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2.08.02. Rinitis Atrófica Porcina PDF
2.08.02. Rinitis Atrófica Porcina PDF
RESUMEN
Requisitos para las vacunas y el material de diagnstico: Hay varias vacunas disponibles en el
mercado que contienen bacterinas de B. bronchiseptica y una mezcla de cepas de P. multocida
toxignicas y no toxignicas, o un toxoide derivado de P. multocida o de una cepa de Escherichia
coli recombinante.
A. INTRODUCCIN
La rinitis atrfica es una enfermedad infecciosa porcina. Los primeros sntomas clnicos son los estornudos, el
resuello y las secreciones oculares que dan lugar a manchas causadas por lgrimas de color oscuro seguidas
por secreciones nasales serosas y mucopurulentas; en algunos casos, los cerdos pueden mostrar epistaxis. La
atrofia de los cornetes (hueso conchal) y la desviacin septal pueden dar lugar al acortamiento o deformacin de
la jeta y, en los casos graves, en dificultad para comer. Se han reconocido dos formas de la enfermedad (9):
a) Una forma progresiva grave, causada por cepas toxignicas de Pasteurella multocida, ms frecuentemente
de los tipos capsulares D o A, solas o en combinacin con Bordetella bronchiseptica.
b) Una forma menos grave, con atrofia de los cornetes, que vara de leve a moderada, y a menudo sin
cambios significativos en la jeta, que es la causada por B. bronchiseptica.
B. bronchiseptica o P. multocida toxignica pueden estar presentes en una piara sin signos clnicos de la
enfermedad, especialmente, cuando estn ausentes otros patgenos respiratorios y las condiciones
medioambientales y de manejo son ptimas. Dichas piaras portadoras representan un riesgo para la transmisin
de estos agentes a otros piaras, en los que puede producirse la evolucin hacia a una enfermedad grave.
El diagnstico de la rinitis atrfica depende de las investigaciones clnicas, patolgicas y microbiolgicas, siendo
las ltimas particularmente importantes en las explotaciones con una infeccin subclnica. Generalmente se
acepta que una piara en el que est presente P. multocida toxignica se considere como afectada por rinitis
atrfica progresiva, tanto si los sntomas son evidentes como si no (26). Por lo tanto, en muchos pases, el
control se ha centrado en la deteccin de la infeccin, incluso en animales asintomticos considerados
potenciales portadores.
La atrofia de los cornetes solo puede verse en el sacrificio, cuando se examinan secciones de la jeta entre el
primer y el segundo premolar. A menudo, para el seguimiento de las piaras, es conveniente y til la valoracin
subjetiva de la atrofia de los cornetes. (9), pero las medidas objetivas son la mejor opcin en los estudios que
requieren un anlisis de datos (16). La radiografa (12) y la tomografa (24) permiten realizar observaciones
objetivas de los animales vivos; la tomografa no solo revela las lesiones graves sino tambin las pequeas
alteraciones que no se detectan mediante radiografa. No obstante, estas tcnicas tienen un alcance limitado a
causa del equipo y del conocimiento experto necesarios. El diagnstico se apoya en la deteccin de los rasgos
histopatolgicos tpicos, como son la sustitucin fibrosa de las placas seas de las conchas ventrales, con una
variacin en el grado de los cambios inflamatorios y reparadores.
