BIOLGICASNo.8,pp.

138149,2006
FacultaddeBiologa PublicadoporlaFacultaddeBiologadela
UniversidadMichoacanadeSanNicolsdeHidalgo

SECCINESPECIAL

Propagacin y mantenimiento in vitro de

orqudeas mexicanas, para colaborar en su
conservacin.

Irene vila Daz1 y R. Salgado-Garciglia2

1
Facultad de Biologa, Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo, Ciudad
Universitaria, Edif. R, CP 58030, Morelia, Michoacn. MXICO. Correo-
e:iavila@oikos.unam.mx
2
Lab. de Biotecnologa Vegetal, Instituto de Investigaciones Qumico Biolgicas,
Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo, Ciudad Universitaria, Edif. B3, CP
58030, Morelia, Michoacn. MXICO. Correo-e: rsalgado@zeus.umich.mx

RESUMEN
La familia Orchidaceae es una de las ms diversas, pero tambin una
de las ms vulnerables, principalmente por la destruccin de su hbitat y la
gran extraccin a la que ha estado sujeta. En Mxico 181 especies de
orqudeas son consideradas en alguna categora de riesgo (NOM-059-
ECOL-2001). Con el presente estudio se pretende colaborar en la
conservacin de algunas especies de orqudeas mexicanas a travs de
generar conocimientos sobre su propagacin y conservacin in vitro.
Segmentos de hojas, estructuras tipo protocormos y pseudobulbos de
plntulas cultivadas in vitro provenientes de semillas, fueron usados como
explantes para su multiplicacin. El medio Murashige y Skoog (MS)
adicionado con concentraciones propias de auxina (ANA), citocinina (BA) y
cido giberlico (GA3) fue utilizado para la induccin de callo, proliferacin
de estructuras tipo protocormos, desarrollo y mantenimiento a mediano
plazo de plntulas. Se considera que se ha logrado establecer los mtodos
ptimos de propagacin y mantenimiento in vitro de 9 especies de
orqudeas Mexicanas (Cattleya aurantiaca, Encyclia adenocaula, Euchile
citrina, Epidendrum radicans, Laelia albida, Laelia autumnalis, Laelia
speciosa, Oncidium tigrinum y Oncidium cavendishianum).

PALABRAS CLAVE: Micropropagacin, cultivos in vitro, plantas en

riesgo de extincin.

[138]BIOLGICAS|NOVIEMBRE2006
 Propagacinymantenimientoinvitrodeorqudeasmexicanas

ABSTRACT
In vitro conservation and propagation of Mexican orchids

The Orchidaceae family is one of the most diverse but also one of the
most vulnerable, due to its habitat destruction and high extraction that has
been done from the wild populations. In Mexico about 181 orchid species
are considered endangered. The present study attempts to conserve and
propagate Mexican orchids species through in vitro cultures. Leaf, bodies
like protocorms and pseudobulb segments of plantlets cultured in vitro from
seeds, were used as explants for in vitro multiplication. Murashige and
Skoog medium (MS) supplemented with appropriate concentrations of
auxin (NAA), cytokinin (BA) and gibberelic acid (GA3) was utilized for callus
induction bodies like protocorms proliferation, plantlets development and
maintenance. Methods for in vitro propagation and maintenance of 9
Mexican orchids (Cattleya aurantiaca, Encyclia adenocaula, Euchile citrina,
Epidendrum radicans, Laelia albida, Laelia autumnalis, Laelia speciosa,
Oncidium tigrinum y Oncidium cavendishianum) have been established.

KEY WORDS: Micropropagation, in vitro cultures, endangered plants.

INTRODUCCIN fuertemente la prdida de la

Se considera que la viabilidad de
las poblaciones a largo plazo est
determinada por factores ecolgicos
(e.g. el tamao y nmero de
poblaciones, el sistema reproductivo,
mecanismos de dispersin), genticos
(e.g. seleccin, mutaciones, deriva
gnica, endogamia), y del medio
ambiente; dentro de estos ltimos
factores, se tienen aquellos
independientes del ser humano (e.g.
eventos catastrficos), o bien
dependientes del ser humano (e.g.
prdida del hbitat, la introduccin de et al., 2005), de las cuales 181 se
especies, la extraccin de los recursos
y la degradacin y contaminacin
ambiental) (Brown,1992; Ledig,1992;
Frankham, 1995). En el pasado
reciente, las actividades
antropocntricas han acentuado
biodiversidad (Vida, 1994).
La familia Orchidaceae, es una de
las ms diversas, pero tambin una de
las ms vulnerables, por la destruccin
de su hbitat y la gran extraccin a la
que ha estado sujeta, por el gran inters
comercial que ha despertado desde
hace muchos aos, lo que ha
favorecido un extenso mercado, en el
que tanto las plantas como las flores de
corte se cotizan en precios elevados.
En Mxico se conocen ms de
1200 especies de orqudeas (Hgsater
registran en alguna categora de riesgo
en la norma oficial vigente (NOM-059-
ECOL-2001), 72 son endmicas, 58 en
la categora de amenazadas, 107 que
requieren proteccin especial, 15 en
peligro de extincin y una especie

NOVIEMBRE2006|BIOLGICAS[139]
 I.vilayR.Salgado
extinta en la naturaleza (Laelia
gouldiana) (Diario Oficial de la
Federacin, 2002).
Se considera que es de vital
importancia tomar acciones que
conlleven a un manejo sustentable de
las orqudeas mexicanas, entre las que
se tiene el establecer sistemas de
micropropagacin, para conseguir la
reproduccin de orqudeas en forma
masiva a partir de semillas o tejidos
vegetativos y desarrollarlas en grandes
invernaderos. Con esto, se puede
mantener una produccin continua de
ejemplares de calidad, para reducir en
cierta medida el saqueo de especies de
sus poblaciones naturales (Lee y Lee,
1991).
Se reporta que las orqudeas
fueron las primeras plantas propagadas
in vitro a partir de la siembra de
semillas, de manera simbitica (Nol
Bernard en Francia c. 1900) y
asimbiticamente (Lewis Knudson en
los Estados Unidos de Amrica en
1921) (Arditti y Krikorian, 1996), o
clonalmente al introducirse la tcnica
del cultivo de meristemos para la
propagacin vegetativa (Morel, 1960,
1964) (Capellades et al., 1991). Dada
la importancia hortcola y comercial de
las orqudeas, se han desarrollado
diversos mtodos de propagacin,
tanto sexual, a travs de semillas
(Northen, 1970; Leroy y Pike, 1976;
Arditti y Ernst, 1981; Sheehan, 1983.),
como asexual con el cultivo de
segmentos vegetativos (explantes)
(Arditti, 1977; Sheehan,1983; Sagawa
y Kunisaki,1984; Chin- Chi Lin, 1986).
En el Laboratorio de
Biotecnologa Vegetal del Instituto de
Investigaciones Qumico Biolgicas de
[140]BIOLGICAS|NOVIEMBRE2006
la Universidad Michoacana de San
Nicols de Hidalgo, se han establecido
cultivos in vitro de diversas orqudeas
mexicanas, predominantemente del
Estado de Michoacn, con el objetivo
de implementar su propagacin masiva
y conservacin in vitro. En el presente
trabajo se presentan los resultados del
establecimiento, propagacin y
conservacin de 9 especies de
orqudeas mexicanas (Cattleya
aurantiaca Bateman ex Lindley P.N.
Don, Encyclia adenocaula La Llave y
Lexarza Schlechter, Epidendrum
radicans Pavn ex Lindley, Euchile
citrina La Llave y Lexarza Whitner,
Laelia albida Bateman ex Lindley,
Laelia autumnalis La Llave y
Lexarza Lindley, Laelia speciosa
(HBK) Schlechter, Oncidium
cavendishianum Bateman, y Oncidium
tigrinum La Llave y Lexarza ). Estos
logros son producto de proyectos de
investigacin apoyados por diferentes
instituciones como La Casa de las
Artesanas de Michoacn, dependiente
del Gob. del Edo. de Michoacn (1999-
2003); el Fondo Mexicano para la
Conservacin de la Naturaleza, en la
colaboracin con el Centro de
Investigaciones en Ecosistemas,
UNAM, (1999-2002); y la Coordinacin
de la Investigacin Cientfica, UMSNH.
Las investigaciones han sido realizadas
por estudiantes tesistas de Licenciatura
de la Fac. de Biologa de la
Universidad Michoacana de San
Nicols de Hidalgo (UMSNH).
 Propagacinymantenimientoinvitrodeorqudeasmexicanas

MATERIALES Y MTODOS de manera uniforme.

Material biolgico
Medios y condiciones de cultivo
La mayor parte de las plantas
El medio de cultivo basal fue el
fuente de semillas son de colecciones
MS (Murashige y Skoog, 1962) con 30
particulares (Cattleya aurantiaca,
g litro-1 de sacarosa, 7 g litro-1 de agar,
Encyclia adenocaula, Epidendrum
con un pH 5.75. Para optimizar la
radicans, Euchile citrina, Laelia
germinacin, regeneracin, desarrollo
albida, Laelia autumnalis, Oncidium
de plntulas y lograr la conservacin
cavendishianum, y Oncidium
de plntulas, se adicionaron
tigrinum). En el caso de Laelia
reguladores de crecimiento (cido
speciosa, las cpsulas utilizadas (5)
naftalenactico, ANA; benciladenina,
fueron colectadas en El Olvido
BA; cido giberlico, GA3; y cido
Michoacn, Mpio. de Tzintzuntzan.
abscsico, ABA) en diferentes dosis
Dicha poblacin tambin ha sido
segn la planta y el tipo de respuesta in
incluida en estudios sobre la gentica
vitro. Los cultivos fueron mantenidos
de poblaciones, el sistema y xito
en cuarto de incubacin con
reproductivo de dicha planta.
condiciones controladas de luz (16 h
fotoperodo, 2000 lux) y temperatura
Establecimiento de cultivos in vitro
(25C). Para la conservacin, estas
El establecimiento de los cultivos
condiciones variaron.
in vitro se realiz por la siembra de
semillas, las cuales se obtuvieron de
Micropropagacin
cpsulas con madurez fisiolgica
Para determinar los sistemas in
(previo a la apertura de stas). Para
vitro de propagacin masiva de cada
realizar la siembra en medios de
orqudea, se utilizaron segmentos de
cultivos, se desarroll la asepsia
hojas, protocormos y pseudobulbos
superficial de las cpsulas bajo un
(explantes, 0.5 cm2) de las plntulas
procedimiento ya establecido (vila y
producidas por semilla, mantenidas por
Salgado-Garciglia, 2000), que
6 meses en cultivos in vitro. Los
consisti en colocarlas en una solucin
explantes fueron cultivados en MS con
de detergente neutro (Hyclin 15%, 15 diferentes combinaciones de
min), enjuague con agua corriente,
reguladores de crecimiento (ANA/BA,
ponerlas en etanol 70% por 2 min,
ANA/GA3, ANA/BA/GA3) en dosis de
posteriormente en agua oxigenada 3%
0, 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 y 10 mg
por 1 min y por ltimo en hipoclorito litro-1, con la finalidad de seleccionar
de sodio comercial 1.2% por 20 min. medios para la induccin de callos,
En rea estril se enjuagaron tres veces
medios para la regeneracin de
con agua destilada estril y fueron
estructuras tipo protocormos y
seccionadas con un corte transversal y
plntulas, medios de desarrollo y de
otro longitudinal, separando las mantenimiento.
semillas con una esptula y
cultivndolas sobre el medio nutritivo,

NOVIEMBRE2006|BIOLGICAS[141]
 I.vilayR.Salgado

Trasplante y aclimatacin RESULTADOS Y DISCUSIN

El cultivo ex vitro se ha llevado a
Establecimiento in vitro
cabo de la siguiente manera: se
Se consigui el cultivo in vitro por
seleccionan plntulas mayores de 3 cm
semillas de todas las orqudeas en
de longitud, los frascos son perforados
estudio. En general se ha obtenido un
y se mantienen en condiciones no
100% de germinacin utilizando el
controladas de luz y temperatura por
medio completo MS, con o sin
24 h y se siembran sobre un sustrato
reguladores de crecimiento, al
constituido por tezontle y corteza de
cultivarlas en condiciones de luz. Se ha
encino triturada (1:1), en cajas de
observado que al adicionar BA en una
plstico transparente, siguiendo el
dosis relativamente baja (0.05 mg litro-
proceso de aclimatacin con 1
), el proceso de germinacin en
disminucin paulatina de la humedad
general se acelera y es homognea, no
relativa, que consiste en abrir la
importando si se incuban en la
cubierta poco a poco (cada cinco das)
oscuridad o en la luz. Para L. speciosa,
durante 30 das posteriores al
el medio ptimo de germinacin es MS
trasplante. Durante este perodo se
sin reguladores de crecimiento (vila y
realizan riegos con pulverizaciones de
Salgado-Garciglia, 2000). El tiempo
agua diariamente. Posteriormente cada
para lograr el 100% de la germinacin
plntula es separada y cultivada de
vara para cada orqudea, en promedio
manera individual, mantenindola con
se obtiene entre los 30 y 45 das,
70% de humedad relativa (Sarabia,
despus de la siembra (Cuadro 1,
2001).
Figura 1A). Esta respuesta ha sido
reportada para diferentes orqudeas
Mantenimiento de cultivos in vitro
cultivadas in vitro asimbiticamente,
El mantenimiento de los cultivos
especficamente Bulbophyllum bufo y
in vitro de las 9 orqudeas en estudio se
Odontoglossum pulchellum
realiza de dos maneras: a corto plazo,
(Morel,1974). Lee y Lee (1991)
con subcultivos continuos de plntulas
reportan que la germinacin en
cada 4 meses, en medios de desarrollo
semillas de orqudeas cultivadas in
seleccionados en investigaciones
vitro a partir de cpsula vara
previas (Sarabia, 2001; Becerril, 2003,
dependiendo de la madurez de sta y
Huapeo, 2004, Luviano, 2006); y a
del tipo de orqudea, sin embargo se
mediano plazo, con subcultivos de
indica que germinan entre 30 y 60 das
plntulas cada 12 meses, en medios de
de cultivo.
conservacin de mnimo crecimiento,
tambin previamente establecidos, que
Desarrollo de plntulas in vitro
se mantienen a 10C y a una intensidad
El desarrollo de plntulas in vitro
de 500 lux (Ochoa-Ambriz, 2005).
para su conservacin en este tipo de
cultivos, para obtener plntulas fuente
de explantes para la micropropagacin
y plntulas que estn aptas para ser

[142]BIOLGICAS|NOVIEMBRE2006
 Propagacinymantenimientoinvitrodeorqudeasmexicanas
cultivadas ex vitro; se ha
implementado en el medio de cultivo
MS con reguladores de crecimiento,
habiendo seleccionado las dosis y tipos
de reguladores para cada orqudea
(medio de desarrollo o de
mantenimiento), obteniendo a los 4
meses plntulas de hasta 5 cm de altura
con formacin de pseudobulbo y races
con velamen (Cuadro 1, Figura 1B). Es
claro que la adicin de la auxina ANA
en combinacin con GA3 promueve el
mejor desarrollo de plntulas de estas
orqudeas (vila y Salgado-Garciglia,
2000).
Morfognesis in vitro
Con fines de establecer mtodos
de propagacin masiva, segmentos de
hoja, protocormos y pseudobulbos de
cada una de estas orqudeas han sido
cultivados en MS con reguladores de
crecimiento, encontrando tambin las
dosis, tipos y combinaciones ptimas
de stos, dando como resultado
diferentes respuestas: formacin de
callo, multiplicacin de protocormos y
regeneracin de plntulas. La
induccin de callo se obtiene por la
adicin de ANA (0.25-1.0 mg litro-1)
en combinacin con diferentes dosis de
BA dependiendo de la especie (0.5-2.5
mg litro-1), condicin que permite la
proliferacin de este tejido no
diferenciado, no importando la fuente
de explante, ya que tanto en segmentos
de hoja como de protocormos y
pseudobulbos, se produce callognesis
(Cuadro 1). Las caractersticas de estos
callos son similares para todas las
orqudeas en estudio, granulosos, de
color verde claro y una alta capacidad
regenerativa (Figura 1C). La
multiplicacin de las estructuras tipo
protocormos de manera directa se
consigue en MS tambin con la
combinacin ANA/BA, aunque en
algunas orqudeas fue necesario la
adicin de GA3. En general, la
multiplicacin de este tipo de
estructuras se produce en tejidos de
protocormos o de pseudobulbos
despus de 30 das de cultivo (Figura
1D), en hoja solamente se ha
observado para O. cavendishinaum, O.
tigrinum, C. aurantiaca y E. radicans.
La regeneracin de estructuras
protocrmicas a partir de fragmentos
de callos de todas las orqudeas bajo
investigacin, tambin ha sido exitoso,
los callos pueden ser subcultivados en
MS con reguladores de crecimiento
para obtener una gran cantidad de estas
estructuras (> 50
protocormos/explante) tan solo en 21
das (Cuadro 1, Figura 1E).
Las dosis y combinaciones de
estos reguladores de crecimiento para
la proliferacin y desarrollo de las
estructuras protocrmicas en estas
orqudeas, son similares a los
observados en la micropropagacin de
orqudeas como en Epidendrum
longipetalum, que en presencia de 2.5
mg/l tanto de BA como de ANA se
producen protocormos y brotes a los 40
das de cultivo de los explantes
(Torres-Ziga y Aguirre-Len, 2001).
Otras orqudeas requieren dosis
mayores de reguladores, como en
Laelia anceps Lindl., donde la
combinacin 1:1 de auxina/citocinina
(ANA/BA) de 8 mg/l, dio como
resultado el mayor nmero de
estructuras protocrmicas hasta los 180
das del cultivo, aunque para la
NOVIEMBRE2006|BIOLGICAS[143]
 I.vilayR.Salgado
formacin de brotes no se requiri la
presencia de los reguladores de
crecimiento (Ramrez, 1999).
La formacin de plntulas a partir
de las estructuras tipo protocormos se
alcanza al cultivarlos en MS
generalmente con ANA/BA/GA3,
dependiendo de la especie de orqudea
(Cuadro 1). Estas plntulas muestran
rpido crecimiento (3-4 meses) en sus
medios de desarrollo respectivos,
presentando caractersticas ptimas
para su trasplante y aclimatacin
(Figura 1F).
La adicin de reguladores de
crecimiento como auxinas, citocininas
y giberelinas a medios de cultivo para
optimizar el crecimiento y desarrollo
de plntulas, frecuentemente resulta en
la estimulacin del desarrollo de las
plntulas, aunque no siempre se
favorece, ya que puede haber respuesta
de callognesis, retardo en el
crecimiento y excesiva elongacin de
los tallos (Weaver, 1990). En todas las
orqudeas bajo estudio la adicin de
reguladores en esta fase de cultivo si
benefici su crecimiento y desarrollo.
Trasplante y aclimatacin
Se ha determinado el
procedimiento para conseguir el
trasplante y aclimatacin de plntulas
micropropagadas de L. autumnalis, L.
albida, E. citrina y O. cavendishianum,
como se detalla en metodologa
(Sarabia, 2001), logrando porcentajes
de sobrevivencia por arriba del 70%.
En el caso de L. speciosa, la
sobrevivencia es hasta de un 98%,
debido a que las plntulas in vitro se
mantienen por 20 das en condiciones
de invernadero previo a su transplante,
[144]BIOLGICAS|NOVIEMBRE2006
cultivadas en MS con 100% de
nutrimentos y 40 g litro-1 de sacarosa,
mtodo establecido por Ortega en el
2003.
Despus de 30 das, las plntulas
producen nuevas races con velamen y
desarrollan el pseudobulbo (Figura
1G), es conveniente mantenerlas en
porcentajes mayores del 70% de
humedad relativa en los siguientes 90
das, para posteriormente cultivarlas en
forma individualizada.
Plantas micropropagadas de L.
speciosa, han sido mantenidas bajo
cultivo por dos aos en invernadero y
presentan caractersticas de
crecimiento y desarrollo ptimos, con
hojas de hasta10 cm de largo y
pseudobulbos de 2-3 cm de dimetro
(Figura 1H).
Conservacin in vitro
Las 9 orqudeas establecidas y
propagadas in vitro, se mantienen bajo
subcultivos continuos (cada 4 meses)
en medio MS de desarrollo propio para
cada especie (Cuadro 1), donde
prevalecen con un crecimiento y
desarrollo natural de estas plantas in
vitro. Crecen hasta 5 cm de altura,
generan pseudobulbos y producen
nuevas plntulas. Por ello, fue
conveniente desarrollar un mtodo de
conservacin a mediano plazo de todas
estas plantas, con el fin de minimizar
su crecimiento sin que disminuyera la
viabilidad. Para determinar los medios
de cultivo y condiciones ptimas para
esta conservacin, se cultivaron
plntulas en medio MS modificado,
variando la concentracin de sus
componentes (100%, 75%, 50%, 25%
y 12.5%), de sacarosa (60, 40, 30, 20 y
 Propagacinymantenimientoinvitrodeorqudeasmexicanas
10 g litro-1), adicionando substancias
retardadoras del crecimiento como
manitol, sorbitol y cido abscsico y
probando tres diferentes temperaturas
(25, 10 y 5C), cultivndolas en
condiciones de luz difusa (500 lux).
Con los resultados obtenidos (datos no
mostrados), actualmente se conservan
a una temperatura de 10C en tres
diferentes medios para mnimo
crecimiento, dependiendo de la especie
de orqudea: L. albida, L. autumnalis y
L. speciosa en MS 12.5% con 60 g
litro-1 de sacarosa y 0.5 mg litro-1 ABA;
E. radicans, O. cavendishianum y O.
tigrinum en MS 12.5% con 40 g litro-1
de sacarosa, sin ABA; C. aurantiaca,
E. adenocaula y E.citrina en MS 75%
con 60 g litro-1 de sacarosa sin ABA
(Ochoa-Ambriz, 2005). Estas plntulas
se subcultivan a medio fresco cada 12
meses con el fin de probar su
viabilidad y capacidad de propagacin,
aunque pueden sobrevivir los 24 meses
de cultivo, perodo en el cual se ha
evitado la contaminacin y mortalidad
al mximo (Figura 1I).
CONCLUSIONES
Se han establecido cultivos in
vitro exitosos a partir de semillas de las
9 orqudeas mencionadas en este
trabajo. Los sistemas de
micropropagacin han sido
implementados para cada una de ellas,
logrando la formacin de callos, la
regeneracin de estructuras tipo
protocormos y el desarrollo de
plntulas, utilizando el medio nutritivo
MS con reguladores de crecimiento
(ANA/BA/GA3). Cada una de ellas se
mantiene bajo el sistema de
conservacin in vitro, con subcultivos
continuos cada 12 24 meses.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a las
siguientes Instituciones, por el apoyo
econmico brindado:
Casa de las artesanas; Fondo
Mexicano para la Conservacin de la
naturaleza, a travs del Proyecto
Manejo sustentable de Laelia
speciosa (FMCN A 1-99/130);
Coordinacin de la Investigacin
Cientfica-UMSNH (RSG-2.10).
Al personal del Orquidario de
Morelia, por el apoyo en la
determinacin taxonmica de algunas
especies; al Dr Ken Oyama por el
apoyo brindado durante el desarrollo
del proyecto Manejo sustentable de
Laelia speciosa, a los estudiantes por
su colaboracin al hacer su tesis de
licenciatura en esta rea.
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NOVIEMBRE2006|BIOLGICAS[147]
 I.vilayR.Salgado

CUADRO 1. Medios de cultivo para desarrollo y mantenimiento de plntulas,

callognesis, multiplicacin de protocormos y regeneracin de plntulas de las orqudeas en
estudio.

MEDIOS DE CULTIVO (MS, ANA/BA/GA3, mg litro-1)

ORQUDEA Multiplicacin
Inductor Regeneracin
Desarrollo de
de Callo de Plntulas
Protocormos
C. aurantiaca 0.1/0/0.5 1.0/2.0/0 1.0/0.5/0 0.1/0.05/0.1
E. radicans 0.01/0.05/0.1 0.5/1.0/0 1.0/1.0/1.0 0.1/0.1/0.1
E. adenocaula 0.01/0.05/0.1 0.5/2.0/0 0/1.0/0.1 0.1/0.1/0.1
E. citrina 0/0.1/0.1 1.0/1.0/0 0.25/2.5/0 0.25/0/0.1
L. albida 0.1/0.05/0.1 0.5/2.5/0 0.1/0.5/0.1 0.1/0.1/0.1
L. autumnalis 0.5/0/0.1 1.0/1.0/1.0 0.1/0.1/0.1 0/0.1/0.1
L. speciosa 0.1/0/0.5 0.5/2.5/0 0.1/0.5/0 0.1/0.05/0.1
O. cavendishianum 0.1/0.1/0.1 0.5/1.0/0 1.0/1.0/1.0 0.1/0.1/0.1
O. tigrinum 0.1/0.1/0 0.25/0.5/0 1.0/1.0/1.0 0.1/0.05/0.1

[148]BIOLGICAS|NOVIEMBRE2006
 Propagacinymantenimientoinvitrodeorqudeasmexicanas

Figura 1. Fotografas que muestran los diferentes eventos de la propagacin y conservacin in

vitro de orqudeas: A. Plntulas de semilla; B. Plntula de 6 meses de edad; C. Tejido calloso; D.
Formacin de estrucuturas tipo protocormos en tejido de pseudobulbo; E. Regeneracin de plntulas a
partir de estructuras protocrmicas; F. Plntula individualizada previo al trasplante; G. Plntulas
micropropagadas cultivadas en invernadero por 6 meses; H, Plntulas micropropagadas mantenidas
por 2 aos en condiciones de invernadero; I, Plntulas cultivadas in vitro bajo el sistema de
conservacin en mnimas condiciones de crecimiento, por 12 meses.

NOVIEMBRE2006|BIOLGICAS[149]