Cuantificacion de Bacterias

CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES,
FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES

SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.
ERICKA TRINIDAD GAITAN.

COD: 4801044.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA.
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS.
MICROBIOLOGIA CON ENFASIS EN ALIMENTOS.
PAMPLONA.
2006.
CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES,
FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES
SUB-SUPERFICIALES PARA EL TRATAMIENTO DE AGUA RESIDUAL.
ERICKA TRINIDAD GAITAN.

COD: 4801044.
Trabajo de pasanta como requisito de graduacin.
Irma Janeth Sanabria.

Directora de proyecto.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA.
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS.
MICROBIOLOGIA CON ENFASIS EN ALIMENTOS.
PAMPLONA.
2006.
2
CONTENIDO
Pg.
INTRODUCCIN 4.
1. OBJETIVOS. 5.
2. JUSTIFICACIN. 6.
3. MARCO REFERENCIAL 7.
3.1. MARCO TEORICO 7.
3.1.1. Microbiologa del agua.. 7.
3.1.2. Agua residual 7.
3.1.3. Humedales 8.
3.1.4. Humedales sub-superficiales. 10.
3.1.5. Ventajas de los humedales sub-superficiales 10.
3.1.6. Remocin biolgica 11.
3.1.7. Nitrificacin biolgica 12.
3.1.8. Denitrificacin 12.
3.1.9. Fijacin biolgica del nitrgeno molecular 13.
3.2. MARCO CONTEXTUAL.. 14.
3.3. MARCO LEGAL 15.
4. METODOLOGA... 16.
5. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES. 18.
6. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS 19.
7. CONCLUSIONES.. 27.
8. RECOMENDACIONES O SUGERENCIAS 28.
9. GLOSARIO.... 29.
10. BIBLIOGRAFA... 30.
11. ANEXOS. .. 32.
3
INTRODUCCIN
Este trabajo es una recopilacin de toda la parte experimental y terica desarrollada en el

laboratorio de microbiologa ambiental de la Universidad del Valle en colaboracin con el
proyecto Modelacin de los mecanismos involucrados en la remocin de nutrientes y
materia orgnica en humedales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales
domesticas, durante la segunda etapa del mismo.
En los ltimos aos se ha aumentado la contaminacin por parte de la poblacin,

incluyendo la contaminacin de las fuentes de agua, situacin que afecta la disponibilidad
de las mismas, estos hechos han llevado a la comunidad cientfica a la bsqueda de
soluciones para mantener un equilibrio en el medioambiente.
Actualmente se estn realizando investigaciones para el modelamiento de humedales sub-

superficiales en el trpico, por ser un mtodo natural para el tratamiento de aguas
residuales domesticas. Los estudios buscan aportar informacin que ayude a la
optimizacin en la aplicacin de estos tratamientos, ya que se trabaja con ellos pero como
un modelo de caja negra, debido a que no se han esclarecido completamente las
comunidades, poblaciones, e interacciones que all se llevan a cabo.
Dentro de las actividades realizadas esta el recuento de los cuatro grupos bacterianos
(nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrgeno y hetertrofas), de los humedales
artificiales sub-superficiales para el tratamiento de agua residual de la planta ubicada en
Ginebra-Valle, y apoyo a las actividades desarrolladas en laboratorios de docencia.
En este informe, basado principalmente en el recuento de bacterias nitrificantes,
denitrificantes, fijadoras de nitrgeno, y hetertrofas de humedales sub-superficiales como
componentes fundamentales en la eliminacin de contaminantes en los humedales
anteriormente mencionados, para el tratamiento de aguas residuales, se pretende aportar
datos que contribuyan a la elaboracin de un modelo matemtico.
La realizacin del proyecto fue a nivel de campo, con toma de muestras en la estacin de
Ginebra Valle, las cuales fueron procesadas en el laboratorio.
4
1. OBJETIVOS.
1.1. OBJETIVO GENERAL.
Incursionar en el campo investigativo, como apoyo en el rea de microbiologa para el

desarrollo del proyecto Modelacin de los mecanismos involucrados en la remocin de
nutrientes y materia orgnica en humedales sub-superficiales para el tratamiento de aguas
residuales domesticas, durante la segunda etapa del mismo.
1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS.
Evaluar y aplicar los protocolos propuestos para el recuento de bacterias

nitrificantes y fijadoras de nitrgeno, por la tcnica de placa en superficie,
bacterias hetertrofas por la tcnica de placa en profundidad, y bacterias
denitrificantes por el mtodo del numero mas probable (NMP).
Proponer recomendaciones para optimizar los protocolos propuestos para el
aislamiento de las bacterias de inters.
Apoyar las actividades del laboratorio de docencia.
Actualizar la base de datos en formato PDF del grupo de investigacin GAOX.
(Grupo de investigacin en procesos avanzados de oxidacin).
5
2. JUSTIFICACIN.
Con el crecimiento de la poblacin mundial la demanda de agua para el consumo humano y

la contaminacin de las fuentes de agua, hacen necesario aplicar mtodos de tratamiento a
las aguas residuales domesticas e industriales para evitar la contaminacin de los cuerpos
de agua a los cuales se vierten estas agua residuales para un mejor cuidado del ambiente y
del recurso hdrico.
En el rea del tratamiento de aguas residuales hay varias opciones a la hora de escoger, sin
embargo estos mtodos pueden llegar a ser demasiado costosos y an si el beneficio es
grande, los costos son una limitante para la puesta en marcha de dichos tratamientos no
obstante se han venido estudiando mtodos naturales, igualmente efectivos en el
tratamiento de las aguas residuales como son los humedales artificiales de flujo sub-
superficial.
Este trabajo contribuye a la recopilacin de datos, para el estudio y anlisis de este tipo de
humedales, con el fin de usarlos en modelacin, con miras a la aplicacin a gran escala de
este tipo de tratamiento.
6
3. MARCO REFERENCIAL
3.1. MARCO TEORICO
3.1.1. Microbiologa del agua. La hidrosfera es un hbitat adecuado para el crecimiento