B. TCNICAS DE DIAGNSTICO
a) Cultivo
Los hisopos tonsilares o las biopsias proporcionarn los ndices de aislamiento ms elevados, ya que
P. multocida coloniza preferentemente las amgdalas (1). Para el aislamiento de B. bronchiseptica, se
recomiendan los hisopos nasales. Cuando no es posible el muestreo de las amgdalas, los hisopos nasales
son suficientes para el aislamiento de ambos microorganismos. Se deben utilizar hisopos con mangos
flexibles; la recogida de muestras en los cerdos jvenes ser ms fcil con hisopos de puntas diminutas. Se
utiliza un nico hisopo para muestrear ambos lados de la cavidad nasal, a continuacin se coloca en un
medio de transporte no nutritivo (por ejemplo, tampn fosfato salino), y se conserva a 48C durante el
Aunque P. multocida y B. bronchiseptica crecen fcilmente en agar sangre, se prefiere un medio selectivo,
ya que el crecimiento en exceso de otras bacterias, que estn presentes en mayor cantidad, interfiere, a
menudo, con su deteccin. Una dificultad aadida relacionada con B. bronchiseptica es que este
microorganismo crece ms lentamente que la mayora de las otras bacterias presentes en las muestras
clnicas. Se han utilizado diferentes formulaciones de los medios que contienen antibiticos para el
aislamiento de P. multocida, pero la comparacin de los resultados de diferentes estudios reflejados en la
bibliografa indica que los ndices de aislamiento ms altos se obtienen con medio de Knight modificado
(agar sangre bovina que contiene 5 g/ml de clindamicina, 0,75 g/ml de gentamicina) (22) o KPMD (agar
sangre bovina que contenga 3,75 U/ml de bacitracina, 5 g/ml de clindamicina, 0,75 g/ml de gentamicina y
2,25 g/ml de anfotericina B) (1). Para el crecimiento selectivo de B. bronchiseptica, a partir de hisopos
nasales, muchos laboratorios utilizan agar de MacConkey con glucosa al 1% y 20 g/ml de furaltadona, sin
embargo un medio de SmithBaskerville modificado (una formulacin de agar peptona que contiene
20 g/ml de penicilina, 20 g/ml de furaltadona y 0,5 g/ml de gentamicina) parece mejor, especialmente,
cuando la cantidad presente de B. bronchiseptica es baja (22,35). Se ha descrito una mejora adicional en el
ndice de aislamiento empleando agar sangre conteniendo 40 g/ml de cefalexina (22). Se ha descrito
tambin un medio selectivo de agar sangre para el aislamiento simultneo de P. multocida y
B. bronchiseptica, que contiene 5 mg/litro de clindamicina-HCl, 0,75 mg/litro de gentamicina sulfato,
2,5 mg/litro de telurito potsico, 5 mg/litro de anfotericina-B y 15 mg/litro de bacitracina (10). Sin embargo,
se ha observado que el telurito potsico inhibe a veces el crecimiento del tipo D de P. multocida (22).
b) Caractersticas bioqumicas
P. multocida es un bacilo Gram negativo pleomrfico, bipolar, que forma colonias grisceas no hemolticas
en agar sangre, de un caracterstico olor dulzn (29). No crece en agar MacConkey, da reacciones
positivas de oxidasa y catalasa, y produce indol.
Se han descrito pruebas de aglutinacin en las que se emplean antisueros especficos para confirmar la
identidad de presuntos aislamientos de B. bronchiseptica, pero con frecuencia los antisueros idneos no se
encuentran disponibles para su uso.
Procedimiento del ensayo con acriflavina para el tipo capsular D de Pasteurella multocida
i) Para cada aislamiento de P. multocida que se ensaya, se inocula un tubo que contiene 3ml de caldo
cerebro corazn, utilizando un cultivo fresco en agar sangre bovina. Como controles positivo y
negativo se incluyen cepas conocidas de los tipos D y A.
ii) Los tubos inoculados se incuban a 37C durante 1824 horas.
iii) Las bacterias se sedimentan por centrifugacin y se toman 2,5 ml del sobrenadante.
iv) Se aaden 0,5 ml de una solucin acuosa 1/1.000 de acriflavina neutra. La solucin de acriflavina
debe prepararse cada semana y conservarse a 4C, protegida de la luz.
v) Se mezcla para resuspender el sedimento bacteriano y se incuba el tubo a temperatura ambiente, sin
agitacin.
vi) Al cabo de 5 minutos se observa para detectar la presencia de un precipitado floculante abundante.
