secuencial en el eje de ordenadas, de los
resultados generados
Resultados fuera de control (normas ISO 8258)
1. Tres resultados consecutivos fuera de los lmites de aviso, pero dentro
de los lmites de accin
2. Dos resultados consecutivos fuera de los lmites de aviso, pero dentro de
los lmites de accin y al mismo lado de la media
3. 10 resultados sucesivos, aunque dentro de los lmites de aviso, al mismo
lado de la media (desplazamiento de la media)
Evaluacin de la calidad:
Conjunto especfica de actividades planificadas y ejecutadas con el objetivo
de asegurarse que las actividades implicadas en el control de la calidad se
realicen de forma adecuada y eficaz.
En un laboratorio analtico se concreta en el contraste sistemtico y
continuado de las actividades implicadas en el control de calidad.
AUDITORIAS
Tipos de evaluacin:
 Cul es el objetivo y la forma de llevarlo a cabo
 Quien lo realiza
a) Segn el objetivo:

16
 17

a. Evaluacin cualitativa: examen visual y documental del

laboratorio, de los procesos analticos y de los sistemas de control
de calidad establecidos
b. Evaluacin cuantitativa: examen de la calidad de los resultados
generados al someter los MRCs al proceso analtico y contrastar
los valores certificados y los generados.
c. Evaluacin integral: supone la combinacin de los dos anteriores
b) Quien lo realiza:
a. Evaluacin interna: lo realiza parte del personal del laboratorio
b. Evaluacin externa: personas ajenas al laboratorio y a su
direccin tcnica
c. Evaluacin externa-interna: personal que pertenece al
ente/organismo del que forma parte el laboratorio pero que no
pertenece a la plantilla
d. Evaluacin externa-externa: llevado a cabo por personal
especificado de otros organismos, y es por tanto doblemente
ajeno al laboratorio.
Estas actividades son conocidas en el mbito de calidad como
auditorias y a su vez, pueden ser exclusivamente cualitativas,
exclusivamente cuantitativas.

Propiedades analticas:

Supremas exactitud representatividad Calidad de

los resultados

Bsicas Precisin Buen

Sensibilidad muestreo
Selectividad
Calidad del
Proc.
analtico
Complementarias rapidez
Bajo coste
Factores personales
Seguridad para el trabajador
Bienestar para el trabajador
Factores ambientales

No todas las propiedades analticas tendrn el mismo peso

Para que un mtodo sea exacto tiene que ser preciso, selectivo y sensible
La representatividad estar relacionada con la variabilidad.
Exactitud: errores sistemticos (Determinados) y errores aleatorios
indeterminados. Expresa la proximidad entre el resultado obtenido y el
verdadero. Existen dos tipos de errores
o Errores sistemticos: podemos englobar todas aquellas diferencias
que se deben a causas concretas: errores del analista al medir, error

17
 18

del mtodo, error en la calibracinSi tienen causas concretas se

pueden reducir
o Errores aleatorios: son debidos al azar y es de ah donde est la
dificultad de obtener el valor verdadero. Toda medida est sometida
a un error aleatorio, hay que asumir estos errores y valorarlos
(medirlos), dando un valor de incertidumbre
Representatividad: relacionada con la generacin de resultandos coherentes
con las muestras recibidas en el laboratorio, la muestra analizada debe ser
representativa del problema analtico que se pretende resolver. Ejemplo:
grado de contaminacin de un suelo por metales pesados.
Lmite de deteccin: el LD de un analito se define como la mnima cantidad
del mismo que proporciona una seal significativamente diferente del

 =  + 3
blanco de fondo

Lmite de cuantificacin: el LQ de un analito se define como la mnima

cantidad del mismo capaz de ser determinado por un mtodo analtico con

=  + 10
una precisin y exactitud aceptable.

Precisin: dispersin de los valores obtenidos alrededor del valor medio,

formas de calcularlo: DE, S2, CV
Selectividad: medida del grado de interferencia que producen los
compuestos que acompaan al anlisis de la muestra (diferencia varias
sustancias dentro de la muestra)
Robustez: capacidad de un mtodo analtico para permanecer relativamente
insensible a ligeros cambios en el procedimiento, a la calidad de los
reactivos o a las condiciones ambientales (cambios de temperatura, de
operador, de casa de reactivos)
Reproducibilidad: incluye todas las posibles fuentes de variaciones
aleatorias de los datos, por lo que se evala la obtencin de resultados de
ensayos independientes con el mismo mtodo. Aplicado a la muestra a
analizar en las diferentes condiciones: laboratorios, equipamientos,
operadores y das.
La especificidad es la capacidad del mtodo para medir inequvocamente el
componente de inters en presencia de todos los dems constituyentes que
se espera que pueda estar presente.
Especfico selectivo
Con la precisin si sabemos cunto se desva del valor verdadero, podemos
conseguir esta diferencia (valor medido - valor real)
Un mtodo preciso pero no exacto, es vlido porque conociendo la desviacin se
puede corregir los datos (por ejemplo un 10% por encima) pero si no es preciso el
mtodo no es vlido.
6.2 Trazabilidad:
Trazabilidad:
Definicin: propiedad del resultado de una medida o del valor de un patrn que
permite relacionarlos con ciertas referencias, normalmente patrones nacionales o
internacionales, mediante una cadena interrumpida de comparaciones, todas ellas
con incertidumbres conocidas.
Entre ellas destacan como cruciales: la calibracin de los instrumentos, la del
material de laboratorio y la de los equipos analticos, as como la validacin del
mtodo empleado.

18
 19

La trazabilidad es imprescindible para poder comparar los datos, est ligada al

seguimiento.
La calibracin: conjunto de operaciones que permite establecer, bajo determinadas
condiciones, la relacin que existe entre los valores de magnitudes indicadas o un
instrumento o sistema de medida, o los valores representados por una medida de
un material o por un material de referencia y los correspondientes valores
obtenidos con los patrones.
Incertidumbre de medida: parmetro asociado al resultado de una medida que
caracteriza la dispersin de los valores que podran atribuirse razonablemente al
mesurando de la medida
La trazabilidad es un requisito bsico para la comparacin de los resultados
producidos en diferentes laboratorios, en diferentes pases y de las conclusiones
derivadas de estos.

Trazabilidad Estndares

TRAZABILIDAD DE UN RESULTADO

Trazabilidad trazabilidad trazabilidad trazabilidad

De estndares instrumentos metodologa muestra
(alcuota)

Exactitud representatividad
La trazabilidad de los estndares es la base de la trazabilidad del mtodo y los
instrumentos porque los equipos se calibran con patrones, y la metodologa se
desarrolla con patrones. La trazabilidad de todos estos factores contribuye a la
exactitud del mtodo.
Pero adems hay que asegurar la trazabilidad de la muestra (relacionado con la
representatividad) y para asegurar la trazabilidad del ensayo, que aseguran la
trazabilidad de la alcuota de muestra que coges.
Jerarqua de patrones
o Kg patrn BIPM
o Kg patrn primario cambios metrolgicos nacionales
o Pesas transferencia 1categoria
o Pesas transferencia 2 categora
Tipo y jerarqua de patrones y su trazabilidad
Patrn: valor de medida materializado, aparato o sistema de medida con el que se
intenta definir, realizar, conservar o producir una unidad fsica, o bien uno o varios
valores conocidos de una magnitud con el fin de que sirvan de comparacin a otros
elementos de medida

19
 20

Patrn primario: patrn designado o ampliamente reconocido como poseedor de

las mejores cualidades metrolgicas y cuyo valor es aceptado sin reverenciarlo con
otros patrones de la misma magnitud
Patrn internacional: patrn designado o ampliamente reconocido como poseedor
de las mejores cualidades metrolgicas y cuyo valor es aceptado sin reverenciarlo
con otros patrones de la misma magnitud considerado
Patrn nacional: patrn reconocido por decisin nacional en un pas y que se utiliza
para asignar valores a otros patrones de la magnitud considerada
Patrn de referencia: patrn de alta calidad metrolgica disponible en un
determinado emplazamiento o en una determinada organizacin a partir del cual se
realizan las medidas
Patrn de transferencia: patrn utilizado como intermedio para comparar patrones
Patrn de viaje: patrn a veces de construccin especial, creado para transportarlo
entre diferentes localidades.

Tipos y jerarqua de patrones y su utilidad

Patrn de trabajo: patrn utilizado de forma rutinaria para calibrar o comprobar
materiales de medidas, instrumentos de medida o materiales de referencia. Este
suele estar calibrado frente a un patrn de referencia.
Estos tambin pueden ser patrones de referencia, este es el caso particular de los
patrones de trabajo calibrados directamente frente a patrones de un laboratorio
nacional de patrones
Material de referencia: material o sustancia, en el cual una o ms de sus
propiedades tienen valores suficientemente homogneos y conocidos, como para
ser usados para calibrar un aparato, evaluar un mtodo de medida o asignar un
valor a un material
Material de referencia certificado: material de referencia, acompaado de un
certificado en el que una o ms de cuyas propiedades se certifican mediante un
procedimiento que establece su trazabilidad a una relacin exacta de la unidad que
se expresan los valores de dichas propiedades. Todos los valores certificados van
acompaados de una incertidumbre a un cierto nivel de confianza.

6.3 Materiales de referencia:

Material de referencia: material o sustancia, en el cual una o ms de sus
propiedades tienen valores suficientemente homogneos y conocidos, como para
ser usados para calibrar un aparato, evaluar un mtodo de medida o asignar un
valor a un material
Tipos:
1. Sustancias puras: caracterizadas por pureza, qumica y/o trazas de
impurezas
2. Disolucin estndar y mezclas de gases preparados gravimtricamente a
partir de sustancias puras. Utilizadas para calibracin
3. Materiales de referencia de una matriz, caracterizados los constituyentes
mayoritarios, minoritarios y/o trazas. Estos materiales se preparan a partir
de matrices que contienen los compuestos de inters o de mezclas
sintticas
4. Materiales de referencia fsico-qumicas: caracterizadas por sus propiedades
como punto de fusin, viscosidad, densidad pticas..

20
 21

5. Equipos/objetos de referencia: caracterizados por sus propiedades

funcionales como sabor, olor, nmero de octanos, dureza, muestra para
microscopia, materiales
Tenemos disoluciones patrn para no introducir incertidumbre al realizarlo por
nosotros,

Elaboracin de materiales de referencia. Aspectos bsicos en la preparacin del

material
Exactitud muy alta y aclaracin de las limitaciones
Homogeneidad mxima
Estabilidad probada y definida en su alcance
Matriz adecuada a los fines propuestos
Trazabilidad aceptable
Incertidumbre aceptable expresada al nivel de confianza determinado
Disponibilidad suficiente: este parmetro es muy importante ya que no tiene
sentido elaborar estos materiales con restricciones iniciales en su cantidad
o distribucin. Por ello ha de prepararse en cantidad suficiente para
responder a las necesidades del mercado y prever la difusin del material
en el mismo nivel internacional
Homogeneidad estabilidad.

Condiciones de la certificacin
La certificacin ha de apoyarse en dos o ms mtodos independientes a ser
posible de distinto fundamento fsico-qumico
Han de ser aplicados por varios laboratorios de reconocida solvencia,
preferiblemente laboratorios acreditados o pertenecientes a organizaciones
internacionales o gubernamentales
La metodologa ha de haber superado la correspondiente validacin y los
procedimientos de calibracin (frecuente fuente de error) han de ser
completos y correctamente aplicados.
Las certificaciones emitidas con los resultados de un solo laboratorio o con
los de varios pero con el mismo mtodo analtico no tienen la misma
garanta que los conseguidos con el concurso de varios laboratorios y
mtodos. Este es el procedimiento establecido por la IUPAC
Incluye los siguientes datos:
o Identificacin y descripcin del material
o Identificacin de la entidad y de las personas que certifican el
material de los laboratorios participantes y de las tcnicas y mtodos
empleados
o Fecha de certificacin
o Informacin de estabilidad y conservacin. Fecha de caducidad
o Instrucciones de empleo
o Valores certificados, incertidumbres y niveles de confianza
o Valores no certificados o certificados con limitaciones
Clasificacin y uso
En su utilizacin en el laboratorio hay que tener en cuenta que se trata de
materiales, caros, disponibles en cantidades limitadas
Hay que tener cuidado en la manipulacin de los materiales en el laboratorio ya
que existen riesgos de alteracin y/o contaminacin durante su manipulacin
Podemos usarlos para:

21
 22

Calibrar el sistema de medida

Validad la exactitud de un nuevo mtodo analtico
Equivalencia entre mtodos
Proporcionar un control de calidad de los anlisis de rutina a intervalos de
tiempos regulares

6.4 Validacin del mtodo analtico

Definicin: Segn ISO (8402) conformacin mediante examen y demostracin de la
evidencia objetiva de que se cumplen los requerimientos particulares para un uso
previsto de forma especfica.
La validacin de un mtodo analtico es el conjunto de actividades que se realizan
para demostrar que un mtodo analtico es adecuado y capaz de efectuar el
anlisis para el cual ha sido diseado.
El mtodo estar validado cuando se demuestre que sus parmetros
caractersticos de calidad son adecuados y el proceso de medida se rige por un
control estadstico riguroso y produce resultados exactos

Caractersticas de un mtodo analtico (es lo que se garantiza)
Exactitud: relacionado con la cantidad de los resultados
Precisin: relacionando con la variacin en las medidas
Incertidumbre
Representatividad
Robustez
La validacin es garantizar que se cumplen los parmetros analticos que hacen
que los resultados tengan calidad.
Se logra validar un mtodo cuando demostramos que los resultados son exactos y
que se realizan los procesos analticos de manera reproducible, utilizando equipos
calibrados, mantenimiento adecuado con personal suficientemente cualificado,
empleando reactivo y materiales correctos

Cuando es necesario validar?
Cuando desarrollamos un nuevo mtodo para una aplicacin especfica
Mtodo establecido que se utiliza en un laboratorio diferente, con
instrumentacin y anlisis distintos
Mtodo establecido que se ha adaptado a un nuevo problema
Mtodo en el que el control de calidad indica cambios con el tiempo

Siempre que sea necesario verificar que sus parmetros de calidad se adecuan
al problema analtico que debemos resolver

22
 23

Proceso de desarrollo, validacin y uso de un mtodo analtico

Definir especificaciones

DESARROLLO
Desarrollo experimental DEL MTODO

Analizar y evaluar resultados

Plan de validacin (ensayos) VALIDACIN

Calibrado precisin estudio de

Intervalo de exactitud estabilidad
Linealidad

Resultados cortejados

APLICACIN
no si
Redactar protocolo de validacin
Aplicar mtodo validado

Criterio que vamos a seguir: the fitners for porpuse of analytical methods
(Eurachem)

23
 24

pr
ocedimie
nto de
validaci
n

1. establecer criterios mnimos

2. Demostrar que el mtodo es especfico
3. Establecer LOD y LOQ
4. Establecer intervalo de trabajo y linealidad
5. Demostrar la exactitud
6. Demostrar la precisin
7. Calcular la incertidumbre
8. Establecer la robustez
Pre-validacin
Recuperacin analtica
Confirmacin de identidad y selectividad
LDD

1. Establecer los criterios mnimos:

Requisitos mnimos necesarios para que el mtodo sea operativo y til
Debe incluirse aspectos como: tipo de muestra, componentes a determinar,
intervalo de concentraciones en el que el mtodo funcione correctamente,
precisin necesaria, etc.

