Biotratamieno 3

204
BtOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
mos nuevos que requieren mltiples ensayos; antes de su

introduccin es necesario un cumplimiento reglamentario
mnimo en comparacin al uso de microorganismos
modificados. El factor reglamentario a menudo puede
ahorrar mucho tiempo y dinero al fabricante en relacin a
la preparacin de los productos para su venta. En segundo
lugar, los mutantes seleccionados se han conseguido aislar
recientemente. En la mayor parte de los casos, estos
microorganismos son ms parecidos a los aislados
naturales que las bacterias modificadas genticamente, ya
que para la ingeniera gentica se utilizan con ms
frecuencia cepas caracterizadas, cepas que han estado
fuera de su ambiente natural a veces durante dcadas. Los
mutantes seleccionados de cepas aisladas recientemente
pueden tener ms xito cuando se reintroducen en su
ambiente nativo. Es ms probable que estas cepas hayan
conservado su resistencia ambiental y, por lo tanto, que
funcionen con xito cuando se reintroducen en su
ambiente.
Finalmente, las cepas seleccionadas pueden actuar como
parte de una asociacin en vez de actuar solas. Una
asociacin puede poseer la variedad gentica suficiente
como para contar con rutas degradadoras enteras, incluso
cuando la informacin se encuentre en diferentes
miembros de la poblacin. Por lo tanto, aunque ningn
organismo nico contenga la ruta degradadora deseada, la
ruta an ser operativa. Si bien es posible juntar mediante
ingeniera gentica todos los genes requeridos en un nico
organismo, esto probablemente empleara ms tiempo y
seria ms costoso que conseguir la armonizacin de
organismos
con
capacidades
complementarias.
_
_
Desventajas
Cuando los protocolos de mutacin y seleccin se

comparan con la modificacin mediante ingeniera
gentica, existen algunas desventajas. En primer lugar, las
modificaciones que se realizan no son especificas. Los
mutgenos que probablemente van a ser utilizados actan
de una forma bastante inespecfica. Las mutaciones
espontneas son aleatorias. Es necesario emplear un
esquema de seleccin para encontrar el fenotipo deseado,
y, no importa lo bien que est diseado, puede que no
sea lo suficientemente especfico como para dar lugar
solamente al fenotipo deseado. Muchos de los procesos de
USO DE MICROORGANISMOS MODIFICADOS PARA LA BIODEGRADACIN... 205
proceso es muy lento. Se puede demostrar en el

laboratorio la adaptacin a sustratos especficos (Engesser
et al., 1980). Sin embargo, las protenas evolucionan a
velocidades muy distintas (Ayalah, 1992; Ornstein, 1991a).
El tiempo requerido para establecer una diferencia del 1
por ciento entre protenas, denominado periodo evolutivo
unitario (PEU), se expresa en millones de aos, por lo
general entre 2 y 20. Esto, obviamente es un problema
comn para muchos compuestos antropognicos
Modificacin de organismos mediante tcnicas de
ingeniera gentica
Durante la ltima dcada, una de las esperanzas de

quienes practican la biorrecuperacin ha sido la
intervencin directa de la biologa molecular sobre la
bioqumica de las rutas catablicas para producir
microorganismos ms eficaces en el tratamiento de
residuos. El proceso, que implica la manipulacin de los
nucleti- dos de las secuencias genticas ya existentes
mediante tcnicas comunes de clonacin de genes, o la
creacin de una enzima especfica empleando la simulacin
por ordenador y su posterior introduccin en un husped
seleccionado, ha sido descrito y aplicado en los sectores
farmacuticos y/o agrcolas (Don et al., 1985; Eaton y
Timmis, 1986; Kttkor et al., 1988; Kuk or y Qlsen, 1990;
Paulsen y Ornstein, 1991; Paulsen et al., 1991). Las
aplicaciones siguen estando limitadas a los sectores farmacutico y agrcola.
Tal y como se ha mencionado anteriormente, ningn
microorganismo conseguido mediante estas tcnicas de
biologa molecular ha sido empleado en biorrecuperacin.
En un simposio de 1985 sobre la emisin, intencionada o
accidental, de bacterias recombinantes al ambiente, se
plantearon las cuestiones de fijacin del nitrgeno
(Rhizobium), vacunas vricas (vaccinia; rabia), nucleacin
del hielo por Pseudomonas, pesticidas bacterianos, y
plantas resistentes a herbicidas. El concepto de
biodegradacin en ese momento ni siquiera mereca una
consideracin (Halvorson et al., 1985).
Ventajas
Aunque hay que afrontar diversos problemas importantes,

Ja capacidad de modificar los microorganismos mediante
ingeniera gentica crea nuevas oportunidades. Por ejemplo,
206
BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
manipulacin de la secuencia gentica correcta que