microbiano, ya que contiene agua, que es necesaria para el metabolismo microbiano. En la
hidrosfera hay poblaciones microbianas autctonas que comparten un nmero limitado de
caractersticas generales. Los microorganismos del agua pueden crecer a baja concentracin
de nutrientes. En el medio acutico, la mayora presentan movilidad por flagelos u otros
mecanismos.
La hidrosfera se divide en los hbitats de agua dulce (limnticos) como lagos, estanques,
pantanos, fuentes, humedales, arroyos y ros, y los hbitats marinos como ocanos, mares y
estuarios. (Atlas, Richard, 2002). En el ambiente acutico, el papel de los microorganismos
en la degradacin de materia orgnica refleja el proceso que ocurre en las plantas de
tratamiento de aguas residuales, pero adems de esto los microorganismos en el ambiente
acutico pueden ser importantes como indicadores de contaminacin. (Lester et al., 1999).
A diferencia de las plantas de tratamiento de aguas residuales, muchas aguas naturales
contienen muy poca materia orgnica y consecuentemente tienen baja densidad
microbiana. Si la biodegradacin de compuestos especficos puede ocurrir esto transcurre
bajo condiciones de limitaciones severas de nutrientes. Las bajas concentraciones de
nutrientes podran no permitir el crecimiento excepto a tasas muy bajas, esto podra
significar que el flujo de energa en el sistema es insuficiente para el mantenimiento de la
poblacin microbiana (Atlas, Richard, 2002).
3.1.2. Agua residual. Los residuos lquidos se producen por las actividades humanas diarias
(aguas residuales domesticas) y por diferentes actividades agrcolas e industriales.
Mediante drenaje a travs del alcantarillado, las descargas de residuos lquidos alcanzan las
masas naturales de aguas superficiales, como ros, lagos y ocanos. Estas mismas capas de
agua se utilizan de formas alternativas : como agua potable , para uso domstico e
industrial y para el riego ; para el cultivo de peces y mariscos ; y para piscinas y otras
actividades de ocio ,por lo tanto es crucial mantener la calidad de esta agua naturales lo
mejor posible .El mantener la calidad de agua significa no sobrecargar con nutrientes
orgnicos e inorgnicos, o con sustancias toxicas, nocivas o inaceptables desde el punto de
vista esttico .No deben alterase significativamente su oxigenacin, temperatura, salinidad,
turbidez o pH.
Las aguas naturales tienen la capacidad inherente de auto purificacin. Los

microorganismos acuticos hetertrofos utilizan y mineralizan lo nutrientes orgnicos. El
amonio se nitrifica y junto con otros nutrientes inorgnicos es utilizado e inmovilizado por
las algas y plantas acuticas superiores. Las bacteria patgenas se reducen y finalmente se
eliminan por las presiones de competencia y depredacin ejercidas por poblaciones
7
acuticas autctonas es as como las aguas naturales pueden aceptar una cantidad moderada
de aguas residuales sin depurar, sin que se produzca un deterioro significativo de la
calidad.
El aumento en el volumen de las aguas residuales lleva a la bsqueda de nuevas soluciones

que lleven a un uso adecuado del agua natural y la posibilidad de reutilizar aguas
residuales domesticas tratadas (Atlas, Richard, 2002).
De los constituyentes enumerados en la tabla 1, los slidos suspendidos, los compuestos

orgnicos biodegradables y los organismos patgenos son de mayor importancia, y por ello
la mayora de instalaciones de manejo de aguas residuales son diseadas para su remocin.
TABLA 1. Principales constituyentes de inters en el tratamiento de aguas residuales.

(Crites, Tchobanoglous, 2000).
Constituyentes Razn de inters

Slidos suspendidos totales Formacin de depsitos de lodos y
condiciones anaerobias.
Compuestos orgnicos Agotamiento del oxigeno en fuentes
biodegradables naturales y desarrollo de condiciones
spticas.
Constituyentes inorgnicos Constituyentes inorgnicos adicionados por
disueltos (Slidos disueltos el uso.
totales ) Aplicaciones en la reutilizacin de aguas
residuales
Metales pesados Constituyentes metlicos adicionados por el
uso.
Muchos metales se clasifican como
Polutantes de prioridad.
Nutrientes Crecimiento excesivo de la vida acutica.
Indeseable, eutrofizacin, concentracin de
nitratos en agua para consumo humano.
Patgenos Transmisin de enfermedades.
Polutantes orgnicos prioritarios Sospechosos de ser carcinognicos,
mutagnicos, teratogenicos o de toxicidad
aguda alta. Muchos polutantes prioritarios
son resistentes a los mtodos de
tratamientos convencionales. (Conocidos
como contaminantes orgnicos refractarios.)
8
3.1.3. Humedales (wetlands). Los humedales son ambientes acuticos de poca profundidad
en los que predominan las plantas emergentes.
Estos se desarrollan en condiciones climticas diversas en zonas acuticas superficiales con
escaso drenaje. Las plantas emergentes sirven como base para la clasificacin de los
humedales.
Los humedales y sistemas acuticos de tratamiento son aquellos que utilizan plantas
acuticas y animales para el tratamiento de aguas residuales municipales e industriales.
Los humedales construidos son una alternativa natural a los mtodos tcnicos de
tratamiento de aguas de desecho (Atlas, Richard, 2002). Son sistemas pasivos de
depuracin, se caracterizan por su simplicidad de operacin, un bajo o nulo consumo
energtico, una baja produccin de residuos, un bajo impacto ambiental sonoro y una buena
integracin al medio ambiente rural.
Hay varios tipos de humedales y sistemas acuticos de tratamiento como:
Fig.1 Sistemas de humedales para el tratamiento de aguas residuales(A, estanque con

plantas libres flotantes; B, estanque de flujo sub-superficial horizontal con plantas
emergentes; C, humedal de flujo sub-superficial horizontal; D, humedal de flujo vertical).
(Stottmister ,2003)
Humedales artificiales de flujo libre

Como pantanos o cinagas.
Con su vegetacin parcialmente en el agua.
Profundidad entre 100- 450 mm.
Humedales artificiales de flujo sub-superficial

La vegetacin emergente se planta en el medio que puede ser grava o arena. El
propsito de la vegetacin es proveer oxigeno ala zona radicular y aumentar el
rea superficial para el crecimiento biolgico en la zona de las races.
9
Profundidad del lecho 0, 45 a 1 m. y tienen una pendiente caracterstica desde 0 a
0,5 %.
Sistemas acuticos de plantas flotantes

Plantas flotantes suspendidas con races relativamente largas (Jacinto de agua), y la
raz sirve como medio para el crecimiento de pelculas de bacterias.
Lentejas de agua (sistemas de sombreado superficial).
Sistemas combinados
Combinacin de humedales y sistemas acuticos para lograr objetivos en relacin
a la calidad del agua.
Los humedales de flujo sub-superficial tienen ventajas respecto a los de flujo

superficial:
Menor incidencia de mal olor debido a la naturaleza subterrnea del flujo.
Bajo riesgo de exposicin directa de las personas y de aparicin de insectos gracias
al flujo subterrneo.
Proteccin trmica debido a la acumulacin de restos vegetales y del flujo
subterrneo, ventaja interesante en los pases nrdicos, donde la cobertura del hielo
y nieve invernal no afectan el proceso.
Entre lo inconvenientes cabe destacar:
Mayor coste de construccin debido fundamentalmente al material granular, el

coste puede incrementarse hasta un 30 %.
Menor valor como ecosistema para la vida salvaje debido a que el agua es
difcilmente accesible a la fauna.
Colmatacion del medio granular por grasas y aceites, aportes continuos de
materiales finos inertes.
Ventajas frente a los sistemas convencionales mecanizados:
Simplicidad en operacin.Requieren un tiempo bajo de operarios y pocos equipos

electromecnicos; pueden ser explotados por operarios con poca experiencia.
Consumo energtico mnimo o nulo.En general limitado al pre-tratamiento o
elevaciones.
Baja produccin de residuos durante la operacin del sistema, bajo costo de
explotacin y mantenimiento en la operacin del sistema.
Fiabilidad en la operacin del sistema de tratamiento.
Con tiempos de permanencia hidrulica muy altos.
Bajo impacto ambiental.
10
Creacin y restauracin de zonas hmedas aptas para potenciar vida salvaje,
educacin ambiental y zonas de recreo.
Principales inconvenientes frente a sistemas convencionales:
Requieren una superficie superior (20-80 veces superior ).