No debe ser excesivamente estricto

24
 25

La comparacin de los resultados obtenidos con los criterios propuestos

requiere el empleo de procedimientos estadsticos/quimiomtricos para la
toma de decisiones de aceptacin o no de los datos.

2. Demostrar que el mtodo es especfico

Selectividad: es la capacidad de un mtodo analtico para diferenciar varias
sustancias en la muestra. Este concepto es aplicable a mtodos en los que
se separen y cuantifiquen 2 o ms compuestos.
Especificidad: es la capacidad del mtodo para medir inequvocamente el
componente de inters en presencia de todos los dems constituyentes que
se espera que puedan estar presentes.

La forma de demostrar la selectividad y especificidad:

o Confirmar la identidad del analito
o Evaluar las interferencias potenciales
Se puede hacer:
o Mtodo analtico diferente:
 Cambio de polaridad de la columna cromatogrfica
 Empleo de otros sistemas de deteccin
o Emplear muestras adicionadas con interferencias potenciales
3. LOD y LOQ
LOD: limite de deteccin, menor concentracin de componente a determinar
en una muestra que puede ser detectada pero no necesariamente
cuantificada bajo condiciones experimentales segn IUPAC el factor

 =  + 3
recomendado es 3

LOQ: limite de cuantificacin, menor concentracin o cantidad de la especie

de inters en una muestra que puede ser determinada con precisin y
exactitud aceptable bajo las condiciones experimentales establecidas,

 =  + 10
IUPAC factor es 10

Tambin se puede dar el LQ mtodo y LQ instrumental; refleja ms el valor

fiable el LQ mtodo (tiene en cuanta matriz y procedimiento: ms real)
Sensibilidad (s): capacidad de respuesta de un mtodo analtico para
distinguir pequeas variaciones en la concentracin de analito a determinar.
Se define por la pendiente de la curva de calibrado.

4. Establecer intervalo de trabajo y linealidad

Linealidad: capacidad de mantener invariable la pendiente de la funcin de
calibrado para el intervalo de concentraciones, Se efecta preparando con,
al menos, 5 niveles de concentracin diferentes que abarquen el intervalo
establecido en las especificaciones.
Cuando dos puntos se salgan de los extremos de concentracin, es desde
donde deja de ser lineal. Estas disoluciones se analizan un mnimo de 3
veces
Aplicacin de la linealidad r > 0,9999. Conviene visualizar grficamente la
funcin de calibrado
Los intervalos de trabajo y lineal pueden ser diferentes para cada matriz
debido al efecto de las interferencias sobre la curva de calibrado.
Por ejemplo un rango 5-1000g/L es bueno para medir muestras en un
amplio rango

25
 26

Intervalo de trabajo: normalmente trabajamos a concentraciones muy bajas

entonces se hace un calibrado ms pequeo.

5. Demostrar la exactitud:
Grado de concordancia de un resultado con el valor verdadero estimado o
aceptado del componente Q que se est midiendo

Error o sesgo:
o Tipos:
 Sistemticos
 Aleatorios
o = x-
- Anlisis de MRC
- Comparacin de resultados con los obtenidos con otro mtodo fiable
- Participacin en estudios intercomparativos
- Clculos de la recuperacin de cantidad aadida
- Mtodo de adiciones estndar
Medida de recuperacin analtica:
o La matriz se sobrecarga (spiked) con el analito a niveles de 50, 100,
150 y 200% del nivel estimado en la muestra
o Debe realizarse un nmero independiente de rplicas a cada nivel de
concentracin, as como de la muestra antes de la sobrecarga (n=6)
o Se determina la recuperacin media y el intervalo de confianza del
mtodo. La recuperacin se debe comprobar a lo largo del tiempo.
o Debe ser 70-75% (70%-120%) depender del tipo de matriz de
compuesto, tcnicas empleadas, etc
o La recuperacin analtica se expresa como:

.  .  

= 100

o Siempre quedar la duda de que si obtenemos una determinada
recuperacin, sta se mantenga en la muestra real (en la muestra
real lo que si sabemos es que nunca ser mayor) porque:
 La forma qumica del analito original muchas veces no se
conoce, lo que origina que se adicione en una forma distinta
 El analito puede estar en diversas formas que se comportan
de distinta manera durante la preparacin de la muestra y por
lo tanto, darn lugar a factores de recuperacin distintos
 Aun conociendo la forma natural del analito, ste puede
unirse qumicamente a los componentes de la matriz, como
sucede con algunos metales que estn unidos a las protenas
en las matrices biolgicas, lo que modifica su comportamiento
 Se requiere un tiempo de equilibrio entre el analito y la matriz
con el fin de facilitar la interaccin entre ellas. Este tiempo es
muy variable y no siempre se optimiza.
o Las recuperaciones analticas en muestras adicionadas son casi
siempre mejores que en muestras reales
o La recuperacin como medida de la exactitud del procedimiento
debe aadirse al inicio del tratamiento.

26
 27

6. Determinar la precisin
Precisin: dispersin entre valores obtenidos al realizar una serie de
medidas repetitivas e independientes de otras, mediante el mismo mtodo
bajo condiciones especficas.
Repetitividad: una misma muestra analizada en el mismo laboratorio, con el
mismo equipamiento y por el mismo operador en un intervalo corto de
tiempo. Mide los errores aleatorios, que son inevitables y se reflejan en las
fluctuaciones impredecibles que se presentan en el uso de un mtodo. Es
un indicativo de la precisin mxima que se puede obtener en un mtodo.
Reproducibilidad: incluye todas las posibles fuentes de variaciones
aleatorias de los datos. Aplicado en diferentes condiciones: diversos
laboratorios, equipos, analistas, das

Parmetros: desviacin estndar (SD) y desviacin tpica relativa

(SDR)
Recomendaciones prcticas: indicar siempre como se ha calculado, porque
no hay un criterio claro.

7. Calculo de la incertidumbre:
Definicin: parmetro asociado con el resultado de una medida que
caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente
atribuidos al mesurando
Es una estimacin de la parte del resultado completo que caracteriza en el
intervalo de valores, dentro del cual se encuentra el valor de la cantidad de
la medida.
La incertidumbre tiene forma de rango y tiene en cuenta tanto los errores
aleatorios como sistemticos, si se determina para un proceso analtico y
para un determinado tipo de muestras puede aplicarse a todas las
valoraciones realizadas con ese mtodo.
La estimacin de la incertidumbre no se refiere a un valor verdadero, solo se
refiere a un resultado y a los factores que afectan a ese resultado.
Para la estimacin global de la incertidumbre, en principio hay que tener en
cuenta la contribucin de todas las incertidumbres aunque en la practica en
la mayora de los ensayos hay incertidumbre tienen un peso especfico
mayor que otras, por lo que las ltimas pueden omitirse (las pequeas)
Contribucin:
o Definicin incompleta del mesurando (no especfica la forma exacta
del analito)
o Muestreo: la muestra no es representativa
o Incompleta extraccin y/o preconcentracin del analito
o Contaminacin durante el muestreo o preparacin de la muestra.
o Desconocimiento de los efectos ambientales sobre el anlisis
o Errores sistemticos en la lectura analgica del instrumento
o Incertidumbre de equipos volumtricos y de pesada
o Resolucin de instrumentos
o Valores asignados a los patrones de medida y material de referencia
o Valores constantes y otros parmetros obtenidos de fuentes externas
o Errores aleatorios

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 28

Proceso de estimacin de la incertidumbre

ESPECIFICAR EL MESURANDO
Incluyendo cantidades medidas, constantes, patrones de calibracin, etc

De los cuales depende

IDENTIFICAR LAS FUENTES DE INCERTIDUMBRE

Muestreo condiciones de almacn
Efectos instrumentales pureza
Estequimetra condiciones de medida
Efecto matriz/analito correccin de blancos
Efectos aleatorios

CUANTIFICAR LOS COMPONENTES DE INCERTIDUMBRE

Medir o estimar la incertidumbre asociada a cada fuente potencial de
incertidumbre (experimentalmente S0) o usando informacin disponible (valor dado
por el fabricante) certificados de calibracin, tolerancias del material de referencia,
manuales de instrumentacin.

CALCULAR LA INCERTIDUMBRE COMBINADA

Calcular la incertidumbre estndar combinada (u)
Calcular la incertidumbre expandida (U): U=Ku
K: factor de cobertura (k= 2, 95% probabilidad de valor verdadero)

Estrategias para calcularlo:

a) Propuestas globales:
a. Usar informacin generada en los ejercicios interlaboratorio
b. Usar informacin generada en la verificacin de la trazabilidad del
mtodo analtico
b) Propuesta iso: identificar, cuantificar y combinar todas las fuentes de
incertidumbre por procedimiento analtico.

Alternativas: las dos propuestas globales para el clculo de la incertidumbre,

nos evitan ir de etapa en etapa:

28
 29

Cuando un laboratorio verifica un mtodo tiene que asegurar la trazabilidad,

por eso, la segunda propuesta global cobra fuerza porque no da ms trabajo
Cuando se hace un ejercicio interlaboratorio tenemos una desviacin
estndar de los laboratorios participantes (Sr) siendo Sr la reproducibilidad y

 =  = 2
se utiliza para el clculo de la desviacin estndar expandida

Adems de tratar de incrementar poco el trabajo en el laboratorio para

calcular la incertidumbre, debemos basarnos en el estudio de la
incertidumbre del material de laboratorio (variacin estndar repetida de
esas muestras que tomamos como referencia)

(
" =  = # $ % +  $ & +  $ % +  $ '$

8. Demostrar la robustez
Robustez: medida de la capacidad de permanecer inalterado cuando se le
somete deliberadamente a pequeas variaciones en los parmetros del
mtodo. Indica el grado de confianza que ofrece en su uso habitual.
La fiabilidad de un mtodo se define como la capacidad de mantener la
exactitud y precisin a lo largo del tiempo.

Se realizan diseos de experiencias

en los que se varan ligeramente las Evaluar efecto
sobre:
condiciones experimentales exactitud y precisin.

Aplicacin y funcionamiento de un mtodo analtico

Aplicacin del mtodo validado garantizar que el mtodo sigue operando

Y manteniendo las caractersticas de
funcionamiento demostrado en la etapa
de validacin.

Aseguramiento de calidad en anlisis ambientales:

Anlisis replicados
Calibracin con patrones(6 o 7) verificacin diaria con ms patrones
Anlisis por duplicado. Permite controlar la precisin del mtodo
Mantenimiento de cartas de control. Para patrones, blancos, de reactivos y
anlisis replicados. Permite asegurar la resolucin a largo plazo del
laboratorio, instrumentacin, analista y/o procedimiento mediante una base
estadstica.

29
 30

TEMA 7: OPERACIONES PREVIAS EN EL ANLISIS DE TRAZAS

Importancia y requisitos bsicos del muestreo. Estrategias de muestreo

Conservacin y tratamiento de la muestra. Fuentes de error
Operaciones previas adecuadas al anlisis de trazas
Analitos inorgnicos: mtodos de destruccin de matrices orgnicas y
disolucin de matrices inorgnicas, mtodos de separacin y
preconcentracin.

7.1 Conceptos bsicos de la metodologa:

metodologa
Proceso analtico: serie de operaciones analticas entre la muestra y los resultados
Muestreo: proceso de seleccin de una porcin de muestra representativa del
conjunto del material
Tcnica analtica: principio cientfico que se ha mostrado til para proporcionar
informacin sobre la composicin de la materia
Mtodo analtico: aplicacin efectiva de una tcnica analtica en el proceso
analtico concreto.
Procedimiento analtico: grupo de instrucciones concretas que se deben seguir para
aplicar un mtodo.
Protocolo: grupo de instrucciones definidas que se deben seguir sin excepcin si el
resultado analtico ha de ser aceptado para un propsito dado.
Tipos de mtodos de anlisis:
a) En funcin de la trazabilidad
 Mtodos oficiales de anlisis: mtodos establecidos por ley o
por regulaciones de naturaleza estatutaria (directivas
Grado de validacin

europeas, BOE, EPA)

 Mtodos normalizados de anlisis o estndar: han sido
estudiados por diferentes organizaciones y utilizan estudios
interlaboratorio para validarlos (ISO, UNE)
 Mtodos recomendados por expertos: que son el resultado de
trabajos de investigacin originales y que se encuentran en
una literatura cientfica especfica como revistas
 Mtodos desarrollados en el laboratorio: generalmente son
mtodos estndar u oficiales modificados con el fin de
adaptarlos a las necesidades actuales o de otro tipo de
muestras diferentes a las del mtodo inicial.
b) En funcin de la finalidad de los resultados
 Mtodos de barrido o de criba (Screening): mtodos de
barrido rpido de las muestras a analizar. Requisitos:
Rpido, bajo coste
Cualitativo o cuantitativo
No debe dar falsos negativos (el analito no se detecta
pero est presente) falsos positivos es menos grave
 Mtodos de vigilancia: similares a los anteriores pero ms
lentos. Resultados cuantitativos
 Mtodos reguladores: puede ser confirmatorios (mtodos de
rutina para confirmar un anlisis) y de referencia (mtodos
probados y vigilados)

30
 31

7.2 etapas del anlisis de trazas:

 Definicin del problema
 Toma de muestra
 Separacin del analito de inters de la matriz
 Eliminacin de impurezas o limpieza de los interferentes
 Concentracin de analito
 Determinacin analtica
 Procesado de datos e interpretacin de los resultados
 Resolucin del problema (informe final)
Definicin del problema:
MUESTREO

Tipo de muestra homogeneidad

Implicacin de los resultados

Analitos concentracin, precisin, exactitud

Problemas a resolver
Seleccin mtodo

Conservacin

Obtencin de resultados resolucin problema

Toma y preparacin de muestras:
Definicin: proceso por el cual se selecciona una porcin de material que
represente o proporciones informacin sobre el sistema de estudio (poblacin)

Recogida de la muestra
Concepto

Conservacin
amplio

Reduccin del tamao partcula

Homogeneizacin
Submuestreo

Problemas:
La heterogeneidad espacial y/o temporal de la materia
Sujeta a errores sistemticos y aleatorios (blancos)
El muestreo puede ser diferente segn las especies a determinar y la
tcnica analtica a emplear.
Gran variedad de materiales objeto del anlisis y tamao de las mismas
Evolucin del material (aseguramiento de la integridad de las especies)

Diseo de un plan de muestreo:

 Definicin: plan que asegure la obtencin de una muestra representativa
 Etapas: identificacin > toma de muestra bruta > reduccin de la muestra
bruta a muestra de laboratorio

31
 32

 Cuestiones a tener en cuenta

o Donde hacer el muestreo de la poblacin objeto?
o Que tipo de muestra hay que recoger?
o Que cantidad de muestra hay que obtener?
o Cuantas muestras hay que analizar?
o Como se puede minimizar la varianza global?
 Planes de muestreo:
o Muestreo aleatorio:
 Cualquier porcin del material original tiene igual probabilidad
de estar en la muestra
 Cuando se tiene poca informacin sobre el material a analizar
o en muestro de productos manufacturados o en el muestreo
de propiedades fsicas como el tamao de partcula.
o Muestreo sistemtico:
 Tcnicas ms comunes de muestreo
 El material a muestrear se recoge a intervalos
predeterminados definidos en un plan de muestreo
o Muestro estratificado
 Sistemtico que implica la divisin de una porcin en grupos
(o estratos)
 Cada grupo se muestrea de acuerdo a su peso o volumen
o Muestreo secuencial:
 Las muestras se toman a intervalos predeterminados pero
aleatorios
 Para comprobar si los resultados son dentro o fuera de las
especificaciones
o Muestreo ambiental:
 Composicin de medio varia con el tiempo y con el punto de
muestreo
 Fluctuaciones en la concentracin de analito a lo largo de un
da, o de un da a otro, de un lugar a tora si el objetivo es
obtener un valor medio.

