UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE MEDICINA

GUA DE PRCTICAS

BIOQUMICA

SEGUNDO NIVEL

REA ACADMICA BSICA.

CARMEN VARIA BARBA GUZMN.

BILOGA GENETISTA.
MASTER EN CIENCIAS BIOLGICAS.

Octubre 2016-Marzo 2017.

Ambato-Ecuador
2016
 CONTENIDO

INTRODUCCIN 3
OBJETIVOS 4
LUGAR DONDE SE DESARROLLARN LAS PRCTICAS 5
INDICACIONES GENERALES PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS 5
GUA DE PRCTICA N 1 Normas de Bioseguridad y Extraccin Sangunea. 8
GUA DE PRCTICA N 2 Determinacin de Glucosa en sangre. 12
GUA DE PRCTICA N 3 Determinacin de Triacilglicridos en sangre. 19
GUA DE PRCTICA N 4 Determinacin de Colesterol en sangre. 25
GUA DE PRCTICA N 5 Determinacin de Protenas Totales en sangre. 32
GUA DE PRCTICA N 6 Determinacin de cido rico en sangre. 37

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INTRODUCCIN:

El desarrollo de la Bioqumica ha revolucionado las ciencias mdicas. La Bioqumica es un campo

multidisciplinario cuya finalidad es la aplicacin de la Ciencia Qumica para contribuir a la
resolucin de problemas de salud. El continuo progreso que experimenta esta ciencia hace
indispensable que el mdico est familiarizado con sus fundamentos y sus aplicaciones biomdicas.
La Bioqumica no solo han permitido conocer bases metablicas de la fisiologa y patofisiologa,
tambin ha permitido avanzar en el diagnstico, tratamiento, pronstico y prevencin de muchas
enfermedades.

Las prcticas de laboratorio resaltarn los fundamentos, metodologas e interpretacin de las

herramientas de Bioqumica aplicada al diagnstico y tratamiento de enfermedades. De la misma
forma durante las prcticas de laboratorio se fomentar los valores profesionales y la tica, el trabajo
en equipo, la bioseguridad durante el trabajo en los laboratorios, as como la comunicacin personal
y cientfica.

De esta forma las clases prcticas de Bioqumica proporcionan un panorama actualizado de los
fundamentos tericos y prcticos de esta ciencia relacionados con importantes herramientas de uso
frecuente en el ejercicio mdico profesional para el diagnstico y tratamiento de enfermedades.

La funcin del laboratorio de Bioqumica es realizar anlisis, tanto cualitativos como cuantitativos,
en fluidos corporales como sangre, orina, lquido seminal, lquido cefalorraqudeo, etc. Para que los
resultados de dichos anlisis sean tiles a los mdicos en el diagnstico, tratamiento y seguimiento
de una enfermedad, stos debern realizarse bajo un estricto control de calidad logrando niveles
ptimos de precisin y exactitud, caractersticas deseables en cualquier resultado de diagnstico.

En esta gua se exponen detalladamente cada una de las prcticas a realizarse, stas, aunque son
sencillas, son representativas y estn de acuerdo con el tiempo y recursos de la facultad y la Unidad
Enseanza aprendizaje de la carrera de Medicina. Cada una de estas prcticas ha sido rediseada
y revisada en lo que respecta a forma y contenido.

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OBJETIVOS:

1. Identificar los conceptos generales de la estructura qumica que constituye a la clula

para comprender los procesos metablicos que en ellas se realizan, utilizando esquemas
y siguiendo los patrones bioqumicos para identificar las alteraciones estructurales y
metablicas que se producen en el proceso salud enfermedad.

2. Analizar la estructuracin y funcionamiento de la respiracin celular y la importancia

metablica de los glcidos, utilizando modelos bioqumicos y siguiendo patrones
metablicos para identificar las alteraciones metablicas que se producen en el proceso
salud enfermedad.

3. Reconocer la estructura qumica de los principales Lpidos y los procesos metablicos

que realizan las clulas del organismo para asimilar y utilizar los productos de su
metabolismo, utilizando modelos bioqumicos y siguiendo patrones metablicos para
identificar las alteraciones metablicas que se producen en el proceso salud enfermedad.

4. Describir los mecanismos de los procesos metablicos de los aminocidos y protenas,

analizando las alteraciones que pueden sucederse por una mala expresin de la
informacin gentica en la sntesis proteica, utilizando modelos bioqumicos y siguiendo
patrones metablicos para identificar las alteraciones metablicas que se producen en el
proceso salud enfermedad.

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LUGAR DONDE SE DESARROLLARN LAS PRCTICAS:
Las prcticas se desarrollarn en el laboratorio de Clnico de la Facultad de Ciencias de la Salud,
ubicado en el campus de Ingahurco.

INDICACIONES GENERALES PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS:

El trabajo en el Laboratorio de Bioqumica requiere del cumplimiento de las de las normas de
bioseguridad establecidas por la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Tcnica de
Ambato.

Normas de proteccin personal:

1. Se usarn en todo momento monos, batas o uniformes especiales para el trabajo en el
laboratorio. El material de proteccin debe cubrir brazos, piernas, torso y pies. Estn
prohibidos el uso de sandalias, zapatos sin puntera, pantalones cortos, faldas, camisetas
cortas.
2. Se usarn guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que puedan entraar
contacto directo o accidental con sangre, lquidos corporales y otros materiales
potencialmente infecciosos o animales infectados. Una vez utilizados, los guantes se
retirarn de forma asptica y a continuacin se lavarn las manos
3. El personal deber lavarse las manos despus de manipular materiales y animales
infecciosos, as como antes de abandonar las zonas de trabajo del laboratorio.
4. Se usarn gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de proteccin cuando sea necesario
proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos y fuentes de radiacin ultravioleta
artificial.
5. Estar prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio, por ejemplo, en cantinas,
cafeteras, oficinas, bibliotecas, salas para el personal y baos.
6. En las zonas de trabajo estar prohibido comer, beber, fumar, aplicar cosmticos o manipular
lentes de contacto.
7. Estar prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en las zonas de
trabajo del laboratorio.
8. La ropa protectora de laboratorio no se guardar en los mismos armarios o taquillas que la
ropa de calle.

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Normas de bioseguridad durante los procedimientos:

1. Lea con atencin, antes de cada prctica de laboratorio, las indicaciones de la prctica. Siga
todas las instrucciones a menos que el profesor realice alguna modificacin.
2. Estar estrictamente prohibido pipetear con la boca. No se colocar ningn material en la
boca ni se pasar la lengua por las etiquetas. No se debe llevar las manos a la boca ni a la
cara.
3. Todos los procedimientos tcnicos se practicarn de manera que se reduzca al mnimo la
formacin de aerosoles y gotas.
4. Se limitar el uso de jeringuillas y agujas hipodrmicas, que no se utilizarn en lugar de
dispositivos de pipeteo ni con ningn fin distinto de las inyecciones por va parenteral o la
aspiracin de lquidos de los animales de laboratorio.
5. Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales infecciosos
se comunicarn inmediatamente al supervisor del laboratorio. Se mantendr un registro
escrito de esos accidentes e incidentes.
6. Se elaborar y seguir un procedimiento escrito para la limpieza de todos los derrames.
7. Antes de utilizar un compuesto, fijarse en la informacin que aparece en su rtulo.
8. Si se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, se debe lavar inmediatamente con
mucha agua y avisa al profesor.
9. Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el
profesor.

Normas de bioseguridad en las zonas de trabajo del laboratorio:

1. El laboratorio se mantendr ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados con el

trabajo.
2. Cada grupo de prcticas es responsable de su zona de trabajo y de su material. Se trabajar
con cuidado, destreza, habilidad y de manera organizada. As mismo se mantendr cada
mesa de trabajo limpia, seca y ordenada.
3. Las superficies de trabajo se descontaminarn despus de todo derrame de material
potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.

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 4. Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados debern ser descontaminados antes
de eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
5. El embalaje y el transporte de material debern seguir la reglamentacin nacional o
internacional aplicable.
6. Las ventanas que puedan abrirse estarn equipadas con rejillas que impidan el paso de
artrpodos.

BIBLIOGRAFA
ava
Murray R., Granner D., Rodwell V., 2012. Harper Bioqumica Ilustrada. 29 edicin; Mxico
D.F.; Editorial El Manual Moderno.
ma
Stryer L., Berg J., Tymaczko J., 2012, Bioqumica con Aplicaciones Clnicas. 7 edicin;
Barcelona; Editorial REVERTE.
ma
William J., Marshall S., 2013, Bioqumica Clnica. 7 edicin; BARCELONA; Editorial
ELSEVIER MOSBY.

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GUA DE CLASE PRCTICA N 1
Tema: INTODUCCIN AL LABORATORIO.
Subtema: NORMAS DE BIOSEGURIDAD Y EXTRACCIN SANGUNEA.
Objetivos:

Conocer el trabajo de laboratorio y sus normas de bioseguridad.

Desarrollar las habilidades necesarias para extraer sangre perifrica en un ser humano.

Sumario:
1. Precauciones Universal de Bioseguridad.
2. Toma de muestra de sangre venosa y capilar.

Resultados de aprendizaje:
El estudiante pone en prctica las normas de Bioseguridad durante los diferentes procederes en el
Laboratorio en cada sesin del mismo.

Breve fundamentacin terica del tema:

La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta tcnica el principal mtodo
de obtencin de sangre en los laboratorios de anlisis clnicos. A partir de la sangre sin
anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene anticoagulante, se obtiene plasma. Del plasma
forma parte el fibringeno, sustancia de la que carece el suero.

Instrucciones: Leer el acpite de instrucciones generales

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Prerrequisito:
Tarea 1: Elaborar un cuadro resumen donde se pongan de manifiesto los diferentes tipos de riesgo
a nivel del laboratorio y las medidas de bioseguridad para mitigar los daos producto de los mismos.
Materiales y equipos a utilizar en la prctica:
EDTA (tapn lila): Tubo estril con anticoagulante EDTA: sal de cido etileno diamina tetractico
di o tripotasica o di sdica, concentracin: 1,2 a 2,0mg/ml de sangre (4,1 a 6,8mmol/l de sangre)
basado en EDTA anhidro. Para uso en hematologa
Citrato de sodio (tapn azul 1/9 y tapn negro 1/4): citrato trisdico con 0,100 a 0,136 mol/l de
cido ctrico. Se recomienda 0,105 mol/l para lograr la estandarizacin recomendada por la WHO
para que quede a 3,2%. Se usa para pruebas de coagulacin (TP, TTP, fibringeno), utilizar l parte
de citrato y 9 de sangre entera.
Tapn rojo: Tubo estril sin anticoagulantes ni aditivos ni geles separadores. Para obtener suero.
Los tapones de colores con una banda Gris agregada indican que el tubo corresponde a uno los
anteriores y que adems contiene gel separador de suero o plasma

Tareas a desarrollar en la prctica: Los estudiantes en el transcurso de la prctica realizarn

las siguientes tareas.
Tarea 1. Realizar extraccin de sangre venosa.
Tcnica de la puncin venosa:
1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exmenes corresponda al mismo
2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efectivamente el paciente no ha
ingerido alimentos
3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que va a ser sometido.
Se debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su tensin.
4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o en decbito
prono, para tener acceso fcil y cmodo a la fosa antecubital.
5. Hay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de la muestra, el
torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel, las jeringas, cuando sea necesario,
la aguja estril para extraccin de sangre y dispositivo utilizado para fijar la aguja al tubo de
extraccin al vaco.
6. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms palpables.

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7. Se selecciona una vena adecuada para la puncin. Se prefieren las venas de la fosa
antecubital, en particular la cubital interna y la ceflica. Tambin pueden utilizarse las venas
de la mueca, el tobillo y la mano. Si existiera ya un catter intravenoso en un brazo, se
utilizar el otro para la extraccin de la muestra.
8. Preparar la cpsula insertando la aguja, pero dejando un poco flojo la capucha de la parte
externa de la misma para retirarlo al momento de la puncin.
9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin
(aproximadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo). No hay que dejar nunca el
torniquete ms de 1 minuto. En casos excepcionales no debe usarse el torniquete, por
ejemplo, cuando en el pedido est el Calcio.
10. Se limpia la zona de la venopuncin con una torunda embebida en solucin en alcohol
antisptico. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia fuera
siguiendo un movimiento en espiral. Se deje que la zona se seque y no se toca con ningn
objeto que no haya sido esterilizado previamente.
11. Se fija firmemente la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con la
ayuda de los dedos pulgar y medio, o ndice y pulgar.
12. Se realiza la venopuncin:
13. a) Se penetra a travs de la piel con la aguja formando un ngulo de aproximadamente 15
con el brazo y con el bisel hacia arriba. Se sigue la direccin de la vena con la aguja.
14. b) Se introduce la aguja con suavidad, pero con la suficiente rapidez para reducir las
molestias del paciente. No hay que enterrar la aguja.
15. c) Si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs del mbolo, con tensin lenta y uniforme a
medida que la sangre va fluyendo en su interior. No debe realizarse este movimiento con
excesiva rapidez, ya que podra hemolizarse la sangre o colapsarse la vena.
16. d) Si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se dirigir el
tubo todo lo posible hacia delante en el dispositivo de sujecin. Al mismo tiempo se sujeta
tenuemente la aguja en su lugar. Una vez que haya llenado el tubo, se retira, cogindolo por
su extremo y tirando suavemente de l.

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 Tarea 2. Realizar extraccin de sangre capilar.
Puncin capilar:
1. Tener todo el material en perfecto orden: algodn, alcohol, lancetas, tubos capilares y
plastilina.
2. Pedir al paciente que se frote el dedo pulgar hasta que obtenga una buena irrigacin de la
zona de puncin.
3. Desinfectar la zona y secarla con otro algodn libre de alcohol
4. Sacar la lanceta y realizar la puncin de forma rpida y firme.
5. Desechar la primera gota para evitar contaminacin con restos de alcohol.
6. Colocar el capilar en la zona e ir llenndolo hasta las tres cuartas partes del tubo.
7. Retirarlo de la zona y colocar un algodn con poco alcohol y solicitar al paciente que se
sostenga por unos minutos para que deje de fluir la sangre.
8. El capilar sellarlo con plastilina y colocarlo en el lugar designado para ese paciente.

Tarea 3. Poner en prctica las medidas de bioseguridad durante el trabajo en el laboratorio.

Conclusiones: A modo de conclusiones y retroalimentacin. Los estudiantes podrn responder

las siguientes preguntas.

1. Identifique los factores de riesgos que se han puesto de manifiesto durante la realizacin
de la prctica.
2. Elabore un plan de medidas con el objetivo de minimizar daos en caso de producirse un
accidente durante la prctica.

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GUA DE CLASE PRCTICA N 2.
Tema: METABOLISMO DE LOS GLCIDOS.
Subtema: DETERMINACIN DE LA GLUCOSA EN SANGRE.
Objetivos:

Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relacin con diversas

patologas.
Determinar la concentracin de glucosa en estado basal y postprandial en una muestra
biolgica mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.

Sumario:
1. Determinacin de las concentraciones de glucosa en una muestra de sangre.
2. Interpretacin de los resultados teniendo en cuenta las diferentes situaciones fisiolgicas a las
que est expuesto el organismo humano durante las etapas del da.

Resultados de aprendizaje:
El estudiante debe interpretar los cambios fisiolgicos que se producen en la glucemia teniendo en
cuenta los mecanismos con los que dispone el organismo humano para mantener el equilibrio de la
misma.

Breve fundamentacin terica del tema:

Los carbohidratos se definen como aldehdos y cetonas polihidroxlicos (aldosas y cetosas,
respectivamente). Los carbohidratos simples como la glucosa se denominan monosacridos. Dos
monosacridos ligados por un puente llamado glucosdico forman un disacrido. Ms de dos
monosacridos unidos por puentes glucosdicos se denomina polisacrido. Los carbohidratos de la
dieta consisten de monosacridos tales como la glucosa, fructosa y galactosa; de disacridos tales
como la sacarosa, lactosa y maltosa y de polisacridos tales como el almidn. Las enzimas
intestinales convierten a los disacridos y polisacridos en monosacridos.
La principal funcin bioqumica de la glucosa es la de proporcionar energa para los procesos de la
vida. El adenosn trifosfato ("ATP") es la fuente de energa universal para las reacciones biolgicas.
La oxidacin de la glucosa por las vas glucoltica y del cido ctrico es la fuente principal de energa
para la biosntesis del ATP.

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El sistema para regular los niveles de glucosa sangunea funciona para lograr dos fines. El primero
es para almacenar glucosa en exceso en relacin a las necesidades corporales inmediatas en un
reservorio compacto (glucgeno) y el segundo es para movilizar la glucosa almacenada de manera
que mantenga el nivel de glucosa sangunea. La regulacin de la glucosa sangunea es esencial para
mantener al cerebro, cuya fuente energtica primaria es la glucosa, abastecido por una cantidad
constante de la misma. La funcin de la insulina es desviar la glucosa extracelular a los sitios de
almacenamiento intracelular en la forma de macromolculas (como el glucgeno, lpidos y
protenas). Es as que la glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de
necesidad.
En respuesta a la baja glucosa en sangre, como en perodos de ayuno, una serie de agentes
hiperglucemiantes acta en las vas metablicas intermediarias para formar glucosa a partir de las
macromolculas almacenadas. De esta forma las protenas y el glucgeno son metabolizados para
formar glucosa-6-fosfato (gluconeognesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hgado y liberada
a la sangre para mantener los niveles de glucosa sangunea.
Los agentes hiperglucemiantes ms importantes son el glucagn, la epinefrina, el cortisol, la
tiroxina, la hormona de crecimiento y ciertas hormonas intestinales. El comportamiento de cada uno
de estos agentes es diferente en la regulacin de la glucosa sangunea; mientras que la insulina
favorece el metabolismo anablico (sntesis de macromolculas), estas hormonas, en parte, inducen
el metabolismo catablico para romper grandes molculas.
Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del lmite superior normal para una
edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores altos de glucosa srica en ayunas se
relacionan con suma frecuencia con la presencia de diabetes sacarina, el nmero de enfermedades
y trastornos fisiolgicos que pueden llevar a incrementos mayores es vasto. Los aumentos de la
concentracin de glucosa srica se dan en: respuesta a la tensin, enfermedad de Cushing, diabetes
mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crnica, administracin de algunos frmacos
como diurticos clorotiacdicos porque suprimen la secrecin de insulina, coma hiperosmolar no
cetnico.

La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentracin de glucosa en ayunas, menor

al lmite inferior normal para el grupo de edad y esto sucede en: enfermedad heptica, desnutricin,
posgastrectoma, tolerancia deficiente a la glucosa, administracin excesiva de insulina,
hipoglucemia funcional o espontnea, ingestin de alcohol en ayunas.

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Debido a que la concentracin de glucosa srica por lo general se vuelve anormal slo cuando hay
un trastorno grave de esta interaccin, el verificar la glucosa srica ayuda a evaluar la funcin e
integridad del sistema.
La prueba de glucosa en ayunas evala de modo aproximado la capacidad del cuerpo para regular
la glucosa y proporciona informacin acerca de la clase de anormalidad, si es que la hay. No se
tomarn alimentos ni bebidas, excepto agua, cuando menos por ocho horas antes de tomar la
muestra.

Instrucciones: Lea el acpite de instrucciones generales.

Prerrequisito:
Tarea 1: Elaborar un resumen donde se explique desde el punto de vista molecular el proceso de
adaptacin o control de la glucemia desencadenado en un individuo normal durante el estado de
ayuno.

Materiales y equipos a utilizar en la prctica:

La enzima glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de glucosa a gluconato y perxido de hidrgeno.
La concentracin de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse aparendolo con un
indicador de peroxidasa.
La determinacin de glucosa se efecta mediante el mtodo de Trinder segn las siguientes
reacciones:

GOD
Glucosa + O2 + H2O = H2O2 + Gluconato
POD
2H2O2 + Fenol + 4-AF = Quinona + 4H2O . Abreviaturas: GOD = Glucosa
oxidasa
POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona

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PREPARACIN
MUESTRA CLNICA:

1. Suero o plasma venoso.

2. La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho horas cuando menos
antes de la prueba.
3. La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo para suero el cual no contiene
anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA anticoagulante para obtener plasma.
4. La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el suero y plasma. (9)
5. La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 das a 2-8C. (14)

Nota:
Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o fluoruro no afectan los
resultados.
La hemlisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere. (14)
La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible. (9)
No se han observado interferencias por hemoglobina (4 g/L); bilirrubina
(20mg/L); creatinina (100mg/L), galactosa (1g/L). (14)

REACTIVOS
Reactivo 1
Tampn TRIS pH 7.4
Fenol 92 mmol/L
0.3 mmol/L

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Reactivo 2
Glucosa oxidasa
15000 U/L
Vial de enzimas Peroxidasa 1000 U/L
Estndar 4-Aminofenazona
Sol. Glucosa 2.6 mmol/L
100 mg/L
Control normal Spinreact.
PREPARACIN:
Disolver los enzimas del R.2 en el contenido del R.1.
Esta solucin monorreactiva es estable 1 mes a 2-8C 7 das a 15 25C, al abrigo de la luz.
Nota: Cada reactivo deber ser etiquetado: colocar las iniciales de la persona que lo prepar,
contenido, concentracin, nmero de lote, fecha de preparacin, fecha de caducidad y
requerimientos de almacenamiento.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.
EQUIPO
Espectrofotmetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.
Centrifuga.
MATERIAL
5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.
1 micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10 L. Puntas para micropipeta. Gradilla.
PROCEDIMIENTO
Condiciones de ensayo:
Longitud de onda: 505nm (490-550)
Temperatura: 30/37C
Cubeta: 1cm. Paso de luz
Ajuste a cero con blanco de reactivo.

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Desarrollo de la prctica:

1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Estndar Muestra Muestra Control
Estndar -- 10 L -- --
Muestra -- -- 10 L --
Muestra Control -- -- -- 10 L
Reactivo 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0m L

2. Mezclar e incubar 10 min a 37C 30 min a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia (A) a 505nm.
4. Coloracin estable 30 minutos a temperatura ambiente.

RESULTADOS:
CLCULOS:
Abs. Muestra
mg /dL Glucosa = x Conc. estndar.
Abs. Estndar
mg/dL x 0.0555 = mmol
Concentracin del estndar: 100 mg/dL.(14)

LINEALIDAD DEL MTODO:

El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL.
Si la concentracin de glucosa es superior, diluir la muestra a 1:2 con solucin salina 0.9% y
multiplicar el resultado por 2. (14)

VALORES DE REFERENCIA
mg/dL mmol/L
Suero o plasma: 55-110 3.05 - 6.11
Neonato nacido a trmino: 30-60 1.07-3.3

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Tareas a desarrollar en la prctica: Los estudiantes en el transcurso de la practica deben
desarrollar las siguientes tareas.
Tarea 1. Realizar extraccin, procesamiento de la muestra para la determinacin de glucosa
en sangre.
Tarea 2. Interpretar los resultados de glucemia obtenidos teniendo en cuenta las variaciones
que experimenta la misma en el transcurso del da.

Conclusiones: A modo de conclusiones y retroalimentacin los estudiantes pueden responder

las siguientes preguntas de autoevaluacin.

1. Explique brevemente los mecanismos de regulacin con los que consta el organismo para el
mantenimiento dentro de lmites normales de la glucemia.
2. Explique qu mecanismos moleculares se desencadenan con el objetivo del control de la
glucemia en situaciones especficas como el ayuno, ejercicio fsico y en el estado
pospandrial.

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GUA DE CLASE PRCTICA N 3.
Tema: METABOLISMO DE LOS LPIDOS.
Subtema: DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS EN SANGRE.
Objetivos:

Realizar la determinacin de triglicridos sricos en una muestra biolgica con un mtodo

enzimtico.
Destacar la importancia de los triglicridos en el metabolismo humano y su relacin con
diversas patologas.

Sumario:
1. Determinacin de las concentraciones de Triacilglicridos en una muestra de sangre.
2. Interpretacin de los resultados teniendo en cuenta las diferentes situaciones fisiolgicas a las
que est expuesto el organismo humano durante las etapas del da.

Resultados de aprendizaje:
El estudiante interpreta los cambios fisiolgicos que se producen en las concentraciones de lpidos
(Triacilglicridos) teniendo en cuenta los mecanismos con los que dispone el organismo humano
para mantener el equilibrio de la misma.

Breve fundamentacin terica del tema:

Las fuentes de lpidos pueden ser exgenas o endgenas, sus vas metablicas hacia todas las
reas del organismo y procedentes de ellas constituyen una red compleja de reacciones qumicas
en las que participan molculas individuales y lipoprotenas de gran tamao.
Los triglicridos estn constituidos por glicerol y cidos grasos. Estos forman parte de las 5 clases
de lipoprotenas que transportan a los lpidos en el plasma: quilomicrones, constituidos casi
totalmente por triglicridos dietticos; lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL); lipoprotenas
de densidad intermedia (IDL); lipoprotenas de baja densidad (LDL), conocidas tambin como
lipoprotenas beta y lipoprotenas de alta densidad (HDL), tambin conocidas como
lipoprotenas alfa.
Aproximadamente del 40% del consumo de caloras en la dieta consta de lpidos y alrededor del
35% provienen de lpidos animales y el 5% de lpidos vegetales poli-insaturados. Los triglicridos

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constituyen una porcin importante del (98 a 99%) de los lpidos animales y el resto son colesterol
y otros lpidos.
Los padecimientos en los cuales predominan los triglicridos son: xantoma eruptivo, lipemia
retiniana, organomegalia, pancreatitis, intolerancia a la glucosa, hiperuricemia, aterosclerosis
prematura, diabetes mellitus insulinopnica, disglobulinemia, lupus eritematoso, embarazo, uso de
hormonas, enfermedad por almacenamiento de glucgeno, alcoholismo, enfermedad de Gaucher,
mieloma.
Los incrementos en los valores de triglicridos en el infarto miocrdico pueden durar un periodo
tan prolongado como de un ao. Las concentraciones de triglicridos en s, tienen poco valor de
prediccin y aumentan despus de la ingestin de grasa.

Instrucciones: Lea el acpite de instrucciones generales.

Prerrequisito: Los estudiantes realizarn las siguientes tareas.

Tarea 1: Elaborar un resumen donde se explique desde el punto de vista molecular el proceso de
adaptacin o control de las concentraciones de Triacilglicridos desencadenado en un individuo
normal durante el estado de ayuno.

Materiales y equipos a utilizar en la prctica:

Los triglicridos son hidrolizados enzimticamente a glicerol, el cual, mediante Glicerol cinasa y
Glicerol-P-oxidasa, libera el perxido de hidrgeno que se valora mediante la reaccin de Trinder,
de acuerdo a las siguientes reacciones.

LPL
Triglicridos + H2O = Glicerol + cidos grasos.

GK
Glicerol + ATP = Glicerol-3-P + ADP.

GPO
Glicerol-3-P + O2 = Dihidroxiacetona-P + H2O2.

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POD
H2O2 + 4-AF + p-clorofenol = Quinona + H2O.

La cantidad de la quinona formada es proporcional a la concentracin de triglicridos.

Abreviaturas: LPL = Lipoproteinlipasa; GK = Glicerol Cinasa; GOP = Glicerol-P-oxidasa; POD =
Peroxidasa.

PREPARACIN
Muestra clnica
Suero: El paciente deber encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin ejercicio vigoroso) y
bajo su dieta ordinaria del da anterior a la prueba.
La muestra debe recolectarse en ayuno total de 12 a 14 horas antes de la prueba, excepto agua.
La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el cual no contiene
anticoagulante.

Para separar el suero la muestra debe centrifugarse durante 10 minutos a 3500 rpm.
Nota:
Los triglicridos son estables en suero 3 das a 2-8C o una semana a 15-25C.
La muestra ser inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada. c) Si existe hemlisis.
d) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.
e) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible.

REACTIVOS
Reactivo 1
Tampn GOOD pH 7.5 50mmol/L
Tampn p-clorofenol 2mmol/L
Reactivo 2
Lipoproteinlipasa 150000 U/L Vial enzimas Glicerol Kinasa 500 U/L
Glicerol-P-oxidasa 2500 U/L Peroxidasa 440 U/L
4-Aminofenazona 0.1 mmol/L ATP 0.1 mmol/L

21
ESTNDAR Sol. Triglicridos 200 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparacin:
Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solucin tampn R.1
Nota:
El reactivo al uso es estable 6 semanas a 2-8C o una semana a 15-25C.
Cada reactivo deber ser etiquetado con los siguientes datos: iniciales de la persona que lo prepar,
contenido, concentracin, nmero de lote, fecha de preparacin, fecha de caducidad y
requerimientos de almacenamiento.
Los reactivos no debern utilizarse fuera de la fecha indicada.
No se debern pipetear los reactivos con la boca y se debe evitar el contacto con piel y ojos.

EQUIPO
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 500-550nm. El alumno deber consultar el
manual del espectrofotmetro que va a utilizar para aplicar correctamente las instrucciones
de operacin, datos y caractersticas de funcionamiento del instrumento.
Centrifuga.
Bao de agua a 25 o 37C.

MATERIAL
5 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
1 Micropipetas de 1mL
1 Micropipeta de 10 L Puntas para micropipeta. Gradilla.

PROCEDIMIENTO
Condiciones de ensayo:
Longitud de onda.505nm (490-550)
Temperatura: 25/ 30/37C
Cubeta.1 cm paso de luz
Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

22
DESARROLLO DE LA PRCTICA:
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Estndar Muestra Muestra Control
Estndar -- 10 L -- --
Muestra -- -- 10 L --
Muestra Control -- -- -- 10 L
Reactivo al uso 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL

2. Mezclar e incubar 5 min a 37C 10 min a temperatura ambiente.

3. Medir la densidad ptica a 505 nm (490-550), frente al blanco de reactivos.
4. El color ser estable durante 30 min.

RESULTADOS
Absorbancia de la muestra
Absorbancia del estndar

CLCULOS
X Conc. del estndar = Conc. muestra
Factor de conversin: mg/dL X 0.0113 = mmol/L Conc. Estndar: 200mg/dL.

LINEALIDAD DEL MTODO

El mtodo es lineal hasta valores de 1000mg/dL (11.3mmol/L).
Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con solucin salina 0.9%,
multiplicando el resultado por 2.

VALORES DE REFERENCIA
Valores sospechosos a partir de 150 mg/dL (1.7 mmol/L).
Valores elevados a partir de 200 mg/dL (2.26 mmol/L).

23
Tareas a desarrollar en la prctica: Durante la prctica de laboratorio los estudiantes
realizaran las siguientes tareas.

Tarea 1. Realizar extraccin, procesamiento de la muestra para la determinacin de

Triacilglicridos en sangre.
Tarea 2. Interpretar los resultados de lipemia obtenidos teniendo en cuenta las variaciones
que experimenta la misma en diferentes circunstancias en el transcurso del da.

Conclusiones: A modo de conclusin y retroalimentacin los estudiantes pueden resolver las

siguientes preguntas.

1. Explique brevemente el proceso de digestin y absorcin de los principales lpidos de la

dieta,
2. Explique los mecanismos que consta el organismo para depurar lpidos de la sangre en
estado pospandrial y como se verifica la movilizacin de estos de los tejidos de depsito en
situaciones como el ayuno y el ejercicio fsico aerobio.

24
GUA DE CLASE PRCTICA N 4.
Tema: METABOLISMO DE LOS LPIDOS (COLESTEROL).
Subtema: DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL.
Objetivos:

Explicar la importancia del colesterol en el metabolismo humano y su relacin con diversas

patologas.
Determinar la concentracin de colesterol en una muestra biolgica mediante el mtodo
enzimtico colorimtrico.

Sumario:
1. Determinacin de las concentraciones de Colesterol en una muestra de sangre.
2. Interpretacin de los resultados teniendo en cuenta las diferentes situaciones fisiolgicas a las
que est expuesto el organismo humano durante las etapas del da.

Resultados de aprendizaje:
El estudiante interpreta los cambios fisiolgicos que se producen en las concentraciones de lpidos
(Colesterol) teniendo en cuenta los mecanismos con los que dispone el organismo humano para
mantener el equilibrio de la misma.

Breve fundamentacin terica del tema:

El colesterol es una sustancia hidrfoba, insoluble en medio acuoso y por tanto insoluble en el
plasma sanguneo.
El colesterol se sintetiza sobre todo en el hgado, pero tambin en la piel, intestino, glndulas
suprarrenales, el ovario, el testculo, el rin y el pulmn. Todas las sustancias que en el organismo
producen cido actico pueden ser precursoras del colesterol (cidos grasos, glucosa, algunos
aminocidos, etc.). El colesterol es esencial para el funcionamiento normal del organismo ya que
es:
Componente estructural esencial de membranas de todas las clulas animales y partculas
subcelulares.
Precursor de cidos biliares.
Precursor de hormonas esteroides.
Precursor de vitamina D.

25
Debido a la atencin que se ha dado a los alimentos libres de colesterol, es interesante observar que
el organismo produce la mayor parte del colesterol en forma endgena. Las fuentes dietticas
aportan tan slo de 150 a 300 mg diarios mientras que el hgado sintetiza 1.5 g al da. De hecho, el
exceso de carbohidratos y protenas de la dieta se utiliza para producir molculas de acetato, que
posteriormente sirven para producir colesterol y cidos grasos. Los lpidos endgenos que genera
el hgado son transportados posteriormente en forma de lipoprotenas para su uso en todo el cuerpo.
La circulacin sistemtica de colesterol es posible gracias a la formacin de complejos solubles por
unin a protenas, las lipoprotenas sricas y entre ellas las de tipo low density lipoproteins (LDL)
son las que representan el mayor porcentaje, con aproximadamente un 60-70% del total.
El colesterol es un constituyente primario de las lipoprotenas de baja densidad (LDL), pero puede
encontrarse tambin en lipoprotenas de alta densidad (HDL) y en las de muy baja densidad
(VLDL).
Las diversas lipoprotenas y apoprotenas asociadas, cuando se analizan directa o indirectamente,
producen datos diagnsticos tiles para el analista, ya que es posible determinar el riesgo de
coronariopata.
Clnicamente es importante, ya que existe una relacin entre la concentracin del colesterol
plasmtico y la presencia de problemas cardacos coronarios.
Los mtodos analticos que se emplean actualmente utilizan colesterolesterasa para el colesterol y
permite examinar lotes grandes de muestras con exactitud y rapidez.
Las concentraciones sricas de colesterol disminuyen en: desnutricin, esteatorrea, hepatitis,
hipertiroidismo, personas con infeccin aguda y anemia, cncer.
Las concentraciones sricas de colesterol aumentan en: hiperlipoproteinemia, cncer de la cabeza
del pncreas, hipotiroidismo, sndrome nefrtico, el tercer trimestre del embarazo, predisposicin
gentica.

Instrucciones: Lea el acpite de instrucciones generales.

Prerrequisito: Los estudiantes realizaran la siguiente tarea.

Tarea 1: Elaborar un resumen donde se explique desde el punto de vista molecular el proceso de
adaptacin o control de las concentraciones de Colesterol desencadenado en un individuo normal
durante un estado de pospandrial.

26
Materiales y equipos a utilizar en la prctica:
El colesterol esterasa hidroliza los steres de colesterol presentes en la muestra dando colesterol
libre y cidos grasos, en una posterior oxidacin enzimtica mediante el colesterol oxidasa se forma
H2O2 y colesterona. El H2O2 se valora por la reaccin Trinder, mediante un cromgeno,
fenol y 4- Aminoantipirina, en presencia de Peroxidasa, formando una quinonimina cuya
coloracin, encarnada, es proporcional a la concentracin de colesterol presente en la muestra.

Colesterol Esterasa
steres de colesterol + H2O = Colesterol + cidos grasos.
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 = 4-colesterona + H2O2
Peroxidasa
2H2O2 + 4-amino-antipirina + fenol = Quinonimina + H2O. (14)

PREPARACIN
Muestra clnica
El paciente debe encontrarse en un estado fisiolgico regular (sin ejercicio vigoroso) y bajo su dieta
ordinaria del da anterior a la prueba.
Suero:
La muestra debe recolectarse en ayuno total excepto agua, durante un lapso de 12 a 14 horas antes
de la prueba.
La muestra debe recolectarse en tubo recolector al vaco de tapn rojo el cual no contiene
anticoagulante.
La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm para separar el suero.
La estabilidad de la muestra es de una semana guardada, tapada y a 2-8 C 3 meses congelada a -
20 C.
Nota:
La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
b) Si la identificacin es inadecuada.
c) Si existe hemlisis.
d) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.

27
e) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible. f) Si existen interferencias
No interfieren en el ensayo los siguientes compuestos y concentraciones: Ac. rico =1.5 mmol/L;
Ac. Saliclico = 3.6 mmol/L; Paracetamol = 0.66 mmol/L; Fenobarbital = 0.4 mmol/L; Glucosa =
28 mmol/L; Cafena = 52 mol/L;
Ac. Nicotnico = 0.16 mmol/L; Cortisona = 5 mmol /L; El c. Ascrbico por encima de 300 mol/L
interfiere negativamente.

REACTIVOS
Reactivo 1
Tampn pH 6.9 90mmol/L Fenol 26 mmol/L
Reactivo 2
Vial enzimas: Peroxidasa 1250 U/L; Colesterol esterasa; Colesterol oxidasa 300 U/L;4-
Aminoantipirina 0.4 mmol/L ESTNDAR: Solucin Colesterol 200 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.

Preparacin:
Disolver con agitacin suave el contenido del vial de enzimas R.2 con un poco de R.1 amortiguador,
una vez disuelto el liofilizado retornar al frasco original del amortiguador, homogeneizar la
solucin.
Esta solucin es estable 4 meses en refrigeracin 2-8C 40 das a 15-25C protegido de la luz.
Nota:
Cada reactivo deber ser etiquetado: las iniciales de la persona que lo prepar, el contenido, la
concentracin, el nmero de lote, la fecha de preparacin, la fecha de caducidad y requerimientos
de almacenamiento.
No se debern usar reactivos fuera de la fecha indicada.
No se pipetearn los reactivos con la boca y evitar el contacto con piel y ojos.

28
EQUIPO
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 500-550nm. El alumno debe consultar el manual del
espectrofotmetro que va a utilizar para saber cules son las instrucciones de operacin y los datos
y caractersticas de funcionamiento del instrumento.
Centrifuga.
Bao de agua a 25 o 37C.

MATERIAL
5 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
1 Micropipetas de 1mL
1 Micropipeta de 10 L
Puntas para micropipeta.
Gradilla.

PROCEDIMIENTO
Condiciones de ensayo:
Longitud de onda.505nm (500-550)
Cubeta.1 cm paso de luz
Temperatura.25 37C
Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.

DESARROLLO DE LA PRCTICA
1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Estndar Muestra Muestra Control

Estndar -- 10 L -- --
Muestra -- -- 10 L --
Muestra Control-- -- -- 10 L
Reactivo al uso 1.0Ml 1.0mL 1.0mL 1.0mL

2. Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 10 min a temperatura ambiente.

3. Ajustar el aparato a cero con el blanco de reactivos.

29
4. Leer a 505nm (500-550) la densidad ptica del estndar y de la muestra.
5. La coloracin ser estable durante 60 min.
Nota:
Se deber procesar junto con las muestras algn suero control valorado con niveles normal y
anormal, que le permitir tener un control de la exactitud y precisin de los resultados.

RESULTADOS
CLCULOS
Abs de la muestra X Concentracin del estndar (200 mg/dl) = Concentracin Abs del estndar
de colesterol.
Factor de conversin: mg/dL x 0.0258 = mmol/L (SI).

LINEALIDAD DEL MTODO

Hasta valores de 600 mg/dL o 15.4 mmol/L.
Para concentraciones superiores la muestra se diluye 1:2 con solucin salina 0.9%, multiplicando
el resultado por 2.

VALORES DE RIESGO
Valores sospechosos desde 220 mg/dL o 5.7 mmol/L.
Valores elevados desde 260 mg/dL o 6.7 mmol/L.

Tareas a desarrollar en la prctica:

Tarea 1. Realizar extraccin, procesamiento de la muestra para la determinacin de
Colesterol en sangre.
Tarea 2. Interpretar los resultados de lipemia obtenidos teniendo en cuenta las variaciones
que experimenta la misma en diferentes circunstancias fisiolgicas y patolgicas como es el caso
de la Hipercolesterolemia adquirida.

30
Conclusiones: A modo de conclusin y retroalimentacin los estudiantes pueden responder
las siguientes preguntas de autoevaluacin.

1. Es beneficioso o perjudicial el colesterol para nuestro organismo? Teniendo en cuenta la

interrogante anterior realice un cuadro resumen donde se especifiquen las funciones del
colesterol en nuestro organismo.
2. Explique brevemente los mecanismos mediante los cuales el organismo en situaciones
fisiolgicas normales es capaz de mantener el plasma sanguneo con concentraciones
nfimas de colesterol.

31
GUA DE CLASE PRCTICA N 5.
Tema: METABOLISMO DE LAS PROTENAS.
Subtema: DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES.
Objetivos:

Demostrar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de protenas en una

muestra biolgica.
Establecer los valores de referencia de protenas y comparar con el valor de nuestra muestra
problema a analizar.
Definir cules son las principales patologas que se presentan si tenemos valores altos o
bajos de protenas.

Sumario:
1. Determinacin de las concentraciones de Protenas Totales en una muestra de sangre.
2. Interpretacin de los resultados teniendo en cuenta las diferentes situaciones fisiolgicas a las
que est expuesto el organismo humano durante las etapas del da.
Resultados de aprendizaje:
El estudiante interprete los cambios que se producen en las concentraciones de Protenas Totales
teniendo en cuenta los mecanismos con los que dispone el organismo humano para mantener el
equilibrio de la misma.
Breve fundamentacin terica del tema:
Protenas sricas en la evaluacin de la funcin heptica. Para la sntesis de las protenas sricas se
requiere un hgado sano en plenas funciones, excepto en el caso de las gamma globulinas. El
hgado tiene la capacidad de duplicar la produccin y salida de protenas durante las enfermedades
asociadas con prdida de protenas. En consecuencia, no debe sorprender que las mediciones de
protenas totales no se alteren sino hasta que haya ocurrido una disminucin extensiva de la funcin
heptica.
La albmina se disminuye en la enfermedad heptica crnica y generalmente se acompaa por un
incremento en las globulinas beta y gamma, debido a la produccin de IgG e IgM en la hepatitis
crnica activa y de la IgM e IgA en la cirrosis biliar o alcohlica respectivamente. Se debe hacer
nfasis en que estas inmunoglobulinas no son producidas en el hgado sino por las clulas
plasmticas del sistema reticuloendotelial. Se puede facilitar la identificacin de estas subclases
de gamma globulinas mediante la inmunoelectroforesis. Sin embargo, una disminucin en la

32
albmina srica no es especfica para la enfermedad heptica, puesto que la albmina tambin
disminuye en la malabsorcin, la desnutricin, la enfermedad renal, el alcoholismo y las
enfermedades malignas.
La fraccin alfa1 de las globulinas sricas se disminuye en la enfermedad heptica crnica y cuando
esta fraccin est ausente, o casi, indica que una deficiencia en la alfa1-antitripsina puede ser la
causa de la enfermedad heptica. Las protenas sricas, globulina alfa2 y beta se aumentan en la
ictericia obstructiva. Este incremento en la alfa2-globulina y la beta globulina en la ictericia
obstructiva est asociada con interferencias en el metabolismo normal de las lipoprotenas. Por
consiguiente, no se puede hacer claramente el fenotipo de un desorden lipdico en presencia de
enfermedad heptica. El uso del colesterol de alta densidad para evaluar el riesgo de la enfermedad
coronaria se obvia en los pacientes con enfermedad heptica alcohlica, obstruccin biliar y
necrosis heptica aguda.
El hgado produce los factores de coagulacin y estos pueden disminuir significativamente en la
presencia de enfermedad heptica. El fibringeno plasmtico est presente normalmente en una
concentracin de 2 a 4 g/L. Una disminucin en el fibringeno plasmtico indica una enfermedad
heptica severa y est asociada con concentraciones disminuidas de otros factores de coagulacin,
especialmente la protrombina. Puesto que la sntesis de la protrombina ocurre en el hgado, y
requiere de la vitamina liposoluble K, se puede incrementar el tiempo de protrombina, en la
enfermedad obstructiva biliar, la cirrosis o necrosis heptica, la falla heptica, el sndrome de Reye,
los abscesos hepticos, la deficiencia de vitamina K y la hepatitis. Se puede diferenciar la
enfermedad intraheptica asociada con una disminucin en el factor de coagulacin, de la
enfermedad obstructiva intraheptica con una absorcin disminuida de vitamina K, observando la
respuesta del tiempo de protrombina a la administracin exgena de vitamina K

Instrucciones: Leer el acpite de instrucciones generales.

Prerrequisito: Los estudiantes realizarn la siguiente tarea.

Tarea 1: Elaborar un resumen donde se explique desde el punto de vista molecular las funciones
fundamentales de las diferentes protenas plasmtica de acuerdo a los criterios de clasificacin
vigentes.

33
Materiales y equipos a utilizar en la prctica:
Los grupos -CO-NH- unidos entre s dan una reaccin con formacin de color violeta con las sales
cpricas en medio alcalino, siendo la ms representativa y simple la que da con el Biuret -NH2-CO-
NH-CO-NH2. Es en la actualidad el mtodo colorimtrico ms exacto y simple para la
determinacin de protenas totales.
PREPARACIN
Muestra clnica
Suero, plasma.

MATERIAL
5 tubos de ensaye de 13 X 100mm.
1 Micropipetas de 1.0 mL.
1 Micropipeta de 10 L.
Puntas desechables para micropipeta.
Gradilla.

EQUIPOS:
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 540 nm.
Centrfuga
Termobloque

CONTENIDO DEL EQUIPO:

Reactivo 1
Tartrato K-Na 15 mmol/L Yoduro sdico
100 mmol/L Yoduro de potasio
5 mmol/L Sulfato de cobre II
5 mmol/L Standard Sol. Protenas 7 g/dL
Estabilidad:
A temperatura ambiente la estabilidad es hasta la fecha de caducidad indicada en el envase

34
PROCEDIMIENTO:
TCNICA

Blanco Estndar Muestra

Estndar -- 25 L --
Muestra -- -- 25 L
R.1 Biuret 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Mezclar e incubar 15 min a 30-37C. Dejar enfriar 5 minutos a temperatura ambiente. Leer, frente
al blanco de reactivo, a 540 nm. Coloracin estable 30 minutos.

RESULTADOS
Clculo:
Abs muestra
-------------------- X 7 (Conc. Estndar) = g/L de protenas totales
Abs estndar

1 g/ dL = 10 g/L

LINEALIDAD
El mtodo es lineal hasta valores de 15 g/dL (150 g/L)

Recin nacidos: 5.2 - 9.1 g/dL

Nios (hasta 3 aos): 5.4 - 8.7 g/dL
Adultos: 6.7 - 8.7 g/dL

Tareas a desarrollar en la prctica:

Tarea 1. Realizar extraccin, procesamiento de la muestra para la determinacin de Protenas
Totales en sangre.
Tarea 2. Interpretar los resultados de lipemia obtenidos teniendo en cuenta las variaciones
que experimenta la misma en diferentes circunstancias fisiolgicas y patolgicas como es el caso
de la desnutricin proteico-calrica.

35
Conclusiones
1. Las protenas plasmticas cumplen un importante rol en el mantenimiento del equilibrio hdrico
en el humano, as como en el transporte se sustancias insolubles exgenas o endgenas y en la
defensa del organismo ante el ataque de agentes extraos. Explique brevemente la razn por la cual
en los estados de desnutricin proteico-calricas se producen entre otros cuadros spticos cuya
severidad depende del grado de desnutricin.

36
GUA DE CLASE PRCTICA N 6.
Tema: METABOLISMO DE LOS COMPUESTOS NITROGENADOS DE BAJO PESO
MOLECULAR.
Subtema: DETERMINACIN DE CIDO RICO.
Objetivos:

Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de cido rico en una

muestra biolgica.
Establecer los valores de referencia de cido rico y comparar con el valor de nuestra
muestra problema a analizar.
Definir cules son las principales patologas que se presentan si tenemos valores altos o
bajos de cido rico en una muestra biolgica.

Sumario:
1. Determinacin de las concentraciones de cido rico en una muestra de sangre.
2. Interpretacin de los resultados teniendo en cuenta las diferentes situaciones fisiolgicas a las
que est expuesto el organismo humano durante las etapas del da.

Resultados de aprendizaje:
El estudiante interpreta los cambios que se producen en las concentraciones de cido rico
teniendo en cuenta los mecanismos con los que dispone el organismo humano para mantener el
equilibrio de la misma.
Breve fundamentacin terica del tema:
El cido rico en los mamferos es el metabolito final del catabolismo de las bases pricas y su
elevacin est asociada a la gota, es decir, los reumatismos hiperuricmicos. En los pacientes con
tal disfuncin, aparecen cristales de cido rico en las articulaciones y en los tendones, lo
que origina las manifestaciones reumticas caractersticas.
Niveles altos de cido rico estn tambin asociados a patologa renal por retencin de productos
nitrogenados, asocindose en estos casos a valores tambin altos de urea y de creatinina.

El cido rico es producto del metabolismo de las purinas, cidos nucleicos y nucleoprotenas,
valores elevados indican patologas que afectan dichos metabolismos, algunas de origen gentico.

37
Habitualmente la concentracin del cido rico vara de un individuo a otro de acuerdo a diversos
factores tales como la edad, sexo, dieta, origen tnico, constitucin gentica, embarazo, etc.

Metabolismo del cido rico:

Xantina. - Producto intermedio de gran importancia en el metabolismo de los cidos nucleicos y

las bases purnicas. Precursor del cido rico, formado por la accin de la xantinoxidasa.
Precursores tambin descompuestos presentes en los nuclesidos y los nucletidos. Los tres
derivados de xantina de mayor inters en medicina son: cafena, teobromina y teofilina.
Hipoxantina. - Base purnica soluble en cidos y lcalis que resulta del catabolismo de la adenina
y de la inosina (hipoxantosina), y que, a travs de la etapa de xantina, es oxidada a cido rico.
Presente en forma libre (en la orina) o en combinacin (en los nuclesidos). Factor de crecimiento
(factor X) para algunos microorganismos, antagoniza la accin inhibidora del crecimiento de las
sulfamidas. Inosina (Hipoxantosina). - Nuclesido de purina; producto intermedio del metabolismo
de las purinas.

38
Instrucciones: Lea el acpite de instrucciones generales.

Prerrequisito: Los estudiantes realizaran las siguientes tareas.

Tarea 1: Elaborar un resumen donde se explique desde el punto de vista molecular el metabolismo
del cido rico y como el organismo humano en condiciones fisiolgicas es capaz de mantener
dentro de valores normales su concentracin con el fin de evitar daos en el entorno celular y los
tejidos.

Materiales y equipos a utilizar en la prctica:

El cido rico es oxidado por la uricasa a alantona y perxido de hidrgeno que en presencia de
POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosceo.
Uricasa
c. rico + 2H20 + 02 = Alantona + CO2 + 2H202
POD
2H202 + 4AF + DCPS = Quinona + 4H20

4-AF = 4 aminofenazona
DCPS = 2,4, diclorofenol sulfonato

Guardar en refrigeracin a 2-8 C. Estos productos son, solamente, para uso de laboratorio y pruebas
"in vitro".

PREPARACIN
Muestra clnica
Suero, plasma u orina
Orina: Diluir la orina al 1:10 con agua destilada, mezclar y seguir la tcnica
Multiplicar el resultado por 10

39
MATERIALES:
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 50 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml
4 Tubos de vidrio de 13X100
Puntas desechables para micropipeta.
Gradilla.

EQUIPO
Fotmetro con filtro de lectura de: 520 nm. Centrfuga

REACTIVOS:
Reactivo 1
Fosfatos pH 7.4, 50 mM
Sol. Tampn 2-4 DCPS, 4 mM
Reactivo 2
Uricasa 60U/L
Vial Enzimas Peroxidasa 660 U/L Ascorbato-Oxidasa 200 U/L
4 - Aminofenazona 1Mm
Standard Sol. c. rico 6.0 mg/Dl

PREPARACIN Y ESTABILIDAD:
Disolver, con agitacin suave, el contenido del vial de enzimas R.2 con un poco de R.1 tampn,
una vez disuelto el liofilizado retornar al frasco original de tampn, homogeneizar la solucin.
Esta solucin es estable 1 mes a 2-8C o 10 das a temperatura ambiente, protegida de la luz.

PROCEDIMIENTO:
Tcnica:
Longitud de onda: . . . . . . . 520 nm (490-550)
Temperatura: . . . . . . . . . . 25/30/37C
Paso de luz: . . . . . . . . . 1 cm paso de luz

40
Ajuste del cero con blanco de reactivo.

Blanco Estndar Muestra

Estndar -- 25 L --
Muestra -- -- 25 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Mezclar e incubar durante 5 min a 37C 10 min a temperatura ambiente.

Efectuar las lecturas de las densidades pticas del estndar y de la muestra frente al blanco del
reactivo. Coloracin estable como mnimo 30 min.

Clculo:
Conc. Muestra mg/dL = D.O. Muestra / D.O. Estndar X Conc. Estndar
Estndar= 6.0 mg/dL
mg/dL x 59 485 = mol/L

Cuando la muestra sea orina, multiplicar el resultado por 10. Si la concentracin de la muestra es
superior al lmite de linealidad (25mg/dL) diluir sta a la mitad y el resultado final se multiplicar
por 2.

Lmite de Seguridad Biolgica:

Suero o plasma Mujeres Hombres
mg/dL 2.5 - 6.0 3.4 -7.0
mmol/L 148 - 357 202 416

Orina de 24 horas:
mg/dL 250 - 750
mmol/L 14,872 - 44,616

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia, considerando
edad, sexo, estado nutricional y dems factores.

41
CONSIDERACIONES IMPORTANTES:

-Si la muestra de orina es turbia, calentarla a 60C para disolver el cido rico.
-El cido rico en suero es estable de 3 a 5 das en T de 2-8C.
-Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no afectan los resultados de la
prueba.
-Se sugiere procesar junto con las muestras algn suero control valorado con niveles normal y
anormal que le permitir tener un control de la exactitud y precisin de los resultados.
-La hemlisis (hasta 100mg/dL de hemoglobina) y la bilirrubina hasta
20mg/dL, no interfieren en los resultados.
-El estndar es muy vido a contaminarse, cuidar mucho su manipulacin, ya que los agentes
reductores tienden a disminuir la respuesta del color, mientras que los oxidantes generan aparicin
de color, aumentando las lecturas de los blancos.
-Los detergentes son inhibidores enzimticos, asegrese de que el material de vidrio este
perfectamente lavado y enjuagado con agua desionizada.

Tareas a desarrollar en la prctica:

Tarea 1. Realizar extraccin, procesamiento de la muestra para la determinacin de cido
rico en sangre.
Tarea 2. Interpretar los resultados obtenidos teniendo en cuenta las variaciones que
experimenta el misma en diferentes circunstancias fisiolgicas y patolgicas como es el caso de la
Gota.

Conclusiones

1. Explique brevemente el fundamento molecular de la enfermedad conocida como Gota.

2. Explique el fundamento del uso de Alopurinol en el tratamiento de dicha enfermedad
teniendo en cuenta sus conocimientos acerca del metabolismo de los nucletidos y la
cintica enzimtica.

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 VALIDACIN DE LA GUIA PRCTICA

Fecha de elaboracin:

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Bio. Msc. Carmen Barba Guzmn. Wilber Romero Fernndez.
DOCENTE PLANIFICADOR 1 Ph.D. Bioqumica y Biologa
DE LA ASIGNATURA-UTA Molecular Celular.
DOCENTE PLANIFICADOR
2 DE LA ASIGNATURA-
UTA
Dr. Miguel Eduardo Ramos
Argilagos.
Especialista de Primer Grado en
Bioqumica Clnica.
DOCENTE PLANIFICADOR 3
DE LA ASIGNATURA-UTA

Fecha de aprobacin:

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Dra. Mg. Mara Garca Barcel. Dra. Esp. Sandra Villacs Valencia.
Coordinadora de rea. Coordinadora de Carrera.

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Dr. Esp. Jorge Morales Sols.
Subdecano de la Facultad.

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