1 Farmacologa y Teraputica

Epigentica en el cncer: fundamentos y ms all

Subhankar Biswas, C. Mallikarjuna Rao
Departamento de Farmacologa, Facultad Manipal de Ciencias Farmacuticas, Manipal
University, Manipal 576104, Karnataka, India.

La activacin de los oncogenes o la desactivacin de los genes supresores de tumores se

ha establecido Mecanismo que conduce a la carcinognesis. Aunque este viejo axioma es
muy exacto, exhaustivo Estudio en los ltimos 15 aos nos ha dado informacin sin
precedentes sobre la participacin de la epigentica en el cncer. Varias vas bioqumicas
que son esenciales para la tumorignesis son reguladas por los fenmenos epigenticos
Como la remodelacin de los nucleosomas por modificaciones de las histonas, la
metilacin del ADN y la orientacin mediada por miARN De varios genes. Por otra parte la
presencia de mutaciones en los genes que controlan los jugadores epigenticos tiene ms
Reforz la asociacin de la epigentica en el cncer. Esta fusin ha abierto nuevas vas
para Anti-cncer con numerosas industrias farmacuticas que se centran en ampliar su
investigacin y desarrollo Tubera con frmacos epigenticos. La informacin
proporcionada aqu elabora los fenmenos elementales De los diversos reguladores
epigenticos y discute su alteracin asociada con el desarrollo del cncer. Nosotros
Tambin destacan los recientes desarrollos en frmacos epigenticos que combinan datos
preclnicos y clnicos para significar este En desarrollo en la investigacin del cncer.
1. Introduccin
El cncer es un grupo de enfermedades que vara ampliamente con respecto a su
origen. Como resultado, los principales obstculos asociados con su tratamiento
consisten en
De diagnstico inapropiado que conduce a recurrencias y resistencia a frmacos. En
Relacin con esto, una de las emergentes clases teraputicas de antineoplsicos
Agente est dirigido a dirigir la expresin gnica debido al hecho de que las
irregularidades
En el patrn de expresin de un gen es una caracterstica clave en el desarrollo
De cncer (Cavalieri, 1996). Para acomodar toda la longitud
De varios metros de ADN humano en el ncleo de una clula, el ADN est enrollado
Alrededor de las protenas histonas formando un complejo llamado nucleosoma,
Unidad bsica de cromatina (Annunziato, 2008). Adems, los estudios
postraduccionales
Modificaciones de la cola de la histona alteran la estructura de la cromatina
A un cambio en la expresin gnica que es un elemento de la epigentica
regulacin. Con nuestra comprensin mejorada sobre el cncer, ahora es
Estableci que el crecimiento maligno est asociado con factores genticos y
Anomalas epigenticas (Sadikovic, Al-Romaih, Squire, & Zielenska,
2008). En particular, las alteraciones epigenticas ocurren precozmente
Crecimiento y finalmente convertirse en un tumor maligno. Aunque epigentica
Modificaciones son heredadas en las clulas somticas, pero estas modificaciones son
Posiblemente reversible, lo que indica que las alteraciones epigenticas pueden ser un
Objetivo teraputico a explorar. Indudablemente, el campo de rpido crecimiento
De la epigentica teraputica se est ampliando continuamente integrando.
Resultados de laboratorio con datos clnicos que nos sugieren cmo la terapia epigentica
Puede ser mejor utilizado para el beneficio del paciente. En esta revisin tomamos Una
mirada comprensiva a los diversos jugadores epigenticos, su participacin En el
desarrollo del cncer y de los frmacos empleados para Mecanismos.

2. Fenmeno epigentico
El trmino Epigentica fue acuado por C.H.Waddington en 1942 como "el
Interaccin causal entre los genes y sus productos, lo que
Fenotipo en ser ". Sin embargo, con nuestro creciente conocimiento en
La definicin ha evolucionado como "el estudio de los cambios en la
Genes que son mitoticamente y / o meolgicamente heredables y que
No implican un cambio en la secuencia del ADN "(Dupont, Armant,
Brenner, 2009). La forma en que se conserva la estructura de la cromatina
Y ordenado es crucial en la comprensin del origen de la alteracin epigentica.
Ciertamente, cada tipo de clula en el cuerpo es genticamente idntico, es decir,
Comparten el mismo conjunto de genes, pero necesitan diferenciar fenotpicamente
En diversos tipos de clulas y tejidos para soportar un funcionamiento normal
cuerpo humano. Esto es controlado por reguladores altamente sincronizados
Mecanismo que implica la epigentica. Los cambios epigenticos regulan
Expresin gnica por obstaculizar la disponibilidad de factores de transcripcin hacia
ADN. Estas modificaciones se producen en diferentes regiones circundantes
El genoma. El fundamento de la regulacin epigentica de la expresin gnica
Tiene en cuenta la forma en que se envuelve el ADN
Nucleosoma y tambin considera la forma en que cada nucleosoma es
Posicionado a lo largo del genoma. Con nuestra comprensin creciente
Sobre la biologa del cncer atribuida por los rpidos avances tecnolgicos,
Ahora est bien establecido que las clulas cancerosas albergan epigenticos globales
Alteraciones al lado de varias mutaciones genticas que representan una interaccin
compleja
Entre estos actores (Sadikovic et al., 2008). Este fenmeno
Fue evidente a partir de la expresin gnica y los estudios de metilacin del ADN
Proporcionando las pistas iniciales que unen la epigentica con el cncer. Emergente
Los datos estn ahora reforzando nuestras perspectivas del genoma amplio papel de
Epigentica. En la actualidad, las alteraciones epigenticas ms estudiadas asociadas
Con fenotipo neoplsico son la variacin en la metilacin del ADN, la alteracin
En la estructura de las protenas de las histonas y la regulacin de genes por pequeos
MicroRNAs no codificantes.

2.1. Metilacin del ADN

La adenina, la timina, la citosina y la guanina son los principales
Bases que se encuentran en organismos eucariotas. Estas bases usualmente
Comprenden la mayora de la secuencia encontrada en el ADN eucaritico. Aparte,
A partir de estas cuatro bases principales, la existencia de una quinta base, es decir,
Metilcitosina, es una de las principales modificaciones covalentes del ADN. En
eucariotas,
La metilacin del ADN es una alteracin epigentica comn y estos
Las marcas epigenticas son tpicas de la heterocromatina. Metilacin del ADN
Juega un papel importante en el mantenimiento de la estabilidad del genoma,
genmica
Inactivacin del cromosoma X en las mujeres, regulacin de la
Transcripcin y tambin en el proceso de desarrollo de un organismo
(Robertson y Jones, 2000). El ADN metilado est presente principalmente en
Regiones genmicas (incluido el ADN satlite, como micro y
Mini-satlites), dentro de centromeres y elementos parasitarios tales como
Cortos intercalados elementos transponibles (SINEs) y largo intercalados
Elementos transponibles (LINEs) donde funcionan para silenciar genes y
Regiones genmicas no codificantes. El quinto carbono de los residuos de citosina
Altamente propensas a la metilacin en comparacin con otras bases nitrogenadas y
Consisten en aproximadamente el 1% de los nucletidos totales. Adems, la mayora
De la metilacin del ADN que ocurre en el residuo de citosina est presente en la
CpG dinucletido distribuido en todo el genoma y tambin es densamente
Encontrados en regiones conocidas como islas CpG (Jones & Takai, 2001). Estas
Las islas CpG se superponen a las regiones promotoras de aproximadamente 60-70%
de
Gen humano En las clulas normales, las regiones promotoras de genes, especialmente
Los precedidos por las islas CpG son usualmente no metilados, permitiendo la
transcripcin
Factores y otras protenas asociadas a interactuar con el gen Y facilitar su expresin.
Por el contrario, los genomas de gametos y
Cuyas regiones promotoras estn menos enriquecidas con islas CpG son
frecuentemente
Metilado durante el desarrollo temprano. Sin embargo, debemos
Tener en cuenta que estos genes muestran un control de la expresin
Desarrollo y son siempre especficos de tejido.
La conversin de citosina en 5-metil citosina (5mC) se lleva a cabo
Por la actividad cataltica de un grupo de enzimas llamadas ADN metiltransferasas
(DNMT). Estas enzimas usan S-adenosil metionina
(SAM) como un donante clave del grupo metilo que transfiere el grupo metilo a
Elementos celulares como el ADN, los lpidos y las protenas. SAM se convierte en
S-adenosil homocistena (SAH) despus de la transferencia del grupo metilo por
DNMTs. Hay dos categoras principales de los DNMTs en mamferos
, Una metiltransferasa de mantenimiento y una metiltransferasa de novo.
El patrn original de metilacin del ADN en una clula se mantiene en gran medida
Por la actividad cataltica de DNMT1, que prefiere el ADN hemi-metilado
En lugar de ADN no metilado como sustrato durante la replicacin, la mayora
Probablemente con el apoyo de UHRF1 (Ubiquitin como con PHD y dedo anular
Dominio 1), que tambin reconoce hemi-metilado sitios, lo que sugiere
Un papel en el mantenimiento de los patrones de metilacin durante la divisin celular
(Qin
Et al., 2015). Por el contrario, se establecen nuevos patrones de metilacin del ADN
En la fase de desarrollo de una clula que utiliza DNMT3A y DNMT3B,
Que se expresan en todo el ciclo celular y muestra la misma preferencia
Para ambos hemi y ADN unmethylated hacindolos de novo methyltransferase.
Se ha identificado otra enzima, DNMT3L, que es de-
En el dominio cataltico conservado comnmente asociado con
ADN metiltransferasa. Aunque se acepta que la ADN metiltransferasa
Son especficos en sus funciones y no se superponen, pero las pruebas recientes
Sugiere el papel superpuesto de las metiltransferasas de novo con
Mantenimiento metiltransferasa.

La metilacin del ADN silencia la expresin gnica directa-

Vinculante de varios factores de transcripcin e indirectamente al
Metil-CpG (MBD). La familia MBD contiene
Cinco protenas ncleo que incluyen MBD1, MBD2, MBD3, MBD4 y el
Protena 2 de unin a la citosina de metilo (MECP2). Aparte de estos, otros
Las protenas que contienen MBD son MBD5 / 6, SETDB1 / 2 y BAZ2A / B. los
La protena MBD emplea enzimas modificadoras de histonas y remodelacin de la
cromatina
Complejos en sitios metilados y facilita la transcripcin
represin. Complejo de remodelacin de cromatina como NuRD se une con
Protena MBD2 y ADN metilato (Du, Luu, Stirzaker, & Clark, 2015).
Estos mecanismos desempean un papel central en el establecimiento del papel
La metilacin del ADN en la regulacin gentica epigentica.
Aunque las enzimas que catalizan la metilacin del ADN han sido bien
Investigacin reciente tambin ha identificado mecanismos
Con la eliminacin del grupo metilo. El descubrimiento de la translocacin diez-once
(TET) [que deriva su nombre basado en un cromosoma recurrente
Translocacin t (10; 11) (q22; q23)] y citidina desaminasa inducida por activacin
(AID) familia de enzimas ha proporcionado informacin sin precedentes
En nuestra comprensin de la desmetilacin del ADN (Scourzic, Mouly,
Bernard, 2015). La desmetilacin del ADN puede lograrse mediante dos procesos
Implicando la desmetilacin pasiva y activa. La desmetilacin pasiva ocurre
Por el fracaso del mantenimiento de la enzima DNMT para metilar el ADN
Despus de la replicacin. Considerando que, la desmetilacin de ADN activa utiliza
TET y
AID de enzimas para hidroxilar, oxidar o desaminar 5mC.
Tres miembros de la familia TET han sido identificados hasta ahora incluyendo TET1,
TET2 y TET3 y cada uno de ellos estn involucrados en procesos celulares distintos.
La hidroxilacin de 5 mC por las protenas TET produce 5-hidroxi
Metilcitosina (5hmC) y su posterior conversin en 5-
Formylcytosine (5-fC) y 5-carboxylcytosine (5caC) seguido de deamination
Y la entrada en la subsiguiente va de reparacin de escisin base.

2.2. Modificaciones histonas

La partcula del nucleosoma ncleo que es el elemento bsico de la cromatina
Envuelve 147 pares de bases de ADN alrededor de un octamer de cuatro histonas de
ncleo
Protenas en un giro sper helicoidal de la mano izquierda de 1.7. El positivo inherente
Gran parte de las protenas histonas bsicas proporciona una unin eficaz con
ADN cargado. La histona de cuatro ncleos comprende H2A, H2B, H3
Y H4 que estn presentes como dmero H2A-H2B y tetramer H3-H4 en asociacin
Con un enlazador de histona H1 que une nucleosomas juntos.
La secuencia de aminocidos que comprende las protenas histonas vara
sustancialmente
Entre las diferentes especies, sin embargo, las protenas histonas son
Compuesto de un dominio estructural comn llamado el pliegue de histonas. Estas
Pliegues comprende una hlice central larga unida con dos hlices
Motivos en los extremos opuestos. Las colas N-terminales de estas protenas
Son muy flexibles y ricos en residuos de lisina y arginina que pueden
Ser ampliamente modificado por un gran nmero de sistemas celulares (Figura 2]
(Ramakrishnan, 1997).
Una pltora de post-translational modificaciones en las protenas histonas
Se observan en las regiones de cromatina transcripcionalmente activa e inactiva.
El trabajo pionero realizado por Vincent Allfrey en los aos 60
Nos ha dado valiosa informacin sobre las histonas y sus modificaciones
(Allfrey, Faulkner, & Mirsky, 1964). Aunque, la investigacin actual
Ha proporcionado una gran cantidad de informacin sobre la estructura de la cromatina
que todava estamos
No asegur si todas las modificaciones de la cola de la histona regulan directamente
Compactacin de cromatina. Debido a la naturaleza omnipresente de la cromatina,
Proceso de ADN, tales como reparacin, replicacin y recombinacin,
Tambin afectados por estas modificaciones. Es interesante entender
Que aunque las enzimas polimerasas no interactan directamente con las histonas,
Una modificacin en ellos altera el estilo de envoltura de ADN y la influencia
la expresion gnica.

probablemente las modificaciones histonas ms estudiadas incluyen la acetilacin

Y metilacin de residuos de lisina en las colas N-terminales de la histona.
La acetilacin del residuo de lisina de colas de histonas es muy frecuente y
Sus niveles se asocian con la cromatina transcripcionalmente activa. Acetilacin
Elimina la carga positiva neta sobre las protenas histonas
Acetilacin del grupo -amino de los residuos de lisina usando acetiltransferasas
(HAT) que utiliza acetil-CoA como el donante del grupo acetilo
Estas enzimas generalmente se clasifican en dos tipos diferentes:
Tipo A, que se encuentran en el ncleo y tipo B, que se encuentran
En el citoplasma (Brownell y Allis, 1996). Sin embargo, la evidencia ha sugerido
Varias funciones del HAT que estn ms all de estas clasificaciones
(Ruiz-Garca et al., 1998). Las histonas nucleosmicas dentro del ncleo
Son acetilados por el HAT del Tipo A, mientras que el rol de limpieza est asociado
Con el Tipo B HAT donde estn involucrados en la acetilacin de nuevos sintetizados
Histonas presentes en el citoplasma (Ruiz-Carrillo, Wangh, & Allfrey,
1975). Las principales familias de las histonas acetiltransferasas incluyen GNAT
Familia (N-acetiltransferasas relacionadas con Gcn5), con una especificidad
H3K9, H3K14, H3K36 histonas, MYST familia con una especificidad hacia
H4K5, H4K8, H4K12, H4K16, H3K14, H3K23 histonas y CBP / p300
(Protena de unin de elemento de respuesta de AMPc) con una especificidad hacia
H2AK5, H3K9, H3K23, H3K56. Aparte de estas familias, el general
Factores de transcripcin incluyen la subunidad TFIID TAF250 y la
HAT relacionados con la hormona nuclear como el receptor de esteroides coactivator-1
(SRC1) y ACTR. Los HAT se asocian con varios complejos proteicos
Para llevar a cabo su actividad cataltica entre los que se incluyen SAGA, TFTC, NuA4,
Los complejos Rtt109-Vps75 se estudian ampliamente. La lisina acetilada en
Las colas de las histonas se reconocen por un motivo conservado evolutivo
Llamado el bromodominio que se encuentran en muchos activadores transcripcionales.
La mayora de los HAT nucleares contienen bromodominio como catalizador
(Losson, 1997). El motivo de bromodominio contiene 110
Aminocidos que estn dispuestos en cuatro hlices conectadas a la izquierda
Con bucles ZA y BC (Dhalluin et al., 1999). Muy alto grado de especi-
Obtenida con la interaccin de un individuo
Bromodomian con otros elementos estructurales dentro de una protena. UN
Ejemplo clsico de esto es la lisina acetilada sobre H4K12 que es
Se encontraron interactuar selectivamente con la protena bromodominio Brd2 para
iniciar
transcripcin. Por el contrario, el motivo de bromodominio asociado
Con TAF (II) 250 y P / CAF se unen a diversos sitios de acetilacin en histona
Protena distinta de H3K14. Para ms informacin los lectores son Sugerido para pasar
por las siguientes excelentes crticas sobre
(Filippakopoulos & amp; Knapp, 2014, Mujtaba,
Zeng, & Zhou, 2007). La metilacin de las protenas histonas es
Encontrado en residuos de arginina y lisina, sin embargo a diferencia de la acetilacin
No hay alteracin en la carga de la protena histona. adems
Debe tenerse en cuenta que este tipo de modificacin tiene una
Nivel de complejidad. Se han observado tres formas diferentes de metilacin
Sobre los residuos de lisina a saber. Mono-, di- y tri-metilo, mientras que arginina
Puede ser mono-metilado y simtricamente o asimtricamente
Di-metilado (Bedford & Clarke, 2009). Una amplia gama de informacin
Est disponible debido a los mltiples estados de metilacin asociados con
Lisina y arginina. Por ejemplo, H3K4me3, es decir, trimetilacin de lisina
4 en la histona H3 es abundante en el promotor del gen activo, mientras que
H3K9me3 est asociado con promotores de genes reprimidos transcripcionalmente
(Kouzarides, 2007, Liang et al., 2004). La metilacin histona es catalizada
Por tres familias distintas de enzimas a saber, el dominio SET que contiene
La familia de protenas de dominio no-SET y la protena PRMT1
(Protena arginina metiltransferasas). La mayora de las enzimas
Con metilato lisina de dominio SET presente en H3 y H4. Es interesante
Para comprender que, aunque, SET 7/9 enzima slo est involucrado en
Monometilando lisina 4 en histona H3, una mutacin en su aminocido
Puede alterar esta especificidad que es evidente a partir de la mutacin de Tyr
3053 a Phe en SET 7/9. Este tipo de mutacin transforma SET 7/9 en
Una dimetiltransferasa. El dominio SET y MYND que contiene protena
2 (SMYD2) es conocido por metilar H3K36 y H3K4 y acta como un transcripcional
Activador (Derissen, Beijnen, & Schellens, 2013). La histona
Metiltransferasa EZH2 utiliza su dominio SET a dimetilato y
Trimetilato lisina 27 en la histona H3 (H3K27me2 / 3). Otra histona
Metiltransferasa SUV39H1 contienen la protena de dominio SET que es
Implicado en la metilacin de H3K9 en los tres estados diferentes. Evidencia
Tambin ha sugerido que el subconjunto de Suv39h1 coexistir en un megacomplex
Para llevar a cabo sus actividades de desmetilacin (Fritsch et al., 2010). Estudios
Han identificado una HATasa G9a de mamferos que desempea un papel
Metilando H3 lisina 9 (Constantinides, Jones, & Gevers, 1977). Adems
Un importante complejo proteico que participa en la metilacin de la lisina-4
De histona H3 es el complejo de protena MLL1 que contiene
ASH2L, HCFC2 / HCF1, WDR5 y RbBP5 como los componentes principales (Avdic
Et al., 2011). La protena no contenida en el dominio SET tambin participa en
Metilando las protenas histonas entre las que DOT1L es ampliamente estudiado.
DOT1L participa en la metilacin de H3K79 y tambin en una serie de
Procesos vitales incluyendo la respuesta de dao del ADN y la progresin del ciclo
celular
(McLean, Karemaker, & van Leeuwen, 2014). Aunque la lisina
La metilacin juega un papel importante en la modificacin de la estructura de la
cromatina,
Enzimas que metilan residuos de peptidil arginina se ha
Ampliamente estudiado. La protena arginina metiltransferasa (PRMT) aade
Mono o dimetilo sobre el nitrgeno guanidino terminal de la arginina
Residuos. Los recientes avances nos han ayudado a
Estructura de los PRMT, clasificndola en varias clases y exponiendo su
Varias funciones (Yang & Bedford, 2013).
No hay duda de que, aparte de la acetilacin y la metilacin,
Otros mecanismos prevalezcan para modificar colas de histona y es ampliamente
aceptado
Que la fosforilacin juega un papel importante en la modificacin de las protenas
Estructuras. Los aminocidos restos de serina, treonina y tirosina en
Las colas de las histonas son propensas a la fosforilacin. Ha sido observado. Que la
fosforilacin de serina 139 en la variante histona H2AX juega un papel
Papel importante en la generacin de las etapas iniciales de la respuesta de dao del
ADN
(DDR). Aunque la fosforilacin de la treonina es un fenmeno menos comn,
Aporta una parte importante en el control epigentico de la cromatina
estructura. Los estudios han demostrado la fosforilacin de
Treonina 119 en H2A por la histonas quinasa-1 nucleosomal que desempea un papel
Papel importante en la progresin del ciclo celular (Aihara et al., 2004). Fosforilacin
De H3S10, S28 y T11 es ampliamente estudiado y est asociado con
Activacin transcripcional. Los estudios han demostrado que la fosforilacin de H3S10
Estimula la acetilacin de H3K14 (Lo et al., 2000). Fosforilacin
De la serina 1 de la histona H4 est involucrada en las etapas posteriores de la DDR y
tambin en la
Estabilizando la nueva estructura del nucleosoma evitando su acetilacin
(Rossetto, Avvakumov y Ct, 2012). Las enzimas implicadas en la fosforilacin
Los residuos de serina pertenecen a la familia de quinasas de enzimas
Entre los cuales se incluyen ribosomal S6 kinase (RSKs), Mitogen y stress activated
Protena quinasa 1 y 2 (MSK1 y MSK2) y Aurora quinasas son ampliamente
(Rossetto et al., 2012). Tienen un papel importante en la fosforilacin
Varios residuos de serina en la histona H3.

