UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E
HISTOTECNOLGICO
LABORATORIO DE BIOLOGA
MOLECULAR

Perodo Ao 2017 - 2018

Extraccin de ADN

Soledad Soria Soria

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Resumen
A lo largo del tiempo se han diseado distintos protocolos con la finalidad de obtener una
cantidad y calidad de ADN adecuados, as como garantizar la eliminacin de inhibidores
potenciales que dificulten el tratamiento posterior de la molcula. Los mtodos
tradicionales, desarrollados en los aos 50, utilizan solventes orgnicos para separar a las
protenas del ADN y, una vez suspendido en la fase acuosa, aislarlo por precipitacin con
etanol. Estos mtodos requieren preparar soluciones y la extraccin puede tomar desde unas
horas hasta varios das por los numerosos pasos que deben realizarse. En general, los
protocolos tradicionales consisten de cinco etapas principales: homogeneizacin del tejido,
lisis celular, separacin de protenas y lpidos, precipitacin y redisolucin del ADN.
La extraccin de ADN requiere de romper la pared celular y la membrana plasmtica para
poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin, debe romperse tambin la membrana
nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lava vajillas emulsionan los
lpidos de las membranas celulares y las rompen. La sal evita la unin de las protenas al
ADN. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en
agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el
alcohol y el agua. Adems de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa.
Palabras clave: protenas, ADN, mtodos
INTRODUCCIN
Todo organismo vivo est formado por la ampliamente estudiada y conocida molcula de
DNA. Sabemos que los organismos vivos provienen de una nica clula ancestral llamada
LUCA. Este hecho nos indica que entre organismos vivos compartimos mucho ms de lo
que a veces nos podramos llegar a imaginar. Por ejemplo, los humanos compartimos el
50% del DNA con el pltano. Sin embargo, el porcentaje de DNA que compartimos
depende de cmo se mida. Si medimos secuencias idnticas de pares de bases, entonces es
bastante bajo, pero si nos jamos en los genes con funciones idnticas o similares entonces
es de hecho el 50 %. Algunas de las cosas para las que estos genes codican son de
bioqumica bsica: la replicacin del DNA, la transcripcin, la traduccin, el metabolismo
del DNA (recombinacin, reparacin), el metabolismo de la clula (catabolismo y
anabolismo) y la regulacin del ciclo celular (mitosis). (1)
El ADN se encuentra en el interior del ncleo de todas las clulas, disperso y muy
replegado, unido a protenas para formar la cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a
partir de prcticamente cualquier material de origen biolgico. Para ello es necesario
homogeneizar el tejido disgregndolo y separando sus clulas y dems componentes, luego
romper las clulas para separar el ncleo y romper ste para liberar el ADN, separarlo de
las protenas y precipitarlo para separarlo de la solucin acuosa.
El ADN (y tambin algo de ARN) aparecer entonces como un agregado de fibras
blanquecinas de aspecto mucoso que se adhieren a una varilla de vidrio o a la pipeta.
Podemos aadir unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo para teirlo. Por
ltimo, se puede situar sobre un porta, teirlo de la misma manera y observarlo al
microscopio. Tambin se puede conservar dejndolo secar sobre papel de filtro o
suspendido en alcohol al 50% o 70%.

MATERIALES Y MTODOS
Tomar la muestra de sangre perifrica
Colocar el torniquete 4 dedos sobre el pliegue del codo, Proceder a realizar la puncin y
extraer la sangre en el tubo lila, Retirar la aguja, mantener presionado y colocar un curita
en el sito de puncin, desechar la aguja en el recipiente de corto punzantes
Extraccin de ADN

Poner 250ul de plasm en ependorff de 1,5 ml, a cada tubo se aadir 250ul de buffer de
extraccin de ADN(buffer de digestin), centrifugamos, dejar incubar por 10 minutos,
retirar el sobrenadante, aadir 250ul de buffer 1 centrifugamos, dejar incubar de por 5
minutos, retirar el sobrenadante, aadir 250ul de buffer 2, centrifugamos, dejar incubar de
por 5 minutos, retirar el sobrenadante, aadir 250ul de etanol 70 y centrifugamos, dejar
incubar de por 5 minutos, retirar el sobrenadante aadir etanol absoluto 250ul
centrifugamos botamos el sobrenadante, colocamos buffer delusion 250ul centrifugamos y
eliminamos el sobrenadante , agitar por inversin por 5 minutos a 10 minutos, observar el
adn el ovillo (blanquecino )

RESULTADOS
No se pudo obtener ADN, debido a que la muestra sufri hemolisis esto produce la
liberacin de hemoglobina, este es un contaminante para el ADN, esto genera que se liberen
enzimas y bloqueen el ciclo de la membrana celular. Hemolisis inducida provoca que el
fibringeno soluble se convierta en insoluble, bloqueando la membrana de clula llenndola
de H2O provocando que la membrana se endurezca ; entonces cuando colocamos el Buffer
de extraccin de ADN este no rompe la membrana celular y por consiguiente no podemos
obtener ni visualizar el ADN.

