Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.

Instituto de Salud Pblica de Chile.

DOCUMENTOS TCNICOS PARA EL LABORATORIO CLNICO

RECOMENDACIONES
PARA LA CLASIFICACIN
SANGUNEA ABO

Enero 2013
RECOMENDACIONES PARA
LA CLASIFICACIN SANGUNEA ABO

AUTOR
TM. Andrs Aburto Almonacid.
Encargado rea de Inmunohematologa.
Seccin de Hematologa e Inmunohematologa.
Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pblica de Chile.

REVISORES INSTITUTO DE SALUD PBLICA

BQ. Patricio Anabaln Soto.
Jefe. Subdepto Enfermedades No Transmisibles.
Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pblica de Chile.
TM. Mitzy Celis Morales.
Jefe Seccin Coordinacin Externa.
Subdepto Coordinacin de Redes de Laboratorios.
Departamento Laboratorio Biomdico Nacional y de Referencia.
Instituto de Salud Pblica de Chile.
Dra. Vernica Ramrez Muoz.
Jefe Subdepto Coordinacin Externa.
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Instituto de Salud Pblica de Chile.

REVISORES EXTERNOS

COMIT DE EXPERTOS PEEC INMUNOHEMATOLOGA

TM. Mg. Cs. Leonor Armanet Bernales.
Directora Escuela de Tecnologa Mdica.
Universidad de Chile.
TM. Hugo Henrquez Bello.
Director Docente Escuela de Tecnologa Mdica.
Universidad Mayor.
Dr. Federico Liendo Palma.
Jefe Banco de Sangre/UMT.
Hospital Barros Luco Trudeau.
Dra. Mara Cristina Martnez Valenzuela.
Directora Centro de Sangre Concepcin.
TM. Ramn Schifferli Salazar.
TM. Encargado de Calificacin Microbiolgica.
Centro de Sangre y Tejidos de Valparaso.
Dra. Vernica Soto Arellano.
Jefe UMT Hospital Roberto del Ro.
Jefe Banco de Sangre Clnica Dvila.
TM. Carolina Villalobos Urbina.
Director Tcnico.
Centro Metropolitano de Sangre y Tejidos.
RECOMENDACIONES PARA LA CLASIFICACIN SANGUNEA ABO
RESUMEN
Este documento entrega las directrices para la reali-
zacin de una adecuada clasificacin sangunea ABO, a
fin de contribuir a los procesos de cada institucin para
asegurar la calidad de la medicina transfusional. Est di-
rigido a los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios Clni-
cos, y ha sido consensuado con el Comit de Expertos
del rea de Inmunohematologa y los participantes del I y
II Taller Nacional de Inmunohematologa PEEC, realiza-
dos en los aos 2011 y 2012 respectivamente.
ALCANCE
Estas recomendaciones aplican a los Centros de
Sangre, Unidades de Medicina Transfusional, Bancos de
Sangre y Laboratorios Clnicos que realizan clasificacin
sangunea ABO a donantes, pacientes y embarazadas se-
gn corresponda.
INTRODUCCIN
Una adecuada clasificacin sangunea ABO, tiene
como objetivo determinar la presencia de antgenos y
anticuerpos del Sistema ABO en sangre humana.
El sistema ABO posee 4 fenotipos o grupos sangu-
neos: A, B, AB y O. Los 4 fenotipos estn determinados
por la presencia o ausencia de antgenos A y B sobre los
Glbulos Rojos (GR) y por la presencia o ausencia de
anticuerpos anti-A y anti-B en el suero. Existe una rela-
cin reciproca entre antgenos en GR y anticuerpos en
suero. Esta caracterstica permite que al realizar la prue-
ba globular y srica se dispone de una contraprueba para
la clasificacin ABO, debiendo corresponder inequvoca-
mente el antgeno detectado con los anticuerpos demos-
trados para asignar el grupo sanguneo, de lo contrario,
se est frente a una discrepancia, lo que impide asignar
el grupo ABO hasta aclarar la discrepancia.
Una consideracin especial corresponde a la clasi-
ficacin ABO para recin nacidos, debido a que desa-
rrollan los anticuerpos para este sistema hasta los 3-6
meses de vida, por lo que no puede realizarse en ellos la
prueba srica, postergando su clasificacin formal des-
pus de este periodo o al primer ao de vida.
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 RECOMENDACIONES PARA
LA CLASIFICACIN SANGUNEA ABO