Adicin de ubiquitina y protena modificadora relacionada con ubiquitina pequea

(SUMO) sobre residuos de lisina especficos es otra histona prominente
posttranslacional
modificacin. Ubiquitinacin de lisina 119 de Histona
H2A y lisina 120 de H2B es una de las observaciones ms importantes
Realizados en los ltimos aos (Jason, Moore, Lewis, Lindsey y Ausi, 2002). Eso
Se observa que para la dimetilacin y la trimetilacin de H3K4 y H3K79
Ubicar la ubiquitinacin de H2B es obligatoria y por lo tanto se considera
Como una marca activadora de genes (Cole, Clifton-Bligh, & Marsh, 2015). Sobre el
Al contrario, la ubiquitinacin de H2A est asociada con el silenciamiento
transcripcional
Con la participacin de dos diferentes ubiquitina ligasas E3,
Ring1B y 2A-HUB (Spivakov y Fisher, 2007). A pesar de que
Ubiquitinaiton de una protena se dirige generalmente hacia proteasomal
La degradacin del papel anterior de la ubiquitina en las protenas histonas sugiere
Su papel epigentico. Casi anlogo a la ubiquitinacin sobre la base
Del mecanismo de reaccin y la clase de enzimas utilizadas, sumoylation
Aade pptidos SUMO a todas las cuatro protenas histonas centrales. Un importante
Caracterstica asociada con sumoylation es su objetivo principal que
Es lisina. Aunque las lisinas son los objetivos de varias otras modificaciones,
Sumoylation suele estar relacionado con la represin de los genes diana
(Nathan, Sterner, y Berger, 2003).

Las histonas tambin son modificadas por la vitamina Biotina que es catalizada
Por las enzimas holocarboxilasa sintetasa (HCS) y biotinidasa. Especficamente,
Residuos de lisina son objeto de este sistema y son ampliamente prevalentes
En regiones repetidas del genoma, contribuyendo a la estabilidad genmica.
Los estudios han identificado que la lisina en la posicin 9, 13 y 129 en H2A; posicin
4, 9 y 18 en H3; Las posiciones 8 y 12 en H4 son los sitios de biotinilacin
(Camporeale, Shubert, Sarath, Cerny y Zempleni, 2004; Sarath et al
Al., 2004). Aunque se estn realizando estudios para explorar ms
Esta modificacin, la evidencia sugiere una disminucin en la biotinilacin de lisina
Residuos con acetilacin de lisinas adyacentes. Considerando que, una mejora
En la biotinilacin de residuos de lisina cuando los residuos de arginina
Son dimetilados (Martnez-Zamudio & Ha, 2012).
La consecuencia de la histona ADP-ribosilacin no es ampliamente
Sin embargo, los estudios han establecido su papel en la
Estructura de la cromatina. En particular, con la identificacin de lisina especfica
Residuos en la histona que acta como sitio aceptor para la ADP-ribosa sugiere
Una importancia igual con respecto a otras modificaciones. Uno de
El mejor sustrato para poli (ADP-ribosa) polimerasa es la histona H1.
Aparte de que todas las histonas de ncleo son tambin ADP ribosilado. La histona del
enlazador
Y las histonas centrales son ADP ribosiladas durante varias fases
Que incluyen poco despus de su sntesis en el citoplasma o durante
Su transporte hacia el ncleo. Muchos informes sugieren que la alteracin
En la estructura de la cromatina se asocia con la ADP-ribosilacin de H1
Histonas Pruebas recientes tambin han identificado enzimas que
ADP-ribosylation que pertenece a dos clases diferentes que son ADPribosylhydrolases
(ARH) y PAR glucohidrolasas (PARGs). Tres
ARHs (ARH1-3) y una enzima PARG ha sido identificada en humanos.
Aunque est claro que las actividades de estas enzimas degradantes
Determinar el patrn de ADP-ribosa modificacin todava falta un detalle Comprensin
sobre el mecanismo de estas enzimas.

2.3. MicroRNAs (miRNAs)

Estudios recientes han identificado un actor clave en la regulacin epigentica
Y la expresin de genes con el descubrimiento de microRNAs. Estos son
Molculas endgenas consistentes en pequeos ARN no codificantes. MiARN
Son aproximadamente de 16 a 22 nucletidos de molcula de ARN largo que se
transcriben
Por la ARN polimerasa II que conduce a la formacin de
MiRNAs. Estos miRNAs primarios son entonces actuados por RNasa III
Drosha y DGCR8 (componentes del complejo del microprocesador) dentro
El ncleo para formar los miRNAs precursores. Los miRNAs precursores generados
En el ncleo son imperfectos en su estructura, por lo general tienen una
Horquilla como la organizacin, por lo que se exportan a cabo en el citoplasma
Formando un complejo con exportin-5 y RAN-GTP para su posterior procesamiento.
En el citoplasma, RNase III Dicer procesa el precursor
MiRNAs en un doble funcional miRNAs. Los miRNAs maduros
Modular la expresin gnica mediante la incorporacin de un complejo llamado
RNAinduced
Silenciador (RISC), mientras que la otra es probable que
Degradarse. En la mayora de los casos, el miRNA maduro interacta con el 3'-
UTR de los mRNAs objetivo que conduce a su degradacin e inhibicin
De traduccin (Fig. 3) (Garzn, Fabbri, Cimmino, Calin, & Croce, 2006).
La expresin de miARN es bastante anloga a la de la codificacin de protenas
Genes, ya que estn regulados por mecanismos genticos y epigenticos.
Investigaciones recientes han mapeado la presencia de genes miARN en el comn
Regiones de breakpoint de oncogenes y genes supresores de tumores
Y regiones frgiles del genoma que son sitio preferente para la delecin,
Translocacin o amplificacin que sugieren su participacin en
Conduciendo el comportamiento del crecimiento del tumor. Adems, los estudios han
encontrado
Un vnculo entre la epigentica y miARN, por ejemplo diversos miRNAs
Son capaces de modular la actividad de las enzimas modificadoras epigenticas
asociadas
Con carcinognesis (Guil & Esteller, 2009). MiARN sirve como un
Parte de la red reguladora que participa en el silenciamiento de la expresin gnica
Por metilacin y modificacin de la estructura de la cromatina. A pesar de que
Un nmero de miARN se ha identificado hasta la fecha, mir-127 fue
El primer microARN epigenticamente regulado asociado con cncer
(Saito et al., 2006).

De hecho, con el progreso en el campo del micro ARN, fue posible

Para encontrar numerosos microRNAs que estn regulados por la epigentica
Maquinaria, a saber. Metilacin del ADN y modificacin de las histonas. Uno
De las alteraciones epigenticas ms comunes incluye la metilacin del ADN
Y se ha observado que numerosos microRNA genes son
Hipermethylated resultando en miARN silenciamiento. Entre ellos miR-9,
Mir-148, miR-124, miR-137, miR-34, miR-127, miR-512 son frecuentemente
Inform que se silenci en varios tipos de cncer. Aparte de la metilacin,
Las modificaciones histonas tambin se han asociado con miARN
expresin. Los estudios han identificado un vnculo entre las modificaciones histonas
(Especialmente H3K27 y H3K9) y el gen miR-212 que contribuye
Hacia el desarrollo de cncer de pulmn (Incoronato et al., 2011).
Por otro lado, se ha observado una perspectiva diferente de miARN
Establecido en el control de la metilacin del ADN y la modificacin de las histonas
Es decir, son capaces de dirigir genes que regulan la va epigentica
Creando una va de retroalimentacin altamente organizada (Denis, Ndlovu, &
Fuks, 2011). Una expresin anormal de estos microRNAs, llamados epimiRNAs
Se ha asociado con diversas enfermedades. Los estudios han
Numerosos miARN que controlan la estructura de la cromatina al alterar la histona
Desacetilasa y los genes relacionados con el grupo de polycomb (Sato,
Tsuchiya, Meltzer y Shimizu, 2011). Por ejemplo, miR-1 y miR-140
Estn implicados en la orientacin de la isoenzima HDAC4 mientras que el miR-449a se
une
Al HDAC1 y regula su patrn de expresin (Chen et al.,
2006; Noonan et al., 2009). Tambin se observa el hecho de que la expresin
De EZH2 una subunidad cataltica del complejo represivo de polycomb 2
(PRC2) se altera por el epi-miARN miR-101 (Varambally et al., 2008).
Por otra parte, una familia de miRNAs (miR-29) regula la expresin de
Mantenimiento DNA metiltransferases DNMT3a y DNMT3b. Estudios Han establecido
que al reprimir las actividades de ADN metiltransferasas,
MiR-29 suprime tumorigenesis alterando el ADN existente
Metilacin patrn en una clula (Morita et al., 2013). En conjunto, el
Papel de epi-miRNA en el control epigentico de la expresin gnica es enorme
Y queda mucho por descubrir.

3. Alteraciones epigenticas en el cncer

3.1. Metilacin aberrante del ADN en el cncer
La alteracin en el patrn de metilacin del ADN est muy estrechamente asociada
Con el inicio y la progresin del cncer y fue tambin el primer epigentico
Alteraciones a identificar. Dos patrones aparentemente opuestos de
La metilacin del ADN se observa en las clulas cancerosas que incluye
Metilacin de las islas CpG y una disminucin general en la metilacin del ADN global
(Feinberg y Vogelstein, 1983). Aunque la
Mecanismos que conducen a estas alteraciones son ampliamente investigados,
Bastante claro que los cambios minuciosos ocurren temprano en la arquitectura del
ADN
Lo que conduce a la iniciacin del cncer (Feinberg, Ohlsson, & Henikoff, 2006). por
Por ejemplo, un estudio reciente investig la prevalencia de metilacin temprana del
ADN
Cambios asociados con el desarrollo de cncer de mama,
Donde confirmaron cambios frecuentes en la metilacin del ADN en los promotores,
Regiones de aguas remotas, intrones, repeticiones de ADN de LINE-1 y satlite 2
(Rauscher et al., 2015).
Numerosos informes han establecido el papel de los hipermetilados
Islas CpG en el desarrollo del cncer incluyendo la naturaleza de los genes (Esteller,
2002). Adems, datos recientes han contribuido a El hecho de que se observa una
metilacin incrementada en el promotor CpG
Islas de genes normalmente no metilados, especialmente el supresor de tumores
Genes en clulas cancerosas (Smiraglia et al., 2001). En este sentido, el gen
CDKN2A, que est involucrado en cyclinD-Rb va para mantener el retinoblastoma
Protena en su estado activo es digno de mencin. Este gen
Codifica un inhibidor de cinasa dependiente de ciclina p16INK4A que es crtico
En la progresin del ciclo celular. Promotor hipermetilacin de p16INK4A conduce
A una progresin descontrolada del ciclo celular que se observa comnmente en
Casi todos los tumores (Herman et al., 1995). Adems, la hipermetilacin
Del gen p16INK4A en pacientes que sufren de cncer de pulmn de clulas no
pequeas
(NSCLC) y el cncer colorrectal (CRC) tienen una mala supervivencia global
(Xing et al., 2013). No slo el gen supresor tumoral, el promotor
Hipermetilacin tambin est conectada con otros genes que estn fuertemente
Involucrados en la tumorignesis. El gen p73, que est estrechamente relacionado
Con p53 se encuentra hipermetilado en varios casos de linfomas
(Pei et al., 2011). De forma similar, p15INK4A, un gen relacionado con p16INK4A es
Hipermethylated en numerosas neoplasias malignas hematolgicas (QuintsCardama
Et al., 2012). Adems, el silenciamiento del inhibidor tisular de la metaloproteinasa-3
(TIMP-3), un regulador negativo de la angiognesis
Conduce al crecimiento maligno. Un estudio reciente de Guan y sus colegas
(Guan, Zhang, Song, & Dai, 2013) sugirieron que la hipermetilacin de
Promotor regin de TIMP3 gen se asoci con el desarrollo
De cncer gstrico y tambin ha sido demostrado por Lin H y su colega
(Lin et al., 2012) que los niveles de TIMP-3 fueron significativamente disminuidos
En el tejido colorrectal del cncer. Aunque la hipermetilacin del ADN Puede inducir
directamente el silenciamiento de genes, hay ciertas maneras indirectas de
Cuya hipermetilacin puede silenciar genes que conducen a la tumorignesis.
Estos incluyen el silenciamiento de los genes de reparacin del ADN y varios
transcripcin
Factores. La alteracin en los genes de reparacin del ADN conduce a la acumulacin
de
Dao del ADN eventualmente promover el desarrollo del cncer (Lahtz &
Pfeifer, 2011). La hipermetilacin que ocurre en los genes de reparacin del ADN
BRCA1 (va de reparacin de recombinacin homloga), gen MGMT (Direct
Reparacin), el gen MLH1 y MSH2 (reparacin no coincidente), el gen ERCC1
(No-homloga de unin final) son algunos de los genes ampliamente estudiados
Asociado con el desarrollo del cncer. Un estudio reciente de Zhu y sus colegas
(Zhu et al., 2015) sugirieron que la hipermetilacin del promotor
Del gen BRCA1 disminuye la supervivencia global de los pacientes y puede ser
Utilizado como biomarcador para el cncer de mama triple negativo. Adems,
aberrante
Hipermetilacin del promotor MLH1 es muy comn en endometrial
Carcinoma que se asocia con la inestabilidad de los microsatlites (Esteller,
Levine, Baylin, Ellenson, & Herman, 1998). Para ms detalles, los lectores
Se sugiere para pasar con la revisin excelente por Esteller (2000). Eso
Tambin se ha observado que silenciar factores de transcripcin tales como
RUNX3, GATA-4, GATA-5 por hipermetilacin conduce a la inactivacin
De sus objetivos aguas abajo que estn implicados en diversos procesos celulares.
RUNX3 pertenece a la familia de factores de transcripcin que juega un papel
Papel vital en TGF- va de sealizacin. La evidencia sugiere que en el pulmn
Cncer de pulmn y el espcimen primario de cncer de pulmn, RUNX3 es
Inactivado por hipermetilacin de ADN aberrante (Li et al., 2004). similar
La familia GATA de los factores de transcripcin se asocian con gastrointestinal
Desarrollo, y se ha observado que en el cncer colorrectal
Promotor que conduce al silenciamiento transcripcional de
GATA-4 y GATA-5 son muy frecuentes (Akiyama et al., 2003).
La hipometilacin global del ADN juega un papel clave en los tumores
Y se encuentran en varias localizaciones genmicas incluyendo
Retrotransposones, promotores pobres de CpG, secuencia repetida y
Numerosos otros sitios (Rodriguez et al., 2006). El fenmeno ms comn
Asociada a hipometilacin es la sobreexpresin de
Proto-oncogenes y factores de crecimiento que son responsables de
Caractersticas del cncer (Szyf, Pakneshan, & Rabbani, 2004). Hipometilacin
De elementos retrotransponibles conduce a su activacin que
Conduce a la inestabilidad genmica. Adems, estudios han demostrado
Que en la insuficiencia genmica del cncer de pulmn no microctico debido a
Elemento retrotransponible hipometilacin est muy estrechamente relacionada
(Daskalos et al., 2009). De forma similar, la hipometilacin de la secuencia repetida
Est tambin asociado con la inestabilidad genmica y es muy prevalente entre
Varios tipos de cncer (Ross, Rand, & Molloy, 2010). El ms
Caracterizada de la inestabilidad genmica se demuestra en pacientes
Con inmunodeficiencia, inestabilidad de la regin centromrica y
Anomalas (ICF). Esta es una nica metilacin del ADN
De deficiencia con una mutacin de lnea germinal en la enzima DNMT3B
Conduciendo a anomalas cromosmicas y se observa en muchos cnceres
(Ehrlich, Jackson, & Weemaes, 2006). Adems, el cncer
Hipometilacin tambin afecta a las regiones gnicas que pueden expresar
Productos proteicos. Por ejemplo, el gen que codifica el plasmingeno tipo uroquinasa
Activador (PLAU / uPA) es hipometilado y conduce a un tumor
Progresin en cncer de mama y prstata (Ehrlich, 2009). La expresion
De uPA est fuertemente correlacionada con su estado hipometilado con
Estudios sobre la sobreexpresin de uPA y su receptor uPAR en
Tumor cerebral maligno (MacDonald, DeClerck, & Laug, 1998). Ellos
Juegan un papel importante en la migracin e invasin de gliomas. similar
Varios factores de crecimiento se ven afectados por la hipometilacin. Por ejemplo,
El factor de crecimiento similar a la insulina 2 (IGF-2) tiene un patrn de expresin
monoallico
En clulas no malignas, sin embargo, la prdida de impresin debido a la
hipometilacin
Se observa en el segundo alelo de las clulas malignas
Debido a que la expresin biallica del factor de crecimiento
Lugar que conduce a la proliferacin de clulas tumorales no controladas (Leick, Shoff,
Wang, Congress, & Gallicano, 2012). Hallazgos recientes implican que
En ciertos cnceres varios genes albergan hipometilacin de ADN en
Su cuerpo gentico. Por ejemplo, la repeticin Alu de TGFB2 que est presente
En la regin intrnica del gen es hipometilado en algn cncer nea celular. Se observa
otra hipometilacin en la regin que se superpone
Una isla CpG en el exn del gen PRDM16 en lneas celulares de cncer
(Ehrlich y Lacey, 2013). Aunque las razones exactas que unen la hipometilacin
Y el cncer todava no est claro, se prev que la deficiencia de
Numerosas enzimas podran desempear un papel. Tambin debe tenerse en cuenta
Que los genes especficos son hipometilados en el cncer y
An no estn claros, proporcionando reas inexploradas para el futuro
Investigacin en esta direccin.
3.2. Alteraciones de las protenas histonas en el cncer Los hallazgos extensos han
sugerido que la variacin en la organizacin De histonas PTMs est ampliamente
asociado con el cncer. Estas aberraciones agregan una Mayor nivel de complejidad en la
comprensin de la tumorignesis. Adelanto En la tecnologa de secuenciacin ha
facilitado la cartografa de la cromatina Cambios en el desarrollo del cncer. Adems,
tambin est claro que Alteraciones en las protenas histonas se encuentran presentes a
nivel mundial a travs de El ADN genmico y tambin en un locus especfico de un gen
(Bannister & Kouzarides, 2011).

