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606 - 967 - MP Patología Clínica PDF
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LABORATORIO DE
PATOLOGA CLNICA
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CONTENIDO
Pgina
I. PRESENTACIN
Introduccin 3
II. PRCTICAS
III. BIBLIOGRAFA 82
IV. ANEXOS
Valores de referencia para distintos analitos 83
V. ACTUALIZACIN 86
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INTRODUCCION
Describir los procedimientos rutinarios realizados en laboratorio clnico condensados en un solo documento
para su fcil acceso y consulta por parte de los alumnos que realicen practica en el Laboratorio.
Este procedimiento aplica a todas las practicas realizadas por los alumnos de la Unidad de Aprendizaje de
patologa clnica con la finalidad de mantener una mejor expectativa en la Unidad de Aprendizaje.
El presente manual est dirigido a todo aquel personal (Alumnos) que opera o proporciona mantenimiento
preventivo a equipos de laboratorio clnico. En el manual se describen algunos de los equipos ms
comnmente usados y sus principales funciones. Algunos de estos son de funcionamiento sencillo tales
como: Microscopio binocular, Centrfuga, Balanza Analtica, Espectrofotmetro y Pipetas automticas.
Es importante hacer notar que este manual no pretende ser un sustituto del manual del fabricante, sino por
el contrario un complemento de l.
OBJETIVOS
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I. Introduccin
Es fundamental conocer el equipo y material de laboratorio comnmente usado en Patologa Clnica para
facilitar el desenvolvimiento de los alumnos en prcticas posteriores.
II. Objetivos
El discente desarrollar las habilidades y conocimientos que le permitan identificar y usar el material de
laboratorio.
El microscopio es un equipo que consta de un juego de lentes que permiten al ojo humano observar detalles
que a simple vista es imposible observar. El uso de este equipo en los laboratorios clnicos, permite
determinar la presencia de parsitos, larvas, cristales, restos de tejido, componentes de la sangre y otros
cuerpos. En el Laboratorio de Anatoma Patolgica, permite el estudio de tejidos para poder determinar
enfermedades, malformaciones o deficiencias.
Sistema ptico.Constituido por lentes, espejos y prismas dispuestos en un tubo que amplan la imagen.
Este incluye: Los oculares, el cuerpo binocular, y los objetivos.
Sistema de Iluminacin.Por lo general consta de un bombillo que puede ser de tungsteno (halgeno), el
cual es controlado por un interruptor de encendido y un regulador de intensidad; adems consta de un
condensador, que tiene como funcin concentrar y enviar un haz de luz perpendicular a la muestra y luego al
objetivo.
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1. Oculares
2. Cuerpo Binocular
3. Brazo o Estativo
4. Macromtrico
5. Micromtrico
6. Interruptor de encendido
7. Revlver
8. Objetivos
9. Platina
De un buen uso y manejo del microscopio depende el funcionamiento continuo de ste. Es importante tomar
muy en cuenta las siguientes recomendaciones:
a. El microscopio debe ser cubierto con cobertores de tela, no con plsticos, ya que estos por el
calor que producen, permiten la formacin de hongos en los lentes.
b. Nunca debe ser expuesto directamente a los rayos del sol, ni cerca de sustancias txicas, ni cerca
de lavaderos. Tampoco deben estar en el mismo mueble donde se encuentran equipos que
producen vibracin.
c. El polvo se encuentra prcticamente en todo lugar, ocasionando serios problemas en las partes
mecnicas que se deslizan sobre guas con extrema precisin, si estas guas estn sucias, el polvo
con la lubricacin hace las veces de esmeril o lija, ocasionando desajustes en los movimientos, por
lo que ser necesario limpiar y lubricar peridicamente.
e. No se debe fumar cerca del microscopio, ya que eventualmente los lentes, llegan a cubrirse con
una capa de material no combustible, mezclado con residuos de carbn. Lo que produce
decoloracin y un campo borroso.
f. No se deben usar cantidades exageradas de aceite de inmersin, pues si ste no se quita cuando
se termina el trabajo, se secar sobre los lentes y producir problemas para el microscopista. En la
mayora los casos, es suficiente usar una gota de aproximadamente 5 mm de dimetro. NOTA:
Favor de no rotar el objetivo 10 X 40X, sobre el aceite de inmersin, por lo tanto girar primero al
lado contrario para utilizar el objetivo 100X con aceite.
g. Cuando hay necesidad de movilizar el microscopio de un sitio a otro, ste debe sostenerse
en posicin vertical, y tomarlo por el brazo y por la base, que son las partes ms slidas del equipo.
La movilizacin inadecuada puede desviar los prismas y su arreglo solo puede hacerlo un experto.
h. La calidad del microscopio depende de la calidad de los objetivos. Estos objetivos son lentes
muy costosos y se debe tener un excesivo cuidado para evitar que se rallen. Siempre se debe
comenzar enfocando con el objetivo de menor aumento y luego pasar al de mayor aumento.
Enfoque siempre hacia arriba y no hacia abajo, pues el lente puede golpearse y rallarse con la
lmina o la platina.
i. Las lmparas no deben usarse al mximo de intensidad, ya que se acorta su vida til. Lo que se
debe hacer es centrar, enfocar y subir el condensador o diafragmas para lograr optimizar al mximo
la luz.
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De los elementos que componen el microscopio, los sistemas de lentes son las partes que exigen mayor
nmero de cuidados especiales. Los componentes mecnicos y de iluminacin pueden ser reemplazados y
ajustados sin que para ello se realicen grandes esfuerzos; en cambio el deterioro de un componente ptico
es un hecho lamentable, cuyo costo es considerable y no puede compararse al de los otros tipos de fallas.
Debido a esto, a continuacin se detalla el procedimiento para realizar un buen mantenimiento preventivo
para mantener en optimas condiciones los diferentes sistemas que forman el microscopio:
a. Limpie la superficie del equipo con un trapo humedecido con agua, no use alcohol, acetona u otra
sustancia demasiado fuerte, ya que la pintura puede desprenderse.
f.1 Objetivos:
Con un ocular en posicin invertida observar el lente externo del objetivo, conservando un
ngulo de aproximadamente 30, para detectar partculas de polvo o aceite, rayones u
hongos.
Con un hisopo humedecido ligeramente en agua destilada frotar el lente externo del
objetivo en forma circular y luego pasarle un hisopo seco para secar el lente.
Con una perilla insufladora sopletear cualquier partcula de polvo o algodn interna y
externamente del objetivo.
Por ningn motivo desarme el objetivo, porque puede daarlo o hasta desajustarlo.
f.2 Oculares:
Para determinar si los oculares se encuentran sucios, montar una lmina con cualquier
muestra en el portaobjeto de la platina y observarla con el objetivo 40x, una vez enfocado el
objeto hacer girar un ocular a la vez y si se observan partculas que giran, es signo de
suciedad en los lentes de los oculares.
Cuando se retiren los oculares, cubrir los orificios donde estos se encuentran para que no
entre polvo en los prismas del cuerpo binocular del microscopio.
Sobre una franela o pedazo de tela desarme cuidadosamente el ocular, teniendo especial
cuidado de conservar el orden y posicin en la que se encuentran los lentes y separadores.
Cada lente debe limpiarse con un pedazo de algodn ligeramente humedecido con agua
destilada y luego secarlo con algodn seco, teniendo el cuidado de no tocar los lentes con la
yema de los dedos, porque quedaran impresas sus huellas digitales.
Con la pera insufladora sopletear los lentes para retirar cualquier partcula de polvo o
algodn.
Nunca use sustancias como acetona, xilol, alcohol 90, ter u otro para limpiar los lentes;
estas sustancias solamente son usadas por personal de Mantenimiento tcnicamente
capacitados.