ii) Cada cepa que se ha de examinar se siembra, por separado, en una placa de agar sangre tripticasa
de soja con sangre bovina al 6%, haciendo varias estras paralelas, con una separacin de 35 mm
aproximadamente, a travs del dimetro de la placa. Para la mxima produccin de cido hialurnico,
es importante que las placas sean recientes y no estn deshidratadas.
iii) Se siembra en estras con abundancia de una cepa de Staphylococcus aureus productora de
hialuronidasa en ngulos rectos con respecto a las lneas de crecimiento de P. Multocida.
iv) Se incuban las placas a 37C, en una atmsfera hmeda, y se observan durante 24 horas. Las cepas
del tipo A exhibirn una marcada inhibicin del crecimiento en la regin contigua a las lneas de
crecimiento de S. aureus.
Este ELISA est comercialmente disponible en toda Europa y en unas pocas regiones del mundo1 (aunque
no lo est en los Estados Unidos de Amrica) y ha sido ampliamente adoptado en muchos sitios como el
mtodo preferido para la identificacin de portadores, y para el control de la rinitis atrfica progresiva.
Aunque sea muy especfico, un resultado positivo, sin historia previa de la enfermedad o sin signos
sospechosos, deber investigarse a fondo para recuperar los aislamientos de toxignicos en los animales
muestreados.
Recientemente se ha descrito una tcnica de PCR mltiple para la tipificacin capsular de P. multocida, que
parece proporcionar resultados ms fiables que los mtodos fenotpicos (37), y puede resultar de utilidad en
los laboratorios que estn convenientemente equipados para llevar a cabo ensayos de PCR.
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2. Pruebas serolgicas
Actualmente no hay pruebas serolgicas satisfactorias en las que se pueda confiar para detectar aquellos
animales infectados por P. multocida toxignica, y que puedan desarrollar o propagar la enfermedad. La
deteccin de anticuerpos contra P. multocida no es til, ya que las cepas no toxignicas comparten muchos
antgenos que dan reacciones cruzadas con cepas toxignicas. Se ha descrito un ELISA para la deteccin de
anticuerpos contra la toxina de P. multocida (14), que est comercialmente disponible en Europa y otras pocas
zonas del mundo (vase la nota a pie de pgina 1). Sin embargo, muchos animales infectados no producen
anticuerpos contra la toxina, y el uso generalizado de vacunas que contienen toxoides limita el valor diagnstico
de este ELISA a las piaras sin historial de vacunacin, o a la deteccin de una respuesta vacunal en las piaras
vacunadas.
La infeccin por B. bronchiseptica puede detectarse serolgicamente mediante el ensayo de la aglutinacin con
bacterias tratadas con formalina, o con un ELISA ms sensible (38). Si no se controla el estado de una piara
negativa, la serologa de B. bronchiseptica puede resultar de escaso valor, ya que el microorganismo est
presente en muchas piaras porcinas aparentemente normales.
La toxina de P. multocida es el antgeno protector ms importante relacionado con la rinitis atrfica progresiva.
Las vacunas basadas en un toxoide de P. multocida ofrecen una proteccin especfica contra la accin de la
toxina, que por s misma puede ocasionar los principales sntomas (para una revisin, vase la referencia (14). El
nivel de la toxina producida por P. multocida es relativamente bajo, y la respuesta de anticuerpos especficos
contra la toxina, inducida por las vacunas que solo tienen bacterinas, puede que no sea la ptima. La dificultad y
el gasto que conlleva la purificacin a gran escala impiden la incorporacin de toxoides purificados a las vacunas.
Los estudios de campo han demostrado que un derivado recombinante de la toxina de P. multocida, al que le
falta un segmento de la porcin aminoterminal de la protena, no es txico, pero s inmunognico, y tiene una
eficacia superior en el cerdo (2, 27). Ms recientemente, se hall que era muy eficaz un toxoide completo
elaborado de forma que contuviera dos sustituciones de cido amino para eliminar la toxigenicidad (36). Se
demostr que una vacuna de ADN que codifica un toxoide completo pero enzimticamente inactivo era muy
inmunognica en cerdos pero an no se ha establecido su eficacia frente a la vacuna de recuerdo (33).
