Introduccin

Hoy en da la identificacin y clasificacin de microrganismo es muy importante para la

identificacin de enfermedades , desarrollo de frmacos as como tambin de actividades
industriales que involucran la biotecnologa .

Una de las maneras para visualizarlos es travs de tinciones biolgicas es decir una combinacin
coloraciones que permitan dar ms detalles de estos organismos . La identificacin de estructuras
y/o clasificacin segn su morfologa depender del tipo de coloracin

La clasificacin de los colorantes se basan en la presencia de grupos cromoforos ; es as que

tenemos colorantes simples o de rutina ( solo puede distinguir la morfologa ) y colorantes
especiales ( mas especificas los cuales pueden diferenciar ciertas estructuras internas )

Tinciones simples Tinciones diferenciales

Utiliza un solo colorante Emplea dos colorantes : Uno de tincin y otro de contraste

Para visualizacin de : Separacin de grupos Visualizacin de estructuras

Morfologa microscpica Tincin Gram Tincin de flagelos

(cocos , bacilos, espirales ) Tincin acido resistente Tincin de capusla
Tincin de esporas
Tincin de granulos
Tabla 1. Tcnicas de tincin aplicadas a bacterias (Triveo, 2011, pg. 66)

Qumicamente un colorante se define como un compuesto organico que contiene un compuesto

grupo benceno mas un grupo cromoforo , asi como , un auxocromo .Un grupo cromoforo , es un
grupo qumico que imparte color al benceno (solvente orgnico ) ; mientras que un auxocromo , es
un grupo qumico que le confiere la propiedad de ionizacin al cromgeno , capacitndolo para
formar sales y unirse a fibras o tejidos . La habilidad de un colorante para unirse a macromolculas
de componentes celulares , radica en la carga elctrica tanto de la porcin cromogenica como del
componente celular a teir (Triveo, 2011, pg. 65) .

Tincin Gram

Desarrollado por el doctor Christian Gram en 19884 , hoy en da es de lo mas utilizados en

microbiologa ya que permite diferenciar agrupar a las bacterias en Gram negativa y Gram positiva
en base en su estructura lo cual depender la coloracin diferencial de cada grupo . Las Gram
negativas carecen de membrana externa y poseen una delgada capa de peptidoglucano mientras
que las Gram positivas poseen una gruesa capa de peptidoglucano y un membrana externa

Esta tincin adems , correlaciona con otras propiedades como endotoxinas , susceptibilidad a
antibiticos , sensibilidad o resistencia a sales biliares , punto isoelctrico y tensin superficial
(Gamboa Cavallini, Hernandez Chavarria, Garcia Hidalgo, & Rodriguez Cavallini, 2005, pg. 63)
Mtodos
A. Tincin gram
Las diferentes bacterias responden de modo distinto frente a tincin gran , esto debido a las
diferencias estructurales en sus paredes lo cual determina la retencin o escape de l complejo
violeta- yodo

Cuando se aplica tanto a clulas Gram positivas como a gran negativas el cristal violeta y luego el
yodo ingresan con facilidad en las clulas en su interior se forma el complejo violeta yodo .Este
complejo es ms grande que la molcula de cristal violeta que ingreso en las clulas y , por su
tamao , no puede ser eliminado por el agregado de alcohol de la capa de peptidoglucano intacta
de las Gram positivas .Por consiguiente las clulas Gram positivas retienen el color del colorante
cristal violeta .En cambio , en las clulas gramnegativos el alcohol altera la capa externa de
lipopolisacrido y el complejo violeta yodo se elimina de la capa delgada de petidoglucano .Como
consecuencia , las clulas gramnegativos son incoloras hasta que se agrega el colorante de
contraste safranina , despus del cual aparece el color rosado (Tortora, Funke, & Case, 2007, pg.
70)

B. Tincin Ziehl-Nielsen
Las paredes celulares de algunas bacterias como de las bacterias del genero Mycobacterium
contienes cidos grasos de cadena larga ( cidos micolicos ) lo cual es causa de la baja absorcin y
alta retencin de la tincin ( fucsina) . Poseen la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol
acido, despus de la tincin con colorantes bsicos .Estas bacterias se pueden identificar a travs
de la tincin de Ziehl-Neelsen

Fundamento

La coloracin se basa en que al calentar el colorante primario , se favorece la disolucin de cidos

grasos de la membrana y esto hace que el colorante pase al interior de la clula .Al suspender el
calentamiento y enfriar en agua , provoca una nueva solidificacin de los cidos grasos de modo
que el colorante ya no puede salir de las bacterias .Por otro lado , el calentamiento aumenta la
energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias
.Las bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo y las que no se ven de color azul
(Espinal, 2005, pg. 17)
Resultados

Tincin gram
Cuestionario

1. Afecta la edad del cultivo a la coloracin de Gram?

S. Es posible que una bacteria Gram (+) pierda el grosor de su capa de
peptidoglucano y por consiguiente su caracterstico tinte morado frente a la
coloracin de Gram, adems de la edad, el estrs, infecciones o dao en
general podran inducir a falsos positivos con respecto a Gram (-).

2. Existen diferencias qumicas que expliquen la velocidad de

decoloracin en las bacterias Gram (+) y Gram (-)?
La presencia de una capa gruesa de peptidoglucano desacelera la decoloracin
de las bacterias Gram (+).

3. Qu componentes bacterianos permiten la resistencia a la

decoloracin con alcohol cido?
Los cidos grasos de sus paredes celulares y citoplasma (cido miclico, ceras,
cidos grasos instaurados, etc).

4. Qu significa BAAR y cul es su interpretacin?

Bacilo Alcohol cido Resistente, este tipo de microorganismo se debe
interpretar como aquellos teidos de rosado/fucsia en la coloracin Ziehl-
Nielsen. Puede indicar que sea un caso de Tuberculosis (M. tuberculosis) u otro
patgeno, aunque no es exclusivo.
Bibliografa

Espinal, G. (2005). Manual de practica de microbiologia I. Santo Domingo: BUHO.

Gamboa Cavallini, M., Hernandez Chavarria, F., Garcia Hidalgo, J., & Rodriguez Cavallini, E. (2005).
Bacteriologia General : principios y practicas de laboratorio . Costa Rica : Universidad de
Costa Rica .

Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Introduccion a la microbiologia . Madrid: MEDICA
PANAMERICANA.

Triveo, A. R. (2011). Conceptos y practica de microbiologia general . Bogota, Colombia.