FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE MEDICINA

VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TCNICAS DE COLORACIN
BACTERIANA
CATEDRTICO:
MCBG. JAIME WESTER

CAMPOS.

ESTUDIANTES:
Castro Chihuan, Lilian Katherine
Romn Hilario, Yomira
Rodrguez Rodrguez, Nadia
Roca Guzmn, Cristian
Ticse Mendevil, Enid

Huancayo 2015 II

INTRODUCCION
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles
de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el
contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para
distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de
determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas,
paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de
teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo
ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como
formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el
colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma.
La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un
portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo
inmediatamente el proceso de tincin.
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante
forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras
celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales
inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos, y
deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos
estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente
existente.

OBJETIVOS

Conocer el mecanismo bsico y ventajas de una tincin.

Aprender conceptos bsicos relacionados a:

o Proceso de preparacin de un frotis

o Tincin Gram
o Tincin de ziehl Neelsen

Identificar caractersticas en las bacterias en estudio en base a

diferentes tinciones.

Conocer o manejo del microscopio ptico para la observacin de

bacterias (importancia del objetivo de inmersin)

IMPORTANCIA
La Tincin bacteriana es importante para la microbiologa debido a que:

Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea,

permitiendo diferenciar varios tipos morfolgicos.

Permite el estudio de las estructuras internas de la clula bacteriana,

tales como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares.

Permite el empleo de mayores amplificaciones.

FUNDAMENTOS TERICOS
TINCIN BACTERIANA
Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para
mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas
son sustancias que usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de
diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser
utilizados para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido
(resaltando

por

ejemplo

fibras

musculares o tejido

conectivo),

poblaciones celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas)

o incluso para resaltar organelas dentro de clulas individuales.
Tincin de Gram o coloracin de Gram
es un tipo de tincin diferencial empleado en bacteriologa para la visualizacin
de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre al
bacterilogo dans Christian Gram (1853-1938), que desarroll la tcnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana,
como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin
bacteriana, considerndose bacterias Gram positivas a las que se visualizan de
color morado, y bacterias Gram negativas a las que se visualizan de color rosa,
rojo o grosella
1. Bacterias Gram positivas. Poseen una pared celular gruesa con numerosas
capas de peptidoglucano, las cuales retienen el colorante cristal violeta.

Algunas de estas bacterias se rodean adems de una cpsula o cubierta

gruesa y viscosa de polisacridos, cuya funcin puede ser adherencia,
resistencia a la desecacin, material de reserva o patogenicidad, como en
Mycobacterium

tuberculosis.

2. Bacterias Gram negativas. Poseen una pared celular fina y una segunda
membrana lipdica denominada membrana externa, la cual no retiene el
colorante cristal violeta, como en Escherichia coli.

Cocos
Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la divisin celular. Diplococos,
aparecen

por

pares.

cadenas. Estafilococos,

Estreptococoss,
aparecen

en

tienden
grupos

unirse

irregulares,

formando
a

veces

de gran tamao

Bacilos
grandes variaciones morfolgicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos

Espirales (Treponemas, Borrelias ...)

Tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR)

es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, usada para la
identificacin de microorganismos patgenos, como M. tuberculosis o el gnero
Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes: Franz Ziehl, un
bacterilogo, y Friedrich Neelsen, un patlogo.
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la
propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin
con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistente. Las
micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan
por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de
Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con
agua, provoca una nueva solidificacin de los cidos grasos de modo que el
colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento

aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin

facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin
son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de
metileno como tincin de contraste.

MATERIALES:

Microscopio ptico
Laminas porta objetos
Hisopos estriles
Set de coloracin Gram
Set de coloracin ziehl neelsen
Mecheros bunsen
Muestras de sarro dental y mucosa oral
Material de asepsia y desinfeccin

PROCEDIMIENTO:
Obtencin de la muestra

Extensin
Una extensin o frotis consiste en recubrir parcialmente un porta con la
muestra obtenida, de tal manera que las clulas de sta se dispongan
formando una sola capa de ellas muy homognea.

Fijacin
Consiste en pasar la lmina directamente por la llama del mechero dos o tres
veces con movimientos de vaivn, de manera que la parte posterior de la
lmina sea lamida por la llama. La exposicin al calor directo provocar que las
estructuras de naturaleza proteica, se coagulen, lo que provocar que la
preparacin quede adherida a la lmina y no sea desprendida despus de la
coloracin por el agua que se utilice para eliminar el exceso de colorante.

Coloracin:

Coloracin Gram
Hucker
Lavar
Lugol
Lavar
alcohol-acetona
Lavar
Safranina
Lavar
Secar
Coloracin ziehl neelsen:

Fucsina
Tres vapores
Lavar alcohol-acido
Lavar
Azul de metileno
Lavar
Secar
Observacin
Consiste el llevar al microscopio la muestra preparada, se observa del
menor al mayor aumento, luego se agrega aceite de cedro.

CONCLUSIN
Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea, difieren
mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite distinguir las
bacterias por Tincin, pues generalmente, el colorante reacciona con
la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.

BIBLIOGRAFA:

Bergey, David H.; Holt, John G.; Krieg, Noel R.; Sneath, Peter H. A.
(1994): Bergey's

manual

of

determinative

bacteriology.

Lippincott

Williams & Wilkins, novena edicin, 1994.

Madigan, M. T; Martinko J., Parker J. (2004): Brock biology of

microorganisms. Lippincott Williams & Wilkins, dcima edicin, 2004.

Sgaard, M.; Nrgaard, M.; Schnheyder, H. (2007): First notification of
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en la revista Journal of Clinical Microbiology, 45: pg. 1113; 2007.

Hall GS, Woods GL. Medical Bacteriology. In: McPherson RA, Pincus
MR, eds.Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory
Methods