Manual Gonorrea PDF

MINISTERIO DE SALUD
Ministro
Dr. Fernando Carbone Campoverde
Sub-Comit Editor
Presidente
Dra. Ada Palacios Ramrez
Vice-Ministro
Dr. Oscar Ugarte Ubillz
Secretario Tcnico
Dr. Csar Cabezas Snchez
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Jefe
Dr. Luis Fernando Llanos Zavalaga
Sub-Jefe
Dra. Ada Cecilia Palacios Ramrez
Centro Nacional de Salud Pblica
Dra. Susana Zurita Macalup
Directora General
Centro Nacional de Alimentacin
y Nutricin
Dra. Doris Jhusey Schreiber
Directora General
Centro Nacional de Control de Calidad
Dra. Rosa Guevara Ormeo
Directora General
Centro Nacional de Produccin de Biolgicos
Q. F. Ricardo Valera Snchez
Director General
Miembros
Dr. Jorge Alarcn Villaverde
Q.F. Zulema Arvalo Chong
Dr. Jorge Barnaby Rodrguez
Dr. Zuo Burstein Alva
Dr. Javier Cieza Zevallos
Dr. Jos Espinoza Babiln
Lic. Ivn Gmez-Snchez Prieto
Dr. Eduardo Gotuzzo Herencia
Dr. Alfredo Guilln Oneeglio
Dr. Csar Nquira Velarde
Lic. Margarita Rodrguez Gutarra
Dr. Vctor Surez Moreno
Edicin
Dr. Leonid Lecca Garca
Revisores
Dr. Alfredo Guilln Oneeglio
Dr. Vctor Surez Moreno
Blga. Martha Glenny Araujo
Portada: Frontis del local central del Instituto Nacional de Salud.
MPR-CNSP-008
Instituto Nacional de Salud
Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL DIAGNSTICO

BACTERIOLGICO DE GONORREA
ELABORACIN:
Jos Luis Portilla Carbajal
Microbilogo
Laboratorio de Bacterias de Transmisin Sexual
Divisin de Bacteriologa
Centro Nacional de Salud Pblica
MPR - CNSP - 008
Catalogacin hecha por el Centro de Documentacin del INS

Portilla Carbajal, Jos Luis
Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea /
Elaborado por Jos Luis Portilla Carbajal. -- Lima : Ministerio de Salud, Instituto
Nacional de Salud, 2002.
44 p.-- : 30 cm. -- (Serie de Normas Tcnicas; 33)
1. GONORREA /diagnstico
I. Jos Luis Portilla Carbajal
II. Instituto Nacional de Salud (Per)
III. Per. Ministerio de Salud
ISBN 9972 857 23 9

ISSN 1607 - 4904
Hecho el Depsito Legal N 1501012002-2005
Ministerio de Salud, 2002
Av. Salaverry cuadra 8 s/n, Jess Mara, Lima, Per
Telf.: 431-0410
Instituto Nacional de Salud, 2002
Cpac Yupanqui 1400, Jess Mara, Lima, Per
Telf.: 471-9920 Fax 471-0179
e-mail: postmaster@ins.sld.pe
Pgina Web: www.ins.sld.pe
Publicacin aprobada con R.J. N 151 2002.
Se autoriza su reproduccin total o parcial siempre y cuando se cite la fuente.
MPR - CNSP - 008
II
CONTENIDO
INTRODUCCIN
SECCIN 1
1.1
1.2
1.3
1.4
1.5
GENERALIDADES
Objetivo
Campo de aplicacin
Responsabilidades
Documentos de referencia
Definiciones
SECCIN 2
2.1
2.2
2.3
2.4
2.5
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
Responsabilidades
Agente
Riesgos en el laboratorio
Precauciones
Manejo del agente
SECCIN 3
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
3.7
3.8
3.9
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Condiciones generales para la obtencin de la muestra
Registro de datos
Materiales y equipos
Hisopado de uretra masculina
Hisopado cervico-vaginal
Hisopado rectal
Hisopado farngeo
Hisopado de conjuntiva
Otras localizaciones
SECCIN 4
4.1
4.2
4.3
4.4
TRANSPORTE DE LA MUESTRA
Objetivo
Condiciones especficas
Condiciones generales
Consideraciones para el transporte de la muestra (aislamientos)
SECCIN 5
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
5.6
PROCEDIMIENTOS PARA EL DIAGNSTICO BACTERIOLGICO

Objetivo
Examen directo de la muestra
Cultivos
Identificacin presuntiva
Identificacin confirmatoria de Neisseria gonorrhoeae
SECCIN 6
6.1
6.2
6.3
6.4
DETECCIN DE CEPAS PRODUCTORAS DE BETA-LACTAMASA

Objetivo
Campo de aplicacin
Mtodo de la cefalosporina cromgena, CEFINASE
MPR - CNSP - 008
III
V
1
1
1
1
2
3
5
5
5
5
5
5
6
6
6
6
7
8
8
8
9
9
10
10
10
10
11
12
12
12
13
14
15
17
23
23
23
23
23
6.5
6.6
6.7
Mtodo Yodomtrico Rpido

Control de calidad para la prueba beta-lactamasa
Preparacin de reactivos para la prueba beta-lactamasa
SECCIN 7
7.1
7.2
7.3
PROCEDIMIENTOS PARA LOS DE AISLAMIENTOS RECEPCIONADOS EN EL INS

Objetivo
Transporte de aislamientos para la identificacin confirmatoria
Identificacin confirmatoria
SECCIN 8
8.1
8.2
8.3
8.4
8.5
8.6
8.7
8.8
8.9
PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

Fundamento de los medios de cultivo
Objetivo
Preparacin del agar Thayer-Martin modificado
Preparacin del agar chocolate enriquecido
Preparacin del medio CTA-carbohidrato modificado
Medios para la crioconservacin de las cepas
Medios de transporte
Registros de los medios de cultivos preparados
SECCIN 9
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO DE CULTIVO THAYER-MARTIN Y AGAR

CHOCOLATE ENRIQUECIDO
Objetivo
Campo de aplicacin
Criterios para el control de calidad
Cepas de referencia
Procedimiento
9.1
9.2
9.3
9.4
9.5
9.6
9.7
BIBLIOGRAFA
24
24
25
26
26
26
26
27
27
27
27
28
29
29
30
30
30
31
31
31
31
31
32
32
32
34
ANEXOS
ANEXO A
FICHA DE REGISTRO DE DATOS DEL PACIENTE.
ANEXO B
FICHA DE DATOS PARA EL TRANSPORTE DE AISLAMIENTOS PARA LA

CONFIRMACIN DE Neisseria gonorrhoeae.
ANEXO C
PREPARACIN DE COLORANTES.
ANEXO D
FLUJOGRAMA PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE Neisseria gonorrhoeae.
ANEXO E
FLUJOGRAMA PARA EL DIAGNSTICO CONFIRMATORIO DE Neisseria gonorrhoeae

POR EL MTODO BIOQUMICO CTA-CH.
ANEXO F
FICHA DE DATOS PARA EL REGISTRO DE MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.
ANEXO G
ILUSTRACIONES DEL EMBALAJE PARA EL TRANSPORTE DE LOS AISLAMIENTOS.
MPR - CNSP - 008
IV
36
37
38
39
40
41
42
INTRODUCCIN
Neisseria gonorrhoeae pertenece a la familia Neisseriaceae, es el agente causante de blenorragia o gonorrea,

enfermedad muy antigua descrita desde el ao 2637 A.C. Fue observada en 1879 por Albert Neisser en exudados
purulentos de uretra de un paciente que presentaba uretritis gonoccica y cultivada por primera vez en 1882 por
Leistikow.
La gonorrea es, generalmente, una infeccin de transmisin sexual (ITS). En varones, el cuadro clnico es sintomtico en 75,0% a 85,0%, lo contrario sucede en mujeres, donde la infeccin en la mayora de casos es asintomtica.
Las infecciones ms frecuentes causadas por el gonococo son: uretritis, cervicitis, proctitis, salpingitis, faringitis,
vulvovaginitis en nias, y oftalma del recin nacido y adultos, entre otras. Es poco frecuente la infeccin sistmica
y la artritis gonoccica.
El xito del aislamiento primario del gonococo depende de una adecuada obtencin de la muestra, contar con
personal debidamente capacitado y de la calidad de los medios de cultivo; adems, que la identificacin confirmatoria
del mismo garantiza el diagnstico clnico y orienta el tratamiento del paciente infectado.
Existen diversas pruebas de laboratorio para confirmar el diagnstico bacteriolgico del gonococo: pruebas
bioqumicas, serolgicas con anticuerpo monoconal, hibridacin del cido desoxiribonucleico (ADN), amplificacin
del ADN, siendo el ms comn el mtodo bioqumico de utilizacin de carbohidratacin en base CTA, conocido
como el mtodo convencional o mtodo del crecimiento.
El Instituto Nacional de Salud (INS), organismo tcnico-normativo, pone a disposicin del personal de salud este
manual que representa el resultado del esfuerzo de profesionales de la institucin y acoge las recomendaciones
tcnicas sugeridas por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), la Organizacin Panamericana de la Salud
(OPS), el Centro de Control de Enfermedades Infecciosas (CDC) y el Programa de Vigilancia de la Susceptibilidad
Antimicrobiana in vitro del Gonococo (GASP). En tal sentido, el presente manual tiene por objetivo establecer los
procedimientos tcnicos para el diagnstico bacteriolgico de N. gonorrhoeae que el INS aplica y recomienda,
mediante la transferencia de tecnologa a los laboratorios de la red nacional.
MPR - CNSP - 008
SECCIN 1
GENERALIDADES
1.1
OBJETIVO
Establecer los procedimientos tcnicos para realizar el diagnstico bacteriolgico de la infeccin causada
por N. gonorrhoeae en la poblacin.
1.2
CAMPO DE APLICACIN
1.2.1
Aplicable para el Laboratorio de Bacterias de Transmisin Sexual y Leptospiras del Centro Nacional de
Salud Pblica (CNSP) del Instituto Nacional de Salud - Ministerio de Salud, recomendndose su aplicacin
en los laboratorios de la Red Nacional, as como tambin en los laboratorios de instituciones particulares.
1.2.2
Comprende:
1.2.2.1 Obtencin de muestras de pacientes.

1.2.2.2 Procedimientos de laboratorio para el aislamiento e identificacin de N. gonorrhoeae.
1.2.2.3 Procedimiento para deteccin de cepas de N. gonorrhoeae productoras de betalactamasa.
1.2.2.4 Envo de muestras al Laboratorio de Referencia Nacional.
1.2.2.5 Control de calidad y registros necesarios para su control.
1.3
RESPONSABILIDADES
1.3.1
El Centro Nacional de Salud Pblica (CNSP), a travs de su Direccin Ejecutiva de Laboratorios de Referencia, es responsable de autorizar la elaboracin, revisin y actualizacin del presente manual, de acuerdo a los procedimientos aprobados por el Instituto Nacional de Salud (INS).
1.3.2
Los directores de los establecimientos de salud orientados al control de las infecciones de transmisin
sexual (ITS), son responsables de autorizar, proporcionar los recursos necesarios y designar al personal
para la aplicacin de las disposiciones contenidas en el presente manual.
1.3.3
El analista, tcnico de laboratorio o profesional de salud a cargo de realizar las pruebas de laboratorio, son
responsables de aplicar las disposiciones establecidas en ste manual.
1.3.4
El resultado de la prueba es responsabilidad del analista, jefe de laboratorio.
1.3.5
La deteccin del incumplimiento de las disposiciones establecidas, amerita que el jefe de divisin (o departamento) recomiende, a travs de la Direccin Ejecutiva, las medidas correctivas y sta a su vez informe al
Director General sobre las medidas adoptadas.
MPR - CNSP - 008
1.3.6
El analista dispondr de un cuaderno de registro, donde anotar los resultados obtenidos de las pruebas
realizadas. El jefe del laboratorio supervisar que el libro de registro est actualizado.
1.3.7
Es responsabilidad del analista, jefe de laboratorio y jefe de divisin (o departamento) que los medios de
cultivos, colorantes, soluciones y reactivos que se utilizan en las pruebas, sean de buena calidad.
1.3.8
El personal de laboratorio, responsable de la preparacin de los medios de cultivo, colorantes, soluciones