B. bronchiseptica produce diversas toxinas y adhesinas que son factores potenciales de virulencia en el cerdo.
Se ha demostrado que solo una protena, la pertactina de la membrana externa, protege contra la enfermedad en
los cerdos (21). A pesar de este hecho, tradicionalmente se ha considerado una toxina dermonecrtica producida
por B. bronchiseptica, no comparable con la toxina producida por P. multocida, como el principal factor de
virulencia e inmungeno protector para el ganado porcino (9). Varios estudios implican a la toxina como un factor
de virulencia, e indudablemente aquella juega un papel en la patognesis y quizs, en la proteccin. Sin
embargo, el papel de la pertactina y de varios factores de virulencia adicionales en la inmunidad protectora es
muy probablemente idntico e incluso superior al de la toxina.
B. bronchiseptica est sometida a una variacin fenotpica bajo determinadas condiciones de crecimiento (por
ejemplo, a temperaturas por debajo de 37C, o en presencia de moduladores qumicos como el MgSO4 o el cido
nicotnico), en las que la produccin de la mayora de los factores de la virulencia est inactivada de forma
reversible. Los mutantes espontneos, permanentemente incapaces de producir la mayora de los factores de
virulencia, aparecen tambin con una baja frecuencia durante el cultivo. Para mantener los cultivos en fase I
(conocida tambin como Bvg+), o virulenta, es imprescindible prestar una cuidadosa atencin a la morfologa de
la colonia en una zona de la placa donde las colonias estn bien separadas. Las colonias de la fase I son
No se dispone de los detalles precisos de los estndares para la produccin de vacunas comerciales eficaces,
pero se sabe que contienen 1010 clulas de B. bronchiseptica muertas con formalina y 10 g de toxoide de
P. multocida por dosis. Tambin est claro que el toxoide purificado (inactivado con formaldehdo) es ms
inmunognico que el toxoide puro, y que la inmunogenicidad de la forma inactivada no se ve afectada por la
mezcla con una bacterina de B. bronchiseptica. El derivado recombinante y truncado de la toxina de P. multocida
ha sido inactivado mediante la deleccin de una porcin del gen que no parece comprometer la inmunogenicidad
protectora. Todas las vacunas comercialmente disponibles contienen un adyuvante oleoso o gel de hidrxido de
aluminio.
Para la produccin de la vacuna se emplear un cultivo virulento de fase I de Bordetella bronchiseptica, y los
aislamientos de P. multocida utilizados debern ser toxignicos. Deben conservarse por los medios
convencionales alcuotas de los inculos de B. bronchiseptica y de P. multocida toxignica, con una identidad e
historial de pases establecidos. Para realizar el cultivo de produccin, se utilizar un nmero de pases definido.
Bordetella bronchiseptica debe inactivarse con formaldehdo. Puesto que la toxina de P. multocida tiene una
localizacin intracelular y se libera en la lisis celular durante la fase estacionaria, el sobrenadante del cultivo debe
recogerse en torno a 48 horas despus de finalizar la fase exponencial de crecimiento.
En el caso de las bacterinas de clulas completas, se describir el origen y el historial de las cepas de
P. multocida y de B. bronchiseptica, y se establecer la caracterizacin completa de los inculos originales
en un protocolo del lote de inculo original.
Los inculos de trabajo utilizados para la produccin de la vacuna derivarn del inculo original, y se
controlarn teniendo en cuenta todas las propiedades pertinentes, como se describe en el protocolo del lote
de inculo original.
b) Mtodo de cultivo
Todas las cepas bacterianas se cultivarn en medios apropiados que faciliten el crecimiento de forma eficaz
y la expresin de los antgenos ms relevantes.
Los cultivos de B. bronchiseptica y de P. multocida se propagarn en medios que faciliten el crecimiento eficaz, y
permitan la expresin ptima de los antgenos que son relevantes para la produccin de anticuerpos protectores.
