Manual Mantenimiento para Equipo Llaboratorio

D
O C U M
E N
T O S
T E C N
I C O S
Tecnologias Esenciales de Salud

Tl-IS/EV - 2005/007
MANUAL
E
MANTENIMIENT
O PARA EQUIPO
E LABORATORIO
eilicamentos Esenciales,
Vacunas y Tecnologias en Salud
MANUAL DE MANTENI MIENTO PARA

EQUIPO DE LABORATORIO
rea de Tecnolog a y Prestacin

de Servicios de Salud
Unidad de Medicamentos Esenciales, Vacunas
y Tecnolog as en Salud
MANUAL DE
MANTENI
MIENTO
PARA
EQUIPO
DE
LABORATORIO
Washing ton D. C., 2005
Tecnolog a y Prestacin de Servicios de Salud (THS)

Medicamentos Esenciales, Vacunas y Tecnologas en Salud (EV)
Biblioteca Sede OPS - Catalogaci6n en la fuente

Organizaci6n Panamericana de la Salud.Area de Tecnologia y Prestaci6n de Servicios de Salud. Unidad de Medicamen
tos Esenciales, Vacunas y Tecnologias en Salud.
Manual de Mantenimiento para Equipo de Laboratorio
Washington, D. C.: OPS, e 2005.
{Documentos Tecnicos.Tecnologias Esenciales de Salud. THS/EV-2005/007)
ISBN 92 75 32590 1
I Titulo II. Serie
Ill. Gabastou, Jean-Marc, Coord.
1. EQUIPO DE 1.ABORATORIO
2. MANTENIMIENTO DE EQUIPO
3. LABORATORIOS - organizaci6n y administraci6n

4. MANUALES
NLM WX 147
Analizador de ELISA
Analizador de pH
Balanzas
Bario de Maria
Cabina de seguridad biol6gica
Centrifuga
Destilador de agua
Diluidor
Dispensador
Espectrofot6metro
Autoclave
Estufa de secado
lncubadora
Lavador de ELISA
Microscopic
Pipetas
Plato caliente con agitador
Refrigerador
Redacci6n/Adaptaci6n:
Jorge Enrique Villamil
Gutierrez Revision:
Jean-Marc Gabastou
Antonio Hernandez
Diseno de portada:
naranhausd iseno
Diagramaci6n/lmpresi6n:
Nuevo Arte
Correcci6n de estilo:
Paulina Rodriguez Ruiz
Fotografia:
Margarita Car'iar
La Organizacin Panamericana de la Salud dar consideracin muy favorable a las solicitudes de autorizacin para reproducir o traducir, ntegramente o en parte, alguna de sus publicaciones, siempre que no sea con
fines de lucro. Las solicitudes y las peticiones de informacin debern dirigir se a la Unidad de Medica- mentos
Esenciales, Vacunas y Tecnolog as en Salud de la Organizacin Panamericana de la Salud/Organi- zacin
Mundial de la Salud, 525, Twenty-third Street, N. W. Washing ton, D. C. 20037, EUA, que tendr su- mo gusto
en propor cionar la informacin ms reciente sobre cambios introducidos en la obra, planes de reedicin y
reimpresiones ya disponibl es.
Organizacin Panamericana de la Salud, 2005
Las publicaciones de la Organizacin Panamericana de la Salud estn acogidas a la pro teccin prevista por
las disposiciones sobre reprodu ccin de origin ales del Protocolo 2 de la Convencin Universal sobre Derecho de Autor: Reservados todos los derechos.
Las denomin aciones empleadas en esta publicacin y la forma en que aparecen presentados los datos que
contiene no implican, por parte de la Secretara de la Organizacin Panamericana de la Salud, juicio alguno
sobre la condicin jurdica de pases, terri torios, ciudades o zonas, o de sus autoridades, ni respecto del
trazado de sus fron teras o lmites.
La mencin de determinadas sociedades mercantiles o de nombr es comerciales de ciertos productos no implica que la Organizacin Panamericana de la Salud apruebe o recomiende con preferencia a otros anlogos.
Salvo error u omisin, las denomin aciones de productos patentados llevan en las publicaciones de la OPS
letra inicial mayscula.
TABLA DE CONTE
OS
INTRODUCCIN
13
Cap tulo pri mero

Analizador de ELISA
Fotografa de analizador de ELISA
Propsito del analizador de ELISA
Principios de operacin
Servicios requeridos
Rutinas de mantenimiento
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
15
15
15
15
15
17
18
21
22
Cap tulo segundo

Lavador de ELISA
Fotografa de lavador de ELISA
Propsito del lavador de ELISA
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
23
23
23
23
23
26
26
28
29
Cap tulo tercero

Analizador de pH
Propsito del equipo
Fotografas y elementos del analizador de pH
Esquema de un analizador de pH
Compon entes
Circuito tpico
Procedimiento general de calibracin
Mantenimiento general del analizador de pH
Mantenimiento bsico del electrodo
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Anexo: Teora del pH
31
31
31
31
32
33
33
34
35
35
37
37
39
41
42
Cap tulo cuar to

Balanzas
Fotografas de balanzas
Propsito de la balanza
Principios de funcionamiento
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
43
43
43
43
43
49
51
52
54
Cap tulo quin to

Bao de Mara
Esquema bao de Mara
Controles baos de Mara
Operacin del bao de Mara
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo sexto
Cabina de seguridad biolgi ca
Ilustracin cabina de segurid ad biolgi ca
Propsitos del equipo
Segurid ad biolgi ca
Uso de la cabina
Evaluacin funcional (alternativa)
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo sptimo
Centrfuga
Fotografa y esquema
Propsito de la centrfuga
Compon entes de la centrfuga
Recomendaciones de conservacin y manejo adecuado
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo octavo
Destilador de agua
Esquema del destilador de agua
Propsito del destilador de agua
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo noveno
Diluidor
Esquema del diluidor
Propsito del diluidor
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
55
55
55
56
57
57
60
60
61
61
61
61
61
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64
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71
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73
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85
85
85
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91
92
93
93
93
93
93
95
96
98
100
Cap tulo dcimo

Dispensador
Esquema y fotografa del dispensador
Propsito del dispensador
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo undcimo
Espectrofotme tro
Fotografas del espectrofotmetro
Propsito del equipo
Compon entes del espectrofotmetro
Mantenimiento del espectrofotmetro
Buenas prcticas de uso del espectrofotmetro
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo duodcimo
Autoclave
Fotografa del autoclave
Propsito del autoclave
Funcionamiento del autoclave
Mantenimiento de compon entes especializados
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo decimotercero
Estufa de secado
Fotografas de estufa de secado
Propsito de la estufa
Operacin de la estufa
Control de la estufa
Control de calidad
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo decimocuar to
Incubadora
Fotografas de incubadoras
Controles de la incubadora
Rutinas de mantenimiento y uso de la incubadora
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
101
101
101
102
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104
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107
107
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153
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157
Cap tulo decimoquin to

Microscopio
Otros nombr es del equipo
Fotografas de microscopios
Propsito del equipo
Diagrama del equipo (isomtrico y corte)
Descripcin de fallas potenciales por compon entes
Mantenimiento general del microscopio
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo decimosexto
Pipetas
Fotografa y esquema de pipetas
Propsito de la pipeta
Principios de operacin de la pipeta
Uso de la pipeta
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo decimosptimo
Plato calien te con agitador
Fotografa del plato caliente con agitador
Controles del plato caliente con agitador
Operacin del plato caliente con agitador
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
Cap tulo decimoctavo
Refrigerador
Fotografa del refrigerador
Propsito del refrigerador
Circuito de control refrigerador
Operacin del refrigerador I
Operacin del refrigerador II
Encendido del refrigerador
Definiciones bsicas
Bibliogr afa
159
159
159
159
160
160
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205
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207
TABLA DE ILUSTRACIONES
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
1: Conjun to de equipos para pruebas ELISA

2: Lavador de ELISA
3: Perfiles de los pozos, tcnica de ELISA
4: Esquema de un analizador de pH
5: Clases de electrodos
6: Circuito de control analizador de pH
7: Balanza de resorte
8: Balanza de pesa deslizante
9: Balanza analtica
10: Balanza de plato superio r
11: Balanza de sustituci n
12: Elementos de las balanzas electrnicas
13: Principio fuerza de compensacin
14: Clasificacin de balanzas por grupos de exactitud
15: Control balanza analtica
16: Bao de Mara
17: Resistencias de inmersin y externa
18: Control de bao de Mara
19: Cabina de segurid ad biolgi ca
20: Concepto de fuerza centrfuga
21: Destilador de agua
22: Esquema diluidor
23: Control del diluidor
24: Jeringa y dispensador
25: Dispensador
26: Elementos dispensadores
27: Interaccin de la luz con la materia
28: Fenmeno de absorbancia
29: Compon entes del espectrofotmetro
30: Reflexin de la luz
31: Rejilla de difraccin
32: Circuito de vapor del autoclave
33:
Espacios
requeridos
por
el
autoclave
34:
Acometida
aire
comprimido
35:
Acometida
de
vapor
36:
Generador
de
vapor
37:
Control
electrnico
de
la
estufa
38:
Circuito
elctrico
de
la
estufa
39:
Formas
de
transferencia
de
calor
40:
Control
de
incubadora
41:
Lente
positivo
(convergente)
42:
Funcionamiento
del
lente
43:
Corte
del
microscopio
44: Clases de pipetas
16
24
25
33
34
34
44
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130
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152
162
160
178
161
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
Ilustracin
45: Fases del uso de la pipeta

46: Desensamble de una pipeta
47: Control plato caliente con agitador
48: Motor de induccin
49: Circuito de refrigeracin
50: Circuito de control del refrigerador
51: Control Banco de sangre
52: Control refrigerador ultrabaja temperatura
180
182
190
192
196
199
200
204
12
INTRODUCCIN
Este manual ha sido desarroll ado con el fin

de apoyar al personal que labora en los laboratorios de salud, sean clnicos o de investigacin, en los campos de la salud pblica, salud
animal, salud ambiental, control de alimentos y control de medicamentos, en la comprensin de los requerimientos tcnicos relacionados con la instalacin, uso y mantenimiento de un grupo de equipos que resultan
de gran impor tancia para la realizacin de las
actividades diagnsticas o de investigacin.
No se pretende que los lineamientos inclui- dos
en este manual conviertan a quien lo consulta
en un experto capaz de solucionar cualquier
probl ema que pueda presentarse en el
equipamiento del laboratorio. El desarrollo
alcanzado a nivel tecnolgi co y cientfi- co ha
incorpor ado en los equipos infinidad de
funciones y modos particulares de operacin,
que necesariamente conll evan a impl ementar progr amas que permi tan apor tar los
recursos para mantener dicho equipamiento en
las mejores condiciones de operacin.
Por la diversidad de orgenes, marcas y modelos, solo es posible presentar unas recomendaciones generales, dado que las particulares
se encuentran desarroll adas en los manuales
de uso, mantenimiento e instalacin elaborados por los fabricantes y que deben ser solicitados y exigidos en los procesos de adquisicin por las dependencias y pro fesionales
que tienen bajo su responsabilid ad la incorporacin y la adquisicin de tecnolog a en las
diversas instituciones.
En su desarrollo , el manual ha tomado en
cuenta los siguientes aspectos:
1. Cada clase o familia de equipo incluida ha
sido desarrollada en un captulo diferente,
que se ha organizado en orden alfabtico,
de acuerdo con el nombr e que los
identifica.
2. Abarca 18 familias de equipo que han sido seleccion adas, t ratando de cubrir
aquellas de mayor utilizacin en laboratorios de baja o media complejidad tcnica.

3. Busca apoyar a los responsables de la
gestin tcnica en la implementacin
de
los
progr
amas
de
mantenimiento y de gestin de calidad en pro de la salud de la
poblacin.
4. Cada equipo ha sido identificado
con el nombr e que ms comnm
ente se lo conoce. Tambin se han
incluido otros nombres alternos.
5. Se han introducido fotografas o
ilustraciones o una combin acin
de ambas para identificar, sin lugar
a equivocaciones, el tipo de equipo
que se est considerando.
6. Dadas las grandes diferencias en la
complejidad tcnica de las marcas
y modelos existentes, cada tema ha
sido desarroll ado pensando en
equipos bsicos, pero, hasta donde
ha sido posible, incluyen tecnologa de desarrollo reciente.
7. Presenta una breve explicacin
sobre los principales usos o
aplicaciones del equipo en el
laboratorio.
8. Contiene una descripcin bsica de
los principios con los que operan los
distintos equipos. En consecuencia,
hay explicaciones basadas en
principios o leyes
fsicas y/o
qumicas que el lector interesado
puede o debera pro fundi zar por
su cuenta.
9. Se incluye una descripcin de los
servicios
o
instalaciones
que
requieren los distintos equipos para
poder funcionar, poniendo n- fasis
en los aspectos elctricos y en los
requisitos que en cada ambiente
podran facili tar su correcta

instalacin y operacin.
10. Describe las rutinas bsicas de

mantenimiento requeridas por los
equipos, que se han clasificado
segn la frecuencia con que deben
realizarse: diarias, semanales,
13
mensuales, semestrales, anuales y eventuales. Dichas rutinas se han numerado y

se presentan siguiendo un orden que trata
de ajustarse a la realidad. Mayor pro- fundid
ad y especificidad se pueden encontrar en
los manuales editados por los fabricantes.
11.Para cada equipo se ha desarroll ado una
tabla que procura condensar los probl emas que con mayor frecuencia lo afectan,
identificando sus posibles causas y las acciones que deberan realizarse para solucionar el probl ema.
12.En cada captulo se ha introducido una lista de definiciones bsicas que ayuda a
comprender el signi ficado de algunos trminos utilizados.

13.Al final se ha incluido la bibliogr afa
utilizada para desarroll ar los
distintos temas.
Tambin, en el caso de algunos equipos, se
han introducido temas adicionales relacionados con la calibracin, el control de calidad o la
forma en que se encuentran diseados y
presentados los controles.
El presente manual ha sido desarroll ado por
la Organizacin Panamericana de la Salud,
para apoyar los progr amas de mejoramiento
de la calidad que promu eve en los laboratorios de la Regin.
14
CAPTULO 1
Analizador de ELISA
Cdigo (s)
ECRI
16-979
ANALIZADOR
DE
Denominacin (es) ECRI

Lectoresde microplacas fotomtricos
ELISA
El analizador de ELISA es un espectrofotmetro especializado, diseado para efectuar la

lectura de los resultados de una tcnica que se
utiliza para determinar la presencia de anticuerpos o antgenos especficos presentes en
una muestra. La tcnica se basa en la deteccin de un antgeno inmovilizado sobre una
fase slida, mediante anticuerpos que, directa
o indir ectamente, produ cen una reaccin cuyo
producto puede ser
ledo
por el
espectrofotmetro. Se le conoce tambin con el
nombr e de Lector de ELISA. La palabra ELISA
es el acrnimo de las palabras en lengua
inglesa Enzyme-Linked Immunosorbent Assay.
FOTOGRAFA DE ANALIZADOR DE ELISA
PROPSITO DEL ANALIZADOR DE ELISA

El analizador de ELISA se utiliza para leer el resultado de las pruebas efectuadas, utilizando la
tcnica de ELISA, la cual tiene aplicacin directa
en inmunolog a y en serolog a; permite confirmar la presencia en el organismo de
anticuerpos o antgenos de un agente
infeccioso, vacunal o autoanticuerpos artritis
reumatoide, por ejemplo, entre otras
aplicaciones.
PRINCIPIOS DE OPERACIN
El analizador de ELISA es un espectrofotmetro especializado. A diferencia de los espectrofotmetros convencionales que permi ten
efectuar lecturas en un rango amplio de longitudes de onda, este dispone de fil tros o rejill as de difraccin que limi tan el rango de
longi tudes de onda a aquellas que se utilizan
en la tcnica ELISA, la cual generalmente se
realiza con longi tudes de onda comprendidas
entre los 400 y los 750 nm nanmetros. Algunos analizadores operan en el rango ultravioleta y pueden efectuar anlisis entre los
340 y los 700 nm. El sistema ptico utilizado
por muchos fabricantes utiliza la fibra ptica
para llevar la luz hasta los pozos de la placa,
donde se encuentra la muestra bajo anlisis.
La luz que atraviesa la muestra tiene un dimetro que vara entre 1 y 3 mm. Un sistema
de deteccin recibe la energa lumnica, proveniente de la muestra, la ampli fica, determina la absorbancia y, a travs de un sistema de
lectura, la convierte en datos que permi ten
interpretar el resultado de la prueba. Tambin hay analizadores de ELISA que emplean
sistemas lumnicos de doble haz. Las
muestras del ensayo de ELISA se colocan en
placas de diseo especial, las cuales disponen
de un n- mero definido de pozos o vasos, en
los cuales se lleva a cabo el procedimiento o
ensayo. Son comunes las placas de 8 column
as por 12 filas, con un total de 96 pozos.
Tambin existen placas con un mayor
nmero de pozos. Las hay de 384 pozos y la
tendencia actual busca aumentar el nmero
de pozos, y reducir la cantidad de reactivos
y el volumen de las muestras requeridas. La
ubicacin de los sensores pticos en el
analizador de ELISA vara dependiendo de
los fabricantes. Algunos los colocan sobre la
placa por tamuestras, mientras que otros los
ponen directamente bajo los pozos de la
placa.
15
En la actualidad, los analizadores de ELISA

disponen de controles regulados por microprocesadores, interfases de conexin a sistemas de informacin, progr amas de control de
procesos y control de calidad que, a travs del
compu tador, permi ten la automatizacin
completa de los ensayos requeridos.
1. Un analizador de ELISA.
2. Un lavador de ELISA (captulo 2).
3. Un sistema dispensador de lquidos. (Pueden usarse pipetas mul ticanal).
4. Una incubadora especializada para las placas.
Equipos requerido s para efectuar ensayos de ELISA

Para desarrollar la tcnica de ELISA se requiere
disponer al menos de los siguientes equipos:
La ilustracin que se presenta a continuacin

da una idea de la forma en que se encuentran
interrelacionados los equipos mencionados.
Ilustracin 1: Conjun to de equipos para pruebas ELISA
Fases mecnicas de un ensayo utilizando la

tcnica de ELISA
Uso de equipos
Cuando se realiza una prueba de ELISA, generalmente se siguen estos pasos:
1. Utilizando el lavador de ELISA o microplacas,
se efecta un primer lavado de la placa.
2. Mediante el dispensador de lquidos o las
pipetas mul ticanal, se llenan los vasos o

pozos de las placas con las soluciones preparadas para ser utilizadas en el ensayo.
3. A continuacin, se coloca la placa en
la incubadora donde, a temperatura
controlada, se lleva a cabo un conjun
to de reacciones.
Las etapas 1, 2 y 3 se pueden repetir varias veces dependiendo del ensayo, hasta que se logre que las muestras colocadas en las placas
hayan terminado sus reacciones.
16
Analizador de ELISA
4. Finalmente, cuando se han completado las

reacciones qumicas, se lleva la placa al
analizador de ELISA y se efectan las lecturas que permi ten emitir un diagnstico.
de color en la solucin, brind ando un medio para medir la cantidad de conjug ado
que a la vez dir cunto complejo antgeno-anticuerpo est presente. Otro perodo
de incubacin permi tir que esta reaccin
tenga lugar.
Fases qumicas de la tcnica de ELISA

Se presenta a continuacin un breve resumen
de cmo funciona la tcnica de ELISA, desde
el pun to de vista qumico1.
1. Se recubren los pozos de una placa con
anticuerpos o antgenos.
2. Se aaden las muestras, controles y estndares a los pozos de la placa y se incuban
a temperaturas que oscilan entre la temperatura ambiente y 37 C, por un perodo
de tiempo determinado, segn caractersticas de la prueba. Durante la incubacin,
una parte del antgeno de la muestra se
une al anticuerpo del recubrimi ento de la
placa, o el anticuerpo de la muestra se une
con el antgeno ubicado en el recubrimiento de la placa, en funcin de su presencia y cantidad en la muestra analizada.
3. Despus de la incubacin, las entidades no
unidas antgenos o anticuerpos se lavan
y se retiran de la placa, utilizando el lavador de ELISA que utiliza un buffer de lavado adecuado.
8. Cumplido el tiempo de incubacin, se

aade un reactivo para detener la
reaccin sustrato-enzima y prevenir
cambios adicionales de color.
Generalmente este reactivo es un
cido diluido .
9. Finalmente, se efecta la lectura de la
placa en el analizador de ELISA. Los
valores de los resultados se usan para
determinar
las
cantidades
de
antgeno o anticuerpo especficos
presentes en la muestra.
Algunos de los pozos en la placa se destinan
para colocar estndares y controles. Los
estndares permiten definir los pun tos de corte
(cut off). Los controles son cantidades
conocidas que se usan para medir el xito del
ensayo, evaluando los datos recibidoscontra
lasconcentraciones establecidas para cada
control. El proceso antes descrito es comn,
aunque muchas pruebas de ELISA tienen
variantes.
SERVICIOS REQUERIDOS
4. A continuacin, se aade un anticuerpo secundario, denomin ado el conjugado, el
cual tiene una enzima que reaccionar
con un sustrato para producir un cambio
de color.
5. Se inicia entonces un segundo perodo de
incubacin, durante el cual el conjug ado
se unir al complejo antgeno-anticuerpo
en los pozos de la placa.
6. Despus de la incubacin, se realiza un nuevo lavado para retirar de los pozos de la placa cualquier vestigio del conjug ado no
unido .
7. Se aade un sustrato. La enzima reaccionar con el sustrato y causar un cambio
Para que el analizador de ELISA opere correctamente, es necesario veri ficar los siguientes
pun tos:
1. Un ambiente limpio , libre de polvo.
2. Una mesa de trabajo estable. Lo recomendable es que la misma est alejada de
equipos que generen vibraciones centrfugas, agitadores, que tenga un tamao
adecuado que permi ta ubicar, al lado del
analizador de ELISA, los equipos compl ementarios requeridos para efectuar la tcnica en mencin: lavadores, incubadora,
dispensador y compu tador con perifricos.
3. Una fuente de suministro elctrico de
acuerdo con las normas y estndares
implementados en el pas. En los

pases americanos se
1
Explicaciones ms detalladas deben ser consultadas en li teratura especializada.
17
utilizan por lo general voltajes de 110 V y

frecuencias de 60 Hz.
Calibracin del analizador de ELISA

La calibracin de un analizador de ELISA es
un proceso especializado que debe realizar
un tcnico o ingeniero debidamente entrenado, siguiendo las instrucciones que para el
efecto brind a cada fabricante. Para efectuar la
calibracin se requiere disponer de un juego
de fil tros grises, los cuales se encuentran mon
tados en una placa de igual geometra a las
utilizadas para efectuar los anlisis. Los fabricantes suministran dichos fil tros y pueden
ser utilizados para realizar calibraciones a
cualquier longi tud de onda de las que utiliza el
equipo .
Los fil tros de calibracin disponen de al menos tres valores de densidad ptica, preestablecidos dentro de los rangos de medicin; uno
bajo, uno medio y el ltimo, un valor al- to.
Para efectuar la calibracin se realiza el siguiente proceso:
1. Colocar el filtro de calibracin en el equipo .
2. Efectuar una lectura completa con el fil tro
de calibracin. Verificar si se presentan diferencias en las lecturas obtenidas de canal a canal. Si es as, invertir el fil tro (180) y
repetir nuevamente la lectura para descartar que las diferencias puedan ser atribuibl es al fil tro en s. Por lo general, se
acepta que el instrumento no requiere calibracin, si se encuentra ajustado en dos
longi tudes de onda.
3. Verificar si el lector est descalibrado. Si es
as, proceder a la calibracin, siguiendo la
rutina definida por el fabricante, veri
ficando especialmente que la linealidad
de las lecturas se mantenga lo ms
rigurosamente posible.
4. Si no se dispone de fil tro de calibracin,
veri ficar la misma colocando una solucin
de color en los pozos de una placa y efectuando en seguida una lectura completa.
Luego invertir la placa 180 y efectuar una
nueva lectura. Si ambas lecturas presentan
valores promedio idnticos en cada fila, el

analizador se encuentra calibrado.
5. Verificar si el desplazamiento de la
placa se encuentra calibrado, column
a por column a. Colocar una placa
vaca y efectuar las lecturas. Si no se
observan diferencias medias entre
las lecturas de column a a column a
de la primera a la ltima, podra
asumirse que el avance se encuentra
calibrado.
RUTINAS DE MANTENIMIENTO
Las rutinas que se describen a continuacin
estn enfocadas exclusivamente al analizador
de ELISA. El mantenimiento del lavador de
ELISA est tratado en el captulo correspondi
ente.
Manteni mien to bsico

Frecuencia: Diaria
1. Revisar que los sensores pticos de cada
canal estn limpios. Si se detecta suciedad,
limpi ar con un pincel la superficie de las
ventanas de los emisores de luz y de los
sensores.
2. Confirmar que el sistema de ilumin acin
est limpio .
3. Verificar que la calibracin del analizador
es adecuada. Cuando se inicien las operaciones diarias, permi tir que el analizador
se caliente durante 30 minu tos. A continuacin, realizar una lectura en blanco y
luego leer un mdulo lleno de sustrato.
Las lecturas deben ser idnticas. Si no lo
son, invertir el mdulo y repetir la lectura,
a fin de determinar si la desviacin se origina en el mdulo o en el lector.
4. Examinar el avance automtico de la placa. El mismo debe ser suave y constante.
Manteni mien to preven tivo

Frecuencia: Trimestral
1. Verificar la estabilid ad de la lmpara. Usar
el fil tro de calibracin, efectuando lecturas
con intervalos de 30 minu tos o una

misma
18
Analizador de ELISA
placa. Comparar las lecturas. No deben

existir diferencias.
2. Limpiar los sistemas pticos de los
detectores y los sistemas de ilumin acin.
3. Limpiar el mecanismo de avance de la placa.

4. Verificar la alineacin de cada pozo con los
sistemas emisores y detectores de luz.
Tabla de solucin de problemas
PROBLEMA
El analizador
brindalecturassinsentido.
Las lecturas del analizador varan
de fila en fila.
El analizador presenta
absorbancias altas.
CAUSA PROBABLE
Lmpara de iluminacin fuera de
servicio.
Reemplazar la lmpara por otrade

lasmismas caractersticasque la original.
Sensorespticos sucios.
Limpiar los sensores.
Lentes o elementos del sistema de

iluminacin sucios.
Limpiar lentesdel sistemade iluminacin.
Falta de calibracin de uno o ms

canales.
Verificar la calibracin de cada uno de

los canales.
Problemascon los blancos.
Efectuar una lectura en vaco y

compararla contra la lectura del blanco.
Si el sistema lee bien, deber
encontrarse una lectura de densidadpticasimilar.Caso contrario, el
analizador est descalibrado.
Revisar que el TMB sea incoloro y la
preparacin adecuada.
Reactivos usados y/o preparados

de forma incorrecta.
Contaminacin con otrasmuestras.
Filtro de longitud de
ondaincorrecto.
Lavado insuficiente o
ineficiente.
Tiempo de incubacin muy largo o
temperatura muy alta.
El analizador presenta absorbancias

bajas.
REMEDIO
Repetir el ensayo verificando la

marcacin, el lavado y la forma de usar
la pipeta.la longitud de onda
Verificar
recomendada para el ensayo. Ajustar si
esdel caso.
Confirmar
el mtodo de lavado utilizado.
Em- plear unensayodecontrol
decalidadapropiado.
Revisar
tiemposy temperatura de
incubacin.
Dilucin de muestras mal

procesada.
Falta algn reactivo.
Revisar proceso
dedilucindemuestras.
Verificar que el ensayo se realiza de
acuerdo al procedimiento establecido.
Tiempo de incubacin muy corto o

temperatura muy baja.
Revisar temperaturas y tiempos de

incubacin.
Los reactivos no se encuentran a

la temperatura ambiente.
Comprobar que los reactivos estabilicen

su temperatura con la del ambiente.
Lavadoexcesivo de la placa.
Ajustar el proceso de lavadoa lo indicado

por el fabricante del ensayo.
Filtro de longitud de
ondaincorrecto.
Verificar el filtro de longitud de

ondaseleccio- nado. Utilizar el
recomendadopara
ensayo.
Revisar
losreactivoselutilizados.Comprobar
Reactivos usados o preparados de

forma incorrecta.
las diluciones.
Falta algn reactivo.
Verificar que el ensayo se realiza de

acuerdo al procedimiento establecido.
La placapresenta rayaduras en el
fondo de los pozos.
Preparar unanueva placay repetir el

ensayo.
19
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
Clase de placamal seleccionadao
pla- casucia.
Verificar el tipo de placa utilizada.

Preparar unaplacanueva y repetir el
ensayo. la forma de lavar la placa.
Cambiar
Se hansecado los pozos de la

placa.
Placa mal colocada en el lector o
mal sentada.
Revisar la colocacin de la placa. Repetir

la lectura.
Humedado huellas digitalesen el

fondo exterior de la placa.
Verificar que el fondoexterior de los

pozos se encuentre limpio.
Cantidadesresidualesdel buffer
delavado en lospozosantesdeaadir
elsustrato.
Las
tabletas del sustrato no
Confirmar la remocin completa del buffer

de lavado.
seencuen- tran completamente

disueltas.
La
tableta del sustrato ha sido
conta- minadapor humedad o
pinzasmetlicaso
no
seencuentra
completa.
La
posicin
del
pozo
El analizador presenta variaciones

inesperadas en las lecturas de
densi- dadptica.
REMEDIO
blancopodra
habersidocambiaday
unacantidadincorrecta en
hasido
La
lmpara del analizador
situacin inestable.
Verificar que las tabletas se disuelvan

correctamente.
Evidenciar integridady manejo de las
tabletas del sustrato.
Verificar la carga correcta de la
placa.
Reemplazar la lmpara por otrade
lasmismas caractersticasque la original.
La lectura del analizador presenta

un aumento gradual o un
decremento de columna en
columna.
Lecturas de densidad ptica muy
bajas comparadas con loscriterios
de la evaluacin ptica del
operador.
Calibracin inadecuada del motor

de avancede la placa.
Calibrar el avancepara que en cada

paso los pozos queden exactamente
alineados con el sistemaemisor de luz.
La lectura seest realizandocon

luzde longitud de ondadiferente
a la requerida por el ensayo.
Verificar con qu longitud de onda se

est efectuandola lectura.Si esdel caso,
ajustar la longitud de onday repetir la
lectura. que se ha seleccionado el filtro
Verificar
de longitud de ondarecomendado.
Baja reproducibilidad.
Homogeneidadde la muestra.
Mezclar los reactivos antes de usarlos.

Permitir queseequilibren con la
temperatura que
ambiente.
Comprobar
las puntas de la pipeta
Procedimiento errneo en el uso

de la pipeta.
Lector descalibrado.
son cambiadas entre las muestras y que

es removido el exceso de lquido en
el exterior.
Revisar
la calibracin. Usar un juego de
control de calidadapropiado.
Lector utilizado sin suficiente

calentamiento.
Reactivos vencidos.
Esperar a que el lector

sehayaestabilizadoen su temperatura de
operacin.
Verificar
las fechas de vencimiento de los
reactivos.
Alta absorbancia del blanco.
Los datos no son transferidos

entre el lector y el
microprocesador.
20
Sustrato contaminado.
Revisar que el TMB sea incoloro y la

preparacin adecuada.
Lavado insuficiente o
ineficiente.
Retirar el buffer despus del lavado.

Revisar que los pozos sean llenados y
aspirados de manera uniformecuandose
lavan.
Verificar
cdigos seleccionados.
El lector y el microprocesador
tienen definidos
diferentescaracteres.
Tasas
de transferencia de
informacin (Baud) diferentes.
Confirmar tasasde transferencia

seleccionadas.
Configuracin de las clavijas de

transmisin/recepcin mal
seleccionada.
Revisar la configuracin de las clavijas.

Debe estar configuradasegnparmetros
definidos por el fabricante.
Analizador de ELISA
PROBLEMA
Haz de luz desalineado.
Identificacin incorrecta de la
muestra.
CAUSA PROBABLE
El analizador presenta fallas en la

deteccin de errores.
DEFINICIONES
REMEDIO
Falla en la interfase del programa

de comunicaciones.
Llamar al servicio tcnico

especializado.
Cable de conexin lectormicroproce- sador mal ajustado.
Revisar conexiones. Ajustar conexiones.
El analizador trasladado o movido

sin las debidas precauciones.

especializado.
La fuente de luz lmpara ha

sido cambiada y su reemplazo no
ha sido instalado y alineado
correctamente. forma inadecuada.
Placacargadade
Verificar montaje y alineacin de la fuente

de luz.
Identificacin incorrecta de la
muestra registradaen el analizador.
El computador falla al indicar los
cdigos de error.
El programaque controla la
activacin
de
lasalarmasy
losmensajesdeadvertencia
presenta fallas o no est validado por el productor.
Diversoscomponentesdel
sistemapre- sentan fallas, como el
sistema de deteccin del nivel de
lquidos.
BSICAS
ELISA. Tcnica desarroll ada para efectuar

anlisis que permi ten determinar si una sustancia se encuentra presente en una muestra.
Se utiliza principalmente en el rea de inmunolog a. La palabra ELISA es el acrnimo de
las palabras en lengua inglesa Enzyme-Linked
Immunosorbent Assay.
Enzima. Protena que sirve de catalizador en
una
reaccin qumica,
acelerando
las
reacciones.
Fluor foro. Molculas que absorben luz a una
determinada longi tud de onda y emiten luz de
una longi tud de onda mayor.
Revisar proceso de identificacin de

lasmuestras. Repetir lectura
efectuandolos ajustes.
especializado.

especializado.
reacciones. El lavador de ELISA utiliza buffers

especiales en los procesos de lavado.
Lector de microplacas. Nombre dado a los
analizadores de ELISA.
Placa de ELISA. Elemento de consumo que se
ha estandarizado para efectuar los anlisis mediante la tcnica de ELISA. Las placas tienen en
general 96 pozos en una configuracin tpica
de 8 filas por 12 columnas. Tambin hay placas
de ELISA de 384 y recientemente se han venido
imponi endo microplacas de hasta 1 536 pozos,
en centros de alta demanda, debido a las economas logradas en insumos y reactivos.
Quimiolu miniscencia. Emisin de luz que
aparece durante una reaccin qumica.
TMB. Sustrato usado con la enzima HRP.
Lavador de ELISA. Equipo que se utiliza para lavar las placas durante las etapas de una
prueba de ELISA, con el fin de remover aquellos compon entes que no se han unido en
las
21
Bibliogra fa
ELISA Automation, Hudson Control Group, AB104A, 2002. (www.hudsoncontrol.com)
Solid Phase Guide, NUNC, Brand Products, Introduction to Solid Phase Techniqu es. ( %20P h
Universal Medical Device Nomenclature System (UMDNS), Product Categories Thesaurus, ECRI,
Zoon, Kathryn, Recommendations to users of medical devices that test for infectious dis- ease ma
22
Codigo (s) ECRI

17-489
LAVADOR DE ELISA
Esta disenado para efectuar las operacio

nes de lavado que se requieren cuando se
utiliza la tecnica de ELISA. El equipo efec
tua el lavado de los pozos que contienen
las placas de ELISA, durante las diferentes
etapas de la tecnica.
podria llegar a intervenir por lo general entre

una y cuatro veces, suministrando buffer de
lavado,agitando y extrayendo, una vez cum
plidos los tiempos programados, los com
puestos que no participaron en las reaccio
nes2. El lavador dispone de dos dep6sitos;
en uno de ellos, se coloca el buffer de lavado,
mientras que en el otro, se recolectan las
sus tancias que se desechan en la tecnica
de ELISA.
FOTOGRAFIA DE LAVADOR DE ELISA1

PRJNCIPIOS DE OPERACION
El lavador de ELISA ha sido diseflado para

realizar las operaciones de lavado que se en
cuentran involucradas en la tecnica de
ELISA. El equipo dispone de al menos los
siguientes subsistemas que varian en diseflo
dependien do del fabricante:
Subsistema de control. Por lo general,
PROPOSITO DEL LAVADOR DE ELISA
El lavador ha sido disenado para proporcio

nar, de forma controlada, los buffers de lim
pieza que se requieren al desarrollar un ana
lisis utilizando la tecnica de ELISA. Asimismo, el
equipo cumple la funci6n de retirar de ca da u
no de los pozos las sustancias que no pa r
ticiparon en la reacci6n. Dependiendo de las
variantes que presente la tecnica, el lavador
es controlado por microprocesadores y

permite programar y controlar las actividades
que de be realizar el lavador como el
numero de ci clos de lavado requeridos3
(1-5), los tiempos de espera, las presiones
de suministro y de ex tracci6n, el tipo de
placa utilizada {96 - 384 pozos); ajusta la
funci6n de succi6n segun la forma del
pozo4 -fondo piano, fondo en V, fondo
redondo o tiras utilizadas-; regula los
volumenes dispensados y/o aspirados,
los tiempos de remojo y agitaci6n, entre
otros.
Subsistema de suministro . Por lo gene

ral,esta compuesto por un dep6sito para la
soluci6n de lavado, u na o varias bom bas,
usualmente de desplazamiento positivo
ti po jeringa y una cabeza dispensadora
que
http:/Nvww.mtxlsi.com/images/FinstrumentsWasherFloat.jpg
Ver explicaci6n breve de la tecnica de ELISA en el capitulo 1, Analizador de ELISA.
3
El numero de operaciones de lavado requeridas depende exactamente de la tecnica que se utilce,aspecto que se
encuen tra explicado en las instrucciones de cada prueba que suministra el fabricante.
2
Si el fondo es piano,la aguja de succi6n es colocada muy cerca a una de las caras def pozo; si es redondeado o en V,se
co loca la aguja de succi6n en el centre def pozo.
23
suministra, a travs de agujas, la solucin

de lavado a los diferentes pozos. La cabeza
suele contar con ocho pares de agujas para
lavar y aspirar los pozos de una misma fila
de la placa de forma simul tnea en la
cabeza confluyen los subsistemas de
suministro y de extraccin. Tambin hay
modelos que disponen de doce pares de
agujas y existen versiones que efectan el
proceso de lavado de manera simul tnea en
todos los pozos de la placa. Algunos
lavadores brind an la posibilid ad de
trabajar con diversas soluciones de limpi eza,
efectuando los cambios de solucin segn
progr ame el operador.
Subsistema de extraccin. Requiere de
un mecanismo de vaco y de un sistema de
almacenamiento para recolectar los fluidos
y desechos retirados de los pozos de las placas. El vaco puede ser propor cionado por
bombas externas o internas. La extraccin
se realiza mediante un conjun to de agujas
mon tadas en la cabeza lavadora/aspiradora. El nmero de agujas vara entre uno y
tres, segn el fabricante y el modelo.
Si se usa una sola aguja, las operaciones de
lavado y extraccin se hacen a travs de
esta
nica aguja. Si se utilizan dos agujas, una se

usa para el suministro de la solucin de
lavado y la otra para la extraccin. Si se
utilizan tres, la primera es para el suministro
de la solucin de lavado, la segunda para la
extraccin y la tercera para controlar
extraer cualquier exceso de volumen
dentro del pozo.
En general la longi tud de la aguja de extraccin es mayor que la longi tud de la aguja de
suministro, con el fin de que pueda avanzar
verticalmente hasta una altura que oscila
entre 0,3 y 0,5 mm del fondo del pozo.
Subsistema de avance. Est compuesto
por un mecanismo que desplaza horizontalmente la cabeza de suministro y extraccin, para poder llegar en la placa de ELISA a cada uno de los pozos; cuando se ha
efectuado el desplazamiento horizontal a
la siguiente f ila, se realiza un movimiento
vertical hacia los pozos, con el fin de dispensar y/o extraer la solucin de lavado.
Hay lavadores que efectan estas operaciones de forma simul tnea.
Se presenta a continuacin una ilustracin en la
que se muestran los subsistemas mencionados.
Ilustracin 2: Lavador de ELISA
24
Lavador de ELISA
La siguiente ilustracin muestra las formas de

pozo ms comunes encontradas en las placas
de ELISA. Cada forma de pozo es adecuada
para un tipo de prueba en particular.
Ilustracin 3: Perfiles de los pozos, tcnica de ELISA
Proceso de lavado
El lavado es una de las etapas que se debe
realizar cuando se efectan anlisis, utilizando
la tcnica de ELISA. Se emplean para el efecto
soluciones especiales. Entre las ms usadas se
encuentra la solucin buffer fosfatada o PBS.
La solucin buffer fosfatada tiene una
estabilid ad de 2 meses, si se la conserva a 4 C.
Se estima que para el lavado de una
microplaca se requiere entre 1 y 3 litros de
solucin. Se estima que en cada pozo se
utilizan 300 l de solucin de lavado por ciclo.
El lavado es una operacin que se puede
realizar manualmente, pero si se tienen demandas altas y si se trabaja con sustancias potencialmente contaminadas, es mejor utilizar
un equipo de lavado automatizado.
Entre los procesos de lavado se destacan los
siguientes:
Aspiracin de arriba hacia abajo. Cuando se inicia la fase de aspiracin, las agujas
se desplazan verticalmente y la aspiracin
se inicia de inmediato; estas entran en el
l- quido ; el proceso contina hasta que
las agujas alcanzan la posicin mxima
inferior, muy cerca del fondo de los
pozos, momento en el que se detienen
para evitar succionar aire que fluira
necesariamente
sobre
las
paredes
laterales interiores de los pozos. Este tipo
de aspiracin previene que corrientes de
aire sequen la pro tena unida sobre la superficie

de los pozos.
Aspiracin
y
dispensacin
simul t- neas. En este tipo de
lavado los sistemas de lavado y
aspiracin funcionan simul tneamente, generando una turbul
encia controlada dentro del pozo
que remueve las sustancias no
unidas durante los tiempos
estimados de reaccin.
Aspiracin desde el fondo de
los pozos. En este sistema, la
aspiracin del fluido con tenido en
los pozos se efecta posicionando
inicialmente
las
agujas
de
aspiracin en una posicin muy
cercana al fondo , iniciando en
seguid a un ciclo de succin que
generalmente es con trolado por t
iempo. Este sistema puede llegar
a aspirar aire si hay di ferencias en los

niveles de llenado de los tanques.
Calibracin del lavador

El lavador de ELISA resulta crtico para garantizar que la tcnica de ELISA funciona de forma apropi ada. Se presentan a continuacin
los lineamientos a tener en cuenta para que el
equipo funcione adecuadamente.
Posicin de las agujas (cabeza de suministro y aspiracin). Se debe veri ficar con
cuidado el ajuste de la posicin horizontal y
vertical respecto de los pozos. Si la placa tiene pozos de fondo plano, se debe verificar
que la aguja de aspiracin se encuentre
ubicada
25
muy cerca a la pared del pozo; si el fondo

es redondo o en V, se debe veri ficar que la
aguja de succin se encuentre en el centro
del pozo y, cuando se efecta el movimiento vertical, se mantenga una distancia aguja-fondo del pozo, comprendida entre 0,3 y
0,5 mm. Nunca se debe permi tir que las
agujas toquen el fondo de los pozos, para
evitar interferencias de tipo mecnico entre
la pun ta de la aguja y el fondo del pozo durante la funcin de aspiracin.
Tiempo de aspiracin. Ajustar el tiempo
de aspiracin de forma que resulte adecuado, para que la pelcula de solucin adherida a la pared del pozo pueda fluir hasta el
fondo del mismo. Evitar tiempos demasiado
largos para impedir que se seque el recubrimiento de los pozos. Verificar que las agujas del sistema de succin se encuentren
limpi as (libres de obstrucciones).
Volu men dispensado. Verificar que el volumen dispensado est lo ms cerca posible
del volumen mximo del pozo; confirmar
que todos los pozos se llenen de forma homognea al mismo nivel. Comprob ar que
las agujas dispensadoras se encuentren limpias (libres de obstrucciones).
Vaco. El sistema de succin debe estar graduado de forma adecuada. Si el vaco es muy
alto, puede alterarse la prueba, pues podr
an secarse los pozos y debili tar
considerable- mente la actividad de la
enzima en los pozos, alterando por completo
el resultado de la prueba. La mayora de los
lavadores funcionan bien con un vaco que
oscila entre el 60 y 70 % de la presin
atmosfrica. En algunos lavadores, el vaco
se produce en una bomba externa que opera
como un accesorio del lavador y su
operacin es controlada desde el lavador, lo
que implica que la bomba de vaco opera
nicamente cuando se requiere.
de ELISA han desarrollado procedimientos que

deben ser efectuados de forma regular. Uno de
los controles5 se basa en la utilizacin del reactivo Peroxidasa, el cual se dispensa mediante
una pipeta en los pozos de la placa para ser
ledo a 405, 450 y 492 nm. En seguida los
pozos se lavan y se les aade un sustrato
incoloro
(TMB/H2O2
Tetrametilbenzidina/Perxido
de
hidrg
eno). Cualquier residuo conjug ado hidroli
zar la enzima y el cromg eno cambiar a
color azul. Despus de detener la reaccin
con cido, el TMB se vuelve amarillo. La in
tensidad
del
color
resultante
est
directamente relacionada con la eficiencia
del proceso de lavado.
Para que el lavador de ELISA opere correctamente, se necesita disponer de los siguientes
servicios:
2. Una mesa de trabajo estable. Se aconseja
que la misma est alejada de equipos que
generen vibraciones centrfugas, agitadores, que tenga un tamao adecuado para
que permi ta ubicar, al lado del lavador de
ELISA, los equipos complementarios requeridos para efectuar la tcnica en mencin: analizador, incubadora, dispensador
y compu tador con perifricos.
3. Una toma elctrica con polo a tierra en
buen estado, conectada a una acometida
que cumpla con las normas y estndares
elctricos implementados en el pas o el laboratorio. En los pases americanos se utilizan generalmente voltajes de 110 V y frecuencias de 60 Hz.
Verificacin del proceso de lavado
Para verificar si el proceso de lavado se realiza
de acuerdo con las especificaciones exigidas
por la tcnica de ELISA, los fabricantes de
pruebas
Las rutinas que se describen a continuacin

estn enfocadas exclusivamente al lavador de
ELISA. El mantenimiento del analizador de ELISA est tratado en el captulo correspondiente.
Procedimiento desarrollado por PANBIO, ELISA Check Plus, Cat. N E-ECP01T.
26
Lavador de ELISA
Mantenimien to preven tivo

Mantenimien to bsico
Frecuencia: Diaria
1. Verificar el volumen dispensado.
2. Comprob ar la uni formid ad del llenado.
3. Veri f icar la eficiencia del subsistema de
aspiracin.
4. Confirmar la limpi eza de las agujas de suministro y extraccin.
5. Limpiar el lavador con agua destilada despus de haberlo utilizado, para remover
cualquier vestigio de sal en los conductos
de los subsistemas de suministro y extraccin. Las agujas pueden mantenerse sumergidas en agua destilada.
1. Desensamblar y limpi ar los conductos y

conectores. Verificar la integridad de los
mismos. Si de detectan fugas o vestigios
de corrosin, ajustar y/o reemplazar.
2. Verificar la integridad de los compon entes
mecnicos. Lubricar de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
3. Comprob ar el ajuste de cada uno de los
subsistemas. Calibrar de acuerdo a las recomendaciones del fabricante.
4. Confirmar la integridad del conector elctrico y el cable de interconexin.
5. Verificar la integridad del fusible, y que
sus pun tos de contacto estn limpios.
6. Verificar la limpi eza del cuerpo del lavador. Si es del caso, limpi ar las superficies
exterior es con una pieza de tela humedecida, con un detergente suave.
Nota: Personal tcnico debidamente capacitado debe realizar el mantenimiento de

sistema de control. Si se requiere, debe
llamarse al fabricante o representante.
PROBLEMA
Al terminar el lavado quedan
residuos de la solucin utilizada en
los pozos.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
El sistema de extraccin del

lavador presenta fallas.
Verificar si el sistema de vaco funciona a

la presin adecuada.
Losconductos del sistemade vaco

son de dimetro diferente al
recomendado.
La
lnea de succin presenta
Comprobar el dimetro de los conductos

que recomiendael fabricante.
obstrucciones.
Verificar que las lneasde vaco

seencuentren limpias.
El recipiente para almacenar el

desperdicio seencuentra lleno.
Confirmar el nivel del recipiente

dedesperdicio.
El filtro de la lnea seencuentra

hmedo o bloqueado.
Verificar el estadoe integridaddel filtro del

sistemade succin.
La punta de la pipeta no est

colocada y no llega hasta el
fondode
Se
utiliz los
unapozos.
microplaca diferente
Examinar la colocacin de las puntas en

la pipeta.
en el ensayo.
Verificar el tipodeplacaque requiereel

ensayo.
El lavador no ha sido
purgadoadecua- damente.
Revisar el proceso de purga.
El operador no ha seguido las

instruc- cionesdel fabricante
correctamente.
Se
coloc la placaen el lavador,
Examinar el proceso recomendado por el

fabricante. Efectuar los ajustes
requeridos.
Revisar
lacolocacinde laplacaen el
sin la alineacin correcta.
lavador.
27
PROBLEMA
El ciclo de lavado se desarrolla de
forma inadecuada.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Se agot la reserva de la solucin

de lavado.
Examinar
el
recipiente
de
almacenamiento de la solucin de
limpieza. Reponer el volumen faltante.
El lavador no fue purgado

adecuadamente al inicio del ciclo
de trabajo.
Limpiar
adecuadamente
para
homogeneizar la humedaden cada
unode
suscomponentes
y
que
seeliminen
las
burbujas
de
aire.
Verificar los volmenesdesolucin
El volumen dispensadodesolucinde
lavadohasidoprogramadoerrneament
La
placa fue colocada de forma
requeridos para cada tipode pruebay

cada tipodelaplaca.
Comprobar
correcta instalacin de la
incorrecta en el lavador.
placa en el lavador.
Laalturade trabajo fuemal

seleccionada.
Revisar la altura de trabajo

recomendadapa- ra cada tipo de placa.
Las placas utilizadas son diferentes

a las recomendadas por el
fabricante.
No
se mantienen los niveles de
Verificar que las placas utilizadas sean

completamente compatiblescon el
lavador.
fluido adecuadoen los pozos.

El tubo desuministro de la
solucin de lavado no es del
dimetro ni del espesor definido
por el fabricante.
Lapresinesinsuficiente
para
entregar la cantidad adecuadade
solucin de lavado.
El recipiente de lavado presenta
crecimiento de hongos o
bacterias.
El sistemano se usa
frecuentemente.
No se utiliza un procedimiento de
control adecuado(desinfeccin).
Los tubos y conectores no se
cambian con la frecuencia
requerida. Lasolucinde
lavadosehacontaminado.
No se ha efectuado el
mantenimiento de acuerdo a la
programacin.
DEFINICIONES BSICAS
Bomba de desplazamien to positivo. Dispositivo conformado por un mbolo que se
desplaza a lo largo de un cilindro . El mecanismo es similar al que presenta una jering a. Est dotado de un conjun to de vlvulas para
controlar los flujos hacia y desde la bomb a.
Buffer. Solucin que mantiene un valor constante y conocido de pH a una temperatura
dada.
PBS. Una de las soluciones que se utiliza para efectuar las operaciones de lavado en las
Revisar lasespecificacionesdel
fabricante.Co- rregir si esdel caso.
Revisar el sistemade suministro y
losconductos de suministro. Puede
haber una obstruccin en la lnea de
llenado.
Revisar losprocedimientos usados para
impedir el crecimiento de hongos o
bacterias.la frecuencia de cambio sugerida
Verificar
por el fabricante y/o por el departamento
tcnico. los procedimientos utilizados
Confirmar
en la preparacin y manejo de la
solucin de lavado, a fin dedeterminar
la causa de lacontami- nacin y
eliminarla.
Revisar las fechas previstas para efectuar
el mantenimiento. Informar a los
responsables.
pruebas de ELISA. PBS es el acrnimo de

Phosphate Buffer Solution. Est compuesto
por las siguientes sustancias: NaCl, KCl, NaHPO42H2O y KH2SO4. Las casas productoras
suministran los boletines tcnicos que
indican las propor ciones e instrucciones de
cmo pre- pararse. En general se mezcla una
parte de PBS, con 19 partes de agua desioni
zada.
Placa (de ELISA). Dispositivo de dimensiones
estandarizadas diseado para colocar las
muestras que requieren ser analizadas
mediante la tcnica de ELISA. En general
existen disposiciones de 96, 384 y 1 536
pozos. Se fabrican en plsticos
como
poliestireno y polipropil eno.
28
Lavador de ELISA
Existen tambin placas que han recibido tratamientos especiales para facili tar la realizacin de pruebas.
TMB/H2O2. (Tetrametilbenzidin a/Perxido de
hidrg eno). Reactivo que se emplea para veri ficar la calidad del lavado de los pozos utilizados en la tcnica ELISA.
Bibliogra fa
ELISA Check Plus, Panbio, Cat. N E-ECP01T, Brisbane, 2004. ( fo/E-ECP01T.pd f)
Good technique for ELISA Assay, GTI, Inc.
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29
30
Cdigo (s)
ECRI
15-164

Medidoresde pH
equilibr a mediante
bicarbonato
ANALIZADOR DE pH
la liberacin de
El analizador de pH se utiliza para determinar

la concentracin de iones del gas hidrg eno
[H+] en una disolucin. Este equipo permite
realizar mediciones de la acidez de una
solucin acuosa, siempre que el mismo sea
utilizado de forma cuidadosa y se ajuste a
procedimientos plenamente comprob ados. A
los analizadores de pH se les denomin a,
adems, pHmetros, monitores de pH o
potencimetros.
PROPSITO
DEL
EQUIPO
El analizador de pH es un instrumento de uso

comn en cualquier campo de la ciencia
relacionado con soluciones acuosas. Se utiliza
en reas como la agricultura, el tratamiento y
puri ficacin de agua, en procesos industriales
como los petroqumicos, fabricacin de papel,
alimentos,
metalmecnica,
farmacia
e
investigacin y desarrollo , entre otros. En el
laboratorio de salud, las aplicaciones del
instrumento estn relacionadas con el control
de medios de cultivo, controlar y/o medir la
alcalinidad o acidez de caldos y buffer. En
equipos especializados de diagnstico de
laboratorio, se usan los mismos principios utilizando microelectrodos para medir la acidez o
alcalinidad de los compon entes lquidos de la
sangre, en donde la sustancia ms impor tante
es el agua que contiene gran cantidad de sales
y sustancias orgnicas disueltas. El pH del
plasma sanguneo es una de las caractersticas
que permite evaluar y determinar el estado de
salud de un paciente; su valor vara
normalmente en el plasma entre 7,35 y 7,45.
Dicho valor est relacionado con el
metabolismo del paciente, proceso en el cual
ocurre multitud de reacciones que resultan
inherentes al proceso vital, en las cuales se
producen y eliminan cidos y bases que, en
condiciones normales, se mantienen en
equilibrio . Los cidos liberan constantemente
iones [H+] que el organismo neutraliza o
FOTOGRAFAS Y ELEMENTOS DEL

ANALIZADOR DE pH
Fotografa
Elemento
Analizador de pH con brazoportaelectrodoy electrodo
1. Brazoportaelectrodoy electrodo
2.Transformador
3. Control ajuste temperatura
4. Controlesde calibracinCal 1 y Cal 2
5. Control selector de funcionesStand by, mV, pH
iones
de
[HCO ]. El organismo mantiene el

equilibrio acido-bsico a travs de los
riones, rganos en loscualesse
elimina cualquier exceso que se presente. Es una de lascaractersticas que
CAPTULO 3
Analizador de pH
vara 3de- pendiendo de factores como la edad o

el estado de salud del paciente. Se presentan
a continuacin los valores tpicos de pH de
algunos fluidos corpor ales.
Tabla 1: Valoresde pH de algunos fluidos orgnicos
FLUIDO
Fotografa
Elemento
Electrodo de pHy brazoportaelectrodo
El analizador de pH mide la concentracin de
iones [H+], utilizando un electrodo sensible a los
iones. En condiciones ideales dicho electrodo
debera responder ante la presencia de un
nico tipo de in, pero en la realidad siempre
se presentan interacciones o interferencias
con iones de otras clases presentes en la
solucin. Un electrodo de pH es generalmente un electrodo combin ado, en el cual se
encuentran integrados un electrodo de referencia y un electrodo de vidrio , en una misma
sonda. La parte inferior de la sonda termina en
un bulbo redondo de vidrio delgado. El tubo
interior contiene cloruro de potasio saturado
(KCl), invariable y una solucin 0,1 M de cido
clorhdrico (HCl). Tambin, dentro
Bilis
VALOR DE
7,8pH
8,6
Saliva
6,4 6,8
Orina
5,5 7,0
Jugo
gstrico
Sangre
1,5 1,8
31
7,35 7,45
del tubo interior, est el extremo del ctodo del

electrodo de referencia. El extremo an- dico
se envuelve as mismo en el exterior del tubo
interno y termina con el mismo tipo de
electrodo de referencia como el del tubo interno. Ambos tubos, el interior y el exterior,
contienen una solucin de referencia, pero
nicamente el tubo exterior tiene contacto con
la solucin del lado externo del electrodo de
pH, a travs de un tapn poroso que acta
como un puente salino.
Dicho dispositivo se compor ta como una celda galvnica. El electrodo de referencia es el
tubo interno de la sonda analizadora de pH,
el cual no puede perder iones por interaccin
con el ambiente que lo rodea, pues como referencia debe permanecer esttico invariable durante la realizacin de la medida. El
tubo exterior de la sonda contiene el medio
al que se le permi te mezclarse con el
ambiente externo. Como resultado de lo
anterior, este tubo debe ser llenado
peridicamente con una solucin de cloruro
de potasio (KCl) para reponer la capacidad
del electrodo que se in- hibe por prdida de
iones y por evaporacin.
El bulbo de vidrio en la parte inferior del
electrodo de pH que acta como elemento
de medicin est recubierto, tanto en el exterior como en el interior, con una capa de gel
hidratado. Los cationes metlicos [Na+] se difunden en el gel hidratado fuera del vidrio y
dentro de la solucin, mientras que los iones
[H+] de la solucin se difunden dentro del gel
hidratado. El gel hidratado es el que hace
que el electrodo de pH sea un electrodo selectivo de iones. El in [H+] no cruza a travs
de la membrana de vidrio del electrodo de
pH, es el in sodio [Na+] el que cruza y permite un cambio de la energa libr e. Cuando un
in se difunde de una regin de actividad a
otra, se presenta un cambio en la energa libre y esto es lo que mide el analizador de pH.
Una breve explicacin de la teora sobre la
cual se basa el funcionamiento de los electrodos se incluye en el anexo ubicado al final del
captulo.
32
http://www.umd.umich.edu/casl/natsci/slc/slconline/PHM/select.html
Analizador de pH
ESQUEMA DE UN ANALIZADOR DE pH
Ilustracin 4: Esquema de un analizador de pH
COMPONENTES
Un analizador de pH dispone generalmente de
los siguientes compon entes:
1. Un instrumento que contiene los circuitos, los controles, los conectores y las
pantallas o escalas de medicin. Dentro de
los compon entes ms impor tantes del
mismo, se encuentran los siguientes:
a) Un interrup tor de encendido /apagado. No
todos los analizadores de pH disponen de
un interrup tor de encendido y apagado.
Algunos simplemente disponen de un
cable con un enchufe que permi te conectarlo a una toma elctrica adecuada.
b) Control de temperatura. Este control
permi te realizar los ajustes relacionados
con la temperatura de la disolucin a la
cual se realiza la medicin del pH.
c) Controles de calibracin. Dependiendo del
diseo, los analizadores de pH pueden
disponer de uno o dos botones o diales de
calibracin. Normalmente se identifican
con las letras Cal 1 y Cal 2. Si el analizador

de pH se calibra con una sola solucin, se
utiliza el dial Cal 1 previendo que el dial Cal
2 se encuentre graduado al 100 %. Si el
analizador de pH permi te el uso de calibr
aciones de dos pun tos, se deber disponer de dos soluciones de pH conocido
que abarquen el rango de pH que ser
medido . En este caso se utilizan los dos
con troles (Cal 1 y Cal 2). En casos especiales debern efectuarse calibr aciones de t
res pun tos (utilizando t res soluciones de
pH conocido).
d) Selector de funciones. Las funciones
in- cluidas en el control en mencin,
generalmente, son:
I. Modo Stand by (0). En esta posicin los
electrodos se encuentran pro tegidos de corrientes elctricas. Es la posicin utilizada para mantener almacenado el equipo .
II. Modo pH. En esta posicin el equipo es- t
en capacidad de realizar las mediciones de
pH, previas a los procedimientos de calibracin requeridos.
III. Modo milivoltios mV. En esta posicin el
33
equipo est en capacidad de realizar lecturas de milivoltios.

