Ao de la Promocin de la Industria Responsable y

del Compromiso Climtico

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

INFORME 04
Reconocimiento de Carbohidratos

CURSO :

Bioqumica
ALUMNA :

Caola Caola, Alinsson Fiorella

CICLO :

PROFESORA :

Julia Mercedes Ticona Michilot

FECHA DE ENTREGA :

30 de octubre de 2014
 Introduccin

Los carbohidratos son una gran cantidad de azucares, almidones, celulosa,

gomas que contienen carbono, hidrgeno y oxigeno en cantidades
similares. La principal funcin de los carbohidratos es suministrar energa
al cuerpo; especialmente al cerebro y al sistema nervioso. En cuanto a
nuestra carrera es muy importante el reconocimiento de los carbohidratos
para saber en qu cantidades se encuentra en cada alimento y tambin
para innovar nuevos productos a partir de ellos. En los ltimos aos, ha
habido grandes avances en lo que respecta a la comprensin de cmo
influyen los carbohidratos en la nutricin y la salud humana. El progreso
en las investigaciones cientficas ha puesto en relieve las
diversas funciones que tienen los carbohidratos en el cuerpo y su
importancia para gozar de una buena salud. De hecho, las noticias son tan
buenas, que merece la pena estudiarlos con ms detenimiento. (1)

Un carbohidrato que no puede ser hidrolizado en uno ms simple es

llamado monosacrido. Los monosacridos ms comunes son la glucosa, la
fructosa, la galactosa y la manosa. Un carbohidrato que puede ser
hidrolizado en dos molculas de monosacridos es llamado disacrido. Los
ms importantes son la lactosa (presente en la leche), la sacarosa
(presente en el azcar comn) y la maltosa. Por su parte, aquellos
carbohidratos que pueden ser hidrolizados en varias molculas de
monosacridos son llamados polisacridos. Los ms comunes son el
almidn y la celulosa, este ltimo es componente estructural de las
plantas. (2).

Ensayo de Molisch; Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general

de carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se hidrolizan con
cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se convierten en
derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con
-naftol formando un color prpura violeta. (3)

Ensayo de Barfoed; Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos

y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce
hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los
disacridos. (3).

Ensayo de Seliwanoff; Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en

la conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior
condensacin con resorcinol formando as complejos coloreados. (3).
Los objetivos de la prctica fueron reconocer carbohidratos utilizando tres
pruebas; prueba de Molisch, prueba de Selivanoff y prueba de Barfoed, en
las diferentes soluciones preparadas.
2. MATERIAL Y METODOS
PROCEDIMIENTO 01: Reaccin de Molish

1. Se tomaron 3 tubos de ensayo a los que se les aadi lo

siguiente:
TUBO I: 2 ml de sol. de glucosa al 1%
TUBO II: 2 ml de sol. de sacarosa al 1%
TUBO III: 2 ml de sol. de caramelo al 1%
2. Se agreg 2 ml de sol. Alcohlica de alfa naftol al 5 % a cada
tubo.
3. Se agreg por las paredes del tubo.

Tubos De Prueba
Componentes I II III

Sol. de glucosa al 1 % 2 ml.

Sol. De sacarosa al 1 % 2 ml.

Sol. De caramelo al 1 % 2 ml.
Sol. Alcohlica de alfa 4 4 4
naftol al 5 % (gotas)

4. Se dej en reposo 5 minutos, para poder ver si la reaccin es

positiva o negativa
PROCEDIMIENTO 02: Reconocimiento de fructosa

1. Se tomaron 3 tubos de ensayo a los que se les aadi lo

siguiente:
TUBO I: 0.5 ml de sol. de yacn al 1%
TUBO II: 0.5 ml de sol. de miel de abeja al 0.1%
TUBO I: 0.5 ml de almidn al 1%
2. Se agreg 2 ml de reactivo de Selivanott a cada tubo.

Tubos De Prueba
Componentes I II III
Sol. de yacn al 1% 0.5 ml.
Sol. Miel de abeja 0.5 ml.
0.01%
Sol. de Almidn 0.5
ml.
Reactivo de Selivanott 2 ml. 2 ml. 2 ml.

3. Luego de preparar los tubos con las soluciones mezclar bien y

someter a la accin del calor en bao mara hirviendo por
2min.

