LABORATORIO N08:

FISIOLOGA INMUNOLOGICA

ALUMNO:
CASTRO PUELLES ARTHUR EDWARD

DOCENTE:
WILSON BECERRA

GRUPO:
11.45 1.15

CICLO:
V

Domingo 14 de mayo del 2017

 EXPERIMENTO N O1: TIPIFICACIN SANGUNEA

1. Procedimiento:

Despus de limpiarse el dedo con alcohol y algodn se les pincho el dedo

cada uno de los estudiantes de la mesa correspondiente , sobre un
portaobjetos previamente marcado se colocaron tres goititas de sangre
de aproximadamente 0.5 cm de dimetro y en cada una de las gotas se
puso un tipificador anti A ,uno anti B , y uno anti RH (D) , mezclar urante
un minuto con una paletita y observar si hay aglutinacin o no y dar los
resultados, despus determinar la frecuencia del grupo sanguneo de los
estuiantes y compararla con la frecuencia establecida .

ANTI A ANTI D

ANTI B

Sueros tipifica dores anti-A, anti-B y anti-D

2. Resultados:

GRUPO 11.45 1.15

NUMERO
ALUMNOS A B AB O RH + RH -

1 ARBOLEDA + +

+
2 BARBOZA +

3 CASTRO + +

4 HORNA + +

5 IPANAQUE + +

6 MONTEZA + +

7 MURO + +

8 ORELLANA + +

9 PAUCAR + +

10 RAMIREZ + +

11 VILCAMANG + +
O

12 WONG + +

13 GIL + +

14 DAVILA + +
 15 GARCIA + +

16 DIAZ + +

GRUPO
SANGUINEO : O
FACTOR RH+

GRUPO SANGUINEO :A

FACTOR RH +

GRUPO SANGUINEO :B

FACTOR RH +
3. Discusin:

Segn el libro GUYTON hay varios grupos de antgenos eritrociticos pero

el principal es el sistema ABO , una persona de grupo sanguneo A solo
puede tener sobre el eritrocito antgenos A pero tiene anticuerpos en el
plasma anti B , el de grupo sanguneo B sobre el eritrocito tendr
antgenos B y en el plasma anticuerpos anti A, al tipo AB se le denomino
como el receptor universal, ya que al no poseer aglutininas (anticuerpos) en el
plasma, as recibiera sangre tipo A, B y O no habra reaccin alguna porque
los antgenos nunca se encontraran con los anticuerpos del receptor y al
grupo sanguneo O como el donante universal ya que al no poseer
aglutingenos de tipo A ni de tipo B, esta no reaccionar con la sangre del
receptor, si tuviera sangre tipo A, B AB; ya que aun teniendo anticuerpo el
receptor en su plasma estos no se activaran porque nunca encontraran el
antgeno.(1)
Una diferencia entre el sistema ABO y el Rh seria en cuanto a sus aglutininas.
Con respecto al sistema ABO, las aglutininas comienzan a formase despus
del nacimiento (a partir de los 2-8 meses) pero con el sistema Rh estos
anticuerpo no se hayan ya que se necesita de una exposicin previa para la
formacin de estos anticuerpos (anti - Rh). As, con mltiples exposiciones al
factor Rh, una persona Rh- finalmente llega a sensibilizarse con ms fuerza al
factor Rh.
En base a los resultados obtenidos de los estudiantes de medicina del grupo
de 11:45 - 1:15 de laboratorio de fisiologa, siendo el total de alumnos 16,
decimos que existe una mayor prevalencia por el grupo sanguneo O, con
un total de 9 alumnos con este grupo sanguneo ,precedido por el grupo
sanguneo A con 5 alumnos quedando el grupo sanguneo AB con un total
de 2 alumnos .comparando con la prevalencia ya establecida de grupo
sanguneo O+ con un porcentaje de 56.25% y el grupo sanguneo A+ con un
porcentaje de 31.25% y el grupo sanguneo AB con un porcentaje de +12.5%
se puede decir que cumple .