IV. Modo ATC. Modo de ajuste automtico
de la temperatura cuando se mide el pH
en soluciones cuyas temperaturas varan.
Esta funcin requiere el uso de una sonda
especial. No todos los analizadores de pH
disponen de este control.
2. Un electrodo de combinacin. Este

dispositivo debe ser almacenado en
agua
destilada
y
permanecer
conectado al instrumento de
medicin o metro. El electrodo de
combin acin dispone de un electrodo de referencia conocido tambin
como
electrodo
calomel
o
calomelanos y un electrodo activo,
integrados sobre un mismo cuerpo.
El diseo del mismo vara dependiendo del fabricante.
Ilustracin 5: Clases de electrodos
CIRCUITO TPICO
de un analizador de pH. Cada fabricante dispone de sus propios diseos y variantes.
A continuacin, se incluye un circuito tpico de

los que conforman el sistema de control
Ilustracin 6: Circuito de control analizador de pH
34
Analizador de pH
Tabla 2: Descripcin elementos circuito de control
SISTEMA
Alimentacin y rectificacin
elctrica
ELEMENTO
Transformador 110V/12VAC
Dispositivo para convertir el voltaje de

red 110V a 12VAC
Diodos rectificadores1N4002
Diodopara controlar la formade la

onday garantizar que la misma
espositiva
Condensadorespara
amortiguar el voltaje
Condensadoreselectrolticos 3
300microfaradios de
(fd)
Reguladores
tres(2)
terminales
(7812, 7912)
Condensadoreselectrolticosde 0,1
microfaradios (fd) (2)
Lmpara de seal 12V DC
Medicin de pH y milivoltios
Seccin desalida
DESCRIPCIN
Amplificador dual de modo no

inverti- doTL081
DC obtenido por los diodos

Dispositivopararegularel
voltajeresultantedela interaccinentre
diodosy condensadores lograr
Dispositivosusadospara
estabilidadenal- ta frecuencia
Lmpara que indicasi el equipoest
prendido
Resistencia (R1) 9,09 K

(ohm)
Resistencia (R2) 1 K (ohm)
Circuito milivoltios
Resistencia (R3) 560K (ohm)
Circuito pH
Resistencia variable (R4) 10K

(ohm)
Resistencia (R5) 30 K (ohm)
Circuito pH
Resistencia a tierra
Voltmetro DCde bajo costo
La ganancia del circuito est

gobernadame- diante la siguiente
ecuacin:
Ganancia
= 1+(R3+PxR4)/R5+(1P)xR4.
Permite la
lectura en milivoltios. El
Circuito milivoltios
voltaje ledo es 10 vecesel voltaje de

la celda, permi- tiendo una resolucin
de lectura
0,1 milivoltios.
La
serealizamediante lautilizacin
de electrodos de carbono/Quinhidrona.
El analizador de pH funciona mediante corriente elctrica de las siguientes caractersticas:

Energa tipo: mono fsica
Voltaje:
110 V o 220 V
Frecuencia: 60 Hz
Tambin existen analizadores de pH de tipo
por ttil que funcionan con bateras.
PROCEDI MIENTO GENERAL
DE CALIBRACIN
Los analizadores de pH normalmente deben
ser calibrados antes de ser utilizados, a fin de
garantizar la calidad y exactitud de las lecturas. Los procedimientos que se realizan son
los siguientes:
1. Calibracin de un punto. Se realiza en
condiciones de funcionamiento y uso
normal. Utiliza una solucin de referencia
de pH conocido.
2. Calibracin de dos puntos. Se realiza si se
requiere efectuar mediciones muy precisas. Utiliza dos soluciones de referencia de
pH conocido. Igualmente, si el instrumento se utiliza de forma espordica y si el
mantenimiento que recibe es eventual.
35
Descripcin del proceso

Frecuencia: Diaria
Calibrar el analizador de pH utilizando una solucin
de pH conocido (calibra - cin de un punto).
1.1. Conectar el equipo a una toma elctrica
adecuada al voltaje del mismo.
1.2. Ajustar el selector de temperatura a la
temperatura ambiente.
1.3. Ajustar el metro.
1.4. Retirar los electrodos del recipiente de
almacenamiento. Los electrodos debern estar siempre almacenados en una
solucin adecuada. Algunos se mantienen en agua destilada, pero otros en
una solucin di ferente que recomienda
el fabricante del electrodo 1. Si por alguna circunstancia el electrodo se seca, es
necesario dejarlo en remojo al menos 24
horas antes de volverlo a utilizar.
1.5. Enjuagar el electrodo con agua destilada, sobre un vaso de precipi tado vaco.
movimiento mediante el uso de un agitador magntico, cuidar que la barra de

agitacin no golp ee el electrodo, pues
podra romperlo. Una solucin buffer se
usa como solucin de calibracin, debido
a que su pH es conocido y as se mantendr aun en el caso de que se presente
una pequea contaminacin. Por lo general, se utiliza para este propsito una
solucin de pH = 72.
3. Girar el selector de funciones de

la posicin Stand by a la
posicin pH.
3.1. Esta accin conecta, en el
analizador de pH, el electrodo a la
escala de medida de pH para que la
lectura pueda ser realizada.
3.2. Ajustar el metro para leer el pH de
la solucin de calibracin,
utilizando el botn marcado Cal 1,
de forma que se pueda leer el pH
de la solucin de calibracin.
1.6. Secar el electrodo con un elemento que

absorba la humedad residual superficial,
pero que no impregne el electrodo. No
frotar el electrodo. Este procedimiento
deber realizarse siempre que los
electrodos
se
utilicen
en
varias
soluciones, para disminuir la posibilid ad
de contaminacin.
Por ejemplo: pH = 7. La aguja podr a oscilar ligeramente en unidades de 0,1 pH; en

promedio la lectura debera ser de 7. Mirar el metro la escala de lectura de forma perpendicular, para evitar o elimin ar
errores de paralelaje errores de lectura
producidos por la sombra de la aguja del
metro, visible en el espejo de la escala de
lectura. El analizador de pH se encuentra
entonces listo calibr ado, para efectuar
lecturas correctas del pH.
2. Colocar los electrodos en la solucin

de calibracin.
3.3. Colocar el selector de funciones en

la posicin Stand by.
2.1. Sumergir el electrodo en la solucin de

estandarizacin, de forma que la parte
inferior del mismo no toque el fondo del
vaso de precipi tados. Esto disminuir el
riesgo de que el electrodo se rompa contra el fondo del recipiente. Si el ensayo
requiere que la solucin se mantenga en
4. Medir el pH de una solucin

4.1. Retirar el electrodo de la solucin
de calibr acin.
4.2. Enjuagar el electrodo con agua
destilada y secarlo con un
elemento secante.
1
2
Verificar el tipo de solucin buffer que recomienda el fabricante del electrodo.

Verificar el tipo de de solucin de calibracin que recomienda el fabricante del electrodo.
36
Analizador de pH
4.3. Colocar el electrodo en la solucin de

pH desconocido.
4.4. Girar el selector de funciones de la
posicin Stand by a la posicin pH.
4.5. Leer el pH de la solucin bajo anlisis,
en la escala del metro o la pantalla del
analizador de pH. Registrar la lectura
obtenida en la hoja de control.
4.6. Girar de nuevo el selector de funciones
a la posicin Stand by.
Si se requiere medir el pH de ms de una solucin, repetir los procedimientos anteriorm ente descritos. Cuando son numerosas las soluciones a las cuales se les mide el pH, se debe
calibrar el analizador de pH de forma frecuente, siguiendo los lineamientos presentados.
5. Apagar el analizador de pH.

5.1. Remover el electrodo de la ltima solucin analizada.
5.2. Enjuagar el electrodo con agua
destilada y secarlo con un elemento
secante que no lo impregne.
5.3. Colocar el electrodo en el recipiente de
almacenamiento.
5.4. Verificar que el selector de funciones
es- t en la posicin Stand by.
5.5. Accionar el interrup tor de apagado o
desconectar el cable de alimentacin,
si carece de este control.
5.6. Limpiar el rea de trabajo.
MANTENI MIENTO GENERAL DEL

ANALIZADOR DE pH
Los analizadores de pH disponen de dos procedimientos generales de mantenimiento: los
dirigido s al cuerpo del analizador y los dirigi dos a la sonda detectora de pH (electrodos).
Procedimien tos generale s de mantenimien to al cuerpo del analizador de pH

Frecuencia: Cada seis meses
1. Examinar el exterior del equipo y evaluar su
condicin fsica general. Verificar la limpi eza
de las cubiertas y el ajuste de las mismas.
2. Probar el cable de conexin y su sistema
de acoples. Comprob ar que se encuentran
en buenas condiciones y que estn
limpios.
3. Examinar los controles del equipo . Verificar que se encuentran en buen estado y
que se pueden accionar sin dificultad.
4. Verificar que el metro se encuentra en
buen estado. Para esta veri ficacin el instrumento debe estar desconectado de la lnea de alimentacin elctrica. Ajustar la
aguja indicadora a cero (0), utilizando el
tornillo de graduacin que generalmente
se encuentra bajo el pivote de la aguja indicadora. Si el equipo dispone de pantalla
indicadora, comprob ar su funcionamiento
normal.
5. Confirmar que el indicador de encendido
bombillo o diodo opere normalmente.
6. Verificar el estado de brazo por taelectrodo. Examinar el mecanismo de mon taje y
fijacin del electrodo, a fin de prever que
el electrodo no se suelte. Comprob ar que
el ajuste de alturas opere correctamente.
7. Revisar las bateras si aplica; cambiar si
es necesario.
8. Efectuar una prueba de funcionamiento
midiendo el pH de una solucin conocida.
9. Inspeccionar las corrientes de fuga y la conexin a tierra.
MANTENIMIENTO BSICO DEL ELECTRODO

Frecuencia: Cada cuatro meses
El electrodo detector requiere mantenimiento
peridico de la solucin conductora, para que
pueda obtener lecturas precisas.
37
Los procesos recomendados para reponer la

solucin electroltica son los siguientes:
1. Retirar el electrodo detector de la solucin
buffer de almacenamiento.
2. Enjuagar el electrodo detector con abundante agua destilada.
3. Retirar la cubierta superior del electrodo
detector.
4. Llenar el electrodo detector con una solucin saturada de cloruro de potasio (KCl).
Utilizar la jeringa o aplicador que acompaa la solucin de KCl. El llenado se efecta
a travs del conducto que pro tege la tapa
superior del electrodo. Verificar que la
pun ta de la jeringa no toque el interior
del electrodo.
5. Envolver una pequea parte de la tapa superior del electrodo para cubrir la apertura
superior del mismo.
6. Usar la pun ta de la aguja de la jeringa para perforar el rea de la tapa que cubre la
abertura, a fin de permi tir que exista un
equilibrio de presiones entre el interior y
el exterior del electrodo.
9. Limpi eza general. Remojar el

electrodo de pH en una solucin 0,1
M de cido clorh - drico (HCl) o 0,1
M de HNO3, durante 20 minu tos.
Enjuagar con agua corriente antes
de usar.
10.
Remocin de depsitos y
bacterias. Remo- jar el electrodo de
pH en una disolucin 1:10 de
blanquedor domstico, durante 10
minu tos. Enjuagar con agua
abundante antes de usar.
11.
Limpi eza de aceite y grasa.
Enjuagar el electrodo de pH con un
detergente medio o con metil
alcohol. Enjuagar con agua antes de
usar.
12.
Limpi eza de depsitos de
protenas. Re- mojar el electrodo de
pH en pepsina al 1 % en cido
clorhdrico 0,1 M, durante 5 minutos. Enjuagar con agua antes de
usar.
Despus de realizar cualquier operacin de
limpi eza, es conveniente enjuagar con agua
desioni zada y rellenar el electrodo de referencia antes de usar.
7. Enjuagar el electrodo con agua destilada.

8. Mantener el electrodo dentro de la solucin buffer de almacenamiento, siempre
que no est en uso.
Limpieza del electrodo

La clase de limpi eza requerida por el electrodo depende del tipo de contaminante que lo
haya podido afectar. Se resumen a continuacin los procedimientos ms comunes.
Otros cuidados
13.
No golp ear el electrodo.
Dado
que
su
estructura
generalmente es de vidrio y este
material es muy frgil se rompe
antes de que se deforme, es
necesario manipul ar- lo de forma
cuidadosa, evitando que sufra
golpes, choques o cadas.
14.
Recordar que el electrodo es
un elemento de consumo y que tiene
una vida til limi tada.
15.
Mientras no est en uso,
mantener el electrodo dentro de la
solucin buffer de almacenamiento.
38
Analizador de pH
PROBLEMA
El analizador de pH presenta
lecturas inestables.
sustancia es bsica cuando, disuelta en agua, es

capaz de producir iones [OH] (hidr xidos).
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Burbujas de aire en el
electrodo.
Remojar el electrodoparaeliminar
lasburbujas.
Electrodosucio.
Limpiar el electrodoy recalibrar.
Electrodomuysuperficial.
Verificar que la muestra cubre

perfectamente la punta del electrodo.
Electrodo roto.
Reemplazar el electrodo.
La respuesta del electrodoes lenta.
Electrodosucio o grasoso.
Limpiar el electrodoy recalibrar.
La pantalla presenta mensaje de

error.
Operacin incorrecta o seleccin

errnea del modo de operacin.
La pantalla presenta mensaje de

calibracin o error.
Error de calibracin.
Verificar modode operacin

seleccionado.Se- leccionar unaoperacin
vlida.
Recalibrar
analizador de pH.
Valor debuffer errneoen

lacalibracin.
Verificar los valoresdel buffer

utilizado.
Electrodosucio.
Limpiar electrodoy calibrar.
Analizador de pH encendido, pero

no hayseal en la pantalla (*).
Bateras mal instaladas.
Verificar polaridadde las bateras.
Bateras agotadas.
Reemplazar bateras.
Indicador de bateras centellea (*).
Bateras agotadas.
Reemplazar bateras.
(*) Causa probable en equipos que funcionancon bateras.
DEFINICIONES
BSICAS
Buffer. Solucin que mantiene un valor

constante y conocido de pH a una
temperatura dada.
pH. Medida de la concentracin del in hidrgeno (H+) dada en moles (M) por li tro en
una disolucin. El concepto de pH fue propuesto por Srensen y Lindstrm-Lang en
1909, con el fin de facili tar el manejo de la
expresin de concentraciones de iones que
resultan muy bajas. Se define mediante la siguiente ecuacin:
pH = Log[H+] [H+] = 10pH
Es una medida de la acidez de la disolucin.
Ejemplo: en el agua la concentracin de [H+] es
1,0 x 107 M, siendo en consecuencia el pH = 7.
Esto permi ti expresar el rango de concentraciones de 1 a 1014 M, simplemente como de
cero (0) a 14. Existen diversos sistemas para
medir la acidez de una solucin. Una sustancia es cida cuando, disuelta en agua, la
misma es capaz de producir iones H+; una
Una sustancia cida tiene una mayor cantidad de iones [H+] que la que presenta el agua
pura; una sustancia bsica presenta mayor
cantidad de iones [OH] que los que presenta
el agua pura. La concentracin de las sustancias se expresa en moles (M).
En el agua pura se sabe que la concentracin
de iones [H+] y [OH] es de 1,0 x 107 M, por lo
que la misma se considera una sustancia neutra. En realidad es un electroli to dbil que se
disocia segn la ecuacin:
H2O
[H+] [OH]
En toda disolucin acuosa existe un equilibrio

que puede expresarse como:
[H+] [OH]
H2O
=K
Si la disolucin es diluid a, la concentracin del

agua no disociada puede considerarse
constante y por ello,
[H+] [OH] = [H2O]K = Ka
39
La nueva constante Ka se denomin a constante de disociacin o producto inico del agua

y su valor es 1,0x1014, a 25 C.
[H+] [OH] = 1,0 x 10-14
X x X = 1,0 x 10-14
X2 = 1,0 x 10-14
X = 1,0 x 10-7
En el agua pura las concentraciones de H+ y
OH son de 1,0 x 107 M, concentracin que es
muy pequea, si se tiene en cuenta que la
concentracin molar del agua es de 55,4
mol/litro.
Disociacin. Fenmeno por el cual se presenta un rompimi ento de las molculas como
resultado de la disolucin de una sustancia en
otra y que produce partculas cargadas
elctricamente (iones).
Disolucin. Mezcla homog nea de propi edades uni formes de dos o ms sustancias.
Se caracteriza por no existir interaccin
qumica entre los compon entes de la mezcla.
El componente que existe en mayor propor
cin y que generalmente se encuentra en
estado l- quido se denomin a disolvente y el
que se encuentra en menor cantidad, solu
to.
Electrodo sensitivo a los iones. Dispositivo
que produce una diferencia de potencial que es
propor cional a la concentracin de un analito.
Electrodo calo mel. Electrodo de referencia que se utiliza, jun to con el electrodo act ivo, en la determin acin del pH de una solucin. Dicho electrodo est construido con
base en mercurio (Hg), una capa de dimercurio (Hg2Cl2) y una disolucin de cloruro de
po tasio (KCl) de concentracin 0,1 M. Se representa as: Cl2[Hg2Cl2, KCl]Hg.

Electroli to. Solu tos que producen soluciones
conductoras tales como el NaCl cloruro de
sodio y el NH4OH.
Gel. Tipo de mezcla en la cual un lquido se
encuentra disperso a travs de un slido .
Ejemplos: jaleas, gelatinas.
In. Cuando un tomo neutro gana o pierde un
electrn, forma una partcula a la que se
conoce con el nombr e de in. Si el tomo
pierde un electrn, se convierte en un in de
carga positiva y se le denomin a catin. Si el
tomo gana o captura un electrn, se convierte en un in de carga negativa y se le denomin a anin .
Mol. Cantidad de cualquier sustancia cuya
masa, expresada en gramos, es numricamente igual a la masa atmica de dicha sustancia.
Molaridad . Como el nmero de moles (M)
de una sustancia en un li tro de solucin. (Nmero de moles de solu to en un li tro (l) de solucin). El parntesis cuadrado alrededor del
smbolo del in indica que se trata de una
concentracin molar.
Solucin. Mezcla fsicamente homog nea
de dos o ms sustancias, cuyas partes son
muy pequeas para diferenciarlas a simple
vista o aun con el microscopio. La
composicin y dems propi edades de la
solucin son iguales en todas sus partes.
40
Analizador de pH
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41
Anexo: Teora del pH
Los electrodos de pH idealmente se compor tan como una celda electroqumica y reaccionan a la
concentracin de iones [H+]. Esto genera una fuerza electromo triz (FEM) que, de acuerdo con la ley
de Nernst, se plantea segn la siguiente ecuacin:
E = E + RT
lnaHL
nF
Si se tiene en cuenta que:
pH = -log aHL donde a es la concentracin efectiva de iones (Actividad)
Si n = 1, la ecuacin entonces se reescribe as:
E = E -
RT
F
pH
E es una constante dependiente de la temperatura. Si se sustituye E por ET, la calibracin resulta ms sencilla. Los electrodos reales no siempre siguen la pendiente de la ecuacin de
Nernst. Si se introduce el concepto de sensibilid ad (s), la ecuacin puede reescribirse as:
E = ET - s
RT
F
pH
Los valores de E y s se encuentran midiendo la FEM en dos soluciones con pH conocido. S es la

pendiente de E versus pH, mientras que E se encuentra de la interseccin con el eje y. Cuando E y
s son conocidas, la ecuacin puede reescribirse y el pH puede calcularse as:
pH =
ET - E
RT
s
F
42
CAPTULO 4
Balanzas
Cdigo (s)
ECRI
10-261
10-263
Balanzas electrnicas
18-449
Balanzas electrnicasanalticas
18-451
Balanzas microelectrnicas, microanalticas
Balanzas
BALANZAS
La balanza es un instrumento que mide la
masa de un cuerpo o sustancia, utilizando como medio de comparacin la fuerza de la
gravedad que acta sobre el cuerpo. La palabra proviene de los trminos latinos bis que
signi fica dos y linx, plato. Se debe tener en
cuenta que el peso es la fuerza que el campo
gravitacional ejerce sobre la masa de un
cuerpo, siendo tal fuerza el producto de la
masa por la aceleracin local de la gravedad.
[F = m x g]. El trmino local se incluye para
destacar que la aceleracin depende de factores como la latitud geogrfica, la altura sobre el nivel del mar y la densidad de la tierra,
en el lugar donde se efecta la medicin. Dicha fuerza se mide en Newt on. La balanza
tiene otros nombr es, entre los que destacan
bscula y pesa.
FOTOGRAFAS DE BALANZAS1
Balanza electrnica
PROPSITO DE LA BALANZA
La balanza se utiliza para medir la masa de un
cuerpo o sustancia o tambin el peso de los
mismos, dado que entre masa y peso existe
una relacin bien definida. En el laboratorio
se utiliza la balanza para efectuar actividades
de control de calidad con dispositivos como las
pipetas, para preparar mezclas de compon
entes en pro- porciones predefinidas y para
determinar densidades o pesos especficos.
PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO
Las balanzas se diferencian entre s por el diseo, los principios utilizados y los cri terios de
metrolog a que utilizan. En la actualidad podra considerarse que existen dos grandes
grupos: las balanzas mecnicas y las balanzas
electrnicas.
htt p://www .ohaus.com/inpu t/media/picture_s/EP64C_s.jpg / htt p://www .ohaus.com/ products/ind/ mechanical.asp
43
Balanza mecnica
Balanzas mecnicas
Algun as de las ms comunesson lassiguientes:
1. Balanza de resorte. Su funcionamiento
est basado en una propi edad mecnica
de los resortes, que consiste en que la
fuerza que ejerce un resorte es propor
cional a la constante de elasticidad del
resorte [k] mul tiplicada por la elongacin
del mismo [x] [F = -kx]. Lo anterior implica
que mientras ms grande sea la masa [m]
que se coloca en el platillo de la balanza,
mayor ser la elongacin, siendo la misma
propor cional a la masa y a la constante
del resorte. La calibracin de una balanza
de resorte depende de la fuerza de
gravedad que acta sobre el objeto, por lo
que deben calibrarse en el lugar de empleo.
Se utilizan si no se requiere gran precisin.
Ilustracin 7: Balanza de resorte
2. Balanza de pesa deslizante. Dispone de

dos masas conocidas que se pueden desplazar sobre escalas una con una graduacin macro y la otra con una graduacin
micro; al colocar una sustancia de masa
desconocida sobre la bandeja, se determina su peso deslizando las masas sobre las
escalas mencionadas hasta que se obtenga
la posicin de equilibrio . En dicho momento se toma la lectura sumando las cantidades indicadas por la posicin de las masas
sobre las escalas mencionadas.
Bandeja Escala macro

Pesa deslizante micro Pesa deslizante macro
Escala micro
Ilustracin 8: Balanza de pesa deslizante
3. Balanza
anal
tica.
Funciona
mediante la comparacin de masas de
peso conocido con la masa de una
sustancia de peso desconocido. Est
construida con base en una barra o
palanca simtrica que se apoya
mediante un sopor te tipo cuchilla en
un pun to central denomin ado
fulcro. En sus extremos existen unos
estribos o casquillos que tambin
estn sopor tados mediante unas
cuchillas que les permiten oscilar
suavemente. De all se encuentran
suspendidos dos platillos. En uno se
colocan las masas o pesas certificadas
y en el otro aquellas que es necesario
analizar. Todo el conjun to dispone de
un sistema de ase- guramiento o
bloqu eo que permi te a la palanca
principal reposar de forma estable
cuando no es utilizada o cuando se
requieren
modi
ficar
los
contrapesos. Dispone de una caja
externa que protege la balanza de
las interferencias, como corrientes de
aire, que pudieran presentarse en el
lugar donde se encuentra instalada.
En la actualidad, se considera que una
balanza analtica es aquella que
puede pesar diez milsimas de gramo
(0,0001 g) o cien milsimas de gramo
(0,00001 g); tienen una capacidad que
alcanza generalmente hasta los 200
gramos.
Ilustracin 9: Balanza analtica
44
Balanzas
Para utilizarlas se requiere disponer de un

juego de masas certificadas, el cual dispone de piezas con masa de diversa magnitud. El juego est por lo general compuesto por las siguientes piezas:
Tipo de
masa
Piezassimples
Piezasfraccional
es
Capacidad2
1 g, 2 g, 5 g, 10 g, 20 g, 50
g,
100
g,
200
y 500
2 mg, 5 mg, 10gmg,
20 gmg,
50 mg,
100mg, 200mg y 500mg
4. Balanza de pla to superior. Este tipo de

balanza dispone de un platillo de carga colocado en la parte superior, el cual es sopor tado por una column a que se
mantiene en posicin vertical por dos pares
de guas que tienen acoples flexibles. El
efecto de la fuerza, producido por la masa,
es transmi- tido desde algn pun to de la
column a vertical o bien directamente o
mediante algn mecanismo a la celda de
carga. La exi- gencia de este tipo de
mecanismo consiste en mantener el
paralelismo de las guas con una exactitud
de hasta 1 m. Las desviaciones de
paralelismo causan un error conocido
como de carga lateral que se presenta
cuando la masa que est siendo pesada
muestra diferencias, si la lectura se toma
en el centro del platillo o en uno de sus
extremos. El esquema que se incluye a
continuacin explica el principio de
operacin, el cual algunos fabricantes han
introducido a las balanzas electrnicas.
5. Balanza de sustitucin. Es una

balanza de platillo nico. Se coloca
sobre el platillo de pesaje una masa
desconocida que se equilibr a al
retirar, del lado del contrape- so,
masas de magni tud conocida,
utilizando un sistema mecnico de
levas hasta que se alcance una
posicin de equilibrio . El fulcro
generalmente est descentrado con
relacin a la longi tud de la viga de
carga y colocado cerca del frente de
la balanza. Cuando se coloca una
masa sobre el platillo de pesaje y
se libera la balanza del mecanismo
de bloqu eo, el movimiento de la
viga de carga se proyecta mediante
un sistema ptico a una pantalla
localizada en la parte fron tal del
instrumento.
Ilustracin 11: Balanza de sustitucin
Veri ficacin de operacin

A continuacin, se describe el procedimiento
utilizado para verificar el funcionamiento de
una balanza mecnica tpica. La descripcin del
proceso se basa en la balanza de sustitucin.
1. Verificar que la balanza est nivelada. La nivelacin se logra mediante mecanismos de
ajuste roscado, ubicados en la base de la balanza. El nivel se logra centrando una burbu
- ja sobre una escala visible en la parte
frontal de la base de la balanza.
Ilustracin 10: Balanza de plato superior
2. Comprob ar el pun to cero. Colocar en cero

los controles y liberar la balanza. Si la escala
de lectura no se mantiene en cero, es
necesario
Manual of Basic Techniques for a Health Laboratory, Geneve, World Health Organization, 2nd. Edition, 2003.
45
ajustar el mecanismo de ajuste de cero que

es un tornillo estriado ubicado en posicin
horizontal cerca al fulcro. Para esto es
necesario bloqu ear la balanza y ajustar
suavemente el citado mecanismo. El proceso
contina hasta que el cero ajuste
correctamente en la escala de lectura.
3. Verificar y ajustar la sensibilid ad. Esta se reajus- ta
siempre que se haya efectuado algn ajuste
interno. Se efecta con una pesa patrn conocida
y se procede siguiendo estos pasos:
a) Bloquear la balanza.
b) Colocar un peso patrn en el platillo, equivalente al rango de la escala ptica.
c) Colocar la graduacin de la dcada de peso inferior en uno (1).
d) Liberar la balanza.
e) Ajustar el pun to cero.
f) Colocar nuevamente la graduacin de la dcada de peso inferior en cero (0). La balanza
deber marcar 100. Si la escala marca menos
o ms que 100, se debe ajustar el control de
sensibilid ad. Esto supone bloqu ear la balanza, levantar la cubierta superior y girar el tornillo de sensibilid ad: si la escala marca ms
de 100, girar el tornillo en el sentido de las
agujas del reloj, es decir, hacia abajo. Si la
escala marca menos de 100, es necesario
desenroscar el tornillo . Luego se repite el
proceso hasta que quede ajustada la balanza
(ajustar en cero y la sensibilid ad).
4. Confirmar el freno del platillo. Este se encuentra
montado sobre un eje roscado que, cuando est
bloqu eada la balanza, toca el platillo para evitar
que oscile. En caso de de- sajuste se debe rotar
suavemente el eje, hasta que la distancia entre el
freno y el platillo sea cero cuando la balanza est
bloqu eada.
3. Verificar el ajuste de sensibilid ad.

4. Limpiar el platillo de pesaje.
Frecuencia: Anual
1. Calibrar la balanza y documentar el proceso.
2. Desensamblar y limpiar los compon entes internos. Se debe seguir el proceso definido
por el fabricante, o contratarse una firma especializada para el efecto.
Balanzas electrnicas
Las balanzas electrnicas involucran tres elementos bsicos3:
1. El objeto a ser pesado que se coloca sobre el
platillo de pesaje ejerce una presin que est
distribuid a de forma aleatoria sobre la
superficie del platillo. De all, mediante un
mecanismo de transferencia palancas,
apoyos, guas, se concentra la carga del
peso en una fuerza simple [F] que puede
ser medida.
[F = Pa] La integral de la presin sobre
el rea permite calcular la fuerza.
2. Un transductor de medida, conocido con el
nombr e de celda de carga, produce una
seal de salida propor cional a la fuerza de
carga, en forma de cambios en el voltaje o
de frecuencia.
3. Un circuito electrnico anlogo digi tal que
finalmente presenta el resultado del pesaje
en forma digi tal.
Manteni mien to de la balan za mecnica

El mantenimiento de las balanzas mecnicas
es- t limi tado a las siguientes rutinas:
Frecuencia: Diaria
1. Verificar el nivel.
2. Verificar la graduacin de cero.
Ilustracin 12: Elementos de las balanzas

electrnicas
3
Kupper, W., Balances and Weighing , Mett ler Instrument Corp., Princeton-High tstown, NJ.
46
Balanzas
Ilustracin 13: Principio fuerza de

compensacin
Las balanzas de laboratorio operan de acuerdo al
principio de compensacin de fuerza electromagntica, aplicable a desplazamientos o torques
dondesecombina
la
exactitud
de
loscomponentes mecnicos con lossistemas
automticos de lectura.
Funciona mien to. Las partes mviles (platillo
de pesaje, column a de sopor te [a], bobin a,
indicador de posicin y carga [G] objeto en
proceso de pesaje) son mantenidas en
equilibrio en flotacin por una fuerza de
compensacin [F] que es igual al peso. La fuerza
de compensacin es generada por el flujo de
una corriente elctrica, a travs de una bobin
a ubicada en el espacio de aire existente en un
electroimn magneto cilndrico. La fuerza F
es calculada mediante la ecuacin [F = I x l x
B], dond e: I = corriente elctrica, l = longi tud
total del alambre de la bobin a y B =
intensidad de flujo magntico en el espacio
de aire del electroimn.
Con cualquier cambio en la carga peso/masa,
el sistema mvil mecnico responde, desplazndose verticalmente una fraccin de distancia, detectada por un fotosensor [e], que como
resultado enva una seal elctrica al servoampli ficador [f] que cambia el flujo de corriente
elctrica que pasa por la bobin a del magneto
[c], de forma que el sistema mvil retorne a la
posicin de equilibrio al ajustarse el flujo magntico en el electroimn. En consecuencia, el
peso de la masa G se puede medir de forma
indi- recta, a partir del flujo de corriente
elctrica que pasa por el circuito midiendo el
voltaje [V], a travs de una resistencia de
precisin [R]. [V = I x R]. A la fecha han sido
desarrollados muchos sistemas que utilizan la
electrnica para efectuar mediciones muy
exactas de masa y peso. El esquema que se
presenta a continuacin explica la forma en
que funciona la balanza electrnica.
Sistema de procesamien to de la seal

El sistema de procesamiento de la
seal est compuesto por el circuito
que transforma la seal elctrica,
emitida por el transductor de medida
en datos numricos que pueden ser
ledos en una pantalla. El proceso de la
seal comprende las siguientes
funciones:
1. Tara. Se utiliza para colocar en
cero el valor de la lectura, con
cualquier carga dentro del rango
de capacidad de la balanza. Se
controla con un botn ubicado
generalmente en el frente de la
balanza.
2. Control para ajuste del tiempo de
integra- cin. Los valores de peso
son promediados durante un
perodo predefinido de tiempo.
Dicha funcin es muy til cuando
se requiere efectuar operaciones
de
pesaje
en
condiciones
inestables. Por ejemplo: presencia
de corrientes de aire o vibraciones.
3. Redondeo del resultado. En general las balanzas electrnicas procesan datos internamente de mayor resolucin que aquellos
que se presentan en la pantalla. De esta
forma se logra centrar exactamente la balanza en el pun to cero, cuando la balanza
es tarada. El valor interno neto se redondea en la pantalla.
4. Detector de estabilid ad. Se utiliza en operaciones de pesaje secuencial y permi te
comparar los resultados entre s. Cuando
el resultado se mantiene, es liberado y
puesto en pantalla, aspecto que se detecta
al encenderse el smbolo de la unidad de
peso seleccionada.
5. El procesamiento electrnico de las seales
permite disponer de otras funciones tales
como conteo de partes, valor porcentual,
valor objetivo, entre otras. Dichos clculos
son realizados por el microprocesador, de
acuerdo con las instrucciones que el
operador ingresa a travs del teclado de la
balanza.
Clasificacin de balanzas
La Organizacin Internacional de Metrolog a
Legal (OIML) ha clasificado las balanzas en
cuatro grupos:
47
MANUAL DE MANTENIMIENTO PARA EQUIPO DE LABORATORIO
1. Grupo I: balanzas de exactitud

especial
2. Grupo II: balanzas de exactitud
alta
3. Grupo Ill: balanzas de exactitud media
4. Grupo IV: balanzas de exactitud ordinaria
1. La carga maxima [Max.]

2. El valor de la division digital [ dd]
El numero de divisiones de la escala se

calcu la mediante la siguiente f6rmula:
La grafica que se presenta a continuaci6n

muestra dicha clasificaci6n.
n
-...+-----i--i-!_,1_,i__, .,---;..
1a4
II
II
I(DI
IIII
i 1 1 1 ii T
. !,,
II
ii
!;
!,CD!,
- ,-
. I.
J
I
I
.
1
0, 1I----"9
JO 100
10 100
10 100
ii
j -'l>'l--j-g-1-
'1'1'1
1. Ultramicroanaliticas
2. Microanalltica
s
3. Semimicroanalfticas
4. Macroanaliticas
5. De carga superior
'1(1[)
i!i
La OIML acepta la siguiente convenci6n para

las balanzas de laboratorio:
g
dd = 1 g
dd = 0,01 mg
dd = 0,1 mg
dd ?! 1 mg
dd = 0,1
10 100d d
kg-.
llustraci6n 14: Clasificaci6n de balanzas

por grupos de exactitud
Control balanza eledronica

A continuaci6n, se ofrece un esquema del
control tlpico que puede tener una balanza
electr6nica moderna.
En la clasificaci6n metrol6gica de las balan

zas electr6nicas solo dos parametros son de
importancia:
Encendido/ Apagado
Bot6n
menu
Bot6n
impresi6n-,
Bot6n
selecci6n/modo
UNIDAD
I
I cALIBRAcloN I
!FECHA U HORA
IIIIIIII
II
Bot6n
tara
Pantalla
llustraci6n 15: Control ba/anza analitica
Kupper,W.,Balances and Weighing, Mettler Instrument Corp.,Princeton-Hightstown, NJ.
48
Balanzas
Operacin de la balanza electrnica

De este esquema es necesario destacar lo
sigui ente:
1. Las funciones incorpor adas pueden llegar
a ser numerosas.
2. Se pueden seleccionar diversas unidades
de medida.
3. Es posible conocer la fecha y la hora en las
cuales se realizan las mediciones.
4. Se pueden imprimir y documentar los procedimientos realizados.
5. Es posible seleccionar el idiom a.
Para instalar y utilizar satisfactoriamente una

balanza, se requiere lo siguiente:
1. Disponer de un ambiente que no presente
corrientes de aire, cambios bruscos de
temperatura y que est libre de polvo.
La operacin de una balanza electrnica moderna est claramente definida en el manual

de operacin que suministran los fabricantes.
En general se debe cumplir el siguiente
procedimiento:
1. Permitir que la balanza equilibr e sus condiciones con las del ambiente donde de encuentra instalada.
2. Permitir que la balanza se precaliente antes
de iniciar las actividades. Normalmente basta
que la misma se encuentre conectada al
sistema de alimentacin elctrico. Algunos
fabri- cantessugieren que se deje transcurrir
un perodo de tiempo de al menos 20 minu
tos, desde el momento en que se energiza
hasta el momento en que se inicia la
utilizacin de la misma. Las balanzas
analticas Clase I requieren al menos 2
horas antes de iniciar su utilizacin.
3. Verificar que la balanza se encuentre calibrada.

Las balanzas electrnicas por lo general disponen
2. Tener un mesn perfectamente nivelado.
de una calibracin hecha en fbrica, almacenada
Es ideal una plataforma de alta inercia,
en la memoria, la cual puede utilizarse si no se
aislada de las estructuras ubicadas en la
dispone de masas de calibracin. Si se requiere
vecindad, para reducir el efecto de las realizar la calibracin, se debe disponer de masas
vibraciones que emiten ciertos equipos calibradas para poder efectuar el procedimiento
como centrfugas y refrigeradores. La que indiqu e el fabricante. Las masascalibradas
misma debe tener un rea suficiente para
utilizadas deben cumplir o exceder las tolerancias
instalar la balanza y aquel equipo auxiliar
ASTM. Como informacin general se incluye a
con el que se interacta en los procesos de
continuacin una tabla que presenta las
pesaje. De igual manera se debe prever el
tolerancias acepta- das para las masas ASTM Clase
espacio requerido por los cables de 15.
interconexin,
corriente
elctrica,
conexin al sistema de informacin, a la
impresora, etc.
3. Evitar que en la vecindad se encuentren
instalados equipos que produ zcan campos
magnticos elevados o vibraciones como
centrfugas, motores elctricos, compresores y generadores.
4. Evitar que se encuentre bajo la influencia
directa de los sistemas de aire acondicionado corri entes de aire y de la luz solar.
5. Disponer de una toma elctrica en buen
estado, dotada con polo a tierra provista
de interrup tores, que cumpla con la
normatividad elctrica vigente en el pas o
el laboratorio.
Peso
(gramos)
Lmitesuperior
(g)
Lmite inferior
(g)
200
200,0005
199,9995
300
300,0008
299,9993
500
500,0013
499,9988
1 000
1000,0025
999,9975
2 000
2000,0050
1999,9950
3 000
3000,0075
2999,9925
5 000
5000,0125
4999,9875
100
100,0003
99,9998
Field Services Handbook for High Precision Scales, IES Corpor ation, Portland, Oregon, 2004.
49
4. Seguir las instrucciones que indica el fabricante en el manual de operacin.
Calibracin de las balanzas

El proceso de calibracin de balanzas debe
ser realizado por personal capacitado especficamente en esta actividad. Como aspecto
fundamental se destaca que la calibracin se

debe realizar con base en los lineamientos de
la OIML o de otra entidad equivalente como
puede ser la Sociedad Americana para Ensayo
de Mate- riales (ASTM), instituciones que han
desarroll ado metodolog as para clasificar las
pesas o masas patrn, utilizadas en los
procesos mencionados. A continuacin, se
incluye la tabla de clasificacin de pesas de
referencia que utiliza la OIML.
Tabla de clasificacin de pesos de referencia OIML6
CLASE
E1
E2
F1
F2
M1
M2
DESCRIPCIN
Pesasde acero inoxidable sin marcaso
cmara de ajuste
0,5 ppm en
1 kg
Pesasde acero inoxidable sin marcaso

cmara de ajuste
1,5 ppm en
1 kg
Pesasde acero inoxidable con botn

roscado para proteger cmara de ajuste
5 ppm en
1 kg
Pesasde bronce plateado
15 ppm en
1 kg
Pesasde bronce que no se corroan o

man- chen o de fundicin de hierro
con terminado en pintura de buena
calidad bronce o fundicin de hierro
Pesasde
(pesas de comercio)
Cualquier proceso de calibracin debe realizarse utilizando un peso patrn, y los resultados obtenidos se analizarn para determinar si
se encuentran dentro de las tolerancias
aceptables. Se deben seleccionar los pesos
patrn, dependiendo de la capacidad de la
INCERTIDU
MBREPERMITI
1/3 de
TOLERANCI
A
50 ppm en
1 kg
200 ppm en
1 kg
FRECUENCIA
DE
RECALIBRACI
2 aos
la
toleran
1/3 de
2 aos
la
toleran
1/5 de
1 ao
la
toleran
1/5 de
1 ao
la
toleran
1/5 de
1 ao
la
toleran
cia
1/5 de
1 ao
la
toleran
balanza. La tabla que se muestra a continuacin complementa la anterior y es una gua que
ayuda a determinar el tipo de peso patrn que
debe utilizarse en los procesos de calibracin
de una balanza en funcin de su capacidad.
Tabla de pesos patrn a utilizar segn capacidad de la balanza
CAPACIDA
D
Hasta 200 g
100 g
-
10 g
-
1g
-
200 g a 1 kg
M1
1 kg a 30 kg
M2
M2
M1
30 kg a 100 kg
M2
M1
F2
Ms de 100 kg
M2
M1/
F2
F1
RESOLUCI
100 N
10
mg
M1
mg
M1
M
1
F
2
F
1
E
2
F
2
E
2
E
2
-
1
m
F2
0,1
mg
F1
0,01
mg
E2
F1/
E2
E2
E2
E2
E
2
-
Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate By LGC (Tedding ton) Ltd., December 2000.
50
Balanzas
2. Limpiar externa e internamente la

cmara de pesaje. Verificar que los
vidrios estn libres de polvo.
La balanza se caracteriza por ser un instrumento de alta precisin. Por tal motivo las rutinas de mantenimiento a cargo del operador
son mnimas y se encuentran limi tadas a las
siguientes:
3. Verificar que los mecanismos de ajuste

de la puerta fron tal de la cmara de
pesaje funcionen adecuadamente.
Actividade s diarias
1. Limpiar el platillo de pesaje, para que este
se encuentre libre de polvo o suciedad. La
limpi eza se efecta con una pieza de tela
limpi a que puede estar humedecida con
agua destilada. Si es necesario retirar alguna mancha, se puede aplicar un detergente suave. Tambin se puede usar un pincel
de pelo suave para remover las partculas
o el polvo que se hubiesen depositado sobre el platillo de pesaje.
Muy impor tante: Nunca lubricar una

balanza a menos que el fabricante lo indiqu e
expresa- mente. Cualquier sustancia que
interfiera con los mecanismos de la balanza
retardan su respuesta o alteran defini
tivamente la medida.
Nota: Por lo general, el fabricante o el representante en instalaciones especializadas
realiza el mantenimiento de las balanzas,
siguiendo procedimientos que varan dependiendo del tipo y modelo de balanza.
Tabla de solucin de problemas (balan za electrnica)
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
La balanzano enciende.
Cable de
interconexindesconectadoo mal
ajustadoen
la balanza.
La
toma elctrica
La lectura del peso es

incorrecta.
desenergizada.
La balanzano fue puesta en cero
antes de la lectura.
La balanzano muestra en pantalla

las unidadesdeseadas de medida.
las seleccioneso cambios.
Revisar conexin. Ajustar cable conector

si es del caso.
Verificar alimentacin elctrica.
Colocar en cero la balanza; repetir la
medida.
La balanzamal calibrada.
Calibrar de acuerdo con el procedimiento

re- comendadopor el fabricante.
La balanzadesnivelada.
Nivelar la balanza.
Unidadesmal seleccionadas.
Revisar el procedimiento definido por el

fabrican- teparaseleccionar
launidaddemedidarequerida.
Habilitar
la unidad de medida de acuerdo
La unidad requerida no
habilitada.
No se puede cambiar la
configuracin del men de la
balanza.
La
balanza es incapaz de guardar
REMEDIO
El men puede estar

bloqueado.
Nosehaoprimido la teclaFin, para
terminar el proceso.
al procedimiento definido por el

fabricante.
Verificar
si el interruptor de bloqueo est
activado. Desactivar si esdel caso.
Verificar la forma en que se realizan los
cambios o selecciones, de acuerdo con
el manual del fabricante. Repetir la
seleccin
o cambio.
Apagar,
esperar
un momento y
encender nuevamente.
La lectura de la balanzaes
inestable.
Vibracin en la superficie del

mesn.
Puerta frontal de la balanzaabierta.
Colocar la balanzasobre
unasuperficieestable.
Cerrar la puerta frontal para efectuar la
medicin.
51
PROBLEMA
La interfaseRS232 no funciona.
La pantalla presenta lecturas
incomple- tas o seencuentra
bloqueada.
CAUSA PROBABLE
Cable de interconexin mal
ajustado.
Microprocesador bloqueado.
La pantalla presenta un cdigo

de error.
REMEDIO
Verificar laconexindel cable de
interconexin.
Apagar la balanzay un momento despus
en- cenderla.Si lasituacinpersiste, solicitar
servicio tcnico al representante.
Verificar loscdigos deerror en el manual
de la balanza.
Tabla de errores funcionales y sus posibles causas
ERROR FUNCIONAL
Lecturas no reproducibles (histresis).
CAUSA PROBABLE
Suciedaden la celda de medicin.
La celda de medicin mal ensamblada.
Lecturas no lineales.
Sistemaelectrnico defectuoso.
Sistemamecnico en malas condiciones.
Lectura digital avanzacontinuamente en

unadireccin.
La lectura digital avanzay retrocede continuamente.
Celda de medicin sucia.
Cambia la temperatura del ambiente.

Problemas ambientales como corrientes de aire,
electricidad esttica o vibraciones.
La pantalla digital en blancoo muestra signos sin sentido.
La pantalla indica condicin de sobrecarga o carga

negativa sin que exista carga aplicada.
Celda de medicin daadapor sobrecarga.
La balanzano puede calibrarse.
Batera de calibracin defectuosa.
Celda de medicin ensambladade forma errnea.

Celda de medicin ensambladade forma incorrecta.
DEFINICIONES BSICAS
ASTM . Sociedad Americana de Ensayo de
Materiales (American Society for Testing and
Materials).
Calibra cin. Determin acin del valor correcto de la lectura de un instrumento, por medicin o comparacin de la misma contra un estndar o patrn. Una balanza se calibra mediante la utilizacin de pesas patrn.
Carga lateral . Habilid ad de una balanza para leer de forma consistente el valor de las
masas, sin impor tar la posicin de las mismas
sobre el platillo de pesaje. En ingls se denomina cornerload.
Error de carga lateral. Desviacin que se presenta en los resultados cuando se pesa un objeto, colocndolo en diferentes posiciones del
platillo de pesaje. Por ejemplo: entre el centro
del platillo y luego en uno de sus bordes.
Error de linealidad . Diferencia que se presenta cuando la balanza se carga de manera
sucesiva, incrementando la cantidad de peso
en igual magni tud hasta lograr su mxima capacidad, para luego descargarla siguiendo un
proceso anlogo al mencionado. Las diferencias que se presentan entre las lecturas obtenidas y los valores aritmticos, correspondientes a las pesas utilizadas, se interpretan
como la no-linealidad.
52
Balanzas
Error de sensibilidad . Desviacin constante a

travs del rango de pesaje o capacidad de una
balanza.
Exactitud. Suma de todos los errores de la
balanza. Se le denomin a banda tota de error .
Histresis. Diferencia que se presenta en los
resultados cuando se aumenta o disminu ye la
carga en la balanza.
Linealidad . Concepto que aplica a la
capacidad o habilid ad de una balanza para
lograr lecturas exactas de peso de masas
menores a la de su capacidad total. Si se dibuj
ara una grfica entre peso, comparado con la
indicacin de peso en una balanza
perfectamente lineal, el resultado final sera
una lnea recta. Para determinar el error de
linealidad de una balanza, se deben utilizar
masas certificadas. El procedimiento que
permite calcular las diferencias de linealidad
consiste en efectuar lecturas con masas
certificadas la misma masa con y sin
precarga. La diferencia entre las dos lecturas
permite calcular el error de linealidad.
Masa. Propiedad de la materia que se

manifies- ta a travs de fenmenos tales como
la atraccin de los cuerpos, mediante la
fuerza de gravedad o mediante la inercia
resistencia a cambiar el estado de reposo o
movimiento bajo. La unidad fundamental
para expresar el concepto de masa es el kilogr
amo [kg].
Masas certificadas. Masas que cumplen con
las tolerancias definidas por los entes de certificacin. Los estndares ASTM clases 1 a 4 son
de amplia utilizacin y son referencia oblig ada
para realizar las rutinas de calibracin.
OIML. Oficina Internacional de Metrolog a
Legal.
Sensibilidad . Masa ms pequea que puede
ser detectada por la balanza. Tambin se entiende como la masa ms pequea que la balanza medir correctamente.
Trazabilidad . Posibilid ad de relacionar el
grupo de medidas de un instrumento con un
estndar definido .
53
Bibliogra fa
Explorer Pro. Instruction Manual, Ohaus Corpor ation, Part N 80250955, 2003. (www.ohaus.com)
Field Services Handbook for High Precision Scales, IESCorpor ation, Portland, Oregon, 2004.
Guidelines for calibration in laboratories, Drinking Water Inspectorate By LGC (Tedding ton) Ltd., D
( %20guid elines.pdf) Kupper, W., Balances and Weighing , Mett ler Instrument Corp., Princeton
Mantenimiento y reparacin del equipo de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital, Ginebra
Manual of Basic Techniqu es for a Health Laboratory, Geneve, World Health Organization, 2nd. Edi
Voyager Pro, Instruction Manual, Ohaus Corpor ation, Part N 80251000, 2003. (www.ohaus.com)
54
CAPTULO 5
Bao de Mara
Cdigo (s)
ECRI
15-108
16-772
Baos de Mara, con agitador
BAO DE MARA
El bao de Mara es un equipo que se utiliza
en el laboratorio para realizar pruebas serolgicas y procedimi entos de incubacin,
aglu tinacin, inactivacin, biomdicos, farmacuticos y hasta industriales. Por lo general, se utilizan con agua, pero tambin permiten trabajar con aceite. Los rangos de
temperatura en los cuales normalmente son
utilizados estn entre la temperatura ambiente y los 60 C. Tambin se pueden seleccionar temperaturas de 100 C, utilizando
una tapa de caractersticas especiales. Los
baos de Mara son fabricados con cmaras
Baos de Mara
cuya capacidad puede seleccion arse entre los

2 y los 30 li tros.
ESQUEMA BAO DE MARA

Se presenta a continuacin un esquema bsico
de un bao de Mara. En el mismo es posible
diferenciar el control electrnico, la pantalla, la
cubierta que es un accesorio opcional y el
tanque. No se muestran algunos compon entes
que pueden instalarse en estos equipos como
el termmetro y la unidad de agitacin, para
mantener uni forme la temperatura.
Ilustracin 16: Bao de Mara
55
Los baos de Mara estn constituidos por un
tanque fabricado en material inoxidable, el
cual tiene mon tado en la parte inferior del
mismo un conjun to de resistencias elctricas,
mediante las cuales se transfiere calor a un
medio como agua o aceite, que se mantiene
a una temperatura preseleccionada a travs
de un dispositivo de control termo par, termostato, termistor o similar que permi te seleccionar la temperatura requerida por los diversos tipos de anlisis o pruebas. Dispone de
un cuerpo externo donde se encuentran ubicados los controles mencionados, el cual se
fabrica en acero y se recubre generalmente
con pin tura electrosttica de alta adherencia
y resistencia a las condiciones ambientales

propi as de un laboratorio. Las resistencias
pueden ser las siguientes:
De inmersin. Se caracterizan por estar
instaladas dentro de un tubo sellado. Estn ubicadas en la parte inferior del recipiente y se encuentran en contacto directo
con el medio a calentar.
Externas. Se encuentran ubicadas en la
parte inferior pero son externas al tanque;
estn pro tegidas por un material aislante
que evita prdidas de calor. Este tipo de
resistencias transfiere el calor al fondo del
tanque por medio de conduccin trmica.
Ilustracin 17: Resistencias de inmersin y externa
Dependiendo del tipo de bao, algunos disponen de una serie de accesorios como sistemas de agitacin, que imprim en al medio calefactor un movimiento cuidadosamente
controlado para mantener la temperatura lo

ms uni forme posible. Se muestra a continuacin una tabla que describe los principales tipos de baos de Mara.
Tipos de baos de Mara
CLA
SE
Baja temperatura
RANGO DETEMPERATURA
Temperatura ambiente hasta 60 C
Temperatura ambiente hasta 100 Ccon cubierta
Alta temperatura
Temperatura ambiente hasta 275 C. Cuandose requiere lograr temperaturas

superioresa los 100 C, es indispensable utilizar fluidos diferentes al agua, debido a
que el punto de ebullicin de la misma a condicionesnormalesesde 100 C.
Este tipo de baos utiliza generalmente aceitescuyos puntos deebullicin son
mucho ms elevados.
Isotrmicos
Temperatura ambiente hasta 100 Ccon accesorios y/o sistemasde agitacin (con
agua)
56
Bario de Marfa
CAPITULO 5
I_
CONTROLES BANOS DE MARiA

Los banos de Maria tienen por lo general
controles
muy
sencillos.
Algunos
fabricantes han incorporado en sus llneas
de
fabricaci6n
controles
con
microprocesadores . Estos va rian
dependiendo del tipo de baf\o. A conti
nuaci6n, se presenta el esquema del panel
de control de un bano de Maria basico.
4.Pantalla
1. lnstalar el bano de Maria en un lugar que se encuentre

cerca de una toma electrica, con la capacidad de
suministrar energia
5. Piloto 1.Control encendido

encendidoy apagado
2.Bot6n menu
\
6.Pilotos escala temperatura
(C, F)
3. Botones
ajuste parametros
llustraci6n 18: Control de bano de

Maria
Como puede apreciarse el control dispone

de estos elementos:
3.
4.
5.
6.
1. Un interrupter de encendido y
apagado
2. Un bot6n de Menu para
seleccionar los pa rametros de
operaci6n:
temperatura
de
operaci6n,
temperatura
accionamiento alarma, escala de
temperatura (C,F)
Dos botones para ajuste de parametros
Una pantalla
Piloto de encendido
Pilotos (2) para identificar escala de tem
peratura (C,F)
OPERACION DEL BANO DE MARiA

lnstalaci6n
electrica de acuerdo con los

voltajes y fre cuencias que
utiliza el equipo para su
operaci6n normal. Dicha toma
debe dis poner de su
respectiva conexi6n a tierra
-polo
a
tierra-,
para
garantizar la protec ci6n y
seguridad del operador y
del equi po. Generalmente
operan con 120 V/60 Hz o
con 230 V/60Hz. Asimismo,
se facili ta la instalaci6n y
uso si el lugar seleccio nado
se encuentra cerca de un
vertedero que disponga de
los servicios de suminis tro y
recolecci6n de agua.
2. Verificar
que
el
lugar
seleccionado este ni velado y
disponga de la resistencia
reque rida para sostener, con
seguridad, el peso del baf\o
de Marla cuando se encuentre
lleno de fluido.
3. Observar
que
el
lugar
disponga de espa cios libres
adecuados, para colocar las
muestras
y
accesorios
requeridos para la normal
operaci6n del bafio de Marla.
4. Evitar colocar el baiio de

Maria
donde
existan
corrientes de aire fuertes que pue dan

interferir con su normal operaci6n. Por
ejemplo: frente a una unidad de aire
acondicionado tipo ventana .
Seguridad
1. Evitar el uso del bano de Maria en
ambien tes en los que esten presentes
materiales inflamables o combustibles. El
equipo
con
tiene
componentes
-resistencias que gene ran temperaturas
muy altas- que podrian iniciar un incendio
o explosi6n accidental.
2. Conectar siempre el equipo a una toma
electrica que disponga de polo a tierra, pa
ra proteger al usuario y al equipo de des
cargas electricas. La acometida electrica
debe cumplir con la normatividad exigida
en el laboratorio y el pais.
3. Trabajar
el
bane
de
Marla
exclusivamen te con liquidos que no
sean corrosives ni inflama bles.
4. Trabajar el bano de Marla utilizando ele
mentos de protecci6n personal. El bano
57
tiene
compon
entes
elementos
resistivos
que
podr
an
causar
quemaduras
si
se
tocan
desprevenidamente, incluso despus de
transcurrido un perodo de tiempo considerable despus de apagar el equipo .
5. Trabajar las sustancias que generan humos
colocando el bao de Mara dentro de una
cabina extractora de humos o en un lugar
muy bien ventilado.
6. Recordar que los lquidos que se trabajan
dentro del recipiente del bao de Mara pueden producir quemaduras si inadvertidamente se coloca la mano dentro del mismo.
7. Tener en cuenta que el bao de Mara est diseado para ser utilizado con un lquido en el interior del recipiente. Si el mismo
se seca, la temperatura del recipiente puede llegar a ser muy alta. Utilizar siempre
la bandeja difusora para colocar los
recipientes dentro del tanque del bao
de Mara. Esta ha sido diseada para
distribuir la temperatura de forma uni
forme.
8. Evitar utilizar el bao de Mara si alguno
de los controles falla: el de temperatura o
el de lmite.
Uso del bao de Mara

Antes de usar el bao de Mara, se debe verificar que el mismo se encuentra limpio y que se
encuentran instalados los accesorios que van a
utilizarse. Los pasos que normalmente se
siguen son estos:
1. Llenar el bao de Mara con el fluido que habr de utilizarse para mantener uni forme la
temperatura agua o aceite. Verificar que,
colocados los recipientes que van a calentarse, el nivel del mismo se encuentre entre 4 y
5 cm del borde superior del tanque.
2. Instalar los instrumentos de control que,
como termmetros y agitadores, puedan
ser requeridos. Utilizar los aditamentos de
1
2
mon taje que, para el efecto, suministran los

fabricantes. Verificar la posicin del bulbo
del termmetro o de la sonda trmica, para
asegurar que las lecturas sean correctas.
3. Si se utiliza agua como fluido de
calentamiento, verificar que la
misma sea limpi a. Al- gunos
fabricantes recomiendan aadir productos que eviten la formacin de
algas.
4. Colocar el interrup tor principal N 11
en la posicin de encendido .
Algunos fabricantes han incorpor
ado
controles
con
microprocesadores que inician rutinas de
auto- veri ficacin, una vez que se
acciona el interrup tor de
encendido .
5. Seleccionar la temperatura de
operacin. Se utilizan el botn de
Men N 2 y los botones para
ajuste de parmetros.
6. Seleccionar la temperatura de corte
en aquellos baos que disponen de
este control. Este es un control de
segurid ad que corta el suministro
elctrico, si se sobrepa- sa la
temperatura seleccionada. Esta se
selecciona tambin a travs del
botn de Men y se controla con los
botones de ajuste de parmetros.
7. Evitar utilizar el bao de Mara con
sustancias como las que se indican a
continuacin2:
a)
Blanqueadores.
b) Lquidos con alto contenido de cloro.
c) Soluciones salinas dbiles como cloruro de
sodio, cloruro de calcio o compuestos de
cromo.
d) Concentraciones fuertes de cualquier
cido.
e) Concentraciones fuertes de cualquier sal.
f) Concentraciones dbiles de cidos hidro clrico, hidrobrmi co, hidroidi co, sulfrico o crmico.
g) Agua desioni zada, pues causa corro sin y tambin perforaciones en el acero
inoxidable.
Los nmeros que identifican los controles corresponden exactamente a los mostrados en el esquema de los baos de Mara.
Fisher Isotemp economy water baths, Instructions: Fisher Scientific, Part N 103412, Rev. E., 2004.
58
Bao de Mara
4. Limpiar el interior del tanque con un

detergente suave. Si se presentan
indicios de corrosin, existen en el
mercado sustancias para limpi ar el
acero inoxidable. Frotar suavemente
con esponjas sintticas o equivalentes. Evitar la utilizacin de lana
de acero para remover manchas de
xido, debido a que las mismas
dejan partculas de acero que podr an
acelerar la corrosin.
Mantenimien to
Adver tencia: Antes de efectuar cualquier

actividad de mantenimiento, desconectar el
equipo de la toma de alimentacin
elctrica.
Los baos de Mara son equipos que no son

muy exigentes desde el pun to de vista de
mantenimiento. Las rutinas recomendadas
estn principalmente enfocadas a la limpi eza
de los compon entes externos. A continuacin, se sealan las rutinas ms comunes.
Limpieza
Frecuencia: Mensual
1. Apagar y desconectar el equipo . Esperar a
que el mismo se enfre para evitar riesgos
de quemaduras accidentales.
2. Extraer el fluido utilizado para el calentamiento. Si es agua, puede verterse a un sifn. Si es aceite, recolectar en un recipiente con capacidad volumen adecuada.
3. Retirar la rejill a de difusin trmica que se
encuentra ubicada en el fondo del tanque.
5. Evitar doblar o golpear el tubo capilar

del control de temperatura que
generalmente se encuentra ubicado
en el fondo del tanque.
6. Limpiar con agua limpi a el exterior y
el interior del bao de Mara.
Lubricacin
Frecuencia: Diaria
Esta actividad es para baos de Mara que
disponen de unidad o sistema de agitacin.
Lubricar el eje del motor elctrico del agitador. Colocar una gota de aceite mineral en el
eje, para que se mantenga una buena condicin de lubricacin entre los rodamientos del
motor y el eje del mismo.
PROBLEMA
No hayenergaelctrica.
El baode Mara no calienta.
La temperatura essuperior a la
seleccionada.
Lasmuestras secalientan
lentamente.
La temperatura
aumenta muy
lentamente.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Bao de Mara desconectado.
Conectar baode mara.
Interruptor defectuoso.
Cambiar interruptor.
Fusible defectuoso.
Sustituir fusible.
Control de temperatura
desgraduado.
Resistencia(s) defectuosa(s).
Graduar control de temperatura.