32
 33

Fuentes de error en la toma de muestra

Fase de la toma de
Posibles fuentes de error Tipo de error
muestra
A. Planificacin
Heterogeneidad,
Definicin y subdivisin
variabilidad espacial de sistemtico y aleatorio
del rea
los contaminantes.
falta de
representatividad
mtodo de toma de
estadstica. Distribucin sistemtico y aleatorio
muestra
sesgada, contaminacin
o prdida de analitos
pocas rplicas. Falta de
nmero de muestras aleatorios
representatividad
falta de
representatividad
Masa de muestra estadstica. Distribucin Aleatorios
sesgada, contaminacin
o prdida de analitos
momento de toma de Variabilidad estacional.
aleatorio o sistemtico
muestra Condiciones clmaticas
B. Toma de muestra
Efectos de matriz,
condiciones
lixiviacin o deposicin, sistemtico
experimentales
irreproducibles
contaminacin o
extraccin por el equipo
envasado sistemtico
y el material contenedor.
Volatilizacin
Contaminacin o
conservacin de la
prdidas por
muestra durante el
volatilizacin. sistemtico
almacenamiento de la
Reacciones qumicas
muestra
(cambio de especie)

Los errores sistemticos se pueden controlar y reducir. En la planificacin hay todo

tipo de errores, el error ms importante est en la planificacin y es el relacionado
con el nmero de muestras, tambin, el de la masa de muestras.
La distribucin de los resultados en funcin de los posibles errores que pueden
afecta a la poblacin obtenida. (Frecuencia [ ])

Errores aleatorios y sistemticos mnimos.

Precisin ptima

[]

33
 34

Errores aleatorios importantes. El nmero de

muestras permite coincidencia del valor medio
con el real. Error sistemtico despreciable.

Buena planificacin de la toma de muestra

(precisin de resultados) errores sistemticos que
afectan a la concentracin del analito y/o
composicin de la matriz. Distribucin desplazada
respecto del valor real.

Distribucin asimtrica. El valor real no coincide ni

con la media, ni con el mediano. Problema de
falta de representatividad y contaminacin o
prdida del analito.

Tamao de muestra
 Muestra homogneas: depende de la etapa posterior de determinacin y de
la concentracin del analito a determinar. Debe permitir superar el lmite de
cuantificacin del mtodo analtico.
 Muestra heterogneas: se necesita aplicar la teora estadstica. Ejemplo:
lote de tipos de partculas A y B, a partir de la informacin previa de la
muestra se conoce la proporcin de cada tipo de partculas.

Error aleatorio asociado a la toma de un nmero de partculas

(
 = ) %* #1 %* '+$

Donde:
S: desviacin estndar de la poblacin de partculas
N: nmero de partculas de muestra que se han tomado
Pa: probabilidad de partcula a
(1-pa) probabilidad de B


Nmero de partculas a tomar para un determinado error:
,,. = / 1 100
0*

1 0* 100
$
=2 34 5
0* ,,.
Donde
Sr,A= error relativo en la determinacin del nmero de partculas.

34
 35

La incertidumbre del resultado final depende del nmero de partculas y no de la

masa tomada del lote de la muestra
Mantener el valor medio representando respuesta
frente a la masa de porcin de muestra.

Disminucin de la variabilidad de los resultados al aumentar la masa de la porcin

de muestra
Nmero de muestras
Aspectos a tener en cuenta:
 Grado de homogeneidad/heterogeneidad de la muestra
 Coste intrnseco de la toma de muestra
 Variabilidad aceptada en el resultado final

Si los resultados procedentes de una toma de muestra estn afectados slo por los

1
errores aleatorios, la poblacin obtenida es similar a una distribucin gaussiana
;:<
6=# ' $=>
#: '
729

Incertidumbre de estimacin del valor real: = xmed + (2/)

Donde:
Z= (x-)/ a un nivel de confianza determinado
N: nmero de resultados a partir del cual se calcula la media de poblacin.

Nmero de muestra para obtener una media con un error asociado y un nivel de

@ 7 $
significacin:

?=/ 1
A

5
Si n<30, distribucin t-Student:
B = C + # '
B

5 $
?=/ 1
A

Cadena de transformacin del lote de muestra en la porcin de anlisis

Muestra a granel Muestra manufacturadas
Lote de muestra son
Distintos

Muestras 1 individ
Unidad de
Muestra
Muestra compuesta

35
 36

Muestra de laboratorio

Muestra de ensayo o anlisis

Porcin de anlisis

Estrategia de toma de muestra (en funcin de matriz, analito...)

 Muestras slidas:
1. Pala de acero (el ms simple); polmero o plstico sera lo ms adecuado
para metales y de acero para compuestos orgnicos.
La pala puede llevar consigo unos criterios determinados: dimensiones
adecuadas a las caractersticas del sistema a muestrear. No todos los
sistemas permiten una muestra representativa. (Relacin volumen
mximo y tamao de partcula)
2. Dragas: Suelen ser de acero y en el interior pueden ir recubiertas de
materiales polimricos, si el estudio lo requiere. Necesita grandes
cantidades y deshace la estratificacin
3. Cilindros: Distintos a las dragas aunque se introduzca de igual forma en
el slido, el material tiene que tener cierta fuera y se mantiene la
disposicin de la muestra (en los sistemas de dragas no)

La informacin que nos da cada dispositivo ser distinta

 Muestras acuosas:
Recogida de las muestras:
Lquidos homogneos
Lquidos heterogneo de tamao pequeo
Lquidos heterogneos de gran tamao:
o Lquidos en mov. Poco prof.
o Liquidas sin mov, Gran prof

36
 37

Muestreador mltiple
1. Sistemas de Van Dorn: Botellas de muestreo de materiales apropiados
con distinto tipo de cierre. Configuracin horizontal, botella y un
dispositivo que permite la accesibilidad de la botella al punto de
muestreo. La forma ha de ser de un contenedor, y despus dispositivos
ms o menos sofisticados para el muestreo.

Los sistemas pueden ser mviles o de toma de muestra mltiple, estos

ltimos recogen varias muestras a distintas profundidades o tiempo.
Tambin hay dispositivos a travs de hielo. Algunos dispositivos estn
normalizados, otros no.

 Muestras Gaseosas
1. Bolsas tedlar: bolsa de material polimrico transparente que posee un
punto de entrada que se conecta a una lnea de toma de muestra
permeable al gas, e inerte a los constituyentes de la muestra.
2. Bultos de vidrio: Ampolla o tubo de vidrio (embudo para gases), posee
dos llaves una de entrada y otra de salida.

Problema: dificultad de transporte, captacinSe usan cuando el transporte

es mnimo.

Hay otros dispositivos:

 Adsorbente slido: la corriente de gas se hace pasar sobre un
adsorbente slido, hay distintos materiales con distinta
selectividad y forma de presentacin.
Ventajas: facilidad de transporte y conservacin
La muestra se analiza como un slido.
 Atrapamiento en disoluciones adsorbentes: se buscan
materiales que no interfieran con dispositivos, en su interior
se coloca una disolucin con un lquido adsorbente y se hace
pasar la muestra, lo que provoca es el borboteo del gas en la
disolucin, podremos hacer una recogida selectiva del analito
en disolucin.
 Trenes de muestreo: sistemas de muestreo normalizados,
basados en el atrapamiento en disoluciones adsorbentes y
absorbentes. En un mismo muestreo, se pueden analizar
compuestos orgnicos e inorgnicos y dentro de ellos an se
pueden separar segn sus propiedades fsicas, qumicas
En cuanto a las etapas o tcnicas que podemos utilizar, el planteamiento lo vamos
a diferenciar segn sean los analitos si de naturaleza orgnica o inorgnica.
Hay muchas caractersticas en comn pero tambin diferenciadas para separarlas:
Compuestos inorgnicos: predominan las tcnicas de Absorcin atmica
Compuestos orgnicos: predominan las tcnicas cromatogrficas.
Esto hace que podamos diferenciar la sistemtica a seguir.

37
 38

7.3 Pasos a seguir en la preparacin de la muestra

La preparacin de la muestra debe realizarse sin prdida de analitos. En caso de
que las hubiera, el analista debe ser capaz de cuantificarlas mediante estudios de
recuperacin analtica.
La preparacin de la muestra, incluye, si es necesario:
1. Transformar el analito en la forma qumica en que se vaya a determinar y
por tanto depender del mtodo analtico a utilizar.
2. Eliminar interferencias de la matriz sin prdidas de analito.
En la preparacin de la muestra se deben seleccionar los reactivos y material
adecuado que no interfieran en el mtodo de anlisis seleccionado. Debe evitarse
la contaminacin cruzada.
La preparacin de la muestra puede incluir diluciones o concentraciones hasta
obtener un valor de concentracin adecuado para el mtodo a utilizar (rango lineal
del calibrado)

Etapas de preparacin de muestras

Destruccin de matrices orgnicas
Descomposicin y disolucin de muestras inorgnicas que pueden ser tanto
de muestras inorgnicas o residuos inorgnicos procedentes de la
descomposicin de matrices orgnicas.
Preconcentracin para obtener el extracto de analito en una forma de
concentracin adecuada para la determinacin final.
Contaminacin: material en que se prepara la muestra, contaminacin del
laboratorio
Reactivos: cidos (grado analtico, HPLC, grado espectrospcpico) y agua de
laboratorio.
Adsorcin: adsorcin a la superficie de un contenedor o filtro, es un
problema frecuenta en anlisis de trazas: As, Hg, Ag (adsorcin o
intercambio con la superficie del vidrio) Produce un error sistemtico que se
pone de manifiesto en el anlisis de compuestos de composicin conocida
Volatilizacin
Anlisis de blancos: los problemas de contaminacin e interferencias se
solucionan con el anlisis de blancos.

Pretratamiento (0peraciones previas)

Pretratamiento: etapa intermedia entre la toma y tratamiento de muestras, incluye
operaciones fsicas sobre la muestra antes de iniciar los procesos analticos
implicados en su disolucin o preparacin para el anlisis.
La muestra debe ser representativa, tengo que decidir qu cantidad de muestra voy
a tomar
El muestreo puede ser de modo aleatorio o sistemtico.
La preparacin de la muestra depende de lo que se quiera analizar.

El mtodo analtico depende de la matriz y el analito

Caractersticas de las operaciones previas

Poseen una gran variabilidad: complejidad del proceso y riesgo de
explosin

38
 39

Requiere una elevada participacin humana: proceso lento y difcil

automatizacin
Fuente importante de error. Prdidas, contaminacin del analito, dificultades
de cantidades rigurosas
El tratamiento de la muestra puede ser variable en funcin de la informacin a
obtener en el anlisis
El Pretratamiento se refiere a procesos de :
1. Lavado
2. Secado/liofilizacin
3. Trituracin
4. Homogeneizacin
5. Tamizado
6. Divisin y submuestreo.

LAVADO

Eliminacin de la contaminacin superficial de la muestra.

Los lquidos ms habituales son:
Agua: til slo para eliminar una fraccin de partculas retenidas en la
superficie
Tensoactivos, cidos o agentes complejantes: en su empleo debe
considerarse que pueden daar las membranas biolgicas o extrae algn
componente
Cloroformo, tolueno, THF: tiles para la eliminacin de grasas, partculas
absorbidas en la superficie

SECADO

Eliminacin del agua contenida en la muestra

El agua se elimina porque puede provocar:
Disoluciones parciales de la matriz de la muestra
Descomposicin parcial de la muestra
Reacciones de hidrlisis: compuestos orgnicos
Variaciones en el peso de la muestra
Se pueden emplear distintos sistemas para llevar a cabo el secado
Secado al aire (termolbiles)
Secado en estufa
Liofilizacin
El ms habitual es el secado en estufa. La muestra se coloca en un vidrio de reloj y
se introduce en un horno a 60-120 C (para compuestos delicados menos de 60 C)
Problemas:
A elevada temperatura, podemos tener prdida de voltiles y
descomposicin de la matriz
A temperaturas bajas, el incremento del tiempo de secado aumenta y por
tanto el riesgo de contaminacin por contacto con el aire del laboratorio
La temperatura es funcin de:
Naturaleza del analito
Matriz de la muestra
Tamao de partcula

39
 40

La liofilizacin es un proceso de secado en frio, pero tiene todava riesgo de prdida

de los compuestos ms voltiles al aplicar presin sobre la muestra congelada, que
provoca la sublimacin del agua.

TRITURACIN Y HOMOGENEIZACIN

En ocasiones, antes y despus de la trituracin hay una etapa de secado, Esta

etapa puede ser necesaria para garantizar la representatividad de la muestra.
Muestras duras:
Slo se puede llevar a cabo poniendo la muestra en contacto con un
material ms duro que ella, siendo el contacto por impacto o abrasin, ya
sea de forma normal o automtica
Manual: martillo o mortero
Automticos; de mandbula, de rodillo, de codo, de bolas, molinos de anillos
y pulverizadores de disco vertical.
Los problemas que pueden surgir son:
Contaminacin: por desgaste del material de sistema de trituracin y
cruzada, debida al paso por ese dispositivo de una muestra anterior
Perdidas de voltiles: porque se genera una gran cantidad de calor por
friccin.

Muestras blandas:
Se lleva a cabo mediante el empleo de algn instrumento cortante, de forma
automtica o manual, o una combinacin de ambas.

DIVISIN Y MUESTREO

Toma de la muestra que ser sometida a tratamiento y anlisis

Muestras slidas:
Mtodos manuales: cono y cuarteo
Mtodos automticos: divisor mecnico y rotatorio
Muestras lquidas:
Si hay fases de agitacin previa, puede ser necesario calentar o filtrar

ALMACENAJE Y TRANSPORTE

Cuando ya tenemos la muestra preparada para su almacenamiento, el cmo

conservarla depende de la muestra y el analito a analizar, tendremos diferentes
almacenajes dependiendo de;
El analito
El tiempo que lo vamos a conservar
De la muestra

7.4 Mtodos de preparacin de muestras para la determinacin de analitos

inorgnicos

Muestras lquidas
Suelen ser las ms sencillas de tratar, existen dos tipos:

40
 41

1. Soluciones acuosas:
a. No requiere tratamiento previo.
b. Segn la concentracin del analito en la muestra y la tcnica
analtica seleccionada ser necesario diluir o concentrar la muestra
c. Si se trabaja con UV-Vis requiere adicionar tampones para reducir
ciertas interferencias
d. Tratamientos utilizados para la separacin fsica del material slido
en muestras lquidas acuosas: filtracin (a vaco o gravedad)
centrifugacin/flotacin.
e. Adicin de sustancias tensoactivas o sustancias coprecipitantes.
f. Desgasificacin para bebidas carbonatadas.