DEFINICIONES Y ABREVIACIONES
a) El sistema sanguneo ABO consta de 4 fenotipos principales:

ANTICUERPOS EN EL SUERO O
GRUPO ANTGENOS EN EL GR
PLASMA
O - anti-A y anti-B

A A anti-B

B B anti-A

AB A, B -

b) No se debe utilizar la nomenclatura 0 (cero) para definir al grupo O debido a que:

- la designacin O es ms ampliamente utilizada a nivel mundial, y la utiliza la literatura cientfica.
- se debe evitar la similitud cero positivo con el trmino seropositivo, donde se llama seropositivo al indi-
viduo que sometido a una prueba serolgica diagnstica, presenta anticuerpos contra un agente infeccioso (Ej.
VIH).

c) No se debe utilizar la nomenclatura numrica antigua (AB-I, A-II, B-III, O-IV) debido a que:
- no define al grupo sanguneo, es ms, redunda en la designacin del mismo.
- no es utilizada en la literatura cientfica.
- su utilizacin confunde cuando debemos designar algn subgrupo ABO (Ej. A2, A3, B3).

d) Abreviaciones:
PBS: buffer fosfato salino.
EDTA: cido Etilendiaminotetraactico.
ACD: cido ctrico, citrato, dextrosa.

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DESARROLLO
MUESTRA
La muestra adecuada para realizar la clasificacin
ABO es sangre completa con o sin anticoagulante (EDTA,
ACD). Los glbulos rojos deben ser suspendidos en
suero o plasma autlogo, o en PBS.
REACTIVOS
Sueros clasificadores o tarjetas de geles que con-
tengan anti-A, anti-B y anti-A, B (opcional). Debido
a la gran potencia de estos reactivos para aglutinar
directamente a sus antgenos respectivos, no es
necesaria la utilizacin del suero anti-A, B, el cual
tiene su utilidad en la clasificacin ABO para recin
nacidos, el control de calidad y la resolucin de
discrepancias para el sistema ABO.
GR testigos A1 y B en la concentracin adecuada
para cada tcnica. Ej. Tubo: 2-4%, Gel: 0,8-1%,
Microplaca: 1-3%. Pueden ser de procedencia co-
mercial o de fabricacin propia en el laboratorio. Si
la opcin es la ltima, los GR testigos A1 y B deben
ser controlados en su aspecto (libre de hemlisis,
coloracin alterada y cogulos) y evidenciar reac-
ciones claras e inequvocas (especificidad) para los
antgenos que fueron fabricados. Debe existir un
procedimiento que asegure la calidad de los reacti-
vos de fabricacin propia, avalado por el ISP.
Suero fisiolgico, PBS o solucin diluyente reco-
mendada para la tcnica utilizada.
TCNICAS
Se recomienda la utilizacin de tcnicas manuales,
semiautomatizadas y automatizadas de tubo, sistema de
geles y sistema de microplaca. La utilizacin de tcnica
en lmina para la clasificacin ABO no constituye una
metodologa reconocida por el Instituto de Salud Pblica
de Chile, debido a lo siguiente:
Es la tcnica menos sensible para clasificacin
ABO, y por lo tanto presenta mayores errores.
Generalmente involucra slo la parte globular (di-
recta) de la clasificacin ABO.
RECOMENDACIONES PARA
LA CLASIFICACIN SANGUNEA ABO
No permite detectar discrepancias y subgrupos en
la clasificacin ABO.
Dado lo anterior, la tcnica en lmina slo sirve como
tcnica para reclasificar y verificar grupo establecido
por una tcnica sensible, no puede ser utilizada en la
rutina y no es reconocida para informar resultados en el
Programa de Evaluacin Externa de la Calidad (PEEC) de
Inmunohematologa.
PROCEDIMIENTO
Para lograr resultados confiables, seguros y de la
calidad esperada, debe realizar una lectura acuciosa
del inserto del reactivo o tcnica, para su cabal com-
prensin, debiendo seguir rigurosamente todas las
indicaciones establecidas en l. Tambin debe hacerse
cada vez que se cambia un reactivo o procedimiento.
Con lo anterior, el laboratorio debe definir el proce-
dimiento a realizar, para la correcta aplicacin de la
tcnica. A partir del inserto debe elaborarse el Proce-
dimiento Operativo Estndar, de acuerdo a la tcnica y
equipos a usar, describiendo al menos el sistema de
identificacin de muestras, los protocolos a usar, la
tcnica de lectura, la validacin del mtodo y el infor-
me de resultados.
A modo de ejemplo se entrega el siguiente procedi-
miento tipo:
1. Numerar las muestras a clasificar y centrifugarlas
de acuerdo al tiempo estandarizado en la centrfuga
para obtener suero o plasma.
2. Preparar en un tubo una suspensin de los glbu-
los rojos a tipificar en su propio suero o plasma,
o en PBS. Esta suspensin se debe preparar de
acuerdo al inserto de la tcnica a utilizar: Ej: Tubo:
2-4%, Gel: 0,8-1%, Microplaca: 1-3%.
3. Para cada muestra a clasificar, se deben efectuar las
siguientes reacciones:
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LA CLASIFICACIN SANGUNEA ABO