4. Conclusin :

Saber el tipo de factor de RH tiene una particular importancia cuando las

madres RH a a luz a lactantes RH+ no afecta el primer embarazo puesto
que no hay el contacto sangre materna y la fetal pero durante el parto
podra darse este contacto y la madre podra formar anticuerpos para RH
+ afectando el segundo embrazo por ende el lactante podra nacer
anmico afeccion llamada eritroblastosis fetal.
Hacer una tipificacion sangunea para saber el grupo sanguneo y a que
grupo RH pertenecemos es de suma importantancia puesto que si se
necesita una transfucion sanguinea o un transplante tendra que ser del
mismo grupo y factor puesto que se presentara una incompatibilidad
provocando problemas de rechazo e incluso hasta la muerte.
 EXPERIMENTO N O2: EVALUACIN DEL TIEMPO DE
SANGRA

1. Procedimiento

Con la ayuda de tres alumnos , se realiz con la lanceta una puncin en el dedo
y obtener una gota de sangre para ponerlo en el pocillo de muestra del kit ,luego
se adiciona una gota de diluyente de muestra inmediatamente ,la lectura debe
realizarse despus de 15 minutos e interpretarlo .

2. Resultados

CASTRO ARBOLEDA BARBOZA

INDICA QUE NO HAY INDICA QUE NO HAY

INDICA QUE NO HAY PRESCIENCIA DE ANTGENO PRESCIENCIA DE
PRESCIENCIA DE ANTGENO
ANTGENO

Negativo o no reactivo :si solo se colorea la banda C

Positivo o reactivo: cuando se colorea las bandas C y T
Invalido : colorea la banda T
3. Discusin :

La hepatitis B es la causa ms comn de viremia e infeccin persistente

crnica del hgado y carcinoma hepatocelular , el antgeno de la hepatitis
B es el primer marcador que aparece en la sangre en un paciente
infectado por hepatitis B , pero se detecta si estuvo expuesto hace dos
meses atrs de la realizacin de la prueba o si hay presencia de
sntomas,, es de vital importancia que la persona que se realiza la prueba
no hay sido inmunizada un tiempo antes de la realizacin de la prueba
puesto que nos dara falsos positivos ya que tendra al antgeno de
hepatitis B pero el de manera artificial. (2)
Los alumnos voluntarios fueros vacunados hace tres aos por eso no
presentan el antgeno artifical provocando en la prueba falsos positivos.

4. Conclusin
El tiempo de espera de los 15 minutos es de suma importancia
puesto que el resultado puede ser otro .
Los portadores crnicos del virus de la hepatitis B ocupan un lugar
muy importante en las estrategias para el control y la erradicacin
de la enfermedad. Los conocimientos que comienzan a acumularse
sobre los mecanismos inmunolgicos de respuesta ms efectivos
e inocuos, as como de los defectos responsables de la
incapacidad para eliminar el virus, contribuirn a curar, aliviar y
mejorar la calidad de vida de los ms de 300 millones de enfermos
crnicos de hepatitis B que existen en el mundo, cifra que supera
diez veces la magnitud de la epidemia del Sndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida.
Esta prueba es rpida lo cual nos ayuda a realizarla antes de
alguna transfusin sangunea evitando posibles contagios del virus
 5. Cuestionario:

5.1La ausencia del Ags VB en la sangre de una persona que estuvo

expuesta al virus B es suficiente para descartar la infeccin o estado
portador ?

El anticuerpo de superficie se forma en respuesta al virus de la hepatitis B. El

organismo puede producir este anticuerpo si usted es vacunado, o si se ha
recuperado de una infeccin de hepatitis B. Si el resultado es positivo, su sistema
inmunolgico ha desarrollado con xito un anticuerpo protector contra el virus de
la hepatitis B, que le brindar proteccin a largo plazo contra infecciones futuras
del mismo. Las personas que obtienen un resultado positivo en el anticuerpo de
superficie no estn infectadas y no le pueden contagiar el virus a los dems.

Cuando hay ausencia del antgeno de superficie o sea sale negativo , significa
que la persona no est infectada pero aun corre el riesgo de posibles infecciones
futuras ,requiere de una inmunizacin.

5.2 Cmo estimulan los linfocitos T a los linfocitos B para el cambio de

isotipo y maduracin de afinidad de inmunoglobulinas ? Cules son la
citoquinas que promueven la maduracin de la sntesis de cadenas
pesadas de psilon ,ganma y alfa?