Lquido con partculas slidas

Tratamiento conjunto Disolucin

Filtracin y disolucin filtrable,

centrifugacin partculas slidas
Disolucin no filtrable de
Filtracin y separacin
partculas

La filtracin es un proceso sencillo, pero a la hora de filtrar tenemos que tener

en cuenta:
o Tamao del poro: pequeo (proceso lento), grande (ciertas partculas
podran interferir)
o Naturaleza del filtro: filtro de celulosa, lana de vidrio, policarbonato,
membrana de filtro metalizado de plata.
Tenemos que evaluar los blancos de filtrado, debido a las posibles
interferencias que puedan provocar los filtros o membranas filtrantes.
Tratamiento de material particulado de los filtros:
o Tratamiento con cido adecuado (metales)
o Extraccin con disolventes (compuestos orgnicos)

2. Soluciones no acuosas
- Disolventes orgnicos:
o En EAA con llama se pueden analizar directamente (viscosidad
nebulizacin) etanol y metil-isobutilcetona (se usa mucho con
metales)
o En EAA con atomizacin electrotrmica y en EEA se puede utilizar
con cualquier disolvente orgnico: hexanol, diisobutilcetona,
dietilsulfxido, tetracloruro de carbono
o En EAA con atomizacin electrotrmica se introduce la muestra
directamente en el tubo de grafito (no hay que aspirarla)
- Aceites minerales, derivados de petrleo, pinturas, aceites vegetales y
otros lquidos orgnicos: tratamientos similares a muestras slidas.

Muestras gaseosas
Aire o efluentes gaseosos industriales
Material particulado  filtracin
Gas:
o Adsorcin sobre slidos

41
 42

o Absorcin sobre disoluciones: borboteadores

Muestras slidas
Para abordar el tratamiento de muestras slidas tenemos que tener en cuenta la
naturaleza del analito y de la matriz. La mayor parte de los tratamientos de
disoluciones slidas estn asociados a la puesta en disolucin de analitos
relacionados, generalmente al proceso de extraccin o digestin.

Sedimentos y suelos, Plantas y tejjidos animales, alimentos y

cenizas y escorias piensos, productos farmacuticos
Naturaleza inorgnica Naturaleza orgnica

Muestras slidas

Naturaleza inorgnica Naturaleza Orgnica

Fusin, oxidacin hmeda Oxidacin seca o calcinacin, oxidacin

o digestin cida hmeda o digestin cida

Oxidacin seca o calcinacin (analito inorgnico, matriz orgnica)

Destruccin de la materia orgnica por calentamiento
Recipientes inertes (slice, pyrex, platino)
Temperatura 450 C 550 C
o A T>450 C combustin completa de la materia orgnica
o A T> 600C implica riesgos de prdidas por volatilizacin
Precalentamiento y combustin de la muestra antes de introducirla en la
mufla (se puede hacer incluso, una precombustin)
Para determinar una especie orgnica
orgnica u organometlica, no podemos usar
tcnicas que destruyan la matriz, porque posiblemente destruya el analito.
Ventajas Inconvenientes
Fcil de usar Prdidas por retencin
Bajo nivel de supervisin Combustin incompleta de algunas
matrices
Tratar numerosas muestras a la vez Necesario Pretratamiento en aceites y
grasas
Puede necesitar aadir cidos
Limitado a matrices orgnicas
Prdida de voltiles

Elementos que se pueden perder en la volatilizacin

Ag, As, Au, Be, Cd,
Cd, Cs, Ge, Hg,
Hg Ir, Li, Ni, Pb,
Pb Pd, Pt, Sb, Se,
Se Sn, Zn
Los elementos en negrita se volatilizan a menos de 500 C

Especies voltiles formadas durante la calcinacin (que pueden afectar a los

resultados y caractersticas de nuestro anlisis)

42
 43

xidos Cloruros Hidruros Otros

Os Sb/Pb Sb Cd
Re Cr/Co As Hg
Ru Cu/Ge Se
Fe/Pb Te
Zn/Pb

Hay riesgo de contaminacin porque son sistemas abiertos (riesgo mayor que
en sistemas cerrados) En esa lnea de reducir prdidas de analitos ms
voltiles, podemos ver:
1. Calcinacin en mufla
Etapas:
a) Pesada de la muestra
b) Calentamiento en horno mufla (gradiente de T)
c) Disolucin en cido mineral diluido
d) Adicin de agentes oxidantes (HNO3, H2SO4)
Ventajas Inconvenientes
Mtodo simple Riesgo de contaminacin alto
Elevado nmero de muestras No aplicable para determinar
elementos voltiles
Gran cantidad de muestra

2. Mineralizacin con plasma de oxgeno a baja temperatura

Proceso en el que se utiliza la molcula de oxgeno activado en el proceso
de eliminacin de la materia orgnica en una muestra. El oxgeno activado
(O*) hace que la reaccin de oxidacin sea ms uniforme que con O2
normal, permitiendo la eliminacin de la materia orgnica a T del orden 150
C
El dispositivo permite la formacin de O* pasando una corriente de oxgeno
a travs de un tubo de cuarzo, en el que se dispone de un campo elctrico
de frecuencia en el campo de las radiofrecuencias.
El oxgeno activado consiste en una mezcla de tomos de oxgeno, iones o
molculas en un estado electrnico fundamental y/o excitado.
Alta reactividad oxidando de forma eficaz la muestra a T 150 C

Ventajas
Bajo grado de volatilizacin
Bajo grado de contaminacin
Inconvenientes
Posibles problemas con el equipo
Elevado coste
Tiempos largos de tratamiento
Nmero de M limitadas por tanda

Este equipo es especfico, se tendr que justificar su utilizacin para tenerlo

en el laboratorio, en cambio, un horno mufla se encuentra habitualmente en
los laboratorios.
3. Proceso de combustin de Schniger (tcnica clsica)
Sistema cerrado en el que podemos asegurar un riesgo mnimo de
contaminacin. La nica prevencin o limitacin: tiene que estar
dimensionada la cantidad de muestra con el volumen o matraz.
Etapas:

43
 44

a) Colocar la muestra en un papel de filtro, de forma que una parte queda a

modo de mecha
b) Se coloca una disolucin colectora en un matraz de H2O2 o adsorbente
de muestra
c) Borboteador de O2 en ese recipiente cerrado, para favorecer la oxidacin
rpida de la muestra
d) Introducir el papel en el que estaba la muestra y le prendemos fuego
e) Lo introduzco en el recipiente para la combustin en atmsfera
enriquecida en O2
f) Una vez producida la combustin, se agita vigorosamente para que los
gases se absorban en la disolucin colectora.
g) Anlisis de la disolucin colectora.
4. Combustin de O2 a presin elevada
Similar a la combustin de Schniger. Los productos gaseosos de la
combustin se absorben en la solucin situado en el propio reactor. Su
principal aplicacin es la determinacin de S en aceites o material biolgico,
pero tambin se puede aplicar en determinacin de halgenos, P, As, Se, B y
algunos metales.
Ventajas:
a) Mayor rapidez
b) Combustin de mayores cantidades de muestra (mayor sensibilidad)
c) Completa recuperacin de la muestra (riesgo de volatilizacin baja)
d) Se puede trabajar con materiales resistentes a la combustin

Comparacin de los distintos tipos de mineralizacin por va seca

Tipos Versatilidad Tiempo Contaminacin

Hornos a Alta Elevado Alta
elevadas T
Plasma a baja T Alta Muy elevado Muy baja
Combustin en Media Corto Baja
frasco de O2

Disolucin Va hmeda (analito inorgnico, matriz orgnica e inorgnica)

Es otra forma de abordar matrices de naturaleza orgnica o tambin de naturaleza
inorgnica.
Para matrices orgnicas implica la eliminacin de la materia orgnica (y nos
quedamos con el residuo mineral inorgnico que puede necesitar un tratamiento
posterior) mediante tratamiento con cidos en caliente, igual que para matrices
inorgnicas.
Se puede llevar a cabo en;
a) Recipientes abiertos
b) Recipientes a presin (recipientes cerrados favorecen la interaccin con la
muestra)
c) Agitacin (para favorecer contacto de la mezcla cida y matriz puede haber
agitacin convencional mediante sonda ultrasonidos, o incluso radiacin
microondas)
Factores a tener en cuenta:
a) cidos
b) Fuente de calor (si es necesario o no, sistema abierto o cerrado o la
necesidad de sistemas ms sofisticados como microondas)

44
 45

c) Fuente mecnicas (si es necesaria para un contacto ms efectivo)

Extraccin diferente a digestin, la extraccin es

para compuestos orgnicos y no se elimina la
materia orgnica, sino que se extrae el analito. La
digestin es para compuestos inorgnicos.

En ocasiones, solo interesa la fraccin disponible, por ejemplo, de un metal de un

sedimento cuanto pasara al agua no toda la constitucin del material. Hay que
tenerlo en cuenta en la extraccin.

cidos a emplear
Depende de la naturaleza del analito y la matriz.
a) cidos diluidos: metales
b) cidos concentrados en caliente
c) Mezcla de cidos
d) cidos ms otros agentes

Propiedades de los cidos y sus mezclas frecuentes:

a) cidos fuertes
b) Capacidad oxidante y/o complejante
c) T de ebullicin (porque el proceso de digestin se ve favorecido con la
temperatura)
Dentro de los ms usados son HCl, HNO3 y la mezcla HCl+HNO3
El HClO4 y el HF tienen aplicaciones especiales (fraccin mineral de cidos
refractarios o silicatos)
1. Empleo de cidos solos
Existen una serie de factores que implica que los cidos tengan una mayor o
menor reactividad para la puesta en disolucin de la muestra y por tanto
condicionan su eleccin para nuestro propsito.
a) Naturaleza del cido (fuerte/dbil)
b) Punto de ebullicin
c) Poder oxidante y/o poder complejante
d) Grado de solubilidad de sus sales formadas
e) Aspectos de seguridad y pureza
Caractersticas ms relevantes de los cidos ms comunes con el fin de
adquirir un criterio de seleccin en funcin de la muestra, caractersticas de
los analitos

HCl
 cido fuerte
 Reacciona con metales de transicin formando complejos clorados solubles
en agua (excepto Ag y Tl)
 Propiedades reductoras dbiles y los iones Cl- poseen carcter complejante
(Au+3, Tl+3, Hg+2)
 Adecuado para disolver muestras fundida con hidrxidos alcalinos,
carbonatos y perxidos.
 Disuelve sulfuros con la formacin y eliminacin del H2S

45
 46

HNO3
 cido fuerte, oxidante, inestable, fotosensible, altamente reactivo y muy
poco complejante
 Buen disolvente de metales: Cu, Pb, Zn, Cd, Mo, etc as como sus
aleaciones. Pasiva metales como Al, Cr, Ti, Nb y Ta
 Puede originar productos de descomposicin que interfieran en muchos
mtodos analticos, hay que eliminarlo por evaporacin o con H2S o cido
perclrico

HClO4
 cido fuerte con elevado poder oxidante y muy poco complejante
 En caliente es capaz de disolver un elevado nmero de metales, por el
elevado punto de ebullicin, por la solubilidad en agua y poder
deshidratante de los percloratos (excepto NH4+, K, Rb y Cs)
 Nunca debe usarse slo, se recomienda la adicin de otros cidos por
ejemplo sulfrico
 Normas especiales
o No usarse en concentraciones superiores a 70%
o Manipulacin en campanas especiales, no debe permitir salir el aire
al exterior y deben tener un sistema de refrigeracin apoyado de
cortina de agua
o La reaccin con materia orgnica suele ser violenta, por eso se
recomienda en funcin de la matriz hacer un tratamiento previo con
ntrico
o Tambin se disuelve en compuestos orgnicos.
HF
 No posee propiedades oxidantes y su poder como agente de disolucin se
debe bsicamente a su capacidad altamente complejante. Uno de los pocos
cidos con capacidad para disolver la slice.
 Generalmente, se utiliza en combinacin con otros cidos
 Problemas
o Evitar usar material de vidrio
o Eliminacin de cualquier restos de fluoruro que pueda dar lugar a
interferencias por la formacin de complejos estables
o Produce quemaduras en la piel
H2SO4
 Diluido no tiene problemas oxidantes, concentrado oxida a un nmero
elevado de sustancias. Es un cido poco voltil, si se trabajan a elevadas
temperaturas se recomienda el uso de material de cuarzo.
 Gran capacidad para destruir la materia orgnica
 Como los sulfatos son poco voltiles, se pueden llevar las muestras a
sequedad sin prdida de elementos voltiles
 Disuelve casi todos los metales, aceros, xidos, hidrxidos, carbonatos y
sulfuros.
H3PO4
 cido dbil, no oxidante y muchos fosfatos son insolubles.
 La presencia de fosfatos interfiere en muchas determinaciones analticas
 Disuelve: sulfuros, ferritas y cromitas. Concentrado disuelve muchos
silicatos
 Capacidad limitada para anlisis orgnico

46
 47

2. Empleo de mezclas de cidos

En muchos casos resulta mucho ms til el empleo de dos o ms cidos debido
a que el efecto conjunto de las distintas propiedades de cada uno puede
aumentar enormemente la eficacia del proceso de disoluciones de muestras.
Los aspectos ms positivos se atribuyen a las causas siguientes:
 Se puede conseguir un doble efecto conjunto
 La mezcla de cidos puede originar un incremento importante de la
reactividad del proceso. Efecto sinrgico
 El cido puede moderar los efectos no deseados de otro
 Elimina los cidos tiles en el proceso de disolucin pero que peuden
interferir en el proceso de anlisis.

Las diferentes mezclas se observan en la tabla de

las transparencias de las EQA

Formas de llevar a cabo la disolucin

Cerrados Abiertos
Analitos voltiles Analitos no voltiles
Concentraciones elevadas Concentraciones menores
Baja cantidad orgnica Elevada cantidad orgnica

1. Recipientes abiertos:
La eleccin del material (vidrio, tefln o cuarzo) debe realizarse en funcin
de la reactividad de la muestra y los cidos que vayamos a utilizar
Se suele llevar a cabo sometiendo la muestra a las temperaturas de inters
y evitando riegos de prdidas y contaminacin de la muestra. Es importante
considerar la volatilidad de los analitos.
La mayora de los procesos de disolucin de muestras que se llevan a cabo
en recipientes abiertos se realizan en una placa calefactora, por lo general,
son procesos lentos. Proceso de transmisin de calor sea mucho ms
homogneo, se suelen llevar a cabo los procesos de disolucin en tubos de
pyrex o cuarzo.
2. Ultrasonidos
El proceso de agitacin puede llevarse a cabo con la ayuda de un bao de
ultrasonidos, el cual origina vibraciones que proporcionan agitacin a la
muestra por generacin de burbujas microscpicas que se contraen y
expanden pudiendo crecer hasta alcanzar un tamao crtico, punto en el que
se colapsan dando lugar a elevadas temperaturas y presiones que producen
la agitacin de la muestra, rotura y/o resquebrajamiento de las partculas
slidas.
Pueden liberar partculas atrapadas fuertemente en las superficies, de ah
que se hayan empleado en la limpieza de recipientes o utensilios
La efectividad del proceso depende de la potencia del instrumento, tamao
y geometra de los tubos y la posicin del transductor.
3. Reactores a presin
Con este tipo de sistemas se reducen los tiempos de extraccin para la
disolucin, los riesgos de contaminacin y prdidas de voltiles.
Son generalmente de tefln para que la zona de contacto con el cido sea
inerte, pero por fuera son de metal para conseguir alcanzar presin en el
interior.
El calentamiento se puede hacer en placa, estufa u horno.