Coste de construccin similar, o incluso mayor.
Larga puesta en marcha, desde meses hasta un ao.
Difciles de disear bien dado al alto numero de procesos y mecanismos implicados
en la eliminacin de contaminantes.
Pocos o ningn factor de control durante la operacin.
Los humedales construidos e han utilizado para tratar una gamma amplia de aguas
residuales:
Aguas domsticas y urbanas.

Aguas industriales ,incluyendo fabricacin del papel ,productos qumicos
y farmacuticos, cosmticos, alimentacin, refineras y mataderos
entre otros.
Lixiviados de vertederos.
Aguas de drenaje de extracciones mineras.
Aguas de escorrenta superficial agrcola y urbana.
Tratamiento de fangos de depuradora. (Atlas, Richard, 2002).
3.1.6. Remocin biolgica. Dado que tanto el nitrgeno como el fsforo pueden causar
impacto en la calidad del agua que los recibe ,la descarga de uno o ambos constituyentes
debe ser controlada con frecuencia .El nitrgeno puede estar presente en las aguas
residuales de varias maneras por ejemplo en forma orgnica amoniaco , nitritos o nitratos.
El fsforo se encuentra en las aguas residuales en forma de fosfatos complejos los cuales
representan cerca de la mitad de los fosfatos de las aguas residuales municipales y
provienen del uso de estos materiales en detergentes sintticos (Atlas et al., 2002).
La figura 2 muestra el flujo del nitrgeno en la tierra.
11
Figura 2. Ciclo del nitrgeno .Los pasos crticos en la fijacin del nitrgeno, en la
nitrificacin y en la denitrificacin estn mediados por las bacterias.
3.1.7. Nitrificacin biolgica .En la nitrificacin biolgica, el amoniaco se oxida en un

proceso de dos pasos: primero a nitritos luego a nitratos. En la conversin de amonio a
nitritos representada por la Nitrosomonas sp. ocurre el mayor consumo de oxgeno (4.33
mg O2 / mg N-NH4+ oxidado), adems de que se generan iones hidrgeno, propiciando en
el cultivo un descenso del pH. En un primer paso, la enzima amonio mono-oxigenasa
(AMO) transforma al amonio en hidroxilamina, que posteriormente se convierte en nitrito,
mediante la hidroxilamina xidoreductasa (HAO).
(AMO)
NH 4 + + H + + 2e - + O 2 NH 2 OH + H 2 O
(HAO)
NH 2 OH + H 2 O NO 2 - + 5 H + + 4e -
La conversin de nitritos a nitratos esta representada por Nitrobacter sp. Mediante la

accin de la nitrito xido-reductasa (NOR):
(NOR)
NO2- + H 2 O NO3- + 2 H + + 2 e -
Las bacterias nitrificantes son quimiolitotrfas y utilizan la energa de la nitrificacin para

fijar CO2, son microorganismos sensibles y extremadamente susceptibles a un amplio
rango de sustancias inhibitorias .A partir de estudios realizados tanto en laboratorio como
en plantas a gran escala se encontr que los siguientes factores afectan el proceso de
nitrificacin:
Concentracin de amonio y nitritos.
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Relacin DBO5 / TKN (ver glosario).
Concentracin de oxigeno disuelto.
Temperatura.
pH
Las concentraciones de oxigeno disuelto que estn por encima de 1 mg /L son esenciales
para que ocurra el proceso de nitrificacin. Si los niveles de oxigeno disuelto caen por
debajo de este valor el oxigeno se convierte en el nutriente limitante y la velocidad de
nitrificacin disminuye o el proceso se detiene. Existe un rango ptimo entre pH 7.5 a 8.6,
pero los sistemas que estn aclimatados a valores de pH menores llevan a cabo la
nitrificacin con xito (Atlas et al., 2002).
3.1.8. Denitrificacin. Las bacterias denitrificantes obtienen energa para su crecimiento de

la conversin en nitrgeno gaseoso, pero requieren una fuente de carbono para la sntesis
celular .Dado que los efluentes nitrificados tienen, por lo general un bajo contenido de
materia carboncea, se requiere con frecuencia una fuente externa de carbono. La
desnitrificacin es un proceso respiratorio anaerobio heterotrfico del tipo anxico, donde
la reduccin del nitrato hasta N2 sigue una serie de pasos que involucran la actividad de
enzimas diferentes.
Nar Nir Nor Nos
NO3- NO2- NO N2O N2
Nitrato nitrito oxido ntrico oxido nitroso nitrgeno gaseoso
Nar: nitrato reductasa; Nir: nitrito reductasa; Nor: oxido ntrico reductasa; Nos: oxido
nitroso reductasa.
Dentro de las variables que afectan el proceso de denitrificacin se encuentran:
Concentracin de nitratos
Concentracin de carbono
Temperatura
pH
3.1.9. Fijacin biolgica de nitrgeno molecular. La fijacin de nitrgeno molecular la

llevan a cabo diversos gneros de bacterias de vida libre, algunas de las cuales estn
asociadas a la rizosfera y gneros de bacterias que forman asociaciones mutualisticas con
las plantas.
El proceso de reduccin de nitrgeno a amoniaco es catalizado por la enzima nitrogenasa.

El complejo de la enzima nitrogenasa tiene dos coproteinas, una que contiene hierro y
molibdeno, y otra que solamente contiene hierro. La nitrogenasa es muy sensible al
oxigeno, necesita una presin parcial o muy baja de este elemento para poder realizar su
13
actividad. Los genes que determinan la fijacin del nitrgeno, estn sometidos a una
rigurosa regulacin gentica. Existe un sistema regulador muy complejo que controla la
expresin de numerosos genes nif necesarios para la sntesis de la nitrogenasa activa. La
fijacin necesita adems de la nitrogenasa, ATP, una ferrodopsina reducida y quizs otros
citrocromos y enzimas. La ecuacin total de la reaccin se muestra a continuacin:
El amonio es el primer producto que se detecta en el proceso de fijacin, y tal como lo

indica la DG`o positiva (DG`o = + 150 Kcal. /mol = 630 Kj / mol), la reaccin requiere una
considerable entrada de energa. El amonio se asimila en forma de aminocidos, que se
polimerizan, formando protenas. (Atlas et al., 2002).
14
3.2. MARCO CONTEXTUAL
La universidad del valle , el instituto de investigacin y desarrollo de agua potable

saneamiento bsico y conservacin del recurso hdrico (CINARA ), el departamento de
biologa vegetal aplicada ,el instituto VON HUMBOLDT y la corporacin autnoma
regional del Valle del Cauca (CVC) se unen para la realizacin del proyecto : Modelacin
de los mecanismos involucrados en la transformacin y remocin de nutrientes y materia
orgnica en humedales artificiales sub-superficiales para el tratamiento de aguas residuales
domesticas en el ao 2003.
La investigacin se centra en identificar los principales mecanismos involucrados en la

transformacin de nutrientes y materia orgnica en un humedal artificial sub-superficial,
para el tratamiento de aguas residuales domsticas.
El trabajo es realizado en Santiago de Cali, Valle del Cauca, por el proyecto ya

especificado y atendiendo al problema de contaminacin del recurso hdrico, y las
posibilidades de re-uso de aguas residuales domsticas tratadas.
En el laboratorio de Microbiologa ambiental de la Universidad del Valle, son llevados a

cabo los recuentos de bacterias nitrificantes, denitrificantes, fijadoras de nitrgeno y
hetertrofas, con el propsito de conocer la proporcin de las poblaciones ya mencionadas
presentes en la interaccin planta-rizosfera.
15
3.3. MARCO LEGAL
La experimentacin va dirigida al tratamiento de aguas residuales domesticas para la

realizacin de la modelacin de los humedales en Ginebra (Valle ) y su potencialidad
para ser aplicados como solucin al problema de contaminacin del recurso hdrico tanto
para la regin como para el pas ,por lo cual se trae a colacin los siguientes decretos :
DECRETO 1594 DEL 26 DE JUNIO DE 1984, del ministerio de agricultura y por el cual
se reglamenta parcialmente el titulo I de la ley 9 de 1979, axial como el capitulo II de titulo
VI parte III Libro II y el titulo III de la parte III Libro I del decreto Ley 2811 de 1974
en cuanto a usos del agua y residuos lquidos.
GUIA TECNICA PARA EL DESARROLLO DE PROYECTOS DE REUSO DE AGUAS

RESIDUALES DOMESTICAS MUNICIPALES, 2001, Ministerio del medio ambiente,
direccin general ambiental sectorial ,grupo de gestin ambiental , urbano y salud .
16
4. METODOLOGA.
4.1. Descripcin del sistema.

La planta de tratamiento, ubicada en el municipio de Ginebra (Valle del Cauca),
perteneciente a la empresa Acuavalle S.A., cuenta con tres humedales de flujo sub-
superficial como tratamiento terciario de las aguas residuales domesticas de este
municipio, las aguas que llegan al sistema vienen de un tratamiento en la laguna
anerobia (fig.. En esta etapa del proyecto se trabajo con las siguientes cargas
hidrulicas:
Humedal plantado con Heliconia psittacorum 600 ml /10 s.
Humedal sin vegetacin 200 ml / 10 s.
Humedal plantado con Phragmites australis 400ml / 10 s.
Figura 3.
Vista de los humedales
Phrag: humedal plantado con Phragmites australis
SV: humedal sin vegetacin
Caa: columna de agua afluente
Cae: columna de agua efluente
Hel: humedal plantado con Heliconia psittacorum
4.2. Toma de muestra

La toma de muestra de realiz desde octubre 13 hasta diciembre 13 de 2006(para un total
de 63 das).
Se tomaron dos tipos de muestra , las muestras de columna de agua ( muestra de agua
tomada de tubos PVC donde por medio de pequeos orificios fluye el agua, cada humedal
tiene la columna de agua del afluente y del efluente ) y las muestras de sustrato (muestra
de carbonilla cercana a la rizosfera de las plantas ), Los humedales fueron muestreados en
cuatro puntos ,.sustrato y columna de agua del afluente y del efluente, fueron escogidas tres
plantas aleatoriamente para la toma de muestra en cada punto para las muestras de
carbonilla, en el humedal sin vegetacin las muestras de sustratos tambin se aleatorizaron,
se realizo el mismo procedimiento en cada recoleccin .
Las muestras fueron trasladadas al laboratorio de microbiologa ambiental para realizar el
recuento de microorganismos.
17
A las muestras de columna de aguas se realizaron mediciones de oxigeno disuelto.
4.3. Recuento de microorganismos.
Se realizaron diluciones sucesivas de las muestras a partir de 1 g. de sustrato y 1 ml de agua
respectivamente en solucin salina 0.85 % .las muestras de sustrato se maceraron para
desprender los microorganismos , para bacterias fijadoras de nitrgeno (medio para
bacterias fijadoras de nitrgeno, protocolos de laboratorio de microbiologa ambiental) y
nitrificantes se sembraron por la tcnica de placa en superficie en el medio autotrfico para
Nitrobacter 756 c (DSMZ), para ver la morfologa tpica (gotas de agua), se utilizo como
control positivo Nitrobacter winogradski DSM 10237 ,las bacterias hetertrofas se
sembraron por la tcnica de placa profunda en agar nutritivo (Merck), y las bacterias
denitrificantes por el mtodo del nmero mas probable en medio para bacterias
denitrificantes (Londoo, 2002)., determinado por la desaparicin de nitrito y nitrato
revelado por el reactivo de Griess-Ilosvay tomando 50 ul de muestra a los cuales se
agregaron 50 ul del reactivo, se utilizo el medio de cultivo sin inocular como control
negativo para asegurar que las bacterias provienen de la muestra.
La mxima dilucin fue de 10-7. Para el recuento de bacterias se utilizaron las cajas que
presentaron el crecimiento entre 15 y 300, con estos datos se calculo ufc/ml utilizando la
siguiente formula:
numero de colonias * factor de dilucin

Ufc/ml = __________________________________
ml sembrados en la placa
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5. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
MES AGOSTO SEPTIEMBRE OCTUBRE NOVIEMBRE DICIEMBRE ENERO
ACTIVIDAD \ SEMANA 2 3 4 5 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 5 1 2 3 4 1 2
Lectura de articulo introductoria X X
Control T de incubadoras X
Organizacin manuales de equipos X
Induccin X X
Recoleccin de artculos para la X X
base de datos.
Limpieza de vidrios zona de lavado X
Limpieza de estantes X
Apoyar las actividades del X X X X X X X X X
laboratorio de docencia.
Lectura de la bitcora Norma X X X
Perez.
Bsqueda de bibliografa X X X
Planificacin del trabajo X
Revisin de 1 parte del trabajo X
Reactivar y conservar en glicerol X
las cepas de E. coli, Salmonella sp
y Shigella sp.
Toma y procesamiento de muestra X X X X X X
Recuento de hetertrofas X X X X X X
Recuento de fijadoras, nitrificantes X X X X X X
y denitrificantes.
Organizacin de datos. X X
Realizacin de grficos. X
Elaboracin del trabajo final. X X
19
6. RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS
Se observo el crecimiento de bacterias nitrificantes y fijadoras de nitrgeno,

caracterizado por la formacin de colonias translucidas en forma de gota de agua en los
respectivos medios de cultivo. (Figuras 4,5 ,6 y 7).
Figuras 4. Figura 5.
Crecimiento tpico de bacterias nitrificantes en medio autotrfico para nitrobacter 756c
(DSMZ), las colonias se observan en los crculos negros.
El medio proporciona nitrito como fuente inorgnica de nitrgeno y las bacterias fijan
el CO2 como fuente de carbono, el crecimiento de estas bacterias varia de 13 a 14 das
debido a su metabolismo lento.
Figura 6. Figura 7.
Bacterias fijadoras. Crecimiento tpico de bacterias fijadoras en medio por componentes
para bacterias fijadoras.
El medio proporciona fuente de carbono orgnico e inorgnico sin proporcionar fuente