Los linfocitos T colaboradores o linfocitos T cooperadores, tambin conocidos

como linfocitos T efectores o simplemente linfocitos Th, son un subgrupo de
linfocitos que tienen un papel muy importante en establecer y maximizar las
capacidades de defensa del sistema inmunitario. La actividad de estas clulas
es inusual, en tanto no son capaces de producir efectos citotxicos o fagocitarios,
es decir, no pueden aniquilar la clula husped o patgenos. Sin la ayuda de
otras clulas inmunitarias se consideran intiles contra una infeccin. Los
linfocitos Th estn involucrados en la activacin y direccin de otras clulas
inmunitarias, y son particularmente importantes en la respuesta inmune
adaptativa. Son esenciales en el proceso de conmutacin para la posterior
formacin de anticuerpos por parte de los linfocitos B, en la activacin y
crecimiento.
Los linfocitos T cooperadores dirigen la activacin de los linfocitos B y
estimulando el cambio de isotipo ,el ligando para el CD40 situado en la superficie
de los linfocitos T activados cooperadores y las citosinas secretadas por este
linfocito son los principales impulsadores moleculares que inducen a los linfocitos
B a realizar el cambio de isotipo . la maduracin de la afinidad tambin depende
de la activacin de los linfocitos B por el CD40L situado en los linfocitos T ,
implica la mutacion somatica de genes V de Ig reordenados en los linfocitos B
activados y la seleccin posterior de linfocitos B con elevada afinidad por el
antgeno original tiene lugar todo esto en los centros germinales.(3)

L-4 y la L- 13 interviene el el cambio de isotipo de la IgE

L-5 y el TGF-beta son las citocina con rango de accin ms reducido al inducir
la generacin de Inmunoglobulina A (IgA)
L-14 interviene en la induccin de la IgG
IFN-gamma, induce cambio en las clulas B para sintetizar IgG.

5.3Qu clula de la respuesta inmune adaptativa es responsable de la

destruccin de los hepatocitos infectados por el virus de la hepatitis B
?cules son los mecanismos de lisis celular ?

Se definen como hepatotropos primarios aquellos virus que tienen un tropismo

especial por los hepatocitos y por lo tanto, los infectan en forma preferencial lo
cual no quiere decir que no infecten otros tipos celulares; y se definen como
hepatotropos secundarios aquellos virus que infectan primariamente a otros tipos
celulares pero que pueden, en el contexto de una infeccin generalizada infectar
los hepatocitos.
Una particularidad del VHB es su escaso efecto citoptico sobre el hepatocito: el
virus no suele destruir a las clulas que infecta; 12 sin embargo, es la respuesta
inmune que se desencadena tras la infeccin y encargada de la eliminacin del
agente patgeno, la responsable de las principales manifestaciones de la
enfermedad. Para ambos brazos del sistema inmune adaptativo, anticuerpos y
linfocitos T, se cumple en el caso de la hepatitis B la peculiar ambigedad de ser
arma de doble filo: proteccin y dao separados por una lnea poco definida.
El poder antiviral de los linfocitos T es mayor que su capacidad destructora en
muchos rdenes de magnitud. El IFN, una de las molculas protagonistas en
esta respuesta inocua, interrumpe la unin del ARN viral y las protenas que a l
se asocian durante el ensamblaje de la cpsida infecciosa; parte de este efecto
parece ser mediado por los proteasomas, organitos celulares encargados de
degradar protenas citoplasmticas, y se ha encontrado que la presencia de
inhibidores de los proteasomas en clulas infectadas por el VHB, bloquea el
efecto antiviral del IFN. Un segundo mecanismo mediado por esta citocina es
la destruccin de una protena celular que protege al ARN viral, lo cual permite
la degradacin de este ltimo por las ribonucleasas que se encuentran en el
citosol. Adems, el IFN y el FNT polarizan la respuesta T hacia el desarrollo de
sus funciones efectoras antivirales, 18 potencian el procesamiento antignico y
el transporte y expresin local de molculas del SPH.

. deficiencias del reconocimiento de linfocitos T4, frente a antgenos virales, con

menor produccin de IL-2, INF garruna y menor actividad de linfocitos NK (por
anomalas de linfocitos intrnsecos);
. menor produccin de inmunoglobulinas por linfcitos B, y por ello menor
produccin de anticuerpos (anti-HBc y anti-HBs). Defecto relativo de actividad de
Te, por menor produccin de INF por clulas polinucleares, linfocitos y
fibroblastos; con menor expresin de la membrana HLA- 1, que es necesaria
para la lisis del hepatocito (1,2). En la membrana del hepatocito, se presenta:
menor citotoxina de linfocitos T y menor expresin del HBcAg. Este es el
antgeno diana de clulas inmunocompetentes, no el HBsAg. El grado de
actividad histolgica est en relacin al grado de expresin citoptica y de
membrana del HBcAg y HBeAg, e inversamente con grado de replicacin. La
respuesta inmune es adecuada con la elevacin de transaminasas, pre-
seroconversin del HBcAg, linfocitos T supresoras disminuidos, con accin
eficaz del INF en etapa de replicacin(4)
 EXPERIMENTO N O3 ENSAYO INDIRECTO DE
INMUNOABSORCIN LIGADO A ENZIMAS (ELISA)

