Protocol for the micropropagation of

Myrtus communis
Arboleda Mario, Boada Lissette, Caiza Joselin, Torres Jocelyn
Departamento de Ciencias de la Vida, Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE
Sangolqu, Ecuador
maarboleda1@espe.edu.ec
laboada@espe.edu.ec
jccaiza2@espe.edu.ec
jatorres16@espe.edu.ec

Resumen
El mirto (Myrtus communis) es un arbusto de hojas perennes, tpico de la regin del
Mediterrneo. Debido al aroma de sus hojas, es utilizada en la industria medicinal, y de
perfumera. Incluso sus frutos por ser tan vistosos son muy codiciados en Europa. Pero el
uso ms importante es el ornamental, ya que sus ramas cortadas sirven para la decoracin
de interiores, mientras que la planta en s sirve para jardinera. Es una especie muy variable
por el tipo y tamao de su fruto, por la arquitectura de la planta, por el tamao de la hoja y
el largo de los entrenudos. Una solucin a su gran demanda, es la micropropagacin. El
primer paso consiste en obtener un brote apical o un entrenudo de una rama joven de una
planta de mirto, luego se esteriliza con etanol al 70% por 30s y NaOCl por 20 minutos.
Luego se cultiva en un medio MS con sales, vitaminas, sucrosa y 0.5 mg/L BA, 0.2 mg/L
IAA, para as poder evitar problemas en la fase de enraizamiento.
Este par de fitohormonas aumentan el porcentaje de races, tanto en nmero como en
longitud. Inclusive la concentracin de sucrosa e intensidad de luz durante la fase de
enraizamiento tambin modulan la produccin de biomasa y el contenido de clorofila.
Palabras clave: Ornamental, brote apical, enraizamiento.
I.

OBJETIVOS

II.
INTRODUCCIN
Segn (Bruna et al, 2007) la especie Myrtus communis conocida mejor en algunos lugares
como mirto o arrayn, es una planta de la familia de las Myrtaceae, nativa del sudeste
de Europa y del norte de frica. Se la cultiva como planta ornamental. Es un arbusto de
follaje perenne que puede alcanzar hasta los 3 metros de altura, sus hojas son coriceas y
relucientes, tienen forma ovatolanceolada aguda y opuesta, que al restregarlas son muy
aromticas, y pueden generar gran aroma. Sus flores son blancas, stas nacen de las axilas
de las hojas y se disponen sobre unos pednculos ms o menos largos. Tienen como fruto
unas bayas comestibles que enriquecen el colorido del arbusto. Viven en todo tipo de
terreno, en suelo bien drenado, desarrollndose en zonas en las que el invierno no es muy
duro. Requiere de climas suaves, donde la sequa estival no sea excesivamente acusada y
suelos frescos y algo hmedos. Contiene un alcohol, el mirtol, que le confiere propiedades

balsmicas, antispticas y sedantes, por lo que se ha usado tradicionalmente en el

tratamiento de afecciones pulmonares y bronquiales. Las hojas, flores y frutos son ricos en
aceite aromtico empleado en perfumera. Son muy conocidas sus propiedades medicinales,
debidas a sus taninos y esencias. Su madera es emplendola como anticatarral y antisptico.
Sus bayas se usan como condimento, tambin se pueden obtener de esta planta elementos
para curtir la piel. Su madera es dura y moteada y se puede usar para artculos torneados o
para hacer carbn vegetal. Sin embargo, la micropropagacin in vitro poco a poco se hizo
comn despus del desarrollo del cultivo de puntas apicales y se est convirtiendo cada vez
ms importante en la produccin comercial (Mohan & Ochatt, 2010). Los esfuerzos por
establecer protocolos eficientes han estado en curso desde hace algunas dcadas. En este
informe se presenta un protocolo especializado para la obtencin, desinfeccin, iniciacin
in vitro as como las prcticas de cultivo generales de multiplicacin, reproduccin,
enraizamiento y aclimatacin en la planta Myrtus communis, con la finalidad de poder
obtener un producto deseado como el desarrollo de callos, brotes, induccin de races,
micropropagacin, organognesis, variacin somaclonal, poliploidizacin as como la
hibridacin interespecfica (Lucchesini, Mensuali, Massai, & Gucci, 2001).
III.
PROCEDIMIENTO
Obtencin del explante
Tras escoger una planta adulta de Myrtus, al aire libre, a partir de una rama joven se corta el
brote apical y los entrenudos, es decir se cortan vstagos en crecimiento activo (5 a 6 cm de
largo) a los que se les remueve las hojas y se roca el material vegetal con benomilo
(fungicida) 0.5g/L y se almacena en fundas plsticas en condiciones fras (6 a 7C) hasta su
uso (Mohan & Ochatt, 2010).
Desinfeccin de explantes
Tras preparar una solucin de etanol al 70%, una solucin de hipoclorito de sodio NaOCl, y
una solucin de detergente con pocas gotas de jabn lquido. En primer lugar se enjuaga el
explante con la solucin detergente, luego se esteriliza con la solucin de etanol al 70%
durante 30 segundos, y posteriormente se esteriliza con la solucin de NaOCl durante 20
minutos. Finalmente se enjuaga dos veces con agua estril (Mohan & Ochatt, 2010).