de nitrgeno solo los microorganismos capaces de tomar el nitrgeno atmosfrico se
desarrollan en este medio.
20
Las bacterias denitrificantes se cultivaron en medios lquidos, se considero positivo con
la eliminacin total del nitrgeno del medio de cultivo, revelado por la permanencia del
color amarillo del medio de cultivo, al adicionar el reactivo de griess ( figura 8 y 9).
Figura 8. Figura 9.
Microplacas donde se revela la presencia de bacterias denitrificantes, los pozos que
luego de agregar el reactivo de griess (reactivo del nitrito) se tornaban de color rojo se
toma como negativo, si luego de la adicin del reactivo no hay cambio de color se
agrega el polvo de zinc (detecta nitratos) si no hay cambio de color, se detecta la
desaparicin de las formas nitrogenadas, la prueba es positiva para el crecimiento de
bacterias denitrificantes. En la figura 9 los 5 pozos en la parte inferior corresponden al
control negativo.
En esta investigacin se cuantificaron las bacterias del ciclo del nitrgeno, ya que los
principales procesos para la remocin de nitrgeno de las aguas residuales se da
principalmente por nitrificacin /denitrificacin.
Las poblaciones encontradas para la zona cercana a la rizosfera varan entre 5,42 y
10,15 unidades logartmicas para bacterias hetertrofas, 5,48 y 8,31 unidades
logartmicas para fijadoras de nitrgeno, 4,02 y 7,97 unidades logartmicas para
nitrificantes y <2,47 y 10,79 unidades logartmicas para denitrificantes.
Se resalta la falta de datos en las grficas correspondientes a las columnas de aguas.

Se esperaba encontrar diferencias en las poblaciones de los humedales con plantas y el
humedal sin vegetacin, ya que el propsito de la vegetacin es proveer oxigeno a
travs de la zona radicular y aumentar el rea superficial para el crecimiento biolgico
en la zona de las races , sin embargo el transporte real de oxigeno hacia la zona
radicular y luego a la columna de agua es limitado , las races tambin liberan
sustancias orgnicas .Estas diferencias no son grandes ya que el humedal sin vegetacin
presentaba crecimiento de pastos ( figura 13) , al igual que el humedal plantado con
Phragmites y Heliconia, que presentaban crecimiento de gramneas (Leucaena sp.)
(figuras 13, 14,15 y 16). Estas plantas poseen una raz densa y expansiva (figura 17.) y
en la rizosfera de estas plantas existen altas poblaciones de bacterias fijadoras y
nitrificantes.
21
a 12,00 b
log UFC/ Bacterias

10,00
Log UFC/ bacterias

Heterotrof 10,00
8,00 as 8,00
Fijadoras Heterotrofas
6,00 6,00
Fijadoras
4,00 Nitrificant 4,00
es Nitrificantes
2,00 2,00
Denitrifica Denitrificantes
0,00 0,00
ntes
13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic 13 oct 26 oct 9 nov 23 6 dic 13 dic
nov
f echas
fechas
c
d
12,00
Log UFC/ bacterias

12,00 Heterotrofas
Log UFC/g-bact./ml
10,00 10,00 Heterotrofas

Fijadoras
8,00 8,00 Fijadoras
nitrificantes 6,00
6,00 Nitrificantes
Denitrificantes 4,00
4,00 denitrificantes
2,00
2,00
0,00
0,00
13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic
fechas
Fechas
Figura 10. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal plantado con Heliconia psittacorum. a. Rizosfera del afluente,
hay gran cantidad de bacterias denitrificantes en los tres primeros muestreos. b. Columna de agua afluente, el 27 de octubre
disminuye el oxigeno disuelto (figura 18), a su vez hay un descenso en el nmero de bacterias hetertrofas, nitrificantes y fijadoras
de nitrgeno, y un aumento de las bacterias denitrificantes. c. Rizosfera del efluente, en las ltimas fechas se resalta el aumento de
bacterias hetertrofas. d. Columna de agua efluente. Los vacos en b y d corresponden a las muestras que no fue posible tomar. En
todos los puntos de muestro se destaca la disminucin del nmero de bacterias denitrificantes en las dos ltimas fechas de muestreo.
22
a b 12,00
12,00 10,00
10,00 8,00 het erot rofas

Heterotrof as Fijadoras
8,00 6,00
Fijadoras Nit rif icant es
6,00
Nit rif icant es 4,00 Denit rificant es
4,00
Denit rificant es 2,00
2,00
0,00
0,00 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic
fechas
f echas
c 10,00 d 10,00
9,00
8,00 8,00
Heterotrof as 7,00 Het erotrof as
6,00 Fijadoras 6,00
fijadoras
Nit rif icant es 5,00
4,00 Nitrificant es
Denit rificant es 4,00
3,00 Denitrificant es
2,00
2,00
0,00 1,00
13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic 0,00
Fechas
f echas
Figura 11. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal sin vegetacin. a. Rizosfera del afluente, presenta un aumento
de bacterias hetertrofas y denitrificantes el 23 de noviembre. b. columna de agua afluente, del 26 de octubre al 23 de noviembre se
da una leve disminucin del oxigeno disuelto (figura 18), y un aumento de bacterias denitrificantes en esta fecha. La cantidad de
oxigeno empieza a aumentar el 6 de diciembre fecha en la cual empieza el descenso en el numero de bacterias denitrificantes. c.
Rizosfera del efluente, se aprecia un aumento de tres grupos bacterianos (hetertrofas, nitrificantes y fijadoras) el 23 de noviembre.
d. Columna de agua efluente, hay disminucin del oxigeno disuelto desde el 26 de octubre hasta el 6 de diciembre (figura 18), sin
embargo las bacterias denitrificantes disminuyen a partir del 6 de diciembre. Los vacos en b y d corresponden a las muestras que no
fue posible tomar. En todos los puntos de muestreo se destaca la disminucin del nmero de bacterias denitrificantes en las dos
ltimas fechas de muestreo.
23
a 12,00 b 10,00
9,00
10,00
8,00
Log UFC/g-bact./ml
Log UFC/g-bact./ml
8,00 7,00
Heterotrofas
Nitrificantes
Fijadoras 6,00
6,00 Fijadoras
Nitrificantes 5,00
Nitrificantes
4,00 Denitrificantes 4,00
denitrificantes
3,00
2,00
2,00
1,00
0,00
13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic 0,00
Fechas 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic
fechas
c 12,00 d
10,00 12,00
Log UFC/g-bact./ml
8,00 Heterotrofas 10,00
Log UFC/g-bact./ml
Fijadoras
6,00 8,00 Heterotrofas
Nitrificantes
Fijadoras
4,00 Denitrificantes 6,00
Nitrificantes
2,00 4,00 Denitrificantes
2,00
0,00
0,00
Fechas 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic
fechas
Figura 12. Bacterias cuantificadas en los cuatro puntos del humedal plantado con Phragmites australis. a. Rizosfera del afluente. b.
columna de agua afluente, en la muestra del 13 de octubre el oxigeno disuelto es de 6,3 mg/l (figura 18) y se obtuvo un alto nmero
de bacterias denitrificantes, para el 13 de diciembre el oxigeno disuelto fue 1,8 mg /l y las bacterias denitrificantes disminuyen, la
cual puede ser causada por otra variable. c. Rizosfera del efluente, se aprecia un aumento de bacterias hetertrofas, y una leve
disminucin de bacterias nitrificantes y fijadoras. d. Columna de agua efluente, presenta un comportamiento similar al de la columna
de agua del afluente donde disminuye el numero de bacterias al igual que la cantidad de oxigeno disuelto. En todos los puntos de
muestreo se destaca la disminucin del nmero de bacterias denitrificantes en las ltimas fechas de muestreo.
24
Figura 13. Humedal sin vegetacin, se
puede apreciar el crecimiento de pasto
(Cyperus rotundus) en todo el humedal.
Figura 16. Humedal plantado con
Heliconia, se observa la maleza.
Figura 17. Malezas encontradas en los

Figura 14. Humedal plantado con humedales, se aprecia el tamao de la
Phragmites. Se puede ver la maleza raz.
Figura 15. Humedal plantado con

Heliconia, se observa la maleza.
25
Oxigeno disuelto en la columna de agua
8
7
6
HCAA
mg /l O2
5
4 HCAE
3 SVCAA
2 SVCAE
1 FCAA
0 FCAE
13-oct 27-oct 10-nov 24-nov 8-dic
fecha
Figura 18. Datos de oxigeno disuelto tomado en la columna de agua.

HCAA: columna de agua Heliconia afluente. HCAE: columna de agua Heliconia
efluente. SVCAA: columna de agua humedal sin vegetacin afluente. SVCAE:
columna de agua humedal sin vegetacin efluente FCAA: columna de agua Phragmites
afluente. FCAE: columna de agua Phragmites efluente.
Los resultados de oxigeno disuelto reflejan los cambios producidos en el humedal a

causa de la poda realizada en los humedales el 27 de octubre, los restos vegetales no
son retirados de los humedales lo que incrementa el contenido de materia orgnica en
los humedales plantados.
El nmero de bacterias denitrificantes se redujo considerablemente en los dos ltimos

muestreos, se debe tener en cuenta que las acondiciones de anoxia son proporcionadas
por el humedal sin embargo su disminucin puede ser causa de la disponibilidad de
materia orgnica para la sntesis celular.
26
8. CONCLUSIONES
Los protocolos aplicados permiten la cuantificacin de los grupos

bacterianos, en esta etapa fue necesario disminuir el nmero de diluciones,
para obtener una buena recuperacin de bacterias fijadoras de nitrgeno.
De acuerdo a los resultados obtenidos las poblaciones bacterianas

cuantificadas, indican un alto potencial de la ocurrencia de los procesos de
remocin de nitrgeno, esto es importante en el tratamiento del agua residual
para la eliminacin de las formas nitrogenadas presentes en estas aguas.
Las condiciones especficas para cada humedal marcan las diferencias en el

nmero de bacterias cuantificadas.
En esta etapa del proyecto no fue posible relacionar las variables fsico-
qumicas, con el aumento o disminucin de las poblaciones, debido a la falta
de datos.
27
9. RECOMENDACIONES
Para encontrar los parmetros que expliquen las variaciones de los microorganismos se
recomienda:
Tener en cuenta los factores fsico qumicos (pH, T, DBO, concertacin de

nitratos (NO3), nitritos (NO2)) que afectan cada grupo bacteriano y asegurar
la medicin de dichos parmetros en cada muestreo.
Controlar en los humedales factores que pueden causar variaciones, como la

carga hidrulica y malezas.
28
10. GLOSARIO
Hetertrofo: microorganismo que sintetiza todo el material celular a partir de

compuestos orgnicos.
Humedal artificial: sistema construido que replica las caractersticas y capacidad de

reciclaje de aguas de los sistemas pantanosos naturales.
Modelacin: es la habilidad para describir la situacin problemtica que confronta un

analista. Puede expresarse a travs de matemticas, smbolos o palabras, pero es
esencialmente una descripcin de entidades y las relaciones entre ellas.
Polutante: Es una sustancia que causa contaminacin y por definicin puede causar
algn efecto peligroso.
Quimiolittrofo: Microorganismos capaces de usar el CO , CO2 o carbonatos como

fuente de carbono para la biosntesis celular y que derivan energa de la oxidacin de
componentes inorgnicos.
Rizosfera: es la parte del suelo inmediata a las races, tal que al extraer una raz, es
aquella porcin de tierra que resta adherida a la misma.
TKN: Mtodo analtico que determina el nitrgeno total orgnico y el amonio.
DQO :Medida del oxigeno requerido para oxidar todos los compuestos presentes en el
agua ,tanto orgnicos como inorgnicos ,por la accin de agentes fuertemente oxidantes
en medio cido La materia orgnica se oxida hasta dixido de carbono y agua ,mientras
el nitrgeno se convierte en amoniaco.
29
11. BIBLIOGRAFA
ATLAS, M. RONALD; BARTHA, RICHARD, 2002.Ecologa microbiana y