y buffers, puede proponer por escrito ante su jefe inmediato medidas que permitan mejorar el procedimiento. El jefe inmediato dirigir el documento ante el Director General del CNSP, quien elevar la propuesta
mediante documento dirigido al Jefe del INS. Este ltimo presentar la propuesta ante el Comit Tcnico
Especial para que la evale y emita su opinin.
1.4
DOCUMENTOS DE REFERENCIA
1.4.1
Instituto Nacional de Salud. Manual de Normas de Bioseguridad Lima: INS; 1996. Serie de Normas
Tcnicas N 18.1996.
1.4.2
Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos para la Obtencin y Envo de Muestras (I). Lima:
INS; 1997. Serie de Normas Tcnicas N 15.1997.
1.4.3
Dillon JR, Li H. WHO/PAHO Co-ordinating Center for Gonococcal Antimicrobial Surveillance Programs in
the Amricas and the Caribbean. Ottawa - Canad. In: A Laboratory Course Manual : Identification and
Antimicrobial Susceptibility Testing of Neisseria gonorrhoeae. 3er ed. Ottawa : WHO/PAHO; 1996.
1.4.4
Ehret JM, Judson FN, Biddle JW. Gonorrhea. In: Wentworth B, Judson N, Biddle JW. Laboratory Methods for the Diagnosis of Sexually Transmitted diseases. American Public Health Association. USA; 1984.
p. 4379.
1.4.5
Kellogg JA, Orwig LK. Comparison of gono gen, gono gen II and micro trak direct fluorescent antibody
test with carbohidrate fermentation for confirmation of culture isolates of Neisseria gonorrhoeae. J Clin
Microbiol 1995; 33(2): 474-6.
1.4.6
Morello JA, Janda WM, Bohnhoff M. Neisseria and Branhamell. In: Lennette HE. Manual of Clinical
Microbiology. 4ta. ed. USA: Am Soc F Mic; 1985. p. 176-92.
1.4.7
Luger A. Neisseria gonorrhoeae: resistencia a mltiples antibiticos. Bol Epidemiol 1982; 3(7).
1.4.8
Organizacin Mundial de la Salud. Neisseria gonorrhoeae e infecciones gonoccicas. Ginebra: OMS;

Informe de un Grupo Cientfico de la OMS.1978.
1.4.9
Organizacin Panamericana de la Salud. Enfermedades de Transmisin Sexual. Bol Epidemiol 1981; 2(1).
1.4.10 Potter LD, Lewis JS, Wentworth B, Larsen H. Ammonium bicarbonate as a replacement for carbon dioxide
in transgrow botheles for primary isolation of Neisseria gonorrhoeae. J Clin Microbiol 1983; 18: 1258-9.
1.4.11
Sonnenwirth A, Leonard J. Mtodos y diagnstico de laboratorio clnico. 8va ed. Buenos Aires: Editorial
Mdico Panamericano; 1969.
1.4.12 Thayer JD, Martin JE. A Selective medium for the cultivation of Neisseria gonorrhoeae and N. meningitidis.
Public Health Reports 1964; 79(1): 49-57.
MPR - CNSP - 008
1.4.13 Neylan V, Genus I. Neisseria Trevisan1885, 105AL. In: Krieg NR. Bergeys manual of systematic bacteriology.
Vol 1. Baltimore-London; 1984.p. 290-6.
1.4.14 Weyant RS, Weaver RE, Hollis DG, Jordans JG, Cook EC, Daneshvar DI. Identification of Unusual
Pathogenic Gram-Negative Aerobic and Facultatively Control Bacteria. 2nd. USA : CDC; 1995.
1.5
DEFINICIONES
1.5.1
ACH: Agar chocolate enriquecido.
1.5.2
ATMM: Agar Thayer Martin Modificado.
1.5.3
aislamiento primario: Obtencin del agente infeccioso a partir del cultivo de la muestra.
1.5.4
aislamiento del agente infeccioso: Obtencin del agente infeccioso en cultivo puro, libre de
microorganismos contaminantes.
1.5.5
bacteria: Microorganismo perteneciente al reino protista.
1.5.6
bacilo: Bacteria que tiene la forma de bastn o cilndrico.
1.5.7
CDC: Center for Disease Control (Centro de Control de Enfermedades).
1.5.8
CTA: Agar cistina - tripticasa.
1.5.9
cepa bacteriana: Cultivo identificado de acuerdo a la sistemtica taxonmica.
1.5.10 colonia bacteriana: Poblacin de bacterias que se desarrollan en la superficie de medios de cultivo
slidos que son observables a simple vista.
1.5.11 cultivo bacteriano: Proceso mediante el cual se pretende obtener el desarrollo de bacterias que tengan
en comn las mismas caractersticas.
1.5.12 GASP: Gonococcal Antimicrobial Surveillance Program (Programa de Vigilancia de la Susceptibilidad
Antimicrobiana in vitro del gonococo para las Amricas y el Caribe) - Canad.
1.5.13 Glu : Glucosa.
1.5.14 identificacin: Procedimiento mediante el cual se identifica a un organismo, siguiendo las pautas recomendadas por la sistemtica de identificacin.
1.5.15 identificacin presuntiva: Identificacin previa a confirmacin. Por lo regular, se llega a identificar hasta
el gnero.
1.5.16 identificacin confirmatoria: Prueba complementaria a la identificacin presuntiva. Por lo general se
llega hasta especie y en ciertos casos, hasta subespecie, biotipo, serotipo, etc.
1.5.17 LCR: Lquido cefaloraqudeo.
MPR - CNSP - 008
1.5.18 Lac: Lactosa.

1.5.19 Mal: Maltosa.
1.5.20 medio de cultivo artificial: Medio de cultivo preparado en el laboratorio para el sembrado de muestras
con la finalidad de aislar al microorganismo patgeno.
1.5.21 medio de cultivo selectivo: Medio de cultivo en el que se desarrolla la bacteria de inters. Las bacterias
cuyo desarrollo no es deseado, tendrn desarrollo parcial o sern totalmente inhibidas.
1.5.22 medio de cultivo no selectivo: Medio de cultivo en el que se desarrollan los microorganismos presentes
en la muestra.
1.5.23 Sac: Sacarosa.
MPR - CNSP - 008
SECCIN 2
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
2.1
RESPONSABILIDADES
El personal responsable de la obtencin, el transporte y el procesamiento de las pruebas de diagnstico de
laboratorio de N. gonorrhoeae deben poner en prctica las medidas de bioseguridad establecidas en el
Manual de Normas de Bioseguridad (Serie de Normas Tcnicas N 18) editado por el Instituto Nacional de
Salud (INS).
2.2
AGENTE
2.2.1
Es sensible a los desinfectantes como hipoclorito de sodio al 1%, etanol al 70%, glutaraldehdo, yodo y
formaldehdo.
2.2.2
Es sensible al calor hmedo a presin (121C por 15 minutos) y al calor seco (160C-170C por una hora).
2.2.3
Se ha reportado que puede sobrevivir hasta 48 horas en vidrio, papel hasta 3 das, plstico por 24 horas y
asientos de bao por varias horas.
2.2.4
Debido a la produccin de betalactamasas de origen plasmdico y/o cromosomal, se ha incrementado el

nmero de cepas resistentes a penicilina.
2.3
RIESGOS EN EL LABORATORIO
2.3.1
Infecciones adquiridas en el laboratorio: Se han reportado 4 casos en Estados Unidos.
2.3.2
Muestras en las que puede estar presente: exudados de conjuntiva, uretra o cervix uterino, lquido sinovial,
orina, heces y lquido cefaloraqudeo.
2.3.3
Riesgos primarios: inoculacin parenteral accidental, contacto directo o indirecto de las membranas mucosas
con material clnico infeccioso, etc.
2.4
PRECAUCIONES
2.4.1
Contencin: Nivel 2 de bioseguridad para toda actividad que envuelva material clnico y cultivos.
2.4.2
Ropa de proteccin: Usar mandil de laboratorio y guantes cuando haya posibilidad de contacto de la piel
con el material infeccioso.
2.5
MANEJO DEL AGENTE
2.5.1
Derrames: Usando ropa protectora, dejar que los aerosoles se depositen, colocar papel toalla sobre el
derrame y aadir hipoclorito de sodio al 1%, empezando desde el permetro hacia el centro. Dejar 30
minutos para permitir un contacto adecuado antes de limpiar.
2.5.2
Todo material usado debe ser descontaminado, utilizando calor hmedo, desinfeccin qumica o incineracin.
2.5.3
La manipulacin de los cultivos debe hacerse en condiciones estrictamente de esterilidad con la finalidad
de no contaminar con microorganismos que se encuentran en el ambiente, en el manipulador o que la
manipulacin sea cruzada entre los cultivos.
MPR - CNSP - 008
SECCIN 3
OBTENCIN DE LA MUESTRA
La eficacia del diagnstico de laboratorio de las ITS, as como tambin de otras infecciones, depende en gran parte
de una adecuada obtencin de la muestra. El aislamiento de N. gonorrhoeae mediante el cultivo permitir un diagnstico acertado y oportuno.
Las muestras debern obtenerse antes que el paciente inicie el tratamiento con antimicrobianos. Para cada zona de
muestreo (uretra, cervix, nasofaringe, ocultar, etc.) se aplicar un procedimiento especfico, debiendo recolectarse
la muestra, preferentemente con hisopos de baja toxicidad como dacrn o alginato de calcio. Si se utilizan los
hisopos de algodn, debe sembrarse inmediatamente en el medio de cultivo.
3.1.
CONDICIONES GENERALES PARA LA OBTENCIN DE LA MUESTRA
3.1.1.
El paciente debe ser informado en forma clara y sencilla, de acuerdo a su grado de instruccin, sobre los
procedimientos a realizar.
3.1.2.
Elegir el lugar correcto a partir del cual se obtendr la muestra empleando la tcnica apropiada. Debe
obtenerse la muestra del sitio de infeccin en condiciones de asepsia para asegurar la no-contaminacin
de la muestra por microorganismos de la flora normal.
3.1.3.
Obtener suficiente cantidad de muestra para asegurar el aislamiento del microorganismo relacionado con
el proceso infeccioso en estudio y evitar resultados falsos negativos.
3.1.4.
Obtener la muestra antes del inicio de la terapia antimicrobiana. Si el paciente ya ha recibido alguna dosis
del antimicrobiano antes de la obtencin de la muestra, el laboratorio debe ser informado.
3.1.5.
Enviar las muestras al laboratorio para su procesamiento inmediatamente despus de haber sido obtenidas, con la finalidad de aumentar la probabilidad del aislamiento de los microorganismos involucrados en
el proceso infeccioso.
3.1.6.
Colocar las muestras en un recipiente secundario apropiado para el transporte hacia el laboratorio, evitando de esa manera el derrame de la muestra y los riesgos que podra ocasionar.
3.2.
REGISTRO DE DATOS
3.2.1.
El laboratorio debe contar con un cuaderno de registro donde se anotarn los datos del paciente, as como
tambin las pruebas realizadas en el laboratorio (Anexo A). Hoy en da existen programas de computacin
donde estos datos se registran y se evalan con rapidez y eficacia.
3.3.
MATERIALES Y EQUIPOS
3.3.1.
Hisopos de dacrn o algodn
3.3.2.
Asa bacteriolgica
3.3.3.
Lminas porta-objetos
MPR - CNSP - 008
3.3.4.
Mechero de alcohol
3.3.5.
Espculos estriles
3.3.6.
Gasa estril
3.3.7.
Algodn quirrgico
3.3.8.
Solucin salina fisolgica estril
3.3.9.
Pinza Metzembaum
3.3.10. Agua hervida fra