47
 48

En sistemas cerrados se logra:

a) Reducir prdidas de voltiles
b) Reducir volumen de cidos (con energa microondas todava ms)
La diferencia entre la digestin y la microondas, es como se va a producir el
calentamiento

Ojo!! En los sistemas cerrados poseen riesgo

de sobrepresin

4. Microondas
Los reactores a presin estndar tienen la carcasa de acero y en el interior
tefln, por eso, este tipo de reactor no se emplea en microondas, porque el
acero refleja la radiacin.
La energa microondas hace un control ajustado de Temperatura y presin,
cosa que no permite una estufa
Los equipos de microondas manejan una frecuencia de 2450MHz (aunque
la frecuencia de microondas posee un intervalo mayor) La diferencia entre
un equipo casero y uno de laboratorio, es la robustez
La radiacin microondas se caracteriza por:
 Radiacin no ionizante
 No origina cambios en la estructura molecular
La interaccin entre molculas y radiacin microondas se debe a que las
molculas con momento dipolar se orientan de acuerdo al campo elctrico
de la radiacin, en esa orientacin respecto al campo magntico oscilante
hay dos mecanismos:
 Radiacin dipolar
 Conduccin inica (orientacin de acuerdo con las caractersticas del
campo elctrico)
El proceso de movilizacin de las molculas produce una transformacin de la
Ec en T el resultado es que la interaccin de la radiacin con la materia
produce un aumento de T en la propia muestra.
En funcin de la interaccin de la radiacin con los materiales los podemos
clasificar como:
 Conductores: Reflejan la radiacin microondas, por eso no se pueden
introducir metales en el microondas porque son conductores.
 Transparentes: no interaccionan con la radiacin electromagntica. La
mayora de los polmeros (como el tefln) son transparentes, por eso
se seleccionan estos materiales
 Dielctricos: interaccionan con la radiacin electromagntica y
absorben radiacin disminuyendo la potencia de radiacin que llega a
la muestra, por eso, tampoco se usan. Producen un incremento de
temperatura por conveccin, por tanto, ser ms lento.
En el proceso de optimizacin se juega con temperatura, masa y recipientes
de la muestra.
La tendencia actual es a reducir el tamao de los reactores para poder
introducir mayor nmero de muestras y hacer extracciones simultneas. En
los reactores se generan gases que hacen aumentar la presin en el interior,
por eso, los reactores, llevan unos dispositivos de seguridad que en esencia
son arandelas que permiten holgura. El cierre debe ser hermtico con un
medio de sellado que tiene propiedades de expansin para liberar la presin.
Los sistemas de rosca son difciles de saltar, antes se deforman.

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 49

En un laboratorio se podra usar un microondas convencional porque la

manera de producir la radiacin microondas es la misma, un magnetrn ser
el que produzca la radiacin de una intensidad y longitud, la diferencia ser:
 La robustez del equipo
 Una puerta reforzada, importante por seguridad si hay riesgo de
explosin, los compuestos orgnicos si son voltiles como son
inflamables hay riesgo de incendio, los cidos si se abre el reactor se
podran quemar.
 Seguimiento de P y T en el interior, puede ser con sondas o sistemas
en la base del equipo. Con el control de P y T podemos hacer las
condiciones para la disolucin de analitos. Trabajaremos con estos
parmetros y no con la potencia.
Normalmente en un mtodo de extraccin microondas tendremos que fijar:
Potencia de la radiacin Relacionado con la tcnica, influyen
tiempo de digestin en la exactitud
nmero de muestras
cantidad de muestras relacionado con la eficiencia de
volumen de cidos extraccin, si se modifica la eficiencia
tipo de cidos de la extraccin, varia la exactitud

En general, en microondas se usa menor cantidad de muestra, la cantidad de

muestra est relacionada con el LD.
A la hora de optimizar el mtodo es importante el nmero de muestras,
tenerlo preparado para 3 o 4 y ver si se mantiene para 20. Tambin
relacionado con la condicin de masa y potencia que puede adsorber esa
radiacin.
Etapas de digestin microondas
 Pesada
 Adicin de cidos
 Calentamiento
 Filtracin
Ventajas
 Rpido calentamiento
 T> P eb de los cidos
 Bajos tiempo de digestin
 Baja cantidad de cidos
 Baja prdida de voltiles (siempre que se respete el enfriamiento de
los reactores)
 Condiciones de digestin enrgicas
 Bajo riesgo de contaminacin, porque se usan materiales adecuados,
baja cantidad de cido y sistemas cerrados
En general, las aplicaciones son para pequeas cantidades de muestra

Tener en cuenta el tiempo de digestin, muchas

veces se habla de tiempo total, el de digestin es
menor. No se podra abrir el dispositivo en
caliente porque se evapora el gas. El enfriamiento
se puede hacer al aire, tambin hay hornos con
dispositivos con ventilacin u otros que favorecen

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 50

el enfriamiento sumergiendo los reactores en

agua/hielo.
Una vez que el reactor est a temperatura
ambiente, se puede abrir y llevar a cabo la
filtracin.
La radiacin microondas est focalizada.

Fusin
Eliminacin de la matriz inorgnica por tratamiento con fundentes en caliente. La
fusin es un proceso que se utiliza cuando no funciona la disolucin por va
hmeda, usndose elevadas temperaturas.
Las variables a controlar son:
 Temperatura
 Fundente
Las caractersticas del proceso de fusin dependen tanto del fundente o disolvente
como de la propia muestra a disolver. El fundente siempre va en proporciones
mayores que la muestra (3 o 15 veces) de ah el riesgo en anlisis de trazas. El
fundente no est puro.
Alternativa a la descomposicin con HF, HClO4 y HNO3 de cenizas.
Etapas
 Pesada de la muestra
 Adicin del fundente
 Calentamiento en mufla T>1200 C
 Disolucin en cido mineral
Se usa para medidas de fluorescencia, RX. No adecuado para trazas.
ventajas Inconvenientes
Disolucin de materiales Prdida de voltiles
resistentes Fcil contaminacin

segn carcter cido-base del fundente

fusin alcalina fusin cida
carbonatos Disulfatos
Hidrxido fluoruros
boratos xido de boro

segn carcter redox del fundente

fusin oxidante fusin reductora
ag alcalino oxidantes alcalinos+reductor
perxidos sulfuros+alcalis

Separacin y preconcentracin
Extraccin lquido-lquido
Extraccin con fluidos supercrticos
Co-precipitacin
PROCESOS FSICO + PROCESOS
Evaporacin del disolvente
QUMICOS
Dilisis
En fase slida
Destilacin

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 51

Objetivos: separacin, preconcentracin y especiacin

Por la propia naturaleza y metodologa de los compuestos inorgnicos, las
interferencias de la matriz son reducidas, aunque en ciertos casos, esta etapa
puede ser necesaria.
Separacin
1. Extraccin lquido-lquido
Complejacin ms o menos selectiva del analito con diferentes agentes y su
posterior extraccin en un pequeo volumen de disolventes orgnicos no
miscibles.
La extraccin de especies inorgnicas se representa en el siguiente cuadro:
Forma en que se extrae
Iones Complejo neutro
cidos y sales solvatados Solvatacin con teres o cetonas
Formacin de pares inicos de
Extraccin de sales no solvatadas
especies aninicas y catinicas
Molculas covalentes Directamente en el disolvente

Principales agentes quelatantes utilizados en extraccin lquido-lquido:

Agentes quelatantes Disolvente Orgnico
8-hidroxiquinoleina Cloroformo
Difeniltiocarbazona (ditizona) Cloroformo, nitrobenceno
Dietiltiocarbamato sdico Cloroformo, diisobutilcetona
Metilisobutilcetona, diisobutilcetona,
Pirrolidineditiocarbamato amnico
CCl4
1,1,2_tricloro-1,1,2-trifluoroetano,
Dietilamonio-dietilditiocarbamato
cloroformo
1-(2-piridilaza)-2-naftol (PAN) metilisobutilcetona
En general y basndose en los factores que gobiernan la solubilidad, las
molculas no cargadas, no polares y gran tamao sern ms solubles en los
disolventes orgnicos.
Un disolvente orgnico debe de tener como requisitos:
 Baja solubilidad y reactividad con el agua
 Puntos de ebullicin no muy bajos
 Densidad adecuada para lograr una buena separacin de fases
 Baja tendencia a forma emulsiones
 Carcter no txico
2. Extraccin con fluidos supercrticos
Extraccin con disolvente a T y P elevadas. Se aumenta la eficacia de la
extraccin disminuyendo el tiempo de extraccin y el gasto del disolvente.
 Propiedades del lquido: alta densidad y elevado poder solubilizante
 Propiedades del gas: baja viscosidad y alta difusividad
Propiedades de la extraccin con fluidos supercrticos:
 Solubilizacin de analitos
 Alta influencia de la P sobre el poder solubilizante
 Ata penetracin dentro de la matriz
 Eficacia en el transporte de los analitos
Se utiliza en muestras donde el analito est fuertemente retenido

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 52

Ventajas Inconvenientes
Rpido Tamao de muestra limitado
Baja cantidad de disolvente Alto coste
Extractante no txico Depende del tipo de matriz
Elevada selectividad
Automtico
No requiere filtracin

3. Co-precipitacin
Co-precipitacin ms o menos selectivo del analito, mediante la adicin, en
determinadas condiciones, de agentes precipitantes (colectores) y
redisolucin en cido diluido.
Inorgnicos: hidrxidos u xidos hidratados de
Fe, Al, La, Mn, Sn y Bi
colectores
Orgnicos: ditiozonatos, oxinato de Cu,
cupferrato de Cu

Preconcentracin
1. En fase slida:
Pre concentracin ms o menos selectiva del analito en soportes slidos de
diferente naturaleza. Posterior elusin con cido diluido.
Resinas de intercambio inico: dowex y chelex 100
Soportes quelatantes: grupo iminodiactico, grupo cido
Soportes
sulfnico
Adsorbentes: carbn activado, slice, almina
2. Transferencia de una matriz a otra fase:
a) Evaporacin del disolvente: Calentar la disolucin por encima de su
punto de ebullicin hasta el volumen deseado e incluso hasta sequedad,
para despus redisolver el producto en el mnimo volumen de disolvente
posible
b) Dilisis: Eliminar parte de la matriz mediante su paso a travs de
membranas semipermeables. No se suele utilizan en analitos
inorgnicos.
3. Transferencia de analitos a otra fase:
a) Destilacin y volatilizacin: los componentes gaseoso o voltiles pueden
separarse de la matriz mediante destilacin y recogerse en una
disolucin absorbente.
Para compuestos inorgnicos se utiliza la volatilizacin, que consiste en
separa un compuesto de la matriz con la ayuda del burbujeo de un gas
de arrastre. Los compuestos volatilizados son absorbidos en una
disolucin adecuada, o se condensan sobre una superficie slida
enfriada, para su posterior determinacin.
b) Extraccin lquido-lquido: complejacin ms o menos selectiva del
analito con diferentes agentes y su posterior extraccin en un pequeo
volumen de disolventes orgnicos no miscibles. Se usa para la mayora
de los metales pesados y de transicin.
c) Precipitacin
d) Reactivos quelatantes o de cambio inico: el empleo de
intercambiadores catinicos o aninicos nos permite concentrar

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 53

compuestos inorgnicos cargados. El empleo de quelatantes en lugar de

intercambiadores proporcionan mayor selectividad al proceso.
e) Atrapamiento en adsorbentes: Semejante al anterior, usando un
adsorbente del tipo carbn activado, slice, almina Para retener
analitos. Usado especialmente en elementos que formen hidruros.

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 54

(Aqu comienza el ltimo parcial)

7.5 Mtodos de preparacin de muestras para la determinacin de analitos

orgnicos
La dificultad del anlisis de los compuestos orgnicos es mayor que la de los
compuestos inorgnicos porque son innumerables. Cuando hacemos una
extraccin, extraemos algo ms que el compuesto de inters.
Adems los compuestos orgnicos son txicos (algunos) y tambin hay que contar
con la toxicidad intrnseca de los disolventes que se utilizan para su tratamiento.
Etapas:
Anlisis compuestos orgnicos

Toma de muestra

Muestreo

Pre-tratamiento y almacenamiento

Extraccin
Preparacin
de la
muestra Purificacin, fraccionamiento y
preconcentracin

Anlisis separacin, identificacin y cuantificacin

cromatog cromatogrfica

En el anlisis de compuestos orgnicos existe mayor probabilidad de interferencias,

por lo que se necesitan etapas previas a la medida.
medida. Esto es debido a que la tcnica
utilizada es menos especfica que EAA.
Suelen emplearse tcnicas cromatogrficas para la determinacin de analitos
orgnicos porque poseen un gran poder de separacin, tienen a su vez distintas
etapas:
 Separacin
 Anlisis cualitativo
 Anlisis cuantitativo

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 55

Extraccin Sustancias
Lquida, sucesiva. interferentes.
slida Muestreo Posibilidad
enriquecido de prdidas

Extraccin Limpieza

Analitos orgnicos

Preconcentracin Eliminacin del disolvente

Seleccin del procedimiento

Hay que tener en cuenta:
 Tiempo necesario para su realizacin
 Empleos de reactivos
 Practicidad
 Coste
 Impacto ambiental del procedimiento
 Procedimiento simple, preciso y exacto.

Extraccin:
Objetivos:
 Obtener un extracto representativo de la muestra original enriquecido en los
compuestos de inters
 Compatible con la instrumentacin analtica y con facilidad para la
separacin y deteccin de los mismos
 Muestra en disolucin.

Extraccin con disolventes (disolventes de trazas)

Particin de la muestra entre dos lquidos inmiscibles en los cuales el analito y su
matriz tienen distintas solubilidades. Implica la separacin de una sustancia
(soluto) en una muestra lquida, slida o gaseosa empleando un disolvente
adecuado.
Se define el coeficiente de distribucin (Kd):


=
E

Donde:
Co: concentracin del analito en la fase orgnica
Caq: concentracin del analito en la fase acuosa

Una expresin ms til es la fraccin de analito extrado (E)

 F F
A= =
 F + E FE 1 + 

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 56

Caractersticas de los disolventes

 Eficiencia en la extraccin: relacionado con la mayor o menor capacidad
extractiva del disolvente aplicando una tcnica determinada
 Selectividad: para aumentarla se emplean mezclas de disolventes
adecuados
 Inercia: el disolvente, debe de ser inerte, no puede reaccionar con los
analitos de inters.
 Punto de ebullicin
o Toxicidad de disolvente
o Densidad relativa de las dos fases
o Tendencia a formarse emulsiones
o Compatibilidad con el sistema de deteccin
o Se prefieren los disolventes de bajo punto de ebullicin
 Compuestos no polares:
o Disolventes: pentano, hexano, tolueno, diclorometano, acetona
o Son no selectivos y extraen materiales lipoflicos al mismo tiempo
que los analitos de inters
 Compuestos polares
o Disolventes: acetonitrilo, metanol

Extraccin: Arrancar el analito de la matriz a la que est unido mediante el empleo

de agentes extractantes (slidos, lquidos o fluidos supercrticos)  Debilitar las
interacciones.