1. Procedimiento:
Se realiz mediante el software PhysioEx. En este experimento se tom:
cinco muestras que se encuentran en el armario de las muestras: paciente
A, paciente B, paciente C, un control positivo y un control negativo; una
microplaca con 96 pocillos; una pipeta multicanal; una pipeta automtica
de 100 ml; un lector de placas; una caja suministradora de puntas de
pipeta desechables; solucin tampn de lavado; solucin del antgeno
VIH; solucin tampn de revelado anticuerpo secundario conjugado con
una enzima; solucin del sustrato; papel secante se usa para secar; un
recipiente para la recogida de residuos biolgicos peligrosos .

2. Resultados:

Resultado de elisa indirecto

MUESTRA Densidad ptica Resultado del test

de VIH
Paciente A 0.054 Negativo

Paciente B 0.432 Intermedio

Paciente C 1.99 Positivo

Control 1.624 Positivo

positivo
control 0.154 Negativo
negativo

Densidad ptica Resultado

<0,300 Negativo
0,300-0,499 Intermedio(es necesario repetir la
prueba)
>0,500 Positivo
3.Discusin:

Es el Virus de la Inmunodeficiencia Humana: Su anlisis indica, que el

individuo que da POSITIVO, si no se trata, desarrollar el SIDA (Sndrome
de Inmunodeficiencia Adquirida) en un periodo aproximado de 4 a 10
aos.se puede detectar mediante una prueba de Elisa

La tcnica ELISA : (ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas) es

una tcnica de inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se
detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar
un producto detectable, como cambio de color o algn otro tipo; en
ocasiones, con el fin de reducir los costes del ensayo, nos encontramos
con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antgeno y que a
su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la
enzima anteriormente mencionada. La aparicin de colorantes permite
medir indirectamente mediante espectrofotometra el antgeno en la
muestra.

Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular

est presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el
procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran nmero de
variables, tales como seleccin de reactivo, temperatura, medicin de
volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los
pasos sucesivos y el resultado de la prueba

La intensidad del color se mide con la Densidad ptica, esta densidad al

medir la intensidad del color mide indirectamente la cantidad de
anticuerpos en el ELISA; debido a que estas 2 variables son directamente
proporcionales.
El Paciente A presenta una densidad ptica por debajo de 0,300 entonces
podemos decir que no hay presencia del virus del VIH en su plasma, lo
cual nos dice que el paciente A es una persona sin la enfermedad (sana)
El paciente B presenta una densidad ptica entre 0,300-0,499 lo que nos
indica un resultado indeterminado; no se puede decir si el paciente esta
infectado o no por es un resultado incierto .
El paciente C presenta una densidad ptica mayor a 0,500 siendo positivo
lo cual nos indica que hay presencia del virus ; pero siempre es necesario
respaldarlo con una prueba mas especifica la prueba del West Blotting
 4. Conclusin:

La prueba de Elisa consiste en la deteccin de los anticuerpos del virus.

Esta prueba debe realizarse 3 semanas despus de la prctica de riesgo
y permite, en muchas ocasiones, la deteccin precoz del VIH.

En el caso de obtener un resultado positivo con la prueba del ELISA, este

debe confirmarse mediante una prueba ms especfica denominada
Wester Blot.

La deteccin precoz de la infeccin te permitir ponerte lo antes posible

en manos de tu mdico para que este pueda valorar cual es el mejor
tratamiento para ti y evitar la posible transmisin del VIH.

En el caso de un resultado negativo como el paciente A , esta prueba es

suficientemente fiable como para poder descartar la infeccin por VIH. No
obstante se recomienda realizar la prueba al cabo de 3 meses para
verificar que no se trata de un falso negativo, y si sale positivo no hay que
alarmarse porque tendra que hacerse una prueba mas especifica.

