Pract 5 Formula Roja

Universidad Veracruzana
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica

Laboratorio de Hematologa
Prctica No. 5. FRMULA ROJA

1. Fundamento
a) Recuento eritrocitario
Los estudios cuantitativos de los elementos formes de la sangre se refiere a
la concentracin de cada uno de ellos en un microlitro (mm 3) de sangre.
El recuento de eritrocitos consiste en diluir la sangre con un diluyente
apropiado, el cual debe isotnico para evitar la lisis y la estructura dentada de los
eritrocitos, adems debe prevenir la aglutinacin; la dilucin deber hacerse en
proporcin exacta y posteriormente se examinar al microscopio un volumen
conocido de la muestra del hemacitmetro (cmara de Neubauer), contando el
nmero de elementos que se encuentran en la retcula de la cmara y mediante
una operacin matemtica se obtiene se obtiene la cifra total de clulas.
Los glbulos rojos son las clulas sanguneas que contienen en su interior
la hemoglobina, son clulas pequeas, delgadas y en forma de disco cncavo por
ambas caras. Los glbulos rojos son los principales portadores de oxgeno a las
clulas y tejidos del cuerpo. Su forma bicncava principalmente es para adaptarse
a una mayor superficie de intercambio de oxgeno por dixido de carbono en los
tejidos. Adems su membrana es flexible lo que permite a los glbulos rojos
atravesar los ms estrechos capilares. Son indiscutiblemente los cuerpos slidos
ms abundantes en el torrente sanguneo. Adems, trabajan incesantemente
recorriendo el aparato circulatorio alrededor de 300 000 veces antes de envejecer
y desintegrarse.
La funcin de los glbulos rojos es el transporte de oxgeno que es
necesario para producir energa en los diferentes tejidos a los que entra en el
cuerpo humano a travs de los pulmones. Atraviesa las membranas de los
alvolos pulmonares y es captado por los glbulos rojos unindose a la
hemoglobina. Luego es transportado por el sistema circulatorio a los tejidos. El
oxgeno se difunde a travs de la pared de los capilares para llegar a las clulas.
Cortazar Murillo Elvis M., Vzquez Garca Vania G., Zrate Hernndez Carlos.
Al mismo tiempo, el CO2 que producen las clulas es recogido por la hemoglobina
de los glbulos rojos y es transportado a los pulmones, en donde es expulsado.
La formacin continuada de eritrocitos o glbulos rojos se denomina
eritropoyesis. Esta constituye un sistema de renovacin continua, es decir que sus
elementos celulares poseen vida media limitada por lo cual deben ser
reemplazados en forma peridica. A la misma categora pertenecen las clulas de
la piel, las del tracto gastrointestinal y las testiculares. Por el contrario, existen
clulas que no son reemplazadas una vez que ha finalizado el crecimiento del
rgano al que pertenecen (por ejemplo, las del sistema nervioso y de los msculos
cardaco y esqueltico), o bien slo lo son luego de alguna lesin (como sucede
con las del tejido conectivo, del hgado o del rin).
En condiciones normales la produccin de eritrocitos constituye una
magnitud constante: alrededor de 30 ml por kilogramo de peso corporal. Los
eritrocitos viven, en el ser humano, 120 das. Este hecho determina la necesidad
de un reemplazo inmediato para impedir que se modifique el volumen de
eritrocitos circulantes. Alrededor de 20 ml de eritrocitos desaparecen por da de la
circulacin y, por tanto, idntica cantidad debe ser producida por el organismo en
el mismo lapso. El proceso de eritropoyesis en el ser humano demora entre 5 y 6
das, y ocurre en la mdula sea del esternn, de los huesos largos y de las
costillas.
Los factores necesarios para su produccin:
-
La vitamina B12: es un factor necesario para la sntesis y la multiplicacin

de las clulas. Puesto que las clulas madre de la mdula sea deben
multiplicarse muy rpidamente para producir glbulos rojos, la falta de
vitamina B12 origina anemia. La anemia por falta de vitamina B12 se
denomina anemia perniciosa. Para la absorcin de la vitamina B12, es
necesario que se una a un factor intrnseco, producido en la pared del
estmago. Una alteracin en la pared gstrica puede producir anemia
perniciosa por falta de absorcin de la vitamina B12.
El cido flico: tambin es necesario para la sntesis de glbulos rojos, y su

falta en la dieta tambin puede producir anemia.
El hierro: es necesario para la produccin de hemoglobina. En todo el

organismo hay entre 4 y 5 gramos de hierro, la mayor parte se encuentra en la
hemoglobina. En el hombre las necesidades de hierro son de 0.6 miligramos al
da para compensar la cantidad que se pierde por las heces. En la mujer las
necesidades de hierro son aproximadamente el doble que en el hombre,
debido a las prdidas en la regla o menstruacin.
La prdida accidental de eritrocitos (como es el caso de una hemorragia),
aumenta notablemente la magnitud de la eritropoyesis hasta restablecer el