I.4 CENTRFUGAS
Las centrfugas son equipos mdicos utilizados en los laboratorios, clnicas y otros, para la separacin de
solutos de sus solventes. Por ejemplo en la rama de laboratorio clnico, para el anlisis de sangre, por lo
general es necesario separar el plasma de los otros componentes para poder ser analizado. Existen varios
tipos bsicos:
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Centrfugas Clnicas (para separacin de sueros o plasma) de baja velocidad (Macrocentrfuga, entre 2,000
y 6,000 R.P.M. aproximadamente), Centrfugas para microhematcritos (Microcentrfuga entre 10,000 y
18,000 R.P.M. aprox.) y las ultracentrfugas (de 20,000 hasta 75,000 R.P.M.) para la separacin de
protenas.
Tambin pueden ser catalogadas basndose en otras caractersticas, como: grandes, medianas y pequeas;
o de piso.
En la figura No. 2, se muestra una centrfuga tpica, con sus partes. Las partes principales de este equipo
son las siguientes (Ver figura 2):
Figura 2. Centrfuga
3. Base 7. Freno
Tapadera. Impide el acceso a las muestras, mientras estas estn en movimiento. En la mayora de
modelos funciona en forma automtica, de modo que no pueda ser abierta mientras la centrfuga
est en funcionamiento.
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Base. Est construida generalmente de materiales pesados, y con sistemas de fijacin a las
superficies, de modo que brinda estabilidad al equipo. Generalmente aqu estn ubicados los
controles.
Tacmetro. Muestra la velocidad a la que gira el rotor, es decir la velocidad de centrifugacin (en
revoluciones por minuto, RPM).
Freno. Algunas centrfugas, dependiendo del modelo, presentan este control, el cual permite ya
sea hacer ms rpido el proceso de paro de la centrfuga, o detenerla en situaciones de emergencia.
Su funcin especfica es determinada por el fabricante, por tanto debe ser utilizado con precaucin
segn las instrucciones de ste.
El rotor. Tambin conocido como araa, es la parte en la cual se colocan los porta muestras. Para
su conservacin es importante seguir las instrucciones de cargado de la centrfuga (seccin IV.2).
Porta muestras. Son una especie de recipientes donde se colocan las muestras. Su tamao
depende de la aplicacin para la que est diseado el equipo: Banco de sangre, hematcrito, etc.
Estos componentes pueden ir variando dependiendo de la complejidad y calidad del equipo.
El cargar la centrfuga en una forma adecuada es muy importante para el funcionamiento correcto de la
misma, y su preservacin. Un procedimiento incorrecto de cargado, ocasiona que la centrfuga vibre durante
el proceso de centrifugacin, lo que ocasiona que el rotor sufra daos que pueden llevar a su sustitucin.
Un procedimiento de cargado correcto, implica el colocar las cargas en el rotor de forma balanceada.
Las centrfugas estn diseadas para obtener un balance cuando estn en movimiento. Para esto es
necesario cumplir los siguientes requisitos:
a) Colocar las cargas de modo que las cargas que tienen la misma masa o peso queden colocadas
de forma opuesta en el rotor. Si tiene un nmero impar de muestras para ser cargadas, busque otra
muestra de igual peso a modo de siempre formar pares opuestos de igual peso; nunca coloque un
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nmero impar de muestras dentro de la centrfuga. Utilice la balanza para estar seguro de la
igualdad de los pesos.
b) Adems de tener la misma masa (peso), deben tener el mismo centro de gravedad, es decir: no
coloque tubos y recipientes como pares contrapuestos, que tengan diferente forma, tamao,
espesor, etc.
c) Utilice la centrfuga colocando todos los accesorios en el rotor, ya que estos equipos han sido
diseados para trabajar con estos.
d) Utilice el rotor y accesorios originales del equipo. Las piezas no originales pueden producir un
desbalance y acortamiento de la vida til del equipo.
Adems de seguir las recomendaciones de la seccin I.4.2, es importante tomar en cuenta otras para
mantener la centrfuga en las condiciones adecuadas:
3. Reemplace los recipientes metlicos que estn deformados, pues producen una presin no
uniforme sobre el tubo de muestra.
4. No utilice equipo de vidrio rallado o agrietado, porque la presin centrfuga puede producir una
ruptura en estos puntos, pulverizando el vidrio y contaminando las otras muestras.
5. Reemplace los tapones amortiguadores de los portamuestras. Cuando se deterioren y/o se rompa
un tubo de vidrio, limpie los restos (macrocentrfuga).
6. Compruebe que la superficie donde tiene el equipo est perfectamente nivelada, ya que si sucede
lo contrario causara vibraciones.
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1. Tome un pauelo humedecido con agua y limpie internamente la cmara y la superficie externa;
luego pase suavemente un pauelo seco. Si tiene manchas pngale al pauelo humedecido, un
poco de detergente, si las manchas persisten reprtelas a mantenimiento. Recuerde que la orina y la
sangre son altamente corrosivas, por lo tanto, cuando se derramen limpie inmediatamente como se
detall anteriormente.
5. Revise l o los empaques de hule, en la mayora de los casos el tubo capilar (en la
microcentrfuga) perfora el empaque, botando la muestra de sangre, la plastilina y/o pulverizando el
tubo capilar. No hay necesidad de cambiar el empaque, basta con despegarlo con mucho cuidado y
girarlo un tercio del espacio entre marca y marca de un tubo capilar y el otro; pegarlo nuevamente
con pega de zapatero. Este procedimiento puede hacerse hasta dos veces, despus cmbielo.
6. Verifique la alimentacin elctrica del equipo para detectar posibles peladuras, cortes o
degradacin del material aislante.
7. Para cambiar los carbones, algunas centrfugas tienen acceso directo a ello, y basta con
desmontar las tapaderas de los portacarbones y verificar el estado de estos. Si estuviesen bien
gastados (entre un 60% y 75% de su tamao normal), agrietados o astillados, cmbielos
inmediatamente. Siempre se cambian los dos carbones, nunca debe cambiarse solo uno. En la
mayora de las centrfugas el acceso a los carbones se tiene por la parte de abajo del equipo, basta
con retirar los portamuestras e invertir el equipo, con un destornillador plano o Phillips (segn sea el
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caso), retirar los tornillos de la tapa inferior; verificar los carbones usando el criterio anterior. Antes
de realizar este procedimiento es importante que el tcnico de mantenimiento le haya explicado
cmo hacerlo, de lo contrario reporte la falla a mantenimiento.
8. Verifique que al centrifugar las muestras, no exista vibracin excesiva. Si la hay, verifique las
cargas; si estas estn bien y la vibracin persiste, reprtelo al departamento de Mantenimiento del
laboratorio.
Se estudia la balanza granataria en el presente manual por ser un equipo que tiene importancia en el
Laboratorio Clnico, ya que de su buen uso depende la exactitud en la preparacin de reactivos y de
estndares.
La balanza granataria (Ver figura 3) es la que nos proporciona mayor exactitud, es por eso que es usada de
preferencia en ambientes como los laboratorios clnicos, en donde se requiere de gran precisin en la
medida.
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Cabe observar que la balanza analtica manual de dos platillos, es muy delicada, ya que todas sus piezas
van colocada sobre pequeas cuas, lo que hace que una vibracin fuerte, cerca de ella pueda
desequilibrarla.
a) Antes de iniciar el uso de la balanza, asegrese que todo el sistema est a 0 (calibrado).
b) Para pesar un reactivo, debe pesarse primero el papel para film o papel encerado y a ese peso
sumarle la sustancia que se desea pesar.
d) Cuando se inicia el proceso de pesado primero se liberan los platillos de sus soportes con el
botn lateral y luego se libera el fiel, con el botn central.
f) Las unidades de gramos, las colocamos sobre el platillo de la derecha, las dcimas sobre la escala
superior.
g) Para obtener las centsimas y milsimas de gramos, se busca en la escala colocada al lado
derecho de los platillos, se toma como referencia el 0 de un pequeo nonius colocado bajo la escala.
b) Debe colocarse en una mesa que sea firme y protegerla de vibraciones (de ser posible una mesa
exclusiva para ella).