ROCEDIMIENTO 03: Prueba de Barcoed

1. Se tomaron 3 tubos de ensayo a los que se les aadi lo

siguiente:
 TUBO I: 0.5ml de sol. de miel de abeja al 1%
TUBO II: 0.5 ml de sol. de fructosa al 1%
TUBO III: 0.5 ml de sol. de sacarosa al 1%

2. Se agreg 2 ml de reactivo de Barfred a cada tubo

Tubos De Prueba
Componentes I II III
Sol. de miel de abeja al 0.5 ml.
1%
Sol. De fructosa al 1 % 0.5 ml.
Sol. De sacarosa al 1 0.5
% ml.
Reactivo de BARFOED 2.0 ml. 2.0 ml. 2.0
ml.

3. Se procedi a mezclar, someter a la accin del calor en bao

mara por 5 min. Se control el tiempo en que aparecen las
reacciones positivas. (precipitado rojo naranja), en los
diferentes tubos.
3. RESULTADOS

Tabla 01. Observaciones de la reaccin de Molish.

TUBO CONTENIDO OBSERVACIONES

Dio reaccin positiva. En esta solucin se
Solucin de glucosa necesit del mayor volumen de gasto para
01
al 1%. lograr el vire y aparicin del anillo violeta,
dado que este demor en aparecer.
Dio reaccin positiva. Si bien es cierto se
Solucin de sacarosa form el anillo violceo, esta muestra
02
al 1%. present la tincin de violeta ms clara
que las dems.
Dio reaccin positiva, la formacin del
Solucin de
03 anillo violeta fue mucho ms rpida y la
caramelo al 1%.
coloracin mucho ms intensa.

Sacarosa Glucosa Caramelo

 Tabla 02. Observaciones de la reaccin de Selivanott.

TUBO CONTENIDO OBSERVACIONES

Solucin de Yacn al Dio reaccin positiva pero en un color
01
1% rojizo mucho ms claro
Dio reaccin positiva. El vire de color se
Solucin de miel de
02 dio al minuto de iniciada la reaccin. Es
abeja al 1%.
un color rojizo obscuro
Dio reaccin negativa. Se agregaron
Solucin de almidn al
03 gotas de lugol para determinar estado
1%.
de solucin.

Yacn Miel Almidn

 Tabla 03. Observaciones de la prueba de Barcoed.

TUBO CONTENIDO OBSERVACIONES

Dio reaccin positiva. Esta muestra
Solucin de miel de
01 form el precipitado celeste pero muy
abeja al 1%.
lentamente.
Dio reaccin positiva. Esta muestra
Solucin de fructosa al
02 form el precipitado color celeste, este
1%.
apareci mucho ms rpido
Solucin de sacarosa al Dio reaccin positiva. Se form el
03
1%. precipitado celeste pero ms lenta.