volumen globular perdido. Si, por el contrario, mediante transfusiones de sangre
se aumenta el volumen de eritrocitos, la eritropoyesis cesa hasta que la muerte
por senescencia posibilita el restablecimiento de los valores celulares normales.
Todo ello prueba que la eritropoyesis es controlada por importantes y sensibles
mecanismos que operan incrementando la produccin cuando disminuye el
nmero de eritrocitos o reduciendo la formacin de stos cuando dicho nmero
aumenta.
La formacin de eritrocitos es controlada por una hormona denominada
eritropoyetina (Epo). La misma estimula la proliferacin y diferenciacin de clulas
progenitoras, hecho que determina la aparicin de eritrocitos circulantes. La
principal funcin de los eritrocitos es el transporte de gases entre los pulmones y
los tejidos, y por tanto la oxigenacin tisular est ntimamente relacionada con la
produccin de eritrocitos a travs de la sntesis de Epo. Mediante mecanismos no
totalmente conocidos, la disminucin de oxgeno tisular estimula la produccin de
Epo, mientras que el exceso de oferta inhibe la sntesis de la hormona.
El conteo de glbulos rojos casi siempre forma parte de un CSC (conteo
sanguneo completo). Este examen puede ayudar a diagnosticar anemia y otros
problemas de salud que afectan los glbulos rojos. Afecciones adicionales bajo las cuales
se puede realizar el examen:
Sndrome de Alport
Anemia hemoltica inmunitaria inducida por medicamentos
Anemia hemoltica debido a la deficiencia de G6PD
Anemias hereditarias, como la talasemia
Anemia hemoltica autoinmunitaria idioptica
Anemia hemoltica inmunitaria
Macroglobulinemia de Waldenstrom
Hemoglobinuria paroxstica nocturna (HPN)
Mielofibrosis primaria
La hemoglobina fetal (hemoglobina F), es la principal hemoglobina del feto y

del recin nacido, resiste a la desnaturalizacin por lcalis, no se desnaturaliza por
la incubacin durante 1 minuto a 20C con hidrxido de sodio 1/12 N. Una muestra
de hemolisado problema se alcaliniza y despus se neutraliza; la hemoglobina
desnaturalizada se hace precipitar con sulfato de amonio acidificado. Al filtrarse,
se obtiene una solucin que slo contendr la hemoglobina resistente a la accin
del lcali y que puede ser medida fotocolorimtricamente a una densidad ptica de
540 nm y expresada como un porcentaje del total de hemoglobina.
b) Cuantificacin de la concentracin de Hb (hemoglobina)
La sangre se hemoliza por agregado de un agente tensoactivo. Con el
ferricianuro de potasio se oxida el fierro ferroso de la hemoglobina a frrico para
producir metahemoglobina, el cianuro de potasio estabiliza a la metahemoglobina
como
cianometahemoglobina.
La
coloracin
producida
es
directamente
proporcional a la concentracin de hemoglobina presente.

La hemoglobina es una protena que contiene hierro lo que le da el color
rojo a la sangre, por ello el nombre de glbulos rojos o Eritrocitos: eritro (rojo) +
citos (clulas).
Una de las propiedades ms importantes de la hemoglobina es su

extraordinaria capacidad para combinarse con el oxgeno en cuanto las dos
sustancias entran en contacto, lo que ocurre en los pulmones. Cada molcula de
hemoglobina que pasa por ellos recoge hasta cuatro molculas de oxgeno y las
transporta a todos los tejidos del organismo a travs del torrente sanguneo. Tan
importante como sta es la funcin que desempean los glbulos rojos recogiendo
el bixido de carbono que producen las clulas al desdoblar los nutrientes.
Las cuatro cadenas polipeptdicas de la Hb contienen cada una un grupo
prosttico, el Hem, un tetrapirrol cclico, que les proporciona el color rojo a los
hemates. Un grupo prosttico es una porcin no polipeptdica que forma parte de
una protena en su estado funcional. El tomo de hierro se encuentra en estado de
oxidacin ferroso (+2) y puede formar 5 o 6 enlaces de coordinacin dependiendo
de la unin del oxgeno a la Hb (oxiHb, desoxiHb). Cuatro de estos enlaces se
producen con los nitrgenos pirrlicos de la porfirina en un plano horizontal. El
quinto enlace de coordinacin se realiza con el nitrgeno del imidazol de una
histidina denominada histidina proximal. Finalmente, el sexto enlace del tomo
ferroso es con el O2, que adems est unido a un segundo imidazol de una
histidina denominada histidina distal. Tanto el quinto como el sexto enlace se
encuentran en un plano perpendicular al plano del anillo de porfirina. La parte
porfirnica del Hem se sita dentro de una bolsa hidrofbica que se forma en cada
una de las cadenas polipeptdicas.
c) Determinacin del Hematocrito
Se realiza por el mtodo de microhematocrito y por el mtodo de Wintrobe.
d) Clculo de ndices eritrociticos.
Se lleva a cabo mediante las siguientes formulas de Wintrobe:
hematocrito X 10
1. VCM (Volumen Corpuscular Medio) No . d eeritrocitos(en millones por mm 3) =
Se expresa en micras cbicas (3) o femtolitros (fl) y representa el volumen medio

de los hemates individuales. Los valores de referencia: 82 a 98 fl.
2.
HCM
Hemoglobina
(Hemoglobina
Corpuscular
Media)=
( dLg ) X 10
No . de ritrocitos( en millones por mm 3)