Procesos de extraccin:
 Extraccin lquido- lquido:
a) Extraccin discontinua: extraccin con embudos de decantacin, sin
necesidad de varias extracciones con extractante limpio
b) Extraccin continua: extractores continuos, extraccin a contracorriente
etc

Ventajas
Bajo coste del equipo
Extracto compatible con el sistema
cromatogrfico
Amplia variedad de selectividad
j modificando los disolventes a
h emplear.
Desventajas
Volmenes grandes de disolvente
Disolventes txicos e inflamables
Procedimiento laborioso
Disolventes de elevada pureza
Minimiza contaminacin e
interferencias de fondo

 Extraccin slido-lquido:
Factores:
Disolvente  polaridad
Temperatura: a mayor temperatura  mayor eficiencia
Presin: mayor presin mayor eficiencia
Con disolventes:
disolventes
a) Mtodos clsicos:
a. Agitacin ultrasonidos
b. Soxhlet

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 57

b) Energa microondas
c) Extraccin con disolventes a presin.

Extraccin con fluidos supercrticos

Extraccin con disolventes:

A. MTODOS CLSICOS
Mtodos clsicos: Agitacin con ultrasonidos
El disolvente puede enfriarse o calentarse a reflujo para mejorar la eficiencia
de extraccin. Es necesaria una homogenizacin y reduccin del tamao de
partcula para contacto ms eficiente entre muestra y disolvente.
Es un proceso suave con baja eficiencia
Manual o automtico
Ultrasonidos (20-40Hz) aumenta la eficiencia
Ventajas/inconvenientes:
Simples
Poco eficaces
Mucha cantidad de muestra
Elevada cantidad de disolvente (requiere preconcentrar)
Requiere filtracin del extracto
Laborioso

Mtodos clsicos: Soxhlet

Consiste en poner en contacto el disolvente limpio con la muestra para
obtener un extracto que contenga los analitos de inters. El disolvente se
evapora al calentarlo y asciende por la rama hacia el extractor, al ponerse en
contacto con el refrigerante condensa y cae sobre la muestra gota a gota. El
disolvente puro y el goteo relativamente continuo.
La muestra se empapa de disolvente y asciende el volumen, al llegar a la
altura del asa se ejerce un efecto de vaco que devuelve el disolvente al
matraz.
Factores a tener en cuenta:
Tiempo
Nmero de ciclos
Temperatura
Volumen de disolvente
Ventaja: mtodo de referencia
Inconvenientes:
Tiempo de extraccin largo (10-24h)
Contacto de la muestra y disolvente es un proceso esttico, excepto
durante el breve periodo que se produce el sifn
Los analitos deben ser estables a la temperatura de ebullicin del
disolvente
Se emplea gran cantidad de disolvente (150-200ml)
Una variante del soxhlet es el Soxtec cuyo equipo instrumental se puede
programar, disminuye el tiempo de extraccin y volumen de disolvente) Las
etapas del proceso de extraccin son:
Solubilizacin de la materia extrable de la muestra inmersa en el
disolvente a ebullicin

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 58

Lavado de disolvente extrable

Concentracin del extracto y recogida del disolvente destilado
Mtodos clsicos: ultrasonidos
Ventajas con respecto al soxhlet:
Reduce el tiempo de extraccin a 1.5h (un total de 1,5h pero son dos
o tres extracciones de 30min)
Reduce el volumen de disolvente (100mL) volumen final no para
cada extraccin
Parmetros:
Tiempo
Volumen de extraccin
Nmero de extracciones
Tipo de disolvente
Masa de muestra

B. MICROONDAS
Se puede emplear para la extraccin de compuestos orgnicos, empleando
distintos disolvente. El fundamento es el mismo que para los compuestos
orgnicos, la interaccin entre molculas y radiacin microondas se debe a
que las molculas con momento dipolar se orientan de acuerdo al campo
elctrico de la radiacin mediante dos mecanismos: rotacin dipolar y
conduccin inica. (Energa
Energa no ionizante)
ionizante
El proceso de movilizacin de molculas produce una energa cintica que
se transforma en temperatura, el resultado es que se produce un aumento
de temperatura en la propia muestra.
Hay tres tipos de materiales segn su interaccin con la radiacin:
Conductores: reflejan la radiacin microondas
Transparentes: no interaccionan con la radiacin
Dielctricos: interaccionan con la radiacin electromagntica y
absorben la radiacin disminuyendo la potencia que llega a la
muestra.
Materiales de los reactores: cuarzo, vidrio, plsticos (tefln y Poliestireno)
Tipos de reactores:
Abiertos (presin atmosfrica) riesgo de prdida de analitos
Cerrados( bajo presin) reduce prdidas por volatilizacin,
condiciones ms enrgicas de extraccin
Disolventes: hexano, diclorometano, acetona, metanol, acetonitrilo
Parmetros a controlar:
Potencia tiempo
Temperatura
Presin: la presin se puede controlar de forma continua o en forma
de pulsos
Componentes del horno:
Generador de microondas (magnetrn)
Gua de ondas
Cavidad resonante
Fuente de energa
Hay equipos que aguantan mayores/menores presiones, asique se
trabajan con medio-baja presin. Es ms importante sistema de fugas

58
 59

(avisa cuando un disolvente se est fugando) tambin que tienen

sensores de temperatura para cada reactor, o bien para uno solo.
Microondas focalizadas; la radiacin se dirige a una cavidad
Ventajas:
Rapidez: las extracciones se realizan en minutos (10-15)
Menor consumo de disolventes (10-20mL)
Sin prdidas de compuestos voltiles (recipientes cerrados)
Sin contaminacin
Econmico
Inconvenientes:
Requiere filtracin del extracto
Requiere limpieza del extracto
Requiere la adicin de un disolvente polar
Factores que afectan a la extraccin
Potencia de la radiacin de microondas
Tiempo de extraccin
Cantidad de muestra
Tipo y volumen de disolvente
Nmero de reactores
Optimizar estos parmetros.

C. EXTRACCIN CON DISOLVENTES A PRESIN (PLE, ASE)

Utiliza disolventes orgnicos a alta temperatura y presin (ambos).
Extraccin ms eficiente (da recuperaciones mayores del 100% con respecto
al Soxhlet)
Temperaturas altas (hasta 200 C)
Aumenta la capacidad del disolvente de solubilizar los analitos
Disminuye la viscosidad de los disolventes orgnicos y se favorece la
penetracin en la matriz
Presiones elevadas (hasta 3000psi)
Permite al disolvente mantenerse lquido por encima de su punto de
ebullicin
Permite al disolvente penetrar en la matriz de la muestra.
Se mezcla con un dispersante (tierra de diatomeas), favorece el mayor
contacto de la muestra con el agente extractante (a alta presin se
compacta la muestra y dificulta que el extractante penetre por ello se utiliza
el agente dispersante)
Ventajas:
Tiempos de extraccin cortos 15-20 min por muestra
Tcnica totalmente automatizada, gran reproducibilidad y fcil
utilizacin
La aplicacin de altas presiones permite la extraccin de analitos
trmicamente lbiles, incluso a elevadas temperaturas.
Empleo de poco volumen de disolvente, de 10 veces menor que en
tcnicas tradicionales.
Limitaciones:
Los costes de los equipos son muy elevados
Aunque el proceso de extraccin es corto, la preparacin de celdas
de extraccin es una etapa laboriosa

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 60

Parmetros iniciales:
Influencia de la masa de muestra
Nmero de extracciones
Efecto de la temperatura y presin
Otros:
Tiempo de precalentamiento, purga durante el precalentamiento, tiempo de
calentamiento, tiempo de extraccin esttica, volumen de lavado, tiempo de
purga, ciclos estticos (nmero de extracciones) disolvente.

Ventajas/inconvenientes con medio acuoso:

Extracto no txico
Alta eficiencia
Requiere filtracin

Extraccin con fluidos supercrticos (SPE)

Extraccin con disolvente a temperaturas superiores a la de ebullicin y
presiones elevadas, por encima de sus valores crticos. Se aumenta la
eficacia de la extraccin disminuyendo el tiempo de extraccin y el gasto de
disolvente.
Propiedades del fluido supercrtico: poder disolvente, baja viscosidad, alta
difusividad, el ms utilizado el CO2
Penetra como si fuera un gas, con las propiedades disolventes de los lquidos,
el poder eluyente puede modificarse mediante presin y/o temperatura o un
modificador.
Permite procedimientos de extraccin selectivos.
Tienen viscosidad ms baja y mayores solubilidades de soluto que los
lquidos, facilitando la transferencia de masas.
Temperaturas de extraccin bajas: sustancias termolbiles.
Ventajas/inconvenientes:
Rpido, eficiente, seguro y menos laborioso que las tcnicas
convencionales.
Elevadas recuperaciones en tiempo de extraccin menos de 20 min
Temperatura de extraccin bajas. Sustancias termolbiles.
Variables a optimizar:
Eleccin del fluido
Presin y temperatura
Tiempo de extraccin
Cantidad de muestra
CO2: fluido de eleccin en aplicaciones analticas:
Baja temperatura (30 C) y presin critica
Baja reactividad y toxicidad
Alta pureza a un coste razonable.

 Extraccin slido-slido:
Dispersin de la matriz en fase slida, tambin vale como proceso de
purificacin.
Los pasos a seguir son:
1. Absorbente en un mortero
2. Se le aade la muestra

60
 61

3. Se homogeniza la mezcla
4. Se pasa la mezcla a una jeringa o columna
5. Se eluye con un disolvente adecuado y se recogen las fracciones

 Preparacin de matrices slidas y semislidas (tejidos biolgicos, frutas,

vegetales)
 Reduce la cantidad de muestra (<1g) bajo consumo de disolvente (98%
reduccin) y reduccin de tiempo de anlisis (90% menos)
 Se emplean distintos tipos de sorbentes/disolventes segn el
analito/matriz.
 Las proporciones muestra/sorbente son . La relacin ptima varia en
funcin de la naturaleza de la matriz.

Procedimiento de purificacin y limpieza (clean-up)

Esta etapa frecuentemente determina el tiempo total de analitos y el xito
del mismo.
Objetivos:
 Eliminacin eficiente de las interferencias de la matriz
 Concentracin o dilucin del analito
 Preparacin del analito en la forma de ms adecuada para el anlisis
final por cromatografa.
Tcnicas ms empleadas:
 Saponificacin (matriz biolgica eliminamos los componentes grasos)
 Tratamiento con cido sulfrico concentrado (oxidar la matriz
orgnica) esto si el analito resiste el cido sulfricos, es muy
limitado
 Filtracin (otras tcnicas de membrana)
 Mtodos cromatogrficos.

Tcnicas de membrana
Implican la migracin de molculas a travs de membranas semipermeables
por difusin molecular
Filtracin:
1. Actualmente proceso complejo
2. Fenmeno de capilaridad
3. Distintos tipos de filtros
4. Tamao de poro de la membrana
Tipos de membrana: papel, fibra de vidrio, polmeros, coloides, etc
1. Microfiltracin: mtodos cromatogrficos requieren que la muestra est
libre de material particulado. Filtracin a travs de un filtro de membrana
de 0,45 m (HPLC o cromatografa inica)
2. Ultrafiltracin: las macromolculas se separan de la solucin por
filtracin a travs de membranas. Inicialmente eran de celulosa, siendo
actualmente de tefln, acetato de celulosa, poliacrilonitrilo y polisulfona.
La seleccin de la membrana correcta depende de la naturaleza de la
inversa y en disolvente.
Aplicaciones:
Concentracin de analitos de elevada masa molecular eliminando el
disolvente
Fraccionamiento de molculas en fase a tamao
Eliminacin eficiente de solutos orgnicos
61
 62

Aislamiento de analitos de baja y alta masa molecular en presencia

de otras.
3. Dilisis: la separacin por permeacin selectiva a travs de membrana
semipermeable debido a un gradiente de concentracin.
a. Dilisis pasiva: implica difusin de las partculas de masa
molecular especfica a travs de una membrana neutra
b. Dilisis activa: se transfieren iones.
4. smosis: proceso de difusin molecular

Mtodos cromatogrficos
Tcnica de separacin.

Depsito

1 disolvente

2 disolvente

Lana de vidrio

Clasificacin de disolvente en funcin de su polaridad.

Apolar Hexano
Isooctano
CCl4
Cloroformo
Diclorometano
ter etlico
AcOEt
Acetona
Acetonitrilo
Isopropanol
Metanol
Polar
Agua

Adsorbente Ejemplo de uso Forma disponibles

Neutra, cida, alcalina.
analitos no polares con
Almina Se activa a 400C
interferentes polares
durante 8-12h
Generalmente activado,
cidos orgnicos,
puede ser desactivados.
Slica gel alcoholes, especies
Se activa a 180C
polares
durante 8-12h
Muy utilizado en
Florisil se activa a 130 C
procesos de limpieza, se
(MgO+Al2O3) durante 8-12h
usa para pesticidas

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 63

absorbente general de
Carbn compuestos orgnicos, activado
elevada rea especfica

materiales no
geles de
adsorbentes, se emplean
porosidad geles de poliestireno,
por exclusin del
controlada polivinilcetato,
tamao, compatibles
(interaccin acrilamida, agarosa
con disolventes
por tamao)
orgnicos

1. Extraccin en fase slida (SPE)

Reparto del analito entre la muestra lquida y la fase slida. Al hacer pasar la
muestra a travs de la fase slida, algunos compuestos quedarn retenidos
en ella, mientras que otros pasarn inalterados. Posteriormente, si los
analitos quedaron retenidos se eluyen con un pequeo volumen de
disolvente,

Caractersticas:
Miniaturizacin de las columnas cromatogrficas convencionales
Se emplea para:
o Enriquecimiento y/o purificacin de matrices slidas
o Extraccin de muestras lquidas.
Nombres comerciales: Sep pak, bond elut, techemt, extra-sep,..