Multiplicacin
Extirpar los pices de brotes y entrenudos de las ramas jvenes seleccionadas a partir de los
genotipos de plantas adultas de Mirto. Enjuagar el material por primera vez en una solucin
de detergente con unas gotas de lquido de jabn para lavar platos, luego se esteriliza al
70% de etanol durante 30 s y con la solucin NaOCl al I.2% de cloro activo, durante 20
min y enjuague dos veces. Cultivar los explantes aspticos en el medio para el
establecimiento in vitro que contiene los agentes antioxidantes, 100 g/L de cido ascrbico
y 10 g/L de cido ctrico se agregaron en los dos primeros subcultivos para evitar la

oxidacin de los exudados de la parte basal de los explantes. Cortar los explantes
dividiendo el pice y los entrenudos, cortar y desechar la base de explante, la transferir
ambos tipos de explantes a un medio de multiplicacin y un subcultivo cada 28 das.
Establecer las condiciones de cmara de crecimiento durante la fase de multiplicacin a
2
23C con un fotoperiodo de 16 h de luz en 30 mol/m /s de PPFD 30 (Cervelli C et al,
2001)

Enraizamiento
La frecuencia y nmero de races por explante son influenciados fuertemente por la
concentracin de citoquininas que se utilice en el medio de multiplicacin de brotes. Los
mejores resultados se obtienen despus de 4 a 5 semanas de cultivo en los brotes
recuperados de medio de proliferacin que debe contener 0,5 a 1 mg/L de BA a los cuales
se subcultivan a medio de enraizamiento suplementado con 1 mg/L de NAA (Bajaj, 2003).
Tabla 1. Composicin del medio para la propagacin in vitro de Myrtus ornamental

Fuente: Mohan & Ochatt, 2010.

Aclimatacin
Despus de 40 das, se evala el peso fresco de la planta, la altura del callo, nmero de
hojas por brote, nmero de brotes por callo con el fin de calcular el ndice de biomasa.
Antes de la transferencia al invernadero de aclimatacin, se debe combinar el contenido de
clorofila (a + b) con el ndice de biomasa, con este valor es posible entender el posible
comportamiento de aclimatacin y tambin los brotes que no enracen. Transferir los brotes
enraizados y no enraizados a 40% turba y 60% sustrato de perlita (en volumen) y colocar
60 das en el invernadero con una humedad relativa del 80% suministrada por un sistema de
niebla o neblina (10s cada 30 min) durante los primeros 30 das y luego disminuir la
humedad de hasta 60%. La temperatura media puede variar entre 20 y 25 C y la
iluminacin puede ser suministrada por la luz natural con 50% de sombra proporcionada

por una red de polister-aluminio. Si un invernadero niebla no est disponible, se puede

cubrir las plantas con papel aluminio colocado bajo la niebla durante los primeros 15 das
lo que permitir evitar el continuo estrs hidratacin-deshidratacin durante los
tratamientos de niebla y para evitar la necesidad de aumentar el nmero de suministro de
agua (niebla), que para esta planta, son perjudiciales y que producen pudricin basal
(Lucchesini, Mensuali, Massai, & Gucci, 2001).
IV. CONCLUSIONES
V. REFERENCIAS
[1] Bruna S, Portis E, Cervelli C, De Benedetti L, Schiva T, Mercuri A (2007) AFLPbased genetic relationships in the Mediterranean myrtle (Myrtus xommunis L.) Sci
Hortic 113(4): 370-375.
[2] Cervelli C, Ruffoni B, Castello S, Savona M (2001) Variability of vegetative traits
with ornamental value in spontaneous Myrtus communis L. genotypes. Proc
Convegno Biodiversit 2: 135-144
[3] Mohan, S., Ochatt, S. (2010). Protocols for In Vitro Propagation of Ornamental
Plants. Human Presss, a part of Springer Science. Chapter 24, pp: 257-269.
[4] Bajaj, Y. (2003). Biotechnology in Agriculture and Forestry. New York: Springer.
[5] Lucchesini, M., Mensuali, A., Massai, R., & Gucci, R. (2001). Development of
autotrophy and tolerance to acclimatization of Myrtus communis transplants
cultured in vitro under different aeration. Elsevier, 4-6.