CUESTIONARIO

5. Cul es el fundamento de los mtodos automatizados para el recuento de

los hemates? Seale los inconvenientes de estos equipos.

RECUENTO AUTOMTICO: CONTADORES ELECTRNICOS.

Los autoanalizadores hematolgicos o contadores electrnicos, son actualmente la

opcin en los laboratorios modernos. El margen de error obtenido mediante los
mtodos manuales, el cual oscila en torno al 20%, se ve disminuido enormemente con
el desarrollo de estos aparatos, siendo el margen de error en torno o incluso inferior al
1%. Tal y como se podr observar a lo largo de este apartado, como norma general los
contadores electrnicos no se limitan a llevar a cabo el recuento celular de los distintos
elementos formes. Por lo general proporcionan los resultados de todos y cada uno de
los parmetros constituyentes del hemograma.(1)

2.1. COMPONENTES QUE CONSTITUYEN EL CONTADOR ELECTRNICO.

- Diluidor: sistema que reduce la concentracin de las clulas sanguneas y las

suspende en soluciones conductoras isotnicas para adecuarla a las capacidades de
medida del dispositivo.

- Aspirador: sistema que toma la muestra diluida y la conduce hacia el dispositivo de

medida.
- Sistema de fluidos: transporta las suspensiones celulares hacia el dispositivo de
medida o la cmara de recuento.

- Cmara de recuento o dispositivo de medida: constituye la parte central o zona

sensible del equipo, donde ocurren los fenmenos pticos, elctricos o ambos,
medidos posteriormente.

- Transductor o detector: son los dispositivos que generan linealmente pulsos

elctricos cuando las clulas pasan la zona sensible, ptica o elctrica, del equipo.

- Discriminador: discrimina los pulsos elctricos generados por los transductores en

correspondencia con el tipo celular medido.

- Amplificador: amplifica la seal elctrica que sale del discriminador para su

posterior procesamiento.

- Convertidor analgico-digital: convierte las seales elctricas en digitales.

- Ordenador: procesa las seales digitales y las convierte en datos que sern
mostrados en pantalla y que pueden ser impresos.

La parte electrnica del equipo est compuesta por el amplificador, el convertidor y el

ordenador.

FUNDAMENTO:

MEDIDA DE LA VARIACIN DE IMPEDANCIA O RESISTENCIA ELCTRICA

(principio Coulter)

Las clulas de una muestra de sangre total diluida en una solucin electroltica se
hacen pasar, una detrs de la otra, a travs de una abertura de determinado dimetro,
por la que circula una corriente elctrica de cierta intensidad inducida por 2 electrodos
dispuestos a ambos lados de la abertura u orificio. Al pasar cada clula a travs del
orificio causa un cambio en la resistencia elctrica que genera un pulso de voltaje cuya
altura o amplitud ser proporcional al tamao o volumen la clula. El nmero de pulsos
elctricos generados se relaciona con la cantidad de clulas que atraviesan la
abertura. Dentro de las ventajas de esta tecnologa se citan su sencillez, bajo costo, la
posibilidad de poderse aplicar an en los instrumentos ms pequeos y su marcada
utilidad para la medicin de los volmenes celulares. En la actualidad, este principio se
aplica como mtodo de referencia para el recuento celular hemtico y la medicin de
los volmenes (tamao) de cada poblacin celular. Es utilizado por la mayora de los
fabricantes de contadores hematolgicos debido a su marcada reproducibilidad,
rapidez y disminucin del error estadstico.(1)

En lneas generales el principio Coulter indica una partcula que es forzada a

atravesar un orificio, por el que circula una corriente elctrica, produce un cambio en
la impedancia a travs del orificio que es proporcional al volumen de la partcula que
est atravesando ese orificio. Este pulso en la impedancia se origina por el
desplazamiento de electrolito causado por la partcula, ya que en las soluciones
electroltcas la carga es transportada por los iones disueltos, y estos encuentran un
impedimento a circular cuando una partcula obstruye parcialmente la abertura.(3)