Deber confirmarse que Bordetella bronchiseptica es un cultivo de fase I, y, en el caso de P. multocida, que el
cultivo contiene niveles suficientes de toxina.
Las clulas de Bordetella bronchiseptica y las clulas de P. multocida y/o la toxina, se inactivan, se destoxifican y
se formulan con un adyuvante. Los adyuvantes comnmente utilizados son las sales de aluminio y las
emulsiones de aceite.
4. Control de lotes
a) Esterilidad
Cada lote de vacuna se probar en relacin a su esterilidad segn los mtodos estndar (vase el captulo
1.1.9.) descritos en la Farmacopea Europea o en el Cdigo Federal de Normas de los Estados Unidos.
b) Inocuidad
Cada lote de vacuna se deber probar en relacin a su inocuidad en el animal diana, administrndole una
dosis doble por la va recomendada de vacunacin, y una segunda dosis nica dos semanas ms tarde. No
deben producirse reacciones locales o sistmicas anmalas.
c) Potencia
Cada lote de vacuna se probar en relacin a su potencia empleando una prueba serolgica validada que
se correlaciona con la proteccin obtenida en el experimentos de eficacia, segn se describe en la seccin
C.1.c.iii. La prueba de potencia no se lleva a cabo necesariamente en el animal diana se pueden utilizar
ratones o conejos. En estos casos la correlacin, se tiene que demostrar con los niveles de anticuerpos
protectores en el animal diana.
d) Duracin de la inmunidad
La vacuna se aplica normalmente durante la ltima etapa de la gestacin, de forma que la progenie quedar
protegida mediante la presencia de los anticuerpos en el calostro.
En el caso de que la vacuna pueda aplicarse con independencia de la etapa de gestacin, la duracin de la
inmunidad deber ser, al menos, de 6 meses, de forma que las vacunaciones de recuerdo dos veces al ao
mantengan niveles eficaces de anticuerpos.
e) Estabilidad
Cada lote de vacuna debe someterse a una prueba acelerada del perodo de validez, que se ha
correlacionado con pruebas del perodo de validez a tiempo real.
f) Conservantes
Cuando se utilice un conservante, debe calcularse su concentracin para cada lote. Esta no debe exceder
del nivel mximo permitido.
g) Precauciones
La inyeccin accidental del operador, cuando se utiliza una emulsin de aceite como adyuvante, puede
producir una reaccin local grave. Debe solicitarse la atencin mdica inmediata, tratando la herida como la
producida por una pistola de engrase.
a) Inocuidad
Para la inocuidad de cada lote de vacuna se debe tener en cuenta lo descrito en la seccin C.4.b.
b) Potencia
Para la potencia de cada lote de vacuna se debe tener en cuenta lo descrito en la seccin C.4.c.
REFERENCIAS
1. ACKERMANN M.R., DEBEY M.C., REGISTER K.B., LARSON D.J. & KINYON J.M. (1994). Tonsil and turbinate
colonization by toxigenic and nontoxigenic strains of Pasteurella multocida in conventionally raised swine. J.
Vet. Diagn. Invest., 6, 375377.
2. BORDING A., NYMARK K. & SMIDT E. (1994). Field trials with a new genetically engineered vaccine for
protection against progressive atrophic rhinitis in pigs. Acta Vet. Scand., 35, 155163.
3. CARTER G.R. (1955). Studies on Pasteurella multocida. I. A hemagglutination test for the identification of
serological types. Am. J. Vet. Res., 16, 481484.
4. CARTER G.R. & RUNDELL S.W. (1975). Identification of type A strains of P. multocida using staphylococcal
hyaluronidase. Vet. Rec., 96, 343.
5. CARTER G.R. & SUBRONTO P. (1973). Identification of type D strains of Pasteurella multocida with acriflavine.
Am. J. Vet. Res., 34, 293294.
