UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA DE QUIMICA

ING CARLOS WONG

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

REPORTE : MICROBIOLOGIA DEL AGUA

TECNICAS DE LOS TUBOS MULTIPLES DE FERMENTACION

YOHANA LOPEZ ROSALES

201213347
 INTRODUCCIN

MICROBIOLOGIA DEL AGUA

TECNICAS DE LOS TUBOS MULTIPLES DE FERMENTACION

Siendo el agua materia prima para la preparacin de un sinnmero de productos

alimenticios y farmacuticos, adems utilizada universalmente por los seres vivos,
es de importancia vital determinar su carga microbiolgica as como el tipo de
microorganismos presentes. Ello permitir reconocer si esta puede consumirse.
Cuando el agua de consumo est libre de microorganismos patgenos y sustancias
qumicas perjudiciales se llama potable.
Existen diversas tcnicas para examinar microbiolgicamente el agua. Bsicamente
todas ellas utilizan un sustrato de nutrientes para determinar el conteo total
bacteriolgico, y utilizan tambin una o ms tcnicas selectivas para detectar la
presencia de microorganismos especficos, especialmente las enterobacterias .
El grupo coliforme incluye a todas las bacterias aerobias o anaerobias facultativas,
gran negativa, no espero genas que fermentan la lactosa con formacin de gas en
48 horas a 35C.
La tcnica del nmero ms probable, NMP, utiliza diluciones mltiples hasta
extincin y es til sobre toda en muestras que tienen poca cantidad de
microorganismos.
Cuando se utiliza para investigar enterobacterias se aprovechan las caractersticas
de estas de producir gas de la lactosa, el cual es atrapado en campanillas de
Durham presentes en los tubos de ensayo.
 OBJETIVOS

1. Determinar la presencia de bacterias coliformes en una muestra de agua, para

establecer su Calidad.

2. Obtener un ndice del numero posible de bacterias coliformes en la muestra

estudiada.

3. Enumerar y explicar cada paso de la tcnica de tubos multiples para la

determinacin de coliformes en una muestra de agua.
 MARCO TERICO

Bacteria Coliforme:

Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfolgica y fisiolgicamente.

Estos M.O. con frecuencia difieren entre si en caractersticas pequeas.

Las bacterias coliforme suelen encontrarse en el aparto intestinal del hombre y

animal. E. Coli, rara vez se encuentra fuera del intestino.

Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos que fermentan la
lactosa y forman cido y gas.

Son anaerbios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre 30

y 37 C, crecen a gran abundancia en medios corrientes, como caldo y agar.

La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de

dimetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde
metlico cuando se observan con luz refleja.

Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen
emplearse 4 y se han juntado sus iniciales en la palabra nemotcnica IMViC (Indol,
Rojo Metilo (R.M.), Borges Proskauer (V:P) y utilizada de citrato.

La reaccin de IMViC de algunas bacterias coliformes como E.coli ++ --, significa

que el M:O: produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P.

Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva.

Se considera que todas las bacterias coliformes, tienen importancia en el H2O

desde el punto de vista sanitario aunque muchos autores an tratado de diferenciar
el tipo fecal (e.coli) y el nofecal (A: aurogenes)

Anlisis sanitario del H2O

El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de H2O se basa en la

capacidad de dicho M:O: para producir gas a partir de la lactosa.
Filtracin:

Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensin del H2O.

Cloracin:

Es el mtodo ms eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad de cloro que se

agrega depende del grado de contaminacin del abasto hdrico y su contenido de
sustancias orgnicas. El cloro mata la mayor parte delas bacterias no esporgenas.
El H2O clorada, en consecuencia no siempre es estril, pero suele
brindar seguridad para consumo por el ser humano.

Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Mtodo):

Se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtracin de acetatos

de celulosa con poros y dimetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el paso
libre del H2O.

La membrana de filtracin se coloca aspticamente en una caja de Petri en un

cojincillo absorbente saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo, se incuba
a 24 C durante 24 horas. Despus se examina la membrana con microscopio de
poca potencia y se cuentan las colonias verdes violceos con resplandor metlico,
si considera que son bacterias coliformes.

H2O potable:

Sea limpia, fresca, sin olores o sabores desagradables o que causen rechazo de
quien lo consume y sin sustancias qumicas o M.O. nocivos.
Ventajas del uso de Filtro de membrana para las H2O:

1.

2. Rapidez en la obtencin de resultados

3. Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los

materiales si el filtro se lava y se vuelve a utilizar.

4. Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy

fcilmente durante un corto tiempo y a una temperatura conveniente.

Inconvenientes de Uso:

1. No hay indicacin de formacin de gas (algunas H2O tienen gran cantidad

de organismos fermentadores de la lactosa sin produccin de gas capaces
de crecer en el medio).

2. La filtracin por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y

bajos recuentos, porque el filtro llega a obturarse antes de que
pase agua suficiente.

3. Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el

medio pueden interferir en el crecimiento de los coliformes.
MATERIAL
1. Diez tubos de 10ml con caldo lactosado siempre y campanilla de Durhem.
2. cinco tubos de 10ml con caldo lactosado doble y campanilla de Durham.
3. muestra de agua posiblemente contaminada, 125mL.
4. Reactivos para tincin de Gram.
5. Caja de Petri con agar EMB o Endo.
6. Tubo con agar inclinado de tripticasa soya.
7. tres tubos concaldo de lactosa de bilis de verde brillante o dos tubos con caldo
de tripticasa soya con campanilla de DURHAM.
8. PIPETAS ESTERILES DE 10Ml.
9. pipetas esteriles de 1mL.
10. Gradilla para tubos de ensayo.
11. asa bacteriologa y aguja de inoculacin
12. mechero o lmpara de alcohol.
PROCEDIMIENTO
 RESULTADOS

PRUEBA PRESUNTIVA
Prueba positivos 5-2-0
Numero mas probable en cm3 0.49 NMP/cm^3

PRUEBA CONFIRMATIVA
Prueba confirmativa Produccin de gas
Formacin de gas NEGATIVA

PRUEBA COMPLETA
Prueba completa Tubo de caldo de bilis verde brillante
Coliformes NEGATIVA
FOTOGRAFIAS