3.3.11. Guantes
3.3.12. Mascarillas
3.3.13. Bandejas metlicas
3.3.14. Autoclave elctrico
3.3.15. Horno elctrico
3.4.
HISOPADO DE URETRA MASCULINA
3.4.1.
La muestra se puede obtener directamente de la uretra o de un exudado obtenido exprimiendo la uretra,

siguiendo los pasos que a continuacin se detallan:
3.4.1.1 El paciente no debe miccionar 2 horas antes de la obtencin de

la muestra.
3.4.1.2 Si hubiese abundante secrecin, limpiar externamente con una
gasa estril.
3.4.1.3 Exprimir la uretra peneana.
3.4.1.4 Obtener la muestra con hisopo de alginato de calcio o de dacrn,
a 1-2 cm del meato uretral.
3.4.1.5 Si hay secrecin abundante colocar la secrecin directamente
sobre el hisopo. Rotar el hisopo durante 20 segundos en la uretra (Figura N 1).
3.4.1.6 Sembrar el hisopado en placa con medio de cultivo (Thayer
Martn y/o Agar Chocolate enriquecido) e incubar a 35C-37C,
en condiciones de humedad y anhidrido carbnico.
Figura N 1. Hisopado de uretra masculina
3.4.1.7 Con otro hisopo, obtener nuevamente la muestra y extenderla suavemente sobre una lmina porta-objeto
limpia y desengrasada, para realizar la coloracin de Gram.
MPR - CNSP - 008
3.5.
HISOPADO CERVICO-VAGINAL
3.5.1.
Colocar el espculo estril en el canal vaginal. Si es necesario lubricarlo con agua destilada estril, nunca
con otro tipo de lubricante que pueden ser letales para los
gonococos. Si el himen estuviese intacto, la muestra se obtendr directamente del orificio vaginal.
3.5.2.
Si hubiese abundante secrecin vaginal, limpiar la regin del

exocervix con una gasa.
3.5.3.
Obtener la muestra con hisopo de algodn, alginato de calcio o

de dacrn, a 1-2 cm directamente del canal cervical (Figura N 2).
3.5.4.
Rotar el hisopo durante 20 segundos en el canal cervical en sentido horario.
3.5.5.
Sembrar el hisopado en placa con medio de cultivo (Thayer Martin

y/o agar chocolate enriquecido) e incubar a 35C - 37C, en condiciones de humedad y anhdrido carbnico.
Figura N 2. Hisopado cervico-vaginal.
3.5.6.
Con otro hisopo, obtener nuevamente la muestra y extenderla suavemente sobre una lmina porta objeto
3.6.
HISOPADO RECTAL
3.6.1.
La muestra del ano se puede tomar directamente o con ayuda de un espculo (anoscopio).
3.6.2.
Si hubiese secrecin rectal (heces o sangrado), limpiar con una gasa.
3.6.3.
Obtener la muestra con hisopo de dacrn, introduciendo 2-3 cm

en el recto (Figura N 3).
3.6.4.
Rotar el hisopo durante 20 segundos en las paredes del recto, en

sentido horario (si se observase abundante contaminacin fecal
en el hisopo, descartarlo y obtener una segunda o tercera muestra).
3.6.5.
Sembrar el hisopado en placa con medio de cultivo (Thayer-Martin

y/o agar chocolate enriquecido) e incubar a 35C-37C, en condiciones de humedad y anhdrido carbnico.
3.6.6.
Con otro hisopo, obtener nuevamente la muestra y extenderla suavemente sobre una lmina porta-objeto
3.7.
HISOPADO FARNGEO
3.7.1.
Las muestras de faringe se toman directamente de las criptas amigdaliana.
3.7.2.
Obtener la muestra con un hisopo de algodn o de dacrn, introduciendo el hisopo hasta las criptas
amigdalianas. Evitar que el hisopo choque con la lengua o el paladar, sujetando con un bajalengua.
Figura N 3. Hisopado rectal.
MPR - CNSP - 008
3.7.3.
Rotar el hisopo durante 20 segundos en sentido contrario.
3.7.4.
Sembrar la muestra en la placa con el medio de cultivo (Thayer-Martin y/o agar chocolate enriquecido) e
incubar a 35C - 37C, en condiciones de humedad y anhdrido carbnico.
7.5.
Con otro hisopo, obtener nuevamente la muestra y extenderla suavemente sobre una lmina porta-objeto
3.8.
HISOPADO DE CONJUNTIVA
3.8.1.
Las muestras de conjuntiva se obtendrn de siguiente manera:
3.8.1.1 Limpiar la zona adyacente al ojo con gasa humedecida con solucin salina fisiolgica estril. Obtener
suavemente la muestra de la secrecin conjuntival.
3.8.1.2 Sembrar el hisopado sobre los medios de cultivo (Thayer-Martin y/o agar chocolate enriquecido) e incubar
a 35C - 37C, en condiciones de humedad y anhdrido carbnico.
3.8.1.3 Con otro hisopo, obtener nuevamente la muestra y extenderla suavemente sobre una lmina porta objeto
3.9
OTRAS LOCALIZACIONES
Si se sospecha de infeccin gonoccica diseminada, se obtendrn muestras urogenital, farngea y rectal,
as como muestras de sangre y fludo articular, pues la combinacin de todas ellas presenta una alta
sensibilidad. En caso de pacientes con enfermedad plvica inflamatoria, se obtendrn las muestras por
laparoscopa.
MPR - CNSP - 008
SECCIN 4
TRANSPORTE DE LA MUESTRA
4.1
OBJETIVO
Describir el procedimiento y condiciones para el transporte de las muestras desde el lugar de su obtencin
hacia el laboratorio donde se realizar el anlisis. Tambin se describe el procedimiento de envo de
aislamientos o cultivos desde el laboratorio donde se realiz el aislamiento del microorganismo hacia el
Laboratorio de Referencia Nacional, donde se realizar la identificacin confirmatoria y otros estudios de
mayor complejidad.
4.2
CONDICIONES ESPECFICAS
4.2.1
Las muestras (hisopados clnicos, biopsias, etc.) deben llegar al laboratorio en buenas condiciones, de tal
manera que el gonococo se mantenga viable y pueda ser aislado.
4.2.2
Si se trata de un aislamiento sospechoso de ser gonococo y es enviado al Laboratorio Referencial para el

respectivo diagnstico confirmatorio, el remitente debe asegurarse que el cultivo est viable y libre de
contaminantes, porque la presencia de stos en el medio de transporte puede ocasionar la no viabilidad de
la bacteria.
4.3
CONDICIONES GENERALES
4.3.1
Las muestras o cultivos sospechosos deben ser transportados en medios adecuados, dependiendo del
tiempo que demorar para llegar a su destino. Estos se clasifican en:
4.3.1.1 Medios no Nutritivos, como el Amies con carbn, el cual es adecuado cuando la muestra va a llegar al
laboratorio dentro de las seis horas de su obtencin. El tiempo es muy importante para las muestras
procedentes de portadores asintomticos o de pacientes tratados con antimicrobianos, las que podran
presentar escasos gonococos viables.
a.
Procedimiento:
Depositar la muestra junto con el hisopo (utilizar hisopo sinttico).
Introducir el hisopo al tubo, previamente rotulado, que contiene el

medio de transporte.
Romper el mango sobrante y cerrar bien la tapa del tubo del hisopo.
Figura N 4. Medio de transporte.
4.3.1.2 Medios Nutritivos o de Crecimiento, tal como el Transgrow o Placas JEMBEC o en medio de
crioconservacin, cuando las muestras no van a ser sembradas dentro de las seis horas. El tiempo ptimo
de transporte en stos medios es de 24 a 28 horas.
a.
Procedimiento
Sembrar la muestra sobre la superficie del medio de cultivo haciendo estras.
Hacer una incubacin previa antes del transporte, a 35C-37C durante 18-24 horas.
MPR - CNSP - 008
10
Llegado al laboratorio, los cultivos sern incubados en ambiente sin CO2 a 35C-37C durante 24-48
horas. Es recomendable, simultneamente, hacer sub-cultivos de la muestra en agar chocolate enriquecido.
4.4
CONSIDERACIONES PARA EL TRANSPORTE DE LA MUESTRA (AISLAMIENTOS)
4.4.1
Embalaje, rotulado y transporte de las muestras
4.4.1.1 Asegurar que las muestras antes del embalaje hayan recibido el tratamiento de acuerdo al tipo de muestras, Ejm. : proceso de secado, adicin de agentes de estabilizacin u otros.
4.4.1.2 Las muestras deben ser embaladas apropiadamente, de acuerdo a las especificaciones tcnicas correspondientes a cada tipo de recipiente primario: lminas de vidrio, placas, frascos, viales u otros recipientes.
Rotular individualmente cada recipiente primario, utilizando etiquetas, rtulos o fichas.
4.4.1.3 Adicionar la Ficha de datos para el transporte de aislamientos (Anexo B).
4.4.1.4 Embalar los recipientes primarios utilizando un recipiente secundario que asegure la conservacin de la
muestra durante el transporte y el almacenamiento hasta llegar a su destino. Se deben evitar riesgos de
golpes accidentales, vibraciones u accin nociva de agentes contaminantes, gases, vapores y lquidos, as
como de la exposicin a la interperie y la humedad.
4.4.1.5 Rotular el recipiente secundario, indicando los datos correspondientes al establecimiento de salud o laboratorio de destino, incluyendo la siguiente informacin:
a.
Nombre y direccin del destinatario.
b.
Nombre y direccin del remitente.
c.
Nivel de bioseguridad.
d.
Instrucciones para la conservacin durante el transporte y almacenamiento. Temperatura en C y humedad relativa en %, en caso sean requeridas.
e.
Instrucciones sobre el tiempo de vida til en caso sean requeridas.
f.
Instrucciones para posicin (etiqueta de orientacin), en caso sean requeridas.
g.
Instrucciones para manipulacin (etiqueta de fragilidad), en caso sean requeridas.
h.
Otras instrucciones establecidas en las normas de seguridad para el transporte de sustancias peligrosas.
MPR - CNSP - 008
11
SECCIN 5
PROCEDIMIENTOS PARA EL DIAGNSTICO BACTERIOLGICO
El agente etiolgico de la gonorrea es Neisseria gonorrhoeae, bacteria Gram negativa, que tiene forma de coco a la
observacin microscpica, se agrupan generalmente en pares, dando la apariencia de riones o granos de caf, no
forma esporas, ni presenta flagelos. Presenta pili y microcpsulas, metabolismo oxidativo e utiliza la glucosa sin
produccin de gas. Es una bacteria muy exigente, que desarrolla en medios de cultivos artificiales, con vitaminas,
hierro y ciertos aminocidos. Asimismo, requiere de humedad 50-70%, anhdrido carbnico 7-10% y temperatura
35C-37C.
5.1
OBJETIVO
Establecer los procedimientos tcnicos para el aislamiento del agente, mediante el cultivo de secreciones
o hisopados de pacientes con sospecha de infeccin por gonococo.
5.2
5.2.1
Agar Thayer-Martin modificado (ATMM)
5.2.2
Agar chocolate enriquecido (ACH)
5.2.3
N,N-Dimethyl-1,4 phenylenediamonium HCl o N,N,N.N-tetramethyl-p-phenylenediamine-HCl solucin 1 % .
5.2.4
Medios diferencial CTA-carbohidrato (Glu, lac, fru, mal y sac)
5.2.5
Perxido de hidrgeno 30 %
5.2.6
Placas petri 15 x 100 mm
5.2.7
Tubos de ensayo de vidrio clase A (borosillicato) 10 x 75 mm
5.2.8
Asas de siembra (nicrn, aluminio)
5.2.9
Aguja bacteriolgica
5.2.10 Mondadientes estriles

5.2.11
Estufa a 35C 37C
5.2.12 Microscopio compuesto, binocular, con lentes objetivo de 10X, 40X y 100X
5.2.13 Autoclave
5.2.14 Balanza
5.2.15 Jarra de cierre hermtico tipo GasPak System
5.2.16 Refrigeradora domstica 4C-8C
MPR - CNSP - 008
12
5.2.17 Cabina de flujo laminar clase IIB

5.2.18 Potencimetro
5.3
EXAMEN DIRECTO DE LA MUESTRA
5.3.1
Campo de aplicacin
Se aplica a la obtencin de muestra para el diagnstico de gonorrea mediante el exmen microscpico,
utilizando la coloracin de Gram (Anexo C).
5.3.2
Procedimiento para el frotis de la muestra
5.3.2.1 De las muestras obtenidas con asa bacteriolgica o hisopo,

preparar dos frotices tan finos como sean posibles y que
abarquen una buena extensin en la lmina porta-objeto (limpia, desengrasada, no rayada). Para evitar alteraciones de
la morfologa celular, no debe frotarse vigorosamente (Figura N 5).
Figura N 5. Extensi n de la muestra

usando hisopo.
5.3.2.2 Cuando la muestra se obtiene por hisopado, sta se debe rotar

suavemente sobre la superficie de la lmina porta-objetos (Figura N 6).
5.3.2.3 Deje secar la muestra a temperatura ambiente o a calor suave, para luego realizar la coloracin de Gram.
5.3.3
Coloracin de Gram (modificado por Hucker) (Figura N 7).
5.3.3.1 Cubrir el frotis con cristal violeta durante un minuto.
Figura N 6. Frotis de la muestra

usando hisopo.
5.3.3.2 Lavar con agua corriente.