CONCLUSIONES

La extraccin consiste en el aislamiento y purificacin de molculas de ADN

basndose en las caractersticas fisicoqumicas de la molcula.
Se puede disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante
debido a su carga negativa y esta capa se rompe en presencia de etanol

Literatura Citada

1. Sacado De: http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/! Publicado

a b r i l De 2015, Abierto Por Ultima Ves El Da: 4/02/2017
2. Martnez, L. (19 de 4 de 2015). EXTRACCIN DE DNA. Obtenido de
http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez
%20Mart%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf
3. Rocha, P. J. (23 de 11 de 2002). Teora y prctica para la extraccin y purificacin
del ADN . Obtenido de http://www.geocities.ws/pedrojrocha/pr/rocha23_3.pdf
 Cuestionario

1.Observe la imagen identifique las estructuras del cromosoma, ponga los nombre que
corresponden.

2. Qu tipo de ADN ES y por que

Doble hlice de ADN por que es una molcula de doble cadena que se
dobla en una hlice como una escalera en espiral. Cada cadena est
compuesta de una columna de azcar-fosfato y numerosos qumicos base
juntados en pares.

Las cuatro bases que conforman los escalones en la escalera en espiral

son adenina (A), timina (T), cistosina (C) y guanina (G).

3.Dibuje la estructura secundaria segn modelo de Watson y crik.

4.Indique las caractersticas del extracto de ADN obtenido

Al realizar el procedimiento adecuadamente, el resulto que las fibrillas de ADN

comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol.

5.Haga un resumen del artculo de Watson y Crick nature 25 de abril 1953

Watson al dibujar la doble hlice hace nfasis en el apareamiento de las bases; Meselson
traza un gran interrogante en medio de las cadenas que se replican; Collins, el actual
director del Proyecto del Genoma Humano, hace nfasis en la familia al dibujar a los padres
y a los hijos; Jeffreys, el descubridor de los pofimorfismos que hicieron posible la
identificacin de los individuos mediante las "huellas digitales" del DNA, Crick, por su
parte, poseedor de una mente brillante, sigui haciendo importantes contribuciones a la
ciencia: anticip la existencia del RNA "mensajero (mRNA), la del RNA de transferencia
(tRNA), y por lo mismo, la manera como deba traducirse el cdigo gentico, postul el
"dogma de la biologa molecular", y en los ltimos aos se ha dedicado a enfrentar un
nuevo reto en la neurobiologa: escudriar nuestra conciencia y profundizar en lo que nos
hace verdaderamente humanos.

6. Porque el ARN es monocatenario.

El ARN es Monocatenario porque en la nica cadena lineal o hlice simple tiene una sola
cadena de NUCLETIDOS. Tiene una sola cadena porque en las Bases Nitrogenadas
complementarias no hay Puentes Hidrgeno, salvo el ARNr, antes de la Sntesis de
Protenas adquiere una estructura Bicatenaria porque aparecen momentneamente Puentes
de Hidrgeno en su extremo final bifurcndose en 2 Cadenas paralelas y no helicoidales
como las posee el ADN.

El ADN tiene doble Hlice porque est formado por 2 Cadenas Helicoidales que se
entrecruzan formando una Hlice Doble, los Pares de Bases Nitrogenadas complementarias
permanecen siempre unidos por Puentes Hidrgeno, de ah la denominacin
BICATENARIO o de Hlice Doble.

7. En que trabajos se sustenta la teora de Watson y Crik.

tomando como base los trabajos realizados en laboratorio por el propio Crick y el biofsico
britnico Maurice Wilkins, y de la cristalgrafa Rosalind Franklin, James Watson y
Francis Crick desentraaron la estructura en doble hlice de la molcula del cido
desoxirribonucleico (ADN).