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31
12. ANEXOS
Anexo 1. TABLAS DE RESULTADOS NMP
13 octubre/2006
HAR
No. No. No.
Tubos Dilucion Positivo Negativo Tubos Vol.Inoc. x L R P Pop. Esta
1 0,0001 4 1 5 0,00001 338330,0605 0 0 5,94699 3,38E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
HE..
No. Pop.
Tubos Dilucion No. Positivo No. Negativo Tubos Vol.Inoc. x L R P Esta
1 0,01 4 1 5 0,001 2116,250209 0,01 0,01 4706,16 2,12E+05
2 0,001 1 4 5 0,0001
3 0,0001 1 4 5 0,00001
HE
No.
Tubos Dilucion No. Positivo No. Negativo Tubos Vol.Inoc. x L R P Pop. Esta
1 0,0001 3 2 5 0,00001 167509,8202 0 0 1047,05 1,68E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 0 5 5 1E-07
HER
Tubos Dilucion No. Positivo No. Negativo No. Tubos Vol.Inoc. x L R P Pop. Esta
1 0,0001 3 2 5 0,00001 136070,3443 0 0 56361,4 1,36E+09
2 0,00001 2 3 5 0,000001
3 0,000001 0 5 5 1E-07
32
SVAR
1 0,0001 2 3 5 0,00001 281906,9398 0 0 1,8E-10 2,82E+09
2 0,00001 5 0 5 0,000001
3 0,000001 4 1 5 1E-07
SVER
1 0,0001 3 2 5 0,00001 237833,3973 0 0 0,01121 2,38E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
FAR
1 0,0001 5 0 5 0,00001 6161015,545 0 0 0,02037 6,16E+10
2 0,00001 5 0 5 0,000001
3 0,000001 5 0 5 1E-07
FA
1 0,0001 3 2 5 0,00001 169841,6931 0 0 16,1612 1,70E+09
2 0,00001 1 4 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
FE
1 1,00E-04 3 2 5 1,00E-05 246440,6218 0 0 0,01118 2,46E+09
2 1,00E-05 3 2 5 1,00E-06
3 1,00E-06 2 3 5 1,00E-07
33
FER
1 1,00E-04 3 2 5 1,00E-05 170044,029 0 0 16,1595 1,70E+09
2 1,00E-05 1 4 5 1,00E-06
3 1,00E-06 2 3 5 1,00E-07
26 de octubre/2006
HAR
1 0,0001 5 0 5 0,00001 1860235,882 0 0 2,34819 1,86E+10
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
HCAA
1 0,01 5 0 5 0,001 7921,74367 0,01 0,01 12996,9 7,92E+05
2 0,001 3 2 5 0,0001
3 0,0001 0 5 5 0,00001
HCAE
1 0,0001 4 1 5 0,00001 167421,2294 0 0 1229643 1,67E+09
2 0,00001 1 4 5 0,000001
3 0,000001 0 5 5 1E-07
HER
1 0,0001 3 2 5 0,00001 234824,3841 0 0 0,01119 2,35E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
34
SVAR
1 0,01 5 0 5 0,001 7905,288903 0,01 0,01 12996,8 7,91E+05
2 0,001 3 2 5 0,0001
3 0,0001 0 5 5 0,00001
SVCAA
1 0,0001 2 3 5 0,00001 199633,1123 0 0 0,00687 2,00E+09
2 0,00001 5 0 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
SVCAE
1 0,0001 4 1 5 0,00001 267688,1805 0 0 988,109 2,68E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 0 5 5 1E-07
SVER
1 0,0001 4 1 5 0,00001 313832,7897 0 0 0,57851 3,14E+09
2 0,00001 2 3 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
FAR
1 0,0001 4 1 5 0,00001 525359,6651 0 0 1E-05 5,25E+09
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 3 2 5 1E-07
35
FER
1 0,0001 5 0 5 0,00001 362498,1689 0 0 2155894 3,62E+09
2 0,00001 1 4 5 0,000001
3 0,000001 0 5 5 1E-07
9 noviembre/2006
HAR
1 0,0001 5 0 5 0,00001 1606747,227 0 0 2,00618 1,61E+10
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
HER
1 0,0001 3 2 5 0,00001 138063,9246 0 0 8473,45 1,38E+09
2 0,00001 1 4 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
SVAR
1 0,0001 3 2 5 0,00001 107819,6945 0 0 3469815 1,08E+09
2 0,00001 1 4 5 0,000001
3 0,000001 0 5 5 1E-07
SVER
1 0,0001 3 2 5 0,00001 203904,3123 0 0 3,9896 2,04E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
36
FAR
1 0,0001 3 2 5 0,00001 321054,2371 0 0 2,9E-05 3,21E+09
2 0,00001 5 0 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
FER
1 0,0001 4 1 5 0,00001 453858,6073 0 0 0,00178 4,54E+09
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 2 3 5 1E-07
23 de noviembre/2006
HAR
1 0,0001 4 1 5 0,00001 662897,9569 0 0 7,4E-08 6,63E+09
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 4 1 5 1E-07
HCAA
1 0,0001 1 4 5 0,00001 82610,97107 0 0 2407,82 8,26E+08
2 0,00001 2 3 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
HCAE
1 0,0001 3 2 5 0,00001 344843,555 0 0 6E-09 3,45E+09
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 4 1 5 1E-07
37
HER
1 0,0001 3 2 5 0,00001 267350,9904 0 0 3,2E-05 2,67E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 3 2 5 1E-07
SVAR
1 0,0001 4 1 5 0,00001 308727,0864 0 0 5,9209 3,09E+09
2 0,00001 3 2 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
SVCAA
1 0,0001 5 0 5 0,00001 1994980,701 0 0 0,06017 1,99E+10
2 0,00001 4 1 5 0,000001
3 0,000001 3 2 5 1E-07
SVCAE
1 0,001 5 0 5 0,0001 32621,21557 0 0 2187764 3,26E+07
2 0,0001 1 4 5 0,00001
3 0,00001 0 5 5 0,000001
SVER
1 0,0001 3 2 5 0,00001 171545,8047 0 0 174,597 1,72E+09
2 0,00001 2 3 5 0,000001
3 0,000001 1 4 5 1E-07
38
FAR
1 0,0001 5 0 5 0,00001 4829172,72 0 0 0,00792 4,83E+10
2 0,00001 5 0 5 0,000001
3 0,000001 5 0 5 1E-07
FCAE
1 0,01 5 0 5 0,001 23888,07491 0,01 0,01 2695,83 2,39E+06
2 0,001 5 0 5 0,0001
3 0,0001 0 5 5 0,00001
FER
1 0,0001 5 0 5 0,00001 4829172,72 0 0 0,00792 4,83E+10
2 0,00001 5 0 5 0,000001
3 0,000001 5 0 5 1E-07
6 DIC / 06
HAR
1 0,01 2 3 5 0,001 446,8615158 0,01 0,01 2E+09 4,47E+04
2 0,001 0 5 5 0,0001
3 0,0001 0 5 5 0,00001
HER
1 0,01 1 4 5 0,001 606,7688063 0,01 0,01 261633 6,07E+04
2 0,001 1 4 5 0,0001
3 0,0001 1 4 5 0,00001
39
Punto nmp Pop.esta
HCAA 000 <3 E 2
SVCAA 000 <3 E 2
SVCAE 000 <3 E 2
SVER 000 <3 E 2
FAR 000 <3 E 2
SVAR
1 0,01 2 3 5 0,001 683,9156901 0,01 0,01 2,3E+07 6,84E+04
2 0,001 1 4 5 0,0001
3 0,0001 0 5 5 0,00001
FER
1 0,01 2 3 5 0,001 1176,082853 0,01 0,01 505,624 1,18E+05
2 0,001 2 3 5 0,0001
3 0,0001 1 4 5 0,00001
13 dic /06
Punto nmp Pop. esta
HAR 000 <3 E 2
HCAA 000 <3 E 2
HCAE 000 <3 E 2
HER 000 <3 E 2
SVAR 000 <3 E 2
SVCAA 000 <3 E 2
SVCAE 000 <3 E 2
SVER 000 <3 E 2
FAR 000 <3 E 2
FCAA 000 <3 E 2
FCAE 000 <3 E 2
FER 000 <3 E 2
40
ANEXO 2
TABLAS DE RESULTADOS DE LA CUANTIFICACION DE BACTERIAS
heterotrofas 13-Oct 26-Oct 09-Nov 23-Nov 06-Dic 13-Dic

HAR 7,03 5,42 6,19 8,30 7,30 6,40
HCAA 8,41 6,12 8,66 6,90 5,70
HCAE 6,29 4,30 6,53 6,48
HER 6,81 7,19 6,13 10,01 9,72 10,15
fijadoras 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic

HAR 6,18 6,72 6,37 7,59 7,35 6,69
HCAA 6,64 5,00 5,72 5,94 5,50
HCAE 6,20 5,40 5,16 5,55
HER 6,66 6,26 6,11 6,38 8,31 5,65
nitrificantes 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic

HAR 5,48 5,70 5,45 4,41 5,95 4,30
HCAA 4,95 4,53 5,61 4,70 4,32
HCAE 5,36 5,20 4,19 4,06
HER 5,40 5,35 5,78 5,15 7,97 4,20
Denitrificantes
HAR 9,53 10,27 10,21 9,82 4,65 < 2,47
HCAA 5,33 5,90 8,92 < 2,47 < 2,47
HCAE 9,23 9,22 9,54 < 2,47
HER 9,13 9,37 9,14 9,43 4,78 < 2,47
heterotrofas 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic

SVAR 8,48 6,13 5,83 10,44 6,60 8,98
SVCAA 6,45 8,57 8,35 6,79
SVCAE 6,77 6,39 8,49 8,16
SVER 7,04 6,57 5,64 9,01 7,62 6,84

SVAR 6,77 6,11 5,95 6,32 6,60 5,48
SVCAA 5,48 7,86 6,20 6,78
SVCAE 6,60 4,93 4,60 7,33
SVER 6,34 5,93 5,95 8,18 5,52 6,23

SVAR 4,98 4,85 5,05 4,51 5,76 4,16
SVCAA 3,78 6,39 4,60 4,45
SVCAE 5,24 3,94 4,11 5,06
SVER 5,00 6,11 5,06 7,57 4,64 4,02
Denitrificant. 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic

SVAR 9,45 5,90 9,03 9,49 4,84 < 2,47
SVCAA 9,30 10,30 < 2,47 < 2,47
SVCAE 9,43 7,51 < 2,47 < 2,47
SVER 9,38 9,50 9,31 9,24 < 2,47 < 2,47
41
heterotrofas 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic
FAR 7,74 9,53 7,75 7,27 7,81 6,71
FCAA 6,90 9,35
FCAE 9,09 6,79 10,22
FER 7,45 7,77 8,05 9,05 7,85 7,84

FAR 7,28 8,31 7,45 7,67 7,46 7,80
FCAA 6,65 6,65
FCAE 6,36 6,41 7,34
FER 7,33 7,73 6,60 7,65 6,85 7,62

FAR 6,80 5,98 5,38 6,32 6,63 4,61
FCAA 5,66 4,18
FCAE 5,60 3,80 4,35
FER 6,48 6,26 5,54 4,42 5,15 5,48
denitrificant. 13 oct 26 oct 9 nov 23 nov 6 dic 13 dic

FAR 10,79 9,72 9,51 10,68 < 2,47 < 2,47
FCAA 9,23 < 2,47
FCAE 9,39 6,38 < 2,47
FER 9,23 9,56 9,66 10,68 5,07 < 2,47
ANEXO 4. Valores de oxigeno disuelto tomado en las columnas de agua.
Punto 13-Oct 26-Oct 23-Nov 06-Dic 13-Dic
HCAA 1,6 0,7 6,8 4,7 1,3

HCAE 2,7 6,9 1,1 - 1,4
SVCAA - 1,5 1,1 0,6 1,2
SVCAE - 3,2 1,2 0,7 2,3
FCAA 6,3 - - - 1,8
FCAE 5,2 - 1,7 - 1,6
El guin (-), representa las muestras no tomadas por falta de agua en las columnas.
42

Cuantificacion de Bacterias

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CUANTIFICACION DE BACTERIAS NITRIFICANTES, DENITRIFICANTES,

FIJADORAS DE NITROGENOY HETEROTROFAS DE HUMEDALES ARTIFICIALES

ERICKA TRINIDAD GAITAN.

ERICKA TRINIDAD GAITAN.

Trabajo de pasanta como requisito de graduacin.

Irma Janeth Sanabria.

Este trabajo es una recopilacin de toda la parte experimental y terica desarrollada en el

En los ltimos aos se ha aumentado la contaminacin por parte de la poblacin,

Actualmente se estn realizando investigaciones para el modelamiento de humedales sub-

1.1. OBJETIVO GENERAL.

Incursionar en el campo investigativo, como apoyo en el rea de microbiologa para el

1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS.

Evaluar y aplicar los protocolos propuestos para el recuento de bacterias

Con el crecimiento de la poblacin mundial la demanda de agua para el consumo humano y

3.1. MARCO TEORICO

3.1.1. Microbiologa del agua. La hidrosfera es un hbitat adecuado para el crecimiento

Las aguas naturales tienen la capacidad inherente de auto purificacin. Los

El aumento en el volumen de las aguas residuales lleva a la bsqueda de nuevas soluciones

De los constituyentes enumerados en la tabla 1, los slidos suspendidos, los compuestos

TABLA 1. Principales constituyentes de inters en el tratamiento de aguas residuales.

Constituyentes Razn de inters

Fig.1 Sistemas de humedales para el tratamiento de aguas residuales(A, estanque con

Humedales artificiales de flujo libre

Humedales artificiales de flujo sub-superficial

Sistemas acuticos de plantas flotantes

Los humedales de flujo sub-superficial tienen ventajas respecto a los de flujo

Entre lo inconvenientes cabe destacar:

Mayor coste de construccin debido fundamentalmente al material granular, el

Ventajas frente a los sistemas convencionales mecanizados:

Simplicidad en operacin.Requieren un tiempo bajo de operarios y pocos equipos

Principales inconvenientes frente a sistemas convencionales:

Requieren una superficie superior (20-80 veces superior ).

Aguas domsticas y urbanas.

3.1.7. Nitrificacin biolgica .En la nitrificacin biolgica, el amoniaco se oxida en un

La conversin de nitritos a nitratos esta representada por Nitrobacter sp. Mediante la

Las bacterias nitrificantes son quimiolitotrfas y utilizan la energa de la nitrificacin para

Concentracin de amonio y nitritos.

3.1.8. Denitrificacin. Las bacterias denitrificantes obtienen energa para su crecimiento de

Dentro de las variables que afectan el proceso de denitrificacin se encuentran:

3.1.9. Fijacin biolgica de nitrgeno molecular. La fijacin de nitrgeno molecular la

El proceso de reduccin de nitrgeno a amoniaco es catalizado por la enzima nitrogenasa.

El amonio es el primer producto que se detecta en el proceso de fijacin, y tal como lo

La universidad del valle , el instituto de investigacin y desarrollo de agua potable

La investigacin se centra en identificar los principales mecanismos involucrados en la

El trabajo es realizado en Santiago de Cali, Valle del Cauca, por el proyecto ya

En el laboratorio de Microbiologa ambiental de la Universidad del Valle, son llevados a

La experimentacin va dirigida al tratamiento de aguas residuales domesticas para la

GUIA TECNICA PARA EL DESARROLLO DE PROYECTOS DE REUSO DE AGUAS

4.1. Descripcin del sistema.

4.2. Toma de muestra

numero de colonias * factor de dilucin

Se observo el crecimiento de bacterias nitrificantes y fijadoras de nitrgeno,

El medio proporciona fuente de carbono orgnico e inorgnico sin proporcionar fuente

Se resalta la falta de datos en las grficas correspondientes a las columnas de aguas.

log UFC/ Bacterias

Log UFC/ bacterias

Log UFC/ bacterias

10,00 10,00 Heterotrofas

10,00 8,00 het erot rofas

8,00 Heterotrofas 10,00

Figura 17. Malezas encontradas en los

Figura 15. Humedal plantado con

Figura 18. Datos de oxigeno disuelto tomado en la columna de agua.

Los resultados de oxigeno disuelto reflejan los cambios producidos en el humedal a