5. Cuestionario :
5.1Cmo puedes afirmar que el ensayo realizado es directo o
indirecto?

Un ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzimas (ELISA) implica la reaccin de

un complejo anticuerpo-enzima con un antgeno o anticuerpo que se mantiene
inmvil sobre una superficie slida. En la incubacin de la enzima conjugada con
un sustrato adecuado, un producto es formado. La formacin de un producto
ayuda a detectar la presencia del antgeno o anticuerpo y su cantidad
proporciona una medida de la cantidad de antgeno-anticuerpo de la reaccin
que se produjo. La prueba de ELISA se puede realizar de dos formas: directa e
indirecta.

En la prueba de ELISA directa, un anticuerpo primario se lleva a cabo en

las paredes de una placa de microtitulacin. Cuando la muestra se
sospecha que contienen el antgeno se aade, hay una reaccin
antgeno-anticuerpo. A continuacin, un anticuerpo secundario ligado a
una enzima que es capaz de reaccionar con el antgeno se aade. Si el
antgeno est presente en la muestra, se une a este anticuerpo ligado a
enzimas. Cuando un sustrato incoloro se aade, un color se desarrolla,
indica la presencia de antgeno.
 En el ELISA indirecto, el antgeno se lleva a cabo en las paredes de la
placa de microtitulacin. Cuando una muestra sospechosa de contener
anticuerpos se aade, una reaccin antgeno-anticuerpo se produce. A
continuacin, un anticuerpo secundario ligado a enzimas capaces de
reaccionar con la regin no unida del anticuerpo, se aade. Cuando el
sustrato incoloro se aade, conduce al desarrollo de color si la muestra
utilizada contiene anticuerpos.

Una amplia gama de anticuerpos secundarios marcados estn

disponibles comercialmente. Adems, es posible crear varios anticuerpos
primarios en una especie dada y utilizar el mismo anticuerpo secundario
para la deteccin. Esto hace que el ELISA indirecto sea fcil de realizar.
En el ELISA directo, los anticuerpos primarios tienen que ser
especficamente preparados para reaccionar con el antgeno especfico
que estn presentes en la muestra. Esto hace que el ELISA directo sea
desventajosa en comparacin con la prueba indirecta. La prueba de
ELISA directa es rpida en comparacin con la prueba indirecta, ya que
slo utiliza un nico anticuerpo. El ELISA indirecto requiere una etapa
adicional de incubacin con un segundo anticuerpo durante el
procedimiento de ensayo, lo que provoca un retraso en la obtencin de
resultados.
La prueba directa de ELISA es menos sensible que la forma indirecta de
la prueba porque no es la amplificacin de la seal mucho menos.
Adems, el etiquetado de la primaria de anticuerpos con una enzima
puede afectar a su perfil de immonoreactividad. En el caso del ELISA
indirecto, el anticuerpo primario no se etiqueta y, por tanto, conserva su
inmunorreactividad. Adems, cada anticuerpo primario tiene muchos
eptopos que pueden unirse con el anticuerpo secundario, lo que permite
la amplificacin de la seal, la mejora de la sensibilidad del mtodo. Sin
embargo, hay una posibilidad de reactividad cruzada entre el antgeno y
el anticuerpo secundario, dando lugar a un error en los resultados. No hay
posibilidad tal en el mtodo de ELISA directo.(5)
5.2indique a que se a unido el AC secundrio o porque ?

El anticuerpo secundario est unido qumicamente a una enzima, los cuales

reaccionan con los anticuerpos especficos aadidos anteriormente y que se
encuentran fijados a los antgenos.
El sistema de deteccin emplea dos anticuerpos: uno primario contra el antgeno
y uno secundario marcado contra el primario. La deteccin tiene mayor
sensibilidad por presentar una amplificacin de seal debida a la unin de dos o
ms anticuerpos secundarios por cada primario.
El marcador enzimtico que se emplea en estos anlisis se conjuga con un
ligando, que puede ser un antgeno, un anticuerpos especfico para el antgeno
de inters o un anticuerpo para el anticuerpo primario.

BIBLIOGRAFA

(1) Guyton A, Hall J. Tratado de la fisiologa mdica. 12 ed. Espaa: Elsevier;

2011. Pg. 445 450.

(2) http://www.plb.gba.gov.ar/gba/plb/pdf/HEPATITIS.pdf

(3)Abbas inmunologa celular y molecular .septima edicin pag 244 -245

(4)http://www.fihu-diagnostico.org.pe/revista/numeros/1998-
99/novdic99/265-270.html
(5)http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-
protocolos.pdf