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c) Los platillos y el fiel deben descansar en sus soportes, siempre que no se est utilizando la
balanza.
e) Mientras la balanza est oscilando, la sustancia a pesar no debe colocarse sobre los platillos, ni
removerse. Para colocar el peso, debe de estar cerrado el fiel y los platillos colocados sobre los
soportes.
f) Si se derrama algn reactivo durante la pesada, hay que limpiar de inmediato con un pao limpio y
seco.
g) No manipular con los dedos, hay que utilizar las pinzas que se encuentran en la caja de pesas.
h) Para mantener un ambiente libre de humedad dentro de la campana, colocar en las esquinas de
la misma dos beakers (de 100 ml.) llenos de slica gel o Carbonato de Sodio.
i) Los pesos mayores de 1 gr deben ser aadidos estando el brazo en posicin de reposo, pues de lo
contrario se puede daar la porcin oscilante que une el platillo al brazo. El brazo siempre debe
soltarse suave y lentamente.
j) Se debe observar si hay una marcada oscilacin del platillo despus de soltarse el brazo, pues
esto indica falta de alineacin. La alineacin debe hacerla personal capacitado. Reprtela al
departamento de mantenimiento.
k) La balanza debe protegerse de corrientes de aire, pues estas producen inestabilidad. Se requiere
ms o menos 15 minutos con 30 segundos para que el flujo de aire cese despus de que se ha
cerrado la puerta.
El creciente aumento en las enfermedades de alto riesgo (VIH y Hepatitis B) hace necesario que el personal
que trabaja en los laboratorios clnicos tome muy en serio las recomendaciones dadas por la OMS. Una de
las ms importantes recomendaciones es la prohibicin de usar pipetas con la boca.
Es por ello que se hace necesario el conocimiento del uso de las pipetas automticas y de las pro-pipetas
(Ver figura 8).
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b. Se sumerge la punta, en la solucin que se necesita pipetear estando seguros que la punta este
bien colocada y que no haya ningn tipo de residuos entre la punta y el cuerpo de la pipeta.
b. Sumerja la punta en la solucin (2-3 mm) y suelte el botn despacio. La punta tiene que estar bien
llena.
c. Descarte el lquido de la punta presionando suavemente el botn superior hasta el primer tope.
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b. Use solamente etanol al 70% para la limpieza de la pipeta. Otro tipo de solvente no es
aconsejable.
c. Utilizar las puntas adecuadas a las pipetas y a la cantidad de solucin que se va a medir.
d. El pistn y el cilindro pueden ser chequeados al menos una vez al ao si la pipeta es usada
diariamente.
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TCNICAS DE HEMATOLOGA
I. Introduccin
El hemograma es un estudio rutinario realizado para el diagnstico clnico de algunas entidades patolgicas
o como medio de seguimiento de evolucin de las mismas. Los datos que aporta de manera importante es la
presencia de anemia o eritrocitosis, as como la evidencia de enfermedades inflamatorias y ocasionalmente
alrgicas, asi como tambin permite identificar agentes etiolgicos (Babesia spp.).
II. Objetivo
El discente desarrollar las habilidades necesarias para hacer un hemograma obteneniendo el hematocrito,
el nmero de eritrocitos, los ndices de Wintrobe, conteo de leucocitos, as como el diferencial, para clasificar
las anemias o en su caso policitemias presentes en el paciente, procesos inflamatorios y/o infecciosos, para
asi tomar decisiones teraputicas sobre los pacientes.
Tubos capilares
Microcentrfuga
Plastilina o un encendedor
Sangre con EDTA o heparina
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TECNICA
1. Llenar un tubo capilar liso (75 mm x 1.0 mm), hasta 3/4 partes de su capacidad con sangre
anticoagulada con EDTA o heparina, sosteniendo el tubo en una posicin casi horizontal para
facilitar el llenado.
a. Como una alternativa puede obtenerse sangre por puncin capilar de la oreja, la ua o dedo
utilizando tubos heparinizados.
2. Limpiar el exceso de sangre del exterior del capilar.
3. El extremo capilar que tiene el anillo coloreado debe sellarse con plastilina manteniendo el capilar en
posicin horizontal e introduciendo este extremo seco en la placa con el compuesto sellador en un
ngulo de 90, girar el capilar ligeramente y retirar la placa. El tapn formado debe tener menos de 4
mm de longitud.
a. Tambin puede ser sellado acercndolo a la flama de un mechero (o encendedor en su
defecto) teniendo cuidado de no calentar la sangre.
4. Colocar el capilar en la microcentrifuga con la parte sellada hacia la periferia. Identificar bien los
tubos.
5. Fijar el cabezal de la centrfuga y cerrar la tapa.
6. Centrifugar durante 5 minutos entre 12.500 y 15.000 rpm. no usar el freno para detener la centrfuga.
7. Se retiran los tubos de la centrifuga y se lee el porcentaje de hematocrito o tambin conocido como
PVC (packed cell volume). Utilizando la tabla para su lectura.
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8. Se debe leer el nivel de eritrocitos centrifugados; no incluir la capa rica en leucocitos y plaquetas
(buffy coat). El valor del hematocrito se calcula dividiendo la longitud de la capa de eritrocitos entre
la longitud total constituida por los eritrocitos, buffy coat y plasma.
Valor de referencia
Estos valores son ligeramente ms bajos en hembras, y dependen de la localidad donde se evalen, por lo
que se recomienda realizar tablas de referencia para valores hematolgicos.
MATERIAL NECESARIO
Hematocitmetro o cmara de
Neubauer
Pipeta de Thomas
Tubo de hule y boquilla
Sangre con EDTA
Diluyente de Harem (cloruro de
mercurio 0.5g, cloruro de sodio 1.0g,
sulfato de sodio 5.0g, y agua destilada
200ml) solucin salina
TCNICA
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4. Se debe limpiar la sangre del exterior de la pipeta con un trozo de papel filtro.
a. Si se rebasa la marca se debe ajustar eliminando el exceso de sangre con un papel filtro o
un algodn, aun as pueden quedar adheridas clulas a la pipeta y la cuenta podra resultar
ms alta.
5. Despus se aspira el diluyente de Harem sino tenemos utilizar solucin salina, con una succin
uniforme hasta la lnea de 101 por encima del bulbo y se debe girar suavemente mientras se llena.
6. La pipeta se retira del diluyente de forma horizontal y se tapan los orificios con los dedos, toda la
sangre debe estar en el bulbo.
7. La pipeta debe agitarse por 2 o 3 en un agitador mecnico, si se hace manual debe ser formando
8s con la mueca.
Conteo de eritrocitos
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d. Clculo
INDICES ERITROCITARIOS
12
VGM= Hto (L/L) x 1000 /recuento de eritrocitos (x 10 /L)
12
VGM= Hto (%) x 10 /recuento de eritrocitos (x 10 /L)
Valores de referencia
Perros adultos 60 a 77 Femtolitros (fL).
Perros recin nacidos 95 a 100 fL hasta los 2 meses de edad.
Gatos adultos 39 a 55 fL.
Gatos recin nacidos 90 fL hasta el mes de edad.
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Valores de referencia
Los valores de las clulas normocrmicas varan de 320 a 370 g/L, de las clulas hipocrmicas son menores
a 320 g/L y los de clulas hipercrmicas son mayores que 370 g/L.
RETICULOCITOS
En los casos en que es diagnosticada una anemia (Hto < 0.37 L/L) es imperativo determinar si esta es
regenerativa, por lo que se debe realizar un conteo de reticulocitos y calcular todos los parmetros que este
conteo ofrece.
MATERIAL NECESARIO
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Clculo
9
Valor absoluto de reticulocitos (reticulocitos x10 /L) = Eritrocitos totales X porcentaje de reticulocitos X
9
10. Si el valor es mayor a 60 x10 /L se considera una anemia regenerative.
Reticulocitos corregidos= Porcentaje de reticulocitos X Hto. observado (L/L)/ Hto. Normal (0.45L/L perro;
0.35 L/L en gato). Este valor corrige para casos donde existe destruccin de eritrocitos maduros de forma
aguda.
Tiempo de maduracin
Tiempo de maduracin
Hto (L/L) Hto (%)
reticulocitaria
0.45 45 1
0.35 35 1.5
0.25 25 2
0.15 15 2.5
Interpretacin: IPR < 2 = anemia no regenerativa; IPR > 2 = anemia regenerativa; IPR > 3 = sugerente a
anemia hemoltica
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MATERIAL NECESARIO
TCNICA
1. Se sigue la misma tcnica que con los eritrocitos solo que la pipeta tiene una marca de 11 por
encima del bulbo.
2. La sangre se aspira hasta la marca del 0.5 y diluida hasta la marca de 11 con la solucin de Turk.
3. Se desechan 2 o 3 gotas de la pipeta antes de llenar la cmara.
4. Se deja 1 minuto para que los eritrocitos se lisen y que los leucocitos sedimenten.
5. Con el objetivo de 10x se cuentan las clulas de cada uno de los 4 cuadros grandes de las esquinas
como se muestra en la siguiente figura.
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a. Se debe reducir la iluminacin para detectar a los leucocitos como objetos uniformes y
oscuros.
b. La regla de incluir y excluir las clulas es la misma que la de los eritrocitos.
Clculo
9
Leucocitos totales /x10 /L= Clulas contadas x 0.05.
Lo que es igual a 50 por la suma de las clulas contadas en los 4 cuadrados= Leucocitos totales
/microlitro.
Cuando se encuentran ms de 5 eritrocitos nucleados en el diferencial, la cuenta leucocitaria
se debe corregir de la siguiente manera:
Cuenta corregida = Leucocitos totales X 100 / 100 + Glbulos rojos nucleados
observados.
RECUENTO DIFERENCIAL
Este conteo permite saber los porcentajes y valores absolutos de las distintas lneas de leucocitos, que
permitira determinar la presencia de diferentes reacciones.
MATERIAL NECESARIO
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tincin de Wright
Sangre con EDTA
TCNICA
1. Hacer una extensin de sangre bien mezclada con sangre con anticoagulante EDTA o capilar con el
mtodo de atraer y arrastrar.
2. Seque rpidamente al aire o en una corriente de aire tibio.
3. Tia el frotis con la tcnica indicada en el apartado de tinciones soluciones.
4. Formas incorrectas de extendido de frotis:
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Examen microscpico
En 10x examinar calidad global del frotis, color y distribucin de clulas, la formacin de rodillos por
los eritrocitos o la aglutinacin de los mismos, debe revisarse con rapidez en busca de cualquier
clula anormal grande o incluso parsitos inesperados.
En 40x se selecciona la zona correcta del extendido donde se debe iniciar el recuento y evaluar la
morfologa celular. Para ello se selecciona el rea en la que los eritrocitos estn superpuestos de 2 a
3 pero que la mayora estn separados entre s.
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En 100x se coloca una gota de aceite de inmersin y se enfoca con este objetivo, se cuentan y
clasifican 100 leucocitos y se informan como porcentajes de leucocitos (valores relativos). La
morfologa de eritrocitos y plaquetas as como la estimacin de estas ltimas se hacen tambin con
este.
Diferencial leucocitario
9
Cuando el recuento leucocitario es mayor a 40.0 x 10 /L se debe realizar el conteo diferencial en 200
clulas.
El barrido del frotis debe hacerse en forma de almena para lograr que la observacin sea
representativa como se muestra en la figura siguiente.
Es importante incluir los bordes laterales para incluir las clulas ms grandes como monocitos,
linfocitos reactivos y clulas inmaduras.
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Tambin se informan anomalas de leucocitos, granulaciones toxicas (se informan como ligeras a
marcadas o 1+ a 3+), cuerpos de Dohle, linfocitos reactivos (pueden reportarse como porcentajes o
como aislados o abundantes).
La formula para convertir valores relativos en absolutos nunca debe omitirse ya que son los
valores ms tiles para la interpretacin es la siguiente:
9 9
Lnea celular/x10 /L= % de lnea celular contado X total de leucocitos (x10 /L)/ 100
PROTEINAS PLASMTICAS
MATERIAL NECESARIO
Tubo capilar
Sangre con EDTA
Refractmetro
Tornillo calibrador (Flecha blanca)
TCNICA
1. Se realiza la tcnica para medir el microhematocrito mencionada anteriormente.
2. Una vez separados los componentes se revisa el color del plasma sobre un fondo blanco. Se
pueden observar las coloraciones siguientes: amarillo plido o paja, transparente, amarillo intenso,
rosado o rojizo, blanco lechoso o turbio, rosa lechoso.
3. Posteriormente el tubo capilar se rompe por encima del Buffy coat.
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4. Se depositan 1 o 2 gotas del plasma sobre el prisma del refractmetro por la parte contraria a la que
se rompi el tubo capilar.
5. Se observa y se registran los niveles de protenas plasmticas en g/dl para multiplicarlos por 10 para
obtener el valor en g/L.
Nota: los valores pueden estar falsamente elevados en hiperlipidemia, hemlisis y/o hiperbilirrubinemia.
Las protenas plasmticas y el hematocrito deben interpretarse en forma conjunta.
Se tiene que calibrar antes de la lectura el refractometro, aplicando una gota de solucin buffer,
ajustando el tornillo (flecha blanca), despues de la lectura se realiza la limpieza con solucion fisiologica y
secar perfectamente el refractmetro.
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I. Introduccin
La evaluacin de los tiempos de coagulacin es una prctica ideal para conocer los distintos tipos de
coagulopatas que podran presentarse en la prctica clnica. Aunque no son enfermedades comunes si son
situaciones que ponen en peligro la vida de los pacientes y deben ser reconocidas correctamente.
II. Objetivo
El discente desarrollar las habilidades necesarias para evaluar los tiempos de coagulacin y poder
diferenciar las vas afectadas de dicha coagulacin.
TCNICA
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5. Cuando termine la incubacin, pasar la cubeta pequea con el plasma y el baln al orificio central
(lector) e inmediatamente detener el conteo oprimiendo RESET.
6. Agregar los 200 microlitros del reactivo PT incubado en la cubeta grande a la cubeta pequea que se
encuentra en el lector, posteriormente este se comprime.
7. Registrar el tiempo de coagulacin.
15.9 segundos 25 %
LED
Plasma
+
PT
Lecto
LED
Valores de referencia
Perro 7 a 10 seg.
33/70
MATERIAL REQUERIDO:
TECNICA
1. Colocar 100 microlitros de plasma citratado en 1 cubeta pequea ms 100 microlitros de reactivo
(APTT) y posicionarla en el trombotimer en el lado derecho.
2. Colocar 100 microlitros de Cloruro de calcio en una cubeta pequea y posicionarla en el trombotimer
en orificio inferior derecho.
3. Colocar el Baln en la cubeta con el plasma y comprimirla.
Eso har que el foco de LED se encienda indicando el inicio de la incubacin. El foco comenzar a
parpadear cuando ya este por terminar la incubacin y se apagara cuando as sea.
4. Cuando termine la incubacin, pasar la cubeta pequea con el plasma mas el APTT y el baln al
orificio central (lector) e inmediatamente detener el conteo oprimiendo RESET.
5. Agregar los 100 microlitros del cloruro de calcio incubado a la cubeta pequea que se encuentra en
el lector, posteriormente este se comprime.
6. Registrar el tiempo de coagulacin.
Valor Normal: < 20 segundos.
LED
Lector
LED
CaCl
34/70
Valores de referencia
RECUENTO PLAQUETARIO
MATERIAL NECESARIO
1. Con la pipeta de eritrocitos se aspira sangre capilar que fluye hasta la marca de 0.5 y se diluye hasta
la marca con oxalato amnico.