Medicin de la cantidad de luz dispersada (mtodo ptico)

La medicin de la intensidad de luz dispersada es utilizada frecuentemente por los

contadores celulares en sus mediciones. Las clulas en suspensin se hacen pasar
alineadamente una detrs de otra, a travs de una pequea zona sobre la que incide
perpendicularmente un haz de luz halgena o lser, lo que provoca la interrupcin y
dispersin lumnica de la energa radiante en diversos ngulos. El nmero de
interacciones del haz de luz se corresponde con la cantidad de clulas que pasan por
la zona de sensible del aparato y la magnitud de su dispersin ser una funcin de
distintas propiedades o caractersticas celulares, dentro de las que pueden citarse el
volumen celular, el tamao, el contorno y el ndice de refraccin que constituye una
funcin del contenido celular (presencia de granulaciones, coloracin, lobularidad
nuclear, entre otros). El mtodo ptico encuentra su principal aplicacin en la
realizacin automtica del recuento diferencial de leucocitos y en el estudio de la
composicin interna de las clulas, aunque tambin se aplica en la realizacin de los
conteos globales y medicin de los volmenes celulares. (2)

INCONVENIENTES:

Para la cuantificacin de granulocitos inmaduros (metamielocitos, mielocitos y

promielocitos) se han utilizado diversos marcadores monoclonales como el CD16
(FcgRIII) que se expresa en los neutrfilos maduros, CD11b (CR3) expresado solo en
neutrfilos inmaduros y el CD64 (FcgRI), expresado en neutrfilos estimulados. La
expresin de estos marcadores no siempre se corresponde con los cambios
morfolgicos que se esperaran encontrar durante la observacin microscpica del
frotis teido; adems, existen diversas situaciones en las que los granulocitos
muestran una expresin anmala de estos marcadores (sndromes mielodisplsicos).
Esto dificulta su implantacin en los analizadores y la solucin parece pasar por la
combinacin de varios de ellos, lo que encarecera mucho su uso para utilizarlos de
forma rutinaria.

Algo similar ocurre con los blastos, en los que no existe un marcador nico para su
identificacin, que hace necesaria la combinacin de varios de ellos segn la
enfermedad de que se trate. Diversos trabajos demuestran la utilidad del CD45 para
poder separar los blastos de los linfocitos en la zona de baja granularidad celular,
debido a la alta expresin de este marcador en estos ltimos, pero son necesarias
diversas combinaciones de anticuerpos monoclonales para su correcta cuantificacin.

La cuantificacin de poblaciones linfocitarias es una realidad. En la actualidad, es

posible el recuento de CD3/CD4/CD8 en un analizador hematolgico. Existen mtodos
de citometra de flujo que con la utilizacin de distintas combinaciones de anticuerpos
monoclonales son capaces de identificar hasta 9 poblaciones linfocitarias y que, en
teora, podran utilizarse en los analizadores hematolgicos. Lo que parece claro es
que la cuantificacin de estas poblaciones patolgicas requiere necesariamente de la
combinacin de la citometra de flujo con los principios de deteccin habituales y por
esta razn, se debe trabajar para que en el futuro prximo todos los analizadores
hematolgicos incorporen este principio de deteccin. (4)

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Cruz-Rodrguez C. Automatizacin del laboratorio clnico. En: Suardaz JH,

Cruz CL, Colina AJ. Laboratorio Clnico. La Habana: Ciencias Mdicas; 2004.
p. 56-9.
2. Gonzlez de Buitrago JM. Tecnologa y mtodos de laboratorio clnico. 3a ed.
Barcelona: Elsevier Masson; 2010.
3. Bentahar A, Izasa SA. Nuevas aplicaciones clnicas en los analizadores
hematolgicos de la serie LH. Haematologica (ed. espaola). 2006;91(Suppl
1):146-9.
4. Villlarrubia J. Avances en el diferencial leucocitario automatizado. Criterios para
la revisin del hemograma y sistemas expertos de validacin automtica.
Haematologica (edicin espaola) 2002 Oct;87(supl 1):138-42.