CROMATOGRAFA

INTRODUCCIN
La caracterstica que distingue a la cromatografa de la mayora de los mtodos fsicos
y qumicos de separacin, es que se ponen en contacto dos fases mutuamente
inmiscibles. La fase estacionaria y la mvil. Una muestra que se introduce en la fase
mvil es transportada a lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria
distribuida. Las especies de la muestra experimentan interacciones repetidas (repartos)
entre la fase mvil y la fase estacionaria. Cuando ambas fases se han escogido en forma
apropiada los componentes de la muestra se separan gradualmente en bandas en la
fase mvil. Al final del proceso los componentes separados emergen en orden creciente
de interaccin con la fase estacionaria. El componente menos retardado emerge
primero, el retenido ms fuertemente eluye al ltimo. El reparto entre las fases
aprovecha las diferencias entre las propiedades fsicas y/o qumicas de los
componentes de la muestra. Los componentes adyacentes (picos) se separan cuando
el pico que sale despus es retardado lo suficiente para impedir la sobreposicin con el
pico que emergi antes.

Hoy en da casi no hay campo de la qumica, biologa, medicina, etc. en el que no se

utilice la cromatografa en alguna de sus formas, tanto en su vertiente preparativa como
en la analtica; por otra parte el desarrollo sobre el uso conjunto de la cromatografa con
otras tcnicas analticas, as como el desarrollo de otros tipos de cromatografa, como
es por ejemplo la de fluidos supercrticos, hace previsible una extensin an mayor de
su uso.

A pesar de que el mtodo cromatogrfico prometa simplificar la separacin

desustancias de mezclas complejas, no fue sino hasta finales de la dcada de los 30 y
principio de los 40 cuando se empez a desarrollar la tcnica teniendo este
mtododiversas aplicaciones. En la actualidad la cromatografa se emplea
principalmente paraseparar compuestos incoloros pero el nombre permanece para
describir cualquier tcnica que se base en los mismos principios.

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CONCEPTOS Y DEFINICIONES
a) Cromatografa.- La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales est en reposo
(fase estacionaria o lecho estacionario) mientras que la otra (fase mvil) se mueve en
una direccin definida. El proceso cromatogrfico se da como resultado de la mayor o
menor capacidad para ser retenidos los diferentes componentes de una muestra por la
fase estacionaria, es decir, se basa en los repetidos procesos de interaccin durante el
movimiento de los componentes de una mezcla arrastrados por la fase mvil a lo largo
de la fase estacionaria (elucin), producindose la separacin debido a las diferencias
en las constantes de distribucin de los componentes de la mezcla entre la fase
estacionaria y la mvil.

b) Fase estacionaria.- Es una de las dos fases que forman un sistema

cromatogrfico. Puede ser un slido, un gel o un lquido. Si es un lquido, puede estar
distribuido en un slido, el cual puede o no contribuir al proceso de separacin. El lquido
puede tambin estar qumicamente unido al slido (fase ligada) o inmovilizado sobre l
(fase inmovilizada). La expresin lecho cromatogrfico o sorbente se puede usar como
trmino general para designar cualquiera de las formas diferentes en que se use la fase
estacionaria. En particular, en la cromatografa de gases se usa el trmino fase lquida,
caso ms comn de fase estacionaria, frente a fase gaseosa para la fase mvil. Sin
embargo, en el desarrollo inicial de la cromatografa lquida se us el trmino "fase
lquida" para referirse a la fase mvil, frente a la "fase slida", es decir, la estacionaria.
Debido a esta ambigedad, se desaconseja utilizar el trmino "fase liquida". Si se debe
expresar el estado fsico de la fase estacionaria, se propone el uso de adjetivos, tales
como fase estacionaria lquida, fase estacionaria slida, fase ligada slida o fase
inmovilizada slida.

c) Fase ligada.- Una fase estacionaria que est unida de forma covalente a las
partculas de soporte o a la pared interior de la columna (lugar donde se produce la
separacin).

d) Fase inmovilizada.- Una fase estacionaria que est inmovilizada sobre las
partculas del soporte o sobre la pared interior de la columna, por ejemplo por
polimerizacin in situ (entrecruzamiento qumico) tras un recubrimiento.

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e) Fase mvil.- Fluido que se filtra a travs o a lo largo del lecho estacionario, en una
direccin definida. Puede ser un lquido (cromatografa cquida, LC), un gas
(cromatografa de gases, GC) o un fluido supercrtico (cromatografa con fluido
supercrtico). En la cromatografa de gases se puede usar la expresin gas portador
para la fase mvil. En la cromatografa de elucin se usa tambin para la fase mvil la
expresin eluyente.

f) Eluir.- Proceso en el que la fase mvil se desplaza a lo largo de la fase estacionaria

transportando los componentes a separar. El proceso de elucin se puede detener
mientras todos los componentes de la muestra estn an en el lecho cromatogrfico, o
continuarse hasta que lo hayan abandonado (se prefiere el trmino "Eluir" a
"Desarrollar", trmino usado en nomenclaturas anteriores de cromatografa plana).

g) Efluente.- La fase mvil que abandona la columna.

h) Muestra.- Mezcla consistente en cierto nmero de componentes, cuya separacin

se pretende en el lecho cromatogrfico al ser arrastrados o eluidos por la fase mvil.

i) Componentes de la Muestra.- Los constituyentes qumicamente puros de la

muestra. Pueden no ser retenidos por la fase estacionaria (es decir, no retardados),
retenidos parcialmente (es decir, eluidos a tiempos diferentes) o retenidos
permanentemente. Se aceptan tambin los trminos eluito y analito para un componente
de la muestra.

j) Soluto.- Trmino que se refiere a los componentes de la muestra en la cromatografa

de reparto.

k) Disolvente.- Trmino que en ocasiones se refiere a la fase estacionaria lquida en

la cromatografa de reparto.
Nota: En la cromatografa lquida, el trmino "disolvente" se ha usado a menudo para la
fase mvil. Este uso no se recomienda.

l) Zona.- Regin del lecho cromatogrfico donde se localizan uno o ms componentes

de la muestra. Se puede usar para ello tambin el trmino banda.

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m) Cromatograma.- Una grfica u otro tipo de presentacin de la respuesta de un
detector (la concentracin de un analito en el efluente u otra magnitud usada como
medida de la concentracin en el efluente) frente al volumen de efluente o al tiempo. En
la cromatografa plana, "cromatograma" puede referirse al papel o capa con las zonas
separadas.

n) Cromatografiar.- Separar por cromatografa.

o) Cromatgrafo.- El instrumento empleado para realizar una separacin

cromatogrfica

MECANISMOS DE SEPARACIN
a. Cromatografa de adsorcin
Que es un fenmeno de interaccin superficial por el cual tomos, iones o molculas
son retenidas en la superficie de un material. Diferente afinidad de adsorcin de los
componentes de la muestra sobre la superficie de un slido activo. La adsorcin es la
capacidad de las superficies para fijar molculas. La Fase Estacionaria. es siempre
slida. Ejemplos: almina, gel de slice, carbn activo, fosfato clcico, hidroxiapatito. La
cromatografa de adsorcin, es una tcnica particularmente til para separar
compuestos de polaridad baja o media. La separacin de compuestos muy polares
mediante cromatografa de adsorcin requiere, debido a la gran retencin que ofrecen,
la utilizacin de adsorbentes muy poco activos, o bien, tratamientos qumicos previos a
fin de reducir su polaridad.

b. Cromatografa de Reparto
La separacin se basa principalmente en la diferente solubilidad de los componentes de
la muestra en la fase estacionaria (caso de la cromatogafa de gases), o en las diferentes
solubilidades de los componentes en las fases mvil y estacionaria (caso de la
cromatografa lquida). La mayor o menor migracin de un componente en este tipo de
cromatografa ser funcin del coeficiente de reparto de ste entre la fase estacionaria
y la fase mvil:

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La cromatografa de reparto se utiliza para la separacin de mezclas de compuestos de
polaridad media y alta. Algunos ejemplos de este tipo de cromatografa son las
cromatografas sobre papel, slice hidratada y fase inversa en la cromatografa lquida
de alta eficacia.

c. Cromatografa de Exclusin
La separacin se basa principalmente en efectos de exclusin, tales como las
diferencias de tamao molecular o de forma, o las diferencias de carga. Se puede usar
tambin el trmino cromatografa de exclusin por tamaos, SEC, cuando la separacin
se basa en el tamao molecular. Anteriormente se usaban para esto los trminos
filtracin en gel y cromatografa de permeacin en gel (GPC), cuando la fase
estacionaria es un gel hinchado. El trmino cromatografa de exclusin de iones se usa
especficamente para la separacin de iones en una fase acuosa.

d. Cromatografa de Intercambio Inico

La separacin se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio de
iones de los componentes de la muestra. Actualmente, cuando se lleva a cabo sobre
columnas de partculas pequeas y elevada eficiencia, y empleando habitualmente
detectores conductimtricos o espectroscpicos, se denomina cromatografa de iones
(IC).

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e. Cromatografa de Afinidad
Esta expresin caracteriza una variedad particular de cromatografa en la que se utiliza
para la separacin la especificidad biolgica singular respecto a la interaccin entre
analito y ligando.

CLASIFICACIN DE LA CROMATOGRAFA
La cromatografa se puede clasificar de acuerdo con la forma del Lecho Cromatogrfico:
Cromatografa Plana y Cromatografa en Columna; y de acuerdo con el Estado Fsico
de las Fases: Cromatografa de gases y Cromatografa lquida.

Cromatografa Plana
La cromatografa plana es aquella tcnica de separacin en la que la fase estacionaria
se presenta en un plano. Se distingue entre la cromatografa en papel y la cromatografa
en capa fina. En el primer caso, la fase estacionaria es una lmina de papel que puede
estar impregnada de otra sustancia, y en el caso de la cromatografa de capa fina
consiste en una capa de partculas slidas distribuidas en un soporte plano.

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Cromatografa en Columna
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de Magnesio.
La fase estacionaria est constituida por un slido poroso, el cual queda soportado en
el interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidrio. La fase mvil se
encuentra formada por la solucin que lentamente va atravesando la fase estacionaria.
La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva
solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna. La
migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra retardada
en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas pueda
ejercer con la fase estacionaria. Las sustancias se separan gradualmente formando
bandas dentro de la banda total, la separacin, y por tanto la resolucin, aumenta con
la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede ensancharse
con el tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la resolucin.

Cromatografa de Gases
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes
a ser separados son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es
estacionaria mientras la otra se mueve en una direccin definida. Los
componentes son separados por sus diferentes tazas de migracin (IUPAC). La

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cromatografa puede ser clasificada por su utilidad y en base al material que se
utilice como eluyente para separar los solutos. De acuerdo a su utilidad la
cromatografa se clasifica en: analtica, utilizada para determinar los qumicos
presentes en una mezcla y en que concentracin; y preparativa, utilizada para
purificar grandes cantidades de qumicos.

Cromatografa lquida
En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna
que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el resultado de las
interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas fases, mvil y
estacionaria

A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto

rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada por la
volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.

La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos naturales

lbiles, materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos polifuncionales de
alto peso molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro parmetro se encuentra
disponible para la selectividad, en adicin a una fase estacionaria activa.

La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una mayor
gama de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la separacin.

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 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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