Fructuosa Sacarosa Miel

 4. DISCUCIN

Prueba de Molisch; es el cido sulfrico concentrado que hidroliza

enlaces glicosdicos para dar monosacridos que pueden ser luego
deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se
combinan luego con alfa-naftol sulfonato originando un complejo prpura.
Esta reaccin es general para los hidratos de carbono pero algunos otros
compuestos orgnicos dan tambin furfural con cido
sulfrico concentrado. (3). Este ensayo permite detectar la presencia de
hidratos de carbono en una muestra; se basa en la accin hidrolizante y
deshidratante que ejerce el cido sulfrico sobre estos compuestos. Como
se sabe, los cidos concentrados originan una deshidratacin de los
azcares para rendir furfurales, que son derivados aldehdicos del furano.
Los furfurales se condensan con los fenoles para dar productos coloreados
caractersticos, empleados frecuentemente en el anlisis colorimtrico.
ste fue el procedimiento utilizado para el reconocimiento de
carbohidratos en las soluciones de glucosa, sacarosa, caramelo y avena, y
en cada solucin mencionada dio como resultado una coloracin diferente
en intensidad. Esto debido a que cuando se hidrolizan los carbohidratos
formas los compuestos llamados furfurales que al reaccionar con el alfa-
naftol, si es que hay presencia de azucares torna un color violeta, es por
ello que en la prctica las intensidades de ste color es diferente por la
cantidad de azcares.
La solucin de glucosa dio incoloro como resultado de la reaccin,
indicando que sta ya no se disocia en azcares ms simples ya que ste
como sabemos es por s un monosacrido. En la solucin de sacarosa dio
como resultado un color violeta claro, ya que ste es un disacrido y se ha
hidrolizado en dos azcares simples. En la solucin de caramelo, si bien se
esperaba que fuera la que tuviera mayor velocidad de reaccin no fue as,
fue tornando el color violeta intenso despus de un tiempo pequeo, pero
si fue el color violeta oscuro indicando la presencia de grandes cantidades
de azcares simples que se disociaron. Y finalmente en la solucin de
avena la reaccin fue ms rpida indicndonos la presencia de gran
cantidad de carbohidratos, que se disociaron en monosacridos formando
ste color violeta tambin intenso.
Prueba de Seliwanoff las cetosas se deshidratan ms rpidamente que las
aldosas dando derivados de furfural que se condensan con resorcinol para
formar un complejo rojo; por lo tanto, debe evitarse un calentamiento
prolongado de la muestra que se est estudiando. (4). Esta prueba es
utilizada para el reconocimiento de fructosa, se basa en azcares que
pueden hidrolizarse, la reaccin es positiva cuando las soluciones luego de
tenerlas por un tiempo en bao Mara presentan colores amarillos,
anaranjados rojizos. La fructosa es una cetosa se hidroliza en sacarosa mas
inulina, esto hace que la reaccin positiva manifieste un cambio de color y
ebullicin que manifiesta que es positiva para la presencia de fructosa.
En la solucin de yacn se tuvo como resultado ebullicin y cambio a color
tamarindo, lo que evidenci la presencia de fructosa en la solucin. En la
solucin de miel de abeja, present cambio a color naranja rojizo, es decir
tambin hay presencia de fructosa en menor cantidad que en el yacn.
Finalmente la solucin de almidn no present cambio de color, lo que
nos muestra que no hay presencia de fructosa, ya que el almidn es un
polisacrido; al no presentar cambios se le denomina neutro.

La Prueba de Barfoed es un ensayo qumico utilizado para

detectar monosacridos. Se basa en la reduccin de cobre (II) (En forma
de acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual forma un precipitado
color rojo ladrillo. (4). Este ensayo se emplea para diferenciar a los mono
de los disacridos. Estos ltimos reaccionan ms lentamente con el
acetato cprico, debido probablemente al tamao molecular, aunque
tambin pueden estar implicados otros factores tales como una
interaccin ms compleja con los dos anillos monosacridos. En la
solucin de miel de abeja se observ que despus de tres minutos se
form el precipitado color ladrillo, manifestando la presencia de
monosacridos. En la solucin de fructosa tambin se present el
precipitado color ladrillo a los tres minutos de reaccionar, ya que sta por
s es un monosacrido. Mientras en la solucin de sacarosa no se present
ningn precipitado, lo que indica que es negativa debido a que es un
disacrido.
Los carbohidratos se hidrolizan en azcares ms simples, y una vez
sucedido esto reaccionan con el alfa- naftol, previamente formando un
complejo furfural, es lo que a sucedido en las reacciones anteriores y que
se a manifestado con los cambios de color en cada tubo de ensayo y
tambin con las formaciones de precipitado en la ltima prueba realizada.
 5. CONCLUSIN

Se reconoci los carbohidratos en diversas soluciones preparadas en el

laboratorio. Utilizando la prueba de Molisch se determin la presencia de
carbohidratos; con la prueba de Seliwanoff se determin la presencia de
fructosa (cetosa); y con la prueba de Barfoed se diferenci la presencia de
monosacridos de los disacridos mediante la formacin de precipitados.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

(1) Freifelder. 1991 tcnicas de bioqumica y biologa molecular.

Reverte. Biblioteca.
(2) Angulo Ugalde. 1999. Bioqumica Manual de Laboratorio.
Universidad de Costa Rica.
(3) Switzer, R. y L. Garrity. 1999. Experimental Biochemistry: Theory and
exercises in fundamental methods. 3rd edition, Freeman and
Company, New York
(4) Watson, 1998. Biologa molecular. 3ed. Edit. Omega biblioteca