6. CHANTER N., RUTTER J.M. & LUTHER P.D. (1986). Rapid detection of toxigenic Pasteurella multocida by an
agar overlay method. Vet. Rec., 119, 629630.
7. COMMISSION OF THE EUROPEAN COMMUNITIES (1992). Commission Directive 92/18/EEC of the 20th March 1992
modifying the annex to Council Directive 81/852/EEC on the approximation of the laws of member states
relating to analytical, pharmotoxicological and clinical standards and protocols in respect of the testing of
veterinary medical products. Off. J. European Communities.
8. COMMISSION OF THE EUROPEAN COMMUNITIES (1994). CVMP Working Party on the Efficacy of Veterinary
Medicines. Note for Guidance. Rue de la Loi 200, B-1049, Brussels, Belgium.
9. DE JONG M.F. (2006). In: Diseases of Swine, Ninth Edition, Straw B.E., Zimmerman J.J., dAllaire S. & Taylor
D.J., eds. Iowa State University Press, Ames, Iowa, USA, 577602.
10. DE JONG M.F. & BORST G.H. (1985). Selective medium for the isolation of P. multocida and B. bronchiseptica.
Vet. Rec., 116, 167.
11. DJORDJEVIC S.P., EAMENS G.J., HA H., WALKER M.J. & CHIN J.C. (1998). Demonstration that Australian
Pasteurella multocida isolates from sporadic outbreaks of porcine pneumonia are non-toxigenic (toxA-) and
display heterogeneous DNA restriction endonuclease profiles compared with toxigenic isolates from herds
with progressive atrophic rhinitis. J. Med. Microbiol., 47, 679688.
13. EAMENS G.J., KIRKLAND P.D., TURNER M.J., GARDNER I.A., WHITE M.P. & HORNITZKY C.L. (1988). Identification
of toxigenic Pasteurella multocida in atrophic rhinitis of pigs by in vitro characterisation. Aust. Vet. J., 65,
120123.
14. GATLIN C.L., JORDAN W.H., SHRYOCK T.R. & SMITH W.C. (1996). The quantitation of turbinate atrophy in pigs
to measure the severity of induced atrophic rhinitis. Can. J. Vet. Res., 60, 121126.
15. GARDNER I.A., KASTEN R., EAMENS G.J., SNIPES K.P. & ANDERSON R.J. (1994). Molecular fingerprinting of
Pasteurella multocida associated with progressive atrophic rhinitis in swine herds. J. Vet. Diagn. Invest., 6,
442447.
16. GATLIN C.L., JORDAN W.H., SHRYOCK T.R. & SMITH W.C. (1996). The quantitation of turbinate atrophy in pigs
to measure the severity of induced atrophic rhinitis. Can. J. Vet. Res., 60, 121126.
17 HAREL J., CT S. & JACQUES M. (1990). Restriction endonuclease analysis of porcine Pasteurella multocida
isolates from Quebec. Can. J. Vet. Res., 54, 422426.
18. HEDDLESTON K.L., GALLAGHER J.E. & REBERS P.A. (1972). Fowl cholera: gel diffusion precipitation test for
serotyping Pasteurella multocida from avian species. Avian Dis., 16, 925936.
19. KAMP E.M., BOKKEN G.C., VERMEULEN T.M., DE JONG M.F., BUYS H.E., REEK F.H. & SMITS M.A. (1996). A
specific and sensitive PCR assay suitable for large-scale detection of toxigenic Pasteurella multocida in
nasal and tonsillar swabs specimens of pigs. J. Vet. Diagn. Invest., 8, 304309.
20. NAGAI S., SOMENO S. & YAGIHASHI T. (1994). Differentiation of toxigenic Pasteurella multocida by PCR. J. Clin.
Microbiol., 28, 18581861.
21. PEDERSEN K.B., NIELSEN J.P, FOGED N.T., ELLING F., NIELSEN N.C. & WILLEBERG P. (1988). Atrophic rhinitis in
pigs: proposal for a revised definition. Vet. Rec., 122, 190191.