Sistemas de purificacin/limpieza
Extraccin en fase slida
Ventajas:
1. Rapidez
2. Bajo consumo de disolventes
3. Mayor nmero de muestras
Procedimiento:
1. Acondicionamiento (acuoso, no acuoso, polar, apolar, etc)
2. Retencin
3. Lavado
4. Elucin de los compuestos de inters
Tambin puede ser al revs que me pase el analito de inters y el resto queden
retenidos, pero es menos selectivo que el procedimiento anterior.
Materiales de relleno:
Absorbentes inorgnicos como silicagel, almina o florisil
Fase enlazados a materiales de slica; octadecil, octil, hexil, etil,
fenil
Resinas de intercambio inico (catinico y aninico)
Polmeros
Resinas quelatantes
Fases espaciales (compuesto con algn grupo especfico que permita
separar un determinado compuesto)

63
 64

Gua para el empleo de SPE

Tipo de sorbente
Fase normal Fase inversa
gel de slice, florisil, cambio inico
octadecil, cianopropil
almina, fase enlazada
disolvente
para aplicar hexano, tolueno,
agua, buffers agua, buffers
a la diclorormetano
muestra
disolvente
acetato de etilo, metanol/H2O, Buffers, soluciones
para
acetona, acetonitrilo acetonitrilo/H2O salinas
elucin

orden de menor a mayor mayor a menor primero menos

elucin polaridad polaridad ionizados

cambio de
disolv, para
incrementar polaridad disminuir polaridad del incrementar la I del
eluir
del disolvente disolvente disolvente, variar el pH
solutos
retenidos

Estudio de etapa de purificacin

Imprescindible en muestras de vegetacin
Florisil: 1g de florisil no suficiente limpieza del extracto, 5g de florisil
Almina; el orden de estos adsorbentes (almina en la parte alga y
florisil en la baja) es importante.
Discos; muestras lquidas.
Ventajas:
o Menor superficie de extraccin
o Reduccin del tiempo
Discos laminares (rellenos de SPE)
Ventajas:
o No necesita filtrado previo
o Elevado flujo de muestra
Ventajas de la SPE frente a la extraccin L-L
Rapidez y posibilidad de predecir parmetros experimentales (cantidad,
volumen)
Muestreo en el campo, evitando el transporte de muestras voluminosas y
almacenamiento fcil
No se produce emulsin de la muestra
Seguridad: reduccin de disolventes, inflamables y exposicin del personal a
disolventes txicos.
Bajos costes, menos laborioso
Fcil de automatizar y posibilidad de acoplamiento online con el proceso de
separacin

Tcnicas de preconcentracin, tipos de sistemas:

64
 65

a. Evaporador rotatorio
b. Evaporacin en corriente de gas inerte (nitrgeno)
c. Evaporador condensador Kuderna-Danish
d. Concentrador evaporador automtico
i. Agitacin + gas inerte
ii. Se pueden evaporar 4-96 muestras al mismo tiempo

2. Microextraccin en fase slida (SPME): no est muy implantada

SPME utiliza una fibra de slice fundida cubierta con un adsorbente, incluida
en una jeringa GC modificadora para extraer muestras y pasan los analitos
directamente al inyector del cromatgrafo.
El objetivo es una extraccin en condiciones de equilibrio. Como las
variables estn perfectamente controladas, se trata de un proceso 100%
reproducible.
Tipos de adsorbentes: polidimetilsiloxano, poliacrilato, divinilbenceno.
El capilar se recubre del adsorbente y el analito se adsorbe sobre este.

GH FH  F
(Dimensiones reducidas)
=
H FH + F
Se puede trabajar en :
a. Espacio de cabeza: dejan volumen 30-50% del vial. Mejor
extraccin y rapidez
b. Inmersin: rellenar ms del 80% del vial (1-5mL) Justo debajo de
la superficie de la muestra.
Importante fijar la posicin de la fibra (reproducibilidad)
Aplicable a slidos, lquidos y semilquidos. Tambin tiene aplicaciones no
voltiles para HPLC
Parmetros:
Tiempo de extraccin: 15-20min
Temperatura: crtica en la precisin
Agitacin
pH
fuerza inica.
La introduccin de la muestra es diferente si se inyecta en CG o HPLC.
La jeringa se introduce en la muestra, se produce la extraccin y
pasado un tiempo se inyecta en el CG (desorcin trmica: til para
voltiles)
Se colocara la jeringa en una interfase de manera que la fase mvil
(el disolvente que quiera) circule y la introduzca en el cromatgrafo
de HPLC
Ventajas:
Rapidez; el tiempo de equilibrio es de 2-15min
Sensibilidad: se alcanza limites de deteccin
Econmico: se reduce el gasto de disolventes y material
Versatilidad: permite emplear cromatografa gases o GC-Ms con
cualquier sistema de inyeccin.

3. Extraccin de barra agitadora (SBSE)

Una barra agitadora recubierta con fibra adsorbente. El procseo se hace con
un Twister de agitacin. Colocamos la muestra lquida o semislida en una

65
 66

plaga agitadora. (podemos controlar agitacin, tiempo, temperatura y fase) y

pasan los analitos a la fibra. Esa barra se eluye despus con 1 o 2 mL de
disolvente.
Aplicaciones:
Comida
Perfumes
Anlisis de aguas residuales
Biomedicina.

4. Microextraccin con gota

Se realiza la extraccin con 1 gota (para espacio de cabeza)
Ventajas:
Elevada selectividad por el amplio rango de disolventes de extraccin
5. Extraccin con membrana (MDSE)

Extraccin de voltiles orgnicos de muestras acuosas (tambin para slidos)

Purga o Stipping espacio de cabeza

Peridica esttico
Continua dinmico

Concentracin de los componentes

en un adsorbente slido.

Sistemas abiertos sistemas cerrados

Purga y tiempo closed-up, stripping

Desorcin de los componenetes

concentrados

Desorcin trmica
Elucin con disolvente.

7.6 Especiacin

Tratamiento de la muestra para determinacin de especies

Especiacin qumica: compuestos o forma qumica en los que un elemento aparece
en un sistema vivo o en el medio ambiente. Tambin puede referirse a la
distribucin cuantitativa de un elemento (definicin IUPAC) Define el estado de
oxidacin, concentracin y composicin de cada una de las especies presentes en
una muestra qumica.
Especiacin se puede definir como proceso por el que se identifican y cuantifican
las diferentes especies, formas o fases presentes en un material donde las
especies, formas o fases se definen:
Funcionalmente: de acuerdo a la disponibilidad biolgica de las
diferentes formas del metal

66
 67

Operacionalmente: de acuerdo al proceso de fraccionamiento fsico o

qumico aplicado a la muestra, Dentro de esta distinguimos:
o Especiacin fsica: la muestra se clasifica segn su tamao de
partculas, densidad o distribucin en diferentes fracciones
o Especiacin qumica: nos centraremos en la especiacin
qumica de metales, a su vez hay dos tipos:
 Esquemas de especiacin; estudio de la fraccin del
contenido total de un metal en un material lquido o
slido con un comportamiento determinado
 Especiacin especfica: consiste en la separacin como
compuestos especficos o estado de oxidacin de un
elemento (gran selectividad y sensibilidad)

Importancia de la especiacin en el medio ambiente

Necesidad de informacin especfica discriminante sobre determinados analito, en
particular, analitos inorgnicos presentes en la muestra. Relacionado con la
dependencia de forma qumica, y toxicidad. No todos los compuestos de un mismo
elemento presenta la misma toxicidad:
Mercurio: compuestos mercuriales 1000 veces ms txicos que las especies
inorgnicas
Arsnico; compuestos organometlicos carecen de toxicidad, sin embargo el As (V)
y As (III) son txicos
Cromo: Cr(VI) mucho ms txico que Cr (III)

El conocimiento de las formas qumicas en que un elemento se puede encontrar en

el medio ambiente permite:
 Evaluar y cuantificar los posibles efectos nocivos de los elementos en el
medio ambiente
 Predecir efectos futuros debidos a la presencia de metales provenientes de
fuentes antropognicas
 Disear tcnicas adecuadas para el control y eliminacin de residuos
 Entender los procesos bsicos de distribucin y movilidad de metales en los
ecosistemas marinos.
 Identificar aquellas especies que puedan ser txicas para los organismos
vivos
 Establecer los parmetros que influyen sobre la biodisponibilidad de
especies txicas (pH, E, T, etc)
La valoracin del impacto ambiental de un elemento no depende
nicamente de su concentracin sino tambin de su especiacin.

La valoracin del impacto ambiental de un elemento no depende

nicamente de su concentracin sino tambin de su especiacin

Principales problemas
1. Durante el tratamiento de la muestra se tiene que conservar la forma
qumica de las especies. Dificultad de las muestras slidas, pasar a
disolucin las distintas especies sin ninguna transformacin qumica.
2. Necesidad de tcnicas de elevada sensibilidad para cuantificar las especies.
Niveles traza/ultratrazas.
3. Falta de patrones comerciales de diversas especies y de materiales de
referencia para la validacin de los resultados

67
 68

4. En ocasiones no est bien establecida la estabilidad de las especies en

disolucin, lo que dificulta su deteccin (los valores tericos no siempre se
corresponden con los de la muestra)
5. El estudio de especiacin de metales no puede ser un proceso de rutina y no
debe tratarse como tal

Extraccin de las especies es la etapa de mayor dificultad y es el factor

limitante del proceso de anlisis.

Especiacin

Modelos matemticos:
mtodo experimental: Suponer distribucin de
Determinar especies sometidas a
analiticamente las iones de equilibrio.
concentraciones de Conocer nmero total e
analito presente identidad. Concentracin
total de metales,
ligandos coloides,
material particulado
Deducir concentracin
de especies

Diferenciacin de formas orgnicas e inorgnicas.

Existen diferentes tipos de especies de metales:
Iones libres: en general, muy txicos para los organismos vivos
Compuestos inorgnicos: pueden reducir la toxicidad de los metales
pesados debido a la formacin de carbonatos
Compuestos organometlicos de bajo peso molecular: son muy
txicos porque son liposolubles y pasan a travs de la membrana
Compuestos organometlicos de alto peso molecular: la
complejacin de los metales con molculas orgnicas grandes
reduce su toxicidad.
Especies metlicas absorbidas en coloides, material particulado o
sedimentos.
En funcin de su solubilidad:
Especies solubles en disolventes orgnicos: complejos neutros y
especies organometlicas.
Especies insolubles en disolventes orgnicos: especies cargadas e
iones libres

Especiacin de Arsnico
El estudio de la separacin de arsnico es muy interesante porque:

68
 69

Posee diferentes estados de valencia As(III), As (IV) intercambiables

en ciertas condiciones
Forma pequeas molculas organometlicas que son biomarcadores
de exposicin (se sabe que en el mecanismo de detoxificacin del
arsnico orgnico se metaboliza a AMMA y ADMA)
Es parte de otros compuestos orgnicos que permanecen inalterados
en el cuerpo como AsB, la AsC, arsenoazcares, arsenolpidos
Forma biomoleculas macromoleculares, como aquellas en que el
arsnico se enlaza a la transferina y a la hemoglobina
Algunos procesos de anlisis:
Especiacin de As(III) y As (V) mediante control de pH
Especiacin de As (III), As(V), MMA y DMA mediante resinas de
intercambio inico
Especiacin de As (III), As (V), MMa, DMa, AsB, AsC mediante
acoplamiento HPLC-MW-HG-AAS

*Nota; MW es microondas, solo acelera el proceso. NO digestin

MMA: cido monometilarsnico
DMA: cido dimetilarsnico
HG: generacin de hidruros.
Especiacin de As (III) y As (V) mediante control de pH
Condiciones estudiadas:
pH= 4-6: As(III): AsH3
pH 1; As (III) y As (V) AsH3 (por diferencia se As(V))
Aplicacin: digestin por va hmeda (60% HNO3, 110C, 2h)
Muestras de sedimentos, vegetacin
Especiacin de As (III), As (V), MMa, DMa, AsB, AsC mediante
acoplamiento HPLC-MW-HG-AAS

Tcnicas hbridas:
Combinacin de dos o ms tcnicas consolidadas:
Cromatografa de gases + masas
Cromatografa de lquidos + Ua, +EAA,+EFA
Cormatografa de fluidos supercrticos + bill
Cromatografa inica + EAA, +ET+EAA,
Electroforesis capilar+UV

69
 70

Tema 8: Tcnicas cromatogrficas en el anlisis de trazas

Definicin: tcnicas de separacin basada en la particin del soluto entre dos fases
inmiscibles entre s y en equilibrio. La velocidad de desplazamiento diferencial de
una mezcla de componentes que se establece por la entrada en contacto de dos
fases mutuamente inmiscibles, siendo una de ellas estacionaria y la otra mvil.
El fundamento bsico de la tcnica se encuentra en alguna propiedad fsica o
fsica-qumica de los analitos que hace que se separen.
Solubilidad
Adsorcin
Volatilidad
Tamao: base de exclusin molecular
Carga: base del cambio inico
Reactividad

Clasificacin de los procesos cromatogrficos

Segn la naturaleza de la fase estacionaria. (Determina el principio en el que se
basa la separacin)
Slido:
o Adsorcin: fuerzas de Van der Waals (CG y CC)
o Cambio inico: fuerzas electrostticas (resina de intercambio,
LC)
o Exclusin molecular: por tamao molecular (LC: interaccin
fsica)
Lquido:
o Particin (CG y CL) reparto del analito entre las dos fases

70
 71

Nunca puede ser la fase estacionaria un gas porque la fase estacionaria es

fija e invariable,

Segn la naturaleza de la fase mvil (es la que pone el nombre a la cromatografa)

Lquido:
o Liq-Liq
o Liq-sol
o LC/HPLC
Gases
o Gas-liq
o Gas-sol
o GC
Fluidos supercrticos: cromatografa de fluidos supercrticos (SFC)

Nunca la fase mvil puede ser un slido porque ha de desplazarse, no

puede estar fija

C18: reparto como si fuera una fase lquida, aunque en realidad es un slido.
Se conoce como fase enlazada.
enlazada

Cromatogramas
Cromatograma, diagrama de separacin de componentes A y B por elucin en
cromatografa en columna, da una seal en el detector a distintos tiempos
(retencin frente a seal) La retencin puede ser:
En funcin del tiempo
En funcin del volumen: el volumen de fase mvil necesario para
eluir el compuesto
En base a la interaccin de los analitos con la fase mvil o estacionaria, se produce
la separacin.
De forma general, tenemos fundamentos bien establecidos por aspectos cinticos y
termodinmicos, se puede definir mediante equilibrios termodinmicos
(distribucin)
Kd; constante de distribucin con aspectos cinticos ya que es dinmico y los
componentes se desplazan.
Los trminos importantes:
Elucin: Particin de soluto entre dos fases miscibles entre s, la
separacin se basa en la retencin relativa de cada compuesto.
Capacidad para que los compuestos abandone la fase estacionaria
Retencin: interaccin de los compuestos con la fase estacionaria y
mvil. Permanencia de un soluto en una de las fases (la estacionaria)

71
 72

A: rea del pico Wb: anchura de la base

h: altura del pico Wh: ancho de pico a media altura
h0,5: altura media Fc: flujo de la fase mvil
h0,1: 10% altura del pico a, b parte de un pico al 10%
Tm: tiempo muerto, es el tiempo que tarda un analito no retenido en recorrer la
columna
Vm volumen muerto, es el volumen necesario para que un analito no retenido
recorra la columna.
Tr tiempo de retencin
TR tiempo de retencin corregido
Vr volumen de retencin
Vr volumen de retencin corregido
Siempre que haga una cromatografa en las mismas condiciones los parmetros de
retencin son los mismos.
Las cromatografas donde = IK da lugar a una recta, la distribucin es gaussiana
IJ

si los picos son simtricos. Cromatografa lineal.

La asimetra de los picos indica algn problema de equilibrio.

Parmetros

 =
/M
F = MN
Velocidad lineal de la fase mvil

M M
Volumen de fase mvil
GO = G O = # F'#F
Factor de capacidad: permite
caracterizar la capacidad de M

G O F 
separacin
= =
Coeficiente de particin F P

72
 73

MR MS
= GOT
M. MS = O
Factor de selectividad
B es el que eluye ltimo G.

2#MR M. '

 =
Capacidad de separacin
Resolucin U + U de dos compuestos
adyacentes
M $
? = 16 / 1
Nmeros de platos U

W=
Peso de plato ?