5.3.3.3 Aplique la solucin de lugol para Gram durante dos minutos.
5.3.3.5 Decolore con alcohol-acetona (1:1).
5.3.3.7 Cubra el frotis con safranina durante 20 a 30 segundos.
Figura N 7. Coloraci n de Gram.
5.3.3.9 Deje secar la lmina al aire o suavemente con papel absorbente.

5.3.3.10 Observar la lmina al microscopio con lente objetivo de inmersin.
MPR - CNSP - 008
13
5.3.4
Interpretacin del resultado del examen directo
5.3.4.1 Positivo : Si se observa la presencia de diplococos intracelulares Gram negativos tpicos (ovales, de
formas arrionadas agrupados en pares) (Figura N 8).
5.3.4.2 Sospechoso : Si slo se observan diplococos Gram negativos extracelulares
5.3.4.3 Negativo : Si no se observan diplococos Gram negativos
5.3.4.4 En trminos generales, el informe del examen directo (coloracin de Gram), debe indicar adems la presencia y cantidad
de leucocitos polimorfonucleares. Este dato es muy importante para el clnico, ya que puede indicar estar frente a un caso
de infeccin no gonoccica.
5.3.4.5 La coloracin de Gram es de gran valor para el diagnstico de
gonorrea aguda en varones (tiene una sensibilidad y especificidad de 99,0%), mientras que en la mujer es considerablemente menor (especificidad de 45,0% a 55,0%) debido a la
presencia de flora bacteriana nativa, siendo necesaria la realizacin del cultivo.
5.3.5
Figura N 8. Observaci n de diplodocus

intracelulares Gram negativos.
Control de calidad de la coloracin de Gram
5.3.5.1 Es importante que el laboratorio controle peridicamente los componentes que conforman la batera de la
coloracin de Gram con la finalidad de garantizar un resultado efectivo. Para ello, debe contar con bacterias de referencia: Gram positivas (Staphylocococcus epidermidis) y Gram negativas (Escherichia coli).
5.4
CULTIVOS
5.4.1
Objetivo
Describir los procedimientos tcnicos para realizar el aislamiento del gonococo a partir de hisopados clnicos, secreciones, LCR, biopsias o cualquier otro tipo de muestra corporal. Mediante el cultivo se puede
lograr la identificacin presuntiva y/o confirmatoria del gonococo, as como tambin realizar estudios especiales, tales como susceptibilidad antimicrobiana, tipificacin molecular, etc.
5.4.2
Los cultivos de secreciones para el aislamiento primario deben ser colocados lo ms antes posible en
condiciones de CO2, humedad y temperatura adecuada. Mientras se van recolectando las muestras, las
placas que ya han sido sembradas pueden mantenerse dentro de una jarra hermtica que contenga CO2.
No deben permanecer por ms de 4 horas sin incubacin.
5.4.3
Procedimiento
5.4.3.1 Inocular el hisopado de la muestra en una placa conteniendo agar chocolate y luego en medio ATMM,
haciendo girar el hisopo sobre el medio, ms o menos la cuarta parte del borde superior.
MPR - CNSP - 008
14
5.4.3.2 Con ayuda de una asa bacteriolgica, diseminar la muestra por todo el medio, por estriamiento. La siembra en agar chocolate debe ser ms estricta que en el medio de cultivo Thayer-Martin.
5.4.3.3 Incubar las placas sembradas, casi de inmediato, a 35C-37C en un ambiente que contenga 3 a 7% de
CO2 y 50-70% de humedad. Esto se logra colocando las placas dentro de una jarra de cierre hermtico o
tipo GasPak sobre una base de gasa humedecida con agua destilada estril y, encima de stas, se coloca
una vela blanca encendida. Antes de incubarlas, asegurarse que la vela se haya apagado, de esta manera
el ambiente interno de la jarra tendr las condiciones adecuadas que necesita el gonococo para su desarrollo. La vela apagada indica que la cmara ha cerrado hermticamente.
5.4.3.4 Examinar los cultivos cada 18-24 horas y descartar positividad despus de las 72 horas de incubacin.
5.4.4
Interpretacin del cultivo

Las colonias primarias de N. gonorrhoeae que desarrollen en medio
Thayer-Martin y/o agar chocolate enriquecido, despus de 18-24
horas. de incubacin, tienen un tamao de 1-2 mm. de dimetro,
son ligeramente levantadas, lobulares, traslcidas y, generalmente,
mucoides (Figura N 9).
5.5
IDENTIFICACION PRESUNTIVA
5.5.1
Objetivo
Figura N 9. Colonias de N. gonorrhoeae

en medio de cultivo.
Describir los procedimientos tcnicos para el diagnstico presuntivo de la infeccin causado por el gonococo. Si
el laboratorio no cuenta con los medios necesarios para la confirmacin diagnstica, debe remitir su aislamiento
al Laboratorio de Referencia.
5.5.2
La identificacin presuntiva de las colonias sospechosas que desarrollan en medio selectivo ATMM y/o en
agar chocolate, se realiza segn los siguientes criterios:
5.5.2.1 Reaccin oxidasa positiva y catalasa positiva.

5.5.2.2 Presencia de diplococos Gram negativos con morfologa tpica.
5.5.2.3 Reaccin positiva al superoxol (Prueba de catalasa usando perxido de hidrgeno 30%).
5.5.2.4 Desarrollo en agar Thayer-Martin y no desarrollo en agar tripticasa soya (TSA).
5.5.3
Prueba para detectar oxidasa
5.5.3.1 Se realiza con el reactivo N,N,N,N-tetrametil-p-fenilenediamina HCl o con N,N-dimetil-1,4-fenilenediamonio

HCl, solucin 1%, con el cual se humedece un pedazo de papel filtro estril dentro de una placa petri. Para
la diseminacin de la muestra sobre el papel con el reactivo, se utiliza una asa de platino o aluminio (el
nicrn u otras asas que contengan fierro pueden causar reaccin falsa positiva) o un mondadientes estril.
MPR - CNSP - 008
15
5.5.3.2 Si el resultado es positivo usando el tetrametil, se observar una mancha azul - violeta, y con el reactivo dimethyl el color ser rojo - grosella.
Si el resultado es negativo, no se observar color (Figura N 10).
5.5.3.3 El reactivo dimetil tiene mayor estabilidad. Ambos son carcinognicos,
por lo que se recomienda evitar el contacto con la piel.
5.5.3.4 Procedimiento
a.
Colocar un pedazo de papel filtro estril dentro de una placa petri.
b.
Humedecer el papel con el reactivo de oxidasa.
c.
Extraer algunas colonias (1-3) del cultivo en estudio.
d.
Con ayuda de una asa de platino o aluminio o un mondadientes estril, colocar y extender el inculo sobre
el papel humedecido con el reactivo.
e.
Observar si se produce reaccin en el transcurso de 10 a 15 segundos de haberse realizado la prueba.
f.
Alternativamente, una solucin del reactivo al 0,5% puede ser goteada directamente sobre la colonia.
Figura N 10. Prueba para

detectar oxidasa.
5.5.3.5 Control de calidad de la prueba para detectar oxidasa

Pseudomonas sp es oxidasa positiva y Escherichia coli es oxidasa negativa.
5.5.4
Prueba para detectar catalasa
5.5.4.1 Esta prueba se realiza con el reactivo perxido de

hidrgeno 30%.
5.5.4.2 La prueba ser positiva si inmediatamente se evidencia la presencia de burbujas y ser negativa si
no se forman burbujas o stas aparecen muy lentamente (Figura N 11).
5.5.4.3 Procedimiento:
Figura N 1.
1 Prueba para detectar catalasa.
a.
Colocar algunas colonias del cultivo en estudio sobre una lmina porta-objetos limpia con ayuda del asa
de siembra.
b.
Aadir sobre el inculo una gota del reactivo perxido de hidrgeno (H2O2).
c.
Observar inmediatamente la reaccin.
5.5.4.4 Control de calidad de la prueba para detectar catalasa
Aeromonas sp es catalasa positiva.

MPR - CNSP - 008
16
5.5.5
Interpretacin de la identificacin presuntiva
5.5.5.1 En la coloracin de Gram del cultivo sospechoso debern observarse diplococos Gram negativos de forma
arrionada y dar reaccin positiva a las pruebas de oxidasa y catalasa.
5.5.5.2 El cultivo sospechoso deber desarrollarse en el medio de cultivo Thayer-Martin y no en agar nutritivo o
tripticasa de soya.
5.6
IDENTIFICACIN CONFIRMATORIA DE Neisseria gonorrhoeae (Anexos D y E)

Realizada la identificacin presuntiva de N. gonorrhoeae, si el laboratorio cuenta con los insumos necesarios para realizar la confirmacin, lo har aplicando las tecnologas recomendadas por los Laboratorios
Referenciales. Existen diversas pruebas de laboratorio para la confirmacin del diagnstico bacteriolgico
del gonococo, entre ellas citamos: bioqumica, serologa con anticuerpo monoclonal, hibridacin y amplificacin del ADN, entre otras.
En el presente manual se describen las pruebas de diagnstico confirmatorio que se utilizan en nuestro
laboratorio (Laboratorio de Referencia Nacional). As tenemos:
Prueba convencional
Prueba bioqumica de utilizacin de carbohidratos en base CTA.
Pruebas rpidas usando kits diagnsticos
Quad Ferm System (BioMrieux Vitek): Tiempo de incubacin de 2 horas.
NEISSERIA 4 H (Pasteur): Tiempo de incubacin de 4 horas.
GonoGen I (BBL).
GonoGen II (BBL).
5.6.1
Utilizacin de carbohidratos en base CTA
5.6.1.1 Prueba convencional ampliamente utilizada por los pases en desarrollo, no es muy costosa pero requiere
de un buen inculo y de mayor tiempo de incubacin (de 18 a 72 horas), en comparacin con las pruebas
rpidas que slo requieren de 2 a 4 horas, dependiendo del kit empleado.
5.6.1.2 Condiciones Especficas

Esta prueba debe realizarse con cultivo joven de 18-24 horas, procedente de sub cultivo en agar chocolate
con suplemento enriquecedor.
a.
Inocular la bacteria en estudio en tubos de 13x100 mm que contienen el medio diferencial CTA-Carbohidrato.
Depositar un buen inculo.
b.
Inocular por picadura en el tercio superior del citado medio diferencial y luego diseminar por estriacin
sobre la superficie inclinada (pico de flauta).
c.
Incubar a 37C sin CO2 durante 18-72 horas. Frecuentemente, resulta suficiente 18-24 horas.
MPR - CNSP - 008
17
d.
Examinar e interpretar: Es positiva, cuando el medio ha cambiado del color rojo inicial hacia el amarillo
claro o plido en el rea del inculo. Si el color amarillo se extiende por todo el medio diferencial, podra
tratarse de bacterias contaminantes. En estos casos se debe hacer
una coloracin de Gram y repetir la prueba, previa descontaminacin,
en medio selectivo ATMM (Figura N 12).
5.6.1.4 Fundamento de la prueba

a.
La prueba consiste en determinar la capacidad de la bacteria

sospechosa de ser gonococo de utilizar oxidativamente, uno o
ms carbohidratos (glucosa, lactosa, maltosa, y sacarosa),
mientras se va desarrollando.
Figura N 12.. Utilizaci n de carbohidrato en base CTA.
b.
El carbohidrato presente en el medio diferencial se encuentra en un agar base cistena-tripticasa, el cual

tiene como indicador rojo de fenol, siendo el pH del medio de cultivo 7,10,1.
c.
N. gonorrhoae slo utiliza glucosa, produciendo acidificacin del medio, sin produccin de gas, lo cual se
evidencia por el viraje de color rojo a amarillo.
d.
Kellog y Orwing determinaron que esta prueba tiene una sensibilidad de 97,6% y una especificidad de
100,0%.
5.6.2
Kit Quad Fermes System

Este kit es una prueba rpida que determina la utilizacin de determinado sustrato por la bacteria en
estudio. El fundamento de esta tcnica se basa en detectar la presencia de enzimas pre formadas para los
sustratos presentes en el kit.
a.
Hacer una suspensin densa en 2 mL de solucin salina fisiolgica estril, McFarland N 3, del cultivo
sospechoso a gonococo.
b.
Repartir 200 microlitros (0,2 mL) de la suspensin bacteriana a cada pocillo del kit, cuidando de no contaminar
su contenido.
c.
Con ayuda de una micropipeta, homogenizar cada uno de los pocillos inoculados.
d.
Incubar a 37C sin CO2 en cmara hmeda durante 2 horas. Antes de las dos horas puede haber reaccin.
e.
Leer e interpretar el cambio de color de cada pocillo. Un cambio de rojo a amarillo indica que la bacteria en
estudio ha acidificado el medio, al actuar sobre un determinado sustrato: glucosa, maltosa, lactosa, sacarosa,
hidrlisis del ADN e hidrlisis al anillo beta-lactmico.
f.
Este kit no solamente identifica a N. gonorrhoeae, sino tambin a Moraxella (Branamella) catarrhalis.
MPR - CNSP - 008
18
5.6.3
Kit Neisseria 4 H

Este kit permite realizar la identificacin confirmatoria de la
bacteria, por medio de una prueba bioqumica, que permite
detectar una enzima pre-formada.
5.6.3.2 La microplaca del kit tiene 16 pocillos (2 filas de 8 pocillos),
de los cuales 12 son utilizados para realizar 10 pruebas.
Cada pocillo corresponde a una prueba bioqumica, excepto
el primero que es el control negativo (Figura N 13)
Figura N 13
. Kit Neisseria 4H.
5.6.3.3 Las pruebas que se realizan son las siguientes:

a.
Utilizacin de azcares: glucosa, maltosa, fructosa y sacarosa.
b.
Deteccin de beta-galactosidasa (ONPG).
c.
Hidrlisis de tributirn (TR).
d.
Sntesis de polisacridos (PS).
e.
Deteccin de gamma-glutamiltransferasa (YGT).
f.
Reduccin de nitratos (NO3).
g.
Reduccin de nitritos (NO2).
5.6.3.4 Material adicional requerido

a.
Tubo McFarland N 3 (9,7 ml solucin H2SO4 1% + 0,3 mL solucin BaCI2 1%)
b.
Lugol de Gram
c.
Reactivo de Gries
d.
Hipoclorito de sodio 5%
a.
Hacer una suspensin de la bacteria en estudio, McFarland N 3 como mnimo, dentro de la ampolla que
contiene un medio de suspensin.
b.
Escribir en la parte inferior del Kit la referencia del paciente o de la cepa aislada.
c.
Distribuir tres gotas (100 L) de la suspensin bacteriana a cada uno de los pocillos hasta el pocillo NO2
(1), utilizando una pipeta de transferencia que trae el kit.
MPR - CNSP - 008
19
d.
En el pocillo NO2 (1) homogenizar inmediatamente el contenido para luego transferirlo al pocillo NO2 (2).
e.
Colocar la cubierta (tapa) sobre la microtapa e incubar a 37C por 4 horas
NOTA: Dada la fragilidad que tienen estas bacterias, los pocillos deben ser inoculados en un tiempo no mayor de
15 minutos luego de haberse preparado el inculo.
5.6.3.6 Lectura de los resultados

a.
Leer los resultados despus de 4 horas, excepto el pocillo denominado Sntesis de polisacridos
que requiere de 24 horas de incubacin.
b.
Sobre la etiqueta de la microplaca, escriba debajo de cada pocillo el resultado positivo (+) o negativo (-),
de acuerdo a las indicaciones mostradas en la Tabla N 1.
c.
El desarrollo de reduccin de nitratos (NO3) se detecta adicionando sucesivamente 1 gota del reactivo I y
1 gota del reactivo II del reactivo de Gries.
d.
La identificacin de la especie se obtiene correlacionando los datos obtenidos con la Tabla N 2.
5.6.3.7 Interpretacin de resultados

a.
Los datos obtenidos de las pruebas bioqumicas, sern comparados con tablas de referencia establecidas
por Organismos Referenciales, tales como OMS, OPS, CDC y GASP.
b.
El cultivo en estudio ser identificado como N. gonorrhoeae si rene las siguientes caractersticas: diplococo
Gram negativo, de forma arrionada, oxidasa positiva, catalasa positiva, desarrolla en medio de cultivo
Thayer-Martin, no desarrollo en agar nutritivo o TSA, y oxidativamente, solamente utiliza glucosa y no
utiliza lactosa, fructosa, maltosa, ni sacarosa.
Tabla N 1. Lectura de resultados de la prueba Kit Neisseria 4H.
Prueba
Tiempo de
Incubacin
Glucosa
Maltosa
Fructuosa
Sacarosa
ONPG
Tributrirn
Sntesis de polisacridos*
YGT
Reduccin de NO3
Reduccin de NO2
4 horas
4 horas
4 horas
4 horas
4 horas
4 horas
24 horas
4 horas
4 horas
4 horas
RESULTADO
Positivo
Negativo
Amarillo o naranja
Amarillo o naranja
Amarillo o naranja
Amarillo o naranja
Amarillo
Amarillo o naranja
Violeta o marrn
Amarillo
Rojo
Amarillo
Rojo o violeta
Rojo o violeta
Rojo o violeta
Rojo o violeta
Incoloro
Rojo o violeta
Amarillo
Incoloro
Indoloro
Incolora o gris
* Lectura despus de adicionar 1 a 2 gotas de lugol.

ONPG: -gactosidasa.
YGT: gamma-glutamiltransferasa.
MPR - CNSP - 008
20
N. lactamica
N. mucosa
M. (B) catarrhalis
N. polisacharea
N. denitrificans
N. sicca
N. subflava
N. flava
Hidrlisis de:
Glucosa
Maltosa
Fructosa
Sacarosa
ONPG
Tributirn
YGT
Reduccin de:
NO3
NO2
Sntesis de polisacridos (24 horas)
Desarrollo en medio selectivo
Colonia pigmentada
N. meningitidis
Especie
N. gonorrhoeae
Tabla N 2. Pruebas bioqumicas para la identificacin de Neisseria
+
-
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
(-)
+
-
(+)
+
+
+
+
+
+
(+)
-
+
+
+
+
+
+
-
+
+
-
+
++
+
++
Puede variar de acuerdo a la cepa.

( )La mayora de las cepas presentan esta caracterstica.
5.6.4
Kit Gonogen II

Es una prueba colorimtrica basada en anticuerpos monclonales que detectan las protenas de la membrana
externa I del gonococo, cultivado ya sea en medio selectivo o en agar chocolate enriquecido (Figura N 14).
5.6.4.2 Componentes del Kit

a.
Reactivo 1: amortiguador solubilizante.
b.
Reactivo 2: anticuerpos monoclonales de mrido.
c.
Control positivo: N. gonorrhoeae destruido con calor.
d.
Control negativo: especies de Neisseria destruidos con calor.
e.
Bandeja de anlisis: consiste en pocillos con matriz especial y material absorbente.
f.
Pipetas de transferencia graduadas.
Figura N 14
. Kit Gonogen II
a.
Rotular un tubo de ensayo (12x75 mm) por cada muestra.
MPR - CNSP - 008
21
b.
Agregar a cada tubo 500 l del reactivo 1.
c.
Hacer una suspensin de la bacteria en estudio, utilizando hisopo de algodn/poliester, hasta alcanzar
turbidez 1 de la escala Mc. Farland.
d.
Desechar el hisopo dentro de un recipiente que contenga solucin desinfectante.
e.
Agitar vigorosamente el reactivo 2 y aadir una gota en cada uno de los tubos a analizarse.
f.
Mezclar bien y permitir que los tubos reposen por lo menos 5 minutos.
g.
Con ayuda de una pipeta de transferencia, aadir 2 gotas de cada suspensin a analizarse a cada uno de
los pocillos de la bandeja de prueba. Utilizar un pocillo para cada prueba.
h.
Finalmente, aadir un gota del reactivo 1 a cada pocillo donde se est procesando.
5.6.4.4 Interpretacin de la prueba

a.
Punto rosa o rojo en el pocillo de la bandeja de anlisis significa que se ha identificado N. gonorrhoeae.
b.
Si el punto resulta blanco o plido, la bacteria en estudio no es N. gonorrhoeae.
5.6.4.5 Control de calidad de la prueba

Para asegurarse que el sistema est funcionando adecuadamente, los controles que traen el kit (control +
y control -), deben ser analizados antes que se realice la prueba.
MPR - CNSP - 008
22
SECCIN 6
DETECCIN DE CEPAS PRODUCTORAS DE BETA-LACTAMASA
Desde el ao 1976 se reporta la presencia de cepas productoras de beta-lactamasa (penicilinasa), as como de
cepas resistentes a otros antibiticos utilizados en el tratamiento de la gonorrea.
La prueba de susceptibilidad antibitica para el gonococo comnmente se realiza mediante el mtodo de concentracin
inhibitoria mnima (CIM), con el objetivo de realizar vigilancia de resistencia antibitica y evaluar los esquemas del
tratamiento.
6.1
OBJETIVO
Establecer los procedimientos para realizar la deteccin de la enzima beta-lactamasa en cepas
de gonococo.
6.2
CAMPO DE APLICACIN
Aplicable a los laboratorios que aislan e identifican al gonococo y que cuentan con recursos necesarios
para realizar este diagnstico. El laboratorio comprometido para realizar esta prueba es el Laboratorio de
Referencia Nacional.
6.3
CONDICIONES GENERALES
6.3.1
Haber realizado el aislamiento e identificacin de N. gonorrhoeae.
6.3.2
La cepa no debe estar contaminada y debe ser un cultivo joven, de preferencia, de subcultivo en agar
chocolate enriquecido.
6.3.3
Las tcnicas que comnmente utilizamos en el Laboratorio de Referencia Nacional son:
6.3.3.1 Mtodo de la cefalosporina cromgena, Cefinase (prueba directa).

6.3.3.2 Mtodo yodomtrico rpido (prueba indirecta).
6.4
MTODO DE LA CEFALOSPORINA CROMGENA, CEFINASE
6.4.1
Fundamento
Consiste en un disco de papel impregnado con cefalosporina cromgena (NITROCEFIN) que cambia de
amarillo a rojo cuando el anillo beta-lactmico es hidrolizado por la enzima beta-lactamasa. Esta prueba
tiene un amplio espectro de susceptibilidad , es fcil de realizar y no requiere de mucho tiempo.
6.4.2.
Procedimiento
6.4.2.1 Con la ayuda de una pinza estril, coger un disco por prueba a realizar y colocarlo dentro de una placa petri
vaca.
6.4.2.2 Humeder el disco con 1 gota de agua destilada estril.
MPR - CNSP - 008
23
6.4.2.3 Impregnar varias colonias de N. gonorrhoeae en la superficie del disco humedecido con un asa estril o un
mondadientes.
6.4.2.4 Observa la reaccin durante 1 a 5 minutos.
6.4.3
Interpretacin del mtodo

Si la cepa en estudio produce beta-lactamasa, el disco cambiar
de amarillo a rojo (Figura N 15).
6.5
MTODO YODOMTRICO RPIDO
6.5.1
Fundamento de la prueba
Figura N 15. M todo de la cefalosporina

crom gena.
Este mtodo se basa en la reaccin del yodo con el almidn vegetal, amilosa, dando un color violeta
oscuro. La enzima beta-lactamasa tiene la capacidad de romper el anillo beta-lactmico de la penicilina u
otros beta-lactmicos produciendo iones altamente reductores, los cuales reducen el yodo, por lo que no
da la reaccin caracterstica al actuar con el almidn.
6.5.2
Procedimiento
6.5.2.1 Descongelar los tubos de ensayo que contienen 0,1 mL de solucin de penicilina. Considerar un blanco, el
cual no ser inoculado con la bacteria en estudio.
6.5.2.2 En la solucin de penicilina, preparar una suspensin densa (Mc. Farland N 3 como mnimo) de un cultivo
de 18-24 horas.
6.5.2.3 Agitar la solucin de penicilina durante 30 segundos y dejar reposar por 30 minutos.
6.5.2.4 Aadir 0,05 mL (2 gotas con pipeta Pasteur) de solucin almidn a los tubos de prueba.
6.5.2.5 Mezclar bien y aadir 0,02 mL (1 gota con pipeta Pasteur) de
solucin yodurada.
6.5.2.6 Agitar la mezcla durante un minuto.
6.5.3
Interpretacin del mtodo