22. PEJSAK Z., WASINSKA B., MARKOWSKA-DANIEL I. & HOGG A. (1994). Field evaluation of thirteen regimens for the
control of progressive atrophic rhinitis. Comp. Immunol. J . Clin. Microbiol., 31, 364367.
23. PENNINGS A.M. & STORM P.K. (1984). A test in vero cell monolayers for toxigenic Pasteurella multocida. J.
Clin. Microbiol., 9, 503508.
24. MAGYAR T., KOVCS F., DONK T., BR H., ROMVRI R., KOVCS M. & REPA I. (2003). Turbinate atrophy
evaluation in pigs by computed tomography. Acta Vet. Hung., 51, 485491.
25. QUINN P.J., CARTER M.E., MARKEY B. & CARTER G.R. (1994). Bordetella species. In: Clinical Veterinary
Microbiology. Wolfe Publishing, London, United Kingdom, 280283.
26. PEDERSEN K.B., NIELSEN J.P, FOGED N.T., ELLING F., NIELSEN N.C. & WILLEBERG P. (1988). Atrophic rhinitis in
pigs: proposal for a revised definition. Vet. Rec., 122, 190191.
27. PEJSAK Z., WASISKA B., MARKOWSKA-DANIEL I. & HOGG A. (1994). Field evaluation of thirteen regimens for the
control of progressive atrophic rhinitis. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis., 17, 125132.
28. RUTTER J .M. & STORM P. K. (1984). Cell culture assay for toxigenic Pasteurella multocida from atrophic
rhinitis of pigs. Vet. Rec., 114, 393396.
29. QUINN P.J., CARTER M.E., MARKEY B. & CARTER G.R. (1994). Pasteurella species. In: Clinical Veterinary
Microbiology. Wolfe Publishing, London, United Kingdom, 254258.
30. QUINN P.J., CARTER M.E., MARKEY B. & CARTER G.R. (1994). Bordetella species. In: Clinical Veterinary
Microbiology. Wolfe Publishing, London, United Kingdom, 280283.
31. REGISTER K.B. & DEJONG K.D. (2006). Analytical verification of a multiplex PCR for identification of Bordetella
bronchiseptica and Pasteurella multocida from swine. Vet. Microbiol., 117, 201210.
32. REGISTER K.B., LEE R.M. & THOMSON C. (1998). Two-color hybridization assay for simultaneous detection of
Bordetella bronchiseptica and toxigenic Pasteurella multocida from swine. J. Clin. Microbiol., 36, 33423346.
33. REGISTER K.B., SACCO R.E. & BROCKMEIER S.L. (2007). Immune response in mice and swine to DNA vaccines
derived from the Pasteurella multocida toxin gene. Vaccine, 25, 61186128.
34. RUTTER J.M. & LUTHER P.D. (1984). Cell culture assay for toxigenic Pasteurella multocida from atrophic
rhinitis of pigs. Vet. Rec., 114, 393396.
35. SMITH I.M. & BASKERVILLE A.J. (1979). A selective medium facilitating the isolation and recognition of
Bordetella bronchiseptica in pigs. Res. Vet. Sci., 27, 187192.
36. TO H., SOMENO S. & NAGAI S. (2005). Development of a genetically modified nontoxigenic Pasteurella
multocida toxin as a candidate for use in vaccines against progressive atrophic rhinitis in pigs. Am. J. Vet.
Res., 66, 113118.
37. TOWNSEND K.M., BOYCE J.D., CHUNG J.Y., FROST A.J. & ADLER B. (2001). Genetic organization of Pasteurella
multocida cap loci and development of a multiplex capsular PCR typing system. J. Clin. Microbiol., 39, 924
929.
38. VENIER L., ROTHSCHILD M.F. & WARNER C.M. (1984). Measurement of serum antibody in swine vaccinated
with Bordetella bronchiseptica: comparison of agglutination and enzyme-linked immunosorbent assay
methods. Am. J. Vet. Res., 45, 26342636.
*
* *