La incorporacin de grupo acetilo en un residuo de lisina de cola de histona Tiene el potencial de

alterar el estado de compactacin de la cromatina y puede Tambin regulan el pH intracelular.
Estudios recientes han identificado que Muchos tumores tienen un pH intracelular bajo junto con
una reduccin en el Nivel de acetilacin de histonas (McBrian et al., 2013). Adems, la alteracin
En el nivel global de la acetilacin de las histonas, especialmente la prdida de acetilacin de la
lisina 16 En la histona H4 (H4K16ac) y la trimetilacin de la lisina 20 en H4 Histona (H4K20me3) se
ha relacionado con una variedad de cncer (Fraga et al., 2005). Los grupos acetilo se incorporan
en la cola de lisina de las protenas histonas Por histona acetiltransferasas. Con la sobreactividad
de estas enzimas Hiperacetylation que conducen a la activacin de protooncogenes Mientras que
los genes supresores de tumores se silencian debido a Hipoacetilacin. Existe un equilibrio entre la
acetilacin de las histonas Y desacetilacin de histonas que se altera muy a menudo en clulas
cancerosas. El HAT Gcn5 desempea un papel fundamental en la regulacin del ciclo celular,
daos en el ADN, Proliferacin celular y la regulacin de la transcripcin sugiere que un anmalo
Actividad en esta enzima puede conducir a un mal funcionamiento celular que Crecimiento
maligno. Se observ que Gcn5 junto con un transcripcional Adaptador de protena Ada3
desempea un papel clave en la proliferacin de clulas de cncer de mama (Germaniuk-
Kurowska et al., 2007). Adems, un estudio reciente
Demostr el papel de Gcn5 en el cncer de pulmn donde Chen y sus colegas
Observ que Gcn5 potencia el cncer de pulmn de clulas no pequeas
El crecimiento con la participacin de E2F1 y diversos reguladores del ciclo celular
Protenas (Chen et al., 2013). Una gran parte de la literatura sugiere la participacin
De Tip60, MOZ, MORF en el desarrollo del cncer. Estas enzimas
Facilitar la activacin de diversas protenas que a su vez los novillos
La clula hacia el crecimiento maligno. Human Tip60 se asocia con
Complejo NuA4 y establece conexin con otra subunidad del
Complejo que parece jugar un papel en la oncognesis (Judes et al.,
2015). La protena de dedo de cinc de leucemia monoctica (MOZ) se encuentra
Se fusionan con otros factores de transcripcin que son crticos hacia la
leucemognesis
(Timmermann, Lehrmann, Polesskaya y Harel-Bellan,
2001). Especialmente la fusin de MOZ-TIF2 se asocia con la ganancia de
Funcin de MOZ conduce a AML en la mdula sea murina (Deguchi et
Al., 2003). Se observ una mutacin puntual errnea en el gen p300 en
Colon y adenocarcinoma gstrico y se asoci con la prdida de
El alelo de tipo salvaje (Iyer, zdag, & Caldas, 2004). Adems, en
Linfoma de clulas B grandes, la actividad HAT de p300 / CBP se
Mutacin puntual y mutacin sin sentido (Haery, Lugo-Pic, Henry,
Andrews, y Gilmore, 2014). Metilacin del residuo de lisina en la histona
Ha sido ampliamente estudiado para la formacin de cncer. La lisina metiltransferasa
SUV39H1 funcin para mantener la estabilidad del genoma y aparece
Para desempear un papel supresor de tumores. Sin embargo, en pacientes mieloides
agudos
Leucemia, los genes supresores de tumores tales como p15INK4B se silencian porque
De H3K9me mediada por SUV39H1 (Lakshmikuttyamma, Scott, DeCoteau,
& Geyer, 2010). EZH2, la subunidad enzimtica de PRC2 es ampliamente
Relacionados con la metstasis de diversos cnceres. Lisina 27 en la histona H3
Es metilado por EZH2, sin embargo no est claro si la metilacin de
H3K27 impulsa la accin tumorignica de EZH2 (Kim & Roberts, 2016).
La metilacin de H3K79 se cataliza por DOT1L que causa la transcripcin
Elongacin y se asocia con leucemia mixta de linaje (MLL).
McLean y sus colegas sugirieron que las protenas de fusin MLL como AF9,
AF10 reclutar DOT1L para aumentar H3K79 metilacin que conduce a la irregular
Expresin de genes que contribuyen a la leucemia (McLean et al., 2014).
La metilacin de H3K36 es catalizada por SMYD2 y sus niveles son elevados en
Varios tipos de cncer incluyendo carcinoma de clulas escamosas esofgico. En
adicin,
Un estudio reciente identific el papel promotor del crecimiento de SMYD2 en
Cncer de pncreas (Reynoird et al., 2016).
La activacin de genes como c-fos y c-jun se ha relacionado con
La fosforilacin de H3S10 (Nowak y Corces, 2004). Es de destacar
Que estos son proto-oncogenes y estn involucrados en la progresin del ciclo celular,
Apoptosis y proliferacin celular que unen fosforilacin de histonas
Con transformacin maligna. La fosforilacin del H3S10 es
Principalmente realizada por Aurora B quinasa y se ha observado que en
Varios cnceres como glioblastoma, cncer hepatocelular y colorrectal
Los niveles de Aurora B se incrementan (Ota et al., 2002, Tanaka et al., 2008).
El deterioro de la maquinaria de reparacin del dao del ADN conduce a un mayor
riesgo
Del desarrollo del cncer. La poliubiquitina unida a K63 sobre H2A y
H2AX es catalizado por el regulador de respuesta de daos al ADN RNF8 y
RNF168 (Huen et al., 2007). Los estudios han sugerido que la prdida de la funcin
De la enzima de ubiquitinacin de histonas debilita la asociacin DSB
La polyubiquitination de H2A y H2AX y aumenta la radiacin ionizante
Dao celular asociado (Pandita et al., 2013). Monoubiquitinaiton de
H2B en la lisina 120 juega un papel crucial en la transcripcin, la respuesta de dao del
ADN
Y se ha observado que en muchos cnceres como pulmn, colorrectal
Y los niveles de H2Bub1 en el pecho son muy bajos o estn ausentes (Cole et al.,
2015).
Por otra parte, USP22 una ubiquitina hidrolasa se expresa altamente en malignos
Cncer y cataliza la eliminacin de la ubiquitina de
Monoubiquitinated histonas H2A y H2B. La participacin del OSD en la
La inestabilidad genmica y el desarrollo del cncer est muy bien
Y estudios han sugerido que una deficiencia en la biotinilacin
De K12H4 es el episodio de sealizacin inicial en respuesta a DSB.

.3. MiARN y cncer

Una creciente cantidad de literatura ha sugerido que los miRNAs son
Regulado epigenticamente y la desregulacin de miRNAs en cncer
Ha sido ampliamente estudiado. La mayora de los miRNAs estn involucrados en la
regulacin
La progresin del ciclo celular, la apoptosis, la diferenciacin y otros procesos cruciales
En la clula y alteraciones en ellos a travs de vas epigenticas
Estn implicados en numerosos tipos de cncer (Kunej et al., 2011). Investigacin
reciente
Ha documentado claramente el papel de los miRNAs en todas las caractersticas de
cncer. Por ejemplo miR-15 y miR-16 se identific en el cromosoma
13q14.3, que se elimina frecuentemente en pacientes con linfocitos crnicos
Leucemia que conduce a una expresin aberrante de anticuerpos anti-apoptticos
Genes (Calin et al., 2002). Aunque los estudios han identificado la sobreexpresin
De miR-9 en el cerebro (Nass et al., 2009), hipermetilacin de
MiR-9 loci es evidente en numerosos tejidos incluyendo colon, cuello y
El cncer de pulmn (Bandres et al., 2009, Kang et al., 2013, Liu, Chen, Yu,
Xia y Zhou, 2009). Adems, el locus de miR-9-1 est fuertemente metilado
Tanto en el carcinoma ductal invasivo como en el componente intra-ductal de
Carcinoma ductal invasivo de mama (Lehmann et al., 2008). En adicin,
Un estudio reciente ha indicado que la metilacin de la isla CpG del gen miR-9
Fue considerablemente mayor en el tejido de cncer gstrico (Li et al., 2014). Adems,
Papel de miR-9 en la metstasis del carcinoma epidermoide de esfago
Se ha establecido mediante la represin de la E-cadherina (Song et al., 2014).
Miembros de la familia miR-148/152 que consta de miR-148a, miR-148b
Y miR-152 juegan un papel importante en el desarrollo del cncer. Creciente
Evidencia ha identificado a los miembros de miR-148/152 como potenciales
Oncogenes y genes supresores de tumor. Los estudios han informado sobre la
regulacin positiva
De miR-148a en el plasma de pacientes con mieloma mltiple
Conduciendo a la mala supervivencia (Huang, Yu, Li, Liu, & Zhong, 2012). Adems
Up-regulacin de miR-148b tambin se observ en hepatocelular arcinoma (Yuan et al.,
2012). Por otra parte, los estudios han indicado
El efecto antitumoral de miR-148a especialmente en el cncer de mama donde
Fue capaz de detener la proliferacin y migracin de las clulas del cncer de mama
Dirigindose a MMP-13 (Xue, Chen, Gu, Zhang, & Zhang, 2016). La expresion
De miR-148/152 miembros de la familia se reduce debido a la metilacin
Que ocurren en las islas CpG de genes de miembros de la familia miR-148/152.
Literatura
Sugiere que en el cncer gstrico sobreexpresin de DNMT1 causado
Hipermetilacin del gen miR-148a que conduce a su inactivacin (Xia,
Guo, Yan y Deng, 2014). Adems, la va de sealizacin del TGF
Papel en la carcinognesis y es un objetivo de miR-148 miembros de la familia.
Inactivacin epigentica de la familia miR-148 por derivaciones de metilacin del ADN
A la sealizacin mejorada de TGF que conduce al crecimiento tumoral y metstasis
(Neuzillet et al., 2015).
MiR-34a controla la produccin de varias protenas diana asociadas Con progresin del ciclo
celular y apoptosis. MiR-34a es inactivado por Metilacin del ADN que ocurre en la isla CpG junto a
su transcripcin Que es una observacin frecuente en diversos tumores malignos (Lodygin et al.,
2008). Adems, Kwon y sus colegas demostraron Que la expresin de miR-34a es silenciada
epigenticamente en el colangiocarcinoma humano Clulas que sugieren su funcin supresora de
tumores (Kwon et al., 2016). Tambin en sarcomas de tejidos blandos (STS), hipermetilacin de
miR- 34b / c se observa muy frecuentemente en sus etapas clnicas tardas (Xie et al., 2015). La
regulacin negativa de miR-137 por metilacin de la isla CpG se ha observado En varios cnceres
(Balaguer et al., 2010, Deng et al., 2011, Zhao Et al., 2012). La acumulacin de pruebas ha
establecido que la expresin ectpica De miR-137 redujo significativamente los niveles de Cdc42 y
Cdk6 A la detencin del ciclo celular en la fase G1 en clulas de cncer de pulmn (Zhu et al.,
2013). MiR-124 es el miARN ms frecuente en el cerebro y un aberrante Expresin conduce a
malignidades relacionadas con el sistema nervioso central. Diversos modos de expresin de miR-
124 se han observado en numerosos Incluyendo glioblastomas (Karsy, Arslan, & Moy, 2012).
Reciente Sugiere que miR-124 acta como un supresor de tumores y podra ser til en el
tratamiento del glioblastoma humano dirigindose a STAT3 (Li et al., 2016). Adems, los estudios
han identificado que la induccin de DNMT1 por Hepatitis C (VHC) condujo a la supresin de miR-
124 en el VHC relacionado Colangiocarcinoma intraheptico (Zeng et al., 2012). Una mayor
frecuencia En la hipermetilacin del gen miR-124-1 se observ en no Hodgkin Linfoma (Wong et
al., 2011). El miR-200 es reconocido como un supresor autnomo de clulas de clulas
epiteliales
A transicin mesenquimal (EMT) y metstasis. Los informes sugieren
Que Zinc dedo E-box vinculante homeobox factor de transcripcin 1 (ZEB1)
Est involucrado en EMT y se ha identificado una sobreexpresin de ZEB1
En numerosos cnceres (Liu, El-Naggar, Darling, Higashi, y Dean, 2008).
Los estudios han identificado que la sobreexpresin de miR-200 inhibe ZEB1
Mediada por metstasis en clulas de cncer colorrectal (Sun, Ding, Zhi, & Chen,
2015). De hecho, se ha demostrado que el silenciamiento miR-200
La hipermetilacin de la isla CpG causa la transicin entre EMT y
Viceversa que conduce a la tumorignesis (Davalos et al., 2012).

4. Medicamentos epigenticos para el cncer

4.1. Medicamentos que alteran la metilacin del ADN:
Un nivel amplificado de metilacin del ADN debido a la sobreactividad de
DNMTs, que se producen en la isla CpG de genes supresores de tumores conduce
Al silenciamiento de la expresin gnica. Debido a la reversibilidad de este tipo
De modificacin, la inhibicin de los DNMTs se considera una interesante terapia
Como puede conducir a la restauracin de un supresor de tumores
Gen. El avance en el campo de la investigacin epigentica ha
Al desarrollo de numerosos inhibidores de la DNMT bien categorizados
Y probado en ensayos clnicos. Los inhibidores de DNMT se dividen en
Dos clases amplias: anlogos nuclesidos y no nuclesidos. El nuclesido
Los anlogos fueron inicialmente diseados como antimetabolitos pero slo
Despus de 1977 sus propiedades hypomethylating vinieron a la superficie
(Constantinides et al., 1977). Azacytidine (5-azacytidine) y La decitabina (5-aza-2'-
desoxicitidina) son los dos anlogos nuclesidos ms antiguos
Que se intercala con el ADN durante la fase S del ciclo celular
Donde son reconocidos por los DNMTs. Estos anlogos actan entonces como
Un inhibidor suicida que forma un complejo covalente irreversible con la enzima,
Conduciendo finalmente a su degradacin proteasomal. Los txicos pro-
Archivo de los anlogos nuclesidos ms antiguos ha sido abordado
Desarrollo de Zebularine y 5-fluoro-2'-dexoycytidine que son
Inhibidores nuclesidos ms efectivos de DNMT. Aunque Zebularine es
Se utiliza a una dosis mucho ms alta en comparacin con los anlogos de suicidio
para alcanzar
Los mismos niveles de desmetilacin en la clula se asocia con menos
Citotoxicidad a esa concentracin. Los datos prometedores de numerosos
Han conducido a la aprobacin de anlogos de nuclesidos Azacitidina y
Decitabina por la FDA para el manejo del sndrome mielodisplsico
(MDS) y la leucemia mieloide aguda (AML) (Derissen et al., 2013). A pesar de que
Se encontr que Zebularine tiene un mejor perfil anticancergeno
A la Decitabina ya la Azacitidina, su limitada biodisponibilidad oral y
El metabolismo incompetente ha obstaculizado su uso clnico (Holleran et al.,
2005; Yang, Lay, Han y Jones, 2010). Los estudios en curso han llevado a
Desarrollo de varios nuevos inhibidores nuclesidos. NPEOC-DAC a 5
Se ha desarrollado un derivado de azacitidina que se convierte en
Decitabina por carboxilesterasa 1 (Fahy, Jeltsch, & Arimondo, 2012). A pesar de que
No se ha reportado su uso como candidato a frmaco. RX -
3117 es otro anlogo de nuclesidos con una capacidad para inhibir DNMT1
(Choi et al., 2012). Los estudios tambin han identificado su efecto contra el cncer en
Vivo (Yang et al., 2014). Un anlogo de nuclesido que se ha sometido actualmente
El ensayo clnico de fase I para el tratamiento de MDS y AML es SGI-110
(Issa et al., 2015). Es un nuevo agente hipometilante que se deriva de
Decitabina y es un candidato prometedor para MDS y AML. La investigacin
El frmaco CP-4200, un ster de cido eladico de azacitidina funciona
Pro-frmaco y ha demostrado un mejor perfil teraputico que
Azacitidina (Brueckner et al., 2010). Un equipo de investigacin de la Southern
Research
El Instituto ha investigado el potencial de los anlogos de tiocitidina
Como inhibidores de DNMT. Han identificado dos anlogos 4'-tio-2'-
Desoxicitidina y 5-aza-4'-tio-2'-desoxicitidina que pueden inhibir
DNMT1 en ambas lneas celulares de cncer y modelos animales de cncer Debido a la
propiedad citotxica de los anlogos de nuclesidos varios
Los inhibidores no nuclesidos de los DNMT se estn desarrollando con la
Idea de que estos compuestos pueden unirse en el sitio cataltico de las enzimas
Sin incorporar directamente en el ADN (Song, Han, & Bang, 2011).
Los estudios realizados en 2009 informaron un derivado de quinolina SGI-1027
Con una capacidad para inhibir la ADN metiltransferasa (Datta et al., 2009). Eso
Es un derivado de quinolina lipoflico que puede inhibir DNMT1, 3A y 3B
Y debido a su propiedad bsica se une dbilmente con la regin rica AT
De ADN. Estudios recientes han indicado que son ms selectivos
DNMT3A humano en comparacin con DNMT1 humano (Rilova et al., 2014). A pesar de
que
Prometedores, se dispone de muy pocos informes que lo establezcan como
Candidato a frmaco. Un quinona antibitico nanaomicina A que fue
Aislado de una cepa de Streptomyces demostr inicialmente ser un
Inhibidor de DNMT1 de la exploracin virtual (Kuck, Singh, Lyko, &
Medina-Franco, 2010; Umezawa et al., 1975). Sin embargo, los bioqumicos
Anlisis realizado utilizando la nanaomicina A sugiri su selectividad hacia
DNMT3B enzima y fue capaz de reactivar silencioso tumor supresor
Genes en clulas cancerosas humanas (Kuck, Caulfield, Lyko, & MedinaFranco,
2010). Otros estudios son vitales para determinar su potencial en
Ensayos Se desarroll un derivado de ftalimido-L-triptfano RG108
Como un inhibidor de DNMT a travs de diseo de frmaco in silico. Un estudio reciente
demostr
Que RG108 indujo la expresin de E-cadherina en
Clulas de leucemia promieloctica administradas solas o en combinacin con
Los inhibidores de HDAC (Savickiene, Treigyte, Jazdauskaite, Borutinskaite,
Navakauskiene, 2012). Adems, estudios han indicado
RG108 fue capaz de proteger las clulas epiteliales de pigmento retiniano de oxidativo
El estrs por la regulacin de los genes metilados silenciados implicados en la
produccin
Enzimas antioxidantes (Tokarz, Kaarniranta, & Blasiak, 2016).
Los compuestos naturales, especialmente los polifenoles, han sido
Ampliamente estudiado para su actividad inhibidora de DNMT (Busch et al., 2015). El
flavan-3-ol Epigalocatequina-3-galato que es profuso en verde
T inhibe directamente la enzima DNMT1 (Yiannakopoulou, 2015). Estudios
Han demostrado que los flavonoides como Quercetin, Myricetin y Fisetin
Inhibieron la enzima DNMT1 de una manera dependiente de la dosis
(Subramaniam, Thombre, Dhar, & Anant, 2014). Adems flavones
Y las flavanonas como la apigenina y la hespertina tambin han demostrado inhibir
DNMT en las lneas celulares de cncer humano (Fang, Chen y Yang,
2007). Hydralazine que est indicado para el manejo de la hipertensin
Ha sido estudiado por su potencial como inhibidor de la DNMT. Graca y
Colegas demostraron que en las clulas de cncer de prstata hidralazina tratamiento
Disminuy la produccin de DNMT1, DNMT3a y DNMT3b mRNA
Sugiriendo su potencial en la reduccin del crecimiento maligno a travs de la
epigentica
Alteraciones (Graa et al., 2014). La evidencia tambin sugiere que combinar
Hidrazona con el inhibidor HDAC cido valproico sera una
Opcin de tratamiento ms eficaz en la terapia epigentica del cncer
(Dueas-Gonzalez et al., 2014). La droga antiarrtmica procainamida
Ha sido estudiado por su capacidad para alterar la maquinaria epigentrica de un
celda. El trabajo llevado a cabo por Lee y colegas sugiri que la procainamida
Fue capaz de obstaculizar la actividad hemimethylase de DNMT1 sin
Mucha alteracin en la actividad de DNMT3a y DNMT3b (Lee,
Yegnasubramanian, Lin, & Nelson, 2005). Los estudios han
La expresin de genes supresores de tumor como p16INK4a, RAR-, GSTP1
Se restaur mediante tratamiento con procainamida (Ren et al., 2011). El ster
Anlogo de procainamida, es decir, procana tambin tiene la capacidad de dificultar
Los niveles de metilacin del ADN en una clula. Estudios han sugerido que
Tiene una mayor afinidad hacia los sitios ricos en CpG y acta parcialmente hacia
DNMT enzimas (Amatori, Bagaloni, Donati, & Fanelli, 2010). Tratamiento
Con procana provoc una reduccin en el contenido de 5-metilcitosina en la mama
Cncer de lnea celular que lo sugiere como un prometedor ADN desmetilante agente
(Villar-Garea, Fraga, Espada, & Esteller, 2003). Un oligonucletido antisentido
Diseado para unirse con la regin 3 'no traducida del ARNm de DNMT1
Y dificultando con su transcripcin es MG98. Es una segunda generacin
Inhibidor de DNMT inhibiendo especficamente DNMT1 sin alterar
DNMT3 expresin (Amato, 2007). Se ha realizado un estudio clnico
Con MG98 en combinacin con Interfern para el tratamiento de metstasis
Carcinoma de clulas renales y se demostr que era seguro en una dosis particular
(Amato et al., 2012). Sin embargo, es necesario llevar a cabo
Para comercializarlo como un candidato a frmaco. La Tabla 1 destaca las
Inhibidores de DNMT utilizados en la configuracin preclnica y clnica.

4.2. Medicamentos que alteran la modificacin de las histonas

Varias modificaciones postraduccionales de la protena histona se llevan a cabo
Utilizando numerosas enzimas que participan en la adicin o
Delecin de varios enlaces covalentes en residuos de histona especficos. Modificacin
O la desregulacin en las funciones de estas enzimas est implicada
Con crecimiento maligno. As, el desarrollo de nuevas terapias dirigidas
Estas enzimas puede ser beneficioso para el tratamiento de
cncer. Actualmente, el inhibidor de la histona deacetilasa es el nico epigentico
aprobado
Terapia en clnicas que alteran las protenas histonas. Sin embargo,
Se estn realizando esfuerzos para el desarrollo de inhibidores especficos
Para dirigirse a otras diversas enzimas implicadas en la alteracin de la histona
Protenas. Higo. 4 resume las diversas dianas epigenticas de frmacos.

4.2.1. Inhibidor de histona metiltransferasa

Las histone metiltransferasas (HMT) estn relacionadas con
Complejo y afectan el patrn de expresin gnica. Histona lisina metiltransferasa
Modificar los residuos de lisina generando diversos
Metilacin. La sobreexpresin de estas enzimas se observa en numerosos
Tipos de cncer que sugieren que son un potencial teraputico
Objetivo (Wagner & Jung, 2012). La lisina metiltransferasa DOT1L es
Un HMT distintivo que no contiene el dominio SET y metilatos
H3K79 en el dominio globular. DOT1L tiene una S-adenosil metionina
(AdoMet) y basado en este EPZ004777 se desarroll
Por un equipo de investigadores (Daigle et al., 2011). La selectividad in vitro de
Se observ EPZ004777 frente a la enzima DOT1L en clulas MLL y Disminucin de
metilacin H3K79. Adems, un nuevo inhibidor de DOT1L EPZ-
5676 se encontr que inhibe la metilacin de H3K79 conduciendo a la reduccin
En la expresin de genes de fusin MLL. Adems, estudios in vivo en xenoinjertos
Modelo de leucemia MLL-translocada EPZ-5676 demostr ser eficaz
En la reduccin del crecimiento tumoral sin ninguna toxicidad significativa (Daigle et al.
Al., 2013). Un estudio realizado por Klaus y sus colegas demostr
Que la EPZ-5676 mostr efecto antiproliferativo sinrgico en combinacin
Con citarabina o daunorrubicina en clulas de leucemia reordenadas MLL
(Klaus et al., 2014). El componente bsico de PRC2 incluye EZH2 y es
Asociado con la metilacin de H3K27 que conduce a la represin del gen
expresin. La sobreexpresin de esta enzima se encuentra en numerosos cnceres
Incluyendo linfoma de clulas B, cncer de prstata y de mama (Volkel,
Dupret, Le Bourhis, & Angrand, 2015; Zhou et al., 2015). Orientacin de la
Degradacin de EZH2 utilizando inhibidor de S-adenosil-L-homocistena hidrolasa
DZNep ha sido eficaz en la induccin de la apoptosis y la inhibicin
Metstasis en clulas de condrosarcoma (Girard et al., 2014). Inhibidor directo.
De EZH2, EPZ005687 ha sido desarrollado por un equipo de investigadores en
Epizyme, Inc., con la capacidad de reducir la metilacin de H3K27 en el linfoma
(Knutson et al., 2012). Otro inhibidor selectivo de EZH2,
EPZ-6438 fue desarrollado por Knutson y colegas que fue encontrado
Para ser superior a la molcula anterior. Este compuesto fue eficaz
En la reduccin del crecimiento tumoral en EZH2 xenoinjerto de linfoma no Hodgkin
mutante
Modelo de cncer de ratones que llevan a estudios adicionales en pacientes
(Knutson et al., 2014). La lisina metiltransferasa, SMYD2
Metilatos lisina residuos en Histona H2B, H3 y H4 aparte de
No histona objetivos. Se desarroll un inhibidor selectivo de SMYD2, AZ505
Por un equipo de qumica estructural en Astra Zeneca y
Cristal de SMYD2 donde AZ505 se uni en el pptido
Sitio de unin de SMYD2 (Ferguson et al., 2011). Sin embargo, pocos informes
Estn disponibles representando estudios adicionales. Otro inhibidor selectivo de
SMYD2 es LLY-507 que se informa para inhibir la proliferacin de varios
Lneas celulares de cncer incluyendo lneas celulares de cncer de hgado y de mama
(Nguyen et al., 2015). Estos datos justifican nuevos estudios in vivo para evaluar
Potencial en los estudios preclnicos. Un estudio reciente fue realizado por
Sweis et al. Donde analizaron los sitios de unin crticos de AZ505
(Sweis et al., 2015). Al modificar la estructura se les ocurri A-
893, un compuesto con mayor potencia para SMYD2. Ellos predijeron
Su mayor actividad debido a la presencia de grupos hidroxilo capaces de
Formando enlace de hidrgeno con el bolsillo de lisina. Datos preliminares in vitro
Con el compuesto es alentador al retratar el desarrollo de
Nuevos inhibidores SMYD2. La metilacin de H3K9 se cataliza por la metiltransferasa
G9a. El G9a est regulado en numerosos casos de cncer y un
Inhibidor de G9a sera beneficioso. BIX-01294 se identific con el
Potencialmente para alterar selectivamente la actividad de G9a despus de
Otros compuestos. Los estudios in vitro demostraron que el compuesto
Fue capaz de reducir los niveles de metilacin de H3K9 en varias lneas celulares
(Kubicek et al., 2007). Otro inhibidor de G9a UNC0638 fue altamente efectivo
En la configuracin in vitro (Vedadi et al., 2011). Recientemente, un pptido
competitivo
Inhibidor de G9a, A-366 fue desarrollado que era eficaz contra
Leucmicas (Pappano et al., 2015). Set 7/9 metilates H3K4
Y se asocia tambin en la metilacin del receptor de estrgeno. Un rayo X
Se ha descrito la estructura cristalina de un inhibidor unido al dominio Set 7/9.
Recientemente la ciproheptadina fue identificada como un inhibidor de Set
7/9 en las clulas de cncer de mama que regulan la expresin gnica dependiente de
estrgenos
(Takemoto et al., 2016). La Tabla 2 muestra diversos inhibidores de HMT en diferentes
etapa de desarrollo.

4.2.2. Inhibidor de la histona desmetilasa

Dos clases de inhibidores de la histona desmetilasa (KDMs) han sido
Las aminas oxidasas como las histonas desmetilasas (especficas de lisina)
Desmetilasas LSD1 / 2) pertenecen a la subfamilia KDM1 y el hierro
Y el dominio jumonji C (JmjC) dependiente de -cetoglutarato que contiene
Desmetilasa pertenecientes a subfamilias KDM ms grandes (KDM2-8).
Phenelzine, Tranylcypromine y Pargyline fueron los compuestos iniciales
Inform que inhiben LSD1. Prusevich y sus colegas
Nuevo anlogo de fenelzina capaz de inhibir la enzima LSD1
A LSD2 in vitro. Adems, tambin observaron una reduccin en la multiplicacin
De clulas de carcinoma de prstata y pulmn (Prusevich et al.,
2014). Numerosos informes sugieren el papel de la tranilcipromina en
Inhibicin de LSD1 y las investigaciones estn modificando continuamente su
estructura
Para llegar a nuevos y mejores inhibidores de LSD1. De hecho, dos nuevos
Se han desarrollado inhibidores de LSD1 basados en la estructura de la tranilcipromina
Y estn actualmente en proceso de ensayos clnicos (Zheng et al., 2016).
Recientemente se ha demostrado que el inhibidor de LSD1 Pargyline inhibe
El proceso de transicin epitelial a mesenquimal en el cncer de prstata
Lneas celulares y retras la progresin del cncer de dependiente de andrgenos
A estado independiente (Wang et al., 2015). Derivados de poliamina
Tambin se inform que inhiben LSD1 funcin con estudios destacando
El papel de los anlogos de poliamina 2d o PG11144 en el tratamiento de
Cncer de mama Observaron un aumento en la metilacin de H3K4 en
MDA-MB-231 con una alteracin en el patrn de expresin de
Mltiples genes (Zhu et al., 2012). Adems, los derivados de
(Bis) guanidinas y (bis) biguanidas mostraron un aumento en las marcas H3K4
Mediante la inhibicin de LSD1 en lneas celulares de cncer de pulmn (Sharma et al.,
2010).
Namoline, un inhibidor reversible de LSD1, detiene su actividad desmetilasa
Llevando al silenciamiento de la expresin gnica y el deterioro de los andrgenos
dependientes
Proliferacin en cncer de prstata (Willmann et al., 2012). Un reciente
Estudio demostr que la inhibicin de LSD1 con HCI-2509 redujo la
Niveles de c-MYC en las lneas celulares de cncer de prstata y tiene un potencial en
docetaxel resistente
Cncer de prstata (Gupta et al., 2016). Sin embargo, todos los inhibidores
Descrito hasta ahora slo se ha evaluado en modelos preclnicos
Y hay pocos informes disponibles describiendo estudios clnicos con aquellos
compuestos. Con nuestra comprensin creciente sobre la estructura y la funcin
Del dominio JmjC ha sido posible disear y desarrollar nuevos inhibidores
Para esta clase de enzimas. N-oxalilglicina (NOG) que est estrechamente
Relacionado con -cetoglutarato se encontr inicialmente para inhibir prolil hidroxilasa
Es ahora conocido para inhibir JmjC KDMs (Hopkinson et al., 2013). A pesar de que
Prometedores muy pocos informes disponibles sobre su
Uso clnico. En la bsqueda de identificar nuevos anlogos dirigidos hacia
JmjC KDMs, el derivado de cido hidroxmico SAHA (vorinostat)
Demostr la inhibicin de KDM4E (Rose et al., 2008). Proyeccin de una serie
Del derivado de 8-hidroxiquinolina condujo a la identificacin de IOX1,
Que es un potente inhibidor de muchos subtipos de KDM (Hopkinson et al.,
2013). Del mismo modo, los informes sugieren que el cido piridina-2,4-dicarboxlico es
Un inhibidor de varios JmjC KDMs y son ms estables que NOG. Solamente
Los estudios celulares sobre esta molcula se han llevado a cabo hasta ahora usando
Como un profrmaco (Rose et al., 2008). Adems de todos los inhibidores descritos
Hasta ahora un nmero de flavonoides han demostrado inhibir muchos subtipos
De JMJC KDMs. Los estudios realizados sobre la miricetina, galato de epigalocatequina
Y el cido cafeico demostraron su capacidad de inhibir pocos subtipos de
KDMs en el anlisis basado en clulas. Para obtener informacin ms completa
Sobre los lectores de inhibidores de lisina desmetilasa de histona
Pasar por la excelente revisin de Thinnes (Thinnes et al., 2014), Hoffmann (Hoffmann
et al., 2012) y McAllister (McAllister y col.,
2016). La Tabla 3 destaca algunas de las histonas experimentales
Desmetilasa.
4.2.3. Inhibidores de histona acetiltransferasa
La participacin de las histonas acetiltransferasas en la regulacin transcripcional
Hacen de estos grupos de enzimas un objetivo importante. Numeroso
Se han descrito inhibidores de molculas pequeas dirigidos a una clase de
SOMBRERO. Entre ellas, las isotiazolonas que consisten en sustituyentes N-alquilo y N-
arilo
Fueron probados para inhibir PCAF y p300 HATs causando una reduccin
En la proliferacin de clulas de cncer de colon (Stimson et al., 2005). En
Silico para un panel de compuestos condujo a la identificacin de
C646, que es un inhibidor competitivo de p300. Un estudio reciente demostr
Que C646 fue capaz de detener el ciclo celular e inducir la apoptosis en
Las clulas de leucemia mieloide aguda positivas a AML1 - ETO (AML) (Gao et al.,
2013). Un compuesto qumico de origen natural, el cido anacrdico
Demostrado inhibir a un miembro de la familia MYST de HAT en estudios celulares
(Sun, Jiang, Chen y Price, 2006). Basado en esto, numerosas estructuras
Se estaban desarrollando anlogos del cido anrdico con estudios que
6-alquilsalicilatos como inhibidores selectivos de Tip60 (Ghizzoni et al., 2012).
Todos los compuestos experimentales descritos anteriormente han establecido
Su actividad inhibitoria HAT en estudios celulares y bioqumicos, sin embargo
Muy pocos informes estn disponibles con estudios in vivo. Recientemente Gajer y
Colegas revelaron dos derivados de piridoisotiazolona PU139 y
PU141 que fueron capaces de inhibir Gcn5, PCAF, CBP y p300 en clulas
Estudios con PU141 mostrando ms selectividad hacia CBP y p300.
La eficacia de estos compuestos tambin se estableci en xenoinjertos
Ratones en los que fueron capaces de reducir la acetilacin de lisina histona (Gajer
Et al., 2015). La Tabla 4 muestra algunos inhibidores preclnicos de HAT.

4.2.4. Inhibidor de la histona desacetilasa

El nivel de acetilacin de histonas en una clula se preserva por el equilibrio
De la actividad de HAT y HDAC. Es ampliamente aceptado que el genoma de ancho
Cambios en la acetilacin de las histonas se asocia con el desarrollo del cncer
Y la actividad aberrante de HDAC est ligada al evento oncognico. Hidroxmico
El Vorinostat fue el primer inhibidor HDAC aprobado por el
FDA. Est indicado para el tratamiento del linfoma cutneo de clulas T
(CTCL). Otros derivados del cido hidroxmico que estn en diversas fases
De desarrollo incluyen Abexinostat, Pracinostat, Resminostat,
Givinostat, Panobinostat. Abexinostat ha demostrado ser prometedor
Actividad anticancergena en el estudio preclnico. Recientemente se informa de una
fase 1
Ensayo clnico con Abexinostat sugiere que los pacientes con
Linfoma se beneficiaron con este frmaco (Morschhauser et al., 2015).
Adems, un ensayo de fase I / II con Abexinostat demostr que era
Bien tolerado y eficaz en el linfoma folicular (Evens et al.,
2016). El pracinostat es otro anlogo del cido hidroxmico con inhibidores HDAC
potencial. Un ensayo de fase II con prainostat en pacientes con
Mielofibrosis mostr su tolerabilidad con actividad clnica modesta
(Quints-Cardama y otros, 2012). Recientemente la FDA ha aprobado Pracinostat
Con una designacin de terapia innovadora en combinacin con
Azacitidina para el tratamiento de la LMA. El inhibidor de HDAC Resminostat
(Desarrollado por 4SC) se evalu en pacientes con cncer refractario o recada
Hodgkin y se encontr que posea un perfil de seguridad admirable
(Walewski et al., 2010). Adems, los resultados del estudio SHELTER
Mostraron que el resminostato en combinacin con sorafenib puede ser til
Para el carcinoma hepatocelular avanzado (Bitzer et al., 2016). Otro
El reciente inhibidor de HDAC 4SC-202 se evalu recientemente en un ensayo de fase I
En pacientes con neoplasias hematolgicas avanzadas
(NCT01344707). El givinostat es otro derivado del hidroxamato con
Actividad clnica comprobada en pacientes con linfoma de Hodgkin y
Mieloma Un estudio de fase II se llev a cabo con givinostat en combinacin
Con hidroxicarbamida (HC) para tratar la policitemia vera.
Los resultados del estudio demostraron que el uso combinado de Givinostat y HC
Fue clnicamente eficaz (Finazzi et al., 2013). El inhibidor HDAC
Panobinostat fue aprobado por la FDA para el tratamiento del mieloma mltiple.
Farydak (Panobinostat) se debe tomar en combinacin con
Bortezomib y dexametasona para mieloma mltiple. Una fase I
Estudio en pacientes con tumor slido avanzado se ha llevado a cabo
Un hidroxamato oral inhibidor de HDAC Quisinostat con el signo de la diana
Modulacin y actividad antitumoral (Venugopal et al., 2013). Recientemente un
Ensayo de fase II se llev a cabo con Quisinostat, donde se encontr que
Ser activo en el tratamiento de pacientes con CTCL recidivante o refractario
(Child et al., 2016). Ensayo clnico de un inhibidor selectivo de HDAC6
Rocilinostat desarrollado por Acetylon pharmaceuticals ha sugerido
Que el rocilinostat solo o en combinacin con bortezomib y dexametasona
Podra ser una opcin de tratamiento para la recada / refractario mltiple
Mieloma (Raje et al., 2012). Un inhibidor HDAC e PI3K de doble accin
CUDC-907 desarrollado por Curis Pharmaceuticals se encontr seguro
Como monoterapia en pacientes con linfoma recidivante o refractario
Y mieloma mltiple (Younes et al., 2016). Otra pequea molcula CUDC - 101 que es un
inhibidor multi - objetivo de HDAC, EGFR y HER2
Recientemente se evalu en un estudio de fase I en pacientes con
(Galloway et al., 2015). Un activo oral
Anti-angiognico Tasquinimod que es un modulador alostrico de
HDAC4 ha sido evaluado clnicamente para el tratamiento de la resistencia a la
castracin
Cncer de prstata (Sternberg et al., 2016). Otro inhibidor pan-HDAC
Desarrollado por Arno teraputica (AR-42) que fue evaluado
Clnicamente en neoplasias malignas hematolgicas se ha evaluado
Ensayo de fase I en pacientes con tumores slidos avanzados (NCT01129193).
Los derivados de benzamida son otra clase de inhibidores de HDAC entre
Que el mocetinostat, el entinostat y el CI-994 (tacedinalina) ha sido
Evaluados clnicamente. Mocetinostat fue encontrado seguro en pacientes
Con sndromes mielodisplsicos y mostraron actividad antileucmica.
Adems, un ensayo de fase II realizado en pacientes con linfocitos crnicos
La leucemia demostr su perfil de eficacia. Otro derivado de benzamida
Entinostat ha sido evaluado para numerosos tipos de cncer en la
Clnicas Adems, la combinacin de entinostat con erlotinib para NSCLC
El paciente fue evaluado y no se observ ningn cambio significativo en el resultado
Cuando se compara con erlotinib solo (Witta et al., 2012).
La tadinalina ha sido evaluada en combinacin con gemcitabina en
Pacientes con cncer de pncreas avanzado y cncer de pulmn de clulas no
pequeas
(Richards et al., 2006) (NCT00005093). El cido graso de cadena corta denota
Otra clase de inhibidores HDAC entre los que se incluyen el cido valproico y
Fenilbutirato son dos compuestos bien caracterizados. Fase I clnica
Ensayo con cido valproico (VPA) en pacientes con enfermedad refractaria
Tumores slidos o tumores del sistema nervioso central y se encontr que estaba bien
Tolerado. Incluso para el tratamiento de tumores neuroendocrinos, el VPA fue
Se encontr que era eficaz (Mohammed et al., 2011).
Varias investigaciones celulares
Se han llevado a cabo con fenilbutirato con un informe reciente
Lo que sugiere su capacidad para suprimir el crecimiento de la lnea celular de
glioblastoma
(Kusaczuk, Krtowski, Bartoszewicz y Cechowska-Pasko, 2016). sin embargo
Pocos informes clnicos estn disponibles sugiriendo su uso en las clnicas.
Una pltora de compuestos naturales han sido seleccionados para su inhibidor HDAC
potencial. Entre ellos Amamistatin, aislado de Nocardia
Asteroides, el ciclopptido natural FR235222 aislado de la fermentacin
Caldo de Acremonium sp., Clamidocina de Diheterospora
Chlamydosporia, apicidina de Fusarium sp. Vale la pena mencionar
(Mottamal, Zheng, Huang, & Wang, 2015). Para una
Se sugiere a los lectores de informacin que remitan las excelentes crticas
(Manal, Chandrasekar, Priya y Nanjan, 2016, Mottamal et al., 2015).
La Tabla 5 destaca varios inhibidores HDAC aprobados y algunos HDAC
Inhibidores que se evalan clnicamente para diversas neoplasias malignas.

5. Observaciones finales
La creencia generalizada de que el cncer es una enfermedad caracterizada por
Irregularidades se ha impugnado sobre la base del
Tecnologas genmicas que nos proporcionaron una visin general de
La causa molecular del cncer. Aunque los defectos en el
El ADN sigue siendo uno de los caminos ms evidentes que conducen a la
Crecimiento, la participacin de factores epigenticos en la oncognesis no
Ser refutado. Las extensas alteraciones del epigenoma incluyendo modi-
Las protenas histonas y el complejo de remodelado de la cromatina
Algunos de los cambios epigenticos vitales asociados con el cncer. En efecto
Con la aplicacin de la prxima generacin de investigadores de la tecnologa de
secuenciacin
Fueron capaces de identificar que en el cncer humano, los genes que controlan
El epigenoma estn altamente mutados, lo que sugiere tener
Va mltiple relevante para el fenotipo del cncer.
La abundancia de mutaciones genticas que ocurren en el sistema epigentico de
regulacin
Complejos y protenas proporcionan una serie de objetivos fundamentales
En el campo del descubrimiento epigentico de frmacos. Est ms all de la sombra
Duda de que estos objetivos son algunos de los estudios ms ampliamente estudiados
Tema en todo el mundo y ha incitado definitivamente su consideracin
En el sector de I + D de la industria farmacutica de mil millones de dlares.
Dicho esto, con una estimacin de aproximadamente 1.800 millones de dlares
(Paul et al., 2010) para introducir una nueva entidad qumica en el mercado.
La I + D farmacutica en la eleccin del objetivo desempear un papel
rol crucial. Debemos ir ms all del enfoque tradicional y
Profundizar en nuevas vas para lograr el mximo beneficio en
Productividad de I + D. Como la mayora de estos objetivos epigenticos son enzimas y
Con el xito en el desarrollo de inhibidores efectivos para borrar epigenticos
(Enzimas de la histona desacetilasa), otros objetivos tales como lectores de
Las marcas epigenticas y el complejo de remodelacin de la cromatina
Contendiente de eleccin. Adems, la presencia de mutaciones genticas
No deben ser nicamente los criterios para acompaar el proceso de desarrollo de
frmacos,
Como hemos visto que la FDA ha aprobado los inhibidores HDAC que se utilizan
Clnicamente sin informes de cualquier alteracin gentica que se produzca en esta
enzima.
Caracterizacin molecular del cncer a travs del uso de alto rendimiento
Genotipo / fenotipo y la identificacin de
Los biomarcadores clnicamente relevantes deberan ser un camino adelante en el
descubrimiento de frmacos
Programa A pesar de las declaraciones anteriores, queda mucho por descubrir antes
Podemos aplicar nuestro conocimiento actual en una configuracin clnica. La quema
El descubrimiento de frmacos epigenticos es el de la selectividad. El aprobado
Los inhibidores de HDAC son no selectivos hacia la enzima HDAC que conduce
A diversos efectos indeseables. Recientemente se ha generado una
El desarrollo de inhibidores especficos de la isoforma con la creencia de que
Conducir a frmacos teraputicos superiores con perfiles txicos ms bajos. Sin
embargo,
Mirando el fracaso en el programa de desarrollo de frmacos la validez
De esta declaracin slo puede ser aceptada una vez que se
Inhibidores de la isoforma en las clnicas. Adems, los estudios han sugerido que
Las neoplasias hematopoyticas son ms vulnerables a la epigentica
Terapias dejando un lado ciego acerca de su eficacia en el tumor slido.
El uso de terapias epigenticas en combinacin con el convencional La quimioterapia
podra ser una estrategia vlida para mirar adelante en el tratamiento de slidos
Tumores. Estos son pocos de los muchos otros retos que enfrentan la epigentica
Programa de descubrimiento de frmacos.
El camino recorrido hasta ahora en la epigentica del cncer ha proporcionado un
Informacin, pero todava hay una manera larga y traicionera
Delante de nosotros sin un mapa que conduce al xito. Creemos que
El panorama del cncer continuar evolucionando en el futuro y
Esperamos que el campo de la epigentica del cncer evolucione con l y sorprenda
nos.
Conflicto de intereses
Los autores declaran que no tienen ningn conflicto de inters para divulgar.
Expresiones de gratitud
La investigacin en nuestro laboratorio es apoyada en parte por los fondos de All India
Consejo para la Educacin Tcnica a travs del Programa de Promocin de la
Investigacin
(AICTE-RPS), Modernizacin y Eliminacin de Obsolescencias (MODROB)
Del Departamento de Biotecnologa (DBT) del Ministerio de Ciencia y
Tecnologa y los fondos aportados por el Departamento de Ciencia y
Technology - Consejo de Investigacin en Ciencia e Ingeniera (DST-SERB). SB
Es apoyado por el Dr. T.M. Una beca de Pai proporcionada por la Universidad Manipal.
Sinceramente pedimos disculpas a los autores cuyo trabajo original ha
Contribuyeron sustancialmente a este campo pero no fueron citados en esta revisin
Debido a las limitaciones de espacio.
Investigacin Farmacolgica

Epigentica: El tercer pilar de la sealizacin del xido ntrico

El xido ntrico (NO), la molcula de sealizacin de radicales libres producida

endgenamente, generalmente se piensa que
Mediante sus interacciones con protenas que contienen hemo, tales como guanilil
ciclasa soluble (sGC), o por
La formacin de aductos de protenas que contienen grupos funcionales de xido de
nitrgeno (tales como S-nitrosotioles,
3 - nitrotirosina, y complejos dinitrosil - hierro). Estos dos tipos de interacciones
resultan en una multitud de
Efectos descendentes que regulan numerosas funciones en fisiologa y enfermedad. De
los numerosos
NO mecanismos de sealizacin, la regulacin epigentica ha adquirido un inters
considerable en los ltimos aos.
Existe ahora abundante evidencia experimental para establecer NO como un regulador
epigentico endgeno de
Expresin gnica y fenotipo celular. Se ha demostrado que el xido ntrico influye en
aspectos claves de la epigentica
Regulacin que incluyen modificaciones postraduccionales histonas, metilacin del
ADN, y niveles de microARN.
Los estudios a travs de los estados de enfermedad han observado la regulacin
mediada por NO de la expresin de la protena epigentica
Y la actividad enzimtica que resulta en la remodelacin del paisaje epigentico para
influir finalmente en el gen
expresin. Adems de las vas bien establecidas de la sealizacin NO, los mecanismos
epigenticos pueden
Proporcionan las explicaciones muy necesarias para los efectos del NO que se conocen
mal del contexto. Estos hallazgos
Proporcionar ms informacin sobre los mecanismos moleculares de NO sealizacin y
aumentar nuestra capacidad de diseccin
Su papel funcional en microambientes especficos en salud y enfermedad. Esta revisin
resumir
El estado actual de la sealizacin NO a travs de mecanismos epigenticos (el "tercer
pilar" de la sealizacin NO).

1. Antecedentes
1.1. Epigentica
Epigentica es el estudio de las modificaciones heredables en el gen
Expresin por un mecanismo distinto de la alteracin en el ADN
Secuencia [1]. El ADN eucaritico se almacena en el ncleo como condensado
Cromatina, que se envuelve en ADN envuelto alrededor de histona
Protenas. La estructura de la cromatina se puede controlar a travs de
Diversos mecanismos celulares y esenciales en la regulacin de la transcripcin.
Estos mecanismos incluyen: reposicionamiento de nucleosomas,
Metilacin del ADN y desmetilacin, modificaciones de la cola de la histona,
Variaciones de histonas y regulacin de microARN. Una colaboracin compleja
Entre las protenas reguladoras epigenticas existe para mantener
Esta cromatina dinmica. Estas protenas reguladoras pueden ser ampliamente
Clasificados como "escritores", "lectores" y "borradores". Escritores, como
Histona acetiltransferasas, histona metiltransferasas y ADN
Metiltransferasas, son enzimas que actan para aadir grupos qumicos a
Protenas o cidos nucleicos. Los lectores son enzimas que reconocen estos
Modificaciones qumicas para activar o reprimir la transcripcin. Borradores,
Cuentos como histona desacetilasas, histona desmetilasas, y ADN
Desmetilasas, enzimas que eliminan estos grupos qumicos [2].
Los estados cromatnicos, como las secuencias de ADN, se pueden
Prximas generaciones de clulas en un proceso conocido como herencia epigentica,
Que es importante para retener la funcin celular y la integridad [2]. Epigentica
Se est convirtiendo en un rea importante de inters
Modificaciones hereditarias de la cromatina se han
Varios estados patolgicos, incluido el cncer. Mutaciones de ADN han sido
Ampliamente estudiado en cuanto al cncer, pero el papel de la epigentica
En la progresin de la enfermedad an no se entiende completamente. Epigentico
Modificaciones, una diferencia de las mutaciones genticas, son reversibles,
Que la orientacin teraputica de las vas epigenticas puede ser clnicamente
Importante Por estas razones, la investigacin actual tiene por objeto
Principales vas por las que una clula puede alterar la estructura de la
Cambios estructurales que conducen a la enfermedad, y cmo la protena reguladora
Puede controlar la progresin de la enfermedad a travs de la epigentica.

1.2. El xido ntrico (NO)

El xido ntrico (NO) es una molcula de radicales libres con una
Efectos fisiolgicos. Cuando NO se descubri por primera vez en mamferos
En los aos ochenta, muchos investigadores nunca haban imaginado que
Tal gas qumicamente inestable y reactivo podra ser producido
Endgena en el cuerpo humano. Originalmente se la denomin
El factor de relajacin derivado del endotelio (EDRF), ya que actu como
Un potente vasodilatador elevando la cantidad de GMP cclico en la sangre
Paredes de los vasos resultando en un vasorelaxant efecto [3].
Ahora se sabe que el NO tiene muchas otras funciones tanto en los enfermos
Y estados saludables. Adems de la relajacin del msculo liso,
Bajo condiciones fisiolgicas, el NO puede regular la funcin renal,
Inflamacin, secrecin endocrina y neurotransmisin. Patolgicamente,
NO se ha asociado con una serie de estados patolgicos
Incluyendo el cncer, la diabetes, las enfermedades del corazn y la enfermedad de
Alzheimer
[4-8]. En comparacin con otras molculas de sealizacin, NO es un pequeo,
Altamente difusible, molcula sin carga con una media vida biolgica corta
Que oscila entre varios milisegundos a 2 s. Siendo un
Radical (una molcula con electrones no emparejados), NO busca otros
Molculas para reaccionar con el fin de estabilizar su electrn libre. Debajo
Biolgicas, el NO slo reacciona con dos tipos de molculas:
Otras especies de radicales libres, tales como superxido y oxgeno; Y metales,
Particularmente hierro ferroso [9]. Estas reacciones son el ncleo
Muchos de sus efectos de sealizacin fisiolgica.
Aunque fisiolgicamente NO puede derivarse de mltiples
Fuentes, la mayora es sintetizada por la enzima xido ntrico sintasa
(NOS), de los cuales hay tres isoformas: endotelial NOS (eNOS,
NOS3), NOS neuronal (nNOS, NOS1), y NOS inducible (iNOS,
NOS2) [10]. NNOS y eNOS se expresan constitutivamente en clulas
Y requieren la fijacin de calmodulina a partir de calcio intracelular elevado
Para sintetizar NO.
La expresin de iNOS es inducida por citoquinas Y tiende a producir NO a una velocidad
mayor que las otras dos isoformas [11]. Las tres enzimas utilizan oxgeno (O2) y el amino
cido l-arginina como sustratos para producir NO y el aminocido Citrulina. Adems de la
sntesis enzimtica, una proporcin considerable De NO proviene del nitrato diettico que
es abundante en Una variedad de verduras. Nitrato reductasas bacterianas en la va oral
Cavidad convierte el nitrato en nitrito, que en ltima instancia puede reducirse A NO en
condiciones cidas o hipxicas o enzimticamente [12]. El xido ntrico tambin puede
provenir de fuentes farmacolgicas, Nitratos orgnicos, tales como trinitrato de glicerilo
(nitroglicerina). En tono rimbombante, Los efectos biolgicos de NO son en gran medida
independientes de su fuente. Esto significa que en cualquier localizacin celular dada, una
molcula de NO Derivados de la reduccin del nitrito se comportarn de la misma manera
Como una molcula de NO generada a partir de NOS o liberada de una NO-donante. Por
lo tanto, fuentes dietticas o farmacolgicas Del NO tambin podra tener potenciales
efectos reguladores epigenticos.

1.2.1. Sin donantes

Como se ha expuesto anteriormente, el NO puede generarse biolgicamente
Variedad de fuentes. Bajo condiciones experimentales in vitro, sin embargo,
Es til tener la capacidad de controlar con precisin tanto el
Concentracin y duracin de la exposicin al NO. Por estas razones, el
Uso popular de compuestos donadores de NO ha sido de gran
Explorando las acciones biolgicas del NO. Aunque hay una variedad de
Clases de compuestos NO-donantes, no siempre se aprecia que
Cada uno puede producir resultados diferentes basados en diferencias en su
Mecanismos de descomposicin. Por lo tanto, es crtico entender
Estas diferencias, ya que pueden afectar en gran medida a la
Resultados e interpretaciones de los resultados. Gran parte de la epigentica
Los datos discutidos en esta revisin se generaron utilizando
De tres compuestos donadores de NO comnmente usados: nitroprusiato sdico
(SNP), diazeniumdiolates (NONOates), o S-nitroglutathione
(GSNO). Por estas razones, una breve discusin de los tipos de NOdonor
Siguientes compuestos.
SNP es una sal de sodio soluble en agua compuesta de Fe2 + complejado
Con xido ntrico y cinco aniones de cianuro. SNP se puede almacenar para
Aos a temperatura ambiente si se mantiene seco y protegido de la luz,
Ya que la descomposicin es acelerada por el oxgeno. Se utiliza clnicamente para
Inducir hipotensin para minimizar la prdida de sangre quirrgica y disminuir
Poscarga y mejorar el gasto cardaco en la insuficiencia cardaca [13, 14]. SNP
Fue utilizado originalmente para investigar los procesos fisiolgicos mediados
Por NO, sin embargo se demostr posteriormente que funcionaba a travs de una
Conjunto complejo de acciones que requieren metabolismo reductor para que
NO en las clulas, tejidos o medios. Por lo tanto, la liberacin de NO
De SNP se produce parcialmente en base a la biodisponibilidad de reductores
[15]. Tambin se ha demostrado que SNP puede transferir un nitrosonio
Equivalente (NO +) a aminas y tioles en lugar de NO libre. Ms
Sin embargo, lo ms importante es el potencial de SNP para liberar cinco equivalentes
De cianuro (CN-) y complejos txicos de hierro por reduccin en
La presencia de perxidos. Como el hierro en las protenas heme puede interactuar
Tanto con CN como con NO, dando lugar a una sealizacin aguas abajo similar
Efectos, el uso de SNP podra confundir sustancialmente la interpretacin
Resultados experimentales, dando lugar a falsas conclusiones
Efectos NO-atribuibles. O-atribuible efectos.
Diazeniumdiolates, comnmente conocido como NONOates, son
Utilizado en experimentos celulares que requieren exposicin controlada de NO.
Esta clase de donantes de NO liberan espontneamente NO libre en solucin acuosa
Soluciones. Son tiles porque tanto la duracin como la
La concentracin de NO en estado estacionario puede ser controlada
Sobre el tipo de NONOato utilizado. Diferencias en las tasas de liberacin de NO
De cada NONOato son una funcin de las cadenas de amina, que parcialmente
Dictan la velocidad de descomposicin (semivida). Cada NONOate
Libera NO a una velocidad controlada (aproximadamente 2 equivalentes de NO por
molcula de NONOato) basado nicamente en el pH y la temperatura
(Que son constantes en la mayora de los experimentos de cultivo celular). Por lo tanto,
Estos donantes no son valiosos para estudiar la biologa NO porque
Generan consistente y reproducible concentracin de NO en estado estacionario
Perfiles con poca influencia de tioles, metales, luz y
Otros componentes de los medios [15, 16].
GSNO es el derivado S-nitrosado de la clula celular ms abundante
Tiol, el glutatin (GSH), que desempea un papel tanto en el producto qumico
Biologa y funciones fisiolgicas del NO. A diferencia de lo espontneo
Liberacin de NO de NONOates, la tasa de liberacin de NO de GSNO
Depende en gran medida de una variedad de factores, incluyendo la luz visible
Y la concentracin de iones metlicos tales como Cu2 +. En entornos biolgicos,
GSNO no puede cruzar las membranas celulares, sin embargo el tratamiento
De clulas con GSNO causa incrementos en el S-nitrosotiol celular
Niveles [17]. Esto se ha demostrado en gran medida porque la mayora
De los efectos de GSNO estn mediados por reacciones de transnitrosacin.
Transnitrosacin se refiere a la transferencia directa de un ion nitrosonio
(NO +) a un tiol, amina, alcohol o metal sin la liberacin de
Cualquier NO libre. La exposicin celular al GSNO da lugar a
Formacin de S-nitrosotioles intracelulares, por lo que es la
Compuesto de eleccin para estudiar las reacciones de nitrosacin del NO. Precaucin
Deben tomarse, sin embargo, cuando se interpretan
Los resultados utilizando nitrosotiol NO-donantes como GSNO porque los estudios
Han demostrado que los aductos celulares formados a partir de la exposicin celular
A GSNO son muy diferentes de lo que se obtiene cuando las clulas son
Expuestos a NO libre (NONOates) [18].

1,3. xido ntrico y regulacin epigentica

Se ha demostrado que el xido ntrico afecta directa e indirectamente
Numerosos mecanismos epigenticos. La literatura actual ha demostrado
La capacidad del NO para alterar drsticamente la histona global
Modificaciones postraduccionales y aductos de ADN directamente
Inhibiendo las enzimas epigenticas o indirectamente alterando la enzima
Niveles de expresin o localizacin celular.
1.4. Modificaciones postraduccionales de xido ntrico y histonas
1.4.1. Regulacin de histona acetiltransferasas (HAT)
Usando acetil-CoA como sustrato, las enzimas HAT son responsables
Para la acetilacin de residuos de lisina de cola histona, una modificacin
Comnmente asociados con la activacin de genes [19, 20]. Alteraciones
En la actividad HAT y posterior acetilacin con histona lisina
Documentado en muchas enfermedades estados asociados con NO. Mientras
Los mecanismos directos de NO-mediado cambios en la acetilacin han
No se han descrito, los mecanismos indirectos van desde la activacin
De la HAT p300 a la regulacin de histona desacetilasas (HDAC)
Va S-nitrosacin. Por ejemplo, el anlisis histolgico de histonas
De muestras de carcinoma de clulas escamosas orales demostrado
Aumento de la acetilacin en H3K9, H3K14, H3K56 y H4K8, as como
Como niveles aumentados de NOS2 expresin cuando se compara con no cancerosos
Tejido oral. Para determinar si la hiperacetylation ocurri en
Respuesta a la produccin de NO, las clulas en cultivo se estimularon con
S - nitrosoglutathione (GSNO). El aumento de la acetilacin de las histonas fue
Observado y se determina que est mediada a travs de la autoacetilacin mejorada
De la protena HAT, p300, por el gliceraldehdo 3-fosfato
Deshidrogenasa (GAPDH) y nucleophosmina (NPM1) [21]. Anterior
Los informes demostraron que la localizacin nuclear mediada por NO
De GAPDH (va S-nitrosacin) con la protena E3 ubiquitina ligasa
Siah1 mejora la autoacetilacin del p300 as como su actividad cataltica
[22]. La nitrosacin de GAPDH lo estimula para la acetilacin en Lys160
Por el complejo p300 / CBP. Esto estimula adems la autoacetilacin
Y la actividad cataltica de p300 / CBP a travs de un mecanismo de avance.
Adems, la actividad de la ubiquitina ligasa E3 de Siah puede
Median la degradacin de SUV39H1, una enzima trimetilante H3K9.
Las reducciones en la trimetilacin de H3K9 van acompaadas de Ncreases en H3K9
acetilacin, que se demostr que activar los genes
Involucrados en el crecimiento [23]. Otro estudio analizando nuevas terapias
Los objetivos para la sepsis y la inflamacin observaron que el tratamiento de THP-1
Con LPS conduce a una mayor actividad de HAT y acetilacin total
De H3 y H4, mientras que el tratamiento con el NOS-inhibidor l-NAME previene
La acetilacin de H3 y H4. Este estudio tambin
Que la exposicin al NO dio lugar a S-nitrosacin de HDAC 2 y 3, pero no
No afectan a su actividad [24].
1.4.2. Regulacin de las histonas desacetilasas (HDAC)
Las enzimas HDAC son responsables de eliminar los grupos acetilo de
Residuos de lisina en las colas de las histonas, que se asocia
Disminuyendo la expresin gnica [25]. Hay numerosos ejemplos
Lo que sugiere un papel de NO en la regulacin de histona desacetilacin. Brainderived
Factor neurotrfico (BDNF), por ejemplo, es importante para
El desarrollo del sistema nervioso. En neuronas cultivadas, BDNF
Inducida sntesis de NO y conducir a S-nitrosation de HDAC2 en Cys262
Y Cys274. Mientras, la S-nitrosacin no afect la actividad HDAC,
Se demostr que causa su liberacin de la cromatina, resultando
En el aumento de la acetilacin de las histonas que rodean la neurotrofina
Promotores de genes [26]. Tambin se observ que las
Las neuronas tratadas con BDNF conducen a la prdida de HDAC2 en el promotor c-fos.
La S-nitrosacin de HDAC2 y su prdida en el promotor c-fos
Podra ser revertida por los inhibidores de la NOS. Tambin se observ que el
tratamiento
Con BDNF no afect los niveles de expresin global de HDAC2,
Lo que sugiere que la S-nitrosacin afecta a la asociacin de HDAC2
Con cromatina en lugar de actividad enzimtica [27].
Ncreases en H3K9 acetilacin, que se ha demostrado que activar los genes
Involucrados en el crecimiento [23]. Otro estudio analizando nuevas terapias
Los objetivos para la sepsis y la inflamacin observaron que el tratamiento de THP-1
Con LPS conduce una mayor actividad de HAT y acetilacin total
De H3 y H4, mientras que el tratamiento con el NOS-inhibidor l-NAME previene
La acetilacin de H3 y H4. Este estudio tambin
Que la exposicin al NO dio lugar a S-nitrosacin de HDAC 2 y 3, pero no
No afectan a su actividad [24].
1.4.2. Regulacin de las histonas desacetilasas (HDAC)
Las enzimas HDAC son responsables de eliminar los grupos acetilo de
Residuos de lisina en las colas de las histonas, que se asocia
Disminuyendo la expresin gnica [25]. Hay pocos ejemplos
Lo que sugiere un papel de NO en la regulacin de la desacetilacin histona.
Brainderived
Factor neurotrfico (BDNF), por ejemplo, es importante para
El desarrollo del sistema nervioso. En neuronas cultivadas, BDNF
Inducida sntesis de NO y conducir a S-nitrosation de HDAC2 en Cys262
Y Cys274. Mientras, la S-nitrosacin no afect a la actividad HDAC,
Se demostr que causa su liberacin de la cromatina, resultando
En el aumento de la acetilacin de las histonas que rodean la neurotrofina
Promotores de genes [26]. Tambin se observ que las
Las neuronas tratadas con BDNF conducen a la prdida de HDAC2 en el promotor c-fos.
La S-nitrosacin de HDAC2 y su prdida en el promotor c-fos
Podra ser revertida por los inhibidores de la NOS. Tambin se observ que el
tratamiento
Con BDNF no afect los niveles de expresin global de HDAC2,
Lo que sugiere que la S-nitrosacin afecta a la asociacin de HDAC2
Con cromatina en el lugar de la enzima enzimtica [27].

Revel un enriquecimiento de estas modificaciones en los lugares de genes

En la inflamacin o la proliferacin, lo que sugiere un papel
Estas modificaciones en la patognesis DMD. Cuando CD1 ratones fueron
Tratado durante 28 das con el inhibidor de la xido ntrico sintasa, LNAME,
Se observaron incrementos significativos en H3K9ac y H3K14ac
En las fibras musculares. Estudios celulares en satlites mdx diferenciados
Clulas tratadas con un donante de NO o transfectadas con eNOS
Mostraron marcadas disminuciones en los niveles de H3K9ac junto con
HDAC5 localizacin nuclear. Adems, la distrofina, el msculo
La protena de tejido comnmente reducida en DMD, fue upregulated
Por NO y atribuido a invertir el patrn anormal de H3
Acetilacin de histonas. Por el contrario, el mismo grupo tambin observ Snitrosation,
Especficamente de HDAC2, despus de la exposicin al NO celular. Esta
Result en la prdida de actividad, lo que sugiere un efecto beneficioso potencial
De los inhibidores de la desacetilasa en un modelo murino de msculos distrficos

1.4.3. Regulacin de lisinas desmetilasas (KDM)

De todos los mecanismos conocidos de regulacin epigentica por NO,
La capacidad de efectuar la metilacin de histonas es el nico conocido directo
mecanismo. Los niveles estables de metilacin en la histona lisina
Residuos son una funcin de las actividades concertadas tanto de histona
Metiltransferasas y histona desmetilasas. La mayora de la histona
Desmetilacin se lleva a cabo por el dominio JmjC que contiene
Histona desmetilasas. stos pertenecen a la familia de oxgeno, hierro y
2-oxoglutarato-dioxigenasas dependientes, que son parte de un
Diversa familia de enzimas de hierro no hemo que catalizan
Importantes reacciones de oxidacin en las clulas [31]. En el sitio cataltico
Estas dioxigenasas contienen una trada facial de 2-histidinas y 1-
Carboxilato que coordina el Fe (II) no hemo que es
Utilizado para la unin de sustrato y cofactor, incluyendo oxgeno molecular
(O _ {2}) [32]. Como muchas protenas que contienen hierro que se unen o reaccionan
Con oxgeno tambin interactan con NO en afinidades variables, varios
Grupos establecidos para probar si NO podra interactuar con JmjC-dominio
Histona desmetilasas y afectan los niveles globales de metilacin de las histonas.
Como oxgeno molecular (O2) es un sustrato para todos los hierro y 2-
Las dioxigenasas dependientes de oxoglutarato, estn fuertemente inhibidas
Por la hipoxia y los mimticos de la hipoxia (Ni2 +, CoCl2). Un estudio mostr
Que la histona desmetilasa Jmjd1a, especficamente, fue altamente
Sensible a la inhibicin de los iones de nquel carcingenos. Clulas tratadas
Con Ni2 + demostr una relacin 1: 1 de molculas de Ni2 + a Jmjd1a
Molculas, sugiriendo que el nquel causa la inhibicin reemplazando
El cataltico no hemo hierro [33]. Cuando los macrfagos RAW 264.7
Fueron tratados con NO, aumento de metilacin en H3K9me2 / me3
Y se observ H3K36me3; Esto era idntico a los efectos
De hipoxia (pO2 <3%) [34]. En las lneas celulares de cncer humano, una
comparacin
Entre Ni, Co, hipoxia, desferrioxamina (DFO, hierro
Quelante), y NO demostr que todos causaron aumentos mundiales
En la metilacin histona en la misma medida en una concentracin y
Dependiente del tiempo [35, 36] En otro estudio sobre la diferenciacin de clulas
madre embrionarias, NO
A la regulacin de Nanog y Oct4, dos genes maestros implicados
En el control del estado pluripotente. Esta baja regulacin fue
Atribuido a la capacidad de NO para aumentar los trimetilados de H3K9,
Una marca de silenciamiento gnico, con su enriquecimiento encontrado distalmente y
Proximalmente a la Nanog promotor [37]. Por cierto, otros grupos
Han demostrado que el silenciamiento o inhibicin de la histona desmetilasa
NO produjo un aumento significativo del H3K9me3 y una disminucin del
La expresin de Nanog y Oct4 [38]. Para examinar la magnitud
De la histona global PTM cambia simultneamente en respuesta al NO,
Un grupo utiliz espectrometra de masas de alta resolucin y encontr que
Sobre las histonas 3 y 4 numerosas marcas mono-, di- y tri-metilo
Estaban cambiando [39]. Evidencia concluyente de que NO inhibe directamente
Las actividades de KDM vinieron midiendo la actividad desmetilasa de
Aislado JMJD1A en presencia de NO, que mostr que su catalizador
La actividad se inhibi de una manera dependiente de la dosis. Electrn
Las mediciones de resonancia paramagntica de JMJD1A en presencia
De NO produjo un espectro mayor con valores de g de 2,17, 2,06 y
2,00, indicativo de un complejo de hierro NO con el 2-His-1-carboxilato
Trada facial como la fuente ms probable para los espectros. Otras estructuras
Estudios han elucidado una estructura cristalina de JHDM1A con
NO ligado al hierro cataltico [40]. Durante la catlisis KDM, 2-OG es
Ligada al hierro de manera bidentada, lo que da lugar a la formacin
De un centro de cinco coordenadas Fe (II). Bajo circunstancias normales
El sexto sitio de coordinacin est preparado para unirse a su sustrato normal
O2, sin embargo, tambin es un objetivo ideal para NO [41, 42]. Como nanomolar
Las concentraciones de NO demostraron una inhibicin completa de la enzima en
La presencia de concentraciones milimolares de O2, se concluy
Que bajo condiciones fisiolgicas la afinidad de estos KDM por
NO son mayores que su afinidad por O2. Colectivamente, estos estudios
Proporcionar la primera evidencia concluyente de un mecanismo directo para el NO
Para afectar significativamente patrones de metilacin de histonas globales. Podra
influir en la metilacin de las histonas globales, como
KDM niveles de expresin o la regulacin de los niveles de hierro celular. Curiosamente,
Un estudio demostr que mientras H3K9 metilacin fue
Fuertemente aumentado en respuesta al NO, su correspondiente desmetilasa,
JMJD1A, fue paradjicamente up-regulation. De hecho, los 9
Conocidas H3K9 desmetilasas fueron reguladas hasta el nivel de mRNA
En respuesta al NO, lo que sugiere que todos estaban an fuertemente inhibidos.
Otro enlace interesante entre el NO y la inhibicin de
Desmetilasa es la contribucin de la piscina de hierro quelatable
(CIP). El CIP es una piscina intracelular heterognea de hierro de trnsito
En equilibrio dinmico y se cree que es la principal fuente de hierro
Para JmjC dominio dioxygenases [43]. Varios grupos han demostrado que
Sobre la exposicin celular a NO, el CIP se convierte cuantitativamente
En complejos de dinitrosilurio paramagnticos con compuestos que contienen tiol
Ligandos (DNIC). Esto hace que el secuestro de hierro se asemeje a un
Fenotipo hambre de hierro [44 - 46]. Cuando se midi la actividad de KDM
En presencia de NO, su actividad se correlacion negativamente con
La cantidad de DNIC que se formaron. Como suplemento de hierro
Actividad restaurada de KDM, estos resultados sugieren el secuestro de
Va la formacin de DNIC indirectamente contribuye a los efectos inhibitorios
De NO en histonas desmetilasas eliminando la biodisponibilidad de
Este cofactor necesario [36].

1.5. Histona metiltransferasas (KMT)

Claramente, la inhibicin del dominio JmjC que contiene demethylases
Es un mecanismo dominante para el aumento de la metilacin de histonas en
Respuesta a NO. Otra posible explicacin de los aumentos
La metilacin de histonas en respuesta al NO, sin embargo, es la estimulacin
De metilacin activa. Varios estudios exploraron esta posibilidad
Y mostr que los aumentos en la metilacin de las histonas en respuesta
Al NO o metales txicos (Ni) no puede ser explicado por
Aumentos en la metilacin [36, 47]. La metionina es el precursor
Para la S-adenosilmetionina (SAM), que es la nica fuente de energa
Metil-donante para las histona metiltransferasas. Cuando las clulas fueron
Cultivadas en medios libres de metionina, continuaron mostrando
En la metilacin histona global despus de NO o
Ni tratamiento. Esta observacin descarta la metilacin activa como
Principal mecanismo de aumento de la metilacin de las histonas. Curiosamente,
Cuando los niveles de expresin de H3K9 metiltransferases fueron
Examinados en respuesta a NO, tanto SETDB2 y SUV39H2 fueron transcripcional
Upregulated. La metiltransferasa G9a, sin embargo,
Se redujo a nivel de protenas en respuesta a la continua
NO exposicin [36]. Estos estudios sugieren que aunque la activacin
De la actividad metiltransferasa por NO es probable, los cambios
Enzima niveles de expresin podra afectar en ltima instancia metilacin de histonas
patrones.

1.6. Las consecuencias de los cambios mediados por NO en la

Histone PTMs
Hasta la fecha, se han identificado ms de 100 PTM de cola de histona diferentes,
Pero el significado funcional de slo una pequea fraccin de
Ellos han sido aclarados [48]. Las modificaciones ms comunes
Son acetilacin, metilacin, fosforilacin y ubiquitinacin.
La acetilacin y la fosforilacin son PTM histonas dinmicas con
Media vidas que van desde los minutos a algunas horas, mientras que la metilacin
Puede ser de larga duracin y requiere la dilucin de la cromatina sobre
Sucesivas divisiones celulares para ver cambios. Es importante anotar
Que las PTM histonas especficas estn asociadas con la expresin gnica, o
Cromatina abierta, mientras que las marcas represivas se asocian con el gen
Silenciamiento y cromatina cerrada.
La magnitud de los cambios fenotpicos atribuidos a NO a travs de epigenticos
Medios se evidencia por un estudio que llev a cabo un microarrays
Anlisis de clulas de cncer de mama expuestas a concentraciones fisiolgicas de NO.
De los 6500 genes expresados diferencialmente en respuesta
A NO, muchos eran regulados por sus asociaciones con ciertos
Histona PTMs. Especficamente, se encontr que la NO inducida significa-
Cambios bidireccionales (incrementos y disminuciones) en numerosos
Marcas de acetil histona tales como H3K9ac. Curiosamente, aunque NO
Caus una reduccin global global de los niveles de H3K9ac, tambin
Indujo una redistribucin significativa de esta marca a travs del genoma.
ChIP experimentos demostraron que NO aument el enriquecimiento
De H3K9ac en los sitios de inicio transcripcional (TSS), intrones y distal
Regiones, sin embargo, hubo una prdida global en los exones. Mientras que slo 88
genes
Perdido H3K9 alrededor de su TSS en respuesta a NO, ms de 3000 genes
Gan H3K9ac alrededor de su TSS. Como H3K9ac es un gen que activa
Marca, no es de extraar que la adquisicin de H3K9ac en TSS en
Respuesta al NO se correlacion con los correspondientes aumentos en su
Asociadosproductos de genes [39]. De forma similar, H3K9me2, un silenciador de
genes
Marca, se enriqueci en regiones promotoras de los genes regulados a la baja
Por NO. Aproximadamente 900 genes perdieron H3K9me2 y 900 genes ganaron
H3K9me2 en sus regiones promotoras en respuesta a NO. Cuando los enfoques
farmacolgicos para reprogramar
Mesenquimatosa en clulas funcionales
Los precursores cardiovasculares se exploraron utilizando epigeneticallyactive
Pequeas molculas, un papel funcional para el NO y las histonas PTMs
Fue descubierto. La exposicin de clulas estromales de tipo mesenquimal a
Un cctel epigentico que contiene donante NO, EpiC (Retinoic Acid,
Butilato de fenilo y DETA / NO), dio lugar a un aumento
H3K4me3 y H4K16ac, as como disminuciones en H4K20me3. Chip
Experimentos en H3K4me3 revel la presencia de un
Patrn de enriquecimiento en los marcadores tpicos del tallo cardiaco residente
Clulas c-Kit, MDR-1 y Nkx2.5 en las regiones promotoras. Aumentado
Expresin de c-Kit, MDR-1, y Nkx2.5 tambin se observaron. Adems,
Un nmero de microRNAs (miR 133a, 210 y 34a) implicados
En la biologa cardiomioctica, la diferenciacin celular y la proliferacin
Fueron regulados por este tratamiento, implicando el potencial
Participacin de NO en otro mecanismo epigentico as [49].
1.7. NO y metilacin del ADN
La metilacin del ADN es un importante mecanismo epigentico que
Regula la expresin diferencial de los genes. El control del ADN
Metilacin y desmetilacin ha estado implicada en varios
Patologas humanas, particularmente en diferentes tipos de cnceres.
Es el proceso epigentico ms antiguo conocido y ocurre por la
Adicin covalente de un grupo metilo al quinto carbono de la citosina
Nucletidos. Esto da lugar a la formacin de una marca llamada
5-metilcitosina (5-mC), que se ha demostrado que se relaciona con
Represin gentica. Aproximadamente 1% del genoma est compuesto de 5-mC
Nucletidos, la mayora de los cuales se encuentran donde la citosina es nextto un
Guanidina, tambin conocida como sitio CpG. En las clulas madre embrionarias y
Las clulas progenitoras hematopoyticas, 5-mC se encuentra en otras reas. Estas
CpG sitios suelen ser errticamente espaciados en el genoma, en contraste
A las islas CpG, que contienen una alta concentracin de sitios CpG [50].
Las islas CpG son tpicamente no metiladas, mientras que estas CpG aisladas
Sitios estn metilados [51]. Curiosamente, a medida que envejecemos y en el cncer,
Las islas CpG se metilan, mientras que hay una prdida global
De metilacin en otras partes del genoma. En general, alrededor del 75%
De citosinas CpG estn metiladas.
La metilacin est regulada principalmente por enzimas llamadas ADN
Metiltransferasas (DNMT), de las cuales hay tres
Tipos: DNMT1, DNMT3a y DNMT3b. DNMT1 funciona durante
Para asegurar que los patrones de metilacin se mantengan
Y se repar durante la replicacin del ADN. Este rol clasifica DNMT1
Como un DNMT de mantenimiento, mientras que DNMT3a y DNMT3b son de
Novo DNMTs. Se unen al ADN y establecen la metilacin del ADN
Patrones, lo que es especialmente importante durante el desarrollo embrionario
Y diferenciacin de clulas germinales. Desmetilacin activa, en
Contraste, est mediado por una familia de enzimas conocida como teneleven
Translocacin (TET) 5-mC hidroxilasas (TET1, TET2 y
TET3). Estas protenas realizan una serie de oxidaciones que
La prdida de la metilacin: 5-mC 5-hidroximetilcitosina
(5 - hmC) - 5 - formilcitosina (5 - fC) - 5 - carboxilcitosina (5 - caC).
La timidina ADN glicosilasa (FDG) puede entonces eliminar 5-fC y
5-cAC, resultando en la base-excisionrepair que reintroducesunmethylated
Citosina [50]. Mecanismos directos por los cuales NO altera la metilacin del ADN
No se ha elucidado. Existen varios informes, sin embargo,
NO produccin o NOS2 expresin con cambios en la metilacin del ADN.
Por ejemplo, los estudios han demostrado que los efectos de silenciamiento de genes
Del NO estn mediadas por metilacin del ADN. Cuando RINm5F de rata
(RIN) se trataron con la citoquina interleucina-1beta (IL-
1) o el NO-donante SNP, dos genes, frgil X Retraso mental 1
(FMR1) y la hipoxantina fosforribosiltransferasa (HPRT), fueron
Marcadamente reprimidos. Esto se atribuy a un mayor promotor
Metilacin de islas CpG. Estos efectos dependan de la
Actividad de los DNMT y fueron completamente prevenidos por los inhibidores de iNOS.
Curiosamente, NO exposicin no aument DNMT expresin gnica,
Sin embargo, la actividad de las DNMT aument cuando se aplic NO directamente
En un extracto de protena nuclear [52].
Otro ejemplo fue proporcionado por los investigadores que estudiaron Helicobacter
Pylori (H. pylori) indujo el cncer gstrico, en el que
Demostraron que el tratamiento de las clulas con H. pylori estimul una
Aumento significativo en la produccin de NO, metilacin del ADN y DNMT
actividad. En presencia de un inhibidor de NOS2, L-NAME, tanto la produccin de NO
Y la metilacin del ADN volvi a los niveles basales [53]. Estas
Resultados de estudios anteriores vinculando la activacin de DNMT a
NO produccin. Los informes han indicado que H. pylori causa epigentica
Silenciamiento de los genes supresores de tumores, lo que
A la carcinognesis. Un estudio mostr que H. pylori caus el ADN
Metilacin que result en el silenciamiento de los supresores de tumores
Gen, runx3. Otro encontr que H. pylori caus el runx2
Gen a ser metilado en clulas epiteliales en presencia de NOproducing
Macrfagos El tratamiento con lipopolisacrido
(LPS), as como H. pylori caus la metilacin de runx3, que fue
Invertido por el tratamiento con un inhibidor de la NOS [54].

1.8. NO-mediated miARN

MicroRNA (miRNA) son ARN no codificantes que van desde 18 a
20 nucletidos que regulan diversos patrones fisiolgicos y patolgicos
Incluyendo apoptosis, proliferacin, diferenciacin,
Y metstasis. Todos los miRNA tienen una regin de semillas, que consiste
De los nucletidos 2 a 8, que es complementario y se une
A los 3
UTR de un mRNA objetivo [2]. Regulan la traduccin
De aproximadamente el 30% del genoma codificante de la protena humana
Principalmente por la regulacin de la expresin de ARNm a travs de la degradacin
de mRNA,
MRNA deadenylation, o inhibicin del montaje ribosomal. Independientemente del
mecanismo, el resultado final es que la traduccin es
Y se inhibe la sntesis proteica del ARNm diana
[2]. Curiosamente, miRNAs tambin se ha demostrado para aumentar la
Traduccin de objetivos especficos a travs de un mecanismo poco conocido
[55, 56].
Varios estudios se han propuesto examinar el vnculo entre
xido, regulacin de miARN y cambios fenotpicos en diversas enfermedades
Estados. En un estudio, las clulas de cncer de mama triple negativo fueron
Expuestos a NO durante 24 hy luego cambios en mRNA y miRNAlevels
Fueron examinados por microarrays. El xido ntrico dio como resultado
Expresin de numerosos miARN: 45 miRNAs se upregulated
Y 72 miRNAs fueron downregulated [39]. Otro estudio en el pulmn
Cncer encontr que la enzima xido ntrico sintasa NOS2 fue
Transactivating miR-21 expresin (un noncoding RNA involucrados en
Oncognico Ras sealizacin) en un KRAS-inducida por el cncer de pulmn ratn
Modelo [57]. Cuando un modelo de knockout iNOS de ratn fue utilizado para
Examinar la participacin de KRAS en la tumorignesis pulmonar, una importante
Reduccin en la expresin de miR-21 junto con disminucin del tumor
Se observ proliferacin celular. MiR-21 ha demostrado ser
Oncognico en el cncer de pulmn e implicado en enfermedades inflamatorias
Tales como colitis ulcerosa, adenomas de colon y enfermedad de Crohn. En
La enfermedad inflamatoria intestinal (EII) NO ha demostrado inducir
Senescencia, y recientemente se ha establecido un vnculo entre NOS2 y
MiR-17, miR-146a, miR-126, miR-223 y miR-221 en IBD [58].
MiR-155, que se sabe que desempea un papel en la inflamacin y el cncer,
Es regulada positivamente por el NO en las clulas epiteliales del hgado (HepG2) a
travs del
SGC / cGMP / PKG en una concentracin dependiente
Manera [59]. Es interesante notar que miR-155 puede upregulate
NO en clulas N-9 microgliales de ratn estimuladas con LPS, lo que sugiere
Un bucle de retroalimentacin positiva entre NO, miR-155 e inflamacin
Hubo otro estudio en los osteoblastos que examin la relacin
Entre NO y miARN en la regulacin de la apoptosis. El no
Donante SNP se utiliz en este estudio y se demostr que upregulate
MiR-1, que se dirige a Hsp-70, un importante regulador de
Y la funcin de la clula del msculo esqueltico. MiR-1 inhibiendo Hsp-70 conducir a
Apoptosis en los osteoblastos [61]. Adicionales miRNAs que funcionan en
Los cardiomiocitos parecen estar regulados por NO incluyendo miR-133a,
MiR-210, y miR-34a [49]. Las acciones de NO en la regulacin de miARN
Parecen ser un componente significativo en la progresin
Diversas enfermedades. Tambin es importante sealar que no slo NO
Regulan los niveles de miARN, pero los estudios tambin han demostrado que miARN
puede
Influyen en la sntesis de NO [3

2. Conclusin
Los mecanismos epigenticos regulan la expresin gnica a travs de la transcripcin
Y el control traslacional para influir en el destino celular normal
Y los resultados de varios estados patolgicos. Ahora ha sido
Demostr que numerosos cambios hereditarios en la expresin gnica
Puede ser regulada por NO a travs de diversos mecanismos a la
Histona, ADN y nivel de microRNA. Se ha demostrado que el xido ntrico
Para realizar las actividades, niveles de expresin y localizacin celular
De numerosas enzimas reguladoras epigenticas. Efectos directos
De NO resultan de la unin de NO al hierro cataltico y la inhibicin
Actividad enzimtica, por ejemplo, en histonas desmetilasas. Estas
Efectos en los cambios inmediatos en el paisaje epigentico de las histonas
Y tienen una influencia significativa y potencialmente duradera
Sobre la expresin de genes asociados. Los efectos de sealizacin de
NO se amplifican y se transducen genmicamente a potencialmente
Reprogramar los perfiles de expresiones genticas para
Fenotipo celular. Adems de los efectos directos del NO sobre la epigentica
Existen numerosos mecanismos indirectos. Uno
rea de inters que emergen recientemente es la idea de que las
Cofactores enzimticos, muchos de los cuales son productos Procesos, contribuyen a la
regulacin epigentica. Esto se basa en
La observacin de que la mayora de las enzimas modificadoras de la cromatina
utilizan
Cofactores que son intermedios metablicos: metiltransferasas usan
S-adenosilmetionina (SAM) para donar grupos metilo, acetiltransferasas
Utilizar acetil-CoA para donar grupos acetilo, y quinasas
Utilizar ATP para donar grupos fosforilados. Las desacetilasas pueden usar nicotinamida
Dinucletido de adenina (NAD), y desmetilasas pueden usar
Flavina adenina dinucletido (FAD) o 2-oxiglutarato como coenzimas.
Es bien sabido que el NO puede tener efectos sobre el metabolismo, especialmente
A travs de interacciones con las mitocondrias, y numerosos estudios
Han demostrado que la fluctuacin en estos cofactores, as como
El oxgeno puede afectar a la actividad de las enzimas epigenticas [62, 63].
Biolgicamente hay tres fuentes de NO en el cuerpo humano.
Puede ser generado enzimticamente a partir de enzimas NOS, puede ser
Producido a partir de la reduccin de nitrito que proviene de la dieta,
Y puede liberarse de varios compuestos de frmaco. El biolgico
Los efectos del NO, sin embargo, son independientes de su fuente y
Determinado ms por su concentracin local, duracin de la produccin,
Y el microambiente local. Esto implica que los efectos
De nitrato / nitrito en la dieta o las actividades de los frmacos liberadores de NO
Pueden propagarse parcialmente a travs de medios epigenticos. Ya sea epigentica
Mecanismos de NO sealizacin son ms frecuentes bajo
Patolgicos, fisiolgicos o farmacolgicos
estar determinado. Varias lneas de evidencia demuestran, sin embargo,
Que este "tercer pilar" de la sealizacin NO es claramente diferente
A partir de mecanismos cannicos tales como la activacin de guanilato soluble
Ciclasa (sGC) o S-nitrosacin de protenas. Adems de la creciente
Lista de funciones para el NO, ahora se puede caracterizar como
Un regulador epigentico producido endgenamente de la expresin gnica
Y Fenotipo celular.
Regulacin del crecimiento: Mecanismos
epigenticos?

Abstracto El desarrollo del organismo est controlado tanto por los programas genticos
como por el medio ambiente para asegurar un xito reproductivo en los adultos. El
crecimiento lineal es Una parte importante del desarrollo y es mayormente controlada por
factores genticos. Sin embargo, la variabilidad de la altura en una especie dada no
parece Para ser especficamente asociado con SNP. Esto sugiere que el medio ambiente
puede desempear un papel crucial. De acuerdo, una parte importante de las Genes
presentes CpG isla en su promotor proximal, lo que indica la posible participacin de los
mecanismos epigenticos. En mamferos, el crecimiento lineal Est regulado por el
sistema IGF, con IGF-I e IGF-II durante el perodo fetal, e IGF-I est incluido dentro del eje
somatotrpico durante El perodo posnatal. La nutricin durante el perodo de lactancia
programa el crecimiento lineal y el tamao adulto a travs de una modulacin del eje
somatotrpico Desarrollo y del establecimiento de su actividad ms adelante. El estudio
de los mecanismos subyacentes sugiere dos oleadas de programacin, que Tanto la
adaptacin estructural durante el perodo postnatal temprano como la adaptacin
funcional permanente en la edad adulta. El primero puede implicar un Estimulacin del
crecimiento axonal de las neuronas GHRH por IGF-I en las primeras semanas de vida,
mientras que la ltima podra implicar modificaciones epigenticas permanentes en edad
adulta.

urrculum
El desarrollo del organismo est controlado a la vez por los programas genticos y por
el medio ambiente.
l'ge adulte. La cultura es una parte importante del desarrollo y est controlada por
los factores genticos.
Sin embargo, la variabilidad de la talla en una especie de datos no estn
completamente bajo la dependencia del fondo gentico. Ceci
Sugerir como traduccin de "environnement jouer" En accord avec cela, une proportion
importante des gneslis la croissance prsente un
lot CpG en su promocin proximal, ce qui indique l'implication potentielle de
mcanismes pigntiques. Chez les mammifres, la croissance
Staturale est rgule par le systme IGF, con la IGF-I y la IGF-II durante el perodo
ftale y la IGF-I is inclus dans l'axe somatotrope lors la
Perodo postnatale. La nutricion pendiente el periodo transitoire que el programa de
allaitement la croissance la estatura y la talla adulte por una
Modulacin del desarrollo del hacha somatotrope y de su actividad a la edad adulta.
El estudio de los mecanismos subyacentes sugiere dos vagues
De la programacin
Que impliquen a la vez
Adaptacin estructural en perodo postnatale precoce y una adaptacin funcional
permanente
Chez l'adulte
La primera vez que implique una estimulacin
Directo de la
vida
Alors que la seconde pourrait impliquer des modifications pigntiques permanentes
l'ge adulte.
2017 Elsevier Masson SAS. Tous droits rservs.

El desarrollo del organismo es uno de los ms complejos Procesos que ocurren en

mamferos. Est estrechamente controlado por ambos Programa gentico y el medio
ambiente para asegurar al organismo un Organognesis adecuada, alcanza su altura final
as como funcional Regulaciones que permiten un xito reproductivo como adultos.
Noventa.
Creacin de las neuronas GHRH por el IGF-I en las primeras
Semanas de
El porcentaje de variacin en la estatura de los adultos puede estar relacionado con
factores genticos.
Sin embargo, los estudios mostraron que slo una fraccin de la variabilidad
En altura normal puede asociarse con el polimorfismo por
Polimorfismo nucleotdico-genoma amplia estudios de asociacin
(SNP-GWAS) [1 - 3]. Esto sugiere que la variabilidad de la
Slo parcialmente regulada por cambios genticos. Por otro lado,
Se ha observado que ms del 80% de los genes asociados con
Altura contienen una isla CpG, sitio de ADN-metilacin en la
Genoma, y que el 50% de ellos presentan una transcripcin asociada
Con su grado de metilacin del ADN. As, la epigentica
Pueden desempear un papel destacado en la determinacin de
Adulto altura. De acuerdo, hay cada vez ms evidencia que sugiere
Que los factores ambientales perinatales desempean un papel importante
En la modificacin de la trayectoria de vida y crecimiento.
El crecimiento offetuses se ha asociado con ambas modificaciones genticas
Y en respuesta a los cambios de su entorno. los
Observado notablemente despus de la exposicin de los fetos,
Su madre embarazada, al estrs, los productos qumicos y la desnutricin [4, 5].
En muchos casos, estas exposiciones inducen un crecimiento intrauterino
Retraso (IUGR) de los fetos que adems estaba asociado
Con un mayor riesgo de desarrollar patologas cardiometablicas
En la adultez [5]. Se cree que los mecanismos involucrados
Tanto las alteraciones estructurales (anatmicas) como las adaptaciones funcionales
Al entorno predicho que se experimentar
mas tarde. Este principio tambin se conoce como el mtodo predictivo adaptativo
Mecanismo de respuesta y es el pensamiento que subyace al desarrollo
Origen de la salud y las enfermedades (DOHaD). En cuanto a los cambios estructurales,
se ha informado que la alteracin
Del medio ambiente mundial (nutricin, hormonas ...) puede inducir
Modificacin permanente en rganos en desarrollo y clula de impacto
Nmero: en el modelo de rata con IUGR inducido por un tero bilateral
Ligadura de la gestacin de la arteria, se ha informado de que la
La masa celular fue del 50% de los controles en ratas de 15 semanas de edad y menos
Que un tercio de los controles a las 26 semanas de edad [6, 7].
Adems de las adaptaciones estructurales, los cambios ambientales
Puede inducir modificaciones funcionales. Estas modificaciones
Por supuesto, las consecuencias de los cambios estructurales,
Sino tambin directamente inducido por modificaciones del medio ambiente.
Estas modificaciones funcionales pueden ser permanentes y
Gran parte de ellos se cree que implican regulaciones epigenticas.
Los procesos epigenticos pueden implicar la metilacin del ADN,
Modificaciones post-traduccionales (PTM) de las protenas histonas y
MicroRNA. MicroRNAs inhiben la traduccin de ARN, actuando en el
Post-transcripcional. Modificaciones epigenticas como el ADN
Metilacin y las modificaciones de las histonas modulan la transcripcin de genes
Organizando la conformacin y accesibilidad de la cromatina.
La metilacin del ADN se produce principalmente en una citosina posicionada
inmediatamente
Antes de una guanina (sitios CpG) y estos sitios son en su mayora
Distribuidos en la isla. La metilacin del ADN se asocia clsicamente
Con inhibicin de la expresin gnica. Isla CpG estn presentes en
Y una subparte de genes no impresos. Metilacin
De ADN en genes impresos permite el seguimiento de su
Origen parental y su represin en consecuencia. Metilacin del ADN
En genes no imprimidos que inhiben su actividad transcripcional
En respuesta a un programa de desarrollo, as como a programas externos
(ambientales)
Estmulos Por otro lado, la regulacin del gen
Expresin a travs de las histonas post-translacional modificaciones es mas complejo.
De hecho, las histonas PTM pueden estimular la transcripcin,
Promover la elongacin del ARNm o inhibir el contraste
La transcripcin, dependiendo de la marca de histona. Por ejemplo,
La acetilacin de la lisina 9 de la histona H3 (H3K9ac)
Presenta un efecto permisivo relajando la conformacin de la cromatina
Mientras que la trimetilacin de la lisina 9 de la histona H3
(H3K9me3) inhibe la transcripcin. Sin embargo, la trimetilacin
De la lisina 4 de la histona H3 (H3K4me3) estimula la
transcripcin.
Primeras implicaciones de los mecanismos epigenticos en la regulacin
De desarrollo a raz de una alteracin del entorno nutricional
Destacadas en nios de mujeres embarazadas que
Hambre experimentada en holands durante el invierno al final de la
Segunda Guerra Mundial (la cohorte holandesa de hambre), que nacieron
Para la edad gestacional. Posteriormente, tambin presentan una mayor
susceptibilidad
Para desarrollar patologas cardiometablicas: obesidad, insulina

Resistencia, hipertensin, etc. [8-10]. Dependiendo del perodo de Exposicin, los genes impresos
y los genes no impresos pueden presentar Marcas epigenticas alteradas. En cuanto a los genes
no impresos, epigenticos Alteraciones se han asociado notablemente con genes Involucrados en
el metabolismo (por ejemplo, PPAR, RXRA) [11, 12]. El metabolismo y el crecimiento lineal estn
fuertemente interrelacionados y Ambos parecen muy afectados durante el desarrollo perinatal. Las
modificaciones epigenticas parecen estar implicadas en la regulacin De crecimiento lineal y
desarrollo como 72 de 87 Genes en humanos contienen una isla CpG dentro de su Promotor [13].
Curiosamente, la frecuencia de estos genes para El anfitrin de una isla CpG es mayor de lo
esperado (88% vs 45%). De Nota, 25 fueron encontrados para ser impreso [13]. Esto es coherente
Con las observaciones de que la alteracin del tamao corporal se observa en Sndromes como
Beckwith-Wiedmann, Silver-Russell o PraderWilli. Con respecto a los genes asociados a la altura
no impresos, Metanlisis interesantes sugieren que algunos operan como parte De la red web.
Estos genes estn implicados en la proliferacin celular / apoptosis O han sido implicados en
cnceres cuando Alterado [13]. Estos genes pueden ser modificados en respuesta A los cambios
ambientales y modular el desarrollo fetal en consecuencia Lso ser controlado a travs de
factores circulantes y hormonas como
Los factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) y la hormona del crecimiento
(GH). Existen dos formas de IGF, y tanto el IGF-II como el IGF-I controlan
El desarrollo del feto. Durante el perodo postnatal, el crecimiento
Se controlan principalmente por GH que actan notablemente a travs de IGF-I.
De hecho, el IGF-I, expresado de manera ubicua por prcticamente todos los
Clulas, es predominantemente secretada por el hgado en respuesta a GH
Durante el perodo postnatal.
El IGF-I es altamente sensible al estado nutricional durante ambos
Fetal y posnatal. Para estudiar si la regulacin de
Crecimiento lineal por nutricin puede involucrar IGF-I, hemos
Modelo de ratn. Hemos modificado la nutricin de los cachorros durante
Perodo de lactancia (de 1 a 16 das de vida) cambiando el
Tamao de la camada al nacer por fomento cruzado [14]. El aumento de la basura
Tamao de 6 a 10 cachorros por presa induce una restriccin en cachorros mientras
La disminucin de hasta 3 cras por presa induce una sobrealimentacin. En
Acuerdo, la insulina, la leptina y los niveles circulantes de IGF-I en 10 das
Los cachorros lactantes viejos se cambian en consecuencia. El transitorio y
Sutil modificacin de la nutricin durante el perodo postnatal temprano
Modula el crecimiento lineal y programa la altura final (naso-anal
Longitud) de los ratones [14]. Curiosamente, esta variacin del crecimiento lineal
Por su modulacin nutricional transitoria se asocia con una
Desarrollo coherente del eje somatotrpico. De hecho, los ratones
Que experimentaron una restriccin nutricional slo durante la lactancia
Perodo son ms ligeros que los adultos y presentan un
Retardo de crecimiento postnatal. Esto se asocia en ratones de 20 das
De edad y en adultos con disminucin coherente de la hipfisis GH
Contenido de IGF-I circulante y niveles plasmticos de ALS,
Hormona liberadora (GHRH) expresin gnica en el hipotlamo,
Ms una hipoplasia pituitaria somatotrofas (clulas GH +)
Y un aumento de la expresin de los genes de la somatostatina (SRIH) en el
hipotlamo.
En contraste, los ratones sobrealimentados durante la lactancia son ms pesados,
Ms altos y presentan un aumento en el contenido de glutamato gH, etc.
Los resultados sugieren que la nutricin durante los programas de lactancia lineal
Crecimiento a travs de una modificacin en el ajuste de la somatotropa eje. Adems, observamos
que el establecimiento de los pases en desarrollo Somatotropic por la nutricin puede implicar
IGF-I directamente. De hecho, la baja regulacin de la IGF-I de sealizacin en ratn Cerebro a
travs de una invalidacin heterozigtica de la Igf-1R en el Sistema nervioso central por el mtodo
Cre-Lox tambin se Con un retardo de crecimiento permanente [15]. El retraso en el crecimiento
Observado es contrario a la intuicin en lo que se refiere al bien conocido Retroalimentacin del
IGF-I sobre la regulacin del eje somatotrpico Hipotalmico en adultos. Estos datos sugieren que
el IGF-I, durante El perodo post-natal temprano, estimula el eje somatotrpico Antes de cambiar
como efectos de retroalimentacin negativa en adultos una vez El eje somatotrpico est
completamente maduro (Fig. 1). De acuerdo, nosotros Observaron que el retraso de crecimiento en
estos ratones transgnicos Una cintica similar y alteraciones en comparacin con el tipo salvaje
Ratones restringidos durante su lactacin: disminucin de la hipfisis GH Contenido de IGF-I
circulante y niveles plasmticos de ALS, Hormona liberadora (GHRH) expresin gnica en el
hipotlamo, Ms una hipoplasia pituitaria somatotrofas (clulas GH +) Y un aumento de la
expresin de los genes de la somatostatina (SRIH) en el hipotlamo. Adems, los resultados
obtenidos con estos ratones Que la programacin del crecimiento lineal por nutricin durante la El
periodo posnatal temprano implica dos ondas. El primero es Asociado a una alteracin transitoria
durante las primeras 2 semanas De vida que induce una primera adaptacin durante el perodo
postnatal perodo. La segunda onda implica una funcin funcional permanente Alteracin durante la
edad adulta. Dado que los ratones mutantes presentan una Alteracin de la sealizacin de IGF-I
slo en el sistema nervioso central, Estos datos sugieren una fuerte participacin de la parte
hipotalmica En el ajuste del eje somatotrpico. Con respecto a la primera ola, los cachorros
de 10 das de edad que llevan el Igf-1R
Heterocigousinvalidation orrestricted in lactation ambos presentan una
Retraso de la inervacin de la eminencia mediana por axones de GHRH
Neuronas Esto parece especfico ya que no hay alteracin de la eminencia mediana
La inervacin por axones de neuronas SRIH se observ en
Mismos individuos. Se sabe que GHRH estimula la secrecin de GH
En los adultos, sino que tambin estimula la proliferacin y la diferenciacin
De los somattrofos durante el perodo perinatal [16]. En esto
Manera, la falta de GHRH durante esta ventana crtica est asociada
Con hipoplasia somatotrfica y retardo de crecimiento postnatal.
De acuerdo con la inervacin tarda de la eminencia mediana
Por el axn GHRH, el inicio de la hipoplasia somatotrfica y la falta
De la acumulacin de GH en la pituitaria se observa en ratones mutantes
A los 20 das de edad. Estos datos sugieren que el IGF-I puede ser un
Potencial principal en el eje somatotrpico y crecimiento lineal
Programacin por nutricin durante la lactancia.
El estudio de los mecanismos subyacentes sugiere que el IGF-I
Pueden afectar directamente al desarrollo de las neuronas GHRH. Ya que
Se sabe que IGF-I modula el proceso celular mltiple como la morfologa celular,
Proliferacin y supervivencia, primero determinamos si
Restriccin nutricional estuvo asociada con cualquier alteracin
Neuronas GHRH ontogenia. Cachorros restringidos y normalmente alimentados
Presente con un nmero similar de neuronas GHRH. Por lo tanto, la
Disminucin de la inervacin de la eminencia mediana por su axn en
10 das de edad sugieren un papel del desarrollo celular de IGF-Iin y
Potencialmente una alteracin del crecimiento axonal (Fig. 2). Como GHRH.

Las neuronas invierten la eminencia mediana a travs de una

Lazo altamente difcil de seguir por la inmunohistoqumica clsica,
Se aplic un enfoque in vitro mediante el cultivo de explantes de
Ncleo arqueado. De acuerdo con nuestra hiptesis, observamos
Que el IGF-I estimula significativamente el crecimiento del axn de GHRH
Neuronas en 24 horas en explantes arqueados recolectados de
Alimentados cachorros [17]. Curiosamente, este efecto parece preferencial ya que
No se observaron estimulaciones para otras poblaciones del arco
Nucleo estudiado todo de una vez (es decir, neurofilamento + axones) o
Especficamente (por ejemplo, axones AgRP +). El crecimiento del axn estimulante
El efecto del IGF-I sobre las neuronas GHRH implica tanto el PI3K / AKT
Y, en menor medida, las vas de sealizacin MERK / ERK
Como se revel por co-estimulaciones de IGF-I con LY294002 y
PD0325901 inhibidores especficos, respectivamente. Sin embargo, cuando
Los explantes del ncleo arqueado se cosecharon a partir de cachorros restringidos,
Observamos que las neuronas GHRH perdieron su capacidad para responder
A la estimulacin con IGF-I a pesar de un ambiente controlado in vitro
[17]. Los experimentos de transferencia Western en explantes de ncleo arqueado
sugieren
Que la ausencia de axn de alargamiento observado para GHRH
Las neuronas en cachorros restringidos se asocia con deterioro de la activacin
De la va de sealizacin PI3K / AKT, donde la activacin
Se mantiene la capacidad de la va ERK / MEK.
Respecto a la segunda ola de programacin del somatotrpico
Por la nutricin durante la lactancia, parece
Particularmente el SRIH (LK, comunicacin personal).
De hecho, ambos modelos de ratn que llevan una mutacin heterozigtica
De Igf-1R en su sistema nervioso central o en su sistema nutricional
Restringido durante la lactancia presente con el aumento del gen SRIH
Expresin en la edad adulta. SRIH aumenta despus de la pubertad pero
No se asocia ninguna alteracin en el nmero de neuronas SRIH en la
Periventricular (PeV). Estos cambios parecen
Gen y sugieren la participacin de mecanismos epigenticos.
De acuerdo con esta hiptesis, el promotor Srih contiene
Una isla CpG cerca de su sitio de inicio. El aumento del gen SRIH
Expresin est asociada con una reduccin coherente del gen GH
Expresin en la pituitaria.
Xpresin en la pituitaria.
As, los conocimientos actuales obtenidos de ratones transgnicos
Modelos de tipo salvaje que experimentaron cambios transitorios
Ambiente nutricional durante el perodo de lactancia sugieren que
El crecimiento lineal puede ser programado directamente por la nutricin. Esta
programacin
Involucra la adaptacin en la puesta en marcha del sistema somatotrpico
Eje que regula el crecimiento postnatal en mamferos. Esta programacin
Parece implicar dos ondas. La primera, durante la primera
2 semanas de vida, implica una modificacin estructural transitoria con
El retardo de crecimiento axonal de las neuronas GHRH, y un permanente
Uno con la hipoplasia hipofisaria en los somatotrficos por 20 das de
En adelante La segunda ola de programacin aparece a continuacin
E implica alteracin permanente de la expresin gnica con
El aumento del ARNm de SRIH. Esta segunda ola puede
Mecanismos epigenticos como la PTM histona y la metilacin del ADN.
Divulgacin de intereses
Una parte del trabajo revisado aqu fue apoyada por una subvencin
De los laboratorios Sandoz France a L.K. Y Y.L.B.
M.C., S.S., L.D. Declaran que no tienen intereses competitivos