Una decoloracin rpida indica que la bacteria en estudio produce beta-lactamasa. Si el color azul se mantiene durante ms
de 10 minutos, la bacteria en estudio no produce la mencionada
enzima (Figura N 16).
6.6
Figura N 16. M todo yodom trico r pido.
CONTROL DE CALIDAD PARA LA PRUEBA BETA-LACTAMASA

Para tener la seguridad que la prueba es satisfactoria, el laboratorio debe contar con la cepa de referencia
N. gonorrhoeae ATCC 31426, productora de beta-lactamasa. Si no se dispone de la mencionada cepa
control, puede utilizarse Escherichia coli productora de beta-lactamasa.
MPR - CNSP - 008
24
6.7
PREPARACIN DE REACTIVOS PARA LA PRUEBA BETA-LACTAMASA
6.7.1
Buffer fosfato pH 6,0
6.7.1.1 Prepare la solucin A (fosfato monopotsico 0,06M) : disolver 0,9073 g de KH2PO4 en 100 mL de agua.
6.7.1.2 Prepare la solucin B (fosfato sdico 0,06M) : disolver 0,4733 g de la Na2HPO4 o 0,594 g de Na2HPO42H2O
en 50 mL de agua destilada.
6.7.1.3 Mezclar 87,7 ml de la solucin A con 12,3 mL de la solucin B. Este buffer es estable durante varias
semanas a temperatura ambiente.
6.7.2
Penicilina G sdica o potsica
6.7.2.1 Pesar 0,06 g de penicilina G y disolver en 10 mL de buffer fosfato pH 6,0 (penicilina a 6000 g/mL).
6.7.2.2 Esterilizar la solucin de penicilina hacindola pasar por un filtro de 45 m de dimetro de poro antes de
utilizarla.
6.7.2.3 Alicuotar la solucin de penicilina, 0,1 ml en tubos 10x75, taparlos hermticamente y guardarlos congelados
a 20C.
6.7.2.4 Eliminar los tubos que no han sido utilizados despus de haberlos descongelado.
6.7.3
Solucin de almidn 1%
6.7.3.1 Pesar 0,1 g de almidn soluble para 10 mL de agua destilada y disolverlo completamente en bao de agua
hervida. No debe hervirse.
6.7.3.2 Preparar una solucin fresca, la que se conservar en el refrigerador no ms de una semana.
6.7.4
Solucin de yodo
6.7.4.1 Disolver 0,406 g de yodo y 10,64 g de yoduro de potasio en 20 mL de agua destilada y guardar a temperatura
ambiente en un frasco de vidrio oscuro.
6.7.4.2 Preparar una nueva solucin cuando el precipitado sea excesivo, lo que puede suceder al cabo de uno o
varios meses.
MPR - CNSP - 008
25
SECCIN 7
PROCEDIMIENTOS PARA LOS AISLAMIENTOS RECEPCIONADOS EN EL INS
7.1
OBJETIVO
Describir el procedimiento para procesar de los aislamientos sospechosos de ser gonococo, remitidos de
los laboratorios referenciales.
7.2
TRANSPORTE DE AISLAMIENTOS PARA LA IDENTIFICACIN CONFIRMATORIA

Al remitir sus cultivos al Instituto Nacional de Salud (INS) para la identificacin confirmatoria del gonococo,
se recomienda proceder de la siguiente manera:
7.2.1.
Del cultivo primario de las colonias sospechosa a gonococo, hacer subcultivos en agar chocolate enriquecido
con la finalidad de tener un cultivo puro.
7.2.2.
Realizar la coloracin de Gram de los subcultivos para tener la seguridad que el cultivo (diplococos gramnegativos), se encuentre libre de microorganismos contaminantes.
7.2.3.
Para el transporte, sembrar dos o tres colonias aisladas por estriamiento en placa petri descartable
conteniendo agar chocolate enriquecido o en Medio Transgrow modificado en frasco de vidrio tipo penicilina.
Estos medios no deben estar deshidratados.
7.2.4.
Rotular los frascos y realizar una pre-incubacin a 35C- 37C durante 18 a 24 horas antes de remitir los
cultivos al INS. El tiempo de incubacin podra ser menor, siempre y cuando se visualice el desarrollo de
las colonias caractersticas a gonococo.
7.2.5.
Remitir el(los) cultivo(s) dentro de un depsito que los proteja de rupturas durante el transporte, adjuntando
su respectiva ficha de envo de cepas (Anexo B).
7.3.
IDENTIFICACIN CONFIRMATORIA
7.3.1.
Sembrar en agar chocolate enriquecido y en agar Thayer-Martin e incubar las placas y los cultivos
recepcionados en sus respectivos medios de transporte durante 18-24 horas.
7.3.2.
Realizar un frotis del cultivo recepcionado y colorear con Gram.
7.3.3.
Despus de las 18-24 horas de incubacin, examinar los subcultivos y cultivos recepcionados.
7.3.4.
Si no hubiese desarrollo de colonias tpicas en los cultivos recientes, realizar una coloracin de Gram,
pruebas de oxidasa y catalasa. Si son diplococos Gram-negativos, oxidasa positiva y catalasa positiva,
continuar con el procedimiento de identificacin previamente descrito en este manual.
7.3.5.
Si no hubiese desarrollo de colonias tpicas de Neisseria, volver a incubar durante 24-48 horas adicionales
y a la vez volver a sembrar, del cultivo recepcionado que tendra ya 24 horas de incubacin, en agar
chocolate enriquecido y en Thayer-Martin.
7.3.6.
Examinar las placas cada 24 horas hasta las 72 horas. Si no hay desarrollo, el cultivo ha estado no viable.
A veces viene el aislamiento contaminado con otros microorganismos, ello dificulta la recuperacin de la
bacteria sospechosa de ser gonococo.
MPR - CNSP - 008
26
SECCIN 8
PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
El xito en el aislamiento del gonococo a partir de hisopados clnicos u otro tipo de muestras biolgicas, adems de
una buena obtencin de la muestra, depende tambin de la calidad de los medios de cultivos a utilizarse.
Los medios de cultivo que se utilizan tanto en el aislamiento primario del gonococo como en los estudios de
identificacin son: Medios de cultivos selectivos (Thayer-Martin, Thayer-Martin modificado, Martin-Lewis, New York
City) y medios de cultivos no selectivos como el agar chocolate enriquecido. El medio selectivo que ms
frecuentemente es utilizado para el aislamiento del gonococo a partir de secreciones es el agar Thayer-Martin
modificado.
Los medios de cultivo que se describen en este Manual son los recomendados por la OPS/OMS, CDC y el GASP.
8.1
FUNDAMENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
8.1.1
Tanto el medio de cultivo agar chocolate enriquecido como el agar Thayer-Martin modificado, son medios
que contienen vitaminas, aminocidos e iones de hierro, favoreciendo el desarrollo del gonococo, bacteria
muy exigente para desarrollar en medios artificiales de laboratorio.
8.1.2
El agar Thayer-Martin Modificado es un medio de cultivo selectivo, es decir, permite el desarrollo del
gonococo e inhibe el desarrollo de bacterias saprofitas que podran encontrarse en la muestra. El poder
selectivo de este medio se debe a que contiene antibiticos: colistina (inhibe a bacterias Gram negativos),
nistatina (inhibe a Candida), vancomicina (inhibe a Gram positivos) y trimetoprim (inhibe a Proteus).
8.2
OBJETIVO
Describir los procedimientos tcnicos para la preparacin de los diferentes medios de cultivo de manera
eficiente para el aislamiento, estudio, conservacin y transporte del gonococo.
8.3
8.3.1
Agar Base GC
8.3.2
Hemoglobina bovina deshidratada
8.3.3
Bacto agar o agar bacteriolgico
8.3.4
Suplemento enriquecedor
8.3.5
Inhibidor antimicrobiano VCNT
8.3.6
Agua destilada calibrada a 7,2 0,2
8.3.7
Barra magntica
8.3.8
Refrigeradora domstica
MPR - CNSP - 008
27
8.3.9
Estufa elctrica de 35C 37C
8.3.10
Autoclave elctrica
8.3.11
Balanza
8.3.12
Mechero de Bunsen
8.3.13
Homogenizador magntico trmico
8.3.14
Potencimetro
8.3.15
Cabina de flujo laminar clase II-B
8.4
PREPARACIN DEL AGAR THAYER MARTIN MODIFICADO

Se mezcla la solucin doble concentrada de hemoglobina con el agar base GC doble concentrado, volumen
a volumen, teniendo cuidado que no se formen burbjas al hacer dicha mezcla. Estas soluciones debern
estar previamente preparadas y esterilizadas.
8.4.1
Solucin de hemoglobina 2% (2X)
8.4.1.1 En un matraz de 2 L colocar 10 g de hemoglobina para disolver en 500 ml de agua destilada calibrada,
adicionar una barra magntica de 75 mm de longitud y agitar hasta obtener una completa disolucin
utilizando un homogenizador magntico, quedando lista la solucin de hemoglobina para ser esterilizada
en el autoclave.
8.4.1.2 Mtodo Alternativo

Colocar la hemoglobina en polvo dentro de un recipiente o un mortero y disolverla en un pequeo volumen
de agua destilada tibia, ayudndose con un agitador de vidrio o algn instrumento similar. Una vez que se
haya obtenido una mezcla homognea, adicionar el volumen restante de agua destilada.
8.4.2
Agar base GC 2X
8.4.2.1 En un matraz de 2 L preparar un agar base GC suspendiendo 36 g del medio. Adicionar 10 g de agar para
un volumen de 480 mL de agua destilada calibrada y disolver antes de esterilizar.
8.4.2.2 Esterilizar por separado el agar base GC, pH 7,2 0,2 y la solucin de hemoglobina en autoclave a 121C
por 15 minutos.
8.4.2.3 Mantener las soluciones estriles en bao Mara a una temperatura de 50C-56C.
8.4.2.4 Reconstituir los inhibidores antimicrobianos con agua destilada estril y dejar reposar por 20 minutos.
8.4.2.5 Reconstituir el suplemento enriquecedor de acuerdo a las indicaciones del fabricante y agitar para asegurar
una completa disolucin.
8.4.2.6 Agregar aspticamente 10 mL de suplemento enriquecedor (Isovitalex BBL 11876, Suplemento B Difco
0276, Suplemento VX Difco 3354 o 30 ml del Suplemento Oxoid SR 105B).
MPR - CNSP - 008
28
8.4.2.7 Agregar aspticamente 10 mL del inhibidor antimicrobiano VCNT (Difco 3198-60 o BBL 12408) o 4 mL del
antimicrobiano Oxoid.
8.4.2.8 Alternativamente, se puede utilizar el suplemento de crecimiento con antimicrobiano de Oxoid (SR 56D),
siguiendo las indicaciones del fabricante.
8.4.2.9 Agregar una solucin de hemoglobina al agar base, evitando la formacin de burbujas y mezclar
suavemente. El pH final debe ser 7,2 0,2.
8.4.2.10 Repartir en placas petri estriles 18-20 mL del medio en placas de 100 mm de dimetro.
8.4.2.11 Realizar el control de esterilidad del medio de cultivo recientemente preparado.
8.5
PREPARACIN DEL AGAR CHOCOLATE ENRIQUECIDO
8.5.1
Composicin
Tiene la misma composicin del medio de cultivo Thayer-Martin, excepto que no lleva el inhibidor
antimicrobiano VCNT.
8.5.2
Preparacin
Del mismo modo que para el medio de cultivo Thayer-Martin, pH final 7,2 0,2.
8.5.3
Condiciones ptimas del medio de cultivo
8.5.3.1 Un buen medio de cultivo es aquel cuyo resultado de control de calidad es ACEPTABLE, es decir, es de
aspecto homogneo, superficie lisa, no muestra contaminacin por microorganismos ambientales y el
gonococo desarrolla satisfactoriamente. El Medio Thayer-Martin Modificado debe tener la capacidad de
inhibir total o parcialmente el desarrollo de microorganismo saprofitos.
8.6
PREPARACIN DEL MEDIO CTA-CARBOHIDRATO MODIFICADO
8.6.1
Para 50 mL de medio CTA-carbohidrato
8.6.1.1 Suspender 2,47 g CTA ms 0,75 g de bacto agar en 40 mL de agua destilada.

8.6.1.2 Ajustar el pH a 7,1 0,1.
8.6.1.3 Esterilizar en autoclave a 120C durante 15 minutos.
8.6.1.4 Atemperar a 50C en bao de agua.
8.6.1.5 Adicionar aspticamente 10 mL de solucin del carbohidrato al 7,5%, el que previamente debe ser
esterilizado por filtracin (pesar 0,75 g de CH para 10 mL de agua).
8.6.1.6 Mezclar bien el contenido y repartir 2,5 mL en tubos 12 x 75 mm.
8.6.1.7 Dejar solidificar en plano inclinado a temperatura ambiente.
MPR - CNSP - 008
29
8.6.1.8 Cambiar los tapones de algodn por tapones de jebe estriles.

8.6.1.9 Almacenar a 4C.
8.7
MEDIOS PARA LA CRIOCONSERVACIN DE LAS CEPAS
8.7.1
Utilizar caldo tripticasa soya que no contenga glucosa (Difco o BBL) ms glicerol 15%, caldo Mueller
Hinton ms glicerol 15%, o caldo BHI ms glicerol al 20%, contenidos en viales tapa rosca de polipropileno
de 2 mL de capacidad (criovial), pH 7,2 0,1. Alternativamente, se puede utilizar el medio leche descremada
(Skim milk) 10%.
8.7.2
La crioconservacin de cepas bacterianas se realiza haciendo una suspensin bacteriana densa en medio
para crioconservacin aproximadamente x109 (Mc. Farland 3-4) e inmediatamente se conserva a 70C y
se hacen pasajes cada 6 a 12 meses. Si se conserva a -20C o se congela en una refrigeradora domstica,
los pasajes se harn cada 2 a 3 semanas.
8.8
MEDIOS DE TRANSPORTE
8.8.1
Medio de transporte Amies Carbn
8.8.1.1 Este medio se basa en la modificacin del Medio de Transporte Stuart, incorporando carbn activo al
medio (concentracin final 1%) para evitar la necesidad de usar un hisopo impregnado en carbn.
8.8.2.1
Preparacin:
a.
Suspender los ingredientes en 1000 mL de agua destilada. Calentar hasta hervir, para disolver
completamente.
b.
Dispensar el medio caliente hasta 0,5 cm del tope en frasquitos pequeos (de 6 a 8 mL de capacidad) o en
tubos pequeos con tapa rosca.
c.
Cerrar hermticamente y autoclavar a 121C durante 15 minutos. Invertirlos inmediatamente para distribuir
el carbn con uniformidad, antes de que el medio se solidifique.
NOTA : Este medio de transporte se comercializa en forma deshidratada.
8.8.2
Medio Transgrow
8.8.2.1 Este medio de transporte est compuesto por agar Thayer-Martin modificado (ATMM), al que se adiciona
bicarbonato de amonio a una concentracin final de 0,1%. Este medio debe estar contenido en un frasco
de cierre hermtico, con suficiente superficie de inclinacin. Ejemplo: una solucin al 10% (esterilizado por
filtracin, 0,45 m de dimetro del poro) se prepara adicionando 1 mL por cada 100 mL de medio de
transporte preparado.
8.9
REGISTROS DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS
8.9.1
El laboratorio debe contar con un cuaderno o folder de registro donde se anotarn los medios de cultivo
preparados (Anexo F).
MPR - CNSP - 008
30
SECCIN 9
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO DE CULTIVO THAYER MARTIN Y AGAR CHOCOLATE ENRIQUECIDO
El xito del aislamiento del agente causante de gonorrea, depende de una adecuada preparacin del medio de
cultivo a utilizarse en el aislamiento primario, as como del medio donde se realizan los subcultivos, con el fin de
obtener clulas potencialmente activas para realizar pruebas de identificacin y de estudios fisiolgicos.
El control de calidad de los medios de cultivos slidos se realiza en funcin del indice de crecimiento absoluto (ICA),
que determina su productividad y selectividad. La metodologa utilizada fue propuesta por Mossel y col, quienes
crearon un mtodo ecomtrico que evala la sensibilidad de los medios de cultivos slidos selectivos al desarrollo
de bacterias deseadas y resistentes a la colonizacin por bacterias no deseadas, as como tambin los medios de
cultivos slidos no selectivos.
9.1
OBJETIVO
Describir el procedimiento tcnico propuesto por Mossel y col. para evaluar el control de calidad del medio
de cultivo Thayer-Martin y el agar chocolate enriquecido que se utilizan en el aislamiento e identificacin
del gonococo.
.
9.2
CAMPO DE APLICACIN
Se aplica a la evaluacin de la calidad de los medios de cultivos que se preparan para el aislamiento del
gonococo, de tal manera que se garantice la optimizacin del medio Thayer Martin y del agar chocolate
enriquecido.
9.3
CONDICIONES ESPECIFICAS
Los medios de cultivo a evaluar sern de reciente preparacin y elaborados segn los procedimientos
descritos en este manual.
9.4
CRITERIOS PARA EL CONTROL DE CALIDAD (Tabla N 3)

Tabla N 3. Criterios para el control de calidad de medios de cultivo slidos
Medio
Agar chocolate
Medio Thayer-Martin
modificado
Agente
N. gonorrhoeae
N. gonorrhoeae
Escherichia coli, Staphylococcus
epidermidis, Proteus mirabilis,
Candida albicans
ICA
3,0
2,5
2,0
ICA: Indice de crecimiento absoluto
MPR - CNSP - 008
31
9.5
CEPAS DE REFERENCIA
Los microorganismos que se emplean en la evaluacin del control de calidad de los medios de cultivo en
mencin son los propuestos en el Manual BBL. Para este caso, la bacteria deseada es N. gonorrhoeae y
los microorganismos no deseados son: Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis, Proteus mirabilis y
Cndida albicans, microorganismos que comnmente se encuentran como flora acompaante de la muestra.
9.6
9.6.1
2 placas agar chocolate con suplemento
9.6.2
5 placas medio Thayer-Martin
9.6.3
Cepas de referencia: Neisseria gonorrhoeae, Escherichia coli, Staphylococcus epidermidis, Proteus mirabilis
y Candida albicans.
9.6.4
Caldo BHI en tubo de ensayo
9.6.5
Tubos Mc Farland 0,5 y 1,0
9.6.6
Medio de cultivo de referencia
9.6.7
Asa de siembra calibrada a 2 L
9.7
PROCEDIMIENTO
9.7.1
Preparacin de las cepas (microorganismos deseados y no deseados)
9.7.1.1 Preparar cultivos frescos, fase estacionaria en tubos de ensayo conteniendo infusin cerebro corazn
(BHI).
9.7.1.2 Incubar los cultivos a 35C-37C durante 24 horas.
9.7.1.3 Ajustar la concentracin de bacterias a la escala Mc. Farland 0,5.
9.7.1.4 Sembrar inmediatamente los cultivos ajustados.
9.7.2
Preparacin de los medios de cultivo en placa petri
9.7.2.1 El medio de cultivo a evaluar debe estar en placa petri 100x10 mm en cantidad no menor de 20 mL (no
menor de 4 mm de espesor).
9.7.2.2 Antes de realizar la prueba, deje secar las placas en posicin invertida en una estufa a 45C por una hora
(a 37C por 2 horas).
9.7.2.3 Divida la placa en 4 cuadrantes similares y luego enumere dichas zonas (ver Figura N 17).
MPR - CNSP - 008
32
5
2
3
Figura N 17. Divisin de la placa y estriamiento
9.7.3
Sembrado de los microorganismos deseados y no deseados
9.7.3.1 Agar chocolate: siembre la bacteria deseada (N. gonorrhoeae).

9.7.3.2 Agar Thayer-Martin modificado: Siembre slo un microorganismo deseado y no deseado por placa.
9.7.3.3 Utilizar un asa calibrada de 2 L para sembrar los microorganismos deseados y no deseados ajustados a
Mc Farland 0,5.
9.7.3.4 Trazar sobre la superficie del medio de cultivo, 5 estras paralelas (2 cm de longitud) en cada cuadrante
y una estra al centro, en forma prefresiva sin recargar ni torcer el asa de siembra.
9.7.3.5 Incubar las placas en posicin invertida a 35C-37C durante 24 horas en ambiente de 3-7% de CO2 y 5070% de humedad.
9.7.4
Determinacin del ndice de crecimiento absoluto (ICA)

A cada estra que muestra crecimiento del microorganismo inoculado, se le asigna un valor de 0,2, dicho
valor se multiplica por el nmero de estras en las que se observa crecimiento, excepto la estra central que
vale 1,0. Por ejemplo, si hubo desarrollo en todas las estras, cada cuadrante alcanza el valor de 1,0, 1,0 x
4 = 4,0 + 1,0. Es decir, el Indice de Crecimiento Absoluto (ICA) alcanzado sera igual a 5.
9.7.5
Resultado
De acuerdo al valor ICA alcanzado, el medio de cultivo evaluado puede resultar de: CALIDAD ACEPTABLE
O NO ACEPTABLE. Si el valor ICA de los microorganismos ensayados supera el valor lmite, el medio de
cultivo ser considerado de CALIDAD NO ACEPTABLE.
MPR - CNSP - 008
33
BIBLIOGRAFA
1.
Dickinson B. Microbiology system. Manual of BBL products and laboratory procedures. Sixth edition; 1992.
2.
Dickinson B. BBL paper discs for the determination of B-lactamase enzymes. 88-0080-1; 1992.
3.
Dickinson B. GonoGen Ii. 88-102025; 1994.
4.
Dillon JR, Li H. A laboratory course manual: identification and antimicrobial susceptibility testing of Neisseria gonorrhoeae. Third Edition. Ottawa-Canada: WHO/PAHO GASP Coordinating Center; 1994.
5.
Ehret JM, Judson FN, Biddle JW. Gonorrhea. In: Wentworth BB, Judson FN. Laboratory methods for the
diagnosis of sexually transmitted diseases. USA: American Public Health Association; 1984. p. 43-79.
6.
Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos para la obtencin y envo de muestras (I). Segunda
edicin. Lima, Per: INS; 1997. Serie de Normas Tcnicas N 15.
7.
Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos tcnicos para el diagnstico bacteriolgico de

gonorrea. Segunda edicin. Lima, Per: INS; 1997. Serie de Normas Tcnicas N19.
8.
Instituto Nacional de Salud. Manual de normas de bioseguridad. Lima, Per: INS; 1996. Serie de Normas
Tcnicas N18.
9.
Kellogg J, Orwig LK. Comparison of gono gen, gono gen II and micro trak direct fluorescent antibody test
with carbohidrate fermentation for confirmation of culture isolates of Neisseria gonorrhoeae. J Clin Microbiol
1995; 33(2): 474-6.
10.
Krieg NR. Bergeys manual of systematic bacteriology. Vol. 1. Williams and Wilkins. Baltimore-London;
1984.
11.
Morello JA, Janda W, Bohnhoff M. Neisseria and Branhamella. In: Lennette HE (Ed.). Manual of clinical
microbiology. American Society for Microbiology. Fourth edition. USA; 1985. p. 176-92.
12.
Organizacin Mundial de La Salud. Neisseria gonorrhoeae e infecciones gonoccicas. Ginebra: OMS;

1978. Serie de Tcnicos 616. p. 156.
13.
Organizacin Panamericana de la Salud. Gua tcnica para el estudio de evaluacin del riesgo
microbiolgico en la va pblica en ciudades de Amrica Latina. OPS; 1994.
14.
Sonnenwirth A, Jarett L. Mtodos y diagnstico del laboratorio clnico. 8edicin. Ed. Panamericana.
Buenos Aires-Argentina; 1984.
15.
Sonnenwirth A, Gradwohl JL. Mtodos y diagnstico del laboratorio clnico. 8 edicin. Ed. Mdico
Panamericana. Buenos Aires; 1969.
MPR - CNSP - 008
34
16.
Thayer JD, Martin JE. A selective medium for the cultivation of Neisseria gonorrhoeae and Neisseria
meningitidis. Public Heralth Reports 1964; 79(1): 49-57.
17.
Neylan V, Genus I. Neisseria Trevisan1885, 105AL. In: Krieg NR. Bergeys manual of systematic bacteriology. Vol.1. Williams and Wilkins. Baltimore-London. 1984. p. 290-6.
18.
Wentworth BB, Judson F. In: Laboratory methods for the diagnosis of sexually transmitted diseases.
American Public Health Association. USA; 1984.
19.
Weyant RS, Weaver RE, Hollis DG, Jordans JG, Cook EC, Daneshvar MI. Identification of unusual
pathogenic gram-negative aerobic and facultatively anaerobic bacteria. Second edition. Williams and
Wikins. Center for Disease Control and Prevention; 1995.
MPR - CNSP - 008
35
ANEXO A
FICHA DE REGISTRO DE DATOS DEL PACIENTE
Fecha de ingreso de muestra: ........................................ Cdigo de la muestra: .................................................