16  $ W $ #1 + G O 'Z
M = 4 5X Y 4 5
Tiempo de retencin  1 #G'$

Fenmenos de difusin:
Para el ensanchamiento de banda existen dos teoras:
rojo: ideal, distribucin de equilibrio
lila: real, distribucin de no
equilibrio

Debera haber un equilibrio entre

las dos fases. La fase mvil se va a
desplazar a unas velocidades
determinadas. Esto hace que haya
una serie de procesos de difusin
que provoca los ensanchamientos
de bandas.
Teora de plato:
plato
Intenta asimilar lo que ocurre en una columna cromatogrfica como en una
columna de destilacin.
$
M,
? = 5,54 \ ]
U(
$
Donde:
N: nmero equivalente de platos
tericos
W1/2: ancho a media altura
5.54 viene de tomar la distribucin
como gaussiana

Cuanto mayor altura ms platos. Tanto N como H (altura) son don trminos
tericos. El N hace referencia al poder de separacin de una columna
cromatogrfica que a su vez est relacionada con la resolucin de la columna.
Supone que la columna est dividida en numerosas capas estrechas denominados
platos tericos. En cada plato se establece un equilibrio de las especies en la fase
mvil y estacionario. A menor distancia entre platos de equilibrio mayor es la

73
 74

eficacia. Esta teora explica de forma satisfactoria la forma gaussiana de los picos
cromatogrficos y la velocidad de desplazamiento a travs de la columna, pero no
justifica el ensanchamiento de los picos de manera mecanstica. Altura equivalente
del plato terico.Menor altura de platos tericos, mayor nmero de platos.
Cmo evaluamos el numero de platos tericos?
o Parmetros:
 Ancho del pico
 Tiempo de retencin (del pico que tomamos como
referencia)
La teora de platos NO tiene en cuenta la velocidad de la fase mvil, a mediados del
siglo XX aparece la denominada Teora de flujo que todava est vigente con los
parmetros de la teora de platos.

Teora de flujo
El ensanchamiento de banda se debe a la velocidad finita ton la que ocurren los
distintos procesos de transferencia de masa durante la migracin de una especie a
lo largo de la columna.
La ecuacin de Van Deemter explica la difusin en base a tres procesos:
1. Difusin de Eddy: se produce un ensanchamiento de banda debido a que el
analito al desplazarse puede encontrar mltiples caminos.
2. Difusin longitudinal; es debido a que los solutos difunden desde la zona
central donde es mayor la concentracin hacia las regiones situadas por
delante y por detrs del centro de la banda, es decir, en el mismo sentido y
en el orden opuesto a la fase mvil.
A mayor velocidad de flujo mvil, menor difusin.
3. Coeficiente de transferencia de masa: el ensanchamiento de la banda se
debe a que siempre trabajamos en condiciones alejadas del equilibrio

^
debido a las muchas corrientes de flujo y el ancho de la fase estacionaria.
WAM0 =  + / 1 + B
B
Donde:
: velocidad de la fase mvil
A: difusin en remolino o difusin de Eddy
B: difusin longitudinal
C: resistencia de transferencia de masa.
Si tenemos fases estacionarias slidas los distintos caminos o trayectorias que
puede recorrer una molcula (fase mvil) en el paso de uan columna
cromatogrfica.
Intenta explicar porque unas molculas tardan ms o otras menos. Este parmetro
se debe a el sistema a como estn distribuidas las partculas (simtricas o no,
forma de compactacin)
Inversamente proporcional a la velocidad de la fase mvil. Hace referencia al
movimiento de la banda del frente de los compuestos que estamos separando.
Necesitamos saber que velocidad de fase mvil para reducir al mximo los
procesos de separacin (condiciones ptimas de separacin)

74
 75

N2Wcot

B/ N2 PGC
He
C
H2
A

Pequeas variaciones en la fase mvil los mnimos (Heq) es similar en

vara mucho la eficacia de separacin todos los gases pero las curvas
son distintas.
La grfica de Van Deember de platos tericos (H) muestra una variacin lineal de la
velocidad de la fase mvil (A) la contribucin de cada trmino que componer la
curva. La grfica para Wcot de cromatografa en columna usando N2, He, N2
Conclusin: a veces estamos optimizando un mtodo y no se tiene optimizado la
velocidad de la fase mvil
Cromatografa de gases
La cromatografa de gases solo puede ser de adsorcin o reparto.
Tiene gran poder de resolucin de compuestos orgnicos voltiles y semivoltiles.
Labilidad trmica de los solutos.
Fase mvil: gas (puedo inyectar gases, lquidos (lo ms comn) y slidos) los
compuestos que nos interesan tienen que pasar a fase gas. Es lo que llega al
detector.
Fase estacionaria:
Soporte slido, adsorbente: cromatografa gases solido (limitada a
compuestos muy voltiles)
Lquido; 90% cromatografa, puede estar como relleno de las
columnas (slidas) columnas de relleno.
La cromatografa de gas-slido tiene una aplicacin limitada debido a la retencin
semipermeable de las molculas aditivas o polares y a la obtencin de picos con
colas muy significativas. Los analitos independientemente de su estado fsico en el
proceso de separacin tienen que poder pasar a gas.
La fase mvil va desde el bloque de inyeccin y arrastra los analitos de manera
continua.
El inyector se adapta para gases y lquidos:
Si es un gas el bloque de inyeccin se termostatiza
Si es un liquido la muestra se tiene que volatilizar, para ello debemos conocer la
temperatura de volatilizacin.
La separacin en la columna ser en funcin del mecanismo y de la retencin
especfica de cada compuesto.
Un factor importante para la separacin es la temperatura: columna, inyector,
salida de la columna,
La temperatura en la columna puede ser:
Temperatura constante (isoterma) compuestos voltiles similares
Temperatura programada: cambia a lo largo del tiempo en funcin de
los compuestos que queremos separar.

75
 76

A mayor temperatura menor tiempo de retencin de los analitos a separar, si los

compuestos salen ms rpido, sus picos tienden a juntarse.
La temperatura lmite viene marcada por la fase estacionaria y por la labilidad
trmica de los analitos.
La presin tambin influye en la separacin podramos ver el efecto de T y P, pero
es complicado programar la P, por eso, no se trabaja mucho con variaciones de P.

Caractersticas del gas portador:

Gas inerte
No soluble en la fase lquida (siempre fases inmiscibles)
Elevada pureza
Influye en la duracin del proceso cromatogrfico y en la resolucin
cromatogrfica.
N2, H2, He: los ms utilizados
H2 tiene menor viscosidad y mayor difusin
El calibrado ms habitual: calibrado del patrn interno

Tipos de columnas:
De dimetro o de relleno o empaquetadas: se deposita sobre el soporte el slido, si
es cromatografa de adsorcin es el adsorbente.
Capilares:
Plot
SCOT
C relleno:
Tubos de acero inoxidable, vidrio o tefln
L: 2-4m
I= 2-4 mm
Rellenas de forma compacta de partculas de soporte, que debe ser:
o Inerte
o Tamao de partcula uniforme
o Elevada rea superficial
o Poroso
o Resistente
o Trmicamente estable
C capilares
Elimina el relleno, por lo que se elimina el factor de difusin. La fase
estacionaria est retenida sobre la pared interna de la columna.
Tubos abiertos de vidrio, acero inoxidable, o slice fundida
L:15-100m
I:100-700m
Diseo ms estrecho y largo que las de relleno proporciona:
o Mayor resolucin
o Menor tiempo de anlisis
o Mayor sensibilidad
o Menor cantidad de muestra (limitacin): por eso hay sistemas
de inyeccin especiales:
 Inyeccin con divisin: Split
 Inyeccin sin divisin: splitless
 Inyeccin on column
 Inyector PTV (vaporizador a T programable)

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 77

 Volumen inyector:1-10L
Diseos comunes de las columnas capilares:
o Pared recubierta (WCOT) recubierta de una pelcula delgada y
uniforme de Fe lquida en la pared interna de la columna
o Soporte recubierta (SCOT y PLOT) un soporte slido (slice o
almina) est unida a la pared interna de la columna (mayor
rea superficial) y se recubre la Fe lquida.
Principales ventajas:
o Separaciones de elevada precisin
o Ms precisin en el anlisis cualitativo y cuantitativo
o Mayor sensibilidad
o Reduccin ele tiempo de anlisis
o Reduccin en el tiempo de puesta a punto de metdicas de
anlisis
Las caractersticas de la fase estacionaria (lquida)
o Viscosidad no muy elevada
o Poca volatilidad
o Selectividad
o Reversibilidad del reparto
o Trmicamente estable.
Influye
o Tiempo de retencin de los picos
o Anchura de los picos
Eleccin en funcin de
o Polaridad
o Temperatura mxima

Nota: las columnas cromatogrficas suelen ir acompaadas de un cromatograma

de referencia y temperatura de trabajo.

Nota1: Con una misma fase estacionaria obtendremos mejor resolucin con una
columna capilar

Bucle de inyeccin:
La muestra debe introducirse lo ms rpidamente posible,
vaporizndose completa e instantneamente
Temperatura regulada y uniforme
Muestra y gas portador deben mezclarse homogneamente
Inyeccin Split
La muestra se vaporiza en el interior del inyector jugando con el flujo
de salida de la vlvula y la mayor parte de la muestra se enva a la
atmsfera
Se utiliza para columnas capilares porque tenemos que inyectar una
cantidad mayor de muestra
Tiene menor difusin y el pico del cromatograma es ms estrecho y
agudo
Split; divisin de flujo. Splitless: sin divisin de flujo
Reducimos la cantidad de muestra que entra en la columna, se hace
en el inyector modificando los flujos.

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 78

Un inyector Split/splitless tiene ms salidas que son las que

modifican los flujos:
o Curva del septum: limpieza e inyeccin
o Split: vlvula que va al exterior (reduce el volumen)
La cantidad de muestra que llega a la columna: se fija el flujo de
entrada y de salida (100ml/min) a la columna pasa 2ml/min.

`_H %_ + `_H _

Reduccin 50:1.
%_  =
`_H  _
Problema: anlisis de trazas, como el Split no es selectivo estamos
perdiendo muestra, por tanto se introduce el splitless

Ventajas
Casi todo tipo de muestras
Relativamente fcil obtener buenos
resultados
Volatilidad del disolvente no es crucial
Inconvenientes
Puede suceder una relacin spliter no
lineal
Cantidad de muestra llega a la columna
se determina indirectamente
Cambio relacin spliter, cambia la
linealidad

Inyeccin Split/splitless
Se busca una forma de que pase el compuestos de inters y que se elimine el
disolvente. Como es el que se encuentra en mayor cantidad es el que me produce
interferencias.
Se produce una sobrepresin por la cantidad de disolvente
El splitless va acompaado del denominado efecto disolvente: la temperatura de la
columna est por debajo a la temperatura de disolvente. Se busca que el
disolvente se encuentre, en la cabeza de la columna, condensado y cuando se abra
el Split funda y salga.
Inicialmente hay una vlvula Split, que est cerrada y no sale nada, al cabo de un
tiempo, transcurrido el tiempo de purga (o tiempo Split) donde la muestra se
volatiliza, la vlvula se abre y parte de la fase gaseosa que se encuentra en el
interior sale al exterior por la diferencia de presin.
Al principio la curva crece, porque el analito aun no est
mezclado con el gas portador (pierdo compuestos y disminuye
la seal)
Tras la lnea roja tiempo Split por ms que tarde en abrir la
vlvula no saldr el compuesto.

T
No interesa una inyeccin que concentre la muestra, interesa eliminar la mayor
parte del disolvente aumentando la proporcin de analito.
Ventajas Inconvenientes
Temperatura de la columna debe ser
Anlisis de compuestos a niveles traza
compatible con la del disolvente
Determinar exactamente la cantidad de Vida de la columna se acorta debido a
muestra inyectada las grandes cantidades de disolvente
Nmero de disolventes utilizados
Utilizar temperatura inyector ms baja limitado
Compuestos voltiles difciles separar

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 79

Inyeccin on column
Consiste en introducir la muestra directamente en la columna sin que pase pro la
cmara de vaporizacin mediante una jeringa especial de pequeo dimetro para
poder inyectar en la columna.
La columna est a temperatura ambiente al inyector, para que no se produzca una
evaporacin brusca de disolvente en la aguja.
Ventajas Inconvenientes
Eliminar por discriminacin Inyectar menor cantidad de muestra
Posibilidad disgregacin muestra
Posibilidad de contaminacin con
mnimo
voltiles
Efecto parecido al del disolvente

Inyector PTV
Es el inyector ms universal. La muestra se introduce en el liner que est fro
aumentando la temperatura se vaporiza la muestra. Se puede programar distintos
tiempo la apertura y cierre de vlvulas (con o sin divisin)
Ventajas:
Jeringa normal
Volmenes grandes
Se elimina disolvente de forma controlada
Componentes voltiles se quedan retenidos en la lana de retencin

Detectores:
Detector de conductividad trmica (TDC): utilizado particularmente
con columnas empaquetadas, detecta H2O, CO, CO2 e H2. Mide la
conductividad trmica de un analito en un gas acarreador. La
velocidad de prdida de color de un campo caliente a un cuerpo ms
frio es proporcional a la conductividad trmica del gas que separa
estos cuerpos
Detector de ionizacin de llama (FID): H2-aire (hidrocarburos)
Detector de captura de electrones (ECD) halgenos
Detector de fotoionizacin (PID)
Detector de N2-P: modificacin de FID para hacerlo ms sensible
para N2 y P
Detector de MS: anlisis tanto cualitativo como cuantitativo
o Seala mas (m/z)
o Sealar pico
Detector de emisin atmica
Cromatografa de lquidos
Mtodos de separacin
- Absorcin de compuestos apolares
- Reparto
- Cambio inico
- Exclusin molecular (y PM)
Segn la naturaleza de la fase mvil
- Fase normal
- Fase reversa (70-90%) basada en reparto
Composicin de la fase mvil

79
 80

- Elucin isocrtica
- Elucin por gradiente
Cromatografa de reparto: el equilibrio de distribucin es entre la fase mvil lquida
y la fase estacionaria
a) Fase inversa (FI): fase mvil polar: fase estacionaria no polar
b) Fase normal (FN): fase mvil no polar: fase estacionaria polar

a. Fase inversa:

Ms ampliamente usada

Solvente es de elevada polaridad  el soluto de elevada polaridad
eluye primero

R: ms comn, C18, C8

Los grupos estn en posicin perpendicular a la superficie formando
una estructura de cepillo o brocha

Cuanto mayor es el nmero de tomos de carbono en R, mayor es la
eficacia

Elucin a pH> 7.5 puede ocurrir la hidrlisis del siloxano
b. Fase normal

PM de baja polaridad. FE polar

Solutos poco polares eluyen primero

Incrementar la polaridad de la fase mvil tiene el efecto de reducir el
tiempo de elucin

R polar: ciano, amino, dimetilamino

Slica gel Slica gel derivatizado

Fase normal Fase inversa

Fase normal Fase reversa

Fase estacionaria Polar (silica gel) No polar C18
Muestra No polar (disol organic) Polar (acuo/organic)
Eluyen primero No polares Polares
Distinto contenido de
Separacin basada en Distinta polaridad
HC

Detectores: UV-vis, fluorescencia, conductividad elctrica, ndice de

refraccin

Instrumentacin de HPLC:
- Reservorio fase mvil: debe estar desgasificado y no puede tener
partculas en suspensin. Fase orgnica o acuosa, disolvente puro o una
mezcla de disolventes
- Bomba: debe vencer elevadas presiones para impulsar la fase mvil a
una velocidad controlada o constante (tambin puede hacer las mezclas
de disolventes)
- Inyector (manual o automtico) inyectamos en L de muestra. Diluida en
un disolvente miscible con la fase mvil. Debe ser la forma de inyeccin
reproducible y adecuada. Tiene una vlvula de giro de 6 vas
o Posicin de carga
o Posicin de inyeccin

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