Cambiar resistencia(s).
Control lmite desgraduado.
Graduar control lmite.
Control de temperatura defectuoso.
Cambiar control de temperatura.
Verificar seleccin de
parmetros.
Tanquevaco o con muy poco
fluido.
Resistencia(s) defectuosa(s).
Llenar tanquehasta el nivel recomendado.

Cambiar resistencia(s).
Control de temperatura defectuoso.
Sustituir control de temperatura.
59
DEFINICIONES BSICAS
Agi tador. Dispositivo diseado para aadir
energa cintica a un fluido contenido en un
recipiente, con el fin de mantener homog neas sus propi edades; por ejemplo: temperatura, color, densidad.
positan por atraccin de las cargas elctricas,

sobre la pieza que quiere pin tar, cubrindola
completamente. Se introduce entonces la
pieza cubierta de partculas de pin tura en un
horno elctrico que funde las partculas de
pin tura, haciendo que las mismas se
adhieran con gran fortaleza sobre la pieza.
Bandeja difusora. Dispositivo que se coloca

en el fondo de los baos de Mara, con el fin
de sopor tar los recipientes que se colocan
dentro del tanque; adems, permi te que las
corrientes de conveccin trmica, que se generan en el fluido que contiene el tanque,
circulen de arriba - abajo - arrib a,
manteniendo la temperatura de forma
homog nea en los niveles seleccionados por
el operador. Por lo general, la bandeja
difusora es de acero inoxidable.
Resistencia (elctrica). Propiedad que tienen las diferentes sustancias o materiales, en

vir tud de la cual se impid e en mayor o menor
grado el paso de la corriente elctrica. En los
textos se identifica la resistencia con la letra
[R]. Para un cuerpo de seccin uni forme, por
ejemplo: un alambre, la resistencia [R] es una
magni tud directamente propor cional a la longi
tud [l] e inversamente propor cional al rea
seccional [a]. La resistencia se representa
mediante la siguiente ecuacin:
Fusible . Dispositivo de segurid ad que pro

tege los circuitos elctricos de los excesos
de corriente. Se fabrican con materiales
cuyas dimensiones y propi edades los
habili tan para
dond
e:
trabajar bien dentro de unas condiciones predefinidas. Si por alguna razn se extralimi tan
los parmetros de diseo, se funde el material y se interrump e el paso de corriente.
k = constante que depende de las unidades

empleadas
l = longi tud del conductor
a = rea seccional del conductor
Pintura electrosttica. Procedimiento mediante el cual se genera una gran diferencia

de potencial (80-150 kw) entre la pieza que
se quiere pin tar y la unidad de atomizacin
que suministra la pin tura, en forma de partculas finamente pulverizadas. Las partculas
de pin tura se cargan elctricamente y se de-
La unidad de resistencia es el ohmio y se representa normalmente por la letra griega .
R=kx
l
a
Resistencia de inmersin. Resistencia elctrica que se encuentra instalada dentro de un

tubo sellado. Se utilizan generalmente para
calentar fluidos como agua o aceite.
Bibliogra fa
Fisher Isotemp economy water baths, Instructions: Fisher Scientific, Part N 103412, Rev. E., 2004
Fisher Isotemp water baths, Instructions: Fisher Scientific, Part N 102370, Rev. K., 2004. (htt p:
Venegas, J., Texto de fsica, Fono-foto y electrolog a, Cali, Colombi a, Editorial Norma.
60
Cdigo (s)
ECRI
15-148

Campanas microbiolgicas
CABINA DE SEGURIDA D BIOLGICA
PROPSITOS DEL EQUIPO
Es un equipo diseado para controlar los aerosoles y micropartculas asociados al manejo

del material biolgi co, potencialmente txicos o infecciosos, que se generan en los laboratorios como resultado de actividades como
la agitacin y centrifugacin, el uso y manejo
de pipetas, la apertura de recipientes con
presiones internas diferentes a la atmosfrica, utilizando condiciones apropi adas de
ventilacin. Las cabinas se han diseado
para pro teger al usuario, al ambiente y la
muestra con la que se trabaja. Se las conoce
tambin como Cabinas de flujo laminar y/o
gabinetes de bioseguridad.
La cabina de segurid ad biolgi ca se utiliza

con estos fines:
ILUSTRACIN CABINA DE SEGURIDAD

BIOLGICA
Ilustracin 19: Cabina deseguridad biolgi

ca
1. Proteger al trabajador de los riesgos asociados al manejo de material biolgi co potencialmente infeccioso.
2. Proteger la muestra que se est analizando para que no se contamine.
3. Proteger el medio ambiente.
Las cabinas se utilizan para el trabajo rutinario relacionado con patgenos parsitos,
bacterias, virus, hongos, el cultivo de clulas
y, bajo condiciones muy precisas, el manejo
de los agentes txicos.
La cabina de segurid ad biolgi ca es una

cmara construida generalmente en acero, que
dispone de una ventana frontal en vidrio, de
altura variable que posee un sistema de
ventilacin conformado por un motor

elctrico, un ventilador y un conjun to
de ductos que, al estar funcionando,
generan una condicin de presin
negativa en el interior de la cabina
comparada con la presin del
ambiente en el laboratorio, condicin
que produce que el aire fluya dentro de
la cabina a travs de la abertura
frontal, generando una cortina de aire
que pro tege al operador. In-
ternamente, el aire esconducido a travs de

una serie de rejillas y ductos, para finalmente
ser tratado mediante filtros HEPA1.
Dependiendo del diseo de la cabina, el aire es
reciclado dentro del laboratorio o extrado y
renovado en diversas propor ciones. El aire
que en las cabinas Cla- se II fluye desde el filtro
hacia la superficie de trabajo es de tipo laminar.
A continuacin, se presenta un resumen del
tipo de cabinas existentes y sus principales
caractersticas.
CAPTULO 6
Cabina de seguridad biolgica
HEPA: High Efficiency Particulate Air
61
Resumen cabinas de seguridad biolgi ca
TIPO DE
CABINA
CARACTERSTICAS
Clase I
TipoA
1. Proteccin ofrecida: al operador y

al ambiente.
2. Velocidaddel aire al ingresar a la
cabina: 38 cm/s.
3. Adecuadapara
trabajar
con
agentes clasificados con nivel de
bioseguridad2 1, 2 3.
4. Sistema de filtracin: HEPA,
colocado en la extraccin. Puede
estar o no acoplado a un
sistema de extraccin conectado
al exterior.
5. Desventaja: No protege el
producto con el cual se trabaja.
Clase II
TipoA
1. Proteccinofrecida: al operador, al
producto y al ambiente.
cabina: 38 cm/s.
3. Adecuadapara
trabajar
con
bioseguridad 1, 2 3.
4. Sistema de filtracin: dos filtros
HEPA,
unocolocadosobre
lasuperficie de trabajo; el
segundoen el sistema de extraccin de la cabina, el cual
puede estar o no acoplado a un
sistema de extraccin conectado
al exterior. Si se acoplan al
exterior, utiliza un acople tipo
campana.
5. Reciclan aproximadamente el 70
1. Proteccin ofrecida: al operador, al
producto yal ambiente.
2. Velocidaddel aireal ingresar a la
cabina: 50,8 cm/s.
3. Adecuadapara
trabajar
con
agentesclasificadosconnivel
debioseguridad1, 2 3.
4. Sistemade
filtracin:
dos
filtrosHEPA.Ex- traemediante un
ducto
el
aire
potencialmentecontaminado(70%)
yrecicladentro
de
la
cabinadespusde filtrarlo el aire
tomado del exterior, a travs de la
rejilla frontal (30%).
5. Todos los ductos biolgicamente
contaminados
presurizados
negativamente.
Clase II
Tipo B1
ILUSTRACI
N
Ver clasificacin de niveles de bioseguridad de los agentes en el subttulo Seguridad biolgi ca, ubicado a continuacin
del resumen de las cabinas.
62
Cabina de seguridadbiolgica
TIPO DE
CABINA
Clase II
Tipo B2
Clase II
Tipo B3 o
A/B3
Clase
III
ILUSTRACI
N
CARACTERSTICAS
cabina: 50,8 cm/s.
3. Adecuadapara
trabajar
con
4. Sistemade
filtracin:
dos
filtrosHEPA. Se le conoce como
cabina de extraccin total. No
tienen
ningn
tipo
de
recirculacin.
5. Todos los ductos biolgicamente
contaminados
presurizados
negativamente.
6. Dispone de ducto de extraccin;
permite trabajar con qumicos
txicos y radionucleidos.
cabina: 50,8 cm/s.
3. Adecuadapara
trabajar
con
4. Sistemade filtracin: dos filtros
HEPA.
5. Todos
los
ductos
biolgicamentecontaminados
presurizados negativamente.
6. Se le conoce como cabina
combinada. Puede conectarse
mediante un ducto y se la
denominacomo deTipoB3.Si carecedel
mismo,
2. Sistema de filtracin: dos filtros
HEPA en serie en la extraccin y
un filtro HE- PA en la admisin.
3. Adecuada para trabajar con
agentes
clasificadosconnivel
debioseguridad4.
4. Cabina totalmente sellada.El
ingreso y extraccin de elementos
se efectan a travs de una caja
de paso de doble puerta. La
manipulacin de los materiales
los realiza el investigador, a travsde guantessellados en el
frente de la cabina.
63
SEGURIDAD BIOLGICA3
Los microorg anismos, con base en el anlisis

de factores como la patogenicidad, la dosis
infecciosa, los modos de transmisin, la variedad de huspedes que pueden utilizar, la disponibilid ad de medidas preventivas y tratamientos efectivos, han sido clasificados en
cuatro categoras:
Entre los servicios que se requieren para que

una cabina funcione adecuadamente, se encuentran los siguientes:
1. Nivel de riesgo 1. Lo conforman agentes

biolgi cos que es muy improb able que causen enfermedades en humanos sanos o animales. (Bajo riesgo individual y comuni tario).
2. Nivel de riesgo 2. Lo conforman patgenos que pueden causar enfermedades a
los humanos o animales; pero en circunstancias normales es improb able que sean
peligrosos para trabajadores de los laboratorios, la comunid ad, los animales domsticos o el ambiente. Las exposiciones en el
laboratorio raramente producen enfermedades graves; hay disponibl es medidas
preventivas y tratamientos efectivos y el
riesgo de diseminacin es limi tado. (Riesgo individual moderado, riesgo comuni tario limi tado).
3. Nivel de riesgo 3. Son patgenos que
usualmente causan enfermedades graves
a los seres humanos y a los animales, y
producen un impacto econmico serio;
sin embargo, no es comn su contagio por
contacto casual de un individuo a otro. Las
enfermedades que producen son tratables
por agentes antimicrobiales o antiparasitarios. (Alto riesgo individual, bajo riesgo
comuni tario).
4. Nivel de riesgo 4. Son patgenos que
usualmente producen enfermedades muy
graves para los seres humanos o los
animales, las cuales a menudo no
disponen de tratamientos y se contagian
fcilmente de un individuo a otro o de
animal a humano o viceversa, directa o
indir ectamente o por contacto casual.
(Alto riesgo individual, al- to riesgo comuni
tario).
1. Un rea dentro del laboratorio pro tegida

de las corrientes de aire que provienen de
ventanas o sistemas de aire acondicionado. Igualmente la cabina debe ubicarse
alejada de las zonas de circulacin del laboratorio, para evitar que las corrientes
de aire producidas por el paso de personas
pudiera llegar a afectar la cortina de aire
dentro de la cabina. Tambin se debe verificar que la cabina no se instale al lado de
otro tipo de cabinas, como las utilizadas
para extraer vapores qumicos.
2. Una acometida elctrica, dotada de los
respectivos elementos de control y seguridad; una toma elctrica con polo a tierra.
3. Una mesa firme y bien nivelada, diseada
para sopor tar el peso de la cabina y
permitir al operador trabajar con
comodid ad. Debe disponer de espacio
libre para colocar los pies y su altura
debe ser adecuada.
4. El piso del lugar debe ser plano y estar
bien nivelado.
5. Deben respetarse las reas libres que recomienda el fabricante alrededor de la cabina. Asimismo debe veri ficarse que la altura piso - techo del sitio donde se instala
sea la recomendada, para que pueda funcionar sin inconvenientes.
6. Las cabinas tipo B requieren necesariamente un ducto de extraccin, el cual debe estar dotado de los dispositivos de control requeridos: vlvulas reguladoras que
permi tan aislar o regular el flujo de aire.
7. Las acometidas de gases deben encontrarse en la vecindad inmediata de la cabina,
a fin de facili tar la conexin a las vlvulas
de servicio.
The Laboratory Biosafety Guidelines, 3rd. Edition-Draft , Health Canada, 2001.
64
8. La cabina debe certificarse anualmente para

veri ficar el cumplimi ento de los requisitos
establecidos en la Norma NSF 49.
USO
DE
LA
CABINA
La correcta utilizacin de la cabina de seguridad biolgi ca se logra al cumplir las siguientes indicaciones:
1. Planificar con anticipacin el trabajo que
se realizar en la cabina de segurid ad
biolgica.
Determinar
qu
procedimientos
y
equipos
sern
utilizados. Coordin ar con los dems pro
fesionales del laboratorio el tiempo de
utilizacin de la cabina, a fin de evitar
interrupciones o trfico indesea- do
mientras la misma est en uso.
2. Encender la cabina. Apagar la lmpara UV
si la misma se encuentra encendida. Encender la lmpara de luz fluorescente y el
ventilador de la cabina. Verificar que las
rejill as, delantera y trasera, se encuentran
libres de obstrucciones. Preparar el rea
de trabajo. Permi tir que la cabina funcione libremente por al menos 15 minu tos.
3. Lavar las manos y antebrazos con jabn
germicida. Vestir los elementos de pro teccin personal: bata/gabacha de manga larga con puos ajustados, anteojos pro tectores y mscara, si la situacin lo amerita.
Preparar las superficies interiores de la cabina aplicando etanol al 70 % o un desinfectante adecuado. Permi tir que estas se
sequen por la accin del flujo del aire.
4. Cargar e instalar nicamente los materiales y equipos requeridos por la prueba o
ensayo. Diferenciar las reas limpi as de
las reas sucias. Colocar el material de
forma que no se crucen los materiales
sucios con los materiales limpios, ni se
impid a la libre circulacin del aire interno
a travs de las rejill as delanteras o
traseras. Colocar una bolsa de biosegurid
ad para almacenar los materiales
desechados,
un
recipiente
con
desinfectante para las pipetas y un recipiente para guardar los elementos pun tia-
gudos. Evitar colocar objetos muy grandes, cerca

uno de otro, dentro de la cabina.
Al finalizar la colocacin de los

elementos, se debe permi tir que el
flujo de aire barra la cabina durante
aproximadamente 3 5 minu tos,
para elimin ar cualquier partcula que
se hubiera producido o liberado durante la carga de materiales y
equipos.
5. Iniciar
las
actividades.
Introducir lentamente las
manos en el rea de trabajo.
Realizar los procesos y tareas
de
forma
metdica
y
cuidadosa; de las reas limpi
as a las reas potencialmente
contaminadas. Mantener los
elementos al menos 10 cm
detrs de la rejilla fron tal;
procurar realizar las actividades que pudieran resultar ms
contaminantes o riesgosas
hacia el fondo del rea de
trabajo de la cabina. Evitar el
uso de lla- mas abiertas como
las de los mecheros, pues
rompen el patrn de
flujo
laminar y se corre el riesgo de
quemar el fil tro. Evitar retirar
las manos del rea de trabajo
hasta
que
todos
los
procedimientos progr amados
hayan sido realizados y el
material
potencialmente
peligroso haya sido dispuesto
en la bolsa de biosegurid ad o en los

recipientes dispuestos para las
pipetas y los objetos cortopun
zantes.
6. Limpiar la cabina, permi tiendo que
el aire fluya libremente por 3 5
minu tos al terminar todos los
procedimientos.
7. Descon taminar la superficie de
todos aquellos materiales y equipos
que hayan estado en contacto con el
material
biol
gicamente
contaminado. Aplicar etanol al 70 %
o un desinfectante adecuado y permitir que el mismo se seque. Levantar
los equipos y materiales y desinfectar
el rea ubicada debajo de los
mismos.
Cubrir
los
recipientes
abiertos antes de ser removidos del
rea de trabajo. Remover los materiales segn corresponda (a la
incubadora, al autoclave).
8. Descartar los guantes y dems
elementos de pro teccin personal.
Disponerlos de la forma establecida
en el laboratorio. Lavar las manos
con agua y jabn abundantes.
9. Apagar el ventilador, la lmpara
fluorescente; cerrar la abertura fron
tal y encender la lmpara ul
travioleta.
65
Nota: En caso de que se presente un

derrame dentro de la cabina mientras la
misma est en uso, esta debe mantenerse en
operacin y todos los objetos o equipos que
resulten invo- lucrados deben recibir un
proceso de descontaminacin de superficie.
Esto evitar que se liberen contaminantes
desde la cabina.
Descon taminacin de la cabina

La descontaminacin de la cabina de seguridad biolgi ca es una actividad que debe realizarse de forma previa a la realizacin de
trabajos de mantenimiento que impliqu en
apertura de sus superficies o compon entes
internos. Siempre que se requiera efectuar
alguno de los procesos que se indican a continuacin, previamente debe descontaminar- se
la cabina.
1. Cambio de fil tros.
Adver tencia: El mantenimiento de los
compon entes internos solo debe ser realizado por personal entrenado y debidamente certificado. Para efectuar el mantenimiento de los compon entes internos,
previamente debe efectuarse una descontaminacin. Para realizar las rutinas, deben
usarse elementos de pro teccin personal.
El mantenimiento general requerido por la

cabina de segurid ad biolgi ca es, en general,
sencillo de realizar. Las rutinas y las frecuencias se muestran a continuacin.
Frecuencia: Semanal
1. Descon taminar la superficie de trabajo y
las superficies interiores de la cabina con
etanol al 70 %.
2. Realizacin de pruebas que requieran acceder a las superficies interiores o expuestas de la cabina.
2. Limpiar el cristal de la puerta fron tal y la

superficie de la lmpara ultravioleta, utilizando una solucin limpi adora domstica.
3. Antes de realizar pruebas de certificacin

cuando la cabina haya sido utilizada con
agentes clasificados como de riesgo biol gico de nivel 2 3.
3. Verificar la lectura del manmetro de presin que permi te conocer la magni tud de
la cada de presin del aire, que fluye a
travs del fil tro HEPA. Registrar la fecha y
la lectura en la bitcora de la cabina.
4. Antes de trasladar la cabina a una localizacin diferente.

5. Cuando se hayan presentado derrames de
sustancias con agentes de alto riesgo.
El procedimiento de descontaminacin ms
adecuado debe definirlo el pro fesional responsable de la segurid ad industrial y riesgos
pro fesionales. En el anexo G del Estndar
NSF
49,
se
encuentra
descrito
el
procedimiento para descontaminar las
cabinas utilizando
Pa- raformaldehdo
despolim erizado. Exclusiva- mente pro
fesionales que hayan recibido la capacitacin
correspondi ente deben realizar dicho
procedimiento.
Frecuencia: Mensual
1. Limpiar las superficies exterior es, en especial, el frente y la parte superior utilizando
una pieza de tela hmeda, a fin de retirar
el polvo.
2. Desin fectar y remover la superficie de trabajo con etanol al 70 % o una solucin desinfectante adecuada.
3. Desinfectar la superficie del compartimiento inferior con etanol al 70 % o una
solucin desinfectante adecuada.
4. Verificar el estado de las vlvulas de servicio.
5. Realizar las tareas de frecuencia semanal.
66
Frecuencia: Anual
2. Levantar la ventana fron tal a su

mxima posicin.
1. Efectuar el proceso de certificacin segn lineamientos establecidos en la Norma NSF

49.
3. Descon taminar
las
superficies
interiores y la lmpara UV.
2. Verificar con un radimetro la intensidad

de la lmpara UV4. Sustituir si es del caso.
4. Desconectar la alimentacin elctrica

a la cabina.
3. Comprob ar el estado de la lmpara fluorescente. Sustituir si es del caso.
5. Desencajar el tubo UV de sus

conectores girndolo 90 grados; a
continuacin, instalar un repuesto
de las mismas caractersticas del
origin al. Algunos fabricantes han
instalado las lmparas sobre una
placa localizada en el frente de la
cabina, que es necesario destornill ar
y levantar para que quede a la vista el
mon taje de la lmpara. Una vez
hecho esto, se puede sustituir la
lmpara como se indic al inicio de
este numeral.
4. Realizar las tareas de frecuencia mensual.
Remocin de la super ficie de trabajo

Para la remocin de la superficie de trabajo,
se requiere realizar lo siguiente:
1. Descon taminar la superficie antes de
removerla.
2. Aflojar y remover los tornillo s de fijacin
ubicados en la parte delantera de la
superficie de trabajo.
3. Aflojar pero no retirar los tornillo s de fijacin ubicados en la parte trasera.
4. Levantar del borde fron tal y retirar halando hacia la parte fron tal de la cabina.
5. Descon taminar la parte interior de la superficie de trabajo.
6. Al ensamblar, realizar en orden inverso las
actividades descritas en los numerales 2, 3
y 4.
Cambio de la lmpara ultraviole ta

Para cambiar la lmpara ul t ravioleta, deben
seguirse las indicaciones del fabricante. Por
lo general, se efectan los sigui entes
procedimi entos:
1. Encender la cabina y dejarla funcionar durante cinco minu tos.
Mantenimien to especializado
Eventualmente, la cabina podra requerir
mantenimiento especializado. Se indican a
continuacin algunos procedimientos que
tendran que ser contratados con firmas especializadas cuando se requiera y que tendran que realizarse siguiendo las indicaciones que los productores han consignado en
sus manuales de servicio tcnico.
1. Certificacin anual de acuerdo a los lineamientos de la Norma NSF 49.
2. Cambio de motores. Generalmente, utilizan rodamientos sellados libres de mantenimiento y funcionan por induccin mediante control de frecuencia, por lo que
carecen de escobill as. Pueden t rabajar
aos(*)5.
3. Cambio de ventiladores. (*)
4. Cambio de fil tro HEPA. (*). La frecuencia
de cambio depende de la intensidad de
uso de la cabina y del sistema de control
ambiental que se tenga instalado en el
laboratorio.
4
5
La vida til de las lmparas UV es de aproximadamente 7 500 horas. Algunos fabricantes sugieren sustituirla anualmente.
(*) Requieren procedimientos especializados de descontaminacin previa.
67
Si hay un buen control de aspectos como

el polvo, el fil tro podra llegar a durar muchos aos.
5. Reparacin del sistema electrnico de control:
alarmas de control de flujo, posicin de la
ventana, controles de velocidad.
6. Reparacin / limpi eza de vlvulas reguladoras
de flujo, ajuste de acoples tipo campana.
Certificacin de la cabina
El proceso de certificacin de las cabinas de
segurid ad biolgi ca est reglamentado por
el Estndar NSF 49, el cual aplica a todas las
cabinas Clase II. El mismo define materiales,
crite- rios de diseo y construccin,
parmetros de operacin y pruebas que permi
ten garantizar que la cabina es segura y
adecuada para los trabajos que se realizan en
ella. Se presenta a continuacin la lista de
pruebas que incluye el estndar mencionado.
Detalles de los mismos deben consultarse en
el Estndar. El proceso de certificacin incluye
las siguientes pruebas:
1. Prueba de estanqueidad .
sobre
las
superficies
Determina si union es,
penetraciones y solda- duras
de fugas.
Se realiza
exteriores.
empaques,
estn libres
2. Prueba de fugas de los fil tros HEPA. Determina la integridad de los fil tros HEPA
de suministro y extraccin, sus alojamientos y marcos de mon taje.
3. Prueba de aumento de tempera tura.
Determin a cul es el aumento mximo de
temperatura en la cabina, cuando en la
misma se encuentran en operacin el ventilador y las luces.
4. Prueba de ruido . Determin a cul es el nivel de ruido producido por la cabina.
5. Prueba de intensidad luminosa. Determina cul es la intensidad luminosa en la
superficie de trabajo de la cabina.
6. Prueba de vibraciones. Determina la cantidad de vibracin presente en la cabina,
cuando la misma se encuentra
funcionando.
7. Prueba de proteccin al personal,

al producto y ensayos biolgi cos
de contaminacin cruzada. La
prueba determina si los aerosoles
son contenidos por la cabina, si los
contaminantes externos alcanzan la
zona de la mesa de trabajo y si los
aerosoles son reducidos por la
cabina.
8. Prueba de estabilidad . Determin a
si la cabina tiene estabilid ad
estructural. Analiza la resistencia al
volcamiento, a la distor- sin por el
efecto de fuerzas aplicadas, a la
deflexin de la superficie de trabajo
sometida a condiciones de carga y
la resistencia al ladeo de la
superficie
de
trabajo
bajo
condiciones de carga.
9. Prueba de velocidad del flujo ver
tical. De- termina la velocidad del
aire que se desplaza verticalmente
hacia la superficie de trabajo.
10.
Prueba de velocidad del
flujo de ingreso. Determin a la
velocidad a la que ingr e- sa el flujo
a la cabina, a travs de la abertura
fron tal, y el volumen de extraccin
de la cabina.
11.
Prueba de patrones de
humo. Determi- na si el flujo del
aire, a lo largo de todo el permetro
de la abertura fron tal, va hacia la
cabina y si el flujo vertical va hacia
abajo, no presenta pun tos
muertos o reflujos sobre la
superficie de trabajo.
12.
Prueba
de
fugas
del
drenaje . Define la capacidad de
contencin de derrames bajo la
13.
Prueba de funciona mien to
del sistema motor/ven tilador .
Determin a si el sistema brind a la
presin esttica requerida.
14.
Prueba
del
sistema
elctrico. Determin a si existen
riesgos potenciales de descargas
elctricas. Mide las corrientes de
fuga,
la
polaridad,
el
funcionamiento del sistema de
pro teccin de fallas de tierra y la

resistencia del circuito a tierra.
68
EVALUACIN FUNCIONAL (ALTERNATIVA)

En caso de que se dispongan cabinas de
seguridad biolgi ca en el laboratorio, pero no
se encuentren en la zona de ubicacin del
laboratorio de servicios autorizados de
certificacin, el personal responsable de
mantenimiento tiene la alternativa de efectuar
procedimientos de revisin anuales basados
en el Estndar NSF 49 que, debidamente
documen- tados, permi tiran identificar con
bajos niveles de incertidumbr e si la cabina se
encuentra en buen estado y su operacin es
normal6. Como actividades a realizar se
destacan las siguientes:
1. Evaluacin de instalacin. Verifica que
las condiciones de instalacin de la
cabina
estn de acuerdo con las recomendaciones

que al respecto ha definido el fabricante.
2. Evaluacin operacional . Compru eba
que la cabina funciona de acuerdo
con sus caractersticas de diseo y
fabricacin.
3. Evaluacin de desempeo . Verifica
la capacidad de la cabina para brind
ar un espacio adecuado de trabajo
en
condiciones
de
operacin
normales y crticas.
En la tabla que se incluye a continuacin se
sealan los parmetros a tener en cuenta en la
evaluacin funcional, los cuales por lo general se incluyen en la planilla7 de inspeccin
que se disea para el efecto.
Tabla de evaluacin funcional de cabinas de seguridad biolgi ca
PARMETROS
Identificacin institucional de la
cabina
Elctricos
Voltaje
Medicin de voltaje. Requiere voltmetro.
Amperaje
Motor/ventilador
Iluminacin
OBSERVACI
N cdigo de inventario, fecha.
Marca, modelo, tipo, serie, ubicacin,
- Fluorescente
- Ultravioleta
Medicin de amperaje. Requiere voltmetro o pinza

amperimtrica.
Verificacin de temperatura de operacin. Verificar nivel de ruido y
vibracin.
Confirmacin del nmero de horas de operacin de las lmparas y de su
intensidad lumnica. Requiere radimetro.
Tomaselctricas
Revisin de integridad, calidaddel contacto y voltajesdisponibles.
Interruptores
Control de estadoe integridad.
Integridadcablesy conectores
Verificacin visual.
Alarmas
Comprobacin de estado y calibracin.
Fsicos
Acabados internos/externos
Verificacin visual.
Estado filtros y prefiltros
Verificacinvisual. Nodebenexistir fugas ni enel material filtrante ni en

lossellos.
Verificacin visual. No deben existir fugas.
Empaquesy sellos
Ventanadeslizante
Operacionales
Velocidaddel flujo
Nivel de ruido
Verificacinvisual.Debepodermoversesuavementeyconservar
lasposicionesseleccionadas.
Control develocidadesdeacuerdoconlaclasey
tipodecabina.Requiereanemmetro.
Requiere sonmetro.
Diferencial de presin en el filtro HEPA
Tomar lectura del manmetro de la cabina.
La evaluacin funcional se fundamenta necesariamente en la disponibilid ad institucional o zonal de

tcnicos e ingenieros debidamente capacitados y experimentados.
7
Cada institucin disea sus propios formatos para el registro administrativo y tcnico de mantenimiento.
69
PARMETROS
OBSERVACI
N
Desempeo
Conteo de partculas
Mtodo definido en los Federal Standard 209D, E. Requiere generador de

DOP, fotmetro y contador de partculas.
Condiciones del rea de instalacin

Temperatura
Requiere termmetro: aproximada de 20-22 C.
Humedad
Requiere higrmetro: aproximada de 45-55 %.
Limpieza
Debe ser adecuada.
Corrientesde aire
No debe haber corrientesque afecten el funcionamiento de la

cabina.
Tabla de solucin de problema s8
PROBLEMA
No encienden la luz ni el sistema
de ventilacin de la cabina.
CAUSA PROBABLE
Cabina desconectadade la toma
elctrica.
No hay alimentacin elctrica en
la acometida.
El ventilador de la cabina funciona,

pero la lmpara no enciende.
El ventilador nogira pero la

luzenciende.
El manmetro indica un aumento

en la cada de presin a travs del
filtro.
Lmpara defectuosa.
Verificar que la cabina est conectada a

una toma elctrica y que el cable est
bien conec- tadoen la caja elctrica de
la cabina. que la
Confirmar
tomaelctricaestenergiza- da y que el
disyuntor no est desactivado
proteccin termomagntica. Inicializar
nuevamente los interruptores.
Reemplazar la lmpara. Utilizar una de
las mismas caractersticasde la original.
Lmpara mal conectada.
Revisar laconexin de la lmpara.Ajustar

a la posicin correcta.
Proteccin termomagntica del

disyuntor activada.
Reconectar el disyuntor.
Alambradode la lmpara
desconectado.
Balasto de la lmpara
defectuoso.
Ventana frontal cerrada.
Revisar alambrado de la lmpara.
Motor del ventilador

defectuoso.
Motor del ventilador desconectado.
Reemplazar balasto.
Abrir la ventana hasta la posicin de
trabajo.
Reemplazar el conjunto motor-ventilador.
Revisar lasconexionesdel motor.
La retencin de partculas en el
filtro HEPA ha aumentado.
Proceso normal durante la vida til del

filtro.
Bloqueo en las rejillas o

ranuras de retorno.
Verificar que las rejillas no seencuentren

obs- truidas con algnequipo o material.
Obstruccin en el conducto de
extraccin.
Comprobar que no existan bloqueos o

restriccionesen el conducto de
extraccin.
Verificar
que el conducto bajo la superficie
Bloqueo o restriccin bajo la

REMEDIO
de trabajo seencuentre libre de

obstrucciones.
Puri fier Delta Series, Biological Safety Cabinets, Users Manual, Kansas City, Labconco Corpor ation, Part N
36960-20, Rev. A ECO B296.
70
PROBLEMA
Se presenta contaminacin en las
muestras que se trabajan en la
cabina.
CAUSA PROBABLE
Procedimientos de trabajo
inadecuados.
Restriccionesen las ranuras de
retorno o bloqueo del ducto de
extraccin.externos a la cabina
Factores
afectan los patrones de flujo
dentro de la misma y causan
contaminacin.
Filtro
HEPA defectuoso.
DEFINICIONES
BSICAS
Aerosol. Suspensin de partculas diminu tas

slidas o lquidas que se dispersan en un gas.
El dimetro medio de las mismas oscila entre
10-4 y 10-7 cm.
Aire de suministro. Aire que entra a la cabina a travs de la abertura fron tal o de trabajo y que reemplaza el aire extrado de la
cabina.
Cabina de seguridad biolgi ca. Equipo
diseado para controlar aerosoles y micropartculas, asociados al manejo de material
biolgi co potencialmente in feccioso que se
generan en los laboratorios como resultado
de actividades como agitacin y centrifugacin, uso y manejo de pipetas, apertura de
recipientes con presiones in ternas di
ferentes a la atmosfrica, entre otros,
utilizando condiciones apropi adas de
ventilacin, para pro teger al usuario, al
ambiente y la muestra con la que se
trabaja.
Certificacin. Procedimiento mediante el
cual se establece que el funcionamiento de
una cabina de segurid ad biolgi ca cumple
con los cri terios y requerimientos mnimos
para poder operar con segurid ad. El
Estndar NSF 49 aplica a las cabinas Clase II,
Tipo A, B1, B2 y B3.
Descon taminacin . Remocin o destruccin de agentes infecciosos; remocin o neutralizacin de agentes txicos.
Filtro HEPA. Fil tro que t iene la capacidad de
remover partculas cuyo dimetro medio es de
0,3 m con una eficiencia del 99,97 %.
REMEDIO
Revisar que la cabina se utiliza de
acuerdo a los procedimientos y a las
buenas prcticas.
Comprobar
queel retornoyel
sistemadeextrac- cinseencuentren
libresde la
obstrucciones.
Verificar
instalacinde lacabinay
losprocedimientos queseestn realizando.
Sustituir filtro HEPAy certificar la cabina.
Estn construidas de microfibras de boro silicato que han sido unidas con un pegante resistente al agua. El medio fil trante se
encuentra plegado dentro de un marco, con
el fin de incrementar el rea de fil tracin.
Flujo laminar . Fenmeno de la mecnica de
los fluidos, en el cual cada pun to de un fluido
se mueve con velocidad uni forme a lo largo
de lneas paralelas entre s. Se presenta
cuando el nmero de Reynolds [Re] es menor
a 3 000.
Luz ultraviole ta. (UV). Radiacin electromagntica cuya longi tud de onda se encuentra comprendida entre los 200 y los 390 nm. Se
utiliza en las cabinas de segurid ad biolgi - ca
porqu e tiene propi edades bactericidas.
NSF. Acrnimo de National Sanitation Foundation, organizacin sin nimo de lucro dedicada a la investigacin, educacin y el servicio, que busca resolver probl emas que relacionan al ser humano y su entorno. Su misin
es promo ver la salud y el enriqu ecimiento de
la calidad de vida, a travs de la conservacin
y el mejoramiento del ambiente. Los estndares de la NSF suministran los cri terios bsicos
para promo ver la salubrid ad y la pro teccin
de la salud pblica.
Super ficie de trabajo . Superficie que se
utiliza cuando se realiza algn trabajo,
operacin o actividad dentro de la cabina
de seguridad biolgi ca.
Txico. Sustancia que tiene un efecto fisiolgico adverso sobre los sistemas biolgi cos.
71
Bibliogra fa
Cabinas de Seguridad Biolgica. Uso, Desin feccin y Mantenimiento, Washing ton D. C., Organizacin Panamericana de la Salud, 2002.
Class II (Laminar flow) Biohazard Cabinetry, NSF International Standard, NSF-49-1992.
Prez, W., Mantenimiento de cabinas de flujo laminar, Memorias Taller Internacional sobre
Calidad en el Laboratorio de Salud Pblica, Bogo t, Instituto Nacional de Salud, 2003.
Personnel & Product Protection: A Guide To Biosafety Enclosures, Kansas City, Labconco
Corpor ation, 1993.
Primary Containment for Biohazards: Selection, Installation and Use of Biological Safety
Ca- binets, Washing ton D. C., U.S. Department of Health and Human Services, Centers for
Di- sease Control and Prevention and National Institutes of Health, 2nd. Edition, 2000.
Puri fier Delta Series, Biological Safety Cabinets. Users Manual, Kansas City, Labconco Corporation, Part N 36960-20, Rev. A ECO B296.
The Laboratory Biosafety Guidelines, 3rd. Edition-Draft , Health Canada, 2001.
(www .Hc-sc.gc.ca/hpb/lcdc/biosafety)
72
Denominacion (es) ECRI
Centrif ugas de pie, baja velocidad, no refrige radas, para banco

15-115
Centrif ugas de pie
Centrif ugas de pie, baja velocidad, refrigeradas
15-116
15-117
CENTRiFUGA
La palabra centrifuga proviene de la palabra
la tina centrum que significa centro y de la
palabra fugare que significa huir. La
centrffuga esta di senada para utilizar la
fuerza centrifuga que se genera en los
movimientos de rotaci6n, con el fin de separar
los elementos constituyentes de una mezcla.
Existe una amplia diversidad de centrifugas
para poder atender necesidades es pecificas de
la industria y la investigaci6n. El pre sente
capitulo se enfoca en analizar las centrifu gas
que normalmente utilizan los laboratorios
dinicos y de salud publica.
FOTOGRAFiA V ESQUEMA 1
Corte de la centrffuga 2
PROPOSITO DE LA CENTRiFUGA
Fotografia
1
2
La centrffuga se ha disenado para utilizar la

fuerza centrifuga -fuerza que se genera cuan
do un objeto rota alrededor de un punto-,
para separar s61idos suspendidos en un
medio llquido por sedimentaci6n o para
separar 11- quidos de diversa densidad. Los
movimientos rotacionales permiten generar
fuerzas mucho mas grandes que la
gravedad, en periodos controlados de
tiempo. En el laboratorio las
Centrifuges, rotors, tubes and accessories, Beckman Coulter Co. BR8102J.

Los numeros de las partes corresponden a los componentes descritos mas adelante.
73
MANUAL DE MANTEN IMIENTO PARA EQUIPO OE LABORATORIO
centrlfugas se utilizan, en general, en

proce sos como la separaci6n por
sedimentaci6n de los componentes s61idos
de los llquidos biol6- gicos y, en particular,
en la separaci6n de los componentes de la
sangre: gl6bulos rojos,
gl6bulos blancos, plasma y plaquetas, entre
otros, y para la realizaci6n de multiples prue
bas y tratamientos.
Hay diversas clases de centrifugas, entre las
que se citan las siguientes: la centrffuga de
mesa, la ultracentrifuga, la centrifuga para
microhematocrito y la centrlfuga de pie, que
son las de mas amplio uso en los laboratorios
de salud publica, de investigaci6n y clinicos,
entre otros.
PRINCIPIOS DE OPERAC16N
Las centrifugas son una aplicaci6n practica
de las leyes del movimiento de Newton.
Cuando un cuerpo de masa [m] gira
alrededor de un punto central [O],
experimenta una fuerza [N] denominada
centripeta en la direcci6n del
eje de rotaci6n,de magnitud igual N = -molR,
donde: [m] es la masa del cuerpo,[R] el radio
de giro y <lJ la velocidad angular. La centrifu
ga dispone de un eje -giratorio- sobre el cual
se encuentra montado un elemento denomi
nado rotor,el cual dispone de un sistema de
alojamiento, donde se colocan las muestras.
La velocidad tangencial viene dada por la
ecuaci6n Vt
wR.
Fuerza
/ centrifuga
Fp
Fp
NFp
,-- Rotor
---
Fp
_))vJlg_
----------
coNCEPTo
REALIDAD
RESULTADO
llustraci6n 20: Concepto de fuerza centrffuga

Cuando el sistema gira a una velocidad de w
ra dianes por segundo, las muestras "parecen
sen tir" una fuerza Fp, de la misma magnitud
de N, pero de sentido contrario. A esta fuerza
comun mente se la conoce como fuerza
centrifuga. El esquema mostrado3 representa
la situaci6n mencionada y resalta un
diagrama de cuerpo li bre del concepto, un
diagrama de su aplicaci6n en la realidad y
undiagrama del resultado obte nido. Dicha
fuerza actua sobre las particulas de la
sustancia que esta siendo centrifugada, pro
duciendo que la misma se separe como
resulta do de las diferencias de densidad,de
forma que en el fondo del tubo estaran las
particulas
mas
densas,las
cuales
se
sedimentan en periodos de
tiempo mas cortos, mientras que las mas

ligeras requieren de mayores tiempos de
centrifuga ci6n para poder sedimentarse, y se
encuentran depositadas sobre las de mayor
densidad. La re laci6n entre la aceleraci6n
centrifuga [(fir ] a un radio dado [r] y la fuerza
de la gravedad [g] se conoce como campo o
fuerza centrifuga relati
va [RCF] .
air
RCF =
g
El RCF es la herramienta que permite comparar
rotores de diferentes especificaciones, cuando
se requieren efectos centrifugos equivalentes.
Las leyes del movimiento de Newton,junto con las explicaciones de los marcosinerciales de referenda, pueden
consultarse en libros de fisica. capitulos de movimiento circular uniforme.
RCF. Relative Centrifugal Field, Campo Centrifugo Relativo.
3
74
Centrfuga
4. Base.
COMPONENTES DE LA CENTRFUGA
5. Tapa.
Los compon entes ms impor tantes de una
centrfuga son los siguientes5:
6. Carcaza.
7. Motor elctrico.
El control elctrico/electrnico que dispone

generalmente de los siguientes elementos:
1. Control de encendido y apagado, control
de tiempo de operacin tempori zador,
control de velocidad de rotacin en algunas centrfugas, control de temperatura
en centrfugas refrigeradas, control de
vibraciones mecanismo de segurid ad y
sistema de freno.
2. Sistema de refrigeracin, en las centrfugas refrigeradas.
8. Rotor. Existen rotores de diverso tipo,

los ms comunes son los de ngulo
fijo, los de cubo pivotante, los de tubo
vertical y los de tubo casi vertical, los
cuales se explican a continuacin.
Tipos de rotores
Las centrfugas utilizan diversas clases de rotores. Dentro de los ms utilizados estn los
siguientes:
3. Sistema de vaco, en ultracentrfugas. (No

consta en la ilustracin).
Tipos de rotores
TIPO DE
ROTOR ngulo
Rotoresde
fijo
Rotoresde cubo
pivotante
Rotoresde tubo
vertical
CARACTERSTICAS
ESQUEMA CORTETRANSVERSAL
Son rotores de propsito general. Mantienen

los tubos en un ngulo fijo [ ] que por
diseo est especificado entre los 20 y los
45 grados. Se utilizan para sedimentar
partculas subcelulares. El ngulo acorta la
trayectoria de las partculas y los tiempos de
centrifugado, si se comparan con los
rotoresde cubo pivotantes.
Se utilizan para realizar estudios isopcnicos
separaciones como una funcin de la
densidad y estudios de tasa zonal
separaciones como una funcin de los
coeficientes de sedimentacin, donde
serequiere mxima resolucin dezonas de
la muestra.
Este tipo de rotor mantiene los tubos
paralelos al eje de rotacin. As se logran
obtener bandas se- paradas, a travs del
dimetro de tuboy no la longitud del
tubo. Estos rotoresse usan para realizar
estudios
isopcnicosy
enalgunoscasosseparacio- nes de tasa
zonal, donde la reduccin del tiempo de
centrifugadoes
importante.
Estos
Los nmeros que identifican cada compon ente corresponden a los indicados en el esquema.
75
MANUAL DE MANTENIMI ENTO PARA EQUIPO DE LABORATORIO
TIPO DE ROTOR
CARACTERISTICAS
Rotores
casi que
vertical
Este tipo de rotor esta diseriado para centrifuga ci6n gradiente, cuando hay componentes
ende
la tubo
muestra
no participan
Normalmente, los fabricantes especifican

los rotores de las centrlfugas mediante la
publi caci6n de tablas especializadas que
contienen la siguiente informaci6n:
1. Tipo de rotor. Precisa el tipo de rotor
para el cual suministra la informaci6n
tecnica.
2. Capacidad nominal de/ rotor. Define la
ca pacidad en litros o submultiplos de
litro. Por ejemplo: 6 litres; 250 ml, etc.
3. Velocidad maxima de operaci6n. lndica a
que velocidad maxima debera operarse
ese tipo particular de rotor en revolucio
nes por minuto (RPM).
4. Maximo Campo Centrffugo Relativo (RCF)
obtenido por ese tipo de rotor.
5. Factor k que es el coeficiente de sedimen
taci6n,el cual esta definido por la siguien
te ecuaci6n:
ln(rmax Irmin)
k :-----(I) z
101
3
X--
3 600
donde:
w=
rmax =
rmin =
velocidad angular en radianes

por segundo
radio maximo en mm, medido
en el tubo de centrifugaci6n
radio mlnimo en mm, medido
en el tubo de centrifugaci6n
mayor duraci6n y vida util. Entre los avances

en menci6n, se encuentran los controles con
base en microprocesadores que, mediante
software, permiten tener en memoria diver
sos programas de operaci6n, los cuales se
controlan a traves de un teclado. De
acuerdo con el tipo de rotor que se utilice y
el tipo de procedimiento a realizar, los
programas con trolan el tiempo de
centrifugado,la tempera tura requerida, las
revoluciones del rotor, la aceleraci6n y
desaceleraci6n, y un sistema complete de
alarmas avisa al operador sobre cualquier
anomalla que se presente durante la
operaci6n.
Por otra parte, los fabricantes han instalado
motores de inducci6n -sin escobillasen las
centrifugas, ya que tienen la ventaja de con
trolar electr6nicamente las corrientes y cam
pos magneticos que regulan la velocidad del
rotor, aspecto que reduce la periodicidad de
los procedimientos de mantenimiento. La
operaci6n y mantenimiento de tales equipos
deben realizarse de acuerdo con las
recomen daciones de los fabricantes.
Las centrlfugas requieren para su normal

operaci6n de lo siguiente:
Este factor permite calcular el tiempo en

horas requerido para la sedimentaci6n.
6. lnformaci6n sobre la compatibilidad del

rotor en menci6n con otros modelos de
centrlfuga def mismo fabricante.
Las centrlfugas de fabricaci6n reciente han
incorporado, en su diseno, innumerables me
joras que buscan una mayor seguridad y una
76
1. Acometida electrica con capacidad

ade cuada al consumo del equipo,que
suminis tre voltaje estable de tipo
monofasico o trifasico -depende def
modelo y especifi caci6n dada por el
fabricante-. Por lo ge neral, utilizan 11O

V o 220 V/60 Hz.
2. Un ambiente limpio, libre de polvo que
disponga de piso firme y nivelado.
Centrfuga
3. Si la centrfuga es refrigerada, requiere de

un espacio libre en el lado del condensador, para que pueda haber una transferencia de calor adecuada.
4. Un mueble en el cual puedan guardarse
los accesorios que, como los rotores alternos, complementan la dotacin de las
centrfugas.
Las rutinas de mantenimiento que requiere una
centrfuga dependen de ml tiples factores,
tales como la tecnolog a incorpor ada, la
intensidad de uso, la capacitacin de los
usuarios, la calidad de la alimentacin elctrica y las condiciones del ambiente donde se
encuentra instalada. A continuacin, se presentan las recomendaciones generales para la
adecuada utilizacin y las rutinas de mantenimiento ms comunes para garantizar una
correcta operacin. Las rutinas o reparaciones especializadas dependern de las recomendaciones que, para cada marca y modelo,
establezcan los fabricantes.
Recomendacin priori taria: Verificar que
nicamente el personal que haya recibido y
aprobado la capacitacin de manejo, uso,
cuidado y riesgos de la centrfuga la opere. Es
responsabilid ad de los directores de los laboratorios vigilar y tomar las precauciones que
consideren opor tunas para que el personal
que las opera entienda las implicaciones de
trabajar esta clase de equipo .
RECOMENDACIONES DE CONSERVACIN
Y MANEJO ADECUADO6
Rotores
1. Registrar la fecha de compr a de cada
uno de los ro tores, incluyendo in formacin relacionada con el nmero de serie
y modelo.
2. Leer y entender los manuales de los rotores, equipo y tubos, antes de que los
htt p://www .sunysb.edu/facili ties/ehs/lab/cs.shtml
mismos sean utilizados. Cumplir con las

indicaciones de uso y cuidado que especifica el fabricante.
3. Utilizar los rotores nicamente en las
centrfugas para las cuales han sido
fabricados. No intercambiar rotores
sin veri ficar la compatibilid ad con la
centrfuga en la cual se instala.
4. Registrar los parmetros de operacin
para cada rotor en una bi tcora,
para poder determinar su vida til
remanente y ges- tionar a t iempo la
adquisicin de los reemplazos.
5. Utilizar las recomendaciones de
velocidad mxima y densidad de las
muestras que recomienda el
fabricante. Cada rotor est diseado
para sopor tar un mximo nivel de
esfuerzo;
dichas
especificaciones
deben ser respetadas rigurosamente.
6. Acatar las recomendaciones relativas
a reducir la velocidad de operacin
cuando se trabaja con soluciones de
alta densidad, con tubos de acero
inoxidable o adaptadores plsticos.
Los
fabricantes
suministran
la
informacin correspondi ente.
7. Utilizar rotores de titanio si se trabaja
con
soluciones
salinas
frecuentemente.
8. Proteger el recubrimi ento de los
rotores para evitar que se deteriore el
metal base. No utilizar detergentes
alcalinos o soluciones limpi adoras
que pudieran remover la pelcula pro
tectora. Los rotores, generalmente
fabricados de aluminio [Al], estn
recubiertos por una pelcula de
aluminio anodi zado que pro tege la
estructura del metal.
9. Utilizar cepillos plsticos en las
actividades de limpi eza de los
rotores. Los cepillos metlicos rayan
el recubrimi ento pro tector y esto
genera fuentes de futura corrosin,
que se aceleran bajo las condiciones
de operacin que acortan la vida til
remanente del rotor.
77
10. Lavar el rotor inmediatamente en el caso

de que se presenten derrames de sustancias corrosivas.
suave, diluido en una relacin de 1:10 en

agua y un cepillo de textura suave no metlico. Evitar usar lavaplatos automticos.
11. Secar el rotor con aire seco, siempre que

haya sido limpi ado y enjuagado con agua.
2. Evitar el uso de alcohol y acetona,

pues dichos materiales afectan la
estructura de los tubos. Los
fabricantes recomiendan el tipo de
solvente que debe utilizarse con
cada tipo de material con que se
fabrican los tubos de centrifugacin.
12. Almacenar los rotores de tubo vertical o

tubo casi vertical, con el lado superior hacia
abajo y sin las respectivas tapas.
13. Almacenar los rotores en ambientes secos. Evitar dejarlos en la centrfuga.
14. Almacenar los rotores de cubo pivotante
sin las tapas de los compartimentos.
15. Lubricar las roscas y los anillos tipo O,
de acuerdo con las recomendaciones del
fabricante.
16. Observar las recomendaciones relacionadas con tiempos de garanta y vida til de
cada tipo de rotor.
17. Evitar utilizar rotores a los cuales se les
ha terminado el perodo de vida til.
18. Utilizar blind ajes si se usa la centrfuga
con material radiactivo.
19. Cargar o descargar los rotores dentro de
una cabina de segurid ad biolgi ca, si se
trabaja con materiales clasificados como de
biori esgo de nivel II o superior.
20. Nunca tratar de abrir la tapa de una centrfuga que est funcionando y nunca intentar detener el rotor con la mano.
3. Evitar secar los tubos en un horno de

secado. Secar siempre con un chorro
de aire seco.
4. Verificar si los tubos utilizados son
reutili- zables o no. Si son
desechables, utilizarlos solo
una
vez.
5. Para esterili zar, previamente es
necesario veri ficar el tipo de
material del tubo, pues no todos
sopor tan la esterili zacin por calor.
La
cristalera
se
esterili
za
normalmente con vapor a 121 C
durante 30 minu tos.
6. Almacenar los tubos y las botellas en
un lugar seco, oscuro y fresco,
alejado de fuentes de vapores
qumicos o fuentes de radiacin
ultravioleta.
7. Verificar los niveles de llenado y el
selle en los tubos de pared delgada,
para evitar su colapso dentro del
rotor por accin de la fuerza
centrfuga. Cumplir las recomendaciones de los fabricantes.
Tubos
El cuidado de los tubos abarca aspectos como
el llenado del tubo, la seleccin adecuada de
temperatura, las limi taciones de velocidad de
centrifugacin, el lavado y la esterili zacin. Las
principales recomendaciones en relacin con
los aspectos mencionados son las siguientes:
1. Lavar los tubos, adaptadores y dems
accesorios a mano, utilizando un
detergente
Adver t encia: Nunca efectuar una intervencin tcnica en una centrfuga,

si la misma no ha sido previamente
descon taminada.
Las rutinas de mantenimiento ms impor tantes que se le efectan a una centrfuga son
estas:
Frecuencia: Mensual
78
1. Verificar que los compon entes externos

de la centrfuga se encuentren libres de
polvo
Centrfuga
medido no debe variar ms de 10 % del

tiempo progr amado.
y de manchas. Evitar que el rotor se afecte

por derrames. Limpiar el compartimiento
del rotor, utilizando un detergente suave.
6. Verificar la velocidad de rotacin real

contra la seleccionada, utilizando
una carga normal. La comprob acin
se efecta con un tacmetro o un
fototacmetro. Si la compuerta no es
transparente, debe seguirse el
procedimiento que para el efecto
indiqu e el fabricante.
2. Comprob ar que el mecanismo de acople y

ajuste de los rotores se encuentre en buen
estado. Mantener lubricados los pun tos
que recomienda el fabricante.
3. Verificar el estado del mecanismo de cierre
/ segurid ad de la tapa de la centrfuga, pues
es fundamental para garantizar la segurid
ad de los operadores. El mecanismo
mantiene cerrada la tapa de la centrfuga,
mientras el rotor se encuentra girando.
4. Confirmar la lubricacin de los elementos
que recomienda el fabricante, como sellos
tipo O. Utilizar siempre lubricantes de
acuerdo con las recomendaciones del fabricante frecuencia y tipo de lubricantes. En centrfugas de fabricacin reciente se usan rodamientos sellados que no requieren lubricacin.
5. Verificar el estado de los empaques y jun- tas
de estanqueidad.
Frecuencia: Anual
7. Confirmar el funcionamiento
sistema de freno.
3. Verificar el cumplimi ento de normas elctricas. Utilizar un analizador de segurid ad

elctrica: pruebas de resistencia a tierra,
corrientes de fuga.
4. Si la centrfuga es refrigerada, comprob ar
la temperatura mediante el termmetro
electrnico. La temperatura no debe variar ms de 3 C.
5. Examinar la exactitud de los controles de
tiempo. Utilizar un cronm etro. El tiempo
del
8. Verificar
el
funcionamiento
del
sistema de refrigeracin; solo en
centrfugas
refrigeradas.
Las
actividades ms impor tantes son las
siguientes:
a)
Controlar que las temperaturas seleccionadas no difieran ms de 3 C, de las

temperaturas medidas con el termm etro digi tal.
b)
Verificar el estado del fil tro de la toma de

aire. Si es fil tro se encuentra obstruido ,
limpi ar o sustituir por un equivalente.
c)
Efectuar una limpi eza detallada de las

aletas difusoras del condensador, para
elimin ar la suciedad que se deposita sobre ellas. Esto mantiene las tasas de
transferencia de calor, segn las especificaciones de diseo. Si se detecta un funcionamiento anormal, solicitar servicio
tcnico especializado.
d)
Verificar el estado de las escobill as del

motor, si la centrfuga dispone de motor
con escobill as. Sustituir por nuevas de
la misma especificacin origin al, en
caso de ser requerido. Realizar esta
rutina cada seis meses.
1. Verificar que las tarjetas electrnicas se

encuentren limpi as y bien conectadas.
2. Comprob ar el grupo de control, el cual
dispone de selectores de velocidad,
tiempo de centrifugado, temperatura de
operacin, alarmas e instrumentos
anlogos o digi tales para registrar los
parmetros de operacin de la centrfuga.
Nota: Evitar derrames de lquidos sobre el

teclado de control. Los teclados de membrana deben operarse con la yema de los
dedos. Evitar que el operador utilice la pun
ta de la ua, pues termina perforando la
membrana de pro teccin.
79
Herramien tas e instrumen tacin requerida

Para poder realizar las inspecciones de mantenimiento requeridas normalmente por una
centrfuga, son necesarios los siguientes instrumentos o herramientas:
1. Una llave para apretar o aflojar la tuerca del
rotor.
2. Un analizador de segurid ad
elctrica o un instrumento para
medir corrientes de fuga
3. Un cronm etro.
4. Un termmetro electrnico con
exactitud de 0,5 C para centrfugas
refrigeradas nicamente.
5. Un tacmetro o fototacmetro.
Tabla de solucin de problemas Rotores7
PROBLEMA
Vibracin severa.
CAUSA PROBABLE
Rotor desbalanceado.
REMEDI
O rotor. Llenar todos
Balancear la carga del
los tubos opuestos con el mismo nivel
de lquido de la misma densidad.
Distribuir simtricamente el peso de
tubos opuestos.
Cargar los rotores de ngulo fijo o de
tubo vertical de formasimtrica.
Tapas de los rotores, canister o

cubos difcilesde aflojar despusde
la centrifugacin.
Velocidadseleccionadacercadel
rango de velocidadcrtica del rotor.
Seleccionar una velocidad de rotacin

fuera del rangode velocidadcrtica.
Rotor mal montado.
Verificar el montaje del rotor. Comprobar

que seencuentre bien ajustado.
Falta lubricacin en lossuportesde

los rotoresde cubo pivotante.
Lubricar los ejes de pivote segn

recomendacin del fabricante. Por ej.
cada 250 procedimientos de
centrifugado.
Abrir el conducto deventilacinen la parte
Produccin de vaco durante la

centrifugacin.
Roscas contaminadas consuciedad,
lu- bricantessecos o partculas
metlicas.
superior del rotor o cubo, para eliminar el

vaco.
Efectuar limpiezarutinaria a las roscas y
lubricar. Utilizar insumos recomendados
por los fabricantes.
Tubos
PROBLEMA
Los tubos presentan fugas.
CAUSA PROBABLE
Tapas mal aseguradas.
Ajustar las tapas.
Tubos demasiado llenos.
El menisco deber estar msbajo para

prevenir las fugas.
En tubos sin tapa, sehaexcedido el

nivel mximo recomendado.
Verificar las recomendacionesde volumen

y la velocidadde
centrifugadorecomendada.
Presionar
suavemente, despus de sellar
En tubosdesello rpido,
sepresumeun sellado deficiente.
REMEDIO
en caliente solosi noseafecta el

contenido.Si se presentan fugas, sellar
de nuevo.
Rotors and Tubes for Beckman Coulter J2, J6 and Avanti J series centrifuges, Users Manual, Palo Alto, Californi a,
The Spinco Business Center of Beckman Coul ter, 2001.
80
Centrfuga
PROBLEMA
Los tubos se rajan o rompen.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Los tubos pueden romperse o

volverse frgilessi seusan por
debajo del lmite de la
temperatura recomendada.
Calentar hasta 2 C, si la muestra est

conge- lada, antes de centrifugar. Evaluar
antes de centrifugar el comportamiento
de los tubos a baja temperatura.
Los tubos se vuelven frgiles con la

edady el uso.
Desechar tubos vencidos, utilizar nuevos.
Sistemas varios
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
El interruptor principal est en

posicin de encendido pero la
centrfuga no funciona.
No hayenergaelctrica.
Verificar suministro de
energaelctrica.
La tapade la centrfugano abre.
Centrfugaapagada.
Encender la centrfuga. Presionar la

manija y abrir la tapa.
El indicador de balanceose
activa.
Carga a centrifugar desbalanceada.
Balancear la carga a centrifugar.
Centrfugadesnivelada.
Nivelar la centrfuga.
Existe vibracin a baja

velocidad.
Mecanismo de ajuste del rotor flojo.
Ajustar correctamente el sistemade

fijacin.
Verificar el balanceode la cargaa
centrifugar.
Seleccionar una velocidad de rotacin
ms elevadao utilizar un tipo de rotor
diferente.
Apagar la centrfuga. Verificar la
condicin y estado de las correas.
Lascorreasdeben estar templadas.
Carga desbalanceada.
Velocidadseleccionadacercanaal
pun- to de resonancia del rotor.
Existen fluctuaciones en la
velocidad de rotacin.
Correasde transmisinenmal
estado(*).
La velocidad de rotacin no llega a

la velocidadseleccionada.
Escobillas defectuosas.
Calibracin del control de velocidad

desajustado.
La cmara est fra peroel rotor
caliente.
El testigo de estado de escobillas
est encendido.
Seleccin incorrecta de la
temperatura.
Escobillasen mal estado.
Apagar la
centrfuga.Verificar
el
estadode las escobillas. Sustituir si
esdel caso por otras de la misma
especificacin
de las
Ajustar calibracin
deloriginales.
control de
velocidad.
Verificar seleccin de la temperatura.
Apagar la centrfuga. Verificar estado.
Sustituir escobillas por otrasde igual
especificacin.
* Procedimiento vlido en centrfugas, con sistemade transmisin de potencia por correas.
DEFINICIONES BSICAS
Densidad . Masa de un cuerpo por unidad de

volumen.
[D =
m
V
Se expresa generalmente en
gramos por cm3.
Escobilla . Dispositivo mediante el cual se

efecta la transmisin de la energa elctrica,
entre la acometida externa cables en estado
esttico y los componentes internos en
rotacin
de un motor. Por lo general, las escobill as

son fabricadas en grafito de textura muy
blanda y son un insumo que debe cambiarse
con re- gularidad (cada seis meses) en los
motores que las utilizan.
Fuerza centrfuga. Fuerza que acta sobre
una partcula y trata de alejarla del centro de
rotacin; se entiende tambin como la tendencia que tiene todo slido en rotacin a alejarse del eje. Es uno de los compon entes del
vector de inercia que equilibr a el conjun to de
81
MANUAL DE MANTEN IMIENTO PARA EQUJPO DE lABORATORIO
fuerzas que actuan sobre una particula. Su

magnitud siempre es -m x aN y su direcci6n,
radial alejandose del centro.
Radian. Unidad angular en la cual la longi
tud del arco que lo forma es igual al radio
del clrculo.Se expresa como el cociente
entre el arco formado por el angulo, con su
vertice en el centro de un circulo, y el radio
de dicho clrculo.
RCF (Campo Centrifugo Relativo) . Rela
ci6n de la aceleraci6n centrlfuga a una velo
cidad y un radio especificos,dado [ml] con la
aceleraci6n normal de la gravedad.Se calcu
la mediante la siguiente ecuaci6n:
olr
RCF = g
Resonancia. Situaci6n en la que un sistema

mecanico vibra como respuesta a una fuerza
aplicada con la frecuencia natural del
sistema .
Sedimentacion. Asentamiento de las parti
culas de una suspension como resultado de
la acci6n de la fuerza gravitacional de la
tierra. En la centrlfuga, este proceso es
mucho mas acelerado y las particulas se
alejan del eje de rotaci6n.
Separacion isopicnica. Metodo para sepa
rar particulas con base en la densidad de flo
taci6n de la particula. Se le conoce como se
dimentaci6n en equilibrio. La velocidad de la
particula, debido a las diferencias de densi
dad, esta dada por la formula:
donde:
R=
w=
radio en mm
velocidad angular en radianes por
segundo
[ (V
2nx rpm
60
g=
aceleraci6n estandar de la
gravedad
= 9 807 mm/s2
Recubrimiento anodizado. Capa delgada

y dura de 6xido de aluminio que se
deposita en la superficie de un rotor
mediante procesos electroquimicos, con el
fin de prevenir la co rrosion. El
recubrimiento tambien logra acaba dos de
diferente color para una mejor estetica.
donde:
dr
velocidad de sedimentaci6n ( dt )
V =
diametro de la partlcula
d=
densidad
de la particula
Pp
densidad de la soluci6n
=
viscosidad del medio llquido
Pc
aceleraci6n estandar de la gravedad
=
=
g=
Velocidad angular. Tasa de giro de un cuer
po medida en radianes por segundo. Se cal
cula mediante la siguiente formula:
(l)
2nx rpm
60
donde:
rpm = revoluciones por minute
n = constante con valor de 3, 1416
82
Centrfuga
Bibliogra fa
Mantenimiento y reparacin de equipos de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Suiza, Organizacin Mundial de la Salud, 1996.
Manual de operacin y cuidados del equipo del laboratorio clnico, Proyecto de mantenimiento hospitalario, San Salvador, El Salvador, GTZ-Ministerio de Salud Pblica, 1998, 5-7. (htt
p://www .gruposaludg tz.org/proyecto/mspas-gtz/Downloads/Laboratorio -Clinico.pdf)
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Palo Alto, Californi a, The Spinco Business Center of Beckman Coul ter, 2001.
(htt p://arcturi.swmed.edu/cue/centri fuges/JR%26T.pd f)
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and MAX C, Users Manual, Palo Alto, Californi a, The Spinco Business Center of Beck- man
Coul ter, 2001.
SERO-FUGE Centrifuge, Mod 0521 and 0522, Operator manual, Clay Adams, Division of Becton Dickinson and company.
(htt p://web.princeton.edu/sites/ehs/labsafetymanual/sec7i.htm)
83
84
CAPTULO 8
Destilador de agua
Cdigo (s)
ECRI
15-136
DESTILADOR
DE
AGUA
La palabra destilador proviene de la palabra

latina distillare que signi fica vapori zar los lquidos por medio del calor. El destilador de
agua que se usa en el laboratorio puri fica el
agua corriente, mediante procesos controlados de vapori zacin y enfriamiento. Al aplicar
energa trmica al agua en fase lquid a, luego
de un proceso de calentamiento, se convierte
en vapor de agua. Esto permi te separar las

Unidadesde destilacin
molculas de agua, de las molculas de otras

sustancias o elementos que se encuentran
mezclados o diluido s. El vapor de agua se recolecta y se lleva a travs de un condensador,
donde el vapor se enfra y vuelve a la fase lquid a. Entonces, el condensado se recoge en
un tanque de almacenamiento diferente. El
agua destilada presenta mejores caractersticas de pureza comparada con el agua corriente; prcticamente se encuentra libre de
sustancias que la contaminen.
ESQUEMA DEL DESTILADOR DE AGUA
Ilustracin 21: Destilador de agua
PROPSITO DEL DESTILADOR DE AGUA

El destilador permi te obtener agua de gran
pureza, a partir del agua potable como la suministrada normalmente por los servicios de
acueducto de los centros urbanos. El agua
destilada se caracteriza por carecer de slidos
en suspensin y es utilizada en ml tiples aplicaciones en los centros para la prestacin de
servicios de salud, especialmente en las unidades de laboratorio, lavado y esterili zacin, y

diettica. En el laboratorio el nivel de pureza
ser mayor mientras ms especializados sean
los procedimientos. Por ejemplo: la preparacin de reactivos o de material biolgi co
requiere agua de la ms alta calidad y la destilacin es uno de los procesos fundamentales
para lograrlo. (Aunqu e no el nico que
85
pudiera ser requerido ). El agua utilizada en los

laboratorios debe estar libre de pirg e- nos,
con una concentracin de slidos totales no
mayor de 1 ppm, cuyos valores de pH estn
comprendidos entre 5,4 y 7,2 y su resistencia
elctrica sea no menor de 3 x 105 ohm/cm a
25 C1.
energa trmica generada mediante resistencias elctricas de inmersin, que transmiten, mediante conduccin directa, energa trmica al agua. Esto hace que la temperatura del agua aumente, hasta que, a
condiciones normales (presin atmosfrica
igual a una atmsfera, y aceleracin de la
gravedad igual a 9,80665 m/s2), el agua en
fase lquida se transforma en agua en fase
vapor a 100 C.
El funcionamiento de un destilador est basado en un fenmeno que se presenta libr emente en la naturaleza y es conocido como el
ciclo del agua. La energa proveniente del sol
calienta el agua de los mares y transforma
parte de la misma en vapor de agua. Dicho
vapor se concentra en nubes que, cuando las
condiciones atmosfricas son adecuadas, se
enfra y condensa, volviendo a la superficie
en forma de lluvia.
2. Nivel de agua. Es un dispositivo que

permite regular la cantidad de agua
dentro del generador de vapor. Se
encuentra conectado directamente a
la acometida que suministra el agua
que utiliza el destilador. Cuando la
cantidad de agua en fase lquida
contenida en el tanque de ebullicin
disminuye, el dispositivo permite
recuperar la cantidad de l- quido que
se ha evaporado.
Funcionamien to del destilador de agua
3. Vlvula
de control.
Es un
dispositivo
mecnico
o
electromecnico que permi te regular el flujo de agua hacia el
tanque del generador de vapor.
El destilador de agua reproduce el fenmeno

natural. Su configuracin y diseo varan dependiendo de los volmenes de agua requeridos. Se presenta a continuacin una explicacin general de las partes que integran un
destilador y se describe cmo funcionan.
1. Generador de vapor . Tambin se le conoce como tanque de ebullicin. Este componente es el recipiente en el cual se almacena el agua que va a ser destilada. Por lo general, dispone de una acometida hidrulica
que permi te reponer el agua que se
evapora
y
destila.
Se
fabrica
generalmente en vidrio en pequeos
destiladores o en acero inoxidable, cobre
recubierto con estao o titanio en
mquinas de gran capacidad. Puede
disponer de controles de nivel, flujo y
calidad del agua de alimentacin, que pro
tegen el destilador en caso de que se
presente alguna irregularidad en el suministro de agua. Como fuente de energa se
utiliza el vapor de agua proveniente de
una caldera o generador de vapor, o la
4. Acometida hidruli ca. Es la red

que suministra el agua en fase
lquida al tanque del generador de
vapor.
5. Agua en fase lquida . Es el agua
que se encuentra dentro del tanque
del generador de vapor. Recibe la
energa trmica que transfieren las
resistencias de inmersin y se
convierte a fase vapor, cuando se
cumplen las condiciones de presin
y temperatura requeridas.
6. Resistencias de inmersin. Son
dispositivos que generan calor
cuando a travs de los mismos
circula una corriente elctrica. Se
encuentran aisladas por una capa de
cermica y pro tegidas del
ambiente externo por una coraza
metlica.
7. Salida del agua de refrigera cin.
Es la lnea que conduce el agua que
se ha utilizado para condensar el
vapor de agua, re- tirando al mismo
energa trmica.
Warming cabinets, sterili zers, and associated equipment, Division 11 - Equipm ent, USACE/NAVFAC/ AFCESA,
UFGS-11710, July 2003.
86
Destilador de agua
8. Condensador . Es un dispositivo en el
cual el vapor pierde energa trmica, se
enfra y vuelve a la fase lquid a. Para
acelerar el proceso se utilizan mtodos
de conveccin forzada, mediante la
circulacin de fluidos aire o agua a
baja temperatura alrededor del
conducto, a travs del cual fluye el
vapor.
9. Filtro. Los destiladores disponen de filtros de carbn activado que se colocan a
la salida del condensador o a la salida del
colector, con el fin de elimin ar sabores o
partculas que pudieran estar presentes
en el vapor que se condensa.
10. Depsito de agua destilada . Es un dispositivo en el cual se recolecta el fluido
que se ha sometido al proceso de destilacin. El agua destilada debe almacenarse
en recipientes especiales fabricados principalmente en materiales plsticos, para
evitar que se presente contaminacin inica. Se utilizan para el efecto
recipientes de polietileno, polipropil eno
o poli tetra- fluoruro etileno 2 .
SERVICIOS
REQUERIDOS
Dependiendo del diseo, la capacidad y el tipo de destilador, los servicios requeridos podran variar. Los servicios ms comunes son
los siguientes:
1. Ambiente bien ventilado donde pueda instalarse el equipo . Es necesario debido a que el
destilador transfiere calor a un fluido y esto
aumenta la temperatura del lugar donde se
instale. Es necesario dejar espacios libres
alrededor del destilador de forma que se
facili te el flujo de aire. Dado que algunos
destiladores se encuentran mon tados
dentro de una caja metlica, esta
normalmente requiere ser instalada
sobre un sopor te que
facili ta la circulacin del aire desde la parte inferior del destilador.

2. Acometida
hidrulica
de
agua
potable. Es tpico encontrar que la
acometida hidrulica requerida tiene
un dimetro de 1/2 " . Sin embargo,
para asegurar una operacin sin
inconvenientes, debe evaluarse la calidad del agua con la que se alimenta
el destilador y determinar si es
necesario instalar un sistema de
tratamiento 3 que evite la presencia de
incrustaciones o sedimentos dentro
del tanque del generador de vapor y
sobre las resistencias de inmersin. El
agua potable se utiliza para alimentar
el generador de vapor y para
refrigerar el condensador 4.
3. Acometida
hidrulica
de
agua
destilada. El agua destilada que se
produce es recolec- tada inicialmente
en un tanque de almacenamiento.
En equipos de gran capacidad se
distribu ye desde el mismo, mediante
una red, a los pun tos de consumo. En
equipos pequeos o medianos, se
transfiere a recipientes desde los
cuales se utiliza en los pun tos de
consumo.
4. Acometida hidr ulica sani taria. Se
utiliza para drenar la acumul acin
de impur e- zas que pueden acumul
arse en el tanque del generador de
vapor. Implica utilizar un si fn que
debe
estar
ubicado
cerca
al
destilador.
5. Acometida elctrica. Debe estar
dotada de los dispositivos de control
y segurid ad, cumplir con las normas
elctricas
nacionales
o
internacionales que utilice el laboratorio, y estar dimensionada a la
potencia de los elementos resistivos
que utiliza el destilador. Por lo
general, el voltaje es de 220 V, 60 Hz
o de 240 V, 60 Hz.
Mantenimiento y reparacin de equipos de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital, Ginebra, Organizacin Mundial
de la Salud, 1996.
3
Los sistemas de tratamiento de agua han sido diseados para retirar las sustancias que normalmente se encuentran
presentes en el agua, debido a la gran capacidad solvente de la misma. Las sustancias son por lo general iones inorgnicos aniones y cationes, entre los que se encuentran bicarbonatos, sulfitos, cloruros, calcio, magnesio, sodio,
potasio, hierro manganeso, nitratos y trazas de muchos otros.
2
Algunos fabricantes refrigeran el condensador mediante la utilizacin de ventiladores, los cuales hacen circular aire
sobre las aletas del condensador, generando procesos de transferencia de calor mediante conveccin forzada desde
la superficie de difusin al medio ambiente.
87
Nota: Verificar siempre las recomendaciones de instalacin del fabricante del equipo, para asegurar que el destilador operar de acuerdo a los parmetros de diseo.
Rutinas de mantenimien to
Las rutinas de mantenimiento dependen del diseo y la capacidad del destilador. Las rutinas
que se describen en el presente manual han
sido enfocadas tomando un destilador dotado
con un tanque generador de vapor fabricado en
acero inoxidable que opera con resistencias de
inmersin y cuyo condensador es refrigerado
mediante un ventilador que impulsa aire,
sobre o a travs de las aletas difusoras del
condensador.
Adver tencia: Antes de realizar cualquier
inspeccin o rutina de mantenimiento, verificar que el destilador se encuentra
apagado y desconectado de la acometida
elctrica.
Inspeccin y limpieza del tanque genera dor de vapor

Frecuencia: Mensual
1. Retirar el panel de pro teccin o abrir la
puerta que permi te acceder al tanque de
ebullicin o generador de vapor.
2. Retirar la tapa del tanque de ebullicin.
3. Verificar visualmente si las paredes interiores o las resistencias de inmersin presentan
depsitos de slidos o sedimentos
alrededor de la superficie. La cantidad de
depsitos presentes depender de la
calidad del agua con la que se alimente el
destilador. Si se compru eba la acumulacin
de dichos sedimentos, debe limpiarse para
evitar que se daen las resistencias de
inmersin5.
4. Limpiar los depsitos acumulados. Por lo
general, el proceso de limpi eza requiere
la utilizacin de un producto qumico, diseado especialmente para remover los

depsitos formados. Dicho producto debe
seleccionarse de acuerdo con las caractersticas del agua que est siendo utilizada y
que se determinan mediante un anlisis
qumico del agua.
5. Drenar la cantidad de agua
contenida en el tanque de generacin
hasta que
su nivel
es- t
aproximadamente 10 cm por encima
del sitio de ubicacin de la sonda de
nivel o de la resistencia de inmersin
verificar que se encuentre ubicado
a ms altura sobre el fondo del
tanque, para asegurar que todos
estos elementos queden sumergidos
en el agua.
6. Aadir
el
producto
qumico
recomendado, en funcin de las
caractersticas del agua.
7. Mezclar bien.
8. Permi tir que el qumico opere
durante toda la noche. El
fabricante del producto utilizado
recomienda los tiempos para remover los sedimentos.
9. Drenar el contenido del tanque, a
la ma- ana siguiente.
10. Aadir agua limpi a, lavar y drenar
hasta estar seguros de que el
qumico
utilizado
haya
sido
completamente removido, jun- to
con
los
residuos
minerales
removidos
de las superficies
afectadas.
11. Reinstalar la tapa.
12. Colocar los paneles fron tales o
ajustar la puerta.
13. Operar normalmente el equipo .
Adver tencia: Bajo ningun a circunstancia

destilar la solucin utilizada para remover
los sedimentos.
Los minerales que se depositan sobre el recubrimi ento de las resistencias de inmersin tienen la particularidad de ser
muy malos conductores del calor, por lo que impid en una eficiente transferencia de calor entre la resistencia de in-
mersin y el agua en proceso de destilacin. Esto hace que la temperatura de la resistencia aumente por encima de
aquella que normalmente alcanzara en condiciones normales de operacin, deteriorando su estado e integridad.
88
Destilador de agua
Cambio del fil tro de carbn activado

Frecuencia: Cada tres meses
Normalmente, el fil tro de carbn activado se
instala aguas abajo del sistema dispensador,
que proviene del tanque de almacenamiento
de agua destilada. Se encuentra mon tado en
una carcaza instalada sobre la lnea de distribucin del agua destilada. Por lo general, es
un dispositivo de fcil sustitucin. El proceso
que generalmente se realiza es el siguiente:
1. Desenroscar la tapa del fil tro.
2. Retirar el elemento fil trante usado.
3. Instalar un nuevo elemento fil trante de
las mismas caractersticas del origin al.
4. Reinstalar la tapa del fil tro.
Adver tencia: El elemento fil trante ajusta
dentro de la carcaza del fil tro, mediante
sellos tipo anillo o rings que deben ser instalados con cuidado en las ranuras para
evitar fugas de agua destilada.
Limpieza del condensador

Frecuencia: Anual
1. Para la limpi eza del condensador, es necesario retirar los paneles pro tectores o abrir la
puerta que permite acceder al condensador.
2. Verificar que el destilador de encuentre
desconectado de la acometida elctrica.
3. Remover el conjun to del condensador. Desconectar elsistema deacople para ingreso de
vapor y el acople que conecta el condensador
al tanque de almacenamiento del producto
destilado.
4. Remover los tornillo s que ajustan y
ensam- blan el conjun to del ventilador
con el condensador. Desconectar los
terminales del ventilador de sus pun tos
de conexin.
5. Retirar el ventilador y limpi ar la suciedad
que se haya acumulado en la superficie de
los labes. Lubricar el sistema de rodamiento con aceite mineral (dos gotas).
6. Retirar
el
condensador.
Aspirar la suciedad, polvo y
pelusa, acumulada sobre la
superficie
de
las
aletas
difusoras. (Tambin puede
utilizarse aire comprimido o
una brocha humedecida con
agua y jabn).
7. Enjuagar el conjun to.
8. Secar.
9. Ensamblar
nuevamente
siguiendo un orden contrario
al descrito.
Esterili zacin del tanque de

almacena mien to de agua destilada
Frecuencia: Ocasional
An tes de iniciar la operacin de un
nuevo destilador de agua, se
recomienda veri f icar que el tanque
de
almacenamiento
del
agua
destilada se encuentre estril y
limpio . Para efectuar la esterili zacin, se

recomienda utilizar un proceso de tipo
qumico usando un blanqueador domstico
a base de cloro . El procedimi ento a seguir
se presenta a con tinuacin:
1. Verificar que el interrup tor general se encuentre apagado.
2. Abrir el panel fron tal para acceder al tanque de almacenamiento del produ cto
destilado.
3. Retirar el f il tro de carbn activado del
alojamiento.
4. Preparar una solucin de blanqueador de
cloro hasta que se obtenga una concentracin de 200 ppm y aadirla al tanque de
almacenamiento.
5. Permi tir que la solucin interacte con el
tanque, por al menos tres horas.
6. Vaciar el tanque de almacenamiento utilizando la lnea de drenaje.
7. Encender el destilador y dejar que el tanque de almacenamiento se llene con agua
destilada.
89
8. Drenar nuevamente el tanque

dealmacenamiento.
9. Colocar el fil tro de carbn activado en su
alojamiento.
10. Permi tir que el destilador llene el tanque

de almacenamiento con agua destilada. El
fil tro de carbn activado remover
cualquier remanente del blanqueador de
cloro utilizado.
PROBLEMA
El destilador
noproduceaguadestilada.
CAUSA PROBABLE
No haysuministro de energa.
REMEDI
O elctrico est
Verificar que el conector
bien ajustadoen la toma elctrica.
Confirmar que hayaenergaelctricaen el
circuito que alimenta el destilador.
Verificar que el interruptor principal est
en la posicin encendido.
Resistencia de inmersin quemada.
El destilador presenta aguaa su

alrededor.
El destilador o alguno de sus

compo- nentesmal instalado.
Comprobar que hayaaguaen el

generador de vapor o cmara de
ebullicin.
Verificar
la integridad de la resistencia de
inmersin. Medir continuidad elctrica
o resistencia en ohmios del calefactor.
Sustituir
por
otrade
lasmismascaractersticasdel original.
Comprobar
que
el
filtro
de
carbnactivadose
encuentrebien
instaladoy que el aguafluyaa travs de
l.
Verificar
que el tanquecolector de
condensado seencuentre bien ubicado.
Confirmar que las instalacionesde drenaje
no presentan fugas.
El destilador presenta vapor a su

alrededor.
El aguadestilada tienesabor.
Ventilacin inadecuadadel
destilador.
Verificar queel destilador dispone

deespacios libresa su alrededor.Tambin
que dispone de espacio libreen la parte
trasera. (Adems, que no est pegadoa
la pared).
Comprobar que no hayaobjetos que
interfie- ran el flujo libre del aire hacia el
destilador. Remover cualquier objeto que
afecte el libre flujo.
Elventilador
derefrigeracinnofunciona.
Verificar el estadodel ventilador.Si

estenergi- zado y no funciona, sustituir
el ventilador por otro de las mismas
caractersticasdel original.
Filtro de carbn activado

agotado.
Reemplazar el filtro de carbn

activado.
90
Destilador de agua
DEFINICIONES
BSICAS
Destilacin. Proceso mediante el cual se calienta un fluido en fase lquida hasta que se
transforma en fase vapor, posteriorm ente se
enfra y se condensa nuevamente a fase lquida. El proceso de destilacin se utiliza para
separar sustancias que se encuentran mezcladas, aprovechando las diferencias en volatilidad de las sustancias involucradas. Tambin
se utiliza la destilacin para obtener la sustancia ms voltil en forma ms pura. Para
obtener sustancias muy puras se recurre a
procesos de destilacin consecutivos, a fin de
elimin ar progr esivamente sustancias con la
que se encuentran mezclados. En el caso del

agua, esta se encuentra mezclada con diversos elementos qumicos.
Disolucin. Mezcla homog nea de propi edades uni formes de dos o ms sustancias.
Se caracteriza por no existir interaccin
qumica entre los compon entes de la mezcla.
El componente que existe en mayor propor
cin y que generalmente se encuentra en
estado l- quido se denomin a disolvente y el
que se encuentra en menor cantidad, solu
to.
Dureza. Caracterstica qumica del agua determinada por el contenido de carbonatos,
bicarbonatos, cloruros, sulfatos y ocasionalmente nitratos de calcio y magnesio. La dureza es indeseable en algunos procesos. Existen
dos tipos de dureza:
Dureza temporal . Est determinada por
el contenido de carbonatos y bicarbonatos de calcio y magnesio. Puede ser eliminada por ebullicin del agua y posterior
elimin acin de precipi tados formados por
fil tracin; tambin se le conoce como dureza de carbonatos.

Dureza per manen te. Est determinada
por todas las sales de calcio y magnesio,
excepto carbonatos y bicarbonatos. No
puede ser elimin ada por ebullicin del
agua y tambin se le conoce como dureza
de no carbonatos.
Interpretacin de la dureza:
Dureza como CaCO3 Interpretacin
0-75 agua suave
75-150 agua poco dura
150-300 agua dura
> 300 agua muy dura
En agua potable, el lmite mximo permisible es de 300 mg / l de dureza.
En agua para calderas, el lmi te es de
0 mg / l de dur eza.
Dureza clcica (DCa++). Cantidad de calcio
presente en el agua.
Dureza magnsica (D Mg++). Cantidad de
magnesio presente en el agua.
Dureza total [Dt]. Cantidad en solucin de
calcio [Ca] y magnesio [Mg] como cationes,
sin tener en cuenta la naturaleza de los aniones presentes en el agua. Se expresa como
ppm (partes por milln ) de carbonato de calcio. Su frmul a es: CaCo3.
Incrustacin. Denomin acin que se otorga
a los slidos en suspensin que se depositan
en forma de capas sobre la superficie de los
recipientes que los contienen.
91
Bibliogra fa
American Society for Testing and Materials, Annual book of Standards 1994, Determin acin
de dureza en agua, Mtodo ASTM D 1126-92.
(htt p://members.tripod .com/Arturobol a/dureza.htm#Bibliogr afa)
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Rev. 12/03. (htt p://www .documark.com/Documents/a/ami50000.pd f)
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AMM 60014, Rev. 4/00. (htt p://www .documark.com/Documents/a/amm60014.pd f)
Mantenimiento y reparacin de equipos de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Organizacin Mundial de la Salud, 1996.
Warming cabinets, sterili zers, and associated equipment, Division 11 - Equipm ent, USACE
/NAVFAC/AFCESA, UFGS-11710, July 2003.
(htt p://www .ccb.org/onlin e/docs/ufgshome/pd f/11710.pd f))
92
Cdigo (s)
ECRI
15-133
DILUIDOR
El diluidor se utiliza para diluir . Diluir proviene de la palabra latina diluere y signi fica aadir lquido a una disolucin. Disolver es penetrar y dividir las molculas de un cuerpo slido. Disolucin es la fragmentacin de una
sustancia en molculas o iones dispersos homogneamente en un lquido , por lo general, agua. Tambin se definen las disoluciones
como mezclas homog neas de dos o ms

Diluidores
compon entes y pueden ser gaseosas, lquidas

o slidas. El diluidor es un equipo de laboratorio que permi te preparar mezclas generalmente lquidas hasta que se cumpla una relacin o propor cin concentracin entre los
elementos que constituyen la mezcla, para que
puedan ser utilizados en distintos tipos de
procesos diagnsticos. La identificacin de este
equipo est generalizada mediante el uso de
la palabra inglesa dilu tor.
ESQUEMA DEL DILUIDOR
Ilustracin 22: Esquema diluidor
PROPSITO
DEL
DILUIDOR
El propsito del diluidor es preparar mezclas de

sustancias, para lograr concentraciones y volmenes determinados de una solucin o sustancia, tal como se hace con una pipeta, con la
ventaja de que el proceso puede ser
automtico o progr amado. Los diluidor es
varan en tamao y complejidad. Su capacidad
depende del fabricante, pero es comn
encontrar que pueden controlar volmenes
comprendidos entre 25 l (microli tros) y 25 ml
(milili tros).
El diluidor tiene varios compon entes que interactan coordin adamente para manejar y mezclar volmenes de lquidos con gran precisin,
lo
que
permite
preparar
disoluciones
comprendidas entre 1 l y 25 ml. El diluidor
tiene, por lo general, los siguientes compon
entes:
1. Un sistema propulsor
2. Un sistema de control
3. Un sistema dispensador
CAPTULO 9
Diluidor
93
Sistema propulsor
Generalmente est conformado por sistemas
de desplazamiento positivo como los que tienen una jering a. En el diluidor se utiliza una
o ms jeringas seleccionables de diversa capacidad para controlar los volmenes a mezclar o diluir. Los pistones de las mencionadas
jeringas son propulsados por un mecanismo
que controla su posicin. Los volmenes aspirados o entregados se calculan mediante la
ecuacin:
V = Al
dond e:
V = fraccin de volumen entregada por la
jeringa cuando el pistn tiene un
desplazamiento l.
A=
rea del pistn.
El volumen total aspirado o entregado es la
integral correspondi ente.
l1
V = A l
lo
Controlando de manera exacta el desplazamiento del pistn, se puede lograr un buen

control sobre los volmenes manipul ados. El
sistema de desplazamiento es accionado mediante un motor elctrico que mueve un sistema de tuerca y tornillo de gran precisin,
que al desplazarse en uno u otro sentido

cambia la posicin del pistn. Complementan
las jeringas y sus sistemas de desplazamiento
un conjun to de vlvulas que controlan los
procesos de aspiracin y suministro. La configuracin del diluidor depende de los tipos y
modelos de los diversos fabricantes.
Sistema de control
Los diluidor es modernos tienen un sistema de
control que puede ser automtico o controlado por microprocesadores. Estos ltimos permiten seleccionar y controlar lo siguiente:
1. Procesos de mezcla y/o disolucin de sustancias (progr amables)
2. Suministro de volmenes predefinidos
3. Velocidades de succin o suministro
4. Nmero de ciclos requeridos
5. Tamao o volumen de las jeringasseleccionadas
6. Tiempos
7. Ciclos de cebado y limpi eza
8. Procedimientos de veri ficacin de la calidad
Para dar una mejor idea de la complejidad tcnica alcanzada, se incluye a continuacin un
esquema del sistema de control, basado en un
microprocesador que presenta algunas de las
funciones que incluye un diluidor. Los controles de este tipo de dispositivos, en general, son
simtricos si se manejan dos inyectores.
Ilustracin 23: Control del diluidor
94
Diluidor
Sistema dispensador
El sistema dispensador est compuesto por un
conjun to de jeringas de alta precisin y de dispositivos denomin ados dispensadores, mediante los cuales se suministran los fluidos segn
volmenes y velocidades seleccionadas.
Dichas jeringas se seleccionan e instalan en el
diluidor , dependiendo de las densidades y
viscosidades, y los volmenes de los fluidos
objeto de manipulacin. Los fluidos son
transpor tados a travs de conductos flexibles,
cuyas caractersticas di- metros, longi tudes,
compatibilid ad qumica
han sido igualmente tenidas en cuenta en el

proceso de diseo y fabricacin, para que resulten
adecuadas
con
la
actividad
seleccionada.
Dichos
conductos
se
interconectan utilizando acoples que es
posible ajustar mediante manipulacin
manual. Normalmente, las jeringas se
encuentran clasificadas de acuerdo con el uso
jeringas
para reactivos,
dilu
yentes,
muestras, y el volumen que es necesario
manipular. La tabla que se presenta a
continuacin muestra un ejemplo de la forma
en que se encuentran clasificadas de acuerdo
con su tamao y volm e- nes procesados.
Tabla de tamaos de jeringa /volmene s manejado s
Parte N
(Depende
del
fabricante)
Df
Df
Df
Df
Df
Df
Df
Df
Df
Df
Modelo
(Depende
del
fabricante)
D
f
D
f
D
f
D
f
D
f
D
f
D
f
D
f
D
f
D
f
Tama
o
jerin
gal
25
Rango
(Volume
n
procesa
2,5-25 l
50 l
5-50 l
100l
10-100l
250l
25-250l
500l
50-500l
2,5 ml
100-1 000l
5 ml
500-5 000l
10 ml
1 000-10
000l
2 500-25
000l
25 ml
250-2 500l
Tamao ductos1
Solucion
es
acuosa
1
8
1
8
1
8
1
8
1
8
1
8
1
8
1
2
1
2
1
2
Lquid
os
viscos
1
8
1
8
1
8
1
8
1
8
1
8
1
2
1
2
1
2
1
2
A continuacin, se incluye un esquema en el
que es posible ver los compon entes del sistema dispensador (jeringa y dispensador).
El diluidor debe ser instalado en un mesn o

superficie de trabajo limpi a, bien nivelada, seca y alejada de lugares donde pueda haber vapores que puedan afectar su funcionamiento.
Se debe disponer de un rea libre alrededor
del equipo para facili tar la ventilacin y el paso de los cables y lneas de interconexin, con
otros dispositivos como depsitos de solvente, compu tadores o sistemas de suministro. Se
estima que el espacio libre alrededor del
diluidor es de aproximadamente 10 cm.
Ilustracin 24: Jeringa y dispensador
Tabla 2.4, Microlab 501A, 503A, 504A, Users Manual, Hamil ton Company.
95
Debe haber una toma elctrica en buen estado con polo a tierra, de 115 V, 60 Hz. Tambin
existen fabricantes que producen diluidor es
que operan a 220 V, 60 Hz.
Las rutinas estn enfocadas principalmente a
elimin ar los contaminantes que puedan depositarse sobre las superficies interiores de los
mecanismos y/o conductos que utiliza el fluido
durante su desplazamiento. Las rutinas ms
comunes son las siguientes:
Limpieza de super ficies exterior es

Frecuencia: Diaria
Adver tencia: Desconectar el diluidor de la
toma de alimentacin elctrica, antes de
iniciar los procesos de limpi eza externa.
1. Limpiar las superficies exterior es, utilizando un trapo limpio humedecido con un detergente suave mezclado con agua.
2. Frotar suavemente las superficies del dilui
- dor y de los accesorios.
3. Secar las superficies tratadas.
Adver tencia: Evitar que la humedad inund
e el compartimiento de los componentes
elctricos o electrnicos.
Limpieza de jeringa s, manguera s o

conductos
Frecuencia: Diaria
Adver tencia:Si el diluidor ha estado en
contacto con sustancias peligrosas, se
deben res- petar los procedimientos de
segurid ad y pre- vencin implementados en
el laboratorio.
1. Cebar el sistema con una solucin de limpi
e- za. Consultar al fabricante para definir
exactamente cul utilizar. Verificar que la
totalidad de los elementos del sistema
entren en
contacto con dicha solucin y que se hayan

eliminado las burbuj as de aire que pudieran
existir. Este proceso se conoce en ingls
como Prime. Para cebar el sistema se
conecta el diluidor a un recipiente en el
cual se encuentra la citada solucin y se
hace funcionar, recolec- tando la solucin
utilizada en otro recipiente para su
disposicin final.
2. Limpiar el sistema. Para efectuar la
limpi e- za, se hace circular un fluido
complemento de la solucin limpi
adora utilizada. (Con- sultar las
recomendaciones del fabricante). Es
comn utilizar agua desioni zada
como
fluido
de
limpi
eza.
Dependiendo de las sustancias
procesadas en el diluidor , tambin
pueden utilizarse otros agentes de
limpi eza como etanol, urea, o una
solucin de blanqueador a base de
cloro disuelto en agua desioni zada
con una concentracin del 10 %.
Limpieza del sistema de conduccin

de fluidos
Frecuencia: Antes de colocar en servicio por
primera vez
1. Preparar un recipiente con solucin de limpieza y colocar el tubo de llenado dentro
del mismo. (Los fabricantes recomiendan
utilizar agentes de limpi eza compatibles
con los materiales de diluidor ).
2. Colocar la sonda de mano dentro del recipiente de la solucin de limpi eza o
dentro del recipiente para recolectar el
desperdicio.
3. Seleccionar un ciclo de cebado o imprim acin hasta que la trayectoria que recorre el
fluido quede limpi a.
4. Retirar el tubo de llenado de la solucin
limpi adora y colocarlo dentro de un recipiente con agua desioni zada. Iniciar nuevamente un ciclo de cebado o imprim acin, hasta que la trayectoria del fluido
quede libre de solucin limpi adora. Descargar el fluido de enjuague dentro del recipiente de desperdicio.
5. Suspender el ciclo de cebado.
96
Diluidor
3. Almacenar las jeringas en sus

empaques origin ales.
4. Cubrir el cuerpo del diluidor para pro
te- gerlo de partculas de polvo.
6. Colocar el sistema propulsor del fluido en la

posicin de descanso.
7. Utilizar el sistema, pues se encuentra limpio y listo.
5. Almacenar.
Procedimien to para almacenar el
diluidor
Frecuencia: Cuando se almacene por un perodo de tiempo prolong ado
1. Purgar e imprim ar el sistema utilizando
metanol (facili ta el secado).
Control de calidad
El control de calidad de los diluidor es es similar al de las pipetas. Para resolver las inqui etudes, se solicita ver la explicacin que al respecto se ha efectuado en el captulo correspondi ente a las pipetas.
2. Remover los tubos y las jeringas.
PROBLEMA
El diluidor no enciende.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Falla en la alimentacin
elctrica.
Cable de alimentacin elctrica
desconectado.
Revisar acometida elctrica.
Fusible de proteccin abierto.
Revisar fusible de proteccin. Sustituir por

un equivalente si el mismo seencuentra
abierto. que el control est bien
Verificar
El diluidor opera bien, pero no hay

mensajeso indicacionesen la
pantalla.
Posible dao en la pantalla LCD o

en los diodos emisoresde luz LED.
Las teclas del control no funcionan.
El diluidor est en modoPausa.
El diluidor est atascado.
Falla interna.
Conectar cable de alimentacin elctrica.
conectadoal sistemapropulsor.
Llamar al servicio tcnico del
fabricante.
Presionar el botn Marcha/Fin para
finalizar la carrera del pistn.
Presionar el botn Marcha/Fin para
finalizar la carrera del pistn y reiniciar el
ciclo. al servicio tcnico del fabricante, si
Llamar
la falla persiste.
El diluidor no aspira o
dispensa.
Tubos de los sistemas hidrulicos

defectuosos o bloqueados.
Conexiones incorrectas de tubos o
jeringas.
Sistemapropulsor defectuoso.
Vlvulas defectuosas.
Verificar que los tubos, jeringas y

conectores estn libresde bloqueos.
Limpiar o sustituir.
Comprobar
que los tubos, uniones,
acoplesy jeringas
utilizadasseencuentranbien
ajustados.
Llamar
al servicio tcnico
del
fabricante.
Remover las vlvulas. Verificar el sello de
las mismas, limpiar y reinstalar. Sustituir
por una vlvula equivalente en caso de
ser requerido.
97
PROBLEMA
El diluidor produceresultados
imprecisos.
CAUSA PROBABLE
Existe aire en el circuito del
fluido.
REMEDI
O de aspiracin se
Verificar que los tubos
encuentren completamente sumergidos
dentro de los recipientesque contienen
los reactivos.
Confirmar
que los diversos conectores se
encuentran ajustados.
Verificar que las jeringas se encuentren
correctamente instaladas y no presentan
fugas.
Comprobar
que los tubos o vlvulas no
presentan fugas.
Tubo de descarga mal

seleccionadoen relacin con la
capacidadde la jeringa.
Apareceunpequeoespacio
deaireen la punta de la
sondadespusde la aspiracin
final. presencia de aire en forma
Existe
per- sistente o fugas constantes
en la trayectoria del fluido.
Tubo de aspiracin sucio.

Modo de aspiracin incorrecto.
Sepresentacavitacinen
elsistema.La velocidadde
aspiracin esmuy alta.
tubouti- lizado y los acoples del mismo.

Para volmenes pequeos utilizar las
dimensiones recomendadas por el
fabricante.
Cambiar o limpiar el tubo de
aspiracin.
Reducir la velocidadde aspiracin.
Reducir
lavelocidaddelsistemapropulsor.Recor- dar
que, mientras msviscosos sean los
fluidos, los
debenacoples
manipularsea
Ajustar
con la menor
mano.
Acoples flojos, gastados o

defectuosos.
El diluidor se recalienta.
Reducir la velocidad de operacin de la

jeringa para eliminar problemasde
cavitacin. el tamaorecomendadodel
Verificar
Sustituir los tubos por otros de

dimensin acorde al fluido procesado.
Pistn defectuoso o jeringadaada.
Reemplazar el pistn o la jeringa.
Vlvula defectuosa.
Reemplazar la vlvula.
Ventilacin inadecuada.
Revisar la ventilacin.
Temperatura del ambiente

demasiado alta.
Revisar el sistema de acondicionamiento

de aire del ambiente.
Ciclo de trabajo muy intenso.
Utilizar el diluidor con menor

intensidad.
DEFINICIONES BSICAS
Cavi tacin. Fenmeno que se presenta en los
fluidos cuando alcanzan condiciones de alto
vaco. (La presin disminu ye hasta que se
alcanza la presin de vapor del fluido ). Esto
produce diversos fenmenos como la vapori zacin de los gases disueltos en el lquido o,
en el caso del agua, la formacin de burbuj as
de vapor que colapsan tras un lapso de tiempo infini tesimal, horadando las superficies de
los conductos en los pun tos localizados en la
vecindad inmediata del lugar de ocurrencia del
fenmeno. En los diluidor es se presenta
cuando se utilizan jeringas de gran capacidad, con velocidades elevadas de propulsin.
Concentracin. Medida de la cantidad de soluto presente en una disolucin, desde el pun

to de vista de la qumica. El concepto se aplica
con mayor frecuencia a las soluciones y se
expresa como la cantidad de un solu to que se
encuentra disuelto en un solvente. La
concentracin se expresa de diversas formas;
las ms comunes son: molaridad [M],
molalidad [m], normalidad [N], tanto por ciento
de solu to.
Diluir . Reducir la concentracin de solu to en
una mezcla, aadiendo otro fluido . El fluido
que se aade se conoce como dilu yente.
Disolucin. Estado que se presenta como resultado del proceso de intercalar totalmente las
molculas de una sustancia slid a, con las
98
Diluidor
molculas de una sustancia lquid a, o las

molculas de una sustancia lquida con las
molculas de otra sustancia lquid a. El
componente ms abundante se llama
solvente o disolvente y el menos abundante,
soluto. Para determinar una disolucin de
volumen V2 y concentracin C2 a partir de una
disolucin concentrada de concentracin C1, se
calcula el volumen V1 mediante la siguiente
ecuacin:
VC
V1 =
2 2
Nor malidad [N] (de un solu to). Nmero de

equivalentes de solu to, por cada li tro de disolucin final:
Eq
N=
Vol (L)
Peso equivalen te [PE] (de una sustancia).
Resultado de dividir el peso molecular [PM]
de la sustancia por su valencia:
PM (g)
C1
PE = Valencia
Dispensador . Dispositivo utilizado para distribuir lquidos.

Dispensar. Distribuir un fluido ; puede hacerse a volumen constante o de forma progr esiva.
Equivalen te gra mo [Eq]. Masa en gramos
de solu to, dividido por su peso equivalente
[PE]:
Eq =
masa(g)
PE(g)
Mol. Peso molecular (PM) del solu to expresado en gramos:

moles =
Solucin. Mezcla homog nea de una o ms

sustancias disueltas en otra sustancia. A la
sustancia disuelta se le da el nombr e de soluto, mientras que la sustancia que disuelve se
llama solvente. El solvente existe en mayor
cantidad que el solu to en una solucin.
masa(g)
PM
Molalidad [m]. Nmero de moles de una

sustancia dada, por cada 1 000 g de solvente.
As una solucin m molal se obtiene al aadir
m moles de la sustancia a 1 000 g de agua.
Molaridad [ M] (de un soluto). Nmero de
moles de soluto por cada li tro de disolucin
final. Una solucin N Molar de un cido se
obtiene al aadir N moles del cido al agua
hasta obtener un (1) li tro de solucin.
Normalmente, la fr- mula empleada es la
siguiente:
M=
Peso/Volu men. Relacin muy utilizada en

bioqu mica clnica. Expresa la masa del solu to
en gramos o subml tiplos de este, por unidad
de volumen en li tros o subml tiplos de li tro.
Por ejemplo: g/l, mg/ml.
moles
Vol (L)
Nota: Para medir concentraciones extremadamente bajas, se utiliza otro tipo de

notacin, conocida como notacin " parte
por-unidad " . Por ejemplo : partes por
milln (ppm) signi f ica que existe una
partcula de una sustancia dada por
cada 999 999 partculas de otras
sustancias.
99
Bibliogra fa
Salgado, J., Hover., R., Biologa molecular y celular, Curso 2003-2004. Sienko, M., Plane, R., Qumic
The Microlab 500 Series: Microlab 501A, Microlab 503A, and Microlab 504A, Users Ma- nual, Ham
The Microlab 500 Series: Microlab 510B, 530B, and 540B, and Microlab 511C, 531C, and 541C, Us
100
CAPTULO 10
Dispensador
Cdigo (s)
ECRI
16-274
DISPENSADOR
El dispensador es un equipo de la familia de las

pipetas y los diluidor es. La palabra dispensar
proviene de la preposicin inseparable dis que
implica privacin, y de la palabra latina pensum
que signi fica tarea. En el laboratorio se
encuentran diversas clases de dispensadores,
los hay para atender las necesidades del rea
de qumica, pero tambin modelos que
efectan una labor anloga, aunque varan

Dispensadoresde lquidos para laboratorio
en diseo como los utilizados en microbiolo ga, bacteriolog a, inmunolog a y farmacologa. Finalmente hay unidades de dispensacin automatizadas, controladas mediante
progr amas de compu tador, que se utilizan en
instituciones de gran demanda de servicios en
donde se han automatizado los procedimientos. Este captulo presenta los dispensadores de tipo por ttil por considerar que son
los ms comunes.
ESQUEMA Y FOTOGRAFA DEL DISPENSADOR
Esquema
Fotografa
Ilustracin 25: Dispensador
101
PROPSITO DEL DISPENSADOR
El dispensador es un equipo mul tipropsito

que puede utilizarse en el laboratorio para
realizar las siguientes actividades:
Los dispensadores modernos, por lo general,

estn controlados por microprocesadores y
disponen de los siguientes compon entes2:
1. Aspirar y dispensar volmenes de lquidos

o soluciones que no requieren mayor
exactitud.
1. Selector de volumen. Grada el volumen

que se requiere dispensar. La seleccin hecha se muestra directamente en la pantalla del dispensador.
2. Distribuir un volumen de lquido o solucin almacenado en un recipiente contenedor en volmenes parciales predefinidos, mediante un dispositivo de suministro
(dispensaciones repetitivas con volumen final constante).
3. Mezclar una solucin mediante operaciones sucesivas de aspiracin y dispensacin,
utilizando un dispositivo de aspiracin y
suministro.
2. Pantalla digi tal. Presenta los datos relacionados con la funcin seleccionada, tales
como volumen seleccionado, tipo de punta colocada y la informacin relacionada
con los mensajes de alarma o error que
puedan generarse durante la operacin.
Ejemplo: batera baja o pun ta mal seleccionada para el volumen seleccionado.
4. Titular. Determin ar la concentracin de

una solucin, midiendo exactamente los
volm enes dispensados (dispensaciones
consecutivas hasta lograr el pun to final).
3. Palanca de dosificacin. Permi te efectuar

la dosificacin accionando un mbolo que
se encuentra acoplado a una bomba de
desplazamiento positivo tipo jering a, en el
cual acciona un pistn a lo largo de un cilindro para desplazar un volumen.
5. Diluir. Reducir la concentracin de una solucin, utilizando mezclas con troladas.

(Adicin de dos reactivos a un vial frasco
comn ).
4. Palanca de llenado. Dispositivo mecnico

que acciona el mbolo de la bomba de
desplazamiento positivo para aspirar los
volmenes.
6. Utilizar como una pipeta (aspirar un volumen y luego dispensarlo).
5. Botn de expulsin. Mecanismo que libera

el elemento de dispensacin de la cabeza
de dosificacin.
7. Distribuir medios de cultivo en placas Petri.

Generalmente para esta funcin se utilizan
dispensadores automatizados, dotados de
accesorios para mover las placas de Petri y
almacenarlas una vez dispensado el medio
de cultivo. Para aplicaciones pun tuales
pequea escala, la distribucin de
medios de cultivo se efecta utilizando
jeringas plsticas desechables con agujas
N 161.
Dichas actividades norm almente pueden progr
amarse en el dispensador,
siguiendo las
instruccion es que para el efecto brind a el
fabricante.
6. Acople del dispensador. Es el vstago mediante el cual el elemento dosificador se

acopla a la cabeza dispensadora, contiene
un sistema de sellos y guas para asegurar
su ajuste adecuado.
7. Escala de dosificacin. Permi te conocer el
volumen mximo que puede dispensar con
el elemento de dosificacin seleccionado.
En algunos casos, tambin permi te saber
cul es el volumen remanente.
8. Elemento de dispensacin. Depsito que
con t iene la solucin que se aspira o se
Product Information Sheet. 3cc Syringes. For dispensing and plating Methocult.
htt p://www .stemcell.com/technical/28230_28240-PIS.pd f
2
La numeracin de la descripcin corresponde a la utilizada en la ilustracin.
1
102
Dispensador
suministra en ciclos de dispensacin. Hay

una gran variedad, dependiendo del modelo. Los hay sencillos y combin ados (con
varias pun tas de dispensacin).
9. Punta
de
dispensacin.
Permi
te
suministrar o succionar las soluciones con
las cuales se trabaja. La pun ta constituye
un elemento indispensable para la correcta
operacin del dispensador, y se encuentra
ubicada en el elemento de dispensacin.
Sin esta es imposible utilizar
el
dispensador.
10
11. Depsito de bateras. (No mostrado en la

ilustracin).
Componen tes de dispensacin

Para que el dispensador realice las operaciones
arriba mencionadas, se requiere utilizar una serie de accesorios que han sido diseados para
realizar tareas especficas. En la ilustracin que
se presenta a continuacin, se muestran
algunos de los modelos disponibl es.
10.
Un in terrup tor de encendido /apagado.
(No mostrado en la ilustracin).
Ilustracin 26: Elementos dispensadores
Volmene s utilizados
Los dispensadores han sido desarroll ados para t rabajar con rangos predefinidos de volumen. Cuando se requiera utilizarlos deber
considerarse el tipo de solucin que se pretende t rabajar y los volm enes a dispensar.
Los fabricantes ofrecen diversos modelos.
Se presenta una tabla con rangos tpicos de
t rabajo.
Capacidad elemento
dispensador
0,1 ml
Rango
volmenes
dispensados
1-20 l
0,2 ml
2-40 l
1 ml
10-100l
5 ml
50-500l
10 ml
100l a 2
ml
250l a 5
ml
25 ml
103
Frecuencia: Diaria
Dependiendo del tipo de dosificador, se requiere contar con unas condiciones mnimas,
entre las que se destacan las siguientes:
1. Verificar que el dispensador haya sido
diseado para trabajar con las soluciones
que se pretenden utilizar. Verificar la
compatibilid ad de los materiales en el
manual de uso y operacin que suministra
el fabricante.
2. Un ambiente limpio , dotado de puestos
de trabajo bien dimensionados y de una
buena ventilacin e ilumin acin.
3. Verificar que la temperatura del ambiente
donde se utiliza sea estable, con un rango
de variacin de 0,5 C, que se encuentre
entre los 4 y los 40 C, es ptima una temperatura de 20 C.
4. Utilizar los elementos de pro teccin adecuados, si se trabaja con materiales txicos
o que conll even riesgo biolgi co.
5. Utilizar las pun tas que el fabricante ha diseado para cada aplicacin en particular.
1. Limpiar el dispensador con una pieza de

tela humedecida con un detergente suave.
2. Desin fectar el dispensador utilizando isopropanol al 60 %.
3. Evitar que la humedad inund e el interior
del control electrnico y/o los mecanismos.
Cambio de batera
1. Abrir el compartimiento de la batera. Por
lo general, solo debe deslizarse una tapa
de la posicin "cerrada" a la posicin
" abierta".
2. Retirar la batera agotada. Procesar como
desecho siguiendo las recomendaciones.
3. Instalar una batera con iguales caractersticas de la origin al. Verificar la polaridad
elctrica para que quede bien instalada.
Antes de colocarla en su alojamiento, limpiar la superficie de contacto con una pieza de tela limpi a.
4. Cerrar y ajustar la tapa.
El mantenimiento del dispensador es sencillo.
Las rutinas detalladas a continuacin destacan las actividades ms impor tantes:
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
No esposible instalar
loscomponentes dispensadoresen
la cabezade dosificacin.
Componente defectuoso.
Dispositivo dispensador no puede

ser retirado de la cabezade
dosificacin.
Falla en el sistemaelectrnico.
La punta del dispositivo

dispensador gotea.
Componente dispensador
contaminado.
Falla en el mecanismo de
ajuste.
Punta defectuosa.
REMEDIO
Solicitar servicio tcnico
especializado.
Observar si existe algn tipo de
obstruccin.
Limpiar
si
esnecesario.Solicitar servicio tcnico
especializado.
Reiniciar
equipo. (Apagar y encender).
Selec- cionar opcin de extraccin
manual. si el pistn sedesplazahacia
Verificar
adelan- teyatrs.Retirar el cilindro
sobre un recipiente para retener
desperdicios.
Sustituir
punta dispensadora.
104
Dispensador
PROBLEMA
Dispositivo dispensador tipo pipeta
gotea.
CAUSA PROBABLE
10
REMEDIO
Punta dispensadora mal

ajustada.
Liberar la punta dispensadora del cono de

ajuste. Ajustar firmemente.
Punta dispensadora mal

seleccionada.
Verificarel tipodepuntadefinidaporel
fabricante.
Pistn o sello del pistn

daados.
La pantalla presenta laseal de
batera baja.
Batera agotada.
Reemplazar el pistn y los sellos. Utilizar

repuestos suministrados por el
fabricante.
Reemplazar
batera.
La pantalla no presenta
ningunaseal.
Batera agotada.
Reemplazar batera.

especializado.
especializado.
Verificar que el volumen disponible para
dispensar sea adecuado. Si no lo es,
cargar o aspirar un volumen que
resulte adecuadoa la cantidadque se
quiere dispensar.
Dispensar. Revisar la operacin que trata
de hacerse.
La pantalla presenta sealesde

error.
La pantalla presenta error de
llenado.
La pantalla presenta error de

volumen completo.
La pantalla presenta error de punta
seleccionada.
Lquido insuficiente para dispensar.
Se ha tratado de aspirar ms
lquido del que puede recibir el
recipiente de almacenamiento o la
punta
utilizada.
La
punta
instaladaen el equipo
no es- t diseada para realizar la
operacin que se pretende.
Punta defectuosa.
DEFINICIONES
BSICAS
Disco Petri. Plato de poca pro fundid ad elaborado en vidrio o plstico que se usa para
efectuar cultivos de microorg anismos en el
laboratorio.
Elemento dispensador . Dispositivos utilizados con una cabeza dispensadora para
transferir una solucin a la placa o recipiente
donde ser examinado o almacenado. Las
caractersticas de los elementos dispensadores varan de acuerdo con la magni tud de los
Verificar qu tipo de punta est

diseadapa- ra realizar la operacin.
Sustituir la punta.
Colocar punta nueva, con lasmismas
especificacionesde la original.
volmenes a dispensar y de las caractersticas

de la solucin.
Medio de cultivo. Material lquido o slido
desarroll ado con propsitos mdicos para
cultivar e identificar microorg anismos capaces de producir enfermedades (patgenos).
Mezclar. Agregar sustancias sin que exista
reaccin qumica entre las mismas. En una
mezcla homog nea, la composicin y el aspecto deben ser iguales en todas las partes
de la misma.
105
Bibliogra fa
Dilu tors and dispensers, Hamil ton Company. (www.hamil toncompany.com)
Manual de Instruccin, Dispensador Eppendor f 5222, Hamburg , Eppendor f AG. B 5522 900.028
Multipette Pro Instruction manual, Hamburg , Eppendor f AG. B 4985 900.014-02/1103. (htt p://ww
Multipette R Plus, Instruction manual, Hamburg , Eppendor f AG B 4981 900.010-09/0904. (htt p:/
Product Information Sheet, 3cc Syringes, For dispensing and
plating
Methocult . (
106
Cdigo (s)
ECRI
15-082
15-083
15-084

Espectrofotmetros de ultravioleta
Espectrofotmetros de luz
visible/ultravioleta
Espectrofotmetros de luzvisible
ESPECTROFOTMETRO
La palabra espectrofotmetro se deriva de la

palabra latina spectrum, que signi fica imagen,
y de la palabra griega phos o pho tos, que signi
fica luz. El espectrofotmetro, construido
mediante procesos avanzados de fabricacin,
es uno de los principales instrumentos
diagnsticos y de investigacin desarrollados
por el ser humano. Utili- za las propi edades de
la luz y su interaccin con otras sustancias, para
determinar la naturaleza de las mismas. En
general, la luz de una lmpara de
caractersticas especiales es guiada a travs de
un dispositivo que selecciona y separa luz de
una determinada longi tud de onda y la hace
pasar por una muestra. La intensidad de la luz
que sale de la muestra es captada y comparada
con la intensidad de la luz que incidi en la
muestra y a partir de esto se calcula la
transmitancia de la muestra, que depende de
factores como la concentracin de la sustancia.
Espectrofotmetro moderno
http://www.biochrom.co.uk/images/spectro/ultro100pro_white.jpg
PROPSITO DEL EQUIPO

El espectrofotmetro se usa en el laboratorio
con el fin de determinar la concentracin de
una sustancia en una solucin, permi tiendo as
la realizacin de anlisis cuantitativos.
FOTOGRAFAS DEL ESPECTROFOTMETRO
Como principio bsico se considera que la luz
es una forma de energa electromagntica, que
en el vaco tiene una velocidad constante [C]
y universal de aproximadamente 3 x 108 m/s.
En cualquier otro medio (transparente) por el
que pase la luz, su velocidad ser lige-
CAPTULO
11calcularse
ramente inferior y podr
mediante la siguiente ecuacin:
Espectrofotmetro
C
v0 =
Espectrofotmetro clsico
l#
107
dond e:
v=
velocidad a travs del medio por el
que pasa la luz
n = ndice de refraccin del medio, cuyo valor
oscila, por lo general, entre 1,0 y 2,5
La energa electromagntica dispone de una
muy amplia gama de longi tudes de onda. Algunos ejemplos se muestran en la siguiente
tabla1:
Tipo de
energa
electromagnti
Ondas de radio
Ondas de radar
Ondas
infrarrojas
Luz visible
Rango de la
longitud de
onda
De pocos metros a pocos

kilmetros
De 1 a 10 cm
De 1 a 10 micras (10-6m)
Rayos X
De 300a 700 nm
(nanmetros)
De 0,1 a 0,5 (ngstrom)
Rayos gama
Aprox. 0,0012 (ngstrom)
La luz, al pasar o interactuar con diversos medios, presenta una serie de fenmenos, entre
los que destacan la reflexin, refraccin, difraccin, absorcin, difusin, polarizacin y

otros que son utilizados en diversos instrumentos y dispositivos. La siguiente tabla
muestra los rangos de longi tud de onda en
donde se utiliza el espectro luminoso para
realizar pruebas de espectrofotometra.
Regin del
espectro
luminoso
Rango de la longitud de onda
Ultravioleta
10-200 nm (nanmetros)
Ultravioleta
cercano
Luz visible
200-280 nm
Infrarrojo
cercano
Infrarrojo
medio
Infrarrojo
lejano
780-3 000 nm
380-780 nm
3 000-20 000 nm
30 000-300 000 nm
Con respecto a la interaccin de la luz con la

materia, el siguiente esquema ayuda a entender la complejidad de los fenmenos que
ocurren:
Ilustracin 27: Interaccin de la luz con la materia
Lobko wicz, F., Melissinos, A., Physics for Scientists and Engin eers, vol. II, Philadelphi a, WB SAUNDERS CO., 1975.
108
Espectrofotmetro
El esquema muestra que la radiacin incidente

[Io] sufre una serie de transformaciones. Parte
de la misma se refleja [Ir], parte se transmite
[It],
parte se difunde [Id] y parte se absorbe e incide
directamente en fenmenos como la fluorescencia [If]. Los fenmenos en los que se basa la
espectrofotometra son principalmente la
absorcin y la transmisin. Para entender cmo se
utilizan, es necesario adicionalmente tener en
cuenta la ley de Beer Lambert.
1
1
La absorbancia [A] se relaciona con la transmitancia [T] mediante la siguiente ecuacin:

1
A = Log10
Io
= Log10
xcxl
=
Log1010
=xcxl
El siguiente esquema explica el fenmeno de la

absorbancia A:
Ley de Beer Lamber t. Se conoce tambin como ley de Beer o de Beer Lambert Bouguer e
identifica la relacin existente entre la concentracin de la muestra y la intensidad de la luz
transmitida a travs de la misma. Con relacin a
la ley en mencin hay implcitos dos conceptos:
transmitancia [T] y absorbancia [A].
La transmitancia [T] es la fraccin de la luz incidente que a una determinada longi tud de
onda pasa a travs de la muestra. Se define
por la siguiente relacin:
T=
It
Io
donde:
It = intensidad de la radiacin transmitida
Io = intensidad de la radiacin incidente
El porcentaje de transmitancia [%T] puede expresarse por la siguiente ecuacin:
%T =
It
Io
Ilustracin 28: Fenmeno de absorbancia

Las curvas que se presentan a continuacin
muestran cmo vara la absorbancia [A] y la
transmitancia
[T]
en
funcin
de
la
concentracin [C], de acuerdo con la ley de
Beer Lambert, en la que se basa la
espectrofotometra2.
Grfica transmitancia
x 100
La concentracin de molculas absorbentes de

luz en la muestra es propor cional a la
absorbancia
[A]
de
la
muestra.
Matemticamente se expresa as:
A=xlxc
donde:
A=
absorbancia medida
=
coeficiente de absortividad molar
[li tros/moles/cm]
l =
distancia de la trayectoria recorrid
a por la luz dentro de la muestra
c=
concentracin de la muestra [moles/litros]
1
A = Log
T
Instruction Manual, Spectropho tometer, SmartSpec 3000, Catalog N 170-2501.
109
Grafica absorbancia
debido a la interacci6n electrostatica entre

moleculas cercanas.
3. Cambios en el indice de refracci6n a
altas concentraciones delanalito.
cro
c; t-------.,,..c;..----
4. Difusi6n de la luz debido a partlculas en la

muestra.
.-------,-------<{
5. Fluorescencia o fosforescencia de la
muestra.
Concentraci6n
6. Radiaci6n no monocromatica.
A=exlxc
COMPONENTES DEL ESPECTROFOT6METRO

Como conclusion puede inferirse que, a
me dida que aumenta la concentraci6n de
una sustancia, la transmitancia disminuye y
que, al aumentar la concentraci6n de la
sustancia, aumenta la absorbancia.
El esquema que se presenta a continuaci6n

des cribe la interrelaci6n de los diversos
componen tes de un espectrofot6metro . os
mas importan tes son los siguientes:
la linealidad de la ley de Beer Lambert se
1. a fuente luminosa
ve afectada, si se presentan las siguientes
2. El monocromador
condiciones:
3. El portador de muestras
4. El sistema detector
5. El sistema de lectura
1. Corrimientos en el equilibrio qu1m1co

de la muestra como una funci6n de la
concentraci 6n.
2. Desviaciones en los coeficientes de
absorti vidad, concentraciones mayores de
0,01 M
Fuente
..
luminosa
Rendija de
entrada \l
Se
recuerda
que
los
componentes
mencionados corresponden a los basicos o
generales deeste ins trumento y no a los que
hayan
sido
incorporados
por
diversos
fabricantes como consecuencia del avance
tecnol6gico.Una breve explicaci6n de los
mismos
se
encuentra
a
continuaci6n
delesquema.
Espejo
r
If
, o/
I
Muestras
Sistema
detector
, I
I
'\
'\ '-----Rendija de
salida
Prisma
Sistema
lector
llustraci6n 29: Componentes def espectrofot6metro
r
110
Espectrofotmetro
Fuen te lumino sa
Portador de muestras
Dependiendo
del
tipo
de
espectrofotometra, la fuente luminosa
puede ser una lmpara con filamento
de tungsteno para luz visible, o una
lmpara de arco de deuterio para luz
ultravioleta. Algunos fabricantes han
diseado espectrofotmetros con
lmparas intermitentes de xenn de
alta duracin que emiten luz en el rango de la luz visible y ultravioleta. La
lmpara o lmparas vienen montadas
de fbrica en una base que permite
asegurar una determinada posicin,
para que se mantengan las condiciones de ajuste ptico y enfoque cuando
est en operacin o se requiere
reemplazarla. La energa radiante
tpica que emite una lmpara de
tungsteno est entre los 2 600 y los 3
000 K (grados Kelvin).
Est diseado para sostener la muestra

que se quiere analizar dentro del rayo
de luz de longi - tud de onda
determinada por el monocromador. El
elemento que contiene la muestra es
una celda o cubeta, por lo general,
rectangular. Las celdas o cubetas se
fabrican de vidrio , si se requieren
efectuar estudios en el rango de los
340 a los 1 000 nm y de slice, si el
anlisis est en el rango comprendido
entre los 220 y los 340 nm. Tam- bin
hay celdas en materiales plsticos
como es- tireno o poliestireno. El por
tador de muestras lo disean los
fabricantes de acuerdo al tipo de espectrofotmetro y de muestra a
analizar, por ello se encuentran por
tadores de muestra con microceldas,
aunque tambin tubos de ensayo y
otras variantes como lasceldas de flujo
continuo.
Monocromador
Est compuesto por un conjun to de
elementos. En general, dispone de una
rendija o ranura de entrada que limi ta
la radiacin lumnica produ- cida por la
fuente y la confina en un rea determinada, un conjun to de espejos
para pasar la luz a travs del sistema
ptico, un elemento para separar las
longi tudes de onda de la radiacin
lumnica, que puede ser un prisma o
una rejilla de difraccin, y una rendija
de salida para seleccionar la longi tud
de onda con la cual se desea ilumin ar
la muestra. Las rejillas de difraccin
tienen la ventaja de eliminar la dispersin no lineal y son insensibles a los
cambios de temperatura.
Sistema detector
El sistema de deteccin puede estar
diseado con fotoceldas, fototubos,
fotodiodos o fotomultiplicadores.
Esto depende de los rangos de longi
tud de onda, de la sensibilid ad y de la
velocidad de respuesta requeridas. El
sistema de deteccin recibe la
energa lumnica proveniente de la
muestra y la convierte en una seal
elctrica propor cional a la energa
recibida. La seal elctrica puede ser
procesada y ampli ficada, para que
pueda interpretarse a travs del
sistema de lectura. En la tabla que se
incluye a continuacin, se presenta
un resumen de las ventajas y
desventajas
de
los dispositivos
normalmente usados en los sistemas
de deteccin.
Tabla de ventajas y desventajas dispositivos de deteccin
1
1
ELEMENTO
Fotoceldas
VENTAJA
S
Econmicas
Pequeas
Fototubos
DESVENTAJAS
Longitudde ondalimitadaentre 400y
750nm.
Baja sensibilidad.
Robustas
Respuesta lenta a cambio de

intensidad lumnica.
No requieren fuentes de energa ni

amplifica- doresde seal.
Agotamiento.
Se fabrican para que sean sensibles entre

los 190y los 650 nm.Tambin entre los
600y los 1 000 nm.
Laseal esmuydependiente de la
temperatura.
Requieren calibraciones, dependiendo de
la temperatura del ambiente en que se
encuentra instaladoel equipo.
Se agotan con altos nivelesde iluminacin.
111
ELEMENTO
Fotodiodos
VENTAJA
S
Carecen de partesmecnicasmviles.
DESVENTAJAS
Adquierendatosespectralesde formasimultnea.
Disponen de un rangodinmico
amplio.
Brindanexcelente reproducibilidadde la
longitud de onda.
Fotomultiplicadores
Son ms sensibles que los fototubos y

las fotoceldas.
Pueden quemarse, si la luz diurna penetra

cuandoestn trabajando.
Trabajanen rangosmsamplios de
longitudes de onda.
Son costosos.
Tienen respuestas ms rpidas a los

cambios de intensidad luminosa.
Necesitan fuente de alto voltaje.
No se agotan como las fotoceldas.
Seusansoloenespectrofotmetrosespecializado
s.
Pueden ser fabricadosconsensibilidada la

luz en todoel rangode la luzultravioleta
yvisible. (Desde 190 hasta 900 nm).
Sistema de lectura
1.
de
La seal que sale del detector recibe diversas

transformaciones. Se ampli fica y se transforma
para que su intensidad resulte propor cional al
porcentaje de transmitancia/absorbancia. Existen
sistemas de lectura de tipo anlogo (muestra la
magni tud leda sobre una escala de lectura) o
digital (muestra la magni tud leda en una
pantalla).
Los indicadores de tipo anlogo reciben tradicionalmente el nombr e de metros. Su exactitud
depende, entre otros factores, de la longi tud
de la escala y del nmero de divisiones que
tenga. (Mientras ms divisiones, ms exacto). Su
principal desventaja es que pueden ser mal
ledos, por la fatiga de los operadores o errores,
cuando disponen de varias escalas, al tratar de
identificar las escalassobre las que deben
realizar la lectura.
Los indicadores digi tales usualmente presentan
los resultados en una pantalla, en forma
decaracteres alfanumricos luminosos. Esto los
hace menos pro- pensos a que se cometan
errores de lectura.
Para el funcionamiento de un espectrofotmetro se requiere lo siguiente:
Una
fuente de suministro elctrico
acuerdo con las normas y estndares

implementados en el pas. En los
pases americanos se utilizan, por lo
general, voltajes de 110 V y
frecuencias de 60 Hz.
3. Una mesa de trabajo estable, que est
alejada de equipos que generen
vibraciones (centrfugas, agitadores).
Los espectrofotmetros, en general, son

equipos muy especializados y costosos.
Su conservacin depende en gran
112
medida de la forma de instalacin y utilizacin.

El medio ambiente que los rodea y la calidad
de los servicios de electricidad constituyen
factores de primordi al impor tancia, para que
los equipos puedan prestar losservicios de
acuerdo con las especificaciones para los que
fueron
fabricados. Las rutinas de
mantenimiento que pueden llegar a requerir
varan en complejidad, van desde la limpi eza
cuidadosa de sus componentes hasta
procedimientos especializados, que solo deben
realizar tcnicos o ingenieros que hayan recibido la capacitacin correspondiente y disponMANTENI MIENTO DEL
ESPECTROFOTMETRO
gan de la informacin tcnica desarrollada por
los fabricantes y que se ajustan a los distintos
Espectrofot6metro
modelos y disenos disponibles. La utilizaci6n,

siguiendo las instrucciones del fabricante,y el
uso cuidadoso garantizaran una vida util,
pro longada y muches aflos de servicio. En
equipos
de fabricaci6n
reciente,
los
productores han in corporado rutinas
automaticas de calibraci6n y verificaci6n del
estado de los componentes que lo integran.
En
este
documento
se
presentan
recomenda
ciones
generales
de
mantenimiento aplica bles a una amplia
gama de espectrofot6me tros. Se destaca que
las rutinas especializadas solo es posible
realizarlas siguiendo las reco mendaciones
especfficas de los fabricantes para cada
modelo de equipo. Las rutinas ge nerales de
mantenimiento para el espectro fot6metro en
buen estado junto con las fre cuencias de
revisi6n estimadas son3:
lnspecci6n del entorn o

Frecuencia: Anual
El entorno donde se instala el espectrofot6metro debe inspeccionarse visualmente y

probarse electricamente para garantizar la
seguridad del operador. La inspecci6n cubre
la instalaci6n electrica y el espacio de instala
ci6n (infraestructura fisica relacionada con el
espectrofot6m etro).
lnstalacion electrica
Debe revisarse y probarse para asegurar
lo siguiente:
1. Existe una toma electrica o receptaculo
con polo a tierra.
2. El receptaculo esta en buen estado y no se
encuentra a una distancia superior a los
1,5 m del espectrofot6metro .
3. El voltaje es de nivel adecuado y no debe
variar mas del 5 % del voltaje
especificado en la placa del equipo.
4. La polaridad del receptaculo es correcta.
Estas pruebas debe realizarlas un tecnico
electricista o un ingeniero y sus resultados
CAPITULO 11
consignarlos en formates que permitan efec

tuar el seguimiento de su estado en el
tiempo.
Lugar de instalacion
1. Revisar que el lugar de instalaci6n dispon
ga de espacio libre alrededor del espectro
fot6metro con dos prop6sitos: Primero,
para pasar sin inconvenientes los cables
de conexi6n y ubicar los elementos o
equipos de apoyo (Ej. estabilizador de
voltaje). Se gundo, permitir una adecuada
ventilaci6n del equipo cuando este en
operaci6n.
2. Comprobar la integridad del mes6n, su
es tado y limpieza.
3. Verificar que en la proximidad del espec
trofot6metro no se encuentren instalados
equipos que pudieran transmitir vibracio
nes durante su operaci6n (Ej. centrifugas).
4. Examinar que el entorno no este afectado
por condiciones de humedad excesiva,

pol vo o alta temperatura. Se estima que
la temperatura ambiente adecuada para
la operaci6n del espectrofot6metro
oscila entre 1O y 35 C.
5. Evitar que el equipo este ubicado en un
lu gar donde reciba radiaci6n solar
directa.
6. No instalar el equipo en un lugar donde
existan campos magneticos o radiaci6n
electromagnetica intensa.
7. Controlar que el area de instalaci6n este li
bre de la influencia de gases o sustancias
corrosivas.
lnspecci6n visual al equipo

El espectrofot6metro debe inspeccionarse
visual mente, para verificar que el estado e
integridad de sus componentes se mantienen de
acuerdo
con
las
especificaciones
del
fabricante. Los as pectos mas importantes se
citan a continuaci6n:
I_
Castellanos, J., Sistema de capacitaci6n tecnica, Mantenimiento de equipo medico, Modulo Laboratorio Clfnico,
subm6dulo 2, espectrofot6metro, Bogota, Colombia. Fonda Nacional Hospitalar io, Division de lngenieria y
Mante nimiento, 1989.
113
1. Revisar que la estructura de la mesa de trabajo, donde se encuentra instalado el espectrofotmetro, est en buen estado.
2. Comprob ar la estructura general del espectrofotmetro. Verificar que los botones o interrup tores de control, los cierres
mecnicos, estn mon tados firmemente y
su sealacin o identificacin sea clara.
3. Controlar que los accesorios estn limpios,
no presenten grietas y su estado funcional
sea ptimo.
4. Confirmar que los elementos mecnicos
de
ajuste
tuercas,
tornillo
s,
abrazaderas,
etc.
se
encuentren
ajustados y en buen estado.
5. Revisar que los conectores elctricos no
presenten grietas o rup turas. Comprob ar
que estn unidos correctamente a la lnea.
6. Verificar que los cables no presenten empalmes ni aislantes rados o gastados.
7. Revisar que los cables, abrazaderas y terminales estn libres de polvo, suciedad o
corrosin. Tampoco deben presentar desgastes o seales de mal estado.
8. Examinar que el sistema de puesta a tierra
interno y externo sea estandarizado, de
un tipo aprobado, sea funcional y est instalado correctamente.
9. Controlar que los conmu tadores o interrup tores de circuito, los por tafusibles y
los indicadores, se encuentren libres de
polvo, suciedad o corrosin.
10.
Comprob ar que los componentes
elctricos
externos
funcionen
sin
sobrecalentamientos.
Mantenimien to general
Limpieza de derra mes. En caso de que se
produ zca un derrame en el sistema por tamuestras, debe limpi arse el derrame mediante el siguiente procedimiento:
1. Apagar el espectrofotmetro y desconectar el cable de alimentacin elctrica.

2. Usar una jeringa para limpi ar el por tamuestras. Absorber la mayor cantidad de
lquido que pueda extraerse.
3. Secar el por tamuestras con un hisopo de
algodn tipo medicinal.
4. Utilizar papel especial para la limpi eza de
lentes o un trozo de tela limpi a de textura
suave, libre de hilazas, para limpi ar la
ventana de la fotocelda.
5. Limpiar el exterior del instrumento con
una pieza de tela humedecida con agua
destilada. Incluir la pantalla, los controles
y el teclado.
Limpieza de cube tas de cuarzo. Para mantener en buenas condiciones las cubetas de
cuarzo, se recomienda realizar el siguiente
procedimiento:
1. Lavar las cubetas utilizando una solucin
alcalina diluid a como NaOH, 0,1 M y un
cido diluido tal como HCl, 0,1 M.
2. Enjuagar las cubetas varias veces con
agua destilada. Usar siempre cubetas limpias cuando se requiere tomar medidas
de absorbancia.
3. Efectuar procedimientos de limpi eza rigurosos y cuidadosos a las cubetas, siempre
que se utilicen muestras que pudieran depositar pelculas. Algunos fabricantes recomiendan utilizar detergentes especiales
para limpi ar las cubetas.
Cambio de bateras. Diversas clases de espectrofotmetros utilizan bateras para mantener en memoria datos asociados a los anlisis como fecha y horas. El procedimiento es
similar en las diversas clases de equipo . Se recomienda seguir este procedimiento:
1. Verificar que en la pantalla del instrumento aparezca la indicacin de batera baja.
114
Espectrofotmetro
2. Apagar el espectrofotmetro.
3. Desconectar el cable de alimentacin
elctrica.
4. Abrir el compartimiento de las bateras y
retirar las bateras agotadas.
5. Limpiar los pun tos de contacto elctrico.
6. Instalar bateras nuevas, con las mismas especificaciones de las origin ales.
7. Cerrar de nuevo el compartimiento.
8. Reconectar el equipo .
9. Ajustar nuevamente los datos de fecha y hora.
Cambio de bombillo /lmpara. El bombillo es

un elemento de consumo, por tanto su vida
til es limi tada y debe preverse que en algn
momento ser necesario sustituirlo , bien porqu
e se quem, o porqu e ha sufrido procesos de
evaporacin y metalizacin interna, y la luz
emitida ya no cumple con las especificaciones
requeridas para ser utilizada en procesos de
espectrofotometra. El proceso de cada modelo
difiere y deben siempre seguirse las
indicaciones del fabricante del equipo . Los
procesos comunes a seguir se presentan a
continuacin.
1. Verificar que el bombillo no funciona o
existe alguna seal o indicacin de que
tiene una falla. En equipos modernos
apa- recer una seal en la pantalla o un
cdigo de error. En equipos antiguos se
ver que el bombillo no encendi.
1
1
de la conexin elctrica a la lmpara. (En

algunos equipos podra no ser necesario,
pues la base de mon taje dispone de mecanismos de contacto directos a los termin ales de contacto de la lmpara).
7. Instalar una lmpara nueva con las
mismas caractersticas de la origin al.
Usar guantes para evitar impregnar
con huellas digi tales la superficie de
la lmpara.
8. Reconectar
los
cables
de
alimentacin elctrica a la lmpara.
9. Ajustar nuevamente los tornillo s que
suje- tan la lmpara.
10. Ajustar nuevamente los tornillo s que
aseguran
la
tapa
del
compartimiento de la lmpara.
11. Reconectar el espectrofotmetro.
12. Encender el equipo y realizar el
procedimiento de recalibracin del
equipo esti- pulado por el fabricante.

El mantenimiento preventivo del espectrofotmetro debe responder a las rutinas y
frecuencias recomendadas por el fabricante. A
continuacin, se presenta un grupo de rutinas
bsicas que puede ser realizada en el
laboratorio.
3. Desconectar el cable de alimentacin.
1. Limpiar externamente el espectrofotmetro, incluyendo los controles, pantallas o

metros de medicin. Esto se puede realizar con una pieza de tela fina similar a la
textura de los pauelos humedecida con
agua destilada.
4. Desajustar los tornillo s que aseguran la

tapa del compartimiento de la lmpara.
2. Inspeccionar y limpi ar el cable de alimentacin elctrica.
5. Desajustar los tornillo s que fijan el mecanismo que sujeta la lmpara.
3. Verificar que la lmpara est limpi a y en

buen estado. Si no funciona, instalar una
nueva, con las mismas especificaciones de
la origin al. En los espectrofotmetros modernos, el estado de la lmpara es detecta-
2. Apagar el espectrofotmetro.
6. Desajustar los tornillo s que fijan los

cables
do automticamente mediante el
softw are
115
que controla el estado y el funcionamien- to

del equipo , por lo que es fcil determinar
en qu momento es necesario cambiar la
lmpara. Efectuar el cambio de la lmpara
y realizar el ajuste posterior siguiendo el
procedimiento
recomendado
por
el
fabricante.
4. Revisar el fusible de pro teccin. Antes de
abrir el alojamiento del fusible, compro bar que el espectrofotmetro est apagado y que sus contactos se encuentren limpios y en buen estado. Si es necesario
reemplazarlo, colocar uno nuevo con las
mismas caractersticas del recomendado
por el fabricante.
5. Colocar el instrumento en la configur a- cin
operacional.
6. Accionar el interrup tor de encendido para permi
tir un funcionamiento por cinco (5) minu tos.
Verificar lo siguiente:
a) Si las lmparas o indicadores pilo to
funcionan.
b) Si el indicador de lectura permanece en
cero (0).
c) Si la luz de la fuente funciona.
7. Realizar una prueba de corriente de fuga en las
posiciones de encendido y apagado.
a) Verificar el polo a tierra y la polaridad
correcta.
b) Verificar la polaridad correcta sin polo a
tierra.
c) Verificar la polaridad inversa sin polo a
tierra.
8. Calibrar el panel fron tal del espectrofotmetro siguiendo las instruccion es del
fabricante.
9. Medir la sensibilid ad del equipo .
10. Realizar una prueba siguiendo la ley de Beer.
11. Regresar el espectrofotmetro a la configuracin inicial, si la calibracin se ha
efectuado con xito.
BUENAS PRCTICAS DE USO

DEL ESPECTROFOTMETRO
1. Efectuar la calibracin del espectrofotmetro, cada vez que se realiza el anlisis
de un grupo de muestras.
2. Mantener cerrada la tapa del por tamuestras durante el proceso de medicin, para
asegurar una lectura adecuada.
3. Evitar reutilizar las cubetas desechables.
4. Utilizar nicamente cubetas de cuarzo,
para efectuar anlisis por debajo de los
310 nm.
5. Evitar el uso de cubetas plsticas, si se utilizan solventes orgnicos.
6. Utilizar cristalera de boro silicato de alta
calidad para preparar los estndares. Evitar el uso de cristalera de sodio xido de
sodio siempre que sea posible, debido a
que el contacto prolong ado con los estndares puede permearla y, en consecuencia, producir resultados errneos.
7. Limpiar cuidadosamente las cubetas de
vidrio despus de utilizarlas. Desechar
aquellas que presenten rayones en la superficie pulid a.
8. Utilizar en lo posible reactivos de alta calidad. Reactivos de baja calidad pueden
causar contaminacin incluso en concentraciones muy bajas. Los dilu yentes utilizados agua o solventes debern estar libres de impur ezas.
9. Verificar que las muestras o estndares no
se han desgasificado dentro de las cubetas. Este fenmeno produce burbuj as sobre la superficie interna de las cubetas y
errores en las lecturas.
10.Tener en cuenta, cuando se pretenda utilizar nuevos procedimientos, que no todas
las sustancias cumplen con la ley de Beer.
Efectuar pruebas de linealidad sobre el
rango de concentraciones a ser utilizadas.
Se recomienda preparar un grupo de soluciones fuertes conocidas y veri ficar los
116
Espectrofotmetro
resultados. Los fenmenos que afectan la

ley de Beer son los siguientes:
a) Las altas concentraciones por asociacin
molecular de especies inicas.
b) Variaciones en la hidratacin a bajas
concentraciones producen cambios en la
naturaleza de los iones complejos.
1
1
c) Absorciones que no obedezcan la ley

requieren dibuj ar una grfica de
estndares conocidos, que indicar
lectura versus concentracin, de
forma que la lectura de las incgni tas
pueda ser relacionada a las concentraciones desde la grfica.
Tabla de solucin de problemas Espectrofotme tro

automatizado4
PROBLEMA
El espectrofotmetro no
seenergiza.
CAUSA PROBABLE
Interruptor
deencendido/apagadoest en
posicin
apagado.
No hayenergaelctrica
en la toma
de alimentacin.
Mal conectado el cable de
alimentacin elctrica.
Los botonesdel teclado no

responden.
Inicializacin incompleta del equipo

durante el arranque.
REMEDIO
Mover el interruptor a la posicin
encendido.
Verificar
alimentacinelctricageneral.Compro- bar
que nosehayadisparadoalgunaseguridad.
Conectar
firmementeel cable
dealimentacin.
Apagar el equipo y encenderlo
nuevamente.
Activacin de un comando
equivocado durante el arranque.
Puerto serial RS232 no
responde.
Pantalla LCD difcil de leer.
Impresora atascada.
El papel de la impresora no se
autoali- menta o avanza.
Inicializacin incompleta del equipo

durante el arranque.
Apagar el equipo y encenderlo

nuevamente.
Cable de interconexin mal

conectado.
Control de contraste
desajustado.
Sistemade iluminacinde
fondoquemado.
Papel trminoarrugadoentre
Verificar conexin.
Llamar al representante.
la
cabeza de impresin y la placa
trmica al momento de
rasgar/cortar el papel.
Remover el exceso de papel con unas

pinzas de punta fina.
Papel de la impresora instalado

errneamente.
Apagar el equipo, reinstalar rollo de

papel.
Borde delantero del papel no

alineado o doblado.
Apagar equipo. Reinstalar rollo de

papel. Cor- tar borde delantero y alinear
nuevamente
en
el
sistemade
alimentacin.
Llamar al representante.
Control de alimentacin de papel

no responde.
Lacubeta noentra enel
compartimien- to portamuestras.
Ajustar contraste.
Apagar el equipo, retirar el papel y

reinstalar nuevamente.
Cubeta de tamaoequivocado.
Usar cubetas del tamaoespecificado por

el fabricante.
Mecanismo de ajuste de la cubeta

mal localizado.
Corregir posicin del mecanismo de

ajuste.
Instruction Manual, Spectropho tometer, SmartSpecTM 3000, Catalog N 170-2501, BIO-RAD Laboratories.
117
PROBLEMA
La lectura presenta
fluctuaciones.
CAUSA PROBABLE
Hay interferencias en el recorrido
de la luz.
REMEDI
O no presente
Verificar que la cubeta
rayones.
Verificar que no hay partculas flotandoen
la cubeta.
Frotar las paredesde la cubeta con
unapieza de tela limpia.
La lectura presenta valores

negativos. No hay lectura de
absorbancia.
Verificar que el rangoseleccionadode

trabajo esadecuadopara la muestra bajo
anlisis.
Aadir unamuestra a la solucin.
No haymuestra.
Colocacin incorrecta de la cubeta.
Verificar la orientacin de la ventana

de la cubeta.
Seleccinerrneade la
longituddeonda.
Ajustar la longitud de ondaal

rangocompati- ble con el anlisis.
Equipo calibrado errneamente

con una muestra en lugar de una
solucin estndar.
Calibrar conunasolucinestndar
oconagua destilada.
Espectrofotme tro no automatizado5
PROBLEMA
Lmpara excitadora no
enciende.
Lecturas bajas en el metro o

galvan- metro.
Indicacin inestable del

medidor.
CAUSA PROBABLE
Filamento roto.
Reemplazar lmpara.
Fusible de seguridadquemado.
Reemplazar fusible.
Resistenciaenel filamentode la
lmpara.
Voltaje errneo.
Reemplazar lmpara.
Lmpara excitadora
defectuosa.
Fotoceldasucia o defectuosa.
Circuito amplificador
defectuoso.
Bajo voltaje en la lmpara
excitadora.
DiodoZener estabilizador
defectuoso.
DEFINICIONES BSICAS
Absorcin. Fenmeno que se presenta cuando los tomos o molculas de una sustancia
absorben luz. La energa incidente interacta
con la estructura de la materia, transfirindo- le
energa que la lleva a un estado energtico
superior. (Los electrones de la sustancia son
promo vidos a rbi tas de mayor nivel
energtico). Dependiendo de la longi tud de
onda de la luz incidente, se producen efectos
REMEDIO
Revisar voltaje.Revisar
fuentedealimentacin.
Reemplazar lmpara.
Limpiar o reemplazar fotocelda.
Cambiar o reparar circuito
amplificador.
Ajustar voltaje.
Reemplazar diodoZener.
distintos. Por ejemplo: la luz ultravioleta promueve los electrones a rbi tas de mayor nivel
energtico; la luz infrarroja produce vibracin
atmica y las microond as, rotacin atmica.
La energa absorbid a se pierde por calor o
radiacin.
ngstrom. Unidad de longi tud que equivale a
10-10 m. Su smbolo es []. Se utiliza para
realizar mediciones a nivel de radiacin X o
gama.
Seminario Taller Operacin y Mantenimiento de Espectro fotmetros, Proyecto Subregional de Mantenimiento,

Convenio RE-HS-02, OPS/OMS.
118
Espectrofot6metro
Ancho de banda. Rango de longitud de onda

que es capaz de transmitir el monocromador.
Coeficiente de absortividad molar [].
Medida para saber que tan fuerte una sus
tancia absorbe luz de una determinada
longi
tud de onda. Se conoce tambien como coefi
ciente de extinci6n molar. Cuando hay mas
de una sustancia absorbente en una
soluci6n, la absorbancia total es la suma de
las absor bancias de los distintos elementos
presentes
en la soluci6n. (A = l[Cx x E x + Cy x cy + ...])
I_
Nanometro. Unidad de longitud que corres

ponde a 109 m (una mil millonesima de me
tro). Se identifica por el slmbolo [nm]. Se usa
para medir longitudes de onda de luz visible
o ultravioleta.
Refraccion. Fen6meno de cambio de
direc cion que se presenta cuando un rayo
de luz llega a la superficie de separaci6n
de dos medios.
Difraccion. Fen6meno por el cual los

rayos de un movimiento ondulatorio se
desvian de la llnea recta, aunque el medio
sea homoge neo, cuando las ondas
encuentran en su ca mino algun obstaculo
por
cuyo
lado
pueden
continuar
propagandose.
CAPITULO 11
Sen afndice de
n= Sen b = refracci6n
Luz
incidente
-,,..:
Medio N 1
Medio N 2
Luz
- ------ refractada
Espectrofotome1ria. Estudio cuantitativo del

espectro lumlnico. Sirve para efectuar
analisis de sustancias organicas o inorganicas,
llustraci6n 30: Reflexion de la luz
dentro de rangos de longitud de onda
determinados. En general,cuando la luz pasa
a traves de una soluci6n una parte de la la luz incide con un angulo [a] y se refracta
misma sera absorbida por esta, mientras que
con un angulo [b], al cambiar de medio de
otra parte pasara o sera transmitida a traves
propagacion.
de la soluci6n. a luz ab sorbida depende de
la longitud de onda, la concentraci6n de la
Rejilla de difraccion. Elemento dispersivo
soluci6n y la longitud de la trayectoria. a luz
de la luz conformado por una serie de
transmitida permite deter minar propiedades
hendi duras paralelas, talladas sobre una
como la concentraci6n de las sustancias,
superficie reflectora. Se fabrican mediante
aspecto que en el campo de la salud basica
maquinas trazadoras protegidas contra
sirve para efectuar multitud de analisis
vibraciones y variaciones de temperatura.
necesarios para determinar el estado de
Las
rejillas
utili
zadas
en
los
salud de un paciente.
espectrofot6metros son copias de una
rejilla patron. Una rejilla patron tiene, por lo
general, mas de 1 200 hendiduras por
lntensidad. Medida del flujo promedio de
milimetro. La figura a continuaci6n muestra
energia por unidad detiempo. Para encontrar
el fenomeno.
la intensidad,se toma la energia por unidad
de vo lumen y se multiplica por la velocidad
con la que se mueve la energia. El vector
Si se conoce el angulo de reflexion [o] y el
resultante tiene dimensiones de energia
es paciamiento [d] de las hendiduras, se
dividida por area.
puede determinar la longitud de onda [A] de
la luz, segun la siguiente ecuacion:
Longitud de onda. Distancia existente entre
dos picos de una onda. a longitud de onda
mantie ne una relaci6n inversa con la
frecuencia, que puede entenderse como
elnumero de picos que pasa por un punto en
un tiempo determinado.
Longi de trayectoria. Distancia que
tud
la luz visible o ultravioleta
atraviesa a lo largo de una muestra en una

celda de analisis.
Seno
=
nJ..
119
= diferencia en la longi tud de onda de dos

ranuras adyacentes
Ilustracin 31: Rejilla de difraccin
Bibliogra fa
Castellanos, J., Sistema de capacitacin tcnica, Mantenimiento de equipo mdico, Mdulo Laboratorio Clnico, submdulo 2, espectrofotmetro, Bogo t, Colombi a, Fondo Nacional Hospitalario, Divisin de Ingeniera y Mantenimiento, 1989.
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Instruction Manual, SmartSpec Tm 3000 Spectropho tometer, Catalog N 170-2501:BIO-RAD
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Jenway Spectropho tometer, model 6305, UV/VISIBLE range, Operating Manual, Gransmore
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(htt p://en.wikip edia.org/wiki/Spectropho tometer)
120
16-141
U nidades esterilizadoras por vapor de agua

U nidades esterilizadoras par vapor de agua masivas
Unidades esterilizadoras por vapor de agua de mesa
16-142
AUTOCLAVE
El autoclave es el equipo que se utiliza para

esterilizar. Por esterilizar se entiende la des
trucci6n o eliminaci6n de toda forma de vida
-microbiana, incluyendo esporas-presente en
objetos inanimados mediante procedimientos
ffsicos,quimicos o gaseosos. La palabra esteri
Jizador proviene de la palabra latina sterilis
que significa no dar fruto. Este capitulo se
en
focara
exclusivamente
en
los
autoclaves,dado que son los de mayor
utilizaci6n en los esta blecimientos de salud,
laboratorios cllnicos y de investigaci6n y
salud publica. A dichos equipos se les
conoce tambien con el nombre de
esterilizadores. La esterilizaci6n debe ser
considerada como un conjunto de procesos
interrelacionados de enorme importancia pa
ra que puedan prestarse los servicios de salud
-esterilizaci6n de materiales,medios de cultivo,
ins trumentos- dentro de condiciones
rigurosas de asepsia. Los procesos
asociados para lograr que un objeto
inanimado este en condiciones esteriles son
los siguientes:
1. Limpieza
2. Descontaminaci6n
3. lnspecci6n
4. Preparaci6n y empaque
5. Esterilizaci6n
6. Almacenamiento
7. Entrega de materiales
FOTOGRAFIA DEL AUTOCLAVE
PROPOSITO DEL AUTOCLAVE
El autoclave es un equipo disenado con el

fin de eliminar, de forma confiable', los
microor ganismos que de otra manera
estarian presen tes en objetos que se utilizan
en actividades de diagn6stico, tratamiento o
investigaci6n en instituciones de salud
-hospitales, laborato rios-;tambien es un
equipo de amplio uso en las industrias
procesadoras de alimentos y en la industria
farmaceutica. En el laboratorio los materiales
y elementos se esterilizan con los si guientes
fines:
1. Preparar el equipo a ser usado en cultivos
bacteriol6gicos (tubos de ensayo, pipetas,
La Federal Drugs Administration (FDA) califica la esterilidad de un articulo basada en estudios estadisticos. Un
arti culo se considera ester ii, si In probnbilidad de encontrarlo no esteril,en un conjunto de articulos sometidos
al mismo proceso de esterilizaci6n,es menor de uno en un mill6n. Este lndice se denomina Sterility Assurance
Level (SAL) y describe el potencial te6rico de inactivaci6n microbiana en un proceso de esterilizaci6n.
121
platos Petri, etc.), a fin de evitar que se

en cuentren contaminados.
2. Preparar elementos utilizados en la
toma de muestras. (Todos deben estar
en
condi
ci6n
esteril:
agujas,
tubos,recipientes).
3. Esterilizar material contaminado.
Los autoclaves se encuentran disponibles en
muchos tamanos, los mas pequenos son los
de sobremesa y los mas grandes, equipos
complejos que requieren gran cantidad de
preinstalaciones para su operaci6n. Para
me dir su tamano, por lo general, se toma
como referenda el volumen de la camara de
esteri lizaci6n, que se mide en dedmetros
cubicos
[dm3 o en litros [I]. Dependiendo de la
]
forma en que se controla su operaci6n, es
posible
encontrar
manuales,
semiautomaticos o to talmente automaticos.
PRINCIPIOS DE OPERACl6N
Los autoclaves son equipos que trabajan

apro
vechando
las
propiedades
termodinamicas del agua, la cual puede ser
considerada como una sustancia pura. En
condiciones normales
-a nivel del mar y con una presi6n atmosferi
ca de 1 atm6sfera- el agua -en fase liquida
hierve -se convierte en vapor,fase gaseosaa 100 c. Si la presi6n se reduce, hierve a
una
menor temperatura. Si la presi6n aumenta,
hierve a mayor temperatura. El autoclave es
un equipo que en una camara sellada, me
diante el control de la presi6n del vapor de
agua, puede lograr temperaturas superiores
a los 100 c,o de forma inversa, controlando
la temperatura, lograr presiones superiores a
la
atmosferica. Las graficas que se muestran a
continuaci6n muestran el comportamiento
del agua,dependiendo de las condiciones de
presi6n y temperatura 2
Grafica
Temperatura/Volumen
Grafica Presion/Temperatura
..... Linea fusion
Fase
llquida
;
I
I
I
/ Linea vapor
,,
saturado
It
,,,
IJ
11
,','
,','
A
I
I
- -- - - -- - - -- - - -
P1
C
Linea llquido
saturado
.:;;
.I
_
Pu
nt
o
criti
co
Fase
s61ida
G
E
E'
Temperatura
1.Esta grafica muestra dos lfneas definidas:Volumen

la lfnea de
lquido saturado (a la izquierda) y la lfnea de vapor
saturado (a la derecha).
2.A medida que aumenta la presi6n, lo hace tambien
la tem
peratura. (Ver lineas Pl , P2, P3) donde:
P3 laizquierda
> P2 > P1. de la lfnea de liquido saturado,el agua
3.A
1.La grafica muestra el comportamiento y la relaci6n que

exis te entre las fases s61ida,lfquida y gaseosa del agua,
depen diendo de las condiciones de presi6n y
2. temperatura
La linea de. sublimaci6n muestra que a determinadas
esta en es tado Ifquido (tramo A-B).AItransferir calor, se

eleva latempera tura del lfquido de la TemperaturaA a la
Temperatura 8.
atrans ferirte caor al agw, lafase s61ida se transf011T1a en fase

lfqlida y lue go,si se aiademas caor, setraisforma a la
fasevapor (tramo H-H').
condicio nes, al transferirle calor, la fase s61ida puede

convertirse directa mente a la fase vapor (tramo E-E'),
sinpasar
la fase
liquida.
3.La
linea deporfusion
muestra
q.ie a determinadas condiciones,
Las graficas han sido obtenidas med iante mediciones experimentales y sus resultados pueden consu ltarse en tablas
que contienen las propiedades termodinam icas del vapor.
122
-------
Autoclave
CAPITULO 12
I_
-----
Grafica Temperatura/Volumen
4.Entre la Ifnea de Ifquido saturado y la de vapor saturado
(tra mo B-C) hay una mezda de las fases vapor y
lfquido,y
la
temperatura
permanece
constante.Mientras mas cerca este del punto C, la
3
calidad
del vapor
es mayor.
5.A
la derecha
de la lfnea
de vapor saturado toda el
agua es ta en fase vapor (tramo C-D).
4. a lfnea de vaporizaci6n muestra en que

condidones de temperatura y presi6n la fase lfquida
del agua se transform a en fase vapor.
5. El punto donde se interceptan las tres lfneas se

denornina Punta Triple.En tales circunstandas las tres
fases existen,si multanearnente,en equilibria.
Los autoclaves utilizan vapor saturado

(con calidad superior al 98 %) para
transmitir su energia termica a los
elementos que se quie ren esterilizar a
presiones superiores a las de la
atm6sfera. Por lo general, este metodo
se
conoce con el nombre de esterilizaci6n
por ca/or humedo. Este es el metodo de
mayor uso debido a su efectividad,
rapidez y bajo costo. Sin embargo,no
todos los materiales o elementos se
pueden esterilizar con calor hu medo;
para aquellos elementos que son afec
tados por el calor y la humedad, se han
desa
rrollado metodos alternos de
esterilizaci6n. En el laboratorio, para
efectuar procesos de
Valvula de
seguridad
Man6etro
camara
Man6metro _
camisa 4.Puerta autoclave -
Grafica Presion/Temperatura
esterilizaci6n,se utilizan autoclaves de

calor humedo y estufas de secado que
emplean ca lor seco (sin presencia de
humedad). Ver capf tulo 13, Estufas de
secado.
Esquema tipo corte del autoclave a vapor
La ilustraci6n que se muestra a
continuaci6n es una sintesis de los
principales componen tes del sistema
de vapor de un autoclave. Por claridad
se han colocado,en la parte superior e
inferior, aditamentos que en la realidad
se encuentran ubicados alrededor del
equipo en lugares seleccionados por
cada fabricante.
10. Salida vapor

-finde ciclo
11.Restricci6n easo evacuaci6n
-vapor esterrlizaci6n liquidos
Linea evacuaci6nvapor
, esterilizaci6n llquidos
Linea evacuaci6nvapor
---esterilizaci6n rapida
....,14. Linea alimentaci6n
vapor camara
----- 15.Valvula admisi6n
aire con f iltro
,_.._ ----
"-
"""'-"'
5. Manija ' puerta

6e.stCearmilizaaraci6dne ,._ ,
Linea evacuaci6n condensado camara
Term6metro _.-----
---------------- 16.Camisa
9. Linea condensado
camisa.,..,..
-Electrovalvulas
17.Valvula de regulaci6n
ingreso de vapor
Linea de alimentaci6n de vapor
Trampas de vapor 20.Desague
'======i.
'
llustraci6n 32: Circuito de vapor def autoclave

3
Calidad [X]. Relacion que existe entre la masa de vapor y la masa total (masa llquida mas masa
vapor). La calidad
1 significa que el vapor esta en estado saturado y que cualquier aumento en la temperatura
sobrecalentara el vapor.
123
Descripci6n de los componentes

del esquema
Se presenta a continuaci6n una descripci6n
breve de los elementos mas comunes que
conforman el circuito de vapor de un autocla
ve. Las configuraciones varlan dependiendo
del diseno de cada fabricante.
1 . Valvula de seguridad. Dispositivo que

impide que la presi6n del vapor aumente
por encima de determinado valor. Los fa
bricantes las instalan tanto en la camara
de esterilizaci6n como en la camisa.
2. Manometro de la camara. Dispositivo
mecanico que indica cual es la presi6n de
vapor en la camara de esterilizaci6n.
3. Manometro de la camisa. Dispositivo
mecanico que indica cual es la presi6n
del vapor dentro de la camisa del
autoclave.
4. Puerta del autoclave. Dispositivo que

permite aislar la camara de esterilizaci6n
del ambiente exterior. Normalmente dis
pone de seguros que impiden su apertura
cuando la camara se
encuentra
presuriza da; dispone tambien de
empaques para evitar que el vapor salga
de la camara cuando el equipo esta en
operaci6n. Hay puertas de operaci6n
manual y puertas, cuya apertura y cierre
se controlan me diante
mecanismos
electromecanicos.
5. Manija puerta. Dispositivo que en algu
nos equipos permite al operador abrir o
ce rrar la puerta. Los equipos de gran
capaci dad, por lo general,disponen de
mecanis mos motorizados para accionar
la puerta.
6. Camara de esterilizacion. Espacio en
donde se colocan los objetos o elementos a
ser esterilizados. Cuando la puerta se
cierra la camara queda aislada del exterior.
Cuan do el proceso de esterilizaci6n esta
en mar cha se llena y presuriza con vapor.
7. Linea de evacuacion de condensado
de la camara. Conducto que permite re
coger el condensado que se forma en la
camara
de
esterilizaci6n
como
consecuen cia de los procesos de
transferencia de ca lor, que ocurren entre
el vapor y los obje tos que estan siendo
esterilizados.
8. Termometro. lnstrumento que indica la
temperatura a la que se realizan los pro
cesos de esterilizaci6n en el autoclave.
9. Linea de evacuacion de condensado
de la camisa. Conducto que permite ex
traer el condensado que se forma en la
ca misa como resultado de los procesos
de transferencia de calor entre el vapor y
las paredes de la camisa.
1 O. Salida de vapor al final de ciclo. Cuan

do se termina un ciclo de esterilizaci6n el
vapor es extraido del autoclave mediante
procedimientos controlados.
11.Restriccion de paso de vapor para ci
clo de esterilizacion de liquidos. Dis
positivo mecanico que restringe el paso
del vapor cuando se efectua un ciclo de
esterilizaci6n de liquidos, para permitir
que la temperatura descienda de forma
controlada, evitando que hiervan los li
quidos esterilizados.
12. Linea de evacuacion de vapor con es
terilizacion de liquidos. Camino que si
gue el vapor cuando se efectua un proce
so de esterilizaci6n de liquidos y pasa a
traves del dispositivo descrito en el nume
ral anterior.
13. Linea de evacuacion de vapor duran
te ciclo de esterilizacion rapida. Cami
no que sigue el vapor cuando se
efectua un ciclo de esterilizaci6n rapida.
14.Linea de alimentacion de vapor. Conduc to
que alimenta con vapor elautoclave. Di cha
Ifnea dispone de controles y accesorios
para que el vapor llegue al autoclave,en
las condiciones estipuladas para llevar a
cabo el ciclo de esterilizaci6n.
15.Valvula de admision de aire con filtro.

Dispositivo que permite el ingreso de aire
Los numeros que identifican cada componente en el esquema lo identifican en la descripci6n.
124
Autoclave
filtrado al finalizar el ciclo de esterilizaci6n.

La valvula homogeniza la presi6n de la ca
mara de esterilizaci6n con la presi6n
atmos ferica externa.
16.Camisa. Espacio ubicado alrededor de la
ca mara de esterilizaci6n a traves del cual

circu la vapor; con el fin de transferir calor
a la ca mara y disminuir la formaci6n de
condensa do.Se encuentra conectada a la
camara y al desague a traves de lineas
controladas me diante electrovalvulas. No
todos los autocla ves disponen de camisa.
Algunos
fabricantes
la
sustituyen
colocando alrededor de la ca mara de
esterilizaci6n resistencias electricas.
17.Valvula de regulacion de ingreso del

vapor . Dispositivo mecanico que
controla la presi6n con la que ingresa el
vapor al autoclave. Dependiendo del
ciclo seleccio nado, la presi6n y, por
consiguiente, la temperatura seran
diferentes. A mayor presi6n, mayor
temperatura. A menor presi6n,menor
temperatura.
18. Linea de alimentacion de vapor. Con
ducto que trae el vapor desde la
caldera o el generador de vapor al
autoclave.
19.Trampa de vapor. Dispositivo diseflado pa
ra aprovechar al maximo la energia
termica del vapor.Su funci6n es evitar que
el vapor salga del sistema. La trampa
solo deja salir el condensado que se forma
en la camara,ca misa y conductos del
autoclave.
20. Desagiie. Linea recolectora del conden
sado que produce el autoclave.
Los autoclaves utilizan hoy en dia sistemas con
trolados por microprocesadores y cada una
desus valvulas y accesorios trabaja de
acuerdo con pro gramas preestablecidos de
acuerdo con instruc ciones almacenadas en la
memoria del micropro cesador.Su operaci6n
queda grabada en un siste ma de registro, que
permite revisar las distintas etapas del ciclo de
esterilizaci6n.Cada fabricante ha incorporado
sistemas de registro que son in dispensables
para el control de calidad.
CAPITULO 12
Producci6n def vapor

El vapor que utilizan los autoclaves se
genera en dispositivos en los que se
transfiere ener gfa termica al agua utilizando
energia electri ca o combustibles f6siles. Los
dispositivos que producen el vapor se
denominan calderas o generadores de vapor
y constituyen un ele mento fundamental para
el
funcionamiento
del
autoclave.
Dependiendo de los tamaflos y la frecuencia
de uso, los autoclaves disponen de sistemas
de alimentaci6n de vapor que provienen de
un sistema central de calderas, o de su
propio generador de vapor, que fun ciona
generalmente con resistencias electri cas y
viene incorporado en el equipo o sumi
nistrado como accesorio por los fabricantes.
FUNCIONAMIENTO DEL AUTOCLAVE

A
continuaci6n,
se
describe
el
funcionamien
to
general
de
un
autoclave;algunos
procedi
mientos
cambiaran de acuerdo al grado de
automatizaci6n incorporado en el equipo:
1. Verificar que el sistema de registro dis
ponga de las plantillas y/o papel requeri
do para documentar el desarrollo del ciclo
de esterilizaci6n. Proveer cualquier ele
mento faltante (tinta, plantilla, etc.).
2. Energizar el autoclave.
3. Abrir la puerta del autoclave. En los
autocla ves de gran capacidad este
proceso se reali za electromecanicamente.
En los de media y baja capacidad,por lo
general,es manual.
4. Colocar las canastas o recipientes de
este rilizaci6n, que contienen el material
pre viamente preparado -limpiado, lavado,
secado,clasificado y empacado- que se va
a esterilizar, en la camara de esteriliza
ci6n,siguiendo las instrucciones de distri
buci6n que recomienda el fabricante.
5.
Cerrar la puerta del autoclave5
de cargar el autoclave, se presuriza la camisa,para que el interior de la camara este callente y dism inuya la
formaci6n de condensado al inicio delciclo de esterili2-aci6n .
s Antes
I_
125
Seleccionar el ciclo de esterilizaci6n

reque rido, que depende del tipo de objetos
o materiales que requieren ser
esterilizados6 Por lo general, se oprime un

bot6n debida mente identificado que en
forma automa tica inicia el ciclo
programado. A partir de este memento,el
proceso transcurre como:se indica a
continuaci6n7
6.
a) Se inicia la fase de pretratamiento.En ella

se efectuan ciclos cortos alternatives de
vado e inyecci6n de vapor a la camara de
esterili zaci6n, con el fin de extraer el aire
de esta y de los paquetes que protegen el
material a esterilizar.
b) Cuando el aire ha sido retirado se inicia la
inyecci6n y presurizaci6n de la camara de
es terilizaci6n. En este memento,el vapor
entra en contacto con los objetos a
esterilizar y se inicia un proceso de
transferencia de calor entre el vapor que se
encuentra a temperatu ra mas alta y los
articulos a esterilizar.Esto ha ce que una
porci6n del vapor, al transferir su energia
termica,se convierta en agua liquida
-<ondensad<ren las capas exteriores del
ma
terial
utilizado
para
empacar,
disminuyendo simultaneamente su volumen
en forma signi
ficativa, por lo que ingresa mas vapor a la
ca
mara de esterilizaci6n, que penetra cada

vez mas dentro de los paquetes a
esterilizar, has ta que el vapor los rodea
integralmente y se estabilizan la presi6n y
la temperatura.
c) Una vez logradas estas condiciones,se con
tabiliza el tiempo requerido para completar
la esterilizaci6n de acuerdo con el tipo de
ob jetos o materiales que estan siendo
procesa dos. Mientras mas alta la
temperatura y la presi6n, menor el tiempo
requerido para es terilizar.
a la camara de esterilizaci6n . Al disminuir

la presi6n, lo hacen tambien las tempera
turas requeridas, para evaporar cualquier
residuo de fase liquida que pudiera haber
se formado sobre los objetos que estan
siendo esterilizados al momento de la
des presurizaci6n. El vacio que se efectua
al canza el 1O % de la presi6n atmosferica
y se mantiene por un perfodo de tiempo
controlado. Cuando se esterilizan liquidos
no se efectua vaclo, sino que se controla
la extracci6n de vapor, a traves de un
meca nismo de efecto restrictivo,para
evitar que el lfquido hierva dentro de los
recipientes que lo contienen.
e) Finalmente,se permite el ingreso controla
do de aire a traves de valvulas, que
disponen filtros de alta eficiencia,hasta
que la presi6n de la camara de
esterilizaci6n sea igual a la presi6n
atmosferica. El ciclo de esterilizaci6n ha
terminado.
7. Abrir la puerta del autoclave.
8. Descargar el material esterilizado.
9. Cerrar la puerta una vez descargado el
ma terial esterilizado,para conservar el calor
de la camara de esterilizaci6n y asi facilitar
el si guiente dclo de esterilizaci6n que se
realice.
10.Almacenar el material esterilizado apropia
damente.
Nota: Los ciclos de esterilizaci6n deben ser
su pervisados y sometidos a procedimientos
de control de calidad mediante la utilizaci6n
de in dicadores de tipo fisico,quimico y
biol6gico, pa ra asegurar su efectividad.
d) Al
el tiempo
programado
de
Advertencia:
Noterminarse
todos los objetos
pueden
ser esterilizados
con calor humedo. Algunos requieren procedimientos
esterilizaci6n, se inicia el proceso de pos
tratamiento.
Este
incluye
la
despresuriza ci6n de la camara, que se
realiza normal mente con ayuda del
sistema de vaclo y el secado de los
elementos mediante el sumi nistro de
calor transferido desde la camisa
Ver la informaci6n de los ciclos de esteriliza ci6n que se incluye mas adelante.
Se describe un ciclo tipico de l os que realiza un autoclave esterilizador, dotado de un sistema de vacio accionado
por bomba electrohidraul ica.
126
Autoclave
Ciclos de esterilizaci6n
quirurgico, llquidos o material sensible al ca

lor. Los principales se conocen como ciclos
de
esterilizaci6n cllnica y se realizan bajo las si
guientes condiciones: 121 c I 1,1 kg /cm 2 o
134 CI 2,2 kg /cm 2. Las principales
caracterls
ticas se senalan a continuaci6n:
Los procesos de esterilizaci6n se realizan si

guiendo ciclos predefinidos que varian de
acuerdo al tipo de carga que se requiere es
terilizar. Hay ciclos de esterilizaci6n diferen
tes para materiales porosos, instrumental
CICLO NMATERIALES
PRESION
TEMP. Ckg/cm2
Cargas porosas Textiles

135
Instrumental envuelto Tubos
I_
CA PITULO 12
2,2
GRAFICA TIPICA8
"' (+)
a
a,
C.
mc.
7mii;i
t" ......,....
Ea,
>-
<>C
-g;
t ...
6:
Presi6n
atmosferka
5Tiempo 0
<50 mb.
min
(-)
2 Instrumental abierto
Utensilios Cristalerf a
Contenedores vados
135
2,2
"'
li":'i
C.
E
a,
>-
,, I
<;;>;
Presi6n
atmosferica
<50 mb, 2 min
Material
sensible al calor 121
3
Cauchos Plasticos
1,1
(+)
121
c.
20 min
. .. ...
<50mb, 5 min
(-)
Las graficasincluidas corresponden a un autoclave que dispone de bomba de vado,autoclave marca Getinge GE-660.
127
CICLO
N
4
MATERIALE
S
Lquidos
en
recipientes abiertos o
semicerrados.*
*
Los
tiempos
dependen
del
volumen
de
la
carga. No hay
vaco
en
el
enfriamiento.
Convenciones:
TEMP.
C
121
PRESI
N
2
kg/cm
1,1
GRFICA TPICA
A: Pretratamiento. Ciclos de vaco e inyeccin de vapor alternados. (Procesos 1, 2,

3).
Proceso 4: Esterilizacin
C: Postratamiento (Proceso 5: vaco y secado)
D: Homologacin de presiones internas y externas
Nota: El proceso de lquidos no tiene vaco a continuacin de la esterilizacin.
El enfriamiento esnatural.
Nota: Los tiempos de los ciclos de esterilizacin se ajustan a la altura sobre el nivel del mar del
lugar donde se encuentra ubicado el autoclave. Los fabricantes suministran las tablas de la
compensacin a tener en cuenta. Por lo general, mientras ms alto est ubicado el equipo ,
ms prolong a- do ser el tiempo de esterilizacin.
Control de calidad
Para que un producto pueda considerarse estril, es necesario veri ficar que todas las etapas que conforman el proceso de esterili zacin se hayan realizado correctamente. Para
veri ficar el cumplimi ento de todas las condiciones, se ha desarroll ado una serie de pruebas que evalan las caractersticas del proceso y su influencia sobre la actividad de los microorg anismos. Hay evaluaciones sobre la
temperatura, la presin, el tiempo, la humedad y el compor tamiento general del equipo
, a fin de certificar que cumpla y funcione de
acuerdo con procedimientos que han demostrado su validez y confiabilid ad. Existen tambin pruebas o indicadores que permi ten
certificar la muerte de los microorg anismos.
Para certificar la calidad de los procesos de
esterilizacin, se ha desarroll ado una serie
de pruebas de distinta categora, entre las
que se destacan las siguientes:
1. Indicadores del proceso de esterili zacin. Estn diseados para supervisar el

funcionamiento de los autoclaves. Incluyen instrumentos que controlan parmetros como temperatura, tiempo y presin
termmetros, manmetros y cronm etros y registran el desarrollo del proceso.
Los sistemas de registro de los autoclaves
modernos microprocesador registran todos los parmetros del ciclo de esterili zacin e inclusive rechazan el ciclo, en caso
de presentarse alguna anomala. Finalmente, en esta categora se encuentra una
prueba denomin ada test de Bowie-Dick,
que evala la eficiencia de la bomba de vaco, utilizando una hoja que cambia de color de forma uni forme, si el proceso se ha
realizado a satisfaccin. Caso contrario, el
color en la hoja es desigual.
2. Indicador es qu micos. Son pruebas de
tipo qumico que cambian de color o de
estado cuando se exponen a las diversas
128
Autoclave
fases del proceso de esterilizaci6n. Los

in
dicadores
quimicos
permiten
diferenciar aquellos artkulos que han sido
sometidos o expuestos a un proceso,de
aquellos que no lo han recibido. Entre los
mas conoci dos se encuentran las cintas
adhesivas o ti ras que van dentro de un
insumo o paque te. La Norma ISO N
11140-1 describe las categorlas de los
indicadores quimicos. Se debe tener
presente que los indicadores qulmicos,
por st mismos, no garantizan que el
proceso de esterilizaci6n cumpli6 con
todos los requisitos. El personal que los
utiliza debe recibir entrenamiento pre ciso
que permita analizar si el resultado
obtenido es coherente con el desarrollo in
tegral del proceso de esterilizaci6n.
3. lndicadores biologicos. Se consideran
el mejor metodo para controlar la cali
dad de un proceso de esterilizaci6n. Es
tan compuestos por microorganismos
vivos que tienen una mayor resistencia a un
de terminado proceso de esterilizaci6n, o
por reactivos qulmicos que reaccionan
ante proteinas especfficas de este tipo
de mi croorganismo. Para controlar el
proceso de esterilizaci6n por vapor
saturado,
plasma
-per6xido
de
hidr6geno- o for maldehido, se utilizan,
por lo general, esporas de bacillus
stearothermophilus. Para controlar la
esterilizaci6n por calor seco -proceso
que reali2an las estufas de secado- y
por 6xido de etileno, se utili zan
esporas de bacillus subti/is, variedad
Niger. La muestra de esporas se coloca
en la carga del esterilizador y, luego del
pro
ceso, se incuba, analiza y determina si se
cumple
con
los
requisitos
de
esterilizaci6n, generalmente, observando
un cambio de color. Estas pruebas estan
estandarizadas y los fabricantes seiialan
la forma de utili zarlas y de interpretar los
resultados. Los indicadores biol6gicos por
si solos tam poco garantizan que el ciclo
de esteriliza ci6n cumple con todos los
requisitos. La l'.mica forma es controlar
todos los parame tros del ciclo de
esterilizaci6n.
CAPITULO 12
Frecuencia de los procesos de contro I

de caJidad
A continuaci6n, se muestra una tabla que re
sume la frecuencia sugerida en cuanto al
uso de indicadores de control de calidad en
los procesos de esterilizaci6n.
1ipode
imicador
freaienda de USO
De proceso
En cada cido de esterilizaci6n
Quimico
En cada paquete
Biol6gico
Semanal;en todos los equipos de

esteri- lizad6n; en los paquetes que
contienen implantes.
Para funcionar los autoclaves requieren los si
guientes servicios:
1. Un lugar de instalaci6n que disponga de
buena ventilaci6n,para remover el calor
y la humedad que genera el equipo
mien tras se encuentra en operaci6n.
Asimismo, requiere de espacios libres
en la parte pos terior y lateral,para que
se le puedan pres tar los servicios
tecnicos que requiera a lo largo de su
vida util. Este espacio es de al menos
0,8 m. Dependiendo del diseiio del
autoclave,
debera
preverse
la
infraestruc tura complementaria, para
que pueda operar a satisfacci6n. El
esquema que se incluye explica el
requerimiento de espa cio alrededor del
autoclave. La temperatu ra en la
vecindad inmediata del equipo puede
ser superior a los 70 C cuando se
encuentra en operaci6n. El piso debera
es tar bien nivelado y construido con
mate riales que resistan la humedad y el
calor.
Manual de Esterilizaci6n y Desinfecci6n, Unidad de lnfecciones lntrahospitalarias de la Red de la Division

Asistencial, Ministerio de Salud,Santiago de Chile. (http://odontologia.uchile.cl/catedras/operato
r/operato/manualfinal.pdf)
I_
129
Ilustracin 33: Espacios requeridos

por el autoclave
Ilustracin 34: Acometida aire

comprimido
2. Acometida elctrica, dimensionada a los

consumos del equipo . Si el autoclave es autnomo , es decir, dispone de su propio generador de vapor, la acometida elctrica
debe estudiarse en detalle, pues la potencia requerida podra ser signi ficativamente
alta. Son tpicas demandas de potencia de
21 kw, 38 kw, 48 kw y superiores, para que
funcione el generador de vapor. La acometida deber contar con las segurid ades y
pro tecciones requeridas. Los voltajes tpicos requeridos por los autoclaves son 220 V,
60 Hz, o 380 V, 60 Hz tri fsico.
5. Sistema de desage diseado para

recolectar agua caliente.
3. Acometida de agua, dimensionada a los

consumos del equipo en volumen y presin. Mientras ms grande el equipo , mayor consumo. El agua que consume el
autoclave debe haber recibido los
tratamientos requeridos para elimin ar los
slidos en suspensin, que puedan afectar
negativamente el funcionamiento de las
electrovlvulas
y dems dispositivos
electrohidr ulicos.
4. Alguno s esterili zadores requieren aire
comprimido , pues sus controles son comandados mediante presin neumtica.
Por lo general, la presin requerida vara
de 5x105 Pa a 9,9x105 Pa. El esquema adjun to muestra los requerimientos mnimos
de la instalacin (vlvula de corte, fil tro y
manmetro).
6. Acometida de vapor. Si el autoclave

no dispone de su propio generador
de vapor, debe ser alimentado
desde el sistema generador de
vapor de la institucin (sala de
mquinas, caldera). La instalacin
de suministro debe cumplir con
requisitos como vlvula de corte, fil
tro, manmetro e instalacin, para
recolectar el condensado con fil tro y
trampa de vapor, como se indica en
el esquema adjun to.
Ilustracin 35: Acometida de vapor
130
Autoclave
7. El autoclave debe ser operado exclusivamente por personal que haya recibido y
aprobado capacitacin especializada en
este tipo de procesos.
12
7. Controlar que no se presenten fugas

de vapor en ninguno de los sistemas
que operan en el autoclave.
8. Limpiar con un trapo hmedo el
frente del autoclave: controles,
indicadores, manijas.
El autoclave es un equipo que demanda supervisin y mantenimi ento preventivo permanente, debido a la gran cantidad de
compon entes y tecnolog as que lo in
tegran. Se enfoca el mantenimi ento hacia
aquellas ru tinas bsicas que pueden
realizar los operadores del equipo . Para
realizar el mantenimi ento detallado,
debern seguirse las instruccion es definid
as en los manuales de servicio de los
fabricantes.
Verificaciones diarias
Antes de iniciar los procesos de esterili zacin,
debern realizarse las siguientes veri
ficaciones:
1. Colocar una nueva plantilla o carta en el
dispositivo de registro, para documentar
el desarrollo del ciclo de esterili zacin.
2. Controlar que las plumill as registradoras
disponen de tinta.
3. Asegurar que las vlvulas de suministro de
agua fra, aire comprimido y vapor estn
abiertas.
Mantenimien to semanal
Responsable: Operador del equipo
1. Limpiar el fil tro del drenaje de la cmara
de esterili zacin. Retirar cualquier residuo
retenido en l.
2. Limpiar internamente la cmara de esterilizacin, utilizando productos de limpi eza
que no contengan cloro. Incluir en la limpieza las guas de las canastas usadas para
colocar los paquetes.
3. Limpiar con una solucin acetificada, si se
esterili zan soluciones con cloro. El cloro
causa corrosin incluso en implementos de
acero inoxidable. Lavar a continuacin con
agua abundante.
4. Limpiar
las
superficies
externas
inoxidables con un detergente suave.
Eventualmente, podra utilizarse un
solvente como el cloro etileno, procurando
que este no entre en contacto con
superficies que tengan recubrimi entos
de pin tura, sealizaciones o cubiertas
plsticas.
5. En autoclaves con puerta de accionamiento manual, veri ficar que los mecanismos
ajustan bien y que su operacin es suave.
4. Accionar el interrup tor que permite calentar

la camisa del autoclave. Este control, al activarse, permite el ingreso de vapor a la camisa de la cmara de esterilizacin. Al ingresar
el vapor, empieza el proceso de
calentamien- to de la cmara de
esterilizacin. Mantener la puerta del
autoclave cerrada hasta el momento que
se coloqu e la carga a esterilizar, para evitar
prdidas de calor.
6. Drenar el generador de vapor (en equipos

que disponen de este accesorio ). Para esto
se abre una vlvula, ubicada en la parte
inferior del generador, que permi te
extraer su contenido. Por lo general, se
hace al finalizar las actividades de la
semana. Seguir las recomendaciones que
para este prop - sito indica el fabricante
del equipo .
5. Verificar que la presin de la lnea de suministro de vapor sea de al menos 2,5 bar.
7. Nunca utilizar lana de acero para limpi ar

internamente la cmara de esterili zacin.
6. Comprob ar el estado de los manmetros y

de los termmetros.
131
Mantenimiento trimest ral

Responsable: Tecnico del
autoclave
1. Accionar manualmente las valvulas de segu
ridad para verificar que se encuentran ope
rando bien. Utilizar un destornillador largo
para mover la palanca de accionamiento,
ubicada normalmente en la parte superior
de la valvula. Comprobar que el rostro y
demas partes del cuerpo no se encuentren
en el ca mino del vapor. Una vez accionada
la valvula, controlar que noquedan
escapes
de
vapor.Si
queda
algun
escape,debe accionarse de nue vo la
valvula hasta que selle bien.
En autoclaves de camara redonda se inicia

el montaje del empaque en la parte superior
y se ajusta progresivamente en la ranura,
sin templarlo, hasta que la totalidad del
empa que se encuentre instalado. A
continuaci6n, se ajustan los elementos de
montaje.
3. Verificar que los sellos de las valvulas de
seguridad se encuentren en buen estado.
4. Limpiar las puntas del sistema de registro
con agua u alcohol y reponer los niveles
de tinta. Por lo general, con tinta roja se
registra la presi6n y con tinta verde, la
temperatura.
Advertencia: Si se permite que en la valvu la de seguridad queden escapes devapor, es tos deterioraran rapidamente
2. Lubricar el empaque de la puerta. Utilizar
el lubricante y el procedimiento recomen

dados por el fabricante del equipo. Algu
nos fabricantes recomiendan el siguiente
procedimiento:
a) Retirar el empaque. Para esto es necesario
desmontarlo de la ranura, aflojando los
me canismos de retenci6n (tornillos y
placas).
b) limpiar con alcohol el empaque y la ranu
ra para que no exista material extraiio que
pueda afectar el sello.La superficie del
empa que debera quedar suave y limpia.
c} Aplicar el lubricante recomendado por el
fabricante al cuerpo del sello hasta que
que de perfectamente protegido. Muchos
fabri cantes deautoclaves utilizan un
lubricantede grafito, resistente a altas
temperaturas.
d} Reinstalar el empaque. En autoclaves
de camara rectangular, normalmente, se
instala colocando el empaque en la mitad
de una de las caras de la ranura de
montaje y ajustando el resto del empaque
hacia los lados, hasta que se ajuste bien
en el interior de la ranura. Este mismo
procedimiento se efectua a conti nuaci6n
en cada una de las caras restantes.
5. Limpiar el interior del generador de vapor.

(Para equipos que disponen de este acce
sorio). El procedimiento de limpieza del
generador de vapor conlleva a realizar las
sigu.ientes acciones:
a) Desconectar elsuministro electrico alequipo.
b) Descargar la presi6n de vapor y esperar

a que la temperatura se estabilice con la
del medio ambiente.
c) Remover la cubierta frontal del generador.
d) Desconectar los terminales electricos de las
resistencias calefactoras (de inmersi6n}.
e} Retirar los tornillos que aseguran la
placa frontal,donde estan instaladas las
resistencias calefactoras,y desmontar la
placa frontal.
f) Revisar elempaquey sustituirio si es necesario.
g} Remover
acumulada
resistencias
recomenda
elementos10
la suciedad que se encuentre

en la superficie de las
calefactoras. Utilizar productos
dos para desincrustar dichos
h) Ensamblar nuevamente siguiendo

orden inverso al presentado.
un
El esquema que se incluye a continuaci6n

mues tra el generador de vapor y sus
componentes.
0
'
Las incrustaciones se muestran cuando elagua que utiliza el generador de vapcr no ha recibido el tratamiento
adecuado.
132
Autoclave
12
Ilustracin 36: Generador de vapor
Mantenimien to anual
Responsable: Tcnico del autoclave
1. Limpiar todos los fil tros.
2. Comprob ar y ajustar el nivel del tanque de
alimentacin de agua, para que se encuentre dentro de los 20 mm del mximo
nivel.
MANTENI MIENTO DE COMPONENTES

ESPECIALIZADOS
Se incluyen, a continuacin, algunas rutinas
especializadas que se aplican a compon entes
del equipo cuando requieren servicio tcnico.
Dado que los autoclaves disponen de ml tiples alternativas y diseos, las rutinas aqu estipuladas podr an ser aplicables solo a determinados equipos.
3. Verificar y ajustar la tensin de los resortes

de las vlvulas de diafragma.
Manteni mien to de vlvula s solenoide s
4. Desmon tar, limpi ar y ajustar las vlvulas
de segurid ad.
5. Cambiar el fil tro de aire.
6. Efectuar un proceso general de esterili zacin comprob ando en detalle: presin,
temperatura, t iempos requeridos para
completar cada fase del ciclo, estado de las
lmparas de sealizacin del proceso, funcionamiento del sistema de registro. Verificar que el funcionamiento se encuentre
dentro de las tolerancias definidas por el
fabricante.
7. Efectuar, adicionalmente, las mismas rutinas recomendadas cada tres meses.
1. Verificar el sonido que emiten las bobin as o

solenoides (humming en lengua inglesa). El
ruido excesivo es una advertencia de
sobreca- lentamiento, debido a corrientes
elctricas anormalmente altas a travs del
solenoide. La corriente alterna aumenta
cuando la im- pedancia [Z] del circuito
disminuye, esto suce- de cuando el
solenoide no se encuentra adecuadamente
rodeado por un circuito cerrado de hierro.
Un espacio de aire en el circuito magntico
puede ser causado por suciedad, que evita
que la armadura alcance su posicin final
cuando el solenoide est energizado.
Limpiar cuidadosamente los alojamientos de
la bobin a y su ncleo, para no interferir al
pistn en su desplazamiento por alguna clase de suciedad.
133
2. Reemplazar los sellos tipo anillo o rings

existentes entre el solenoide y el cuerpo
de la vlvula, cuando estos elementos hayan sido desensamblados.
3. Antes de realizar cualquier desensamblaje,
comprob ar cul es la posicin en que se
encuentra instalada la vlvula solenoid e. Algun
as poseen indicaciones claras sobre cmo van
instaladas, pero otras carecen de tal informacin.
4. Cuando se desmon ta una vlvula solenoide
servoasistida, controlar en qu posicin se
encuentran los ori ficios que la comuni - can con
el medio de trabajo, para poder ensamblar de
nuevo cuando se efecte el ensamble de la
vlvula.
Limpieza del fil tro de vapor
1. Alojar la tapa.
2. Retirar la malla.
3. Limpiar cuidadosamente.
4. Reinstalar la malla.
5. Colocar nuevamente la tapa.

All se incluyen los probl emas ms comunes.
Dada la diversidad de marcas, modelos y tecnolog a disponibl es, es conveniente que los
usuarios sigan las instrucciones contenidas en
los manuales de uso de los autoclaves instalados en el servicio.
Adver tencia: Antes de desensamblar el filtro de vapor, disipar la presin de vapor en el

sistema.
PROBLEMA
El testigo de esterilizacin no
indic la finalizacin exitosa del
ciclo de esterilizacin.
CAUSA PROBABLE
Cmara deesterilizacinmal
cargadao cargadaen exceso.
Revisar distribucin de la carga.Revisar

cantidad de carga. Ajustar de acuerdo
a las reco- mendacionesdel fabricante.
Trampade vapor defectuosa.
Revisar trampade
vapor. Reparar o
sustituir.tiempo de esterilizacin. Ajustar
Revisar
Tiempo de esterilizacin
inadecuado.
No se alcanz la temperatura y la
presin de esterilizacin
seleccionada.
Penetracin de vapor
insuficiente.
Pretratamiento defectuoso. Ha
quedado demasiadoaire dentro de
la
cmara.biolgico mal
Indicador
Se interrumpe el ciclo de
esterilizacin sin raznaparente.
REMEDIO
seleccionado para el ciclo

realizado. de vapor, agua o aire
Presiones
inade- cuadas. En consecuencia,
no se accionan los dispositivos
de
regulacin
y
control
servoasistidos.
al tipo de ciclo.
Revisarseleccinde temperatura.Revisar
presin de vapor correspondienteal
cicloseleccionado.
Revisar
posiblesfugasdevaporen lapuerta
empaque oen losdispositivosdecontrol
de paso.la cantidadde paquetesa ser
Reducir
esterilizados; esto permite un mejor
flujo del servicio
vapor. tcnico especializado
Solicitar
para revisar el sistemade vaco.
Revisar especificaciones de uso del
indicador biolgico. Repetir el ciclo de
esterilizacin.
Revisar
presiones de alimentacin de
vapor, aguao aire. Ajustar sistemasde
regulacin.
134
Autoclave
PROBLEMA
Material esterilizado sale
hmedo.
El indicador biolgico
espositivo.
CAUSA PROBABLE
12
REMEDIO
Trampade vapor defectuosa.
Revisar/limpiar trampa de vapor. Sustituir

trampa.
Drenaje de la cmara de
esterilizacin obstruido.
Revisar sistemade drenaje. Limpiar.
Autoclavedemasiado cargado.
Reducir la cantidaddecargaen la
cmara.Re- petir el ciclo de esterilizacin.
El autoclaveno est bien

nivelado.
Indicador biolgico mal
seleccionado.
Nivelar el autoclave.
Utilizar unindicador biolgicodeotro
loteofabri- cante.Registrar cuidadosamente
losparmetros.
Revisar
el empaque; reemplazar el
Presin de vapor demasiado

baja.
Empaque de la puerta defectuoso.
Presin de vapor excesiva.
Autoclavedemasiadocargadocon
material textil.
Reducir lacargadel autoclave.
Autoclavedescalibrado.
Calibrarel autoclave.
Fuga de vapor interna en otro

dispositivo del autoclave.
DEFINICIONES BSICAS
Asepsia. Conjun to de procedimientos para
lograr la ausencia de microorg anismos.
Atm sfera. Antigua unidad de presin que
equivale a 101 325 Pa (pascales) o a 14,69 libras por pulgada cuadrada.
Calidad . Propiedad termodin mica que, por
lo general, se identifica con la letra [X] y se
define como la relacin existente entre la masa
de vapor y la masa total de la sustancia en
condiciones de saturacin.
Calor hmedo. Mtodo de esterili zacin que
elimin a microorg anismos por desnaturalizacin de las pro tenas, que se acelera por la
presencia de agua (vapor).
Cmara de esterili zacin. Espacio donde se
colocan los objetos que requieren ser esterilizados. Cuando se efecta el proceso de esterili zacin la cmara se llena de vapor a presin, alcanzando temperaturas directamente
relacionadas con las presiones seleccionadas.
Dispone de una puerta que la sella durante el
ciclo de esterili zacin y, mediante un sistema
de segurid ades, solo es posible abrirl a una
vez que haya terminado el proceso de esterilizacin y se haya homog enizado la presin
interna con la atmosfrica.
empaque.
Revisar trampas, electrovlvulas, etc.
transferir calor a la cmara de esterili zacin,

en las etapas de pretratamiento (remocin de
aire) y postratamiento (secado del material
esterili zado).
Bar. Unidad de presin que equivale a 10 5 Pa
(Pascales).
Descon taminacin. Procedimiento que tiene el propsito de disminuir la cantidad de
microorg anismos de un objeto o artculo, para que sea segura su manipul acin. El trmino cubre aquellos objetos que se utilizan en los
procedimientos de atencin a un paciente y
que puedan ser afectados por fluidos, sustancias corpor ales o materia orgnica.
Desinfeccin. Proceso que utiliza medios fsicos o qumicos, mediante el cual se destruyen
de los objetos inanimados formas de vida en
estado vegetativo. (Se excluyen las esporas).
Esterili zacin. Conjun to de acciones mediante las cuales se destruye toda forma de
vida, incluyendo esporas de objetos inanimados, con procedimientos fsicos, qumicos y
gaseosos.
Camisa. Espacio ubicado alrededor de
la cmara de esterili zacin, a travs
del cual circula vapor. Su funcin es
Inspeccin. Evaluacin visual de los artculos

la- vados en bsqueda de desperfectos o
suciedad
135
que pudieran interferir en los procesos de esterili zacin. Es un proceso de gran responsabilid ad y debe realizarse utilizando ayudas
como lupas para precisar pequeos detalles.
Limpieza. Remocin mecnica de toda materia extraa ubicada en las superficies de objetos inanimados; por lo general, comprende la
utilizacin de agua limpi a combin ada con algn detergente. Es un procedimiento bsico
que se efecta antes de que los objetos sean
sometidos al proceso de esterili zacin propi amente dicho. La limpi eza puede realizarse
utilizando mtodos manuales o automticos,
pero debe entenderse que no es un procedimiento que destruye microorg anismos, sino
que nicamente disminuye la cantidad de
microorg anismos.
Pascal (Pa). Unidad de presin del Sistema
Internacional, que corresponde a la fuerza de
un newt on (N) que acta sobre un (1) metro
cuadrado Pa = 1N / m2.
Testigo de esterili zacin. Indicadores de tipo qumico o biolgi co que permi ten veri ficar si un objeto o material fue sometido a
procesos de esterili zacin. Los ms conocidos
son la cinta de enmascarar termosensible

cambia de color cuando se alcanzan determinadas condiciones de temperatura y las
esporas del B. Stearo thermophilu s.
Trampa de vapor . Dispositivo diseado para
restringir el paso de vapor y permi tir el paso
del condensado.
Vlvula s servoasistidas. Tipo de vlvulas
solenoides que dependen de la presin del
medio en el que trabajan para cerrar o abrir.
Por lo general, disponen de membranas con
pequeos ori ficios a travs de los cuales suministran el medio de trabajo.
Vlvula solenoide s. Dispositivos electromagnticos de control que se utilizan en mltiples aplicaciones. Se conocen tambin con
el nombr e de electrovlvulas. Mediante una
bobin a que se energiza o desenergiza, se
controla la posicin de un pistn que permite o impid e el paso de un fluido dentro de un
circuito determinado. Se utilizan en circuitos
hidrulicos, neumticos, vapor, vaco. Los fabricantes han desarroll ado un gran nmero
de diseos para aplicaciones especializadas.
136
Autoclave
12
Bibliogra fa
Autoclave GE-660, Control Unit A2, Getingeverken N 660 A2 8301.
Ginesta, N., "La nueva generacin de miniclaves: Un pequeo esterili zador de vapor con las
prestaciones de los grandes", Antonio Matachana, Barcelona. XIII Congreso Internacional
del CEDEST, en El autoclave, Revista del Club Espaol de Esterili zacin, ao 14, N 2, 2002.
Instrucciones funcionamiento Autoclave 80L-1, Antonio Matachana, IM-001.81.
Manual de Esterili zacin y Desin feccin, Santiago de Chile, Unidad de Infecciones Intrahospitalarias de la Red de la Divisin Asistencial, Ministerio de Salud.
(htt p://odon tologi a.uchile.cl/catedras/operator/operato/manualfinal.pd f)
Manual de operacin para equipos esterili zadores y destiladores, San Salvador, Proyecto de
Mantenimiento Hospitalario, Ministerio de Salud - GTZ, 1998.
Manual de operacin de autoclave, San Salvador, Proyecto de Mantenimiento Hospitalario,
Ministerio de Salud - GTZ, 1997.
Sentry " 220 " Sterili zer, Straightline and Cylindri cal, MA-2, Service Manual, Rochester, N.Y.,
Castle Sybron Corpor ation.
Sterilisateur vapeur, UltraClave M9/M11, Manuel dinstallation et du tilisation, Midmark
Corpor ation, N 03-0920-02 Rev. B, 1998.
137
138
CAPTULO 13
Estufa de secado
Cdigo (s)
ECRI
14-410

Horno de secado
ESTUFA DE SECADO
La estufa de secado es un equipo que se utiliza para secar y esterili zar recipientes de vidrio y metal en el laboratorio. Se identifica
tambin con el nombr e Horno de secado. Los
fabricantes han desarroll ado bsicamente dos
tipos de estufa: las que operan mediante
conveccin natural y las que operan mediante
conveccin forzada. Las estufas operan, por lo
general, entre la temperatura ambiente y los
350 C. Se conocen tambin con el nombr e de
Poupinel o pupinel.
FOTOGRAFAS DE ESTUFA DE SECADO1
PROPSITO DE LA ESTUFA
La estufa de secado se emplea para esterili zar
o secar el material de vidrio y metal utilizado en
los exmenes o pruebas, que realiza el laboratorio y que proviene de la seccin de lavado, donde se enva luego de ser usado en
algn procedimiento. La esterili zacin que se
efecta en la estufa se denomin a de calor seco y se realiza a 180 C durante 2 horas; la
cristalera, al ser calentada por aire a alta
temperatura, absorbe la humedad y elimin a la
posibilid ad de que se mantenga cualquier
actividad biolgi ca debido a las elevadas
temperaturas y a los tiempos utilizados.
Las estufas de secado constan, por lo general,
de dos cmaras: una interna y una externa. La
cmara interna se fabrica en aluminio o en material inoxidable, con muy buenas propiedades
http://www.precisionsci.com/lab/products/ov_t160.htm
139
para transmitir el calor; dispone de un conjun to de estantes o anaqueles fabricados en

alambre de acero inoxidable, para que el aire
circule libremente, all se colocan los elementos que requieren ser secados o esterili zados
mediante calor seco. Se encuentra aislada de
la cmara externa por un material aislante que
mantiene in ternamente las condiciones de alta
temperatura y retarda la t ransferencia de
calor al exterior. La cmara externa est
fabricada en lmina de acero, recubier- ta con
una pelcula pro tectora de pin tura
electrosttica. El calor in terno es generado
mediante conjun tos de resistencias elctricas, que t ransfieren la energa trmica a la
cmara in terna. Dichas resistencias se ubican en la parte in ferior de la estufa. El calor
dentro de la cmara in terna se t ransfiere y
distribu ye mediante conveccin natural o
conveccin forzada (estufa con ventiladores in
ternos).
La resistencia [R] puede ser calculada con la

siguiente ecuacin:
La potencia energa por unidad de tiempo

disipada por una resistencia elctrica puede
ser calculada mediante la siguiente ecuacin:
La estufa moderna se controla mediante un

mdulo con microprocesadores desde el cual
es posible seleccionar los parmetros de
operacin del equipo y sus alarmas, y
programar la realizacin de ciclos o procesos
trmicos, mediante los cuales se controlan no
solo las temperaturas, sino tambin la forma
como las mismas deben variar en el tiempo, a
travs de fases
o
etapas
de
calentamiento/enfriamiento
natural o sostenimiento de la temperatura
dentro de ciertos lmites de tiempo. Las estufas
operan normalmente desde condiciones de
temperatura ambiente hasta los 350 C. Algunos fabricantes disponen de modelos con rangos no tan amplios de operacin.
P = I2R
dond e:
I = intensidad de la corriente elctrica
medida en amperios [A]
R = resistencia elctrica medida en ohmios
[]
Dado que la energa no se crea ni se destruye,
sino que se transforma, es posible calcular la
energa trmica equivalente de los elementos
resistivos. Para el caso de un alambre resistivo,
la cantidad de calor [q] que disipa puede calcularse mediante la siguiente ecuacin2:
I2R = qr0 L
dond
e:
R = resistencia del alambre resistivo
I = intensidad de la corriente elctrica
r0 = radio exterior del alambre
R=
L
A
dond e:
= resistividad del material de la resistencia
L = longi tud del alambre de la resistencia
A = rea de alambre de la resistencia
La estufa tiene una puerta metlica que tambin dispone de su aislamiento trmico y est
dotada de una manija fabricada igualmente en
material aislante, para evitar que el calor del
interior llegue a ser una amenaza para las manos del operador. La puerta est instalada sobre la parte frontal del cuerpo de la estufa, mediante un conjun to de bisagras que permiten
su apertura logrando ngulos hasta de 180.
Las estufas antiguas disponen simplemente de

un conjun to de resistencias cuya operacin
es controlada mediante un termostato.
En la tabla que se incluye a continuacin, se
muestra la relacin de temperatura/tiempo
requerida para efectuar procesos de esterilizacin con calor seco, como los que se pueden lograr en las estufas de secado.
Se ha colocado el ejemplo correspondi ente de la transferencia de calor de una resistencia tipo alambre de geometra circular. Para otras geometras deben efectuarse los ajustes correspondi entes.
140
Estufa de secado
1. No usar en la estufa materiales o sustancias que sean inflamables o explosivas.
Tabla de tempera tura/tiempo de

esterili zacin por calor seco3
Temperatura C
180
2. Evitar derrames interiores de soluciones

cidas o que formen vapores corrosivos,
para evitar la corrosin de las superficies y
estantes interiores.
Tiempo
(minutos)4
30
170
60
160
120
150
150
140
180
121
360
13
3. Utilizar elementos de pro teccin personal

(guantes aislados, anteojos de segurid ad
y pinzas para colocar o retirar sustancias o
elementos dentro de la estufa de secado).
Rutina de operacin
SERVICIOS
REQUERIDOS
Por lo general, se realiza el sigui en te

procedimi en t o:
Para poder ser utilizada, la estufa de secado

requiere lo siguiente:
1. Activar el interrup tor general, presionando el botn identificado habitualmente

con una [I].
1. Disponer de un mesn de trabajo de contextura fuerte y bien nivelado.

2. Acondicionar alrededor de la estufa un espacio libre de al menos 5 cm y de un espacio para colocar el material que deber ser
procesado en el equipo .
3. Instalar una toma elctrica en buen estado
con polo a tierra debidamente dimensionada, para suministrar la potencia elctrica
que consume la estufa, que deber cumplir
con la normativa elctrica nacional o
internacional que utilice el laboratorio y no
deber estar a ms de 1 m del equipo . El
voltaje tpico utilizado es de 110 V o 220
V/60 Hz.
4. Verificar que el circuito elctrico disponga
de los dispositivos de pro teccin requeridos para garantizar una adecuada alimentacin elctrica.
OPERACIN
DE
LA
ESTUFA
2. Presion ar la tecla iden t i f icada como

Programa.
3. Seleccionar la temperatura de operacin.
Para ello se presiona la tecla marcada con el
signo (+), hasta obtener en la pantalla la
temperatura seleccionada. La estufa empezar el proceso de calentamiento hasta que
se alcance la temperatura seleccionada.
4. Si la estufa es progr amable, se deben seguir las instrucciones que para cada caso
particular defina el fabricante y que permiten definir parmetros adicionales como tiempos, formas de calentamiento y
alarmas.
CONTROL DE LA ESTUFA
A continuacin, se presenta un esquema de
uno de los controles que utilizan las estufas de
secado modernas.
La operacin de la estufa requiere tener en

cuenta una serie de precauciones para su correcta operacin. Entre las ms impor tantes se
encuentran las siguientes:
Manual de Esterili zacin y Desin feccin, Santiago de Chile, Ministerio de Salud.
Los tiempos se cuentan solo desde el momento que se alcanza la temperatura correspondi ente.
141
Tern eratura actual
TematJrec La AS)
I I IIYID
CJ
Programa
Posici6n
Interrupter
..-_....--general
Posici6n apagado
IIustraci6n 37: Control electr6nico de la estufa
En el mismo es posible identificar los siguien

tes elementos:
1. El interrupter general
Cada fabricante proporciona las instrucciones

detalladas de c6mo operar dicho control. Por
lo general, los controles se ubican en la parte
inferior de las estufas y son refrigerados por
un ventilador que hace circular aire a tempe
2. Las pantallas para controlar las

temperatu
ras
actuales
y
seleccionadas
3. El bot6n de selecci6n de parametros
(menu)
4. El bot6n para programar ciclos de
operaci6n
ratura ambiente dentro del espacio de mon

taje donde estan instalados el control y de
mas componentes electr6nicos.
Circ uito electrico

A continuaci6n, se incluye una ilustraci6n
que permite apreciar el circuito electrico ba
sico que incluye una estufa de secado.
5. Los botones para aumentar o disminuir las

ternperaturas
Interrupter
general
.....
lndicador estufa --..----------energizada
..
Polo a tierra
--
-------
Control general estufa

lndicador resistencias
/ ,,.--- energ izadas
/.,,-- Resistencias
llustraci6n 38 : Circuito electrico de la estufa
142
Estufa de secado
De la ilustracin del circuito se destacan los siguientes elementos:

1. Interrup tor general. Energiza o desenergiza la estufa.
2. Control. Permi te controlar las funciones
de la estufa (temperatura, tiempos,
formas de calentamiento o enfriamiento,
modos de operacin seleccionados en el
laboratorio,
tales
como
precalentamiento,
esterilizacin,
deshidratacin,
acondicionamiento,
secado e inclusive horn eado).
3. Resistencias. Elementos calefactores que
transforman la energa elctrica en energa trmica.
4. Sistemas indicadores. Dispositivos que
complementan el control general. Permiten conocer si la estufa est energizada, si
se encuentra en operacin.
CONTROL
DE
CALIDA
El control de calidad en las estufas es un poco difcil de realizar, por cuanto la tcnica de
esterili zacin por calor seco tiene como parmetros crticos la temperatura y el tiempo.
Por lo general, se usan como indicadores biolgicos esporas de Bacillus subtilis, variedad
Nger, que deben incubarse por varias horas
despus del proceso de esterili zacin. La carga inicial de esporas del indicador biolgi co
oscila entre 5 x 105 y 1 x 106. Su efectividad
depende de la difusin del calor, la cantidad
de calor disponibl e y la prdida de calor. La
accin microbicida est condicionada por la
presencia de materia orgnica o suciedad en
el artculo. La esterili zacin por calor seco debe limi tarse a materiales que no puedan esterili zarse en autoclaves.
El mantenimiento que requiere una estufa de
secado no es complicado, ni precisa rutinas
peridicas de mantenimiento de complejidad
tcnica avanzada. Se presentan, a continuacin, rutinas generales de mantenimiento
que deben efectuarse cuando se requieran.
13
Los procedimi entos pueden variar dependiendo del tipo de estufa y las particularidades de diseo incluid as por los diversos
fabricantes.
Adver tencia: Antes de efectuar cualquier
rutina de mantenimiento en la estufa, veri
ficar que esta se encuentra a temperatura
ambiente y se ha desconectado la toma de
alimentacin elctrica.
Acceso a los componen tes electrnicos

Frecuencia: Cuando se requiera
Los compon entes electrnicos de la estufa
se encuentran usualmente en la parte
inferior de esta. Para poder revisarlos se
requiere proceder como se explica a
continuacin:
1. Desconectar la estufa de la toma de alimentacin elctrica.
2. Desplazar la estufa hacia adelante hasta
que la parte fron tal de la base se encuentre alineada con el borde de la superficie
de trabajo.
3. Colocar dos cuas de aproximadamente 3
cm de espesor bajo cada uno de los soportes fron tales. Esto elevar la parte
delantera de la estufa y facili tar la
inspeccin de los elementos electrnicos
una vez que se retire la tapa inferior.
4. Retirar los tornillo s que aseguran la tapa
inferior y levantarla. Entonces, pueden revisarse los compon entes del control electrnico. Por lo general, se ubican en este
compartimiento los siguientes elementos:
a)
El control progr amable
b) Un relevo de segurid ad
c) El interrup tor general y el disyuntor
(breaker) estn combin ados en un mismo
dispositivo.
5. Reinstalar la tapa una vez termin ada la
revisin.
143
Cambio de las resistencias calefactoras

El procedimiento que se explica a continuacin deber realizarlo personal que disponga
de buenos conocimientos de electricidad.
1. Desconectar la estufa de la toma de alimentacin elctrica.
2. Desmon tar el termmetro del alojamiento
ubicado en la parte superior de la cmara.
3. Abrir la puerta y retirar los estantes.
4. Desconectar la sonda del termmetro.
5. Retirar los tornillo s que aseguran el panel
inferior.
6. Retirar el panel inferior fuera de la cmara.
7. Retirar los tornillo s que aseguran los cables de alimentacin elctrica de las resistencias y desconectar los terminales que
los fijan a las resistencias.
8. Retirar los tornillo s que aseguran las resistencias y las resistencias fuera de la estufa.
9. Instalar resistencias nuevas de las mismas
caractersticas de las origin ales.
10.
Reinstalar los elementos retirados
y reconectar los compon entes elctricos.
4. Instalar un ventilador de las mismas

especificaciones del origin al;
conectar los cables que alimentan
el ventilador a los termin ales.
5. Reinstalar la cubierta de pro teccin.
Cambio del empaque de la puer ta

El empaque de la puerta usualmente es de
silicona.
1. Apagar la estufa y abrir la puerta.
2. A f loj ar los seguros que ret ienen el
empaque.
3. Retirar el empaque utilizando un destornillador para desencajarlo de la gua de retencin. Evitar esfuerzos excesivos que
puedan deformar el alojamiento.
4. Instalar el empaque de repuesto iniciando
la labor por la parte superior. A continuacin, desplazar el resto del empaque hacia
los lados, asegurndolo con los elementos
de mon taje que lo fijan a la puerta. Terminar el procedimiento en la parte inferior
de la puerta, tal como se hizo en la parte
superior.
Cambio del termo par

Cambio del ventilador de enfriamien to

1. Abrir el comp ar t imi en t o del con t rol

electrnico.
Para cambiar el ventilador de enfriamiento, que

se encuentra generalmente en la parte inferior,
se sigue el procedimiento que se explica a
continuacin:
2. Retirar los cables conectores del termo par

de sus pun tos de conexin en la tarjeta
del controlador.
1. Proceder tal como se ha explicado para abrir

el compartimiento de elementos electrnicos.
2. Desconectar los terminales de la alimentacin elctrica del ventilador.
3. Desmon tar los tornillo s de f ijacin del
ventilador.
3. Aflojar el mon taje del termo par de la parte superior de la estufa y retirarlo hacia la
parte delantera hasta dejar expuesta una
longi tud libre del cable conector de por lo
menos 15 cm.
4. Cortar el cable del termo par, para poder
retirar la envoltura del termo par.
144
Estufa de secado
5. Asegurar los extremos cortados del termo

par defectuoso, con los cables del termo
par de reemplazo. Utilizar cinta para evitar que se suelten.
6. Halar suavemente el termo par defectuoso
fuera del compartimiento electrnico,
mientras se guan los cables del nuevo,
atados a los del viejo, hasta el lugar que
les corresponde dentro del compartimiento electrnico.
7. Conectar los cables del termo par nuevo a
los terminales de conexin que les correspond e. Verificar que se mantiene la
polaridad origin al.
13
Cambio de las bisagras de la puer ta

Para cambiar las bisagras de la puerta, se procede como se explica a continuacin:
1. Abrir la puerta y levantarla de las bisagras.
2. Retirar los tornillo s de mon taje de la bisagra defectuosa.
3. Retirar la bisagra defectuosa.
4. Colocar la bisagra nueva y asegurarla con
los tornillo s de mon taje.
5. Reinstalar la puerta.
8. Reensamblar la cubierta pro tectora.
PROBLEMA
No hayenerga.
Temperatura errtica elevada.

La estufa presenta fallas de
calentamiento.
La pantalla de datos actuales

muestra el mensaje "abierto".
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
La estufa no est conectada.
Conectar estufa a toma elctrica.
El interruptor de encendido
seencuentra apagado.
Accionar el interruptor de encendido.
Disyuntor defectuoso.
Cambiar el disyuntor.
Tarjeta de control defectuosa.
Sustituir tarjeta de control.
Cable conector abierto.
Revisar/reparar cablesconectores.
Termo par defectuoso.
Sustituir termo par.
Controlador defectuoso.
Sustituir controlador.
Se seleccion una temperatura

inferior a la actual.
Cambiar la seleccin de la temperatura.

Espe- rar a queesta desciendapor
debajo de la temperatura seleccionada.
Termo par defectuoso.
Sustituir el termo par.
Resistencia calefactora defectuosa.
Sustituir resistencia calefactora.
Relevo defectuoso.
Sustituir relevo.
Controlador defectuoso.
Reemplazar controlador.
Circuito del termo par abierto.
Verificar conexin del termo par o

sustituir el termo par.
145
DEFINICIONES BSICAS
Calor . Forma de energa que es transferida, a
travs del lmite de un sistema a una temperatura dada, a otro sistema o vecindario a una
menor temperatura, por la diferencia de
temperatura entre los dos sistemas. Cuando un
sistema de gran masa [M] se pone en contacto con otro sistema de pequea masa [m],
que est a temperatura diferente del prim e- ro,
la temperatura resultante final se encuentra
cerca de la temperatura inicial del sistema de
mayor masa. Se dice, entonces, que una
cantidad de calor Q ha sido transferida del
sistema de mayor temperatura al sistema de
menor temperatura. La cantidad de calor Q
es propor cional al cambio en temperatura
T. La constante de propor cionalidad [C], llamada la capacidad calrica del sistema, permite establecer la siguiente relacin Q = CT,
de la cual se infiere que una de las consecuencias del cambio de temperatura en un
sistema es la transferencia de calor.
Disyun tor. Dispositivo de control elctrico que
permi te energizar o desenergizar un equipo o
dispositivo. Se denomin a tambin interrup tor.
En lengua inglesa se identifica como breaker.
Par termoelctrico. Compon ente formado por
dos materiales diferentes, unidos por los
extremos, que generan una corriente elctrica
cuando una de las union es est a mayor
temperatura que la otra. Este fenmeno se
conoce como efecto Seebeck, en honor a su

descubridor, el fsico alemn Thomas Seebeck.
Resistencia. Propiedad que tienen las diferentes sustancias o materiales, en vir tud de
la cual se impid e en mayor o menor grado el
paso de la corriente elctrica. En los textos
se identifica la resistencia con la letra [R].
Para un cuerpo de seccin uni forme; por
ejemplo: un alambre, la resistencia [R] es una
magnitud directamente propor cional a la
longi tud [l] e inversamente propor cional al
rea seccional [a]. La resistencia se
representa mediante la siguiente ecuacin:
R=kx
l
a
dond
e:
empleadas
La unidad de resistencia es el ohmio y se representa normalmente por la letra griega .
Termostato. Dispositivo que regula la temperatura de un sistema. Opera usualmente
mediante la expansin de uno de sus componentes, que mecnicamente acciona otro elemento como, por ejemplo, un interrup tor
que controla alguna funcin.
146
Estufa de secado
13
Bibliogra fa
Fisher Series 100 Isotemp Gravity Convected Ovens, Instructions N 0-0812-10/1166, 1980. Holman, J., Heat
Isotemp Programmable Ovens 800 Series, Instruction Manual, Fisher Scientific Company, Part N 104502, 200
Manual de Esterili zacin y Desin feccin, Santiago de Chile, Unidad de Infecciones Intrahos- pitalarias de l
( tologi a.uchile.cl/catedras/operator/operato/manualfinal.pd f)
Melissinos, A., Lobko wicz, F., Physics for Scientists and Engin eers, vol. I, Philadelphi a, W. B. Saunders Co., 19
Operating and services procedures for series Fisher Series 200 Isotemp Gravity Convected Ovens, Model 215
147
148
CAPTULO 14
Incubadoras
Cdigo (s)
ECRI
15-151
15-152
Incubadora anaerbica
INCUBADORA
La palabra incubadora proviene de la palabra

latina incubare que signi fica empollar. Es un
equipo diseado para mantener una cmara
a temperatura, atmsfera y humedad controladas, con el fin de conservar organismos vivos en un entorno que resulte adecuado para su crecimiento. Entre las aplicaciones ms
comunes, se citan las siguientes: incubacin
de cultivos bacteriolgi cos, virales, micolgi cos, celulares, determinacin de la demanda
biolgi ca de oxgeno (DBO) y conservacin
de biolgi cos. Las incubadoras varan en
compl ejidad y diseo. Algun as nicamente
con trolan la temperatura, mientras que
otras, adems, con trolan la composicin
atmosfrica.
Incubadora aerbica
FOTOGRAFAS DE INCUBADORAS
Incubadora estndar
http://www.fisherlabequipment.com/incubator.ht
m
Finalmente, algunas disponen incluso de la

capacidad para lograr condiciones de temperatura por debajo de la temperatura ambiente y, en consecuencia, incluyen sistemas de refrigeracin. Se infiere de lo anterior que, dependiendo del diseo y las especificaciones
requeridas, pueden encontrarse en el mercado incubadoras que controlan temperaturas
desde los 10 C y van hasta los 75 C o un
poco ms. Con relacin al control
atmosfrico, algunas incubadoras disponen
de inyeccin de CO2 para lograr condiciones
especiales de atmsfera, bajo las cuales se
incrementa el crecimiento de diversas
especies de organismos y clulas.
Incubadora de baja temperatura

http://www.fisherlabequipment.com/incubator.ht
m
149
La incubadora es un equipo que utiliza diversos medios de t ransferencia de calor y
con trol ambiental, para ob tener unas condiciones bajo las cuales se puedan efectuar
procedimi entos especializados de laboratorio. En general, disponen de un sistema de
resistencias elctricas que se con trolan mediante dispositivos como termostatos o
con troles micropro cesados. En cuanto a los
sistemas de t ransferencia de calor, las incubadoras utilizan bsicamente la condu ccin
y la conveccin natural o forzada.
Conveccin trmica
En las incubadoras que funcionan mediante
conveccin trmica, el calor generado por el
sistema de resistencias es transferido a un
fluido aire que circula en la cmara de incubacin, transfiriendo el calor a las muestras; la eficiencia de este proceso depende de
los patrones de flujo del mismo. En general el
aire ingresa a la incubadora por la parte inferior y es calentado en un compartimiento,
desde el cual fluye a la cmara de incubacin,
siguiendo patrones uni formes de flujo, para
finalmente salir al exterior a travs de un
conducto ubicado en la parte superior de la
incubadora.
Conduccin trmica
En las incubadoras que funcionan por conduccin trmica, el conjun to de resistencias
elctricas transfiere directamente el calor a las
paredes de la cmara, donde se incuban las
muestras. Las resistencias constituyen una
regin de alta temperatura, mientras que la
cmara es una regin de menor temperatura.
La transferencia de energa trmica se presenta siempre desde la regin de mayor temperatura hacia la regin de menor temperatura, segn la siguiente ecuacin1:
T
q = -kA
dond
e:
q=
cantidad de calor trasferido por conduccin
k=
conductividad trmica del material
A = rea de transferencia de calor
T
gradiente de temperatura en la direc=
cin del flujo de calor
x
La ecuacin bsica que explica el compor tamiento es2:
q = hA(TW - T )
dond e:
q = cantidad de calor transferido por conveccin
h = coeficiente de conveccin de transferencia de calor
A = rea a travs de la cual se realiza la transferencia de calor
TW = temperatura en la superficie de la
resistencia
T temperatura del fluido
Algun as incubadoras disponen tambin de
ventiladores que hacen circular el aire, por lo
que el proceso de conveccin es forzado. En
el esquema que se presenta a continuacin
se muestran tres cri terios de diseo
utilizados en las incubadoras: conduccin
trmica, conveccin natural y conveccin
forzada.
El signo menos () se introduce en la ecuacin para que se cumpla la segunda ley de la

termodin mica.
1
2
Ecuacin bsica de transferencia de calor, deducida por el fsico y matemtico francs Joseph Fourier.
Ecuacin de transferencia de calor por conveccin, desarrollada por Isaac Newt on (ley de enfriamiento).
150
Incubadoras
14
Ilustracin 39: Formas de transferencia de calor
Cuando se requiere obtener temperaturas en la

cmara de incubacin inferiores a la temperatura ambiente [Ta], es necesario instalar
en la incubadora un sistema de refrigeracin
que le permi ta extraer cantidades de calor
adicionales, de forma que la temperatura en la
cmara de incubacin sea ms baja que la
temperatura del ambiente. Dicho sistema es
operado mediante el sistema de control de
temperatura de la incubadora.
Alguno s fabricantes han incorpor ado en sus
diseos cmaras de agua que rodean la cmara de incubacin. El agua en estado l- quido
es una sustancia que t iene mayor capacidad
de absorcin y retencin trmica. Este diseo
es particularmente til cuando se requieren
garantizar condiciones muy es- tables de
temperatura dentro de la cmara de
incubacin.
Cuando se necesitan atmsferas especiales,
se han diseado incubadoras que inyectan
gases como dixido de carbono (CO2) y
mantienen concentraciones del mismo en la
cmara de incubacin que varan entre el 3 %
y el 5 %.
Los sistemas de control de temperatura se
ba- san en la utilizacin de termostatos
bimet- licos o de expansin de fluidos o de
pares termoelctricos o termistores, o
diversos elementos semiconductores que
utilizando circuitos electrnicos permi ten,
mediante el uso de microprocesadores, controlar la

temperatura
y dems funciones de la incubadora.

Cada productor ha desarroll ado sus
propios
diseos.
Los
datos
relacionados con los niveles de temperatura progr amados o alcanzados y
dems informacin son presentados en
pantallas construidas con base en
diodos emisores de luz (LED).
Para que una incubadora regule
adecuadamente la temperatura,
debe existir una di ferencia entre la
temperatura de la cmara [Tc] y la
temperatura ambiente [Ta] de al
menos 5 C. Si la temperatura de la
cmara [Tc] debe ser in ferior a la
temperatura ambiente [Ta], se
requiere que la incubadora sea de
baja temperatura, es decir, que disponga

de un sistema de refrigeracin, mediante el
cual sea posible reducir la temperatura de
la cmara [Tc] a una temperatura in ferior a
la del ambiente [Ta].
Resumen: Si Tc>Ta, la incubadora no requiere sistema de refrigeracin. Si Tc<Ta, la incubadora es de baja temperatura y requiere de
sistema de refrigeracin.
En consecuencia la adquisicin de incubadoras depende del tipo de procedimientos que
realiza el laboratorio. Entonces, las especificaciones tcnicas deben ser estudiadas y definidas cuidadosamente, para que la adquisicin responda a las necesidades reales de cada laboratorio.
151
CONTROLES DE LA INCUBADORA
El esquema que se muestra a continuacin da
una idea del tipo de controles que normalmente es posible encontrar en una incubadora de
fabricacin reciente. Los nmeros que identifican cada elemento en el esquema se explican
a continuacin.
Ilustracin 40: Control de incubadora
1. Un interrup tor general para encender o

apagar el equipo . Algunos productores incluyen en el mismo un breaker de pro teccin. El interrup tor dispone de dos posiciones. En la posicin [I], se energiza la incubadora. En la posicin [O], se desconecta la
incubadora.
2. Una pantalla que permi te ver los parmetros seleccionados. Por ejemplo: temperatura seleccionada, temperatura de alarma
(mximo y mnima).
3. Dos botones de control que normalmente
se identifican con las palabras Men y Seleccin o Set en ingls. Estos permi ten programar la operacin de las incubadoras y
determinar los niveles de alarma.
4. Dos botones de seleccin que permi ten
aumentar o disminuir las temperaturas requeridas. Los botones de seleccin se utilizan en combin acin con los botones de
control.
5. Un conjun to de diodos emisores de luz o
LED que in forman sobre el estado de
operacin. Si el sistema calefactor est en

operacin, se enciende el LED identificado
como Calor; si se est progr amando la incubadora, se enciende el LED identificado
como Programa.
6. El teclado corresponde a la zona del
control, donde se encuentran
ubicados los botones de seleccin y
de control.
Cada fabricante utiliza controles ajustados al
diseo de incubadora, pero en general todos
disponen de los controles a los que se ha hecho mencin. La secuencia de accionamiento
de los mismos normalmente se explica en los
manuales de uso de los fabricantes.
En general con el botn denomin ado Men, se
elige el parmetro con el que se quiere trabajar y, al presionar los botones de seleccin,
se aumentan o disminu yen hasta el pun to en
donde lo requiere el operador. A continuacin,
se confirma la seleccin realizada en el botn
Seleccin o Set en ingls.
152
Incubadoras
SERVICIOS
REQUERIDOS
Las incubadoras requieren para su funcionamiento las siguientes condiciones:

1. Una acometida elctrica dimensionada de
acuerdo con los estndares elctricos utilizados en el pas. La toma elctrica que alimenta la incubadora no debe estar a ms
de 1,5 m del lugar seleccionado para la instalacin de la incubadora. La acometida
elctrica normalmente debe suministrar
un voltaje de 120 V, 60 Hz o de 220-240 V,
50/60 Hz y disponer de su respectiva acometida a tierra.
2. Un espacio libre a los lados de la
incubadora y tambin en la parte trasera
del equipo, con el fin de permi tir el paso
de los cables y la ventilacin requerida
por
la
incubadora
para
su
funcionamiento normal. Dicho espacio se
estima entre 5 y 10 cm.
3. Un lugar del laboratorio donde la variacin de temperatura sea mnima.
4. Una estantera o mesn, firme y nivelado,
capaz de sostener el peso de la incubadora. El peso de una incubadora de tres estantes se estima entre 60 y 80 kg.
5. Reguladores de presin, mangueras y acoples, para las incubadoras que utilizan dixido de carbono (CO2). Adems, anclajes
que permi tan asegurar el cilindro de alta
presin que contiene el CO2.
RUTINAS DE MANTENI MIENTO Y

USO DE LA INCUBADORA
Se presentan a continuacin las rutinas generales de operacin y mantenimiento que puede
llegar a requerir una incubadora. Los procedimientos especficos deben realizarse siguiendo
las recomendaciones de cada fabricante.
Recomendaciones de uso
1. No utilizar una incubadora en presencia
de materiales inflamables o combustibles,
debido a que en el interior del equipo
14
existen compon entes que en operacin

podr an actuar como fuentes de ignicin.
2. Evitar el derrame de soluciones
cidas en el interior de la incubadora.
Estas deterio- ran los materiales
internos de la cmara de incubacin.
Procurar manejar sustancias cuyo
pH sea neutro en lo posible. Evi- tar
incubar sustancias que generen
humos corrosivos.
3. Evitar colocar recipientes sobre la
cubierta inferior que pro tege los
elementos calefactores resistivos.
4. Emplear elementos de pro teccin
personal cuando se utiliza la
incubadora: anteojos de segurid ad,
guantes, pinzas para colocar y retirar
recipientes.
5. Evitar permanecer frente a una
incubadora que se encuentre con la
puerta abierta. Algun as sustancias
emiten humos o vapores no
recomendables para respirar.
6. Calibrar la incubadora en el lugar de
instalacin para constatar su uni
formid ad y estabilid ad.
7. Verificar la temperatura de operacin
de la incubadora en horas matutinas
y ves- pertinas, con instrumentos
certificados: termmetro, termo par,
etc.
8. Registrar cada inconformid
ad
detectada en la bitcora de la
incubadora. Explicar si se tomaron
acciones correctivas.
9. Verificar que la temperatura de la
incubadora no vare ms de un
grado centgrado (+/ 1 C).
10. Aadir
un
agente
inhibidor
microbiano de carcter no voltil, si
se requiere instalar dentro de la
incubadora un recipiente con agua
para mantener una determin a- da
cantidad de humedad.
Recomendaciones de limpie za
1. Desconectar la incubadora antes de

iniciar los procesos de limpi eza.
153
2. Usar agentes de limpieza no abrasivos: un

trapo humedo con detergente suave, para
limpiar las superficies de facil acceso,
exte riores e interiores.
incubadoras, son sencillamente un

juego de tornillos.
3. Evitar que los agentes de limpieza entren

en contacto con elementos electricos.
4. Esperar a que la incubadora este seca -li
bre de humedad- antes de proceder a su
reconexi6n.
154
R utinas de mantenimiento
Una incubadora bien instalada y operada tie
ne muy pocas exigencias de mantenimiento
y pueden pasar anos antes de requerir
alguna intervenci6n tecnica. Cuando se
realice
cual
quier
actividad
de
mantenimiento, deben se guirse las
recomendaciones de los producto res de los
equipos.
Advertencia:Antes de efectuar cualquier reparaci6n, verificar que la incubadora ha sido descontaminada, se encu
Las rutinas de mantenimiento que se

presen tan a continuaci6n solo deben ser
realizadas por personal que haya recibido y
aprobado capacitaci6n tecnica sobre la
incubadora y es te consciente de los riesgos
que se corren en este tipo de actividad.Las
mismas estan enfo cadas a verificar el
estado y correcto funcio namiento de los
siguientes componentes:
1. Empaque de la puerta. Este es un
elemento generalmente fabricado a
base de silicona, con lo que se
garantizan varios aiios de vida util.
Para sustituir el empaque, es
necesario desmontar la puerta y
retirar los mecanismos de fijaci6n
que lo ubican en la puerta. Por lo
general,el empaque va montado
sobre una ranura. El nuevo
empaque debe tener las mis mas
especificaciones del original y su
montaje se hara utilizando el
alojamiento que lo sos tiene en la
puerta y mediante los mecanismos
de
fijaci6n
que,en
algunas
2. Elementos calefactores (sistema de resis

tencias). Los elementos calefactores se
en cuentran ubicados generalmente en
la par te inferior de la incubadora. Para
poder
sustituirlos,
es
necesario
desmontar los pa neles y las cubiertas
inferiores de la incuba dora. En algunas
incubadoras
se
deben
desmontar
inclusive las puertas -la exte rior,
metalica y la interior, en vidrio-. Una
vez retiradas las cubiertas protectoras,
se desconectan las resistencias y los
sistemas sensores de temperatura y se
sustituyen por nuevas con las mismas
especificaciones de la original. A
continuaci6n,se precede a ensamblar de
nuevo los elementos removi dos y se
efectua la calibraci6n.
3. Ventilador de enfriamiento. En caso de
daiio, este componente debe ser
sustitui do por otro con las mismas
caracteristicas del original. Para su
instalaci6n
se
debe
abrir
el
compartimiento en el cual se en cuentra
alojado.
Para
hacerlo,
en
algunas
incubadoras es necesario desmontar las

puertas y algunos paneles de protecci6n.
Despues, se desconecta el ventilador da

nado y se desmonta . Se sustituye por
uno nuevo con las mismas caracteristicas
del original. En el momento del montaje
se debe verificar la direcci6n hacia la cual
in dica se dara el flujo de aire una vez
conec tado. Se precede a conectar y
ensamblar nuevamente los elementos
desmontados.
Para la sustituci6n de los componentes que
se citan a continuaci6n, se precede de
manera analoga a las que han sido descritas
en los com ponentes anteriores. Lo
importante consiste en utilizar repuestos con
las mismas especificacio nes de los
originales.
4. Ventilador de circulaci6n interna

5. Control electr6nico
6. Componentes electronicos
7. Termopares
8. Puerta de vidrio (interna)
9. Manija
10. Cuerpo de la incubadora (elementos
in ternos y externos)
Incubadoras
14

Normalmente, las situaciones comunes que se
presentan en la siguiente tabla debe realizarlas personal que haya recibido y aprobado
capacitacin especializada en operacin y

mantenimiento de incubadoras. Casos especializados deben atenderse siguiendo las recomendaciones de los fabricantes.
Incubadora normal
PROBLEMA
La incubadora no enciende.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
No hayenerga en la red de
alimentacin elctrica.
Revisar el estado de la acometida

elctrica.
El interruptor de
encendido/apagado est en la
posicin
apagado.
El
cable de
alimentacin elctrica
Colocar el interruptor en la
posicinencendido.
Revisar cable o sustituirlo.
est defectuoso.
La incubadora presenta fallas de
calentamiento.
Elcontrol
detemperaturaestdefectuoso.
La resistenciacalefactoraest
defectuosa.
Revisaryajustarosustituircontrol
detemperatura.
Sustituir resistencia. Colocar repuesto con
las mismas caractersticasdel original.
Laconexin de la resistencia
calefactora est defectuosa.
Limpiar puntos deconexin.Ajustar

laconexin.
El par termoelctrico est

defectuoso.
La temperatura
seleccionadaesmenor que la
Reemplazar par termoelctrico.
El relevo est defectuoso.
Alarmapermaneceencendiday la
temperatura esmayor que la
seleccionada.
La
pantalla
muestra
continuamente unaseal de falla.
Usualmente los LED muestran las
letrasEEE.
Revisar especificacin de la incubadora.

Solo las incubadoras refrigeradas pueden
operar en este tipo de condiciones. En
condiciones normales la temperatura
ambiente es menor que la temperatura
de la incubadora.
Sustituir relevo.
El empaque(s) de la puerta est

defectuoso(s).
Cambiar empaque(s) de la puerta.
La temperatura seleccionada ha
sido cambiadaa un valor menor
que el lmite mximo definido
para la alarma.
Elcontrol
Esperar a que la temperatura actual

disminu- ya hasta la temperatura
seleccionada.
detemperaturaestdefectuoso.
El
relevodeestadoslidoestdefectuoso.
El diodo de alarma centellea.
El diodo de alarma centellea.
Sustituir control de temperatura.

Sustituir relevo.
Permitir que la incubadora seenfre
hasta que se estabilice en la temperatura
seleccionada de operacin.
Permitir que la incubadora seenfre
hasta que se estabilice en la temperatura
seleccionada de operacin.
155
Incubadora de baja tempera tura
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
El control de la incubadora no
funciona.
El interruptor est apagado.
Encender el interruptor principal.
No hayalimentacin elctrica.
Verificar circuito de alimentacin elctrica.
Lecturas de temperatura errticas

(su- perioreso inferioresa la
especificada).
Hay acumulacin de escarcha

alrededor del evaporador.
Descongelar segn proceso definido por

el fabricante.
Temperatura uniformeen lacmara

dein- cubacin, perosuperior a
laseleccionada.
Hay acumulacin de escarcha

alrededor del evaporador.
Reducir la temperatura de
enfriamiento.
Descongelar segn proceso definido por
el fabricante.
Temperatura superior o inferior a la

seleccionada.
El flujo interior de aire est

bloqueado por contenedoresde
muestras.
El
control de temperatura podra
requerir calibracin.
Reorganizar loscontenedorespara
permitir el flujo de aire.
Calibrar segn procedimiento definido por
el fabricante.
El control se desconecta estando

en operacin.
El voltaje de lnea es
inadecuado.
Verificar el voltaje de lnea, este no debe

variar msdel 5 % del
voltajeespecificadoen
Acometidaelctricalaplaca.
fuerade norma.
El compresor no funciona, aunque

el LED de enfriamiento est
encendido.
El protector trmico del compresor

est abierto.
Verificar el voltaje de lnea, este no debe

variar msdel 5 % del voltaje
especificadoen la placa.
Lecturas
de
temperatura
superiores a las seleccionadas y
disparo de alarma por encima de
los 40 C.
El
relevodeenfriamientoestdefectuoso.
El compresor est defectuoso.
Sustituir relevo de enfriamiento.
DEFINICIONES BSICAS
Conduccin trmica. Forma de transferencia
de calor dentro de una sustancia, en la cual el
calor fluye del pun to de mayor temperatura al
pun to de menor temperatura.
Conveccin trmica. Forma de transferencia
de calor a travs del movimiento de un fluido .
DBO. Demanda biolgi ca de oxgeno. Indicador de la contaminacin de un efluente. Se
mide mediante el consumo de oxgeno disuelto por parte de microorg anismos que
descompon en la materia orgnica presente
en el propio efluente. La DBO se mide como
la masa en miligr amos de oxgeno utilizado
por un li tro de muestra del efluente, cuando
se incuba a 20 C durante 5 das.
LED. Diodo emisor de luz, en ingls ligh t emision diode. Dispositivo electrnico muy utilizado para presentar datos en pantallas.
Sustituir compresor. Cargar refrigerante y

calibrar. (Procedimiento especializado
que requiere herramientas especiales).
Par termoelctrico. Compon ente formado por

dos materiales diferentes unidos por los
extremos que generan una corriente elctrica,
cuando una de las union es est a mayor
temperatura. Este fenmeno se conoce como
efecto Seebeck en honor a su descubridor, el
fsico alemn Thomas Seebeck.
Resistencia. Propiedad de las diferentes
sustancias o materiales, en vir tud de la cual
se impid e en mayor o menor grado el paso de
la corriente elctrica. En los textos se
identifica la resistencia con la letra [R]. Para
un cuerpo de seccin uni forme; por ejemplo:
un alambre, la resistencia [R] es una magni
tud directamente propor cional a la longi tud
[l] e inversamente propor cional al rea
seccional [a]. La resistencia se representa
mediante la ecuacin siguiente:
R=kx
l
a
156
Incubadoras
dond e:
empleadas
La unidad de resistencia es el ohmio y se representa usualmente por la letra griega .
14
de bajo costo que se utilizan en diversas aplicaciones, una de las ms comunes es el control
de temperatura.
Termostato. Dispositivo que regula la temperatura de un sistema. Por lo general, opera
mediante la expansin de uno de sus componentes que mecnicamente acciona otro elemento como, por ejemplo, un interrup tor
que controla alguna funcin.
Termistor. Compon ente electrnico cuya resistencia vara con la temperatura. Son
dispositivos
Bibliogra fa
Holman, J., Heat Transfer, New York, Mc Graw Hill Co., 1972.
Isotemp Standar Incubator 600 Series, Instruction manual, Fisher Scientific, Part N 95587, Rev. K,
Isotemp Forced Air Incubator 600 Series, Instruction manual, Fisher Scientific, Part N 102886, Rev.
Isotemp Large Capacity Refrigerated Incubator, Model 304 & 304R, Fisher Scientific, Cat. 11-679-30
Low Temperature Incubator, Model 307A, Operating and Service Instructions, Fisher Scientific, Part N
Millipor e Laboratory Incubator, User Guide, Millipor e Corpor ation, P36008, Rev. A., 2000.
Universal Medical Device Nomenclature System (UMDNS), Product Categories Thesaurus, ECRI, 52
157
158
M icroscopios
MICROSCOPIO
OTROS NOMBRES DEL EQUIPO
La palabra microscopio proviene de la fusion

de las palabras griegas micros que significa
pequeno y skopien que significa ver o exami
nar. Este capitulo presenta las rutinas y cu.ida
dos de mantenimiento de los microscopios
utilizados en la practica cllnica.
Dependiendo def sistema de contraste, los

microscopies reciben diversos nombres. Entre
los mas comunes estan los siguientes:
Microscopio 6ptico de campo claro

Microscopio 6ptico de campo oscuro
Microscopio 6ptico de fluorescencia
Microscopio 6ptico de contraste de fase
Microscopio 6ptico de interferencia
Microscopio 6ptico de luz polarizada
Microscopio 6ptico invertido
Microscopio estereoscopio
FOTOG RAFiAS DE MICROSCOPIOS
Estereoscopio
l nstrumento que media nte la
sobreposicion de dos imagenes planas,
una por cada ojo,
permite aprecia r imagenes
tridimensionales o vol umenes.
http://www.microscopeworld. com/images
Microscopio binocular
l nstrumento que usa diversos sistemas de
len
tes e ilumi nacion controlada pa ra obtener
la magnif icacion de un objeto.
159
PROPSITO DEL EQUIPO

El microscopio es un instrumento de precisin
conformado por subsistemas pticos lentes, fil
tros, prismas, condensadores; mecnicos
elementos para controlar la posicin de la
muestra en el espacio tridim ensional X, Y, Z;
elctricos transformadores y sistemas de iluminacin, y electrnicos cmaras, sistemas
de televisin, etc., que interactan entre s
para ampli ficar y controlar la formacin de
imgenes de objetos de tamao reducido, cuyas caractersticas no alcanzan a ser detectadas por el ojo humano.
Por lo general, para observar las muestras se
requiere que estas hayan sido preparadas de
acuerdo con tcnicas que permi ten resaltar los
detalles a observar. El microscopio constituye
una ayuda diagnstica de primer orden en el
rea de salud, en especialidades como hematolog a, bacteriolog a, parasitolog a y la formacin de recursos humanos. (Existen microscopios con aditamentos especializados para
que los estudiantes efecten las observaciones, dirigido s por un pro fesor). El desarrollo
tecnolgi co de estos equipos ha permi tido fabricar una enorme cantidad de modelos de
aplicacin especializada en la industria y la
academia, y ha sido fundamental para el desarrollo del conocimiento humano y para entender el funcionamiento de la naturaleza.
El microscopio ha sido construido utilizando
las propi edades fsicas de los lentes al interactuar con la luz. Un lente es un elemento ptico, fabricado por lo general en vidrio , que
tiene la propi edad de refractar la luz. Es de
dimensiones calculadas con superficies generalmente parablicas o esfricas. Si los rayos
de luz que inciden sobre una de las superficies del lente convergen al salir del mismo en
un pun to F, el lente se conoce como positivo o
convergente; si el lente dispersa los rayos
luminosos que lo atraviesan, se denomin a divergente o negativo. Los lentes positivos
(convergentes), como el que se presenta a
continuacin, constituyen la base sobre la cual
se fabrican los microscopios.
Ilustracin 41: Lente positivo (convergente)
En la ilustracin es posible identificar el foco [F]

lugar donde se concentran los rayos luminosos y la forma en que es refractada la luz al
atravesar el lente. La distancia entre el lente y
el foco [D] se conoce universalmente como
distancia focal.
La ilustracin que se muestra a continuacin

resume los conceptos relacionados con el
funcionamiento de los lentes, los cuales se
aplican en el diseo y fabricacin de los elementos pticos del microscopio.
160
Microscopio
15
Un objeto [h], ubicado a una distancia [a] del lente, produce una imagen [h], a una distancia [b], donde [h>h].
Relaciones matemticas que gobiernan la construccin de lentes: 1/f = 1/a+1/b, dond e:
f = distancia al foco. (Lugar donde se concentran las ondas luminosas); [a] = distancia del lente al objeto y [b] = d
[M] = h/h = b/a.
Ilustracin 42: Funcionamiento del lente
Explicacin. Cuando un objeto bien ilumin ado [h] se coloca a una distancia [a] a la izquierda de un lente convergente, los rayos de
luz que provienen del mismo son refractados al
cruzarlo. El rayo que proviene de la parte
superior del objeto, que cruza el eje ptico
del lente en el pun to focal [F], es refractado
por las dos superficies del mismo y sale en
una direccin paralela al eje ptico. El rayo
que parte paralelo al eje ptico y cruza el
lente en la parte superior es refractado y
cruza,
La magni ficacin [M] de un lente est definida por la relacin que existe entre el tamao
del objeto y el tamao de la imagen y se representa por la ecuacin:
a travs del pun to focal [F] del lado de la

imagen hasta que se cruza con el primer
rayo a una distancia [b] del lente, donde se
forma la imagen. En el caso presentado, la
distancia [a] es mayor que la distancia focal
[f], por lo que se forma una imagen real e
invertida a una distancia [b] a la derecha del
lente. La distancia focal [F] est relacionada
a las distancias [a] y [b] por la ecuacin:
[h] y [h] corresponden respectivamente a las

dimensiones de la imagen y del objeto, y [a] y
[b] a las distancias existentes entre el lente y el
punto donde se forma la imagen, y entre el
lente y el punto donde se encuentra el objeto.
1
F
1
a
1
b
M=
h
h
b
a
dond
e:
161
DIAGRAMA DEL EQUIPO (ISOMTRICO Y CORTE)1
Ilustracin 43: Corte del microscopio
La numeracin corresponde a la descripcin de compon entes que se presenta a continuacin.
162
Microscopio
15
Componen tes
Los compon entes principales de los subsistemas son los siguientes:
bombillo s, disponen de un espejo, mediante el cual se
N
SISTEMA
N
dirig COMPONENT
e la luz hacia la placa ubicada
2
3
Cabezabinocular
Revlver portaobjetivos
Plataforma, platina o carro
portamuestras y
condensador
Oculares
Tubo binocular
Cabezabinocular
Revlver portaobjetivos
Objetivos
Condensador
Diafragmade apertura
Portafiltros
Lente de campo amplio
ES
2
Control de altura del condensador
1
2
Plataforma, platina o carro portamuestras
3
4
Iluminador
1
Cristal de cierre con portafiltros
0
1
Palancade graduacin del campo luminoso del diafragma
1
1
Espejo cncavo
2
1
Lmpara incandescente
3
1
Portalmpara con anillo de ajuste
4
1
Lente colector
5
1
Espejo
6
5
Cuerpo del microscopio
1
Transformador interno
7
1
Restato de control
8
1
Cable de alimentacin
9
2
Control de ajuste macro/micromtrico
0
2
Brazodel microscopio
2
2
Base
4
*Ver ubicacin de componentesen la ilustracin 43.
SERVICIOS
REQUERIDOS
Normalmente, los microscopios utilizan energa elctrica de 110 V/60 Hz o 220 V/60 Hz. Algunos disponen de una fuente regulada que
permi te variar la intensidad lumnica. Tambin existen microscopios que, en lugar de
en la plataforma. Dichos microscopios son de

mxima utilidad en regiones alejadas de los
centros urbanos, donde no existen lneas de
interconexin elctricas y se utilizan en brig adas de salud. Otras clases de microscopios requieren de preinstalaciones especiales. Un microscopio de fluorescencia necesita una cabina
oscura para poder efectuar las observaciones.
163
DESCRIPCIN DE FALLAS POTENCIALES

POR COMPONENTES
enfoque y se vuelve a ensamblar. Si los lentes

del ocular presentan roturas debido a circunstancias fuera de control golpes por cada, uso
indebido, debe cambiarse el ocular.
Cabeza binocular
Cabeza binocular
Descripcin
1. Ocular
2. Tubo binocular
3. Cabeza binocular (prismas, lentes y
espejos)
Oculares
El probl ema ms frecuente que afecta los
oculares es la presencia de polvo o suciedad,
la cual puede ser externa en lassuperficies
exteriores o interna en lassuperficies
interiores. Dicha suciedad o polvo produce
sombras que interfieren con la muestra bajo
anlisis, especialmente cuando se usan
objetivos de alto poder (40X-100X). Si la
suciedad es externa, la reparacin se realiza
limpi ando lassuperficies de los lentes y, si es
interna, desensamblando el objetivo, limpi
ando las superficies internas, reensamblando y
veri ficando el estado final.
Tambin los lentes de los oculares se ven afectados por rayones, especialmente en aquellos
que ya tienen largo tiempo de servicio. Los
mismos se producen por descuidos en los procedimientos de limpi eza y por uso de elementos inadecuados en dichos procesos. Los rayones producen sombras en el campo visual del
ocular, similares a los de una telaraa. Desafortunadamente, este tipo de defecto oblig a a
cambiar el ocular. Algunos disponen de mecanismos de enfoque que a veces se traban. Para reparar se desensambla el ocular, se aplica
solvente a la rosca, se limpi a el mecanismo de
El estado de la cabeza binocular tiene un efecto directo sobre la calidad de la imagen del microscopio. Cualquier suciedad adherida a los
compon entes pticos de la cabeza afecta la
calidad de la imagen. Este compon ente
puede llegar a ensuciarse debido a situaciones
deriva- das del trabajo normal en el laboratorio
como las generadas en el cambio de oculares,
la instalacin de accesorios como cmaras
fotogr- ficas o el simple olvido de colocar los
tapones cuando no est en uso el microscopio.
Sus compon entes ms impor tantes son
prismas y espejos.
Prismas. Tienen una superficie reflectora
plateada que puede oxidarse con el tiempo
y perder capacidad reflectiva. Algunos prismas solamente disponen de una capa de
pin tura reflectora aplicada sobre la superficie de sus caras, a travs de la cual la luz
entra y sale.
En el caso de daos en la superficie reflectora, el prisma puede ser removido, limpi ado, replateado o repin tado, instalado y alineado en la cabeza binocular. Esta clase de
mantenimiento es altamente complejo y
solo lo realizan laboratorios especializados
o empresas que brind an servicios de
mantenimiento
especializado.
La
remocin de prismas, sin el entrenamiento y
la herramienta adecuada, puede producir
graves desajustes en la calidad de la imagen
e inclusive la rotura del compon ente.
Espejos. Tienen sus superficies reflectoras

directamente expuestas y son susceptibles
a la oxidacin. Si es necesario repararlos, se
desmon ta y se retira el espejo de la cabeza
binocular y se sustituye por uno nuevo, que
se corta, cementa y alinea directamente en
el sitio de mon taje.
164
Microscopio
15
Espejos
Iluminador
Los espejos se caracterizan por tener una superficie reflectiva directa, aplicada sobre el
cuerpo del espejo. En microscopios de fabricacin reciente, generalmente se encuentra
pro tegida por un recubrimi ento. En equipos
antiguos, la capa reflectora no dispona de
tales recubrimi entos, por lo que estaba expuesta a la oxidacin.
Bombillo incandescente
Descripcin
10.Cristal de cierre con por tafil tros
11.Palanca de graduacin del campo
luminoso del diafragma
12.Espejo cncavo
13.
Lmpara incandescente
14.Por talmpara con anillo de
ajuste 15.Lente colector
16.Espejo
Es un elemento fundamental para la utilizacin

del microscopio. Si el sistema de ilumin acin no
funciona bien, el microscopio puede quedar fuera de uso, dado que la intensidad luminosa y el
contraste son fundamentales para la identificacin y observacin de la muestra estudiada. Diversos factores afectan el sistema de ilumin
acin; los ms comunes son la suciedad o
deterioro de los compon entes pticos como
espejos y lentes, fallas en los voltajes de
alimentacin o la utilizacin de bombillo s
diferentes a los recomendados por los
fabricantes.
Las anomalas
mencionadas
producen pequeas sombras en el campo de visin, intensidad de luz insuficiente o falta de
ho- mogeneidad en la ilumin acin.
El bombillo es un compon ente de consumo.

Tie- ne una determinada vida til y por esto se
debe planificar su adquisicin de forma que
siempre est disponibl e un repuesto en el
laboratorio o en la institucin donde se
encuentra instalado el equipo . La instalacin
del bombillo se realiza siguiendo las
instrucciones del fabricante. Algu- nos equipos,
como los microscopios pticos de fluorescencia,
utilizan bombillo s especiales
lmparas de mercurio o xenn que requieren
procedimientos de montaje y calibracin que,
aunque sencillos, se deben efectuar segn las
recomendaciones de los fabricantes. El voltaje
suministrado
al
microscopio
debe
corresponder al especificado por el fabricante.
De lo contrario, se corren riesgos innecesarios
que afectan la calidad de la ilumin acin.
Algunos microscopios utilizan transformadores
internos o externos y sistemas de regulacin de
voltaje.
Plataforma, platina o carro

portamuestras y condensador
Suciedad interna
Aparece debido a que lossistemas de ilumin
acin no estn sellados para impedir el ingreso
de polvo y partculas. El polvo que ingresa al
sistema produ - ce difusin y disminucin en la
cantidad de luz proyectada sobre la muestra.
Las partculas grandes producen sombras que
dificultan la observacin. Para corregir el probl
ema, se desensambla el ilumin ador, se limpi an
sus compon entes, se en- samblan y alinean de
nuevo sus compon entes.
Componentes
6. Condensador
7. Diafragma de apertura
8. Portafiltros
9. Lente de campo amplio
21.Con trol de altura del condensador
23.Platina, plataforma o carro por tamuestras
165
Condensador
El condensador controla la forma en que la
luz se concentra o contrasta sobre la muestra
bajo observacin. Est compuesto por elementos pticos y mecnicos. Los elementos
pticos estn constituidos por lentes; los elementos mecnicos, por dispositivos que permiten controlar la posicin de los elementos
pticos y la cantidad de luz que llega a la
muestra mediante un diafragma mecnico.
Normalmente, los compon entes pticos son
afectados por la presencia de polvo. El mismo
debe ser limpi ado de forma similar a la utilizada con los sistemas de lentes. Se limpi an
con un pincel fino de pelo de camello, con el
cual se remueve el polvo que se haya depositado sobre sus superficies. Los compon entes
mecnicos requieren, para su ajuste, de herramientas de caractersticas especiales. Cada fabricante dispone de sus propios diseos. Las
rutinas habitualmente estn enfocadas a procedimientos de limpi eza, ajuste y lubricacin.
Revlver portaobje tivos
Componentes
4. Revlver por taobjetivos
5. Objetivos
El mantenimiento del revlver por taobjetivos

es sencillo. Internamente dispone de un
trinquete que permite alinear cada uno de los
objetivos con el tren ptico del microscopio.
Simplemen- te, se gira con suavidad hasta que
el mecanismo del trinquete ajusta la posicin
correcta del siguiente objetivo. Cada
fabricante define el n- mero de objetivos que
pueden ser montados en el revlver; lo comn
es encontrar revlveres que aceptan desde tres
hasta cinco objetivos. El mantenimiento busca
mantener limpio , lubrica- do y bien ajustado el
mecanismo rotatorio.
Platina o carro por tamuestras

La platina o carro por tamuestras est constituido por una serie de compon entes que interactan entre s y que tienen como prop sito controlar la posicin de la muestra bajo
anlisis. El carro dispone de movimientos de
translacin en sentidos X/Y, que el operador
controla a travs de botones macro/micromtricos independientes; adems, el carro dispone de dispositivos de tensin que permi ten
graduar la suavidad de los movimientos y unas
guas tipo "cola de milano " que normalmente
se lubrican. En la parte superior estn
instaladas las platinas o uas de sujecin de
las lminas por tamuestras. El mantenimiento
busca mantener limpios, lubricados y bien
ajustados estos mecanismos.
Los objetivos reciben rutinas de limpi eza de

sus superficies pticas externas. Los de
inmersin requieren que, cada vez que se
termine de utilizar el objetivo, se limpie el
aceite para evitar que, por capilaridad, este
invada la estructura ptica interna del objetivo.
Cuerpo del microscopio
Componentes
17. Transformador interno
18. Restato de control
19. Cable de alimentacin
20. Control ajuste macro/micromtrico
22. Brazo del microscopio
166
Microscopio
15
Instalacin y almacenamien to
El cuerpo del microscopio est diseado para
recibir y sopor tar los compon entes ya
descritos
cabeza binocular, carro por tamuestras, condensador y revlver por taobjetivos y algunos
otros como el transformador y dems elementos elctricos/electrnicos que forman parte
del sistema de ilumin acin del microscopio.
El mantenimiento del cuerpo del microscopio
consiste bsicamente en mantener limpi a la superficie, removiendo la grasa, suciedad o
elementos que hayan podido afectar su
presentacin y estado. Es necesario tener
especial cuidado con sustancias qumicas que
pueden ser corrosivas y los tintes que se utilizan
en los laboratorios para teir las placas por
tamuestra.
MANTENI MIENTO GENERAL
DEL MICROSCOPIO
Ante todo es necesario enfatizar que el microscopio es un equipo de alta precisin. La

integridad de sus compon entes pticos, mecnicos y elctricos debe ser observada, a fin
de conservarlo en las mejores condiciones.
Cada elemento del microscopio ha sido desarroll ado utilizando las ms avanzadas tcnicas de fabricacin. El ensamble de sus
compon entes y su ajuste se realiza en fbrica, utilizando equipos especializados que,
mediante tcnicas de medicin avanzadas,
controlan las tolerancias requeridas entre
los diversos compon entes del equipo . La
limpieza del ambiente en el que se utiliza,
su instalacin y uso cuidadoso resultan
fundamentales para lograr una larga vida
til.
La humedad, el polvo y las malas condiciones de alimentacin elctrica, el mal uso o
instalacin inadecuada resultan contraproducentes para su correcta conservacin. El
mantenimiento del microscopio implica mucho cuidado, paciencia y dedicacin. Debe
ser efectuado nicamente por personal que
haya recibido capacitacin en el equipo y
que disponga de la herramienta especializada que se requiere para in tervenir. Se presentan a continuacin las recomendaciones
generales para la instalacin y el mantenimiento necesarios para mantener un microscopio en buen estado de funcionamiento y
que estn al alcance del microscopista.
1. Asegurarse que el ambiente o rea en que

se instale el microscopio est pro tegido o
pro tegida del polvo y la humedad. El ambiente ideal debe disponer de un sistema
de aire acondicionado que garantice aire
libre de polvo o partculas, control de humedad y control de temperatura de manera permanente.
2. Verificar que el ambiente o rea en que se
instale el microscopio disponga de seguridad: puerta con cerradura para evitar su
sustraccin no autorizada.
3. Confirmar que el lugar seleccionado para
ubicar el microscopio est alejado de lugares como pocetas de agua o donde se
trabajen sustancias qumicas, para evitar
que el equipo resulte afectado por un derrame o salpicadura. Tambin deben evitarse sitios que tengan luz solar directa.
4. Verificar que el lugar seleccionado cuente
con una toma elctrica en buen estado, cuyo voltaje est ajustado en magnitud y frecuencia con los cdigos y normas
elctricas, y que resulte compatible con el
del sistema de ilumin acin del microscopio.
En caso de que el microscopio utilice
espejo, debe estar ubicado cerca de una
ventana que permita una buena ilumin
acin, pero sin estar directamente expuesto
a la luz solar.
5. Instalar el microscopio sobre una superficie nivelada de estructura rgida, bajo la
cual exista espacio suficiente para que el
usuario microscopista coloqu e sus piernas y como consecuencia pueda acercar el
cuerpo hacia el microscopio y la cabeza
hacia los oculares, sin forzar la column a
vertebral: cuello y espalda.
6. Para facili tar la colocacin del microscopista, propor cionar una silla de altura variable, que le brind e un buen sopor te
lumbar; si es del caso, tambin proveer un
apoyo para los pies, situado al frente del
sitio de trabajo, no en la silla. El propsito
es lograr que la column a vertebral est lo
ms recta posible y se reduzca la flexin
de los hombros y el cuello.
167
7. Evitar que en sitios cercanos al lugar de

instalacin del microcopio haya equipos
que produ zcan vibraciones como
centrfugas o refrigeradores.
8. Procurar no mover el microscopio de su sitio de
instalacin y con mayor razn si el mismo se
utiliza intensamente cada da.
9. Cubrir el microscopio con un pro tector de
polvo si no se usa por perodos de tiempo
largos; tomar precauciones para que no lo
afecten excesos de humedad. Mientras ms
seco el ambiente, menos probabilid ad de
que se presente crecimiento de hongos. El
pro tector puede ser de plstico o de tela similar en calidad a la utilizada en la fabricacin de pauelos, que no suelte pelusa.
10. En zonas de humedad alta, guardar el microscopio durante la noche, en una cabina
provista de un bombillo de mximo 40 W. Esto
ayuda a mantener seco el entorno y reduce la
probabilidad de que se presente formacin de
hongos. Si se utiliza esta alternativa, veri ficar
que disponga de ori ficios que permitan la
ventilacin del interior.
Procedimien tos de limpie za

La limpi eza del microscopio es una de las rutinas ms impor tantes y debe considerarse un
procedimiento rutinario. Para realizar la rutina
de limpi eza se requiere lo siguiente:
Materiales:
1. Una pieza de tela limpi a, de textura similar a la de los pauelos.
2. Una botella de lquido para limpi eza de lentes. Se consigue en las pticas. Normalmente
no afecta los recubrimi entos de los lentes y
tampoco afecta los pegantes o cementos
utilizados para el mon taje de los mismos.
Entre los lquidos de limpi eza ms utilizados
se encuentran el etil ter, el xileno y la
gasolina blanca.
3. Papel para limpi eza de lentes. Se

consigue normalmente en las
pticas. Si no es posible conseguir
este material, se puede sustituir
con papel absorbente suave o con
algodn tipo medicinal. Tambin
puede utilizarse un trozo de seda
suave.
4. Una pieza de gamuza muy fina. Se
puede conseguir en peleteras.
5. Una pera de caucho para soplar
aire. Se puede fabricar en el
laboratorio un dispositivo con este
propsito, acoplando una pipeta
tipo Pasteur, con la pera de caucho.
6. Una cubierta plstica. Se utiliza para
proteger el microscopio del
ambiente externo cuando no est
en uso. Tambin podr a utilizarse
una bolsa de tela de textura similar
a la de los pauelos.
7. Un pincel suave de pelo de camello o
un pincel fino para pin tura. Lo impor
tante es que el pelo del pincel sea
natural, de longi - tud uni forme,
textura muy suave, est seco y libre
de grasa. En los almacenes que distribu yen artculos de fotografa, es
posible conseguir este accesorio .
Tambin es posible encontrar un
equivalente
en
tiendas
especializadas en
suministro
de
cosmticos.
8. Un paquete 250 g de material
desecante (silica gel). Este material
se utiliza para mantener controlada
la humedad en la caja de
almacenamiento del microscopio, si
la misma es hermtica. Este material
cambia de color cuando se
encuentra saturado de humedad,
aspecto que permi te detectar si
requiere ser sustituido o renovado.
Cuando est en buen estado, por lo
general, es de color azul; cuando
se encuentra saturado de humedad,
es de color rosado.
9. Bombillos y fusibles de repuesto. De
la clase instalada por el fabricante o
un equivalente de las mismas
caractersticas del origin al.
Precaucin: Algunos fabricantes recomiendan no utilizar alcoholes o acetonas, debido

a que pueden afectar disolver los cementos o pegantes utilizados para fijar los
lentes.
168
No ta: Todos los materiales requeridos para

efectuar la limpi eza deben mantenerse
limpio s y guardados en recipientes que los
pro tejan del entorno externo.
Microscopio
Limpieza de los elemen tos pticos

En un microscopio se encuentran dos tipos de
elementos pticos: los externos, que estn en
contacto con el ambiente que rodea el equipo
, y los internos, que se encuentran dentro del
cuerpo del microscopio las partes internas de
los objetivos, oculares, espejos, prismas, condensador, ilumin ador, etc. y que no tienen un
contacto directo con el ambiente que rodea el
equipo . Los procedimientos de limpi eza, aunque similares, difieren en cuanto al cuidado y
precauciones que deben preverse.
1. Los elementos p t icos externos de los
oculares, los objetivos, el condensador y
el ilumin ador se limpi an fro tando suavemente la superficie de los mismos, con el
pincel de pelo de camello. Est o remueve
las partculas de polvo que hayan podido
encon t rarse depositadas sobre la superf icie de los mismos. A con tinuacin, se
utiliza la pera para soplar chorros de aire sobre la superficie de los lentes y asegurar que los mismos quedan libr es de
polvo. Si el polvo se encuentra adherido
a la superficie p t ica, se utiliza la pieza
de tela limpi a y de forma muy suave se
efecta un pequeo movimiento circular, sin ejercer mayor presin sobre la superficie del lente. Con la pera se sopla
nuevamente la superficie del lente. Est o
retira las partculas adheridas. Podra
tambin utilizarse una pieza de gamuza
fina. En este caso se instala la pieza de
gamuza en la pun ta de un pequeo cilin
- dro de dimetro ligeramente in ferior al
del lente y, sin ejercer mayor presin, se
efecta una ro tacin de la misma sobre
la superficie del lente. Finalmente, con
la pera, se sopla aire sobre la superficie
del lente. Est o basta para limpi ar las superficies externas. La pieza de gamuza
puede humedecerse con agua destilada.
2. En condiciones adecuadas de instalacin,
las superficies interiores de los elementos
pticos no deben resultar afectadas por la
presencia de polvo o partculas. Si por alguna circunstancia aparecen partculas sobre la superficie interior de los lentes, se
15
necesita abrirlos para efectuar la limpi eza.

Nunca debe abrirse un ocular u objetivo, si
no se cuenta con un ambiente limpio en el
cual realizar el procedimiento de limpi eza.
Las superficies pticas interiores se limpi an
con el pincel de pelo de camello y con la
pera para soplar aire, siguiendo un procedimiento anlogo al anteriorm ente explicado; se recomienda no desmon tar por
ningn motivo los elementos pticos para no
alterar las tolerancias de ensamble del
fabricante. Si se desmon tan, sera necesario alinear nuevamente los elementos y esto solo es factible siguiendo instrucciones
precisas del fabricante. La limpi eza de los
objetivos se limi tar a conservar limpios los
lentes fron tal y posterior.
3. Si se detectan residuos de aceite de
inmersin en la superficie de los
lentes, este debe removerse
utilizando papel especial para limpi
eza de lentes o algodn tipo
medicinal.
A
continuacin,
la
superficie del lente debe limpi arse
con una solucin compuesta de 80 %
ter petroleum y 20 % 2-Propanol2.
Limpieza del cuerpo del microscopio

1. El cuerpo del microscopio puede ser limpiado con una solucin jabonosa que resulta til para remover la suciedad externa. La solucin jabonosa corta la grasa y el
aceite. La misma puede aplicarse con un
cepillo pequeo. Despus de que la grasa
y la suciedad hayan sido removidas, debe
limpi arse el cuerpo del microscopio con
una solucin 50/50 de agua destilada y
etanol al 95 %.
Nota: Esta solucin no es adecuada para

limpi ar las superficies pticas.
2. Las partes mecnicas, integradas por los

mecanismos de ajuste macro/micromtrico
ajuste grueso y fino, el mecanismo de
ajuste del condensador y los mecanismos
Manual of Techniqu es for a Health Laboratory, World Health Organization, 53-66, Geneva, 2nd. Edition, 2003.
169
del carro por tamuestras o plataforma, deben ser lubricados de forma peridica con
aceite fino de mquin a, para permi tir su
desplazamiento suave.
Mantenimien to del microscopio

Entre las rutinas ms impor tantes para mantener un microscopio en condiciones adecuadas
de operacin, se encuentran las siguientes:
1. Verificar el ajuste de la plataforma mecnica. La misma debe desplazarse suavemente, en todas las direcciones (X-Y) y debe mantener la posicin que selecciona o
define el microscopista.
2. Comprob ar el ajuste del mecanismo de enfoque. El enfoque que selecciona el
microscopista debe mantenerse. No debe
variar la altura
asignada por el
microscopista.
los barnices de recubrimi ento de los elementos pticos podr an deteriorarse. Limpiar estas superficies con un pincel de pelo de camello o una pera para soplar aire.
5. Evitar dejar el microscopio sin los
oculares. Colocar los tapones si
requiere retirar los oculares para
evitar el ingreso de polvo o
partculas a la cabeza binocular.
6. No dejar el microscopio guardado
en una caja, en ambientes
hmedos.
7. Evitar presionar los objetivos contra
las "Placas", puesto que se podr an
producir daos en la laminill a o el
lente fron tal del objetivo. Enfocar
el microscopio de forma lenta y
cuidadosa.
8. Mantener limpi a la plataforma o
carro por tamuestras.
3. Verificar el funcionamiento del diafragma.

4. Limpiar
todos
mecnicos.
los
compon
entes
5. Lubricar el microscopio de acuerdo con las

recomendaciones del fabricante.
6. Confirmar el ajuste de la ua fijalminas.
7. Verificar el alineamiento ptico.
9. No desensamblar los compon entes

pticos, pues se pueden producir
desalinea- mientos. Las superficies
pticas deben limpiarse en
primera instancia con un pincel de
pelo de camello; a continuacin,
con gamuza o papel especial para
lentes.
10.
Utilizar las dos manos para

levantar el microscopio. Con una
mano sostenerlo por el brazo, y con
la otra sostener su base.
Precauciones
1. Evitar limpi ar los compon entes pticos con
etanol, debido a que estos lquidos afectan
los elementos pticos. Tampoco limpi ar la
base o la plataforma con xileno o acetona.
2. No utilizar papel ordin ario para limpi ar los
lentes, dado que en sus compon entes
constituti- vos podra haber elementos de
alta dureza que podran rayar la superficie
de los lentes.
3. No tocar los lentes con los dedos, para evitar las huellas digi tales.
4. No limpi ar el interior de los lentes de oculares u objetivos con telas o papel, ya que
11. Evitar tocar con los dedos la

superficie de la bombill a cuando se
la cambia. Las huellas digi tales
disminuyen la intensidad lumnica.
12.Verificar
que
el
voltaje
de
alimentacin es el correcto para
prolong ar la vida til de la bombill
a; siempre que sea posible, utilizar
la menor intensidad luminosa que
resulte til para realizar las
observaciones.
13.Conectar el microscopio a travs de
un estabili zador de voltaje, si el
voltaje de alimentacin no es
estable.
Cuidados especiales en climas clidos
170
Tanto en climas clidos como en secos el principal probl ema que afecta al microscopio es el
polvo, ya que afecta las partes mecnicas y a
Microscopio
los sistemas pticos. Dicho probl ema se

puede controlar mediante los siguientes
procesos:
1. Proteger siempre el microscopio con una
cubierta plstica, cuando no est en uso.
2. Limpiar el microscopio con aire, utilizando
una pera de caucho, al finalizar el turno
laboral.
3. Limpiar los lentes con un pincel de pelo de
camello o con un cepillo de aire. Si el polvo permanece unido a la superficie ptica,
intentar removerlo con papel especial para lentes, pero frotando la superficie de
forma muy suave, para evitar rayones.
Cuidados especiales para climas

hmedos
En climas hmedos, por lo general calurosos,
los microscopios suelen ser afectados por
hongos, que se forman principalmente sobre la
superficie de los lentes, en las ranuras de los
tornillo s y bajo la pin tura pro tectora. En caso
de no pro tegerse el equipo de forma
adecuada, podra quedar inservible en muy
corto plazo. Los cuidados que se detallan a
continuacin ayudan a prevenir la formacin de
hongos:
1. Almacenar el microscopio durante la noche en una caja dotada de un bombillo
elctrico que no exceda los 40 W de potencia. El bombillo debe estar instalado en la
parte superior de la caja, cerca de la cabeza binocular y debe estar encendido durante toda la noche. La caja debe disponer
de ori ficios para permi tir la circulacin del
aire. Se debe evitar que la temperatura
del interior de la caja no exceda los 50 C,
para que no se afecten las propi edades
de los lubricantes del microscopio.
2. Si no es posible utilizar la caja con el bombillo elctrico, como alternativa se puede
utilizar un material desecante como silica
gel o arroz. Cuando use el agente desecante, veri ficar que el microscopio est guardado en una caja o pro tegido con una cubierta pro tectora que puede ser fabricada
en tela de caractersticas similares a la de
los pauelos. Veri f icar que el agen te
15
desecan te est en buenas condi cion es;

caso contrario, sustituirlo o regenerarlo.
3. Limpiar el microscopio de forma
peridica. Usar guantes de ltex si
tiene que tocar los lentes. Esto evita
que las huellas digi tales de adhieran
a la superficie y disminu ye los riesgos
o probabilid ad de crecimiento de
hongos donde quedaron impresas las
huellas digi tales.
4. Si ningun a de las alternativas
mencionadas es factible, ubicar el
microscopio en un lugar que tenga
buena circulacin de aire. Cuando el
microscopio no est en uso, podra
colocarse bajo la luz solar de forma
directa, por perodos cortos de
tiempo. Esto reduce la humedad y el
riesgo de que crez- can hongos en las
superficies del equipo .
5. El aire acondicionado con trol de
temperatura y humedad evita signi
ficativamente el crecimiento de los
hongos en los microscopios. Sin
embargo, esta no es una opcin que
disponga una gran cantidad
de
laboratorios. Si el servicio de aire
acondicionado no es continuo en el
rea donde se encuentra instalado el
microscopio,
se
deben
tomar
precauciones
para
controlar
la
humedad.
Remocin de la pelcula de hongos

1. Revisar y limpi ar con frecuencia el microscopio, utilizando los procedimientos mencionados en el presente captulo. Controlar las condiciones de humedad donde se
usa y almacena el microscopio. Si se mantiene una ventilacin adecuada, disminu
ye la posibilid ad de que se inicie la
formacin de hongos en el microscopio.
2. Si se detecta un crecimiento de hongos, utilizar una mota de algodn humedecida en
una solucin limpi adora de hongos que
normalmente es ter o xilol. Frotar suavemente siguiendo un movimiento circular, a
lo largo de toda la superficie del lente.
Tambin puede realizar un movimiento oscilatorio, hacia adelante y hacia atrs o izquierda-derecha-izquierda, ejerciendo sobre la superficie del lente una presin muy
171
moderada. Si es necesario, repetir el procedimiento con una nueva mota de algodn .

3. Cuando se termine la remocin de la pelcula de hongos, limpi ar con una mota de
algodn limpio .
Nota: Los hongos solo pueden ser removidos cuando su crecimiento se limi ta a la
superficie de los lentes. Si dicho crecimiento no se atiende a tiempo, el hongo
puede penetrar el cuerpo del lente. Si este
es el caso, el lente se pierde, all ya es
imposible removerlo.
Atencin: Si el microscopio se utiliza con

elementos potencialmente contaminados,
debe ser limpi ado con mayor frecuencia.
Cuidado del microscopio
para control de humedad, colocar all el microscopio, encender la lmpara y cerrar la

puerta de la misma.
Frecuencia: Cada mes

1. Remover las partculas de polvo que pueda
tener el cuerpo del microscopio. Usar una
pieza de tela humedecida con agua
destilada.
2. Retirar las partculas de polvo de los oculares, objetivos y del condensador. Utilizar la
pera para soplar aire. A continuacin, limpiar la superficie de los lentes con solucin
limpi adora de lentes. No aplicar directamente esta solucin a los lentes, sino en
papel para limpi ar lentes y luego frotar
suavemente la superficie de los mismos
con el papel mencionado.
3. Retirar el mecanismo de sujecin de las
placas por tamuestras; limpi ar cuidadosamente y reinstalar.
Frecuencia: Diaria (despus del uso)

1. Limpiar el aceite de inmersin del objetivo
100X. Usar papel para limpi eza de lentes
o en su defecto algodn tipo medicinal.
2. Limpiar el carro por tamuestras.
3. Limpiar el condensador.
4. Colocar el restato de control de intensidad luminosa en la posicin mnima y luego apagar completamente el sistema de
ilumin acin.
5. Cubrir el microscopio con una funda pro
tectora plstica o de tela. Asegurar que
queda ubicado en un
lugar bien
ventilado, en el cual estn controlados la
humedad y la temperatura. Si se dispone
de caja de almacenamiento ventilada
dotada con bombillo
Como complemento a las rutinas mensuales de

mantenimiento se recomienda lo siguiente:
1. Efectuar una inspeccin visual general del
microscopio. Verificar que cada compon ente se encuentre en buen estado, est limpio y est bien ajustado mecnicamente.
2. Verificar que en el lugar de instalacin se
conserven las condiciones de buena ventilacin, control de humedad y temperatura.
3. Comprob ar la calidad del sistema elctrico
que alimenta el microscopio. Verificar la
integridad de los conectores, los fusibles y
la lmpara incandescente.
172
Microscopio
15
Tabla para la solucin de problemas Sistema de

ilumina cin
PROBLEMA
El sistemade iluminacin no
enciende.
El sistema de iluminacin no
produce luz uniforme.
CAUSA PROBABLE
El cable de alimentacin elctrica
est desconectado.
Conectar el cable de alimentacin

elctrica.
El fusible de proteccin est

quemado.
El bombillo est quemado.
Reemplazar el fusible de proteccin.
El
interruptordeencendidoestdefectuoso.
El sistema elctrico presenta fallas
de voltaje.
El conector del microscopio a la
toma de pared est flojo.
El bombillo est mal instalado y no
hace buen contacto.
La muestra no es iluminada de
forma uniforme.
REMEDIO
El bombillo presenta metalizadoo

puntos negros sobre su
superficie.
La
fuente de luz no est
Reemplazar el bombillo de iluminacin.

Ase- gurar que el mismo quede bien
alineado.
Reemplazar
el interruptor de
encendido.
Revisar y reparar el sistema elctrico.
Conec- tar el microscopio mediante un
estabilizador de voltaje.
Conectar bien el enchufe a la toma. Si
alguno de los elementos est defectuoso,
sustituirlo. el bombillo.
Reinstalar
Sustituir el bombillo de iluminacin.
Rectificar el alineamiento del condensador.
centrada.
El
objetivonoseencuentrabiencentrado.
Girar lentamente el revlver portaobjetivos

hasta que suene el trinquete de ajuste.
El iris del diafragmaest casi

cerrado.
Abrir el iris del diafragmahasta que la

iluminacin sea adecuada.
El condensador est muy alejado

(muy bajo).
Acercar el condensador.
Los lentes del condensador

presentan polvo o crecimiento de
hongos.
Limpiar el condensador. Retirar el polvo

con pincel. Remover el hongo con
solucin para limpiezade lentes.
Hay excesivo contraste en la

imagen.
El iris del diafragma del

condenador est casi cerrado.
Abrir un poco el iris del diafragma.
La imagen espoco clara y con

brillo.
El iris del diafragma del

condensador est muy abierto.
Cerrar un poco el iris del diafragma.
La muestra es iluminada
defectuosa- mente.
Sistema mecnico
PROBLEMA
La plataforma portamuestras no
man- tienesu posicin y la
imagen
sedesenfoca
continuamente.
La plataforma portamuestras no
puede ser levantadaa su lmite
superior.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
La tensin de ajuste de la
plataforma portamuestras est floja.
Ajustar el mecanismo de tensin de la

plataforma.
La plataforma mecnica est

bloqueada muy bajo.
Aflojar el mecanismo de bloqueo de la

plataforma. Ajustar a la altura deseada.
Reajustar el mecanismo de bloqueo.
173
Sistema ptico
PROBLEMA
Mala calidadde la imagen en el
objetivo 40X.
CAUSA PROBABLE
Los lentespresentan hongos.
Lentesdaados.
REMEDIO
Remover los hongos utilizando una
solucin
limpiadora.
Seguir
las
instrucciones del fabricante del
dispositivo.
Revisar
el objetivo. Verificar si los lentes
presentan rayones, picaduras
muescas. Reem- plazar el objetivo.
El objetivode inmersin
nobrindaim- genesclaras.
Polvoosuciedadvisibleen el
campode visin.
Lentes accidentalmente untados

con aceite de inmersin.
Remover cuidadosamente el aceite con

papel para limpiezade lentes.
El objetivoest siendousadosin
aceite de inmersin.
Colocar aceite de inmersin sobre la

placa.
El aceite de inmersinesde bajo

ndice de refraccin.
Utilizar aceite de buena calidad.
El aceite de inmersin ha invadido

el interior del objetivo.
Limpiar los lentescon papel especial

para limpiar lentes. Si la
limpiezaexterna no es solucin, enviar
el objetivo a un laboratorio especializado para su reparacin. (Desmonte
de lentes, limpieza, cambio de sellos,
cementarealineacin
y ensamble).
Retirar
lascin,
partculas
de polvo
con un
Polvosobreel lentecolector de la
fuente de iluminacin.
pincel de pelo de camello.
Polvo sobre el lente superior del

condensador.
Retirar las partculas de polvo con un

Polvo en el ocular.
Retirar las partculas de polvo con un

DEFINICIONES BSICAS
Acetona. Lquido incoloro , oloroso, miscible
en agua de excelente capacidad, disolvente de
gran nmero de sustancias orgnicas. Pun- to
de ebullicin: 56 C. Frmul a qumica:
apertura numrica permi ten que un mayor

nmero de rayos oblicuos de luz pase por los
lentes fron tales del objetivo, produciendo una
resolucin ms alta de la imagen. Matemticamente se expresa as:
NA = nSen()
CH3 - CO - CH3
Aper tura numrica. Medida de la habilid ad
que tiene un objetivo para concentrar la luz y
distinguir pequeos detalles de un objeto.
Normalmente, el valor de la apertura numrica se encuentra grabado en el costado del
cuerpo del objetivo. Mayores valores de
dond e:
NA = apertura numrica
n = ndice de refraccin (n = 1 aire; n = 1,52
aceite de inmersin)
= ngulo de apertura. A mayor ngulo, mayor apertura numrica, mayor aumento.
174
Microscopio
15
3
Su densidad es 0,806
g/cm
. Su pun to Expresin
de ebullicin es de 78,3 C. Frmul a qumica:
Apertura
numrica
matemtica
NA = n x Sen
0,27= 1 x
Sen(16)
Magnificacin
aprox. 10X
NA = n x Sen
0,42= 1 x
Sen(25)
Magnificacin
aprox. 20X
NA = n x Sen
0,68=1 x
Sen(43)
Magnificacin
aprox. 40X
Campo de visin. Dimetro del campo de

visin en milmetros, medido en el plano intermedio de la imagen. El dimetro del campo
en un microscopio ptico se expresa por el
nmero del campo de visin, o sencillamente
como nmero de campo.
Dia frag ma. Dispositivo que controla el flujo
de luz a travs del microscopio. Hay diafragmas de dos tipos: el diafragma de apertura que
ajusta el ngulo de apertura en el microscopio, y el diafragma de campo que regula el tamao de la imagen del instrumento. El
propsito de los diafragmas en los microscopios pticos es prevenir que lleguen, a los
planos de formacin de imgenes, rayos de luz
con aberraciones severas y asegurar una
adecuada distribucin de luz, tanto en la
muestra como en el espacio de la imagen.
Etanol . Lquido incoloro de olor agradable y
sabor quemante. Se le conoce tambin como
alcohol etlico. Disolvente de amplio uso industrial. Se usa en la industria farmacutica.
CH3 - CH2OH
ter. Sustancia lquida derivada de los alcoholes por elimin acin de una molcula de
agua, entre dos molculas de alcohol. Es un
disolvente excelente, poco solubl e en agua,
muy voltil e inflamable. Punto de ebullicin:
35 C. Frmul a qumica:
CH3 - CH2 - O - CH2 - CH3
Foco. Lugar dond e, como resultado de la refraccin de la luz, se concentran los rayos que
atraviesan un lente. Si los rayos de luz
convergen en un pun to, el lente es positivo
y el foco real; si los rayos de luz divergen, el
lente es negativo y el foco vir tual.
ndice de refraccin. Valor que se calcula
comparando la velocidad de la luz en el vaco, con la velocidad de la luz en un segundo
medio de mayor densidad. Se representa normalmente por la letra [n] o [n], en la li teratura tcnica o en las ecuaciones matemticas.
Ocular . Conjun to de lentes diseado para
proyectar una imagen real o vir tual, dependiendo de las relaciones que existan con
otros conjun tos de lentes del microscopio.
Como su nombr e lo indica, a travs del mismo, el microscopista observa la imagen.
Profundidad de campo. Grosor del espcimen o muestra que es razonablemente claro a
un determinado nivel de enfoque.
Profundidad de foco. Rango sobre el cual
el plano de la imagen puede ser movido,
manteniendo una claridad estable.
Rango til de magni f icacin. [RUM] de una
combin acin objetivo/ocular se define por la
apertura numrica del sistema. Para percibir
los detalles de una imagen, se requiere de
una magni f icacin mnima, la cual t
radicionalmente est compr endid a entre 500 y
1 000 veces la apertura numrica [AN] del
objetivo. {Aceptables desde RUM= (500) x [AN]
hasta (1 000) x [AN]}.
175
Resolucin. Habilid ad para distinguir los detalles finos de una placa o muestra particular.
Entre los factores que ms influyen para lograr
una buena resolucin, se encuentran la apertura numrica, la clase de muestra, la ilumin acin, la correccin de aberraciones y el tipo de
contraste utilizado. Es una de las caractersticas ms impor tantes de un microscopio.
Revlver por taobje tivos. Dispositivo mecnico diseado para mon tar los objetivos y
permi tir su intercambio rpido, a travs de un
movimiento rotatorio. Su capacidad depende
del tipo de microscopio. En general vara
entre tres y cinco objetivos.
Xileno . Ismero del etilbenceno que se obtiene del alqui trn de hull a. Se emplea como
disolvente y tambin en la preparacin de colorantes y lacas. Punto de ebullicin: 138 C /
CH3
CH3
C6H4
Propanol . Se conoce tambin como alcohol

isoprop lico. Se prepara por hidratacin del
propeno. Se emplea como disolvente y en la
preparacin de acetona. Punto de ebullicin:
CH3 - CHOH - CH3
Bibliogra fa
Devore, G., Muoz, E., Qumica Orgnica, Mxico D. F., Publicaciones Cultural S.A., 1969.
Manual of Basic Techniqu es for a Health Laboratory, World Health Organization, Geneve, 2nd. Edi
Microscopio Lavobal 2, Instrucciones para el uso, Boletn N 30-G060-4, Carl ZeissJena, DDR.
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Venegas, J., Texto de Fsica. Fono-foto y electrolog a, Cali, Colombi a, Editorial Norma. Nikon: ( as/
Definiciones y procesos:
(
Historia, Galileo:
(htt p://www .tw ingro ves.district96.k12.il.us/Renaissance/University/Inventions/Microscope)
176
CAPTULO 16
Pipetas
Cdigo (s)
ECRI
15-166

Pipetas
PIPETAS
Las pipetas son dispositivos que se utilizan para medir o transvasar pequeos volmenes de
lquido de un recipiente a otro, con gran exactitud; se caracterizan por carecer de un depsito. Las pipetas tienen gran diversidad de modelos. Inicialmente, se fabricaron en vidrio ; en
la actualidad, existe una amplia gama de opciones. Se destacan las pipetas de volumen fijo
y las de volumen variable, las cuales en general disponen de controles mecnicos. Tambin
se han introducido recientemente en el mercado pipetas que disponen de controles de tipo
electrnico. En el presente captulo se tratan
los aspectos referentes al mantenimiento y calibracin1 de las pipetas mecnicas, las cuales
se conocen como pipetas tipo Gilson.
FOTOGRAFA Y ESQUEMA DE PIPETAS
Esquema pipeta monocanal
PROPSITO DE LA PIPETA
Las pipetas son dispositivos de amplia utilizacin en los laboratorios clnicos y de investigacin. Se utilizan para suministrar cantidades muy exactas de fluidos.
PRINCIPIOS DE OPERACIN DE LA PIPETA

La pipeta mecnica o de pistn funciona generalmente transmitiendo la fuerza que un
operador, de forma manual, ejerce sobre un
mbolo que se encuentra unido a un pistn
mediante un eje que lo desplaza a lo largo de
un cilindro de longi tud fija, forzando un volumen predefinido de lquido fuera de la pipeta.
Fotografa pipeta multicanal
La calibracin debe ser realizada exclusivamente por personal capacitado, siguiendo estndares internacionales como
el BS ES ISO 8655-6:2002. Los instrumentos de trabajo deben estar debidamente calibrados por instituciones nacionales
o internacionales, responsables de veri ficar el cumplimi ento de los estndares internacionales de medicin.
177
Las pipetas a pistn en general son de dos tipos: las de volumen fijo que dispensan un volumen predeterminado de lquido , el cual es
conocido como volumen nominal [Vn], y las de
volumen variable, las cuales permi ten ajustar
el volumen a ser dispensado dentro de un
rango determinado en las especificaciones de
la pipeta. La variacin en el volumen se logra
modi ficando la longi tud de la carrera del pistn dentro del mbolo . En estas, el volumen
nomin al es el lmite superior del rango de volumen de la pipeta, de acuerdo con las especificaciones dadas por el fabricante.
Cada uno de los tipos mencionados pipetas

de volumen fijo y pipetas de volumen variable puede ser subdividido en dos subtipos: A
y B. Las pipetas del subtipo A se denomin an
pipetas de desplazamiento por aire, debido a
que existe un volumen de aire entre la cabeza del pistn y el lquido en el cilindro . (Ver
pipeta N 1). A las pipetas del subtipo B se les
denomin a pipetas de desplazamiento positivo o de desplazamiento directo, debido a
que el pistn se encuentra en contacto directo con el lquido . (Ver pipeta N 2). El esquema que se incluye a continuacin permi te diferenciar los tipos de pipetas mencionados.
Ilustracin 44: Clases de pipetas

Tabla de convencin de color en
Las pipetas de desplazamiento de aire tienen las pipe tas
la ventaja de presentar menos riesgos de contaminacin cuando se usan continuamente,
Volumen dispensado por
Color caracterstico
pero no son tan exactas como las de desplala pipeta. Rango en
utilizado para
zamiento positivo, cuando se trabaja con vomicrolitros l
identificarla
lmenes muy pequeos de lquido , debido a la
0,1-2,5 l
Negro
compresibilid ad del aire. Todas las pipetas de
0,5-10 l
Gris
pistn disponen de pun tas desechables, para
2,0-20 l
Gris/Amarillo
minimi zar los riesgos de contaminacin; se
recomienda utilizar siempre las pun tas su10-100l
Amarillo
ministradas por el fabricante, para garantizar el
50-200l
Amarillo
ajuste de las mismas al cuerpo de la pipeta, as
100-1 000l
Azul
como los volmenes a dispensar. Para facili
tar la identificacin de estos volmenes, los
500-2 500l
Rojo
fabricantes han adop tado un cdigo de color
que facili ta la identificacin de los volmenes
a dispensar. La tabla que se incluye a continuacin muestra la convencin de color
mencionada.
178
Pipetas
16
Recomendaciones generale s
SERVICIOS
REQUERIDOS
Para utilizar una pipeta se requiere que el laboratorio brind e unas condiciones adecuadas
de comodid ad, limpi eza e ilumin acin. Las
condiciones generales son las siguientes:
1. Verificar que la temperatura del ambiente
donde se utiliza sea estable, con un rango
de variacin de 0,5 C, que se encuentre
entre los 15 C y los 30 C, siendo ptima
una temperatura de 20 C.
2. Confirmar que la humedad relativa del
ambiente sea superior al 50 %. Las pipetas
y muestras o materiales con los que se trabaja deben estar estabili zados a las condiciones del laboratorio, por lo que se recomienda que se encuentren en el mismo
con dos o tres horas de anticipacin al momento en que se realiza el trabajo.
3. Evitar trabajar con las pipetas bajo la influencia de la luz solar directa.
4. Utilizar los elementos de pro teccin adecuados, si se trabaja con materiales txicos
o que conll even riesgo biolgi co.
USO
DE
LA
PIPETA
Para obtener resultados exactos, precisos y

sobre todo confiables, es necesario que los
operadores de pipetas conozcan en detalle los
procedimientos relacionados con su utilizacin. Esto se logra mediante capacitacin y
seguimi ento detallado del uso de las pipetas.
Se presentan a continuacin lineamientos generales para el uso adecuado de los dispositivos en mencin.
Adver tencia: Antes de utilizar una pipeta,
veri ficar que la misma se encuentra debidamente calibrada y que es adecuada
para realizar el trabajo que se requiere
desarroll ar.
2
1. Verificar que la pipeta se encuentra en posicin vertical, cuando se requiera aspirar

un lquido . La posicin vertical garantiza
que no se presente incertidumbr e por variaciones mnimas en la cabeza del lquido
.
2. Confirmar la recomendacin que efecta
el fabricante de la pipeta con relacin a la
pro fundid ad mnima de inmersin de la
pun ta de la pipeta, cuando se requiere aspirar lquidos. Las pro fundid ades varan
de acuerdo con el tipo y capacidad de la
pipeta. Una gua general se muestra en
la siguiente tabla2:
Tabla de profundidad de inmersin de

la punta de la pipe ta segn volumen
Volumen de la
pipeta (l)
1-100
Profundidad de la
inmersin
(mm)
2-3
100-1 000
2-4
1 000-5
000
2-5
3. Humedecer previamente las pun tas de las

pipetas que funcionan por desplazamiento de aire para mejorar la exactitud. Para
lograr la humidi ficacin mencionada, se
opera varias veces la pipeta con la solucin
de trabajo, dispensando el contenido en el
recipiente de desperdicio. Esto reduce la
posibilid ad de que se aspiren burbuj as de
aire, cuando se aspiran lquidos de densidad elevada o lquidos con propi edades hidro fbicas. El proceso mencionado permite homog eneizar la humedad en la cmara de aire de la pipeta volumen de aire
entre la cabeza del pistn y la superficie
del lquido. No es necesaria la prehumidi ficacin en pipetas que dispensan volm enes inferiores a 10 l. Tampoco es necesaria la humidi ficacin previa en las pipetas
a pistn de desplazamiento positivo.
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipette, UK, National Physical Laboratory, Tedding ton,
Middlesex, 2004, pg. 6. (www.npl.co.uk)
179
4. Remover, despus de llenar la pipeta, cualquier gota que se adhiera a la pun ta de la

pipeta. El procedimiento que se sigue consiste en tocar, con la pun ta de la pipeta,
suavemente la pared del recipiente que
contiene el lquido aspirado. Podra requerirse un material absorbente, teniendo cuidado de no tocar el ori ficio de la pun ta de
la pipeta y tomando las precauciones del
caso, si el material presenta algn tipo de
contaminacin.
5. Dispensar el lquido contenido en la pipeta tocando con la pun ta de esta la pared
del recipiente receptor. La pun ta de la pipeta debe formar un ngulo con la pared
del recipiente que vara entre los 30 y los

45, y estar ubicada entre 8 y 10 mm sobre
la superficie del lquido contenido.
Mtodo convencional de uso

Se describen a continuacin las actividades generales requeridas para utilizar una pipeta mecnica por desplazamiento de aire. El operador
debe tener en cuenta las recomendaciones especficas del fabricante, observacin que tambin debe acatarse cuando se utilicen pipetas
controladas electrnicamente. El esquema que
se incluye muestra la descripcin de los procesos que se explican a continuacin.
Ilustracin 45: Fases del uso de la pipeta
1. Colocar una pun ta nueva, ajustada a las

especificaciones de la pipeta, en el por tapun tas de la pipeta. Evitar contaminar la
pun ta con otras sustancias. Verificar que la
misma queda bien ajustada.
recomendacin que suministre el fabricante. Confirmar que la pipeta se encuentra en

posicin vertical. Este proceso corresponde al mostrado en la posicin 1B (primera a la izquierda).
2. Presionar el mbolo suavemente hasta el

primer tope. Hasta este momento la pun
ta de la pipeta no debe estar sumergida
en el lquido .
4. Liberar el mbolo de forma suave

para que la pipeta absorba el
lquido (posicin 2A). Verificar que el
mbolo se desplace hasta la posicin
del lmite superior. Espe- rar al
menos dos segundos, antes de
retirar la pun ta de la pipeta del
lquido .
3. Sumergir la pun ta de la pipeta en el lquido. Verificar la pro fundid ad recomendada

en la tabla incluida en el numeral 2 de las
recomendaciones generales o utilizar la
5. Colocar la punta de la pipeta

contra la pared del recipiente en
el cual ser dispensado
180
Pipetas
el lquido. Verificar que el ngulo formado

entre la pun ta de la pipeta y la pared del
elemento receptor est entre los 30 y los
45. Si el recipiente receptor ya tiene algn
nivel de lquido , evitar que la pun ta de la
pipeta quede sumergida en el mismo
(posicin 3A).
6. Dispensar el contenido de la pipeta presionando el mbolo de forma suave pero
firme, hasta el primer tope (posicin 4B).
Mantener en todo momento el contacto
entre la pun ta de la pipeta y la pared del
recipiente receptor. Frotar la pun ta de la
pipeta contra la pared de 8 a 10 mm,
para asegurar que no quede ningun a
gota de lquido pegado a la punta de la
pipeta.
7. Presionar el mbolo suavemente hasta que
alcance el segundo tope en la carrera del
pistn (posicin 5C). Esto expulsa
cualquier fraccin de lquido que hubiera
podido quedar en la pun ta de la pipeta, al
forzar el aire de la cmara a travs del ori
ficio de la pun ta de la pipeta. Mantener el
mbolo presionado en el segundo tope,
mientras se retira la pipeta del recipiente
receptor. Una vez retirada la pipeta, liberar
suavemente el mbolo hasta la posicin
lmite superior.
8. Desechar la pun ta de la pipeta. Para esto
accionar el botn del mecanismo de
expulsin (posicin 6).
Nota: Si se utiliza una pipeta de volumen
variable, primero se debe seleccionar el
volumen que necesita ser dispensado. Para
esto deben seguirse las instrucciones que al
respecto indiqu e el fabricante.
Normalmente, los controles de volumen se
encuentran ubicados en la parte superior
de la pipeta y es necesario que el operador
aprenda a entender y diferenciar las
escalas.
Se sealan a continuacin los lineamientos
generales de las rutinas de mantenimiento
requeridas por las pipetas mecnicas. Se
deben
16
realizar rutinas especficas de los diversos modelos, de acuerdo con las instrucciones de los
manuales suministrados por los fabricantes.
Inspeccin
Frecuencia: Diaria
Las pipetas son dispositivos que requieren inspecciones frecuentes para detectar desgastes
anormales o daos y/o verificar que las mismas
se encuentran en buenas condiciones de
funcionamiento. La inspeccin debe cubrir
lossiguientes aspectos:
1. Verificar la integridad y ajuste de los
mecanismos. Los mismos deben poder
moverse de forma suave. El pistn debe
desplazarse suavemente.
2. Confirmar que el por tapun tas no presente
distorsiones o marcas de desgaste, dado que
es esencial para la exactitud de las medidas.
Verificar el ajuste de las pun tas.
3. Colocar una pun ta y llenarla con agua destilada. La pipeta no debe presentar ningn tipo de fuga.
Limpie za y descontaminacin
1. Verificar cada da que la pipeta se encuentra
limpi a, en sus superficies interiores y
exteriores. Si se detecta suciedad, la misma
debe limpiarse utilizando un solvente
adecuado o una solucin jabonosa. Revisar
las recomendaciones del fabricante
relativas a la compatibili - dad que tienen los
materiales con que est fabricada la pipeta
para seleccionar aquellos solventes que no
produ zcan efectos dainos a la integridad
de los compon entes.
2. Esterilizar
la
pipeta
siguiendo
las
indicaciones de los fabricantes. Algunas
pipetas se pueden esterilizar en un
autoclave, utilizando un ciclo de 121 C y un
tiempo estimado de 20 minu tos; algunas
requieren ser desensambla- das para que el
vapor est en contacto con
Las pipetas que se pueden esterilizar con vapor disponen de una marca que permite identificarlas; el fabricante propor ciona los requerimientos de desensamble.
181
sus componentes internos3. El desensamble

consiste en liberar o desenroscar el cuerpo
central de la pipeta, siguiendo los procedimientos indicados por los fabricantes. Para
desensamblar o ensamblar algunas pipetas,
se requiere utilizar un conjun to de
herramientas
llaves que normalmente propor cionan los
fabricantes, jun to con la pipeta en el
momen- to de la venta. La pipeta solo debe
ensamblar- se de nuevo, cuando el ciclo de
esterilizacin
haya
terminado
y
la
temperatura se haya esta- bilizado con la del
ambiente. En ese momento se verifica que
los compon entesse encuentren secos y se
procede al ensamble. Algunos fabricantes
recomiendan esterilizar la pipeta, utilizando
una solucin de isoprop anol al 60 % y, a
continuacin, lavar los compon entes con
agua destilada, secar y ensamblar.
3. Si una pipeta ha sido utilizada con sustancias
peligrosas para la salud, es responsabilid ad
del usuario asegurar que est completamente descontaminada, antes de que la misma
sea utilizada en otros procedimientos o sea
retirada del laboratorio. Es conveniente diligenciar un repor te que indiqu e su marca,
modelo, nmero de serie, sustancias con las
que trabaj y sustancias o procedimientos
con las que fue tratada o limpiada.
Si los compon entes interiores fueron contaminados accidentalmente, todas las superficies debern ser limpiadas con un detergente y luego con agua destilada. Si los anillos o
sellos en O requieren ser cambiados,
debern ser sustituidos por repuestos de las
mismas caractersticas de los origin ales.
Debe tenerse en cuenta que este tipo de
sellos vara dependiendo de la marca, tipo
y modelo.
3. Lubricar el mbolo y el pistn con
grasa siliconada especial4 para
pipetas. La grasa mencionada ha
sido especialmente desarrollada para
ser utilizada en las pipetas. Utilizar
siempre la recomendada por el
fabricante. Retirar cualquier exceso de
lubricante con un papel absorbente.
4. Ensamblar siguiendo un
inverso
al
utilizado
desensamblar.
proceso
para
Mantenimien to
Frecuencia: Semestral
Una pipeta que se utiliza diariamente debe ser
sometida a los siguientes procedimientos para
garantizar su correcto funcionamiento:
1. Desensamblar la pipeta. Seguir el procedimiento que para el efecto describe el
fabricante, en el manual de uso y
mantenimiento
de
la
pipeta.
(El
procedimiento vara dependiendo de la
marca, tipo y modelo). Normalmente, se
desensambla el cuerpo principal de la pipeta
del
sistema
eyector
de
pun
tas,
desenroscando el cuerpo de la pipeta del
cilindro .
2. Limpiar los anillos en O, el mbolo y las paredes interiores del cilindro antes de
lubricar.
Ilustracin 46: Desensamble de una

pipeta5
La grasa siliconada existe en diversas especificaciones. Por lo tanto, debe utilizarse la recomendada por el fabricante de las pipetas.
Despiece basado en el Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Single Channel, Variable models, Rev. 2 /
121199.
182
Pipetas
Conceptos de calibra cin de pipe tas

La calibracin de las pipetas se realiza utilizando
procedimientos completamente estandarizados
y cuya eleccin depende principalmente del
volumen de las muestras obtenidas para
efectuar la calibracin. Mientras ms pequeo
sea el volumen, ms exigente y costoso el
proceso de calibracin. En este captulo se
realiza una breve descripcin del proceso
gravimtrico, el cual se utiliza con pipetas que
dispensan volmenes comprendidos entre los 20
l (microli tros) y 1 ml (milili tro).
Elemen tos y equipo s6 requerido s

1. Una balanza analtica
2. Un termmetro de tipo electrnico con
resolucin de 0,1 C o mejor, capaz de
medir en el rango de temperatura en el
cual se realiza el ensayo, cuya sonda pueda
ser sumergida en el lquido bajo anlisis.
3. Un higrm etro con una incertidumbr e estndar de 10 % o mejor
4. Un barmetro con una incertidumbr e
estndar de 0,5 kPa o mejor
5. Un cronmetro
6. Micropipetas de varios volmenes
7. Puntas desechables de varios volmenes
8. Viales de fondo plano
9. Agua bi o tridestilada y desgasificada
16
por la densidad del agua). En la prctica se realiza un grupo de mediciones, a las que se
aplican correcciones que compensen cualquier
variacin que las aparten de las condiciones
estndar de temperatura y presin atmosfrica
y cualquier evaporacin que resulte impor tante
durante el tiempo que duren los ensayos. Este
tipo de ensayo permite las siguientes
actividades:
1. Comparar diversos tipos de pipetas entre s
para detectar si hay diferencias entre ellas.
2. Controlar la precisin y la exactitud de una
pipeta.
3. Controlar la exactitud y la precisin de un lote de pipetas.
4. Controlar factores atribuibl es a la utilizacin
de una pipeta por diversos usuarios.
Procedimien to7
El procedimiento que se explica a continuacin
es vlido para las pipetas que funcionan por
desplazamiento
de
aire.
Comprende
lossiguientes pasos:
1. Instalar una pun ta nueva en la pipeta.
2. Succionar con la pipeta agua destilada del
recipiente de almacenamiento y desecharla
en el recipiente de desperdicio al menos 5
veces, para estabilizar la humedad del volumen de aire en el interior de la pipeta.
3. Aadir agua al recipiente que se utilizar
para pesar, hasta que se obtenga una
altura del lquido de al menos 3 mm.
10. Recurso humano entrenado
4. Registrar la temperatura del agua, la

presin ambiental y la humedad relativa.
Principio
5. Reemplazar la tapa del recipiente de pesado, si aplica.
El procedimiento se basa en medir el volumen

de una muestra de agua, a partir de la masa de
agua que dispensa una pipeta de capacidad conocida. (Dividiendo la masa de agua
dispensada
6. Registrar el peso que presenta la balanza o

efectuar la tara para que la lectura de la
misma quede en cero (0).
Los equipos a utilizar en la calibracin de la pipeta deben estar certificados por un laboratorio de calibracin acreditado.
El procedimiento presentado es una gua general. Para detalles completos, consultar estndares como el BS ES ISO 86556:2002.
183
7. Llenar la pipeta con agua del recipiente de

almacenamiento y dispensarla en el recipiente de
pesado. Expulsar la totalidad del agua. (Tal y como
se ha descrito en el numeral 7 del Mtodo
convencional de uso). El trabajo se realiza de la
misma forma que se utiliza la pipeta de forma
cotidiana.
2. Convertir cada valor de masa a volumen a 20

C, dividiendo la masa para la densidad del
agua
ajustada
a
la
mencionada
temperatura.
8. Registrar el nuevo peso detectado por la

balanza.
3. Calcular el volumen promedio de los volmenes calculados en el numeral 2. (Suma de los

volmenes, dividido para el nmero de
muestras). Aplicar los ajustes por fenmenos
tales como el empuje del aire sobre la masa
flotacin. Para esto se multiplica cada masa por un factor de correccin [Z].
9. Repetir los pasos 7 y 8 por nueve (9) veces

adicionales, registrando al final de cada ciclo
el peso que registra la balanza.
10. Registrar la temperatura del lquido en el recipiente de pesado, al final del dcimo ciclo y
medir el tiempo transcurrido desde el inicio de las
mediciones.
11. Evaluar si la evaporacin ha sido signi ficativa,
(caso crtico cuando se trabaja con pipetas de volumen muy pequeo). Si as se
estima, se debe permi tir que trascurra un
perodo de tiempo adicional [Ta], igual al
utilizado durante las diez mediciones, y
cuando se complete, efectuar una nueva
lectura del peso que registra la balanza.
12. Dividir la masa de agua perdida por evaporacin en el tiempo adicional [Ta] por el nmero total de muestras analizadas (diez).
Es- to dar un indicativo promedio de la
masa de lquido perdida, debido a
evaporacin por ciclo, cifra que debe
aadirse a cada una de las lecturas de
masa realizadas.
Mi
Vi =
X = Vi n x Z
4. Calcular la desviacin estndar de la muestra.
[S] S =
i=1
5. Calcular el coeficiente de variacin.

[Cv] CV(%)
=
S
XA
x 100
A continuacin, se muestra una tabla que contiene el resumen de las frmul as matemticas
mencionadas.
Frmulas
Clculos
1. Calcular la masa del agua dispensada por la

pipeta en cada ciclo. Restar la lectura
registrada correspondi ente al final del ciclo
anterior de la registrada en el presente ciclo
y continuar as hasta el final. Si se considera
adecuado, sumar la masa promedio
correspondi ente a la evaporacin calculada
por ciclo.
n
x
(Xi - XAV)
1
n-1
X = Vi n x Z
Para efectuar los clculos se procede como se

describe a continuacin:
S=
XAV)2
1 x (X i
n-1
Es = X - Vn
Convenciones:
X=
valorpromediodelvolumen
S= desviacinestndar
Z= factor de
ajusteen (l /
S
Cv(%) = 100 x
XAV
XAV - XNom
D(%) =
XNom
V =
i
Mi
D
Convenciones:
Cv(%)= coeficiente de
variacin
D(%) = inexactitud
Los valores de Z dependen de la temperatura y la presin para el agua destilada. Deben consultarse en publicaciones especializadas como el Estndar BS EN ISO 8655-6:2002, Anexo A.
184
Pipetas
16
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
La pipeta presenta fugas.
Punta colocada de forma incorrecta

en la pipeta.
Instalar la punta de acuerdo a

procedimiento definido por el fabricante.
Cuerpos extraos entre la punta y

su cono de ajuste.
Limpiar acople. Retirar la punta y limpiar

el cono de ajuste. Instalar unapunta
nueva.
Desensamblar
y limpiar el conjunto
Cuerpos extraos entre el pistn y

el anillo/sello en Oalojadoen el
cilindro. insuficiente en el pistn
Lubricante
REMEDIO
cilindro/pistn. Lubricar
y ensamblar.
Desensamblar
y lubricar
y o el sello en O.
adecuadamente.
Sello en O doblado o daado.

Pistn contaminado.
Reemplazar sello en O. Desensamblar,

limpiar, reemplazar sello, lubricar y
ensamblar.
Limpiar
el pistn y lubricar
Cono inferior flojo.
ligeramente.
Ajustar el cono inferior.
Gotas visiblesdentro de la punta

de la pipeta.
Humidificacin no homognea de
la pared plstica.
Instalar unapunta nueva en la pipeta.
La pipeta presenta
inexactitudes.
Operacin incorrecta de la
pipeta.
Revisar los procedimientos de uso y

corregir erroresdetectados.
Cuerpos extraos bajo el botn de

accionamiento.
Limpiar el montaje del botn.
Punta de la pipeta mal

instalada.
Interferencia en la calibracin.
Revisar el montaje de la punta de la

pipeta. Instalar una punta diferente,
adecuadaa las especificacionesde la
pipeta. de acuerdo a procedimiento
Recalibrar
Punta contaminada.
estandarizado. Revisar procedimiento de

uso.
Instalar unapunta nueva.
La pipeta presenta inexactitudes

con determinados lquidos.
Calibracin inadecuada.
Recalibrar la pipeta utilizando

procedimiento estandarizado.
Ajustar la calibracin si seutilizan lquidos
de viscosidadalta.
El
botndecontrol
nosemuevesuavemente
o
presenta alta resistencia al
accionarlo.
Pistn contaminado.
Limpiar y lubricar ligeramente.
Sello contaminado.
Desensamblar la pipeta, limpiar todos los

sellos o reemplazarlos si es necesario.
Lubricar ligeramente.
Pistn daado.
Reemplazar el pistn y los sellos del

pistn. Lubricar ligeramente.
Vapores de solvente hanentrado

en la pipeta.
Desenroscar la unincentral de
lapipeta.Ven- tilar, limpiar el pistn y
lubricar ligeramente.
185
DEFINICIONES BSICAS
Coeficien te de variacin [CV]. Parmetro
estadstico que representa la fraccin de la
desviacin tpica con respecto a la media.
Densidad. Relacin que existe entre la masa
de un cuerpo y el volumen que el mismo ocupa.
La densidad promedio de un objeto es igual a
su masa total dividida por su volumen total. Se
identifica mediante la letra griega Ro []. En el
Sistema Internacional de Unidades, la densidad
se mide en kilogr amos por metro cbico
[kg/m3].
Desviacin estndar [S]. Parmetro estadstico que se utiliza para determinar el error
global de una muestra.
Error (de una medida) . Diferencia que se
presenta entre el valor medido y el valor
correcto.
Exactitud. Concepto relacionado con los
errores que presentan las medidas. Se dice
que un instrumento es exacto cuando los valores de un grupo de mediciones se acercan
bastante al valor real.
Masa. Propiedad fsica de los cuerpos
relacionada con la cantidad de materia que
estos contienen. En fsica hay dos cantidades
a las que se denomin a masa. La masa
gravitacional que es una medida de la forma
en que un cuerpo interacta con el campo
gravitacional. (Si la masa del cuerpo es
pequea, el cuerpo experimenta una fuerza
menor que la que experimentara si su masa
fuera mayor).
Por otra parte, la masa inercial se entiende

como la resistencia a cambiar el estado de
movimiento, cuando se le aplica una fuerza a
un objeto. (Un objeto, con una masa inercial
pequea, cambia su estado de movimiento con
mayor facilidad que uno que tenga una mayor
masa inercial, cuando se les aplica una misma
fuerza).
Microgra mo [g]. Unidad de peso que equivale a 1 x 10-6 gramos (g).
Miligra mo [mg]. Unidad de peso que equivale a 1 x 10-3 gramos (g).
Microli tro [l]. Unidad de capacidad que
equivale a 1 x 10-6 li tros (l). Un (1) l de agua
pesa exactamente un (1) mg y tiene un volumen de 1 mm3.
Milili tro [ml]. Unidad de capacidad que
equivale a 1 x 10-3 li tros (l). Un (1) ml de agua
pesa exactamente 1 g y tiene un volumen de 1
cm3.
Precisin . Concepto relacionado con los
errores que presentan las medidas. Se dice
que un instrumento o mtodo es preciso
cuando en ensayos independientes, al repetir
una medida, se obtienen resultados similares.
Rango . Diferencia entre el mximo y el mnimo valor que lee o mide un instrumento.
Volu men. Cantidad de espacio fsico que
ocupa la masa. Se calcula dividiendo la masa
por la densidad promedio.
186
Pipetas
16
Bibliogra fa
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipettes, National Physical Laboratory, Tedding ton, Middlesex, UK, 2004. (www.npl.co.uk)
Digi tal pipette, Guide to Justor 100 series pipettes, Nichiryo Co., LTD.
Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Rev. 2/121199.
Mantenimiento y reparacin del equipo de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Organizacin Mundial de la Salud, 1996, 52-55.
Manual de instrucciones, Eppendor f Serie 2000.
(htt p://www .brinkm ann.com/pdf/bs-manuals/ReferenceSeries2000.pd f)
Standard Operating Procedure for Pipettes, Brinkm ann/Eppendor f SOP. 5101-201C,
Brinkm ann Instruments Inc, 2001. (htt p://www .brinkm ann.com/pdf/5101-C201.pd f)
The Finnpip ette, Instructions for Use, Labsystems, Helsinki , Finland.
187
188
Codigo (s) ECRI

16-287
PLATO CALIENTE CON AGITADOR
El plato caliente o plato agitador calefactor

ha sido desarrollado con el prop6sito de po der
calentar y mezclar fluidos contenidos en
recipientes de laboratorio como Erlenmeyers,
tubos de ensayo y tubos de precipitado.
FOTOGRAFiA DEL PLATO CALIENTE

CON AGITADOR
con materiales que se caracterizan por ser

buenos conductores termicos como el
aluminio [Al] o ma teriales ceramicos.
Tambien han sido desarro llados platos
calientes que utilizan para ca lentar
exclusivamente fuentes de radiaci6n de tipo
infrarrojo (luz infrarroja). Los plates calientes
con agitador disponen de un ele mento
calefactor (una resistencia
electrica), un
sistema de control (encendido, apagado,
control de temperatura,control de agitaci6n
y su respective motor). Los motores que se
utilizan en este tipo de instrumentos, por lo
general,son de inducci6n de tipo monofasico,
1
a los que se denomina de polo degradado
Su velocidad depende del numero de polos y

de la frecuencia del voltaje de alimentaci6n.
Temperatura:
Temp. ambiente hasta aproximadamente
500 (
Velocidad de rotaci6n:
Desde 60 R PM hasta aproxima damente
1 200 RPM
CONTROLES DEL PLATO CALIENTE

CON AGITADOR
PRINCIPIOS DE OPERACION
Normalmente,el plato caliente con agitador
dispone de una superficie plana sobre la

cual se colocan los recipientes que
contienen los fluidos que han de
calentarse o agitarse,o ca lentarse y agitarse.
Dicha superficiees fabricada
El esquema que se incluye a continuaci6n

in cluye un control tipico de los que se
pueden encontrar en un plato caliente con
agitador. El esquema que se presenta
corresponde a un plato caliente que utiliza
un microprocesador para regular las
funciones, que es la tenden cia que se
impone en los equipos modernos.
La potencia de estos motores es aproximadamente de 1/20 de hp;se caracterizan por tener un torque bajo y ser de
bajo costo. En ingles se les denomina shaded pole induction motor.
189
Pantalla temperatura
seleccionada I obtenida da
--
/--
Pantalla velocidad
- seleccionada I obteni
Botones
---- selecci6n velocidad agitaci6n
-----
Botones selecci6n tanperatura
llustraci6n 47: Control plato caliente con agitador
El control dispone de botones para seleccionar

la temperatura y la velocidad de agitaci6n, que
se pueden graduar de forma independiente. Se
puede seleccionar solo la temperatura o solo la
velocidad de agitaci6n o combinar los dos
para metros. Para seleccionar los parametros
basta
con accionar el bot6n de control
correspondien
te
y
seleccionar
la
temperatura y la velocidad a la que se
requiere trabajar.
El plato caliente con agitador requiere ser co

nectado a una toma electrica con polo a tierra,
en
buen
estado,dimensionada
para
suministrar la potencia electrica requerida por
el equipo, que cumpla con las normativas
electricas nacio nales o internacionales. Por lo
general, operan con voltajes de 120 V/60 Hz,
o 230 V/50/60 Hz.
Para su operaci6n normal requieren de una
su perficie de soporte,debidamente nivelada
y con la resistencia suficiente para sostener el
peso del plate caliente,junto con el peso del
recipiente y los liquidos contenidos.
OPERAC16N DEL PLATO CALIENTE

CON AGITADOR
Precauciones
1. Conectar siempre el plato caliente con
agi tador a una toma electrica en buen
estado que disponga de polo a tierra.
2. Desconectar el equipo antes

efectuar
cualquier
rutina
mantenimiento.
de
de
3. Evitar utilizar el equipo en ambientes en

los que haya presencia de materiales
com bustibles o inflamables. Evitar tambien
la utilizaci6n del equipo en ambientes
con vapores corrosivos.
4. Supervisar cuidadosamente si se requiere
ca lentar sustancias con bajo punto de
ignici6n (Flash point). Podrla iniciarse un
incendio o explosion,si los vapores tocan
la superficie de calentamiento a dicha
temperatura.
5. Utilizar elementos de protecci6n personal
si se trabaja con liquidos inflamables:
guantes, anteojos.
6. Tener en cuenta que la superficie del
equi po puede permanecer caliente por
un lar go perlodo,despues del memento
en que ha sido apagado o desconectado.
7. Evitar
colocar
sobre
la
superficie
calefactora:
a) laminas metalicas
b) materiales con propiedades aislantes
c) elementos devidrio de bajo punto de
fusi6n
8. Mantener un espacio libre alrededor del
equipo para facilitar su conexi6n y la
coloca ci6n de los elementos, materiales o
sustan cias que se requieren para utilizar
el
equipo.
Algunos
fabricantes
recomiendan un espa cio libre de
aproximadamente 15 cm.
190
1
7
9. Evitar
colocar
materiales
combustibles cerca del equipo .
aplicables a la sustitucin de las superficies

cermicas.
10. Evitar colocar recipientes cuyo

peso exceda la capacidad definida
por el fabricante.
1. Verificar que el plato caliente se

encuentre desconectado y fro. Esto
evita el riesgo de que se produ zca un
choque elctrico o se presente una
quemadura.
RUTINAS
DE
MANTENIMIENTO
El plato caliente con agitador es un
equipo diseado para trabajar en
condiciones normales, sin que
presente mayores exigencias de
mantenimiento. Este equipo bien
instalado y operado funciona sin
probl emas durante muchos aos.
En este documento se exponen las
rutinas generales de mantenimiento
que recomiendan los fabricantes.
Procedimientos
especializados
deben
realizarse
siguiendo
cuidadosamente las recomendaciones de los fabricantes.
Limpieza
Frecuencia: Mensual
1. Limpiar el equipo en una posicin
vertical, para evitar que los
agentes de limpi eza lleguen a
los compon entes internos.
2. Utilizar un detergente suave.
Aplicarlo sobre las superficies
externas, utilizando una pieza de
tela de calidad similar a la de los
pauelos.
3. Verificar que el equipo se
encuentre completamente seco
antes de volver a conectar.
Reempla zo de super ficies

cermicas
A continuacin, se presentan las
recomendaciones
generales
2. Manejar con extremo cuidado el equipo

, pues una superficie cermica rota tiene
bordes cortantes muy peligrosos.
3. Colocar la unidad con

la superficie calefactora hacia abajo.
4. Retirar los tornillo s
que fijan la tapa inferior y removerla.
5. Ubicar y desconectar
los cables que alimentan
las
resistencias elctricas
(en modelos que
utilizan
estos
elementos).
6. Desconectar
los
cables
existentes
entre el control del
equipo
y
las
resistencias.
7. Retirar los tornillo s
que fijan la cubierta
superior a la base.
Verificar que no se
afecten las conexiones
a
las
resistencias
calefactoras.
8. Orientar la nueva
superficie cermica,
tal como se encuentra
mon tada la superficie
cermica a cambiar.
9. Observar cmo se
encuentran colocados
los seguros de la
cubierta
cermica
daada.
Retirar
dichos seguros y colocar los

elementos calefactores y
aislantes dentro de la nueva
superficie, conservando la
misma
alineacin
y
distribucin que tena en la
cubierta origi - nal. Colocar
los nuevos seguros.
10. Reconectar los siguientes
compon
entes
en
un
proceso inverso al arriba
descrito.
Reempla zo de fusibles
Si el plato est conectado y el
interrup tor principal en la posicin
de encendido , pero no hay efecto
calefactor, es posible que sea
necesario sustituir el fusible. El
proceso es el siguiente:
1. Colocar el interrup tor principal
en la posicin apagado y
desconectar el cable de alimentacin elctrica.
2. Retirar, con un destornill ador de
pala, la tapa del compartimiento
del fusible.
3. Reemplazar el fusible por uno
nuevo
de
las
mismas
especificaciones del origin al.
4. Colocar
la
cubierta
compartimiento del fusible.
del
191
Tabla de soluci6n de problemas CAUSA PROBABLE
INo hay energfPROBLEMA

a electrica.
Falla en el fusible de protecd6n.
REMEDIO
Sustituir el fusible de protecci6n.
Falla en la acometida electrica que ali- 1 Revisar estado de la acometida

electrica. menta el equipo.
Equipo desconectado de la toma
de ali- mentaci6n electrica.
Conectar el equipo a la torn a electrica.
Sustituir el cable de alimentad6n

Calle de alimentad6n electrica
defectuoso.
No se ha seleccionado la funci6n de electrica.
Accionar funci6n de calefacci6n en el
tablero
calefacci6n .
de control.
El plato no presenta efecto

calefactor.
Resistencia calefactora fuera de
Sustituir resistenda calefactora. Colocar

to de las mismas caracterfsticas del
No se ha seleccionado la funci6n de original.
Accionar el control de rotaci6n en el
tablero de
No hay efecto de rotaci6n.

-
DEFINICIONES BASICAS
Bobina principal
Erlenmeyer. Recipiente fabricado en
vidrio, utilizado en los laboratories para
contener o medir sustancias.
Motor de induccion de polo degradado.
Motor de inducci6n que se utiliza para pro
pulsar pequenas maquinas. Se caracteriza
por disponer de una bobina en corto circuito,
cu yas corrientes inducidas causan que el
flujo magnetico,en la zona donde esta la
bobina, se desfase con relaci6n al flujo en la
otra por ci6n, produciendo un torque. Estos
motores son de baja eficiencia y costo. La
velocidad de los mismos puede calcularse
mediante la ecuaci6n:
120 f
n(rpm) = p
donde:
[n]
velocidad sincr6nica en
por minuto
revoluciones
[f] = frecuencia del voltaje aplicado

[p] = numero de polos en el estator
Se incluye un esquema de c6mo se represen
tan en circuitos electricos.
Bobina
llustraci6n 48: Motor de inducci6n
Punto de ignicion. Temperatura a la cual las

moleculas de una sustancia reaccionan con
el oxigeno del aire iniciando una combusti6n.
En ingles dicha temperatura se denomina
Flash Point.
192
1
7
Bibliogra fa
Fitzgerald, A., Kingsley, C., Kusko, A., Electric Machinery, Mc Graw Hill Co., 1971.
Instructions for replacement on ceramic top on Fisher 11-500 series, Hotplates and Stirrers, Part N 103177, 1998.
Instruction manual for Fisher Isotemp Digi tal, Instructions Part N 104612, Rev. A. Pitts- burg, Fisher Scientific, 200
Instruction manual for Fisher Scientific Stirrers, Hotplates and Stirring Hotplates, Pittsburg, Fisher Scientific.
Universal Medical Device Nomenclature System (UMDNS), Product Categories Thesaurus, ECRI, 5200 Butler Pike,
(
193
194
Refrigeradores Refrigeradores biol6gicos

Refrigeradores para laboratorio
15-170
17-157
15-171
REFRIGERADOR
El refrigerador en los laboratorios es uno de

los equipos mas importantes. Su funci6n
con siste en mantener, en un ambiente
controla do -espacio refrigerado-, diversos
fluidos y sustancias, para que los mismos se
conserven
en
buenas
condiciones
-mientras mas baja sea la temperatura,
menor actividad qulmica y biol6gica-. Para
lograr esto se requiere que la temperatura
interior del refrigerador sea inferior a la
temperatura ambiente. En el la boratorio
se utilizan diversas clases de refri
geradores que podrian agruparse dentro
de los siguientes rangos:
refrigeradores de conservaci6n y de los refri

geradores de ultrabaja temperatura.
FOTOGRAFiA DEL REFRIGERADOR
Refrigeradores de conservaci6n
funcionan
en el rango de O 0c a 8
c.
Refrigeradores de baja temperatura
funcionan
en el rango de O 0c a -30
c.
Refrigeradores de ultrabaja 0temperatura
funcionan
en el rango de O c a -86
c.
Dependiendo de las actividades que realice

el laboratorio, debe seleccionarse el
refrigera dor que resulte apropiado a sus
funciones . Por ejemplo: si se requiere
conservar sangre entera, basta utilizar un
refrigerador conoci do como de Banco de
sangre, que proporcio
na temperaturas comprendidas entre los O C
y los 8 c. Por el contrario,si se requiere
con servar una cepa particular, es necesario
un re
frigerador de ultrabaja temperatura. Los re
frigeradores resultan indispensables para
conservar sustancias biol6gicas y reactivos.
En el presente capltulo se trataran los as
pectos de operaci6n y mantenimiento de los
:..
PROPOSITO DEL REFRIGERADOR
Basicamente, los refrigeradores son utilizados

para
la
conservaci6n
de
sangre
y
derivados,11- quidos biol6gicos y tejidos,
reactivos, quimi cos, biol6gicos y cepas. La
actividad quimica y biol6gica, por lo general,
es mas alta cuanta mas alta sea la
temperatura. Por esta raz6n, al reducir la
tern peratura, se logra controlar el
195
efecto que la misma tiene sobre las

sustancias cuya composici6n y estructura se
quiere con servar. En el laboratorio los
sistemas de refri geraci6n se usan para la
conservaci6n de sus tancias como reactivos
y elementos biol6gicos que, de mantenerse
en condiciones de tempe ratura ambiente,se
descompondrlan
o
altera
rian
sus
propiedades. La refrigeraci6n, como tecnica,
brinda las condiciones mediante las cuales
es posible conservar aquellos elementos que
como la sangre y sus derivados son nece
sarios para el diagn6stico, la investigaci6n y
la prestaci6n de servicios de salud. En
consecuen cia se pueden obtener ranges de
temperatura extremadamente bajos, como
los utilizados para la conservaci6n de cepas
(-86 () o tem peraturas que oscilan en el
range de los O y los
8 c,que son suficientes para conservar
reacti vos y diversos productos biol6gicos.
PRINCIPIOS DE OPERACION
De la segunda ley de la termodinamica se

sabe que, si se requiere transferir energfa
termica de un lugar de menor temperatura a
otro de mayor temperatura, es necesario
reafizar un
trabajo mecanico para lograrlo. De lo contra

rio, es imposible obtener tal transferencia.
Los refrigeradores funcionan de acuerdo con
leyes fisicas plenamente comprobadas que
regulan la transferencia de energla entre
lugares don de existen diferencias de
temperatura.
Los refrigeradores modernos son maquinas
termicas que funcionan principalmente utili
zando un cido llamado de compresi6n, en el
cual se utiliza un fluido de propiedades espe
ciales para lograr dicha transferencia. Este
ca pltulo se enfoca en explicar c6mo operan
los refrigeradores que utilizan la compresi6n
co mo medio para obtener
un efecto
frigorlfico.
Circuito de refrigeraci6n 1
A continuaci6n, se presenta el circuito basico
que explica c6mo funciona un refrigerador.
En la parte izquierda es posible diferenciar
los si guientes componentes: evaporador,
conden
sador,
compresor,valvula
de
expansion,filtro y tuberias de interconexi6n.
Dentro
de
cada
uno
de
estos
componentes,circula un fluido refri gerante
de caracteristicas especiales.
Cicio ideal compresi6n de vapor refrigerante

ExteriorTa
Aislamiento termico
Zona baja presi6n [4-1]
Ta
.?. :. .... : ," .: ," :.: ..:;: :' ;: ,,' . :: :: ..::::
s
llustraci6n 49: Circuito de refrigeraci6n
Para entender el funcionamiento de los procesos de refrigeraci6n, es indispensable entender conceptos basicos
so bre la primera y la segunda ley de la termodinamica.
196
Refri=ge-rador CA PITULO 18
En la parte derecha de la figura, se presenta

una grafica de temperatura [T] contra
entropia [S] que muestra el funcionamiento
de un ciclo de refrigeracion ideal2
identificando, con los mismos numeros del
esquema basico de la iz quierda,en que
puntos se presentan los proce sos adiabaticos
(compresion (1-2] y estrangula miento [3-4]) y
los procesos que involucran transferencia de
calor (en el evaporador - am biente
refrigerado [4-1] y en el condensador (2-3], al
exterior). El ciclo complete se describe como
la secuencia de procesos [1-2-3-4-1] .
Evaporador. Es un dispositivo que contiene
una red de conductos, a traves de los cuales
circula el fluido refrigerante. En el mismo se
lleva a cabo un proceso de transferencia de
calor [QI], a presion constante. Para que el
proceso de refrigeraci6n pueda realizarse, el
ambiente que se quiere refrigerar debe estar
protegido -rodeado- de un sistema de aisla
miento termico para evitar que la energla ter
mica del medio ambiente ingrese a la zona de
influencia del evaporador, con la misma pron

titud que el fluido refrigerante la absorbe en
el evaporador. El fluido refrigerante ingresa
en fase liquida al evaporador por el punto [4]
(ideal) o (4'] (real) y, a medida que recorre la
red de conductos del evaporador, absorbe
ca lor [QI], y progresivamente cambia de
fase li quida a fase vapor.Cuando el
refrigerante lle ga al punto [1], se encuentra
en forma de va por. Desde alli es succionado
por el compresor,
a traves del conducto o linea de succion.
Compresor. Es un dispositivo que es propul
sado, generalmente, mediante un motor
elec trico. El compresor succiona del
evaporador el fluido refrigerante que se
encuentra en fase de vapor -saturado- a baja
presion y, median te un piston o conjunto de
pistones,ejerce so bre el un proceso de
compresion adiabatica
reversible -sin transferencia de calor-, entre
los puntos [1-2]. A la descarga del compresor,
el vapor se encuentra a alta temperatura co
mo consecuencia del proceso de compresion
y en ese estado es entregado al
condensador en el punto [2].
Condensador. Es un dispositivo que, de for

ma analoga al evaporador, dispone de una
red de conductos, a traves de los cuales
circula el fluido refrigerante. Como la
temperatura del refrigerante es mas alta que
la ternperatura ambiente [Ta],se produce un
proceso de trans ferencia de calor [Qh], desde
el fluido refrige rante al medio ambiente, a
presion
constante.
Para
facilitar
la
transferencia de calor, los tu bos del
condensador disponen de aletas del gadas
que aumentan el area de transferencia. Al ir
perdiendo calor [Qh] como resultado del
proceso de transferencia, el refrigerante
cam bia de fase vapor a fase liquida,hasta
que lle ga al punto (3] como liquido saturado,
donde ingresa a la valvula de expansion.
Valvula de expansion. Es un dispositivo
que solo permite pasar el refrigerante de for
ma controlada. La valvula ejerce una
resisten cia al paso del refrigerante, sin que
se pro duzca transferencia de calor -de forma
adia batica-, como resultado del cual
la
presi6n del mismo se reduce de forma
drastica, en el punto [4]. A la salida de la
valvula de expan sion, generalmente se
instala un filtro. Algu nos fabricantes de
refrigeradores
sustituyen la valvula de
expansion por un tubo capilar, que tiene un
efecto restrictivo al paso del fluido
refrigerante, equivalente al de la val vula de
expansion.
Filtro. Es un dispositivo que tiene por objeto
retener la humedad y las impurezas que pu
diera contener el fluido refrigerante. A la sa
lida del filtro el sistema se conecta nueva
mente al evaporador en el punto [4], para re
petir el ciclo descrito.
Colector de liquidos. Es un dispositivo que
colocan algunos fabricantes, antes de que el
fluido refrigerante ingrese al compresor. Su
objetivo es retener cualquier porci6n del flui
do refrigerante que se encuentre en fase li
quida para garantizar que la totalidad del
fluido refrigerante que ingresa al compresor
se encuentre en fase vapor. (No se indica en el
esquema de refrigeraci6n).
Elciclo real se diferencia def ideal por la existencia de algunos procesos irreversibles no indicados en la graf ica, en
benefic io de la claridad y la sencillez.
I_
197
Aislamien to trmico. Es un conjun to de

materiales que tiene la propi edad de retardar la transferencia de calor. Su funcin consiste en evitar que la energa trmica del medio ambiente pueda llegar al entorno que se
pretende refrigerar, con la misma rapidez
que el sistema de refrigeracin extrae la
energa trmica del interior. Todo equipo de
refrigeracin dispone del aislamiento trmico
adecuado, para lograr que la temperatura interior sea inferior a la temperatura del medio
ambiente. El mejor aislante trmico es el vaco. En los refrigeradores se utilizan diversos
materiales; entre los ms comunes y usados,
se encuentran el poliur etano en forma de espuma y la lana de vidrio . Asimismo, se acostumbra fabricar las superficies interiores en
materiales como plstico ABS.
Vlvula s de servicio. Son dispositivos que se
utilizan para cargar el circuito de refrigeracin
con el fluido refrigerante. A travs de las mismas, se conectan los sistemas de vaco y de
carga de refrigerante requeridos, para que el
refrigerador opere de acuerdo con las
condiciones de diseo establecidas por el
fabricante. Normalmente, su utilizacin est
limi tada al fabricante y a personal tcnico
especializado. (No se indican en el esquema
de refrigeracin).
Protector trmico. Es un dispositivo de proteccin que debe activarse y desconectar el
compresor, en caso de que ocurran sobrecargas o sobrecalentamientos que afecten las
bobin as de campo del compresor. (Pertenece
al sistema elctrico y no se indica en el sistema de refrigeracin).
Nota: Tanto el evaporador como el
condensador estn fabricados con
materiales que presentan muy buenas
propi edades de conduccin trmica como
aluminio [Al] y cobre [Cu]. Para mejorar la
transferencia de calor, se han incorpor ado,
en los condensadores y evapora- dores,
sistemas de ventilacin que inducen procesos
de conveccin forzada. Para lograr las
diferentes temperaturas de refrigeracin
que se requieren en los laboratorios o en la
industria en general, los fabricantes han
desarroll ado diversidad de diseos y de fluidos refrigerantes, los cuales utilizan dependiendo de los resultados esperados.
Para su funcionamiento, los refrigeradores
requieren las siguientes previsiones:
1. Acometida elctrica con polo a tierra adecuada a los requerimientos de voltaje y
frecuencia del equipo . En general los refrigeradores, dependiendo de su capacidad,
pueden conseguirse en versiones que funcionan con 115 V, 60 Hz; 208/230 V, 60 Hz.
Debe preverse que las acometidas elctricas cumplan con las normativas elctricas
nacionales o internaciones que utilice el
laboratorio.
2. Si se instala ms de un refrigerador que
dependa de un mismo circuito elctrico, se
debe veri ficar que la capacidad potencia
elctrica y las segurid ades del mismo
sean adecuadas para suministrar la
potencia
que
demandan
los
refrigeradores.
3. Conectar directamente el refrigerador a la
toma elctrica. Nunca instalar un refrigerador en una toma elctrica sobrecargada
o que presente deficiencias de voltaje. En
lo posible, evitar el uso de extensiones
elctricas. La toma elctrica no debe estar
a ms de 2 m del lugar seleccionado para
instalar el refrigerador.
4. Instalar el refrigerador sobre una superficie nivelada, previendo que se disponga
de un espacio libre alrededor del equipo .
Los refrigeradores en la base disponen de
un sistema de nivelacin que permi te ajustar las pequeas diferencias de nivel que
pudiera tener el piso. Se acostumbra dejar
un espacio libre de 15 cm a los lados, y en
la parte trasera para facili tar la ventilacin
del condensador.
5. Evitar instalar el refrigerador bajo la luz
solar directa o cerca de fuentes de calor
como radiadores o calentadores. Recordar
que mientras mayor sea la diferencia de
temperatura entre el ambiente y el condensador, la transferencia de calor ser
ms eficiente.
198
--------
Refrigerador
PITULO 18
CIRCUITO DE CONTROL REFRIGERAD0R 3
Se presenta a continuaci6n un circuito de

control tipico, de los que normalmente se
en
cuentran
instalados
en
los
refrigeradores,con
I_
el fin de dar una idea de la forma en que

es tan interconectados los diversos
subsistemas que lo integran. El circuito de
control de ca da modelo varia de acuerdo
con las caracte rlsticas que haya
incorporado el fabricante.
Luz refrigerador
5'. lnterruptor descongelaci6n 2
lnterruptor
4. Vent iladores evaporador
e ;l; - - - - j
V ---1 6. Resistenc ias
115 V / 60 Hz
\A, ---1
frontales
6. Resistencia
-- - .AAA----lcondendor
i-- --"l"'Tl"
ev,,;.= 5"".Resistencia
descongelamiento
-'1e.Sicoogle@!,tueot0-.....j
5. lnterruptor
descongelamiento . - . _
1. lnterruptor llave
--3. Motocompresor
Ventilador
---condendor
7. Controlador
j Relevo 5"'. Motorte P?rizador
:ompresor descongelam 1ento
"-TC---l
llustraci6n 50: Circuito de control de/ refrigerador
Como componentes centrales se destacan

los siguientes:
1. lnterruptor general. Energiza el
refrigerador.
2. lnterruptor de la puerta. Enciende la luz
cuando se abre la puerta; desconecta los
ventiladores del evaporador.
3. Motocompresor.
4. Ventiladores del evaporador.
5. Subsistema de descongelam iento.

lnte rruptor, resistencias, temporizador
(5, 5', 5", 5"', 5"").
6. Subsistema
de
resistencias
para
desconge lar o mantener componentes
def equipo fi bres de hielo.
7. Controlador.
CA
Circuito basado en el instalado en los refrigeradores Fisher Scientific ISOTEMP, Laboratory Freezers, Instruction Ma
nual, Fisher Scient ific Co. Rev. H.Part N 102999, 2003.
199
OPERACION DEL REFRIGERADOR I
4. Cargar el refrigerador de acuerdo con la

capacidad establecida por el fabricante.
Caso I: Refrigeradores de conservaci6n

La operaci6n de los refrigeradores de conser
vaci6n en general es muy sencilla. Cada fabri
cante da recomendaciones basicas. Algunas
de las mismas se sei'ialan a continuaci6n.
1. Conectar el cable de alimentaci6n
electrica del refrigerador a una toma
electrica dota da de polo a tierra y
capacitada para sumi nistrar el voltaje y la
potencia requeridas.
2. Accionar
el
interruptor
de
encendido. Al gunos fabricantes
colocan interruptores de llave a
los refrigeradores. Esperar que el
refrigerador
alcance
la
temperatura de operaci6n, antes
de almacenar cualquier producto.
Los fabricantes ajustan la tem
peratura de estos refrigeradores
aproxi
madamente en 4 c.
5. Distribuir
las
cargas
de
forma
homogenea dentro del refrigerador.La
uniformidad de la temperatura depende
de la circulaci6n libre del aire dentro del
refrigerador.
6. Evitar abrir la puerta por perlodos de tiem
po largos, para evitar el ingreso de energia
termica y humedad -presente en el aireal
ambiente refrigerado, pues se forma hielo
y se aumenta el tiempo de trabajo del
sistema
de
refrigeraci6n.
Abrir
Cmicamente para co locar o retirar los
elementos almacenados.
Controles refrigerador de conservaci6n

Se presenta a continuaci6n un esquema de
un control de reciente desarrollo con el que
vienen equipados los refrigeradores de con
servaci6n.
Por
ejemplo:
refrigerador
Banco
de sangre.
3. Seleccionar la temperatura a la
cual debe ac cionarse la alarma.
Seguir las instrucciones que para el
efecto suministra cada fabricante.
lndicador servicio
tecnico
Term6metro \
Pantalla
\
Bot6n aumento temperatura

\
Interruptor
de nave
lndicador puerta, /
abierta
;
lndicador bater!a
baja
Bot6nselector de parametros
--temperatura,alarmas
--Alarma audible
Bot6n disminuci6n temperatura
llustraci6n 51: Control Banco de sangre
200
Refrigerador
Se aprecian en el esquema lossiguientes

controles:
1. Un interrup tor general, accionado por llave
2. Indicadores de puerta abierta, batera baja, condicin tcnica anormal
3. Botones para aumentar o disminuir parmetros
18
3. Una vez desmontados los estantes o

cajones, limpiar las paredes interiores
del refrigerador, utilizando un
detergente suave. Secar antes de
montar los accesorios interiores.
4. Aplicar a los cajones un detergente
suave con un t rapo hmedo. Fro tar
con cuidado. Secar los cajones y
reinstalarlos en los dispositivos de
mon taje disponibl es en el
refrigerador.
4. Pantalla indicadora
Los refrigeradores son equipos que en general

no son muy exigentes desde la perspectiva de
mantenimiento, aunque s son exigentes con
relacin a la calidad de los sistemas de alimentacin elctrica. Si se conectan a circuitos elctricos de buena calidad y se veri fica que tengan buena ventilacin alrededor del equipo ,
pueden funcionar aos sin demandar servicios
tcnicos especializados. El circuito de refrigeracin es sellado en fbrica y no dispone de
compon entes que puedan requerir mantenimiento rutinario. Se describen a continuacin
las rutinas de mantenimiento ms comunes.
Refrigerador es de conservacin
Limpieza interior
1. Verificar que los estantes interiores del refrigerador se encuentran limpios. Generalmente se fabrican en malla metlica, a la
cual se le aplica un recubrimi ento para
evitar la corrosin. Para limpi arlos debe
retirarse del refrigerador cualquier
material que pudiera interferir la labor de
limpi eza. Mover los estantes vacos hacia
adelante. Aplicar un detergente suave con
un trapo hmedo, frotar suavemente, las
superficies superiores e inferiores. Secar
y reubi- car en la posicin origin al.
2. Si el refrigerador dispone de cajones, la labor de limpi eza es similar. Desocupar los
cajones y desmon tarlos de los dispositivos
de ajuste. Retirarlos del refrigerador.
Adver tencia: Evitar el uso de lana de acero u otros abrasivos para efectuar la limpieza de los estantes o los cajones. Evitar
el uso de gasolin a, nafta o adelgazantes,
porqu e estos daan los plsticos, el empaque o la pin tura de las superficies.

Frecuencia: Cada 6 meses
1. Desconectar el cable de alimentacin elctrica.
2. Verificar la posicin donde se encuentra
instalado el condensador. Los fabricantes
lo colocan principalmente en la parte inferior y en la parte trasera del equipo . Algunos refrigeradores lo tienen instalado en
la parte superior.
3. Retirar la rejill a de pro teccin y el fil tro
de pro teccin del condensador (No todos
los fabricantes proveen fil tro).
4. Retirar la suciedad y el polvo depositados
sobre la superficie del condensador. Utilizar una aspiradora dotada de un cepillo de
succin. Recorrer toda la superficie del
condensador para retirar la suciedad o el
polvo acumulado. Verificar que tanto la
superficie de los tubos como la superficie
de las aletas conductoras de calor queden
limpi as. Aspirar tambin el fil tro (si se dispone de este elemento).
5. Reinstalar la cubierta.
6. Conectar el refrigerador a la acometida
elctrica.
201
Adver tencia: Si el condensador no se limpia, se interfiere el proceso de transferencia

de calor y el refrigerador podra
"calentarse" o funcionar con temperaturas
diferentes a las seleccionadas.
3. Afecta la conservacin de la temperatura.

4. Incrementa los costos de operacin.
Descongelar
Empaque de la puer ta
El empaque de la puerta es un compon ente
que debe permanecer en buen estado para
que el refrigerador opere correctamente. Pa- ra
veri ficar su estado se procede como se explica a continuacin.
1. Abrir la puerta.
2. Insertar una tira de papel de unos 5 cm de
ancho, entre el empaque de la puerta y el
reborde del cuerpo del refrigerador donde
se aloja el empaque.
3. Cerrar la puerta.
4. Halar suavemente el papel desde el exterior.
El papel debe presentar una resistencia a ser
desplazado hacia afuera. Si el papel puede
retirarse sin presentar resistencia, el empaque debe ser sustituido. Efectuar este procedimiento cada 10 cm alrededor de todo el
permetro sobre el cual acta el empaque.
Adver tencia: Un empaque en malas condiciones produce varios inconvenientes

en el funcionamiento del refrigerador:
1. Permi te el ingreso de humedad, que se condensa y congela en el interior del evaporador.

2. Incrementa el tiempo de operacin del
compresor para mantener la temperatura
seleccionada.
Muchos refrigeradores modernos disponen

de ciclos automticos para descongelar el
evaporador, a fin de evitar que se presenten
acumulaciones de escarcha. Normalmente,
dichos ciclos se realizan mediante la activacin de un conjun to de resistencias elctricas
que de forma rpida elimin an la escarcha
presente. Algunos fabricantes prefieren que
este ciclo se realice bajo el cri terio de quien
opera el refrigerador y su accionamiento es
manual. Se presenta a continuacin el procedimiento recomendado para descongelar.
1. Verificar que el espesor de la escarcha sea
superior a 8 mm.
2. Retirar el contenido de los compartimientos.
3. Desconectar el refrigerador.
4. Dejar la puerta abierta.
5. Retirar el agua a medida que esta se acumula en los compartimientos. Utilizar una
esponja o una pieza de tela absorbente.
6. Colocar una toalla para evitar que el agua
descongelada moje la parte fron tal e inferior del refrigerador.
Adver tencia: Nunca utilizar elementos

cortopun zantes para retirar el hielo o la
escarcha del evaporador. Tal accin puede
perforar la pared del evaporador y permitir la fuga del fluido refrigerante, causando una falla grave que solo puede ser reparada en un taller especializado.
202
Refrigerador
18

trica requerida por el refrigerador, que cumpla con
nacionales
CAUSA PROBABLE las normas elctricas
REMEDIO
PROBLEMA
El refrigerador no funciona.
El refrigerador funciona de forma

con- tinuasin efecto frigorfico.
Equipo desconectado.
Verificar conexin del refrigerador.
No hay electricidad en circuito de

alimentacin.
Comprobar acometida elctrica.
Termostato ajustadoa alta

temperatura. congelado.
Refrigerador
Verificar el interruptor general

(breaker).
Confirmar ajuste del termostato.
Ajustar el termostato a una temperatura
menos baja.
Descongelar el refrigerador.
El refrigerador presenta
fluctuaciones de temperatura.
El refrigerador presenta
temperatura alta.
Control de temperatura
descalibrado.
Condensador sucio.
Calibrar la temperatura de operacin

segn procedimiento definido por el
fabricante.
Limpiar
condensador, de acuerdo a
Puerta abierta.
procedimiento citadoen rutinas de

mantenimiento.
Verificar
que la puerta est bien ajustada.
Falla en la alimentacin
elctrica.
Confirmar que la acometidaelctrica

funciona correctamente.
Secolocunacargaa
temperaturaalta(l- quidososlidos)
dentrodel
refrigerador.
El
compresor
no funciona.
Esperar a que el refrigerador retire el

calor de la carga.
El compresor funciona, pero hay

hielo en el evaporador.
Al operar el refrigerador se
escuchan sonidos similaresa un
clic.
El compresor funciona, no
hayhielo en el evaporador y
funcionanbien
los
ventiladoresdel
evaporador.
El protector trmico ha
desconectado el compresor.
OPERACIN DEL REFRIGERADOR II

Caso II: Refrigerador de ultrabaja
tempera tura
La operacin de los refrigeradores de ultrabaja temperatura implica seguir un procedimiento recomendado por los fabricantes, para
lograr las condiciones de trabajo estipul a- das
en el diseo del equipo . Se destacan las
siguientes recomendaciones comunes a cualquier refrigerador:
1. Conectar el refrigerador a una toma elctrica con polo a tierra de dedicacin exclusiva,
en buen estado de operacin y que est dimensionada para brind ar la potencia elc-
Verificar funcionamiento del

compresor.
Comprobarsi estencendidaunade
lasalarmas.
Verificar si funcionan los ventiladores del
evaporador.
Se requiere una verificacin completa
del sistemade refrigeracin.Llamar al
servicio tcnico especializado.
Verificar si el voltaje de alimentacin es
el correcto.
o internacionales. El voltaje no debe variar

ms de +10 % o 5 % del voltaje de placa.
Hay refrigeradores que demandan potencias de aproximadamente 12 kw, por lo que
es indispensable una acometida elctrica
dimensionada a tales cargas.
2. Seleccionar un lugar que disponga de
piso firme, bien nivelado en todos
los sentidos y ventilado y libre de la
influencia de la luz solar directa o de
la influencia de fuentes de calor.
Algunos fabricantes esti- pulan la
temperatura
ambiente
adecuada
entre los 10 C y los 32 C. El espacio
libre a los costados y en la parte
trasera debe ser de al menos 15 cm.
La puerta se debe poder abrir
libremente hasta un ngulo de 90.
Normalmente, los fabricantes incluyen aditamentos para la nivelacin
del
203
refrigerador, ubicados en la base, jun to con

lossopor tes o rodamientos de sustentacin.
ENCENDI DO DEL REFRIGERADOR

Para entender los procedimientos de operacin del refrigerador, se ha preparado un esquema de un tablero de control similar a los
que utilizan los refrigeradores en mencin. El

esquema es de tipo general, por lo que seguramente se encontrarn diferencias con los
controles que utilizan los diversos fabricantes.
El mismo se incluye a continuacin y es bsico
para entender los procedimientos de operacin
que se explican en seguid a.
Ilustracin 52: Control refrigerador ultrabaja temperatura
Procedimien tos
1. Conectar el cable de alimentacin elctrica
a la toma de suministro elctrico.
2. Girar la llave, a la posicin de encendido .
La pantalla debe ilumin arse indicando la
temperatura del gabinete y un diodo emisor de luz indicar que el refrigerador se
encuentra energizado. Esta accin pondr
en marcha el compresor y los ventiladores
del evaporador y del condensador.
3. Seleccionar la temperatura de operacin del
refrigerador, por lo general, se accionan varios botones de forma simul tnea; el botn
correspondi ente al control de temperatura
y los botones para incrementar o disminuir la
temperatura. Una vez seleccionada la temperatura deseada, se liberan los controles.
La pantalla mostrar la temperatura de
operacin seleccionada. Esperar un tiempo

adecuado para que el refrigerador alcance la
temperatura seleccionada.
4. Seleccionar las temperaturas lmite a
las que debern accionarse las
alarmas.
Generalmente,
las
temperaturas lmites superiores e
inferiores no varan ms de un 10 %
de la temperatura de operacin. Las
alarmas, por lo general, se ajustan
cuando ya el refrigerador ha
obtenido una temperatura cercana a
su
punto
de
operacin.
El
procedimiento consiste en activar el
control de alarmas y seleccionar las
temperaturas lmites superiores e
inferiores, de forma que se active la
alarma si por algn motivo se
exceden dichos lmites. Se debe
seguir el procedimiento que recomienda el fabricante. Usualmente,
el control dispone de un botn que
permite desactivar las alarmas y
tambin de la opcin para probar

el funcionamiento de las mismas.
204
Refrigerador
5. Los
refrigeradores
de
ultrabaja
temperatura disponen de otra serie de
alarmas que avi- san a los operadores
sobre la ocurrencia de eventos que
pudieran
afectar
el
adecuado
funcionamiento del refrigerador. Entre los
mismos se encuentran los siguientes:
Falla en la alimentacin elctrica
Bajo voltaje
Temperatura ambiente demasiado alta
Temperatura de lmite superior superada
Temperatura de lmite inferior superada
Las rutinas de mantenimiento de los refrigeradores de baja temperatura se encuentran
enfocadas a los siguientes aspectos:

Frecuencia: Cada 6 meses
1. Retirar la rejill a pro tectora.
2. Retirar y limpi ar el fil tro. Si est demasiado obstruido , sustituir por otro de las mismas caractersticas del origin al.
3. Verificar el funcionamiento del ventilador.
4. Aspirar el
difusoras.
condensador
sus
aletas
5. Reinstalar la rejill a pro tectora y el fil tro.

Adver tencia:Si el condensador no se limpi a,
se interfiere el proceso de transferencia de
calor y el refrigerador podra "calentarse" o
funcionar con temperaturas diferentesa
lasseleccionadas.
Integridad del sello de la puer ta
Se recomienda que, de forma peridica, se veri
fique la integridad del sello de la puerta. El
mismo debe permanecer en buen estado y no
presentar roturas, pinchazos o rasgaduras.
18
Descongelar
Cuando sea necesario descongelar el
refrigerador, debe procederse de la
siguiente manera:
1. Trasladar los productos que se
mantienen refrigerados a otro
refrigerador de caractersticas
similares de operacin.
2. Apagar el refrigerador y permitir que
el interior del mismo alcance la
3. Retirar el hielo y el agua
acumulada en el interior del
refrigerador.
4. Si se presentan olores extraos,
lavar el interior del refrigerador
con bicarbonato de sodio y agua
tibia.
Mantenimien to de la batera del

sistema de alarma
Frecuencia: Aproximadamente cada dos o tresaos
Usualmente, la batera del sistema de alarma
debe cambiarse una vez que haya completado su ciclo de vida til. Para sustituirla se procede como se describe a continuacin.
1. Remover la tapa fron tal. Por lo general,
la(s) batera(s) se encuentra(n) inmediatamente detrs de la misma.
2. Desconectar los terminales de conexin.
3. Retirar la batera agotada.
4. Instalar una batera de las mismas caractersticas de la origin al.
5. Conectar los terminales.
6. Reinstalar la tapa.
5. Limpiar
el
exterior
con
un
detergente suave, secar y luego
aplicar una cera protectora.
Adver tencia: Nunca utilizar elementos
corto- punzantes para retirar el hielo o la
escarcha del evaporador. Tal accin puede
perforar la pared del evaporador y permitir la
fuga del fluido refrigerante, causando una
falla grave que solo puede ser reparada en un
taller especializado.
205
PROBLEMA
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Indicador de bajo voltaje

encendido.
Voltaje inadecuado en la toma de

alimentacin elctrica.
Verificar el voltaje de alimentacin.

Compro- bar
la
acometida
y
lossistemasde proteccin de la misma.
Indicador de filtro sucio encendido.
Verificar limpiezadel filtro.
Limpiar el filtro de proteccin del

condensador. Si el mismo est saturado
de suciedad, sustituir por otrode
lasmismascaractersticas del original.
Indicador de batera baja

encendido.
Batera agotada.
Sustituir batera por otra de las mismas

especificacionesde la original.
El refrigerador no funciona.
Equipo desconectado.
Conectar el equipo a la toma de

alimentacin elctrica.
Fusible quemado.
Sustituir fusible por otro de lasmismas

caractersticasdel original.
Temperatura de operacin
seleccionada a un punto muy
bajo.
Condensador
sucio.
Disminuir la temperatura
seleccionada.
Ventilacin inadecuada.
Verificar y corregir la ventilacin.
Equipo congelado.
Descongelar el refrigerador.
El refrigerador funcionade forma

continua.
El refrigerador funciona de forma
con- tinuasin efecto frigorfico.
Limpiar condensador.
Otros procedimientos adicionalesde mantenimiento requieren de herramienta e instrumentacin especializada.
DEFINICIONES BSICAS
BTU. Unidad para determinar la transferencia
de calor en el Sistema Ingls. BTU es el acrnimo de British Thermal Unit. Un BTU es la
cantidad de calor que debe ser transferido
para aumentar la temperatura de una libra
de agua de 63 F a 64 F.
Calor. Forma de energa transferida, a travs
del lmite de un sistema a una temperatura dada, a otro sistema o vecindario a una menor
temperatura, por virtud de la diferencia de temperatura entre los dos sistemas. Cuando un sistema de gran masa [M] es puesto en contacto
con otro sistema de pequea masa [m] que se
encuentra a temperatura diferente del primero,
se observa que la temperatura resultante final
se encuentra cerca de la temperatura inicial del
sistema de mayor masa. Se dice entonces que
una cantidad de calor Q ha sido transferida del
sistema de mayor temperatura al sistema de
me- nor temperatura. La cantidad de calor Q
es propor cional al cambio en temperatura T.
La constante de propor cionalidad [C], llamada
la capacidad calrica del sistema, permite
establecer la siguiente relacin Q=CT , de
la cual se
infiere que una de las consecuencias del

cambio de temperatura en un sistema es la
transferencia de calor.
Calora . Cantidad de calor que debe ser
transferida a un gramo de agua, para que su
temperatura aumente 1 C. Esta definicin
aplica exactamente cuando, a condiciones
normales (presin atmosfrica igual a 760 mm
Hg, aceleracin de la gravedad igual a 9,81
m/s2), la temperatura del gramo de agua
aumenta de 14,5 a 15,5 C.
Calor especfico. Cantidad de calor requerida para aumentar en un grado la unidad de
masa.
Calor latente. Cantidad de energa trmica
requerida para que en una sustancia ocurra un
cambio de fase. Por ejemplo: de fase lquida
a fase vapor.
Calor sensible . Cantidad de energa requerida para aumentar la temperatura del fluido
refrigerante, al absorber calor. Por ejemplo:
cantidad de calor requerida para aumentar la
temperatura de 15 a 20 C, o de 30 a 40 C.
206
Refrigerador
Entropa . Propiedad del estado de un sistema de ml tiples partculas. Los cambios diferenciales de entropa se expresan mediante la
ecuacin siguiente:
dS =
dQ
T
dond e:
dQ: calor absorbido de una reserva a temperatura T durante un cambio infini tesimal
reversible del estado
T:
temperatura de la reserva
18
Fluido refrigeran te. Sustancia que se utiliza

como medio en los procesos de absorcin de
calor.
Mquina trmica. Dispositivo que opera en
un ciclo termodin mico y realiza una cierta
cantidad positiva de trabajo como resultado
de la transferencia de calor entre un cuerpo a
alta temperatura a un cuerpo a baja
temperatura.
Proceso adiab tico. Proceso en el cual no
hay transferencia de calor. Implica que Q = 0.
Para cualquier ciclo reversible se cumple la siguiente ecuacin:

dQ
S = dS =
=0
Si el ciclo es irreversible, se tiene que:

dQ
S =
<0
Bibliogra fa
General purpose laboratory refrigerator/freezer, Instruction Manual, Pittsburgh , Fisher Scientific, Part N 1027
Gordon , J., Sonn tag, R., Fundamentals of Classical Thermodynamics, New York, John Wiley and Sons, 2nd. Ed
Hernndez, E., Fundamentos de aire acondicionado y refrigeracin, Mxico, Editorial Limu- sa, 1973.
Instruction Manual, Fisher Scientific Isotemp Laboratory Freezers, Part N 102999, Rev. H. Pittsburgh , Fisher S
Installation and Operation, Laboratory Refrigerators, REVCO. ( t/manuals/labfrz2.pd f)
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207
208
www.paho.org
de la Salud
W
Organizacion
Panamericana
Ofk:ma Regional de la
Organizaci6n Mundial de la Salud

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Este manual ha sido desarroll ado con el fin

aquellas de mayor utilizacin en laboratorios de baja o media complejidad tcnica.

podran facili tar su correcta

10. Describe las rutinas bsicas de

mensuales, semestrales, anuales y eventuales. Dichas rutinas se han numerado y

comprender el signi ficado de algunos trminos utilizados.

Denominacin (es) ECRI

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Ilustracin 1: Conjun to de equipos para pruebas ELISA

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8. Cumplido el tiempo de incubacin, se

implemen- tados en el pas. En los

Explicaciones ms detalladas deben ser consultadas en li teratura especializada.

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