TUBO SUERO O PLASMA GLBULOS ROJOS UTILIDAD

Muestra en concentracin
A anti-A (comercial) Determinacin de presencia de antgeno A en GR
adecuada a la tcnica usada

Muestra en concentracin
B anti-B (comercial) Determinacin de presencia de antgeno B en GR
adecuada a la tcnica usada

Muestra en concentracin Determinacin de presencia de antgenos A y B en

AB anti-A, B (comercial)
adecuada a la tcnica usada GR (opcional)

Determinacin de presencia de anticuerpos anti-A

GRA Muestra Testigos A1
en suero o plasma

Determinacin de presencia de anticuerpos anti-B

GRB Muestra Testigos B
en suero o plasma

Muestra en concentracin Control autlogo. Determinacin de

PA Muestra
adecuada a la tcnica usada Autoaglutinacin

* En la clasificacin para recin nacidos slo se debe realizar la clasificacin globular que incluye los 3 primeros
reactivos (anti-A, anti-B, anti-A, B) agregando a esta clasificacin una prueba de antiglobulina directa.

4. Mezclar y centrifugar de acuerdo a la calibracin de nual que recomiende el fabricante. En caso de no

la centrfuga para lectura, o a los tiempos y revolu- existir, usar aquella tcnica que permita una mayor
ciones establecidas por el proveedor. sensibilidad del mtodo.
5. Observar en busca de aglutinacin y hemlisis, de 6. Registrar los resultados obtenidos de acuerdo a la
acuerdo a la tcnica de lectura automatizada o ma- siguiente tabla de intensidad de reaccin:

INTENSIDAD
SCORE O AGLUTINACIN AGLUTINACIN
DE REAC-
PUNTAJE TUBO/MICROPLACA GEL
CIN

Botn nico. Fondo claro. Sin clulas Banda homognea de aglutinados en la

4+ 12
libres. parte superior de la columna.

Banda superior de aglutinado y

Varios aglutinados de gran tamao. Fondo
3+ 10 desplazamiento en la parte superior de la
claro. Sin clulas libres.
columna.

Muchos aglutinados de mediano tamao. Aglutinados pequeos en la columna y a lo

2+ 8
Fondo claro. Sin clulas libres. largo de la columna.

Numerosos aglutinados pequeos. Fondo Algunos aglutinados pequeos en la

1+ 5
turbio por GR libres. columna.

Apenas la aglutinacin es visible. Fondo Escasos aglutinados de pequeo tamao en

+/- 2
turbio por GR libres. la columna.

Banda de GR al fondo de la columna, resto

0 0 Ausencia de aglutinacin
de la columna sin aglutinados.

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LA CLASIFICACIN SANGUNEA ABO

INTERPRETACIN
La asignacin del grupo sanguneo debe realizarse de acuerdo a los resultados de la siguiente tabla:

REACCIN DE CLULAS CON REACCIN DE SUERO CON GRUPO ABO

ANTI-A ANTI-B GR A1 GR B

0 0 + + O

+ 0 0 + A

0 + + 0 B

+ + 0 0 AB

0 = No hay reaccin de aglutinacin

+ = Intensidad de aglutinacin de cualquier tipo (4+, 3+, 2+, 1+)

Cualquier otra combinacin de resultados constituye CONTROL DE CALIDAD INTERNO

una discrepancia, la que deber ser estudiada y aclarada
antes de informar el grupo sanguneo.
INFORME DE RESULTADOS
Se deben seguir los procedimientos de control de
calidad recomendados por los fabricantes de reactivos y
equipos. Cada laboratorio debe realizar control de cali-
dad en las siguientes situaciones:

Actualmente existen mltiples terminologas que se
utilizan para informar los resultados de la clasificacin
ABO, no necesariamente todas de base correcta, pero
que se han instaurado y se utilizan masivamente. Ej:
Grupo, grupo sanguneo, clasificacin ABO.
Dado que la clasificacin de grupo sanguneo de uti-
lidad clnica incluye el sistema ABO y el antgeno D del
sistema Rh, la denominacin recomendada es:
CLASIFICACIN ABO Y RhD: A RhD positivo;
A RhD negativo; O RhD positivosegn corres-
ponda al individuo clasificado.
a) Con cada serie de clasificacin: los reacti-
vos que se utilicen (sueros y GR testigos) deben
dar reacciones apropiadas e inequvocas, segn la
tabla n 1.
b) Con cada nuevo lote de reactivos: correspon-
de a la verificacin para asegurar la conformidad
con los criterios utilizados. Cualquier reactivo que
no cumpla con las especificacin requeridas para
los test, no se debe utilizar.
c) Con cada nueva tcnica o tecnologa: adems
de probar los reactivos como se describen anterior-
mente, es conveniente realizar junto a este nuevo
mtodo, si es posible, en paralelo con el mtodo que
se estaba usando, de acuerdo al protocolo de verifi-
cacin implementador en el laboratorio. Esto deber
asegurar que el mtodo es apto para su uso rutinario.

Tabla n 1

REACCIN POSITIVA REACCIN NEGATIVA

Anti-A Glbulos rojos A1 Glbulos rojos B y O

Anti-B Glbulos rojos B Glbulos rojos A1 y O

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d) Inspeccin visual f) Potencia: se debe evaluar el lmite de deteccin de

- Etiqueta debe contener informacin sobre: el
nombre del producto, el nmero de lote (serie), la
fecha de vencimiento, las condiciones de almace-
namiento y nombre del fabricante o su logo.
- Inserto del producto debe aportar los mismos
detalles que los sealados en la etiqueta, pero ex-
plicitando el mtodo recomendado para su uso, los
controles de calidad a aplicar, los diluyentes reco-
mendados etc., que pueden ser necesarios, adems
de cualquier limitacin o advertencias en el uso de
ese reactivo. Debe incluir tambin detalles de la
composicin del reactivo, advertencias de biosegu-
ridad y aportar detalles para su uso seguro.
Todos los reactivos no-celulares deben estar libres de
hemlisis, precipitados, partculas o formacin de gel.
e) Especificidad: los reactivos deben dar reacciones
positivas y negativas claras cuando son probado con el
nmero de muestras indicado en la tabla n 2.
reacciones especficas para cada suero en estudio (sen-
sibilidad).
Se debe usar el nmero de muestras y ttulos m-
nimos aceptables (en parntesis), indicado en la tabla
n 3.
g) Avidez: se deben producir las reacciones observa-
bles en un tiempo dado. Es de utilidad para reactivos
que sean utilizados en lmina para reclasificar.
Se debe usar el nmero de muestras, indicados en
la tabla n 4, las cuales deben aglutinar dentro de los
primeros 2 minutos.
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO:
Los Centros de Sangre, Unidades de Medicina
Transfusional, Bancos de Sangre y Laboratorios Cl-
nicos del pas que realizan esta determinacin deben
participar en algn programa de evaluacin externa de
la calidad.

Tabla n 2

GLBULOS ROJOS ANTI-A ANTI-B ANTI-A, B

A 2 2 2
B 2 2 2
AB 2 2 2
O 2 2 4

Tabla n 3

GLBULOS ROJOS ANTI-A ANTI-B ANTI-A, B

A 2 (128) 2 (128)
B 1 (128) 2 (128)
AB 2 (64) 3 (64) 2 (64)
El reactivo sin diluir debe dar una reaccin de 4 +

Tabla n 4

GLBULOS ROJOS ANTI-A ANTI-B ANTI-A, B

A 1 2
B 1 2
AB 3 3

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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Roback JD, editor. AABB Technical Manual, 17th ed.,
Bethesda, Maryland, 2011.
American Association of Blood Banks. AABB Standards
for Blood Bank and Transfusion Services, 25th ed.,
Bethesda, Maryland, 2008.
Ministerio de Salud de Chile. Orientaciones para Cen-
tros de Sangre y Unidades de Medicina Transfusional,
MINSAL, 2007.

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