Se expresa en picogramos (g) o micro micro gramos (g) y representa el
contenido medio en peso de hemoglobina en un hemate individual. Valores de
referencia: 27 a 33 g.
3.
CCMH
Hemoglobina
(Concentracin
Corpuscular
Media
de
Hemoglobina)=
( dLg ) X 100
Hematocrito
Se expresa en % o en g/dL y representa la concentracin media de hemoglobina
por 100 mL de hemates concentrados. Valores de referencia: 31 a 35 %.
e) Observacin de anormalidades de los eritrocitos
Se basa en la elaboracin de extendidos sanguneos (frotis) y su tincin con
un colorante policromo, lo cual permtela observacin de la morfologa de sus
elementos formes.
Los colorantes policromos de azul de metileno y eosina derivados del
mtodo original de Romanowsky sirven para la tincin diferencial de la mayora de
estructuras normales y anormales de la sangre. La mayor parte se disuelven en
alcohol metlico y combinan la fijacin y la tincin. Se han ideado numerosos
mtodos para la preparacin y aplicacin de estos colorantes siendo los ms
conocidos los de Giemsa y Wright.
Colorantes de Wright: Este colorante se llama poli cromtico porque

produce varios colores, de acuerdo a la composicin qumica de los componentes
celulares. Es una solucin en alcohol metlico de un colorante cido (eosina) y otro
bsico (azul de metileno). El citoplasma de los eritrocitos es cidofilo por los que
toma el colorante cido, tindose de color rosado. Los ncleos, en caso de
encontrarse eritoblastosis y algunas otras estructuras se tien con el colorante
bsico, por lo que se denominan basfilas. El colorante de Wright es uno de los
mejores y ms empleados, permitiendo la observacin de la morfologa de los
glbulos rojos.
2. Resolucin preguntas gua
1.- Describe las caractersticas de la cmara de Neubauer, sus medidas y su
volumen.
Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas y
que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un diamante una
cuadrcula de dimensiones conocidas. Se cubre la cmara con un cubrecmaras
que se adhiere por simple tensin superficial. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con
una separacin entre dos lineas consecutivas de 0.25 mm. As pues el rea
sombreada y marcada L corresponde a 1 milimetro cuadrado. La depresin central
del cubreobjetos est hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que
cuando se cubre con un cubreobjetos ste dista de la superficie marcada 0.1
milmetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de
0.1 milmetro cbico, es decir 0.1 microlitro.
2.- Si en lugar de hacer el recuento de eritrocito utilizando una dilucin 1:200 se

requiere utilizar una dilucin 1:100 Cmo haras esta dilucin? Cmo se haran
los clculos?
Se llenara hasta marca 1 en vez de 0.5 y en los clculos:
Volumen de 80 cuadros = 0.01 mm3, La dilucin de la sangre = 100, y El clculo
de clulas, seria:
N x 100 x 1/0.01
N x 100 x 100
N x 10 000
Lo cual nos dara el mismo nmero de clulas que si utilizramos la dilucin

1:200, ya que el factor de multiplicaciones es igual 10 000.
3.- Cules pueden las diversas fuentes de error en esta determinacin?
Un mal conteo de eritrocitos en la cmara de Neubauer, que no est limpia
la cmara cuando se utilice, el diluyente no sea el correcto o este mal almacenado
y puede daar los eritrocitos.
4.- Bajo qu condiciones del paciente debe hacerse la toma de muestra para esta
determinacin, es decir se debe dar alguna indicacin especial?
No, puesto que es una determinacin que no tendr interferencia por efecto
de algn factor ajeno a la metodologa o determinacin.
5.- Cules pueden ser las causas de que un paciente tenga elevado o disminuido
su recuento de eritrocitos?
El conteo de glbulos rojos se incrementar durante varias semanas
cuando el paciente se traslade a una altitud mayor.
Los frmacos que pueden incrementar los conteos de glbulos rojos abarcan:
-
Gentamicina
Metildopa
Los nmeros de glbulos rojos ms bajos de lo normal pueden deberse a:

-
Anemia
Insuficiencia de la mdula sea (ejemplo, por radiacin, toxinas o tumor)
Deficiencia de eritropoyetina (secundaria a enfermedad renal)
Hemlisis (destruccin de glbulos rojos) debido a transfusin, lesin
vascular u otra causa

Hemorragia (sangrado)
Leucemia
Desnutricin
Mieloma mltiple
Deficiencias nutricionales de:

-
hierro
cobre
Sobrehidratacin
Embarazo
folato
vitamina B12
vitamina B6
Los frmacos que pueden disminuir el conteo de glbulos rojos son, entre otros:
Frmacos quimioteraputicos
Cloramfenicol
Hidantona
Quinidina

1.- Qu es la hemoglobina y cul es su funcin en nuestro organismo?
La hemoglobina es una protena que contiene hierro y que le otorga el color
rojo a la sangre. Se encuentra en los glbulos rojos y es la encargada del
transporte de oxgeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos y tambin
transporta el dixido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de
produccin de energa, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire.
2.- Qu otros mtodos existen para la determinacin de hemoglobina?
Mtodo para la determinacin cuantitativa de hemoglobina en sangre
completa sin diluir, ni hemolizar que comprende las etapas de: proporcionar una
cubeta capilar desechable, que tiene una longitud de camino ptico inferior a 1
mm; rellenar dicha cubeta con una muestra de sangre completa sin alterar; llevar a
cabo una primera medicin de absorcin a una primera longitud de onda en el
intervalo de 490 - 520 nm directamente sobre la muestra en la cubeta, llevar a
cabo adems una segunda medicin de absorcin a una segunda longitud de
onda diferente de la primera longitud de onda y en la que la absorcin es
sustancialmente menor que en la primera longitud de onda, y procesar los
resultados de la primera y segunda mediciones de absorcin para determinar la
concentracin de hemoglobina en la muestra, en la que la etapa de procesamiento
comprende compensar la dispersin en la muestra, siendo dependiente dicha
compensacin del resultado de la segunda medicin de absorcin, caracterizado
porque dicho procesamiento determina la concentracin de hemoglobina en la
muestra calculando la siguiente frmula: [Tot Hb]= (Abs1 - Abs2)k + F(Abs2) en la
que [Tot Hb] es la concentracin total de hemoglobina en la muestra, Abs1 es la
absorbancia medida de la primera medicin de absorcin, Abs2 es la absorbancia
medida de la segunda medicin de absorcin, k es un coeficiente de calibracin,
10
que depende de la disposicin de medicin, y F(Abs2) es una funcin que

depende de la absorbancia medida de la segunda medicin de absorcin.
3.- Cules son las ventajas de este mtodo?
La ventaja de este mtodo es que mide la mayora de las formas de la
hemoglobina (Hb, Hb02, Hi y HbCO).
4.- Qu precauciones deben tenerse al utilizar el lquido diluyente?
Cuidar la temperatura a la que est expuesto el reactivo, no exponerse
demasiado tiempo a el, debido a que el KCN es venenoso, no debe acercarse a
soluciones o reactivos cidos ya que forma HCN, se debe eliminar por el fregadero
con suficiente agua para evitar corrosin en las tuberas.
5.- En qu casos se encuentra aumentada o disminuida la concentracin de
hemoglobina en un paciente?
Cuando el nivel de hemoglobina en un anlisis aparece debajo de los niveles
normales se est describiendo una anemia que luego puede ser de diferentes
orgenes:
-
Anemias primarias
Enfermedades autoinmunes
Cncer
Hemorragias
Embarazo
Linfomas
Enfermedades renales
Problemas de alimentacin
11
-
El nivel bajo de hemoglobina suele acompaarse de un nivel de hematocrito
bajo.
-
Si el nivel de hemoglobina aparece alto puede deberse a:
Cardiopatas
Deshidratacin
Enfermedades pulmonares crnicas
Estancias en lugares de mucha altitud
e) observacin de anormalidades de eritrocitos
1.- Describe las distintas anormalidades morfolgicas que pueden

presentarse en los eritrocitos.
Normocrmicos
Eritrocitos de color rojizo en una
tincin de Wright, son
ligeramente ovoides con el
centro refractante proporcional a
tamao.
Hipercrmicos
Eritrocitos coloreados de rojo
oscuro, con la zona refringente
casi nula.
Color
- Hipocrmicos
- Eritrocitos de poco coloracin,
ligeramente rosas con la porcin
refringente mucho mayor.
Anisocrmicos
Combinacin de eritrocitos
hipercrmicos e hipocrmicos
observados en una tincin de
Wright.
- Tamao
Normocitos
- Macrocitos
Clulas de tamao uniforme
- Clulas de gran tamao, con
ligeramente ovoides, con una
una zona refringente apenas
zona refringente proporcional al
visible, llegando a observarse
tamao, de un tono rojizo.
casi esfricos.
Anisocitosis
- Microcitos
Se observa la combinacin de
- Clulas de menor tamao, casi
clulas macro y microciticas.
la cuarta parte de una clula
eritrocitica normal, con una zona
refringente mayor a la normal.
- Forma
Eliptocitos
- Esferocitos
12
Clulas de forma elptica

alargadas, con una zona
refringente casi nula.
Clulas en diana
Clulas con apariencia de una
diana semiredondos,que
comienza desde el centro con un
punto rojo seguido de un aro
refringente y un aro
coloreado.Presentes en
hemoglobina anormal de clulas
C.
Esquistocitos
Pedazos de eritrocitos,
observados en anemias
hemolticas.
Estomatocitos
Clulas que asemejan granos
de caf redondos, cuya zona
refringente se encuentra
alargada. Se observa cuando
existe exceso de aglutinante.
Acantositos
Clulas con borde
estrellado,puntiagudo.
Eritrocitos esfricos cuya zona

refringente ha desaparecido,
debido a la redondez de la
clula.
Crenocitos
Clulas con el borde ondulante
asemejando una corcholata, con
una zona refringente difusa.
Dacrocitos (clulas en forma de

lagrima)
Clulas cuya forma recuerda a
una pera alargada o una
lagrima.
Drepanocitos (clulas
falciformes)
Se observan clulas en forma de
luna creciente. Se puede inducir
a un eritrocito mediante
metasulfito de sodio.
Poiquilocitocis
Se observan diferentes formas
de eritrocitos. Caractersticos de
anemias por deficiencia de
hierro.
Normocitos
Clulas eritrociticas ligeramente
ovoides con una zona refringente
proporcional al tamao.
- Variaciones estructurales
Basofilia difusa
- Punteado basofilo
Se observan los eritrocitos
- Se observan clulas rosadas
coloreados de tono azuloso,
con pequitas
aumentados de tamao con una
azules,ligeramente grandes.
zona refringente nula.
Cuerpos de Howell-Jolly
- Siderocitos (cuerpos de
Clulas rosceas con un
Pappenheimer)
13
fragmento azulado en su interior

(probablemente fragmentos de
ncleo no expulsado.
Se observan estructuras verdeazulosas, dentro de clulas con

borde ondulante. Se requiere de
azul de Prusia para poder
observarlos.
Anillos de Cabot
- Cuerpos de Heinz
Se observan restos de
- Pequeas granulaciones en la
membrana nuclear, que
periferia de la clula, que se
asemejan un ocho, puede llegar
observan con violeta de metilo o
a ocupar toda la periferia celular.
cristal violeta. Es precipitado de
hemoglobina desnaturalizada.
- Variaciones en la distribucin de los eritrocitos
Rouleaux (pilas de moneda)
- Aglutinacin
Se observan los eritrocitos
- Eritrocitos aglomerados
apilados unos sobre otros,
semejando una mancha o
asemejando pilas de moneda o
racimo de uvas tupido, sucede
cadenas compactas.
por el desencadenamiento de
una reaccin de tipo
inmunolgico.
3. Material, reactivos y equipo
Material:
Material necesario para la extraccin de sangre.

4 tubos de ensaye de 13 x 100.
1 pipeta de Thoma para eritrocitos con boquilla.
1 cmara de Neubauer con cubreobjetos.
1 pipeta graduada de 5 ml.
1 pipeta de Sahli con boquilla o una micropipeta de 20 l.
Reactivos:
E.D.T.A. al 10 %.
Solucin de Gower (lquido diluyente).
1 frasco de solucin estndar de Hb.
Solucin diluyente de Drabkin (cianometa).
Equipo:
Microscopio.
14
Agitador mecnico para pipetas.

Espectrofotmetro con adaptador y 4 celdas.
4. Tcnica
1.- Obtener sangre venosa en la forma acostumbrada. Colocarla en un tubo

de con anticoagulante y mezclar bien por inversin del tubo.
2.- La punta de pipeta de Thoma para glbulos rojos se coloca debajo de la

superficie de la sangre que entonces se aspira rpidamente hasta la marca
0.5; no deben existir burbujas de aire en la columna de sangre. Si la sangre
se eleva ligeramente por encima de la marca, puede extraerse hasta llegar
a ella mediante pequeos golpecitos en la punta de la pipeta sobre el dedo.
Es preciso limpiar cualquier resto de sangre que est en la parte externa de
la pipeta.
3.- La punta se sumerge en el lquido diluyente manteniendo la pipeta

inclinada (en ngulo de 45) y se empieza a aspirar el lquido; cuando se ha
llenado cerca de la mitad, se coloca la pipeta en posicin vertical y se
termina de llenar exactamente hasta la marca 101. En esta fase la sangre
se ha diluido 1 a 200.
4.- Se retira con cuidado el tubo de hule y la boquilla; los extremos de la

pipeta se cierran con los dedos pulgar y medio y se agita durante 30 seg.
para facilitar la mezcla inicial. La bolita situada en el bulbo de la pipeta debe
moverse libremente.
5.- La pipeta se sostiene entre los dedos pulgar y medio o en un agitador

mecnico especial y se agita durante 2 o 3 min. Cuando se ha limpiado la
cmara de recuento y el cubreobjetos, ste se colca sobre la cmara, en las
areas de recuento.
15
6.- Se expulsaran las 3 o 4 primeras gotas para eliminar el lquido sin

clulas del tubo capilar. La pipeta se sostiene en un ngulo de unos 30,
mientras la punta se sita en el ngulo entre el borde del cubreobjetos y
uno de los extremos salientes de la pieza base. El lquido se extender por
debajo del cubreobjetos por atraccin capilar.
7.- Las caractersticas de una cmara de recuento que ha sido llenada en

forma adecuada son que el lquido llene por completo o poco menos el
espacio situado debajo del cubreobjetos, que ninguna porcin del lquido se
haya deslizado al foso y que no existan burbujas. Si no se cumple ninguna
de estas situaciones, el recuento puede carecer de garanta y la cmara
debe limpiarse, secarse y recargarse.
8.- Se dejara en reposa la cmara durante 3 minutos para que las clulas
se depositen.
9.- El recuento se efectuara en el cuadro central de la cmara, el cual est

dividido en 25 cuadros y stos a su vez en 16 cuadros ms pequeo. El
recuento se efectuara en 5 cuadros de las ms grandes (los de ms
esquinas y el central) que corresponde a 80 cuadros de los ms pequeos.
Las clulas se encuentran en cada uno de los cuadros pequeos, primero
de izquierda a derecha, empezando por la parte superior de 4 cuadros
pequeos y luego de derecha a izquierda para la prxima hilera y as
sucesivamente. Las clulas que estn situadas tocando las lneas que
limitan los bordes superior e izquierdo de cada cuadrado ms pequeo se
incluyen en el recuento y se excluyen los de los lmites inferior y derecho. El
nmero de clulas para cada uno de los 5 grupos de 16 cuadros se registra
por separado y se suman los resultados. Esta suma ser N. dicho recuento
se har con objetivo de 40x.
Valores de referencia:
Recin nacido: 4.4- 5.8 x 1012/l

Al ao: 3.8-5.2 x 1012/l
16
Nios de 2-12 aos: hombres: 4.5-5.3 x 1012/l

Mujeres: 4-5 x 1012/l
Adulto masculino: 4.6-6.3 x 1012/l
Adulto femenino: 4.2-5.2 x 1012/l
A partir de los 50 aos puede disminuir fisiolgicamente un poco el RBC
(recuento de hemates).
1.- Colocar en un tubo de ensaye exactamente 5ml de solucin diluyente de

Drabkin.
2.- La muestra de sangre puede tomarse de una puncin capilar que fluya
libremente o de una vena. En el ltimo caso hay que mezclar bien la
muestra en el tubo antes de tomar la alcuota. Se llena la pipeta de Sahli
con sangre entera hasta la marca, la cual corresponde exactamente a 0.02
ml (20 microlitros), limpiando perfectamente su parte exterior y se vaca al
tubo de ensaye que contiene el diluyente, enjuagando la pipeta varias
veces con el mismo. Tambin puede utilizarse una micropipeta.
3.- Mezclar la sangre y el diluyente invirtiendo varias veces el tubo. Se deja

en
reposo
durante
10
min.
para
permitir
la
formacin
de
la
cianometahemoglobina, la cual es estable por varias horas.

-
4.- Ajustar la escala de longitud de onda del espectrofotmetro a 540 nm.
5.- Emplear como blanco agua destilada o la solucin diluyente. La luz que
absorbe el diluyente a 540 nm es insignificante.
6.- Ajustar el blanco a 100 en la escala de transmitancia (T) o a 0 en la

escala de densidad ptica o absorbancia. (D.O. o A).
7.- Leer la densidad ptica del problema y calcular la concentracin de

hemoglobina mediante el factor correspondiente, aplicando la siguiente
frmula:
Concentracin del STD .

Lectura del STD
17
Concentracin de Hb (gr/dl) =
X Lectura del problema
Valores de referencia:
Recien nacido: 170-215 g/l o 17.1-21.5 g/dl

Al ao: 99-145 g/l o 9.9-14.5 g/dl
Adulto masculino: 140-180 g/l o 14-18 g/dl
Adulto femenino: 120-160 g/l o 12-16 g/ dl
e) observacin de anormalidades de los eritrocitos:
1.- Preparar frotis sanguneos en portaobjetos o cubre objetos tal como se

describi en la prctica No. 2
2.- Colocar la placa con la extensin secada al aire hacia arriba en un

puente de tincin.
3.- Cubrir la extensin con lquido colorante mediante un gotero. Emplese

suficiente cantidad de colorante con el fin de evitar la evaporacin excesiva
y la precipitacin consiguiente, sin embargo tampoco debe ser tan
abundante que rebose y se derrame.
4.- Dejar reposar durante 3 minutos y aadir sobre el lquido colorante en la

extensin una cantidad ms o menos igual de solucin amortiguadora con
un segundo gotero. Para conseguir la mezcla del colorante con el diluyente
se sopla con suavidad en varios puntos de la placa para establecer
corrientes suaves igualando as la distribucin. Dejar reposar de 8 a 10
min., esperando la aparicin de una capa metlica verdosa.
5.- Quitar el colorante con un chorro de agua destilada, primero suave y

luego ms fuerte hasta que haya desaparecido todo exceso de aquel,
manteniendo siempre horizontal la placa. El lavado tardar de 5 a 30
segundos.
6.- Despus del lavado, quitar el exceso de agua inclinando la placa y

tocando con un papel secante el borde inferior. Limpiar la parte posterior del
porta o cubreobjetos.
18
7.- Secar las preparaciones al aire.
8.- Si se utilizan cubreobjetos, montarlos con la extensin hacia
abajo
sobre un portaobjetos con blsamo de Canad o bien una gota de aceite de

inmersin
-
9.- Examinar minuciosamente la extensin con objetivo de inmersin en

aceite. Clasificar y anotar las anormalidades que se observen en los
eritrocitos.
5. Observaciones
-
La muestra se realiz con la sangre de la paciente que presentaba
amenaza de aborto. Se obtuvieron resultados variados, lo que puede deberse a: el

tiempo en el que se recogi la muestra (aprox. 5 h), la temperatura con la que se
trabaj, el traslado de la muestra, la estabilidad de los reactivos, el tiempo con el
que manejbamos nuestra muestra en los reactivos (calidad de los reactivos).
-
Figura 1. Frotis sanguneo: presencia de acantositosis, clulas diana,

anisocitosis, hipocroma, equinocitosis.
19
Figura 2. Cmara de Neubabuer; recuento eritrocitario: 2.53 x 10 12/l
Concentracin de Hb:
-
Bco: 0.007
Mtra: 0.325
Estndar: 14.9 g/dl, 0.597
Concentracin de Hb: 8.11 g/dl
VCM: 145.05 fl
CCMH: 22.09 %
HCM: 32.05 pg
Ht: 48%
6. Resultados
- Universidad Veracruzana
- Laboratorio de Hematologa
Paciente: Paciente del Hospital Regional de Xalapa Dr. Luis F. Nachon,

Sexo: FEMENINO.
Edad: 16 aos.
Localidad: Xalapa, Ver.
Prueba
Resultado
Valor de
referencia
20
Recuento
eritrocitario
- Hb
Ht (mtodo
Wintrobe)
VCM
- CCMH
- HCM
Frotis sanguneo
-
2.53 x 1012/l
8.11 g/dl
- 48%
- 145.05 fl
- 22.09%
- 32.05 pg
- Acantosiosis
-
4.2-5.2 x 1012/l
Clulas diana
-
Anisocitosis
Hipocroma
12-16 g/dl
- 38-50 %
80-100 fl
31-35 %
27-33 pg
Normocticas
Normocrmicas
-
- equinocitosis
Realiz: Elvis Marian Cortazar Murillo, Vania Gabriela Vzquez Garca,
Carlos Zrate Hernndez.
Responsable: M.A.C. Elea Vallejo Sol
7. Conclusiones
7.1. Elvis Marian Cortazar Murillo

-
La frmula roja es un examen completo que descarta posibles
anemias de diferente ende. Los resultados obtenidos varan en gran manera,

concluyendo que la paciente (debido a su riesgo de aborto) necesita cido flico
(debido a los ndices eritrocitarios bajos y al frotis sanguneo) y pudiera presentar
una deficiencia de vitamina B12. Puede estar presentando deficiencia de hierro
(debido a la Hb baja) lo que conlleva a alguna anemia ferropnica. Con respecto al
conteo eritrocitario, el resultado obtenido es errneo; creemos que es debido al
mal llenado de la cmara, pues es un resultado muy bajo.
-
7.2. Vania Gabriela Vzquez Garca

-
Se le realiz a la paciente uno de los exmenes ms completos
debido a los valores que incluye: la frmula roja. Hay que destacar que la paciente
presentaba una amenaza de aborto a una edad en la cual todava se est en
21
desarrollo(16 aos) por lo que en los resultados se esperara encontrar una Hb

baja (lo cual fue as) esto puede deberse a la amenaza que presentaba la paciente
aunque tambin podra significar una posible anemia o malnutricin lo cual se
contradice con el Ht el cual result de un valor dentro del rango de lo normal al
igual que el VCM
y el HCM pero difiere con el CCMH cuyo valor fue
considerablemente ms bajo de lo normal. El conteo eritrocitario se considera

errneo puesto que es muy bajo aqu se puede deber a un mal llenado de la
cmara de Neu Bauber.
-
7.3. Carlos Zrate Hernndez

-
La presencia de anemias se debe a diferentes factores: tanto
hormonales, genticos, por deficiencia de vitaminas, entre otros. La frmula roja

permite hacer una valoracin con los elementos sanguneos ms importantes:
glbulos rojos. Los resultados obtenidos comparados con los valores de referencia
establecidos fueron muy bajos: la paciente (con amenaza de aborto) pudo perder
sangre, la deficiencia de cido flico se refleja en los ndices eritrocitarios y
hemoglobina. Quiz el conteo erritrocitario fue error nuestro al llenar la cmara de
Neubauber ya que, al ser menor la cantidad de hierro y por lo tanto de transporte
de oxgeno al organismo, se debera ver un aumento de eritrocitos para
compensar esa prdida. Se debe considerar que la muestra llevaba 5 h aprox.en
medio ambiente despus de la toma de muestra.
-
8. Bibliografa
ngel Meja Gilberto, ngel Ramelli Mauricio. 2006. Interpretacin clnica

del laboratorio. 7. edicin. Editorial Mdica Panamericana. Bogot,
Colombia.
Dyorkin A. Mario, Cardinali P. Daniel .2008. Best & Taylor: Bases
Fisiolgicas de la Prctica Mdica. 13. edicin. Editorial Mdica
Panamericana. Buenos Aires, Argentina.

Muoz J. Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos.
Editorial MASSON S.A., 2005. Mxico, D.F.
22

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Universidad Veracruzana

Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica

Prctica No. 5. FRMULA ROJA

La vitamina B12: es un factor necesario para la sntesis y la multiplicacin

El cido flico: tambin es necesario para la sntesis de glbulos rojos, y su

El hierro: es necesario para la produccin de hemoglobina. En todo el

aumenta notablemente la magnitud de la eritropoyesis hasta restablecer el

Anemia hemoltica inmunitaria inducida por medicamentos

Anemia hemoltica debido a la deficiencia de G6PD

Anemias hereditarias, como la talasemia

Anemia hemoltica autoinmunitaria idioptica

Anemia hemoltica inmunitaria

Hemoglobinuria paroxstica nocturna (HPN)

La hemoglobina fetal (hemoglobina F), es la principal hemoglobina del feto y

proporcional a la concentracin de hemoglobina presente.

Una de las propiedades ms importantes de la hemoglobina es su

Se expresa en micras cbicas (3) o femtolitros (fl) y representa el volumen medio

No . de ritrocitos( en millones por mm 3)

Colorantes de Wright: Este colorante se llama poli cromtico porque

2.- Si en lugar de hacer el recuento de eritrocito utilizando una dilucin 1:200 se

Lo cual nos dara el mismo nmero de clulas que si utilizramos la dilucin

Los nmeros de glbulos rojos ms bajos de lo normal pueden deberse a:

vascular u otra causa

Deficiencias nutricionales de:

b) Cuantificacin de la concentracin de Hb (hemoglobina)

que depende de la disposicin de medicin, y F(Abs2) es una funcin que

El nivel bajo de hemoglobina suele acompaarse de un nivel de hematocrito

Si el nivel de hemoglobina aparece alto puede deberse a:

Enfermedades pulmonares crnicas

Estancias en lugares de mucha altitud

e) observacin de anormalidades de eritrocitos

1.- Describe las distintas anormalidades morfolgicas que pueden

Clulas de forma elptica

Eritrocitos esfricos cuya zona

Dacrocitos (clulas en forma de

fragmento azulado en su interior

Se observan estructuras verdeazulosas, dentro de clulas con

3. Material, reactivos y equipo

Material necesario para la extraccin de sangre.

Agitador mecnico para pipetas.

1.- Obtener sangre venosa en la forma acostumbrada. Colocarla en un tubo

2.- La punta de pipeta de Thoma para glbulos rojos se coloca debajo de la

3.- La punta se sumerge en el lquido diluyente manteniendo la pipeta

4.- Se retira con cuidado el tubo de hule y la boquilla; los extremos de la

5.- La pipeta se sostiene entre los dedos pulgar y medio o en un agitador

6.- Se expulsaran las 3 o 4 primeras gotas para eliminar el lquido sin

7.- Las caractersticas de una cmara de recuento que ha sido llenada en

9.- El recuento se efectuara en el cuadro central de la cmara, el cual est

Recin nacido: 4.4- 5.8 x 1012/l

Nios de 2-12 aos: hombres: 4.5-5.3 x 1012/l

b) Cuantificacin de la concentracin de Hb (hemoglobina)

1.- Colocar en un tubo de ensaye exactamente 5ml de solucin diluyente de

3.- Mezclar la sangre y el diluyente invirtiendo varias veces el tubo. Se deja

cianometahemoglobina, la cual es estable por varias horas.

4.- Ajustar la escala de longitud de onda del espectrofotmetro a 540 nm.

6.- Ajustar el blanco a 100 en la escala de transmitancia (T) o a 0 en la

7.- Leer la densidad ptica del problema y calcular la concentracin de

Concentracin del STD .

X Lectura del problema

Recien nacido: 170-215 g/l o 17.1-21.5 g/dl

e) observacin de anormalidades de los eritrocitos:

1.- Preparar frotis sanguneos en portaobjetos o cubre objetos tal como se

2.- Colocar la placa con la extensin secada al aire hacia arriba en un

3.- Cubrir la extensin con lquido colorante mediante un gotero. Emplese