Establecimiento de salud: ......................................................................................................................
Regin de salud: ........................................................................................................................................................
Nombre del paciente: ..................................................................................... Edad: .......... Sexo: ..........................
Conducta de riesgo: ..................................................................................................................................................
Trabajadora sexual (TS), cliente (CL), hombre que tiene sexo con con otro hombre (HSH), poblacin general (PG),
drogadicto (D), poblacin privada de su libertad (PPL), Otro: (Indicar)
......................................................................................................................................................................................
Tipo de muestra: .......................................................................(secrecin uretral, cervical, farngea, etc.)
Diagnstico clnico: ....................................................................................................................................................
Diagnstico bacteriolgico: .......................................................................................................................................
PRUEBAS DE LABORATORIO
Desarrollo en Thayer Martin: ......................... Desarrollo en TSA: ..........................................................................
Coloracin de Gram de la colonia sospechosa: .....................................................................................................
Prueba de oxidasa: ........................................ catalasa: .........................................................................................
RESULTADO DEL DX. PRESUNTIVO: .......................................................................................................................
RESULTADO CONFIRMATORIO
Utilizacin de carbohidrato en base CTA : ..............................................................................................................
Otra tecnologa de identificacin utilizada : ..............................................................................................................
..............................................................................................................
(gnero especie)
Fecha de procesamiento de la muestra :
Inicio: ....................................................................... Trmino: ..................................................................................
........................................................
Responsable
MPR - CNSP - 008
36
ANEXO B
FICHA DE DATOS PARA EL TRANSPORTE DE AISLAMIENTOS
PARA LA CONFIRMACIN DE Neisseria gonorrhoeae
Cdigo de recepcin del cultivo en el INS: .............................................................................................................

Cdigo de procedencia/nombre del paciente:.........................................................................................................
(Consigne el cdigo de la muestra y las iniciales del nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno, primer
y segundo nombre)
Establecimiento de salud: ...................................................................................................................
(Indique el nombre del establecimiento de salud (DISA a la que pertenece) donde se hizo el aislamiento del germen)
Edad: .............................................
(a: aos, m: meses, d: das)
Sexo: ..........................................
(M: masculino, F: femenino)
Grupo poblacional: ........................................................................................................................................................

(Consigne PG: poblacin general, TS: trabajadora sexual, HSH: hombre que tiene sexo con otro hombre, CL:
cliente, PPL: poblacin privada de su libertad, DRO: drogadicto, Otro: indique)
Tipo de muestra: .........................................................................................................................................................
Trabajadora sexual (TS), cliente (CL), hombre que tiene sexo con con otro hombre (HSH), poblacin general (PG),
drogadicto (D), poblacin privada de su libertad (PPL), Otro: (Indicar)
.......................................................................................................................................................................................
Fecha de obtencin de muestra: ........................ Dx. bacteriolgico: ...........................................................................
(Registre: da, mes y ao)
Fecha de aislamiento: .................................... Fecha de envo al INS: .................................................................
(Registre: da, mes y ao)
........................................................
Responsable
MPR - CNSP - 008
37
ANEXO C
PREPARACIN DE COLORANTES
COLORANTE DE GRAM
C1.
CRISTAL VIOLETA DE HUCKER

Solucin A:
Cristal violeta (certificada).. 2 g
Etanol (95%)................... 20 mL
Solucin B:
Oxalato de amonio............. 0,8 g
Agua destilada................ 80 mL
Disolver el cristal violeta en etanol (solucin A).
Disolver el oxalato de amonio en agua destilada (solucin B).
Procedimiento
Mezclar las soluciones A y B, filtrar con papel filtro despus de las 24 horas de haber realizado la
mezcla.
Guardar en frasco oscuro.
Etiquetar y anotar la fecha de su preparacin
NOTA: Almacenar el colorante filtrado en frasco de vidrio oscuro.
C2.
SAFRANINA: Solucin al 0,25%

Safranina O (certificada).. 0,25 g
Etanol (95%).............. 10 mL
Agua destilada............ 90 mL
C3.
DECOLORANTE ALCOHOL-ACETONA (1:1)

Etanol (95%)............... 50 mL
Acetona qp. ............... 50 mL
C4.
YODO DE GRAM
Cristales de yodo......... 1 g
Yoduro de potasio......... 2 g
Agua destilada............ 300 mL
Procedimiento
Mezclar en un mortero los cristales de yodo y el yoduro de potasio.

Agregar agua destilada en pequeas cantidades.
Almacenar la solucin preparada en frascos de vidrio oscuro.
MPR - CNSP - 008
38
ANEXO D
FLUJOGRAMA PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE
Neisseria gonorrhoeae
MUESTRA
Examen directo
(Coloracin de Gram)
//
Transporte en:
- Amies o
- Transgrow
- Otros.
Cultivo en:
- Agar Thayer-Martin
modificado (MTM)
y/o
- Agar chocolate con
suplemento enriquecedor
Incubacin a 35C,
con 3-7 % de CO2 y 70% de
humedad.
Lectura cada 18-24 horas. Descartar
positividad despus de las 72 horas
De las colonias sospechosas hacer:

coloracin Gram, prueba oxidasa y catalasa.
IDENTIFICACION
PRESUNTIVA
Diplococos gramnegativos tpicos
oxidasa (+) y catalasa (+)
IDENTIFICACION
CONFIRMATORIA
Utilizacin de carbohidratos
en base CTA:
Glucosa Lactosa Maltosa Sacarosa
+
-
N. gonorrhoeae
(LAB. REF. REGIONAL)
ENVIO AL LABORATORIO DE
REFERENCIA NACIONAL (INS)
MPR - CNSP - 008
39
ANEXO E
FLUJOGRAMA PARA EL DIAGNSTICO CONFIRMATORIO DE Neisseria gonorrhoeae POR EL MTODO
BIOQUMICO CTA-CH
Incubaci n a 3C, 3-10%

de CO2, 50-70%
humedad/ 24-72 horas
IDENTIFICACIN
PRESUNTIVA
IDENTIFICACIN
CONFIRMATORIA
COLORACIN
DE
CATALASA
GRAM
OXIDASA
PRUEBA BIOQUMICA CTA-CH:
Prueba: betalactamasa
: Punto crtico
SISLAB: Sistema de Informacin de Laboratorios.
MPR - CNSP - 008
40
ANEXO F
FICHA DE DATOS PARA EL REGISTRO DE MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS
Fecha de preparacin: ...............................................................................................................................................
Nombre del medio de cultivo: ..................................................................................................................................
Cantidad: ........................ Cantidad de placas servidas: .......................... Cantidad de frascos: ..............................
COMPONENTES:
Marca de la base GC: ................................... Fecha exp.: .................................. lote:.............................................
Marca de la hemoglobina: ............................................................ Marca: ...............................................................
Fecha exp.: .......................................lote: ...........................................
Nombre del suplemento enriquecedor: ..................................... Marca: ...............................................................
Fecha exp.: ...................................... lote: ...........................................
Iniciales de los antibiticos: ......................................................... Marca: ...............................................................
Fecha exp.: ....................................... lote: ............................................
Agar adicionado: ........................................................................... Marca:................................................................
Fecha exp.: ...................................... lote: ............................................
........................................................
Responsable
MPR - CNSP - 008
41
ANEXO G
ILUSTRACIONES DEL EMBALAJE PARA EL TRANSPORTE DE LOS AISLAMIENTOS
Figura G1. Forma adecuada de embalar los recipientes primarios.
Figura G2. Forma adecuada de embalar los recipientes primarios.
MPR - CNSP - 008
42
Figura G3. Forma de colocar varios recipientes primarios dentro del recipiente secundario.
Figura G4. Forma de tapar y sellar con cinta de embalaje.
MPR - CNSP - 008
43
Figura G5. Etiqueta de identificacin.
Figura G6. Etiqueta de orientacin y forma de colocar dos etiquetas de

orientacin en cada extremo del contenedor.
MPR - CNSP - 008
44
MPR - CNSP - 008
45
ARTES Y DISE OS LASER S.R.Ltda.

Teodoro C rdenas 124 - B
Santa Beatriz
Lima 01 - Per
Telf.: 470-6172 Telefax: 472-4525
Mayo 2002
Tiraje: 3,000 ejemplares
MPR - CNSP - 008
46

Manual Gonorrea PDF

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Manual Gonorrea PDF

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

MINISTERIO DE SALUD

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Portada: Frontis del local central del Instituto Nacional de Salud.

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL DIAGNSTICO

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

Catalogacin hecha por el Centro de Documentacin del INS

ISBN 9972 857 23 9

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

PROCEDIMIENTOS PARA EL DIAGNSTICO BACTERIOLGICO

DETECCIN DE CEPAS PRODUCTORAS DE BETA-LACTAMASA

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

Mtodo Yodomtrico Rpido

PROCEDIMIENTOS PARA LOS DE AISLAMIENTOS RECEPCIONADOS EN EL INS

PROCEDIMIENTOS PARA LA PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO DE CULTIVO THAYER-MARTIN Y AGAR

FICHA DE REGISTRO DE DATOS DEL PACIENTE.

FICHA DE DATOS PARA EL TRANSPORTE DE AISLAMIENTOS PARA LA

FLUJOGRAMA PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE Neisseria gonorrhoeae.

FLUJOGRAMA PARA EL DIAGNSTICO CONFIRMATORIO DE Neisseria gonorrhoeae

FICHA DE DATOS PARA EL REGISTRO DE MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.

ILUSTRACIONES DEL EMBALAJE PARA EL TRANSPORTE DE LOS AISLAMIENTOS.

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

Neisseria gonorrhoeae pertenece a la familia Neisseriaceae, es el agente causante de blenorragia o gonorrea,

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

1.2.2.1 Obtencin de muestras de pacientes.

El resultado de la prueba es responsabilidad del analista, jefe de laboratorio.

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

El personal de laboratorio, responsable de la preparacin de los medios de cultivo, colorantes, soluciones

Organizacin Mundial de la Salud. Neisseria gonorrhoeae e infecciones gonoccicas. Ginebra: OMS;

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

ACH: Agar chocolate enriquecido.

ATMM: Agar Thayer Martin Modificado.

bacteria: Microorganismo perteneciente al reino protista.

bacilo: Bacteria que tiene la forma de bastn o cilndrico.

CDC: Center for Disease Control (Centro de Control de Enfermedades).

CTA: Agar cistina - tripticasa.

cepa bacteriana: Cultivo identificado de acuerdo a la sistemtica taxonmica.

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

1.5.18 Lac: Lactosa.

MPR - CNSP - 008

Instituto Nacional de Salud

Manual de procedimientos para el diagnstico bacteriolgico de gonorrea

Debido a la produccin de betalactamasas de origen plasmdico y/o cromosomal, se ha incrementado el

Infecciones adquiridas en el laboratorio: Se han reportado 4 casos en Estados Unidos.

MANEJO DEL AGENTE