2. Se mezcla durante 5 minutos, de preferencia en un rotor mecnico.
3. Se desechan las primeras 3 o 4 gotas y se llena la cmara.
4. En la caja de petri con el papel filtro hmedo sobre la tapa o bien la hoja de papel hmedo en la
parte de abajo y la cmara sobre dos soportes que la separen del papel filtro hmedo, y encima la
tapa de la caja de petri para evitar la entrada de detritus y basura.
5. Ah se deja reposar la cmara por 15 minutos para que las clulas sedimenten
6. Se cuentan todos los trombocitos en toda el rea rayada reservada para la cuenta de eritrocitos. Se
utiliza microscopia de contraste con el aumento de 40x.
7. Deben contarse ambos lados del hematocitometro y los recuentos no deben diferir en ms de un
10%
3
8. Como se us una dilucin 1:100 se observa 0.1mm , el valor de trombocitos es el mismo para
9
concentracion de x 10 /L.
35/70
Valores de referencia
9
Perros 200 a 575 x10 /L
9
Gatos 230 a 680 x10 /L
9
Trombocitopenia leve 100 175 x10 /L
9
Trombocitopenia grave < 20 x10 /L en el cual puede haber signos clnicos.
Estimacin plaquetaria
Valores de referencia
36/70
PRUEBA DE FIBRINOGENO
37/70
I. Introduccin
La anemia es una entidad clnica sumamente comn en la prctica diaria, en ocasiones esta anemia puede
ser tan grave que los mecanismos compensatorios podran verse superados y por tanto poner en riesgo la
vida del paciente. La transfusin sangunea es una tcnica que se lleva a cabo siempre que existe un dficit
de eritrocitos que transporten suficiente cantidad de oxgeno a los tejidos. Una de sus principales
desventajas es la existencia de incompatibilidades que deben ser evaluadas previamente a la administracin
de sangre entre individuos, para hacer a esta prctica ms segura.
No se debe transfundir a un paciente simplemente con base a un hematocrito (Hto), sino tambin tomar en
cuenta la causa y si persiste la prdida de sangre, si est respondiendo al tratamiento sintomtico, etc. El
funcionamiento renal, cardiaco y pulmonar tambin deben ser tomados en cuenta antes de realizar una
transfusin. Cuando el Hto es menor a 0.30 L/L se encuentra deprimida la funcin ventricular, sin embargo,
la extraccin de oxgeno y la presin venosa central de O2, permanecen normales hasta que se alcanza un
Hto de 0.20 L/L (2, 3). El volumen sanguneo circulante (plasma + eritrocitos) normal en perros es de 85 a 90
ml/kg., y en el gato es de 65-75 ml/kg (4).
II. Objetivo
El discente desarrollar las habilidades necesarias para identificar las posibles incompatibilidades
sanguneas entre individuos de la misma especie, antes de realizar la transfusin sangunea.
III. Material
38/70
Tcnica
1. Se deben extraer al menos 2 mililitros de sangre con EDTA de cada paciente (donador y
receptor).
2. Se centrifugan las muestras a 3500 r.p.m. durante un minuto, a partir de aqu se separa el
plasma.
3. Se realiza un lavado con solucin salina de los eritrocitos, se homogeinizan, se vuelve a
centrifugar y se elimina el sobrenadante, esta accin se repite tres veces.
4. Del concentrado de eritrocitos de cada paciente se obtienen 20 L de eritrocitos se mezclan con
980 L de solucin salina (Eritrocitos al 2%). De ambos el receptor y el donador.
5. Prueba cruzada MAYOR
Se agregan 150 L de eritrocitos del donador (solucin al 2%) a 150 L del plasma del receptor.
7. Prueba CONTROL
Se agregan 150 L de eritrocitos del donador a 150 L de plasma del donador. (Figura 1).
Interpretacin
39/70
A que pueden deberse las reacciones adversas a parte de los grupos sanguneos?
40/70
I. Introduccin
El Urianlisis como herramienta diagnstica, permite evaluar distintos rganos y sistemas tales Como la
sangre, el pncreas endocrino, el hgado y el sistema inmunolgico, as como algunas enfermedades
neoplsicas y musculares. Lo anteriormente descrito indica que se deben interpretar correctamente los
resultados para poder tomar decisiones diagnsticas y/o teraputicas.
II. Objetivo
El discente desarrollar las habilidades necesarias para evaluar las alteraciones presentes en el Urianlisis
que le permitirn diferenciar los orgenes de estas.
III. Material
5 mililitros de orina.
Tubos de ensayo
Refractmetro
Microscopio clnico
Centrfuga clnica (1500-3000 rpm)
Tiras reactivas de orina (diferentes marcas)
IV. Tcnica
El examen de la orina est conformado por tres partes, un examen fsico, uno qumico y uno microscpico,
que se realizan en ese orden. El procedimiento entiende de la obtencin de 5 mililitros de orina por
diferentes tcnicas como son:
Miccin espontnea
Ventajas
Fcil.
No traumtico.
41/70
Desventajas
Falta de cooperacin del animal.
Necesidad de evitar el residuo del final de la miccin.
Riesgo de hematuria y rotura de la vejiga con la presin manual.
Volumen variable.
Riesgo de contaminacin fecal/muestra no adecuada para cultivo.
Cistocentesis
Ventajas
Rpida.
Asptica.
Sin contaminacin uretral.
Fcil de realizar cuando la vejiga esta moderadamente distendida el paciente
adecuadamente sujeto.
Riesgo mnimo de hematuria e iatrogenia.
Desventajas
Experiencia
Contraindicado cuando hay Trombocitopenia o la vejiga esta hiperdistendida (obstruccin
del tracto urinario inferior) no est suficientemente llena.
Cateterizacin
Ventajas
Sin riesgo de contaminacin
Desventajas
Experiencia
Riesgo de infeccin e iatrogenia, hematuria por lesin en la mucosa
Coste del equipo y del catter desechable.
Una vez obtenida la muestra esta debe ser vertida en un tubo de cristal nuevo o limpio que no contenga
ningn tipo de aditivo. En este tubo es donde se observarn las distintas pruebas a realizar en la orina.
42/70
EXAMEN FSICO
Evaluar las caractersticas organolpticas de la orina
1. Color.- suele ser amarilla, plido o mbar, depende de la concentracin urinaria y se debe
interpretar junto con la densidad urinaria. El color se determinan al observar la orina en el tubo de
ensayo.
1. Amarilla (clara, plida, oscura)
2. Incolora
3. Caf-amarillenta o rojiza
4. Verde
5. Rojo
6. Azul
7. Lechoso
2. Olor.- (este paso suele evitarse) pero se determina por medio del olfato indirectamente al verter la
muestra de orina al tubo, debe hacerse con distancia y puede reportarse:
1. Normal o caracterstico
2. Amoniacal
3. Dulce
4. Putrefacto
5. A frmacos
3. Aspecto.- hay que comparar el aspecto de la orina fresca en los perros y gatos normales, la cual
suele ser transparente durante la miccin; puede presentar cierto grado de turbidez debido a
factores como cristales, clulas, lpidos, etc. Puede reportarse:
1. Transparente
2. Ligeramente turbia
3. Turbia
4. Muy turbia
43/70
Tcnica:
Despus de centrifugar la muestra a 1500 rpm durante 3 minutos.
Con un pipeta se toma una pequea cantidad de orina fresca
Colocar una(s) gota(s) sobre el prisma del refractmetro
Se observa el lente del mismo y se anota la densidad observada
Al terminar la lectura se limpia el prisma con un algodn humedecido con agua destilada y
despus de seca con otro seco, cuidando de no rayar el prisma.
Si la lectura sale de la escala, se diluye un pequeo volumen de orina con igual volumen de agua destilada,
se toma la lectura de nuevo y se multiplica por 2 las ltimas cifras.
Fig. 1 Refractmetro
EXAMEN QUMICO
Tcnica manual:
Realizar el examen qumico dentro de la primera hora de recolectada la orina.
La muestra de orina deber depositarla en un tubo de ensayo, lo suficiente para poder introducir la
tira reactiva de orina y esta se humedezca de manera correcta y completa; retirarla inmediatamente
para evitar que se disuelvan los reactivos.
Al momento de sacar la tira deslice el borde de la tira contra el canto del recipiente para eliminar el
exceso de orina.
Mantenga la tira en una posicin horizontal para prevenir posibles mezclas de los reactivos y/o
contaminar las manos con orina.
Leer visualmente comparando las reas reactivas con la correspondiente escala de color de la carta
adherida al frasco a los tiempos especificados ms adelante.
Mantenga la tira cerca de los bloques de color y compare cuidadosamente
Evitar tocar la carta de color con la tira para que no se deteriore la carta.
44/70
Glucosa pH 60
30
Bilirrubina 30 Protenas 60
Cetonas 40 Urobilinogeno 60
Gravedad Especfica Nitrito 60
45
Sangre 60
NOTA: Estos tiempos pueden variar con la marca productora de la tira reactiva.
EXAMEN MICROSCPICO
Para interpretar el sedimento urinario deber de ser de manera inmediata o bien centrifugar la muestra y
recoger el sedimento para comenzar a examinarlo. Si se demora para hacer la inspeccin las clulas pueden
lisarse, cambiar el pH y la precipitacin de cristales sin trascendencia.
45/70
Tcnicas: hay dos planteamientos de la microscopia, cada uno de los cuales requiere una interpretacin
diferente.
Interpretacin u Observaciones
Examen Qumico
Los resultados se deben reportar de manera cualitativa (como 1+, 2+, 3+, etc.) ya que la determinacin del
color es apreciativa del tcnico y la concentracin depende de la gravedad especfica o densidad urinaria).
Slo debern colocarse concentraciones aproximadas cuando se utilicen aparatos pticos para la lectura de
las tiras reactivas.
46/70
Examen Microscpico
La muestra se observa en un objetivo 10X, para encontrar el plano donde hay sedimento, determinar la
cantidad del sedimento y encontrar elementos de mayor tamao como cilindros y agregados celulares, se
debe examinar el rea completa bajo el cubreobjetos debido a que los cilindros tienden a flotar en el extremo
de cubreobjetos. Estos se reportan como el nmero medio observado en el objetivo poco aumentado.
Para detectar la presencia de bacterias e identificar algunos cristales y diferenciar tipos celulares es
necesario el objetivo 40X. las clulas epiteliales, los eritrocitos y leucocitos se reportan como nmero medio
observado por un objetivo de muchos aumentos.
Las bacterias se registran como escasas, moderas o abundantes y su morfologa (coco, bacilo, filamento,
etc).
47/70
DETERMINACIONES BIOQUIMICAS
Las determinaciones bioqumicas en nuestro laboratorio se realizan utilizando suero como principal muestra,
se prefiere trabajar con suero porque este se hemoliza menos probablemente que el plasma, adems no
contiene anticoagulantes los cuales pueden interferir en las determinaciones que se vayan hacer o pueden
extraer el agua de las clulas sanguneas originando la dilucin de los constituyentes. Sin embargo, el
plasma puede ser utilizado en las determinaciones de urea y glucosa porque no existe una diferencia muy
marcada en la concentracin de estos metabolitos en los eritrocitos y en el plasma, pero la diferencia en las
concentraciones de otros constituyentes es mas elevada. En nuestro laboratorio se realizan con mayor
frecuencia y con fines diagnsticos las siguientes determinaciones:
GLUCOSA
I. Introduccin
El nivel de glucosa sangunea refleja las condiciones nutricionales, emocionales y endocrinas del sujeto.
Despus de la comida aumenta hiperglucemia alimentaria en animales monogstricos, pero no en los
rumiantes. Durante la excitacin aumenta probablemente como efecto de la liberacin de norepinefrina. Por
esta razn es costumbre obtener la sangre de individuos post-absortivos quietos, para determinar la glucosa
sangunea en ayunas. La concentracin de glucosa en los eritrocitos se aproxima a la concentracin de
glucosa en plasma en la mayora de los monogstricos y rumiantes jvenes. Los eritrocitos de los equinos
contienen tambin poca glucosa, la concentracin de glucosa en el plasma excede generalmente a la de
glucosa en sangre en 10 a 30 mg/dL en rumiantes y caballos adultos.
48/70
II. Objetivo
La medicin de la glucemia en muestras sanguneas en animales domsticos, tanto en suero como plasma y
describir las diferencias encontradas
III. Material
IV. Mtodo.
Principio.
MUESTRA.
EQUIPO.
QUICK LAB
REACTIVOS.
1 reactivo (tampn/enzimas/cromgeno)
1-A Fenol
49/70
CONDICIONES.
Evitar en lo posible la fuerza en el momento de la toma de muestra, para minimizar las condiciones
de estrs, que pueden alterar el metabolismo de los carbohidratos.
LINEALIDAD.
PROCEDIMIENTO
Incubar a 37C en bao de Mara por 15 min, o a temperatura ambiente por 30 min.
Colocar el Blanco en la cubeta de reaccin y presionar la tecla BLANK, luego colocar el estndar y
presionar la tecla CALIBRATE, por ltimo colocar la muestra y presionar la tecla ANALYSE.
EXPRESION DE RESULTADOS.
Los resultados para esta prueba en nuestro laboratorio, se expresan en mg/dl. Para convertirlo al
sistema internacional de Unidades debe multiplicarse por 0.051 o dividirse entre 18 (mg/dL a
mmol/L)
V. Interpretacin u observaciones
Las concentraciones de glucemia evalan indirectamente la actividad endocrina del pncreas, adrenales,
hipfisis y el estado nutricional del individuo. Valores de hiperglucemia pueden indicar insuficiencia de
insulina o efecto esteroidal endgeno o exgeno. Valores de hipoglucemia pueden indicar desnutricin
severa, insuficiencia heptica o consumo in vitro, por lo que se recomienda interpretar los resultados a la luz
de la historia clnica de cada individuo.
50/70
UREA
La urea es un compuesto orgnico relativamente simple producido por los mamferos en el hgado como
producto final del catabolismo de las protenas. Es una de las substancias ms difusibles en el cuerpo y se
encuentra en todos los lquidos del cuerpo. Es relativamente atxica, aunque en concentraciones altas
desnaturaliza protenas con la formacin de productos txicos. La urea se elimina principalmente por los
riones, pero una porcin de ella por la piel, sobre todo en los animales que sudan. Se ha observado que el
nitrgeno ureico sanguneo no se eleva en perros, salvo pocas excepciones, hasta que al menos el 75% del
rin funcional se ha destruido, y se aconseja hacer la determinacin en todos los pacientes quirrgicos de
mas de 5 aos y en toda enfermedad en perros viejos antes de iniciar el tratamiento. La urea se aumenta en
sangre por trastornos renales como la insuficiencia renal crnica y aguda; por obstruccin de las vas
urinarias; excesiva destruccin de protenas como en estados de fiebre, toxicidad o sepsis extensa. Tambin
se pueden aumentar los niveles de urea por una hemoconcentracin debida generalmente a graves vmitos
o diarreas; cuando existe alteracin de la funcin cardiaca que reduce el flujo de sangre a travs del rin se
ve aumentada la concentracin de urea en sangre.
El descenso en los niveles de urea son raros, tericamente pueden presentarse en asociacin con graves
enfermedades hepticas o malnutricin de protenas.
II. Objetivo
La evaluacin orgnica de los distintos sistemas es importante al interpretar los cambios clnicos observados
en el paciente, la evaluacin heptica y renal son dos de las pruebas que se realizan ms frecuentemente en
la clnica veterinaria.
III. Material
IV. Tcnica
METODO.
UV a tiempo fijo.
PRINCIPIO.
MUESTRA.
Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:50 con agua destilada.
EQUIPO.
QUIK LAB
REACTIVOS
1 A Tampn
25C.
CONDICIONES.
Aunque la urea es estable en suero, plasma u orina durante varios das bajo refrigeracin, las
muestras, especialmente la orina, debern valorarse a las pocas horas para evitar la contaminacin
bacteriana, que podran provocar una perdida rpida de la urea.
LINEALIDAD.
En suero y plasma la linealidad del mtodo es hasta 300mg/dl y 150 g/l para la orina. Para
concentraciones altas, diluir la muestra 1:2 con agua destilada, repetir la valoracin y multiplicar el
resultado por 2.
52/70
PROCEDIMIENTO.
Standard Muestra
EXPRESION DE RESULTADOS.
CREATININA
La creatinina esta en el cuerpo principalmente en forma de fosfato de alta energa. En los msculos es
fuente de energa. En animales jvenes de crecimiento se encuentra en mayores cantidades. La creatinina
es una substancia muy difusible y distribuida de manera uniforme en el agua corporal. Se elimina del plasma
aproximadamente en la tasa de filtracin glomerular.
Al estudiar la excrecin de creatinina, tiene valor el hecho de que los niveles sricos de creatinina casi no
son afectados por la creatinina exgena de los alimentos, por la edad, el sexo, el ejercicio o la dieta. Por lo
tanto los niveles elevados solamente se presentan cuando se altera la funcin renal. La medicin de los
niveles de creatinina en sangre proporcionan la misma informacin para el diagnstico y pronstico de la
funcin renal que la obtenida por la medicin del nitrgeno ureico.
MTODO.
PRINCIPIO.
La creatinina reacciona en un medio alcalino que no contenga protenas con picrato, para formar un
compuesto rojo anaranjado (Reaccin de Jaff).
53/70
MUESTRA.
Suero o plasma.
EQUIPO.
QUIK LAB
REACTIVOS.
Los reactivos 1 y 2 son estables a temperatura ambiente de 15 a 25C hasta la fecha de caducidad
que viene indicada en la etiqueta.
CONDICIONES.
LINEALIDAD.
volumen de la muestra con un volumen igual de agua destilada, repetir el ensayo y multiplicar el
resultado por 2.
PROCEDIMIENTO.
Standard Muestra
54/70
Colocar la solucin standard y presionar la tecla CALIBRATE, luego colocar la muestra y presionar
la tecla ANALYSE.
EXPRESION DE RESULTADOS
Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo a- amino de la alanina al cido a-cetoglutarico. La enzima
se encuentra en el hialoplasma de todas las clulas y existe una relacin lineal entre la GPT heptica y el
peso del animal. Siendo este el caso la determinacin de GPT es casi especifica del hgado del perro y el
gato, mientras que es de escaso o de ningn valor en las enfermedades de bovinos y equinos. Se ha
encontrada muy elevada en la necrosis heptica. Es una enzima muy estable, y en estado de congelacin se
conserva largo tiempo. La ictericia no estorba la determinacin de la enzima, pero debe evitarse la hemlisis.
Las enfermedades hepticas que producen niveles elevados de GPT comprenden neoplasias malignas,
cirrosis y hepatitis, incluyendo la que se produce en el perro por el virus de la hepatitis canina infecciosa
(HCI)
METODO.
Test cintico UV
PRINCIPIO.
55/70
MUESTRA.
EQUIPO.
QUIK LAB
REACTIVOS.
1 A NADH/LDH
2 a - cetoglutarato
PIRIDOXAL 5-FOSFATO
CONDICIONES.
LINEALIDAD.
Para concentraciones mayores de 265 y 271 U/L a una absorbancia de 340 y 334 nm
PROCEDIMIENTO
Muestra
Solucin 1 1000 l
56/70
Solucin 2 100 l
Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la cubeta de reaccin y presionar al tecla
START.
EXPRESION DE RESULTADOS
Esta enzima hidroliza los fosfatos orgnicos en fosfato inorgnico y la fraccin orgnica. Es una enzima muy
estable y puede ser congelada con poca o ninguna prdida de actividad se halla gran cantidad en el hgado,
rin, mucosa intestinal y hueso. En la mayora de los animales, quiz con excepcin del gato se elimina en
su forma natural por el hgado por lo tanto cualquier obstruccin al flujo de la bilis causa aumento de la
enzima en el suero. El problema es determinar la fuente de esta elevacin cuando no es patente la
enfermedad heptica. Se producen elevaciones de la enzima en el suero, en enfermedades del bazo,
hgado, rin, mucosa intestinal o hueso. En la obstruccin biliar se eleva notablemente, las neoplasias
seas malignas causan a veces niveles elevados. Tambin se puede elevar la ALP por una mayor actividad
de los osteoclastos durante el crecimiento del esqueleto, por enfermedades seas degenerativas en
animales adultos, raquitismo, osteomalacia y en osteosarcoma. Durante interferencias con la excrecin
heptica, debida a una destruccin de las clulas hepticas o a una destruccin del conducto biliar. Los
resultados se interpretan mejor en conjuncin con los niveles de GPT, que generalmente se encuentran
aumentados en estos casos.
MTODO.
Colorimtrico.
PRINCIPIO.
MUESTRA.
57/70
EQUIPO.
QUIK LAB
REACTIVOS.
1 TAMPON
1 A substrato
CONDICIONES.
LINEALIDAD
El mtodo tiene una linealidad de 1492U/I, valores superiores a este realizar diluciones 1:10.
PROCEDIMIENTO
Muestra
Solucin 1 1000 l
Suero Problema 10 l
Solucin 2 100 l
Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la cubeta de reaccin y presionar la tecla
START.
EXPRESION DE RESULTADOS.
58/70
La utilizacin del equipo depende del tcnico laboratorista preparado, por lo que se recomienda siempre leer
el manual del usuario. Para corregir algunos problemas se presentan las siguientes acciones:
_ Cambio de lote de sueros multicalibradores y reactivos, realizar nueva calibracin del equipo.
_ Verificar reactivos que correspondan a la prueba pedida y evitar agotamiento de los mismos.
V. Interpretacin u observaciones
Incrementos en la Urea y Creatinina se asocian a estados de hiperfusin renal y posiblemente lesin activa,
es importante compara estos resultados con la concentracin urinaria dada por el resultado de
refractometra: densidad urinaria (ver Urianlisis).
59/70
I. Introduccin
La evaluacin citolgica de los lquidos corporales, de los tejidos y de las lesiones tumorales se ha
convertido en una opcin muy importante en medicina veterinaria. Sobre todo desde hace casi 20 aos. Se
trata de un medio de diagnstico muy rpido, fcil de realizar, barato, con un mnimo de riesgos y que
permite con frecuencia evaluar las muestras e interpretarlas antes de que el paciente se retire de la sala de
examen, e identificar el proceso como neoplsico o inflamatorio. En algunos casos se pueden establecer los
procedimientos indicados para llegar a un diagnstico final, como el realizar una biopsia, una evaluacin
microbiolgica, un examen radiolgico, etc. Con revisiones peridicas se puede efectuar un seguimiento de
la evolucin del caso, as como un control del tratamiento, determinando si ste es eficaz o se debe
reemplazar por otro. En una gran proporcin de casos, la citologa permite llegar a un diagnstico final y
establecer un pronstico.
Una importante limitante es que en algunos casos es necesario recurrir a una biopsia para la evaluacin
histolgica, ya que es prcticamente imposible distinguir un adenoma o una hiperplasia; lo mismo sucede
cuando una neoplasia maligna es bien diferenciada y citolgicamente no podemos ver la estructura
histolgica ni la presencia de invasin a vasos o tejidos circundantes.
II. Objetivo
El discente desarrollar las habilidades necesarias para reconocer cuando las lesiones tumorales y en su
caso lesiones susceptibles de ser muestreadas, para diferenciar eventos inflamatorios o neoplsicos.
III. Material
Jeringa de 10 ml
Aguja No. 21
Laminas portaobjetos
Pistola para citologa
60/70
IV. Tcnica
Existen varios tipos de preparacin de laminillas para su evaluacin. El que se emplea con mayor
frecuencia en citologa es el frotis o extendido, similar al que se realiza en hematologa. Se deben
emplear laminillas limpias, no melladas, sin huellas (porque la grasa hace impermeable a la laminilla
e impide que se adhiera la pelcula celular a sta).
3
Se introduce una aguja directamente en la lesin, se aplica una presin negativa de algunos cm (en
general de 5 a 8), dependiendo de la consistencia de la masa: mientras ms slida, mayor presin;
si es muy dura la masa se puede mantener la presin efectuando en corto un "raspado" con la aguja,
para obtener mejores muestras y ms celulares. Generalmente se ejerce presin negativa jalando el
mbolo dos o tres veces, se suelta y se permite que regrese a su posicin original antes de retirar la
aguja de la masa, de lo contrario, la muestra pasar al barril de la jeringa y ser prcticamente
imposible recuperarla. Si ejercemos demasiada presin negativa y nos esperamos hasta ver sangre
en el barril, las muestras estarn muy contaminadas. Las muestras ms "limpias", es decir, con
menor contaminacin sangunea, se obtienen cuando se percibe ligeramente un lquido en la base
plstica de la aguja. en ese momento se debe dejar de ejercer la presin negativa. Son an mejores
las muestras si el lquido celular accede solamente a la parte metlica de la aguja.
Cuando la lesin cuenta con varias consistencias (dura. turgente, suave o blanda) se recomienda
efectuar las aspiraciones cambiando la direccin de la aguja para obtener material del centro, de un
lado, de la periferia, de las partes slidas, de las blandas, con la finalidad de conseguir una imagen
completa de la lesin.
En la mayora de los casos no es necesario efectuar este tipo de maniobra, ya que el tejido para las
muestras en general es homogneo.
Extendido (frotis)
Antes de efectuar el frotis, se ensaya el deslizamiento sin tocar la muestra para detectar
imperfecciones en el lavado o el borde de la laminilla en que se va a extender y poder reemplazarla
cuando no deslice libremente. Se aplica en lquidos con una densidad parecida a la sangre, tambin
en material de lesiones tumorales aspirado con aguja fina. La fuerza de separacin es de moderada
a ligera, dependiendo del ngulo que se emplee para su confeccin. En general, debe ser de
alrededor de 45 para lquidos como la sangre, >45 para lquidos poco celulares o en tejidos muy
61/70
delicados y <45 cuando se desea mayor fuerza de separacin celular para su extendido adecuado y
su cmoda evaluacin.
Sedimentacin
Se coloca un cilindro (por ejemplo 0.5 mL de una jeringa), se adhiere a la laminilla con cera,
asegurndose de que sea hermtico para evitar la salida de la muestra en la unin cilindro y
laminilla, se coloca hasta 0.5 mL del lquido que se va a evaluar y se deja reposar 30 minutos.
Impresiones
Se pueden realizar directamente de una lesin cutnea o de un rgano interno o llevarse acabo a
partir de biopsias.
En las biopsias, las impresiones se realizan con una porcin del tejido de inters de una dimensin
3
no mayor de 1 cm , se toma con las pinzas de diseccin y se hacen unas impresiones sobre papel
absorbente para eliminar el exceso de lquido y que exista mayor poder de adhesin de las clulas al
vidrio de la laminilla.
Se hacen impresiones en secuencia en el papel, cada vez es menor la cantidad de lquido que se
desprende, hasta que se encuentra casi seco siguiendo la direccin de las flechas.
Raspados
Se realizan en lesiones duras, con una hoja de bistur para obtener mayor nmero de clulas. El
raspado se efecta con ligeros movimientos en corto hasta obtener una pasta celular.
Posteriormente se lleva a cabo la extensin de esa "pasta celular", con delicadeza para evitar un
destrozo celular.
Hisopados
Esta tcnica est reservada para lesiones fistulosas o para rganos tubulares como vagina. tero,
canal auditivo, fosas nasales; inclusive se ha llegado a emplear en muestreos de trquea bajo una
tcnica particular. Se verifica que el hisopo estril de algodn est bien adherido al palillo para evitar
que se quede por accidente dentro de la luz del rgano que se est muestreando, posteriormente se
introduce y se gira suavemente para descamar clulas del epitelio o canal, se retira y se deposita
62/70
sobre la laminilla, se ejerce una ligera presin con el ndice y se rueda hasta el otro extremo, se
puede efectuar hasta 3 veces sobre la misma laminilla.
Estos tipos de lquidos son habitualmente poco celulares: para su evaluacin se requiere de un
mtodo de concentracin eficaz, que no afecte la morfologa celular.
V. Interpretacin u Observaciones
Es necesario incluir la resea del animal (especie, raza, gnero, edad), ya que ciertas neoplasias no se
encuentran en todas las especies o son particulares para una de ellas. Tambin es importante conocer la
raza, ya que algunas son ms propensas que otras a ciertos tumores; lo mismo ocurre con el gnero y la
edad.
El objetivo principal de la evaluacin citolgica es determinar si las lesiones son Inflamatorias, degenerativas
o neoplsicas; para ello se requiere conocer las diferentes clasificaciones y los criterios para una
interpretacin apropiada.
63/70
b) No sptica. Cuando la muerte de los neutrfilos ocurre en forma lenta (muerte natural) donde se
observan los ncleos de los neutrfilos en picnosis o en cariorrexis (picnosis de cada lbulo).
a) Epiteliales. Las muestras en estos casos suelen ser bastante celulares. Estas clulas se
distinguen por ser polidricas, son angulares cuando estn bien diferenciadas y pueden encontrarse
en forma individual o en sbanas o en ambas. Pueden ser epiteliales: papilomas.si son benignas o
carcinomas, si son malignas; o glandulares: adenomas o adenocarcinomas, si son benignas o
malignas, respectivamente. Las clulas glandulares en general muestran una fragilidad del
citoplasma superior a las otras clulas, el citoplasma se encuentra en cantidad de moderada a
abundante y con frecuencia se observan ncleos desnudos. En ocasiones se aprecia en el
citoplasma material de secrecin. Asimismo, pueden encontrarse clulas con el ncleo excntrico y
oprimido por la gran cantidad de material de secrecin.
b) Mesenquimatosas. En general la celularidad suele ser muy escasa, por lo tanto, de mayor
dificultad para la evaluacin. Las clulas se presentan comnmente en forma individual y se
caracterizan por ser fusiformes, en general, y tener una membrana citoplsmica no aparente. El
ncleo es principalmente cntrico ovalado o fusiforme.Ejemplos de estos tumores son los benignos,
con el sufijo oma, y los malignos.con el sufijo sarcoma (osteoma, osteosarcoma; condroma,
condrosarcoma; fibroma, fibrosarcoma; hemangioma, hemangiosarcoma).
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c) Clulas redondas. Este tipo de tumores presenta, por lo general, muestras con una celularidad
elevada, la forma es redonda como su clasificacin lo dice. Este tipo de clulas se caracteriza por
tener una membrana citoplsmica evidente, el citoplasma en cantidad moderada y un ncleo
redondo generalmente cntrico. Como ejemplos de tumores de clulas redondas estn los
histiocitomas, melanomas, tumores venreos transmisibles, mastocitomas, linfosarcomas y
sarcomas de plasmocitos (mielomas mltiples).
Criterios de malignidad
Los criterios de importancia capital en la interpretacin son los nucleares y los nucleolares, los
ltimos tienen mayor peso en la designacin final.
el) Multinucleacin. Clulas que presentan dos o ms ncleos. Criterio ms importante si la misma
clula presenta, adems, anisocariosis.
g) Cromatina granular gruesa, en cordones o en terrones. Indica alta actividad o capacidad mittica
de las clulas.
k) Nuclolos angulares
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BIBLIOGRAFIA
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ANEXOS
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V. ACTUALIZACIN
Primera Edicin
Director:
Dr. en C. Jos Mauro Victoria Mora
Elabor:
M en C. Lemuel Len Lara
Revis:
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