controla la produccin de oxigenasa en la cepa
respectiva (Shields y Reagin, 1992).
Antes de utilizar estos organismos de reciente
creacin en los trabajos de campo se deben resolver
muchos problemas, incluyendo:
Diseo de la cepa. La mayora de las zonas
contaminadas
son
nicas,
y
poseen
distintas
combinaciones de parmetros fsicos que afectarn a los
procesos biolgicos necesarios para el tratamiento de
los materiales txicos. Quizs sea necesario disear (as
cepas de forma nica para su introduccin en zonas
especficas, con el fin de lograr que su gama de
capacidades genticas complemente los peligros
ambientales a los que se vayan a enfrentar, Estos
microorganismos se podran construir para que
degradasen ms rpidamente los residuos y una gama
ms amplia de materiales (Ornstein, 1991/?).
Ingeniera gentica. Incluso despus de. muchos-aosde experiencia cn~ estas
-----tcnicas; conseguir la mnlpulacin gentica no es algo
trivial y, con frecuencia, emplea
mucho tiempo. El tiempo necesario para manipular y
ensayar implica un coste adicional para el productor.
Otro factor importante es que los requisitos de datos
para la evaluacin de los riesgos an no se han
definido completamente. Sin embargo, cuando aumente
la experiencia con los microorganismos derivados de
forma tradicional, los procedimientos para la evaluacin
de riesgos mejorarn. Esto permitir que los
investigadores puedan inventar formas para incorporar
caractersticas de seguridad en la lneas celulares
modificadas y desarrollar protocolos de ensayo para
evaluar tanto la utilidad como los peligros de la
biorrecuperacin. Esto, finalmente, permitir llevar a
cabo un verdadero anlisis sobre los costes-beneficios,
donde el coste no va a ser solamente una cantidad en
dlares, sino que incluir tambin los costes ambientales de una inactividad prolongada y/o los posibles
efectos adversos del contaminante o del tratamiento.
Factores de seguridad. Se sigue investigando en el
desarrollo de las caractersticas de seguridad especficas
para limitar la supervivencia, y en el alcance de los
microorganismos
modificados
con
fines
de
biorrecuperacin. Cuskey (1992) revis los conceptos y
aplicaciones de la restriccin biolgica que implicaban
la
introduccin
de
genes
letales
controlados
cqndicionalmente(ge-nes-suicrdas>>) en los" micro-----organismos modificados.La introduccin del (de los)
USO DE MICROORGANISMOS MODIFICADOS PARA LA BIODEGRADACIN... 207
duccin de residuos proporciona un fuerte incentivo para

aumentar la eficacia en la biodegradacin de materiales
residuales.
Desventajas
Varios factores han frenado la utilizacin de la ingeniera

gentica. Uno es la fuerte y persistente creencia de que
existen todas las rutas posibles de degradacin microbiana
o, por lo menos, de que existe tal cantidad de enzimas y
rutas que se puede desarrollar cualquier ruta deseada
mediante una sencilla reorganizacin utilizando tcnicas no
recombinantes (Gibson et al., 1990; Pemberton et al., 1979;
Don et al., 1985). La idea de que se deben agotar todos
los recursos existentes ha actuado como un fuerte obstculo
para entrar en vas menos seguras y ms caras que
permitan desarrollar microorganismos eficaces mediante
ingeniera gentica. La facilidad con la cual se han aislado
o manipulado genticamente microorganismos mediante
tcnicas que no eran de biologa molecular, tcnicas que
dan lugar a productos eficaces y que no requieren una
revisin reglamentaria, ha frenado el crecimiento de la
industria recombinante.
Quienes proponen la explotacin de las rutas
degradadoras existentes han reconocido que algunos
productos qumicos poseen elementos estructurales o sustituyentes que confieren a la molcula un alto grado de
resistencia al ataque enzimtico, o bien, estn presentes
en mezclas incompatibles con la degradacin eficaz del
componente txico (Timmis et al., 1987; Gerger y Shields,
1992), y requieren rutas y/o enzimas diseadas
especficamente (Rojo et al., 1987, 1988). Sin embargo, el
xito de las estrategias adicionales que implican, por
ejemplo, el emparejamiento o el uso de presiones de
control sobre la poblacin, la transferencia de genes
existentes entre organismos, o la alteracin de genes
reglamentarios (Rojo et al., 1987, 1988), a un coste
relativamente ms bajo del que implicara el uso de
tcnicas ms modernas de biotecnologa, ha tenido un
efecto
inhibitorio
sobre
la
investigacin
de
los
microorganismos utilizados para la biorrecuperacin en la
ingeniera gentica actual. Todas estas tcnicas tradicionales
presuponen que la informacin gentica est disponible, es
decir, que se puede seleccionar fcilmente en los trabajos
de laboratorio o de campo.
Desde una perspectiva puramente econmica, un factor
importante es la inexactitud reglamentaria junto con la
208
ganismos recombinantes con fines de biorrecuperacin no

solamente es pattico, jest prcticamente desierto!
Reconocimientos
Los autores desean expresar su agradecimiento a James

Harvey, Vicegestor de Programas, Technical Resources
Inc., Gulf Breeze, Florida, por su ayuda en a organizacin
del material utilizado en este captulo.
Referencias bibliogrficas
lvarez-Cohen, L., and P. L. McCarty. \99\a. Effects of

toxicity, aeration, and reductant supply on trichloroethylene
transformation by a mixed methanotrophic culture. Appi
Environ. Microbio}. 57:228-235.
lvarez-Cohen, L., and P. L. McCarty. 1991. Product toxicity
and cometabolic competitive inhibition modeing of
chloroform and trichloroethylene transformation by methanotrophic resting cells. Appi Environ. Microbio!. 57:10311037.
Ayalah, F. J. 1992. Evolution. In: The Genetic Revolution (ed.
B. D. Davis), John Hopkins _ Press, Baltimore, pp. 178-196.
Bedard,
T.
R.,
P.
Allenza,
and
T.
G.
Lssie.T9847Hyperinductiarr of enzymes ofthe phos
phorylative
pathway
of
glucose
dissimilation
in
Pseudomonas cepacia. Curr. Micro- biol. 11:143-148.
Compeau, G. C., W. D. Mahaffey, and L. Patras. 1991. Fullscale bioremediation in contaminated soil and water. In:
Environmental Biotechnology (ed. G. Omenn). Plenum
Press: New York, pp. 91-110.
Cuskey, S. M. 1992. Biological containment of genetically
engineered organisms. Jn: Mi- crobial Ecology, Principies,
Methods, and Applications (ed. M. A. Levin, R. J. Seidler,
and M. Rogul). McGraw-Hill: New York, pp. 911-918.
Don, R. H., A. J. Weightman, H. J. Knackmuss, and K. N.
Timmis. 1985. Transposon mu- tagenesis and cloning
analysis of the pathways for degradation of 2,4dichlorophenoxyacetic
acid
and
3-chlorobenzoate
inAlcaligenes eutrophus JMP134(pJP4). J. Bacterio!. 161:8590.
Eaton, R. W., and K. N. Timmis. 1986. Characterization of a
plasmid-specifed
pathway
for
catabolism
of
isopropylbenzene in Pseudomonas pulida RE204. J.
Bacteriol. 168: 123-131.
Engesser, K.-H., E. Schmidt, and J.-J. Knackmuss. 1980.
Adaptation of Alcaligenes eutrophus B9 and Pseudomonas
USO DE MICROORGANISMOS MODIFICADOS PARA LA BIODEGRADAC1N... 209
Fox, B. G., J. G. Borneman, L. P. Wackett, and J. D.

Lipscomb. 1990. Haloalkene oxidation by the soluble
methane monooxidase from Methylosinus trichosporium
OB3: Mecha- nistic and environmental implications. Appi.
Environ. Microbiol. 29:6419-6427.
Furukawa, H., T. D. Gaffney, and T. G. Lessie. 1987.
Insertion-sequence-dependent
rearrangements
of
Pseudomonas cepacia plasmid pTGLl. J. Bacteriol. 169:224230.
Gerger, R. R., and M. S. Shields. 1992. Expansin of the
range of chloroaromatic compounds degraded by the
trichloroethylene degrading strain Pseudomonas cepacia.
Abs. AMS Q-210, (ed. H. Halvorsen, D. Pramer, and M.
Rogul. 1985. Engineered organisms in the environment:
Scientific issues. AMS, Washington, D,C.
Gibson, D. T., G. J. Zylstra, and S. Chauhan. 1990.
Biotransformations catalyzed by toluene dioxygenase
from
Pseudomonas
putida
FI.
In:
Pseudomonas:
Biotransformations,
Pathogeniss,
and
Evolving
Biotechnology (ed. S. Silver, A. M. Chakrabarty, B.
Igewski, and S. Kaplan). ASM: Washington, D.C.
Halvorsen, H. O., D. Pramer, and M. Rogul. 1985.
Engineered organisms in the environment: Scientic issues.
AMS, Washington, D. C.
Harker, Alan R. 1991. Potential use of genetically engineered
microorganisms in the remediation of environmental
pollution. In: Proceedings of the International Symposium on Ground Water in Practice. Nashville, TN, 7/298/2/1991. ASCE: New York, pp. 232-237.
Hildebrandt, W. W., and S. B. Wilson. 1991. On-site
bioremediation systems reduce crude oil contamination. J.
Petrol. Technol. 43:18-22.
Hoeppel, R. E., R. E. Hinchee, and M. F. Arthur. 1991.
Bioventing
soils
contaminated
with
petroleum
hydrocarbons. J. Ind. Microbiol. 8:141-146.
-Knaekmuss, J. H., WrBeckmarm, ErDorn; andW. Reincke.
T976rZurnmecFanismus der biologischen persitenz von
halogenierten und sulfonierten aromatischen Kohlenwasserstoffen (On the mechanism of the biofogical persistence
of halogenated and sulfo- nated aromatc hydrocarbons).
Zentralbl. Bakteriol. (orig B) 162:127-137.
Kellogg, S. T., D. K. Chatterjee, and A. M. Chakrabarty.
1981. Plasmid-assisted molecular breeding: New technique
for enhanced biodegradation of persistent toxic chemical.
Science 214:1133-1 135.
Krumme, M. L., R. L. Smith, S. M. Thiem, and D. F. Dwyer.
1991. Enumeration of Pseudomonas species B13 folowing
injection into a sand and gravel aquifer. Abs. ASM Q71.
Kukor, J. J., and R. H. Olsen. 1990. Molecular cloning,
characterization and regulation of a Pseudomonas pickettii
210
suitability of different continuum dielectric and hydrogen

atom models for protein simulations. J. Biomol. Struct.
7:1019-1042.
Paulsen, M. D, and R. L. Ornstein. 1991. A 175-psee
molecular
dynamics.simulation
of
camphor
bound
cytochrome p450 sub (cam). Proteins 11:184-204.
Paulsen, M. D., M. B. Bass, and R. L. Ornstein. 1991.
Analysis of active site motion from a 175-psee molecular
dynamics simulation of camphor bound Cytochrome p450
sub(cam). J. Biomol. Struct. Dyn. 9:187-203.
Pemberton, J. M., B. Corney, and R. H. Don. 1979.
Evolution and spread of pesticide degrading ability
among soil microorganisms. In: Plasmids of Medical,
Environmental, and Commercial Importance.
Pettigrew-Pope, Tom. 1990. Increasing role for bugs in waste
cleanup. Waste Age.21:86-88.
Rojo, F., D. H. Pieper, K. H. Engesser, H. J. Knackmuss,
and K. N. Timmis. 1987. Assem- blage of ortho cleavage
route for simultaneous degradation of chloro- and
methylaro- matics. Science 238:1395-1398.
Rojo, F., J. L. Ramos, D. Pieper, K.-H. Engesser, H.-J.
Knackmuss, and K. N. Timmis. 1988. Laboratory
evolution of novel catabolic pathways. In: Biosensors and
Environ- mentai Biotechnology (ed. C. P. Hollenberg, H.
Sahrn). Fischer Verlag: Stuttgart, pp. 65-74.
Russel, H., J. Matthews, and G. Sevvell. 1992. TCE removal
from contaminated soil and ground water. U.S.
Environmental Protection Agency, EPA/540/S-92/002:
Washington, D.C.
Sangodkar, U. M. X., P. J. Chapman and A. N. Chakrabarty.
1988. Cloning, physical map- ping and expression of
chromosomal genes specifying degradation of the
herbicida
2,4,5-tiichlorophenox.yaeetic acid (2,4,5-Tj by Pseudomonas
cepacia ACllOO. Gene
71(2):267-277.
Sayler, G. S. 1991. Contribution of molecular biology to
bioremediation. J. Haz. Mater. 28:13-27.
Shields, M. S., and M. J. Reagin. 1992. Selection of a
Pseudomonas cepacia strain constitu- tive for the
degradation of trichloroethylene. Appl. Environ. Microbiol.
58:3997-3983.
Shields. M. S., S. W. Hooper, and G. S. Sayler. 1985.
Plasmid mediated mineralization of 4-chlorobiphenyl. J.
Bacteriol. 163:882-889.
Spain, J. C., 1990. Mctabolic pathways for biodegradation of
chlorobenzene. In: Pseudomonas: Biotransformations,
Pathogenisis, and Evolving Biotechnology. (ed. S. Silver,
A. M. Chakrabarty, B. Iglewski, S. Kaplan). ASM:
Captulo
BIOTRATAMIENTO
APLICADO A SUELOS
CONTAMINADOS CON
FTALATOS:
RECONOCIMIENTO Y
SUPERACIN DE
RETOS TCNICOS
A. Keith Kaufman
Divisin de Servicios de Biorrecuperacin RESNA Industries, Incorporated Los

ngeles, California
Cheryl C. Kreuger
Divisin de Servicios de Biorrecuperacin RESNA Industries, Incorporated Los
ngeles, California
La tecnologa de biorrecuperacin aplicada se est

utilizando cada vez ms como una forma deseable de
limpieza ambiental debido a las muchas ventajas prcticas
y econmicas que ofrece su utilizacin de una forma
apropiada. En la literatura relativa al tema se pueden
encontrar numerosas historias de casos que documentan la
biorrecuperacin eficaz de aguas subterrneas y suelos
afectados por diversos contaminantes ambientales (vanse
Refs. 1, 2, 3, 5, 6, 9, 10, 11, 14, 15, 16). Las agencias
reglamentarias tambin han contribuido 12por su parte al
crecimiento continuado de la industria , especialmente
debido al muy famoso tratamiento con recuperacin que
se realiz
en parte del derrame de petrleo del Exxon
4
Valdez y en otros incidentes martimos.
La mayor parte de las aplicaciones de biorrecuperacin se
han asociado a la limpieza de la contaminacin ambiental
211
212
8IOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
cia, los mtodos de biotratamiento utilizados en estas

aplicaciones se presentan casi como rutinarios, con la
aportacin de escasa informacin, si existe alguna, en
relacin a los impactos potenciales (o reales) del
tratamiento provocados por los diferentes parmetros
fisicoqumicos y/o microbiolgicos. Pocos proveedores de
productos o servicios asociados con el biotratamiento
publicarn descripciones que hagan referencia a los
fracasos en la recuperacin, independientemente de la causa, debido a las obvias consecuencias adversas que tendria
sobre sus negocios esta informacin negativa.
Para intentar proporcionar una perspectiva ms realista
sobre la biorrecuperacin aplicada, este captulo tratar
sobre nuestros esfuerzos en 3 relacin a la limpieza de
aproximadamente 1.250 m
de suelo
afectado por
13
butilbencil ftalato (resina plastificadora) , contaminacin
provocada por el descarrilamiento de un tren en la zona
norte de Arizona. Aunque la operacin tuvo xito, los
factores fsicos y biolgicos fueron un reto tanto para la
operacin
como
para
el
mantenimiento
de
la
biorrecuperacin, la interpretacin de la influencia que
ejercieron estos factores fue esencial para completar el
proyecto de forma rentable y eficaz. Aunque, obviamente,
no se trataba de un trabajo de biorrecuperacin rutinario y
tpico, las consideraciones surgidas en este captulo, sin
duda, tendrn su aplicacin en muchas operaciones de
biotratamiento, incluso en aquellas que implican tan slo a
los hidrocarburos sencillos del petrleo.
Introduccin
Al final del invierno de 1987, se produjo el

descarrilamiento de un tren en una zona poco poblada del
norte de Arizona, dando lugar a la emisinl3 ambiental de
butilbenciiftalato, una resina plastificadora . Tambin se
descargaban, mezcladas en los suelos de alrededor, diversas
cantidades de cristales de urea, aceite de soja, pieles de
ganado, y harina de maz. Cuando finalizaron las
actividades de respuesta-emergencia, se inici una
investigacin para determinar la extensin de la contaminacin y evaluar las alternativas de recuperacin. 3Esta
investigacin revel que aproximadamente 1.250 m de
suelo estaban afectados por ftalatos y los restantes
materiales, mezclados de modo heterogneo, junto con
residuos de ferrocarril en forma de piezas de tren. La
contaminacin, en general, se confinaba a los 2 m
superiores del suelo, y las aguas subterrneas no estaban
BIOTRATAMIENTO APLICADO A SUELOS CONTAMINADOS.
213
inicia una investigacin de este tipo, es importante plantear

si se implantar una aproximacin de bioestimulacin o de
bioaumento. Esta determinacin normalmente se realiza en
base a la siguiente informacin:
A favor de la bioestimulacin. Gran proporcin de

biodegradadores especficos del contaminante dentro
deja poblacin microbiana lugar-especfica,^ el
contaminante es la nica (o principal) fuente de
carbono disponible.
A
favor del bioaumento. Pequea proporcin de
biodegradadores especficos del contaminante dentro
de la poblacin lugar-especfica, y el contaminante no
es la nica (o principal) fuente de carbono disponible.
Teniendo en cuenta la importante presencia de fuentes de
carbono alternativas, as como lo reciente de la
contaminacin (no haba pasado el tiempo suficiente como
para que se desarrollase una gran poblacin de
degradadores de los ftalatos), los esfuerzos subsiguientes de
biotratabilidad se dirigieron hacia el tratamiento mediante el
bioaumento. Cuando se establecieron las condiciones
ptimas para la biodegradacin y se caracterizaron las
pocas especies microbianas autctonas mejor adaptadas para
el proceso, se llev a cabo una investigacin a escala de
laboratorio sobre muestras de suelo lugar-especficas. Los
datos obtenidos en esta parte de la evaluacin se utilizaron
para validar la factibilidad de la biorrecuperacin as como
para establecer un marco temporal que permitiese
pronosticar cundo se completara el tratamiento. Despus
se utiliz esta informacin en el diseo de un plan de
trabajo que sera revisado por el cliente y las agencias
reglamentarias. El objetivo de limpieza aprobado para el
proyecto se fij en una concentracin media de 100 ppm
de butilbencil ftalato.
Cuando se inici la investigacin de biotratabilidad, nos
dimos cuenta de las condiciones atpicas que existan en el
lugar del proyecto (aunque en ese momento no ramos
1. Aislados
biodegradadores
que
se
adaptaran
metablicamente para desarrollar una actividad sobre el
butilbencilftalato,
y
que
no
estuviesen
com2. Aislados degradadores de ftalatos que tendran
actividad en una amplia gama de temperaturas y de
3. Aislados degradadores de ftalatos que utilizaran urea y
amonaco como fuentes de nitrgeno.
214
Despus de una investigacin de seis semanas, se

seleccionaron tres aislados autctonos para los ensayos
piloto y su posible uso en el trabajo de oampo. Adems,
tambin se identificaron los fosfatos y otros nutrientes
necesarios para mantener el pH ptimo del suelo y reponer
los constituyentes inorgnicos asimilados por los organismos
en funcin de su metabolismo biodegradador.
Cuando se completaron estos anlisis, los ensayos a
escala piloto empleando ambos sistemas de control
revelaron que el sistema de ensayo (bioaumento) reduca
los niveles de ftalatos desde 38.000 ppm hasta 20.000
ppm en solamente 15 das, lo que equivale a una bajada
del 47 por ciento en los sustratos. Esta actividad coincidi
con un aumento en el nmero observado de las clulas
biodegradadoras viables. En los controles, no se observ
ningn cambio importante en los niveles de ftalatos o en
las concentraciones microbianas.
Aunque creamos, debido a la diversidad de las
caractersticas fisicoqumicas nicas asociadas a este
proyecto, que era poco probable conseguir estas cinticas
en el trabajo de campo; creamos tambin que los
resultados de las investigaciones mencionadas anteriormente
apoyaban la viabilidad y eficacia de un tratamiento de
biorrecuperacin a gran escala.
Implantacin en campo y resultados obtenidos
Se construy una clula forrada de biotratamiento en la1

superficie, de tal forma que pudiese acomodar los 1.250 m
de suelos contaminados en una capa con un grosor de unos
45 cm. Los suelos contaminados se colocaron sobre una
capa de 15 cm de suelo limpio que actuaba como tapn
contra la rotura del forro durante las operaciones
subsiguientes de mezcla del suelo. Se coloc a lo largo del
permetro de la clula de tratamiento un sistema de
distribucin hidrulica para proporcionar una aplicacin
uniforme de los bionutrientes acuosos y de los
microorganismos degradadores de ftalatos. Peridicamente,
se utiliz un recubrimiento de plstico transparente sobre
los suelos tratables para aumentar su calor y retencin de
humedad.
A finales de julio de 1989 se inici el biotratamiento.
ste consista en la aplicacin de bionutrientes y
microorganismos degradadores de ftalatos cada dos semanas, mezclndolo semanalmente. En los dos primeros
Nitrgeno de
Identificacin
n
o;
+
+
+
A lea i gen es
faeca
l is
Pseudomonas
Pseudomonas
jluorescens
216
no; nh*
+ +
44-
Rango de crecimiento
pH
Temperat
ura
7,75-8,75 6-35 C
6,75-7,75
18-25
6,75-8,75 6-35 C
BIOTRATAMIENTOS
DE APLICADO
RESIDUOSATXICOS
PELIGROSOS
BIOTRATAMIENTO
SUELOS Y
CONTAMINADOS.
BIOTRATAMIENTO APLICADO A SUELOS CONTAMINADOS.
217
215
proceso biolgico
implantacin enlalos
Si TABLA
bien9.2.elResultados
hecho del
nocontrol
se del
conoce
ni es durante
muy laapreciado,
campo
urea (y sus constituyentestrabajos
de de
amonaco)
es eficaz como
fuente de nitrgeno solamente cuando la mayora de los
microorganismos
sealados para su uso son productores de
ureasa (la ureasa es una enzima, producida solamente

pora. algunos organismos especficos) y/o pueden utilizar el
nitrgeno
del amonaco (slo lo pueden hacer poblaciones
5
o
o
seleccionadas).
Estas caractersticas, reconocidas durante
E
muchos
aos como importantes desde el punto de vista del
c
diagnstico
para la identificacin de microorganismos,
o
raramente
se tienen en cuenta en la prctica de la
u
biorrecuperacin.
Desgraciadamente, no reconocer la
importancia
de
estos
criterios puede afectar a ia eficacia y
c final de! biotratamiento.
xito
Como se seala en la Tabla 9.1, de los tipos de
Objetivo de
aislados
degradadores de ftalatos seleccionados para la
limpieza
biorrecuperacin,
solamente uno fue capaz de utilizar
Julio Sept. Nov. En. Mar. Mayo Julio Sept. Nov. En. Mar. Mayo Julio Sept.Oct.
eficazmente el nitrgeno del amonaco. El nitrato y el
nitrito,
normalmente fuentes de nitrgeno eficaces para el
T (meses)
metabolismo
oxidativo (aerobio) (como se trata de
componentes
oxidados,
estos
compuestos
pueden
9.1. La reduccin
dei butilbencilftalato
en suelos.
proporcionarFigura
oxgeno
y nitrgeno),
fueron
claramente ms
idneos para los organismos degradadores de los ftalatos.
Por desgracia, la urea y el amonaco prevalecan en el
lugar m- pactado.
y la evidencia
parece validarlo
(Tabla
9.2),
en Creimos,
las
concentraciones
de ftalatos,
losoxidar
niveles
an
no
que
gran
parte
del
amonaco
se
podra
hasta
nitrato
haban llegado a los establecidos bajo el objetivo de
y/o
nitrito,mediante
una semezcla
de otra
suelotemporada
vigorosa dey
limpieza.
Por lo tanto,
necesit
frecuente.
Adems,
los
anlisis
previos
de
biotratamiento
tratamiento para completar la recuperacin. Para octubre
tambinJh^barL
indicado
Ja-presencia
de bacterias
de 1991, los niveles
de ftalatos
se haban reducido
a una
nitrifcadras
que
s
producen
de
forma
natural
y que,
media de 49 ppm, lo que representa una reduccin
de
segn
preveamos,
actuaran
sobre
elconcentracin
amonaco,
aproximadamente
el
99
por
ciento
en
la
CFU/g
Fech Temperatura global.
pH
N<
NH/
P'
C
suelo
x
a suelo/aire
V
(C @ 1
10*
TABLA 9.1. Caractersticas de los organismos
degradadores de ftalatos seleccionados para la
P.M.)
(Selectivo)'
Principales retos operativos
y de rendimiento
biorrecuperacin
del suelo
7/89
31/27
9,2 niy ND 7,50
0,71
4.625
0
Cristales
de
urea
10/8
26/21
9,0 ND ND 1.80
48
2.725
1/90
3/-2
8,8
ND
ND
923
336
2.650 como enmienda
Aunque histricamente se ha empleado
5/90
22/21
8,9
25
25
800
280
2.425 la urea no es
de
suelo
en25 cantidades
especficas,
7/90
25/24
8,6
25
940
360
840 complemento de
necesariamente
la 1.07
eleccin deseada
como
10/9
22/22
8,7
50
40
221
502est presente en
nitrgeno
", 40 especialmente-cuando
12/9
21-2
8,7
ND
750
311
390
concentraciones
La inquietud
ms obvia son
5/91
14/13
8,7 ND
25 importantes.
875
250
348
los
posibles
peligros
asociados
a
la
descomposicin
de la
7/91
29/29
8,6 ND
25 390
! 63
124
urea
y
la
consiguiente
liberacin
de
amonaco.
De
hecho,
8/91
28/27
8,7 ND
375 317
151
225
el8,4 impacto
inmediato
9/91
21/19
ND
375 225 ms190notable
157 en la zona del
10/9
27/22
8,7 ND
370 190
407
49
1
CL
JO
89
90
91
1
N
O
218
rango de temperatura. El uso de esta informacin en el

desarrollo de un bioproce- so puede permitir el desarrollo
de la biorrecuperacin en una variedad ms amplia de
climas, aunque las cinticas a bajas temperaturas casi
siempre sern ms lentas debido a la termodinmica
molecular.
En el norte de Arizona, la temperatura del aire flucta
entre bajo c.ero en el invierno y 38 C en verano. Por lo
tanto, era necesario utilizar, de la'mejor forma posible,
organismos que tuviesen una amplia gama de tolerancia a
la temperatura. Durante la eleccin del proceso de
biotratabilidad,
se
seleccionaron
microorganismos
degradadores de ftalatos, en parte, por su capacidad de
reproduccin en un ambiente que iba a estar sujeto a
amplias fluctuaciones de temperatura (Tabla 9.1). Adems
de utilizar un recubrimiento de plstico transparente que
produca un efecto tipo invernadero sobre los suelos y
evitaba su congelacin, la aplicacin de estos organismos
dio lugar a una poblacin creciente incluso durante los
" NO;,;
nitrato en(Tabla
ppm h{lmite
de embargo, al contrario
meses
de invierno
9.2). Sin
deteccin
=
1,0
ppm).
N0
;
nitrito
2
que enenppm
los(lmite
mesesde deteccin
ms calurosos,
no se observ una
=de1,0
reduccin
en
la
concentracin
ftalatos
(Fg. 9.1). Si el
ppm).
1
nmero
de
biodegradadores
de
ftalatos,
tanto = generales
NH; amonaco en ppm (lmite de deteccin
1,0
comoppm).
selectivos,
segua
subiendo
durante
los meses de
d
CFU/g
suelo; nmero
degradadores
invierno,
entonces,
por qude no
descenda microbianos
la concentracin
de ftalatos? La respuesta probablemente se relaciona con la
presencia de sustratos carbnicos alternativos, harina de
maz y aceite de soja, emitidos conjuntamente durante el
descarrilamiento.
Fuentes de carbono alternativas y temperatura
Como los microorganismos no se pueden reproducir sin
utilizar
carbono,
estaba usando
tipo
Sin duda,
los sabamos
factores que
msse influyentes
que algn
impactaron
dedirectamente
carbono_potque
se
poda
observar
una
reproduccin
sobre el rendimiento y la duracin de este
microbiana.
como dos
sabamos
que no aparentemente
se estaban
proyecto Adems,
fueron los
parmetros,
utilizando
los ftalatos,
muy probable
que se (sustrato)
estuviesen y
conectados:
fuentes era
alternativas
de carbono
metabolizando
temperatura. las fuentes alternativas de carbono harina
de maz
y aceite
soja.
Pero si se sobre
produca
la degra-del
Aunque
tiene deuna
clara influencia
la cintica
dacin
del sustrato
durante los pormeses
metabolismo
biodegra-alternativo
dador, la temperatura
s soladeno
invierno,
por qu
parece que
se produca
durante los
puede romper
o posibilitar
un no
proyecto
de biorrecuperacin,
meses
ms las
calurosos?
ya que
caractersticas microbianas van parejas a las
La respuesta previstas
probablemente
con los
efectos
temperaturas
durantese elrelaciona
tratamiento
en un
lugar
combinados
de
la
gentica
y
fisiologa
bacteriana.
Las
determinado. Sabiendo que las temperaturas van a ser
enzimas
inducibles
necesarias
para la degradacin
de los
bajas, por
ejemplo,
se necesitaran
microorganismos
psiftalatos
normalmente
no al
sonfro)
innatas
(constitutivas)
en ladel
crotolerantes
(tolerantes
y/o psicrfilos
(amantes
mayora
de losejemplos
microorganismos,
ya que la mayora
nunca
fro). Como
de tales organismos
se pueden
citar
han
estado que
en contacto
conalimentos
ftalatos y,
lo tanto, noDe
aquellos
estropean los
en por
un frigorfico.
habran
maquinaria gentica
y metablca
forma evolucionado
inversa, unasla expectativas
de temperaturas
altas
BIOTRATAMIENTO APLICADO A SUELOS CONTAMINADOS..,
219
explicacin as encaja con las circunstancias y est en

sintona con la bioqumica, gentica y fisiologa
microbiana conocida.
Conclusin
Las investigaciones de biotratabilidad llevadas a cabo al

principio del proyecto demostraron que, bajo las
condiciones apropiadas, los ftalatos se pueden biodegradar eficaz y rpidamente. El trmino apropiado
claramente no se pudo aplicar en este proyecto de
biotratamiento en particular, y para el xito de este
trabajo fueron cruciales los esfuerzos realizados en
relacin a anticipar los retos fisicoqumicos y
microbiolgicos asociados, as como, el intentar
comprender la importancia de las observaciones llevadas
a cabo en el laboratorio y en los trabajos de campo.
Aunque fue imposible controlar algunos aspectos de este
proyecto inusual [como tratar con el doble de la lluvia
anual normal y con una temporada de nieve que, en un
ao, dur 8 meses (es regla comn que ningn equipo
de campo se puede transportar sobre las carreteras
pblicas cuando se puede ver nieve sobre el suelo)], la
atencin a estas variables sin duda ayud a mejorar una
serie de circunstancias difciles con el fin de lograr los
objetivos de recuperacin. Si bien el coste global de este
proyecto
excedi
los
presupuestos
iniciales,
la
recuperacin an se llev a cabo y se complet por
menos de lo que supondra el coste proyectado para los
mtodos alternativos considerados (vertedero, fijacin,
oxidacin).
Con demasiada frecuencia, la biorrecuperacin en la
superficie
(especialmente
cuando
se
trata
de
hidrocarburos del petrleo) se trivializa como algo casi
1. Applied BioTreatment Association. 1989. Compendium of

Case Histories. Applied Biotreatment Association,
Washington, D.C.
2. Bamhart, M. 1987. Case history: Biological soil treatment
in Buffalo, N.Y. Haz. Mat. Waste Mgmnt. SeptemberOctober, pp. 42-44.
3. Basta, N. 1987. Better biological processes boost
220
BIOTRATAMiENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
4. Berkey, Edgar. 1991. Evaluation process for the

seleccin of bioremediation technologies for Exxon
Valdez oi! spill. In Environmental Biotechnology for
Waste Treatment. Plenum Press, New York/London.
5. Chemical Marketing Reprter. 1987. Microbes used to
fight waste in grundwater. September 28, p. 27.
6. Compeau, Geoffrey C., et al. 1991. Full-scale
bioremediation of contaminated soil and water. In
Environmental Biotechnology for Waste Treatment.
Plenum Press, New York/ London, pp. 91-109.
7. Frankenberger, W. T., Jr. 1988. Use of urea as a
nitrogen fertilizer in bioreclamation of petroleum
hydrocarbons in soil. Bui. Environ. Contani. Toxico!.
40:66-68.
8. Frankenberger, W. T., Jr. 1992. The need for a
laboratory feasibility study in bioremediation of
petroleum hydrocarbons. In Hydrocarbon Contaminated
Soils and Ground- water. Lewis Publishers, Chelsea, MI,
pp. 237-293.
9. Heyse, E., et al. 1986. In si tu aerobic biodegradation of
aquifer contaminants at Kelly Air Forc Base. Environ.
Progr. 5:207-211.
10.
Hildebrandt, W. W., and S. B. Wilson. 1992. The
use of modern on-site bioremediation systems to reduce
crude oil contamination on oilleld properties. In
Hydrocarbon Contaminated Soils and Grundwater. Lewis
Publishers, Chelsea, MI, pp. 487-499.
11.
Kaufman, A. K., and C. C. Krueger. 1988.
Bioremediation of fuel-contaminated soil: A case history.
In Proceedings, Hazmacon, 1988. Anaheim, CA, pp. 743752.
2. Kaufman, A. Keith. 1991. The technical, economic, and
regulatory
future
for
bioremediation:
An
industry
perspective. \n Environmental Biotechnology fot-Waste
222
ganismos para transformar los compuestos txicos en

molculas inocuas que pueden proporcionar energa o
actuar como precursores metablicos de los microorganismos.
La complejidad del suelo representa un reto nico para
la industria de la biorrecuperacin. Aunque la
biodegradacin es un proceso natural y forma parte del
ciclo de nutrientes en el suelo, muchos de los compuestos
aadidos al suelo como consecuencia de la actividad
humana son txicos y recalcitrantes. Sin embargo, el
nmero creciente de publicaciones que indican la
biodegradacin con xito en el laboratorio de muchos de
los compuestos antropognicos recalcitrantes, ha estimulado la fe en la biorrecuperacin como tecnologa til
para el tratamiento de suelos contaminados.
Muchos estudios de laboratorio dependen de la
desaparicin de un compuesto como medida de
biodegradacin. Esto puede ser equvoco, ya que en
algunos casos la desaparicin de una molcula especfica
puede suponer su transformacin en un compuesto ms
txico. Un ejemplo es la conversin, mediante un
organismo de suelo manipulado genticamente, del
D. J. Roberts,
R. H. Kaake,no
S. B.
Funk, cido
D. L. Crawford y R. L. Crawford
herbicida
relativamente
txico
Centro de Investigacin para la Recuperacin de Residuos Peligrosos Departamento
2,4- de Bacteriologa
diclorofenoxiactico
(2,4-D) en el
y Bioqumica Universidad de Idaho Moscow, 43
compuesto
mutagnico
2,4-diclorofenol Idaho
.
La
produccin de 2,4-diclorofenol a partir de 2,4-D
puede haber sido a responsable de los efectos
txicos observados sobre la poblacin natural del
suelo despus de la adicin del organismo
manipuladol4 genticamente en suelos contaminados
con 2,4-D . Este ejemplo muestra la necesidad de
diferenciar entre los resultados obtenidos en estudios
y lasgenerales
aplicaciones
reales de lade
Las de
treslaboratorio
aproximaciones
aat.la44 recuperacin
biorrecuperaein.-Sims-et
presentaron
suelos
se realizan
mediante
mtodos fsicos,
qumicos
y
untrabajo
sobredas
aproximaciones
a
la
biorrecubiolgicos.
Los
tratamientos
fsicos
incluyen
la
inperaciny de
suelos contaminados,
sealando
lalos
cineracin
vitrificacin.
Estos procesos
convierten
necesidad
de
una
caracterizacin
completa
del
lugar,
residuos
en inertes
y aun asy, pueden
necesitar
una
de estudios
deresiduos
tratabilidad
posiblemente,
de la
evacuacin
como
peligrosos
(p.
ej.,
cenizas
integracin Algunos
de mtodos
de como
recuperacin
fsicos,de
incineracin).
procesos,
la
estabilizacin,
qumicos,
y biolgicos
en contaminante
un tratamientoenconjunto
reducen
laconseguir
movilidad
delimpieza
un
el zona
suelo
para
la
total de una
mediante
la
adicin
de
agentes
estabilizantes
(cemento
o
contaminada.
resinas
de plsticos) que enlazan o envuelven los
residuos en una matriz impermeable, evitando la
migracin
del encontaminante.
Otrosde suelos
mtodos de trataPrcticas
actuales
la biorrecuperacin
Captulo
10
BIORRECUPERACIN
ANAEROBIA A
ESCALA REAL DE
SUELOS
CONTAMINADOS CON
* Publicacin N." 91.521 de Idaho Agricultural Experimental Station

(Estacin Experimental Agrcola de Idaho).
221
Tecnolog
aTratamie
nto en
lechos
Ventajas
Procedimiento sencillo
No costoso
Mtodo aceptado
actualmente
Desventajas (
Tasas de degradacin lentafc
Frecuentemente no se separa
la contaminacin residual i
Altos riesgos de exposicin.
Puede requerir largos perodos
de incubacin ,
i
Aplicacin/contaminante
Contaminacin superficial
Proceso aerobio
Niveles de contaminacin
bajos
a medios
Pentaclorofenol
Petrleo y gasolina
HPAs
BIORRECUPERACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL.
Referencias
9,15,19,40,44,54
223
Otra caracterstica importante del suelo que se debe

considerar cuando se est planificando un programa de
recuperacin es la competencia biolgica del suelo.
Muchos suelos contendrn la poblacin microbiana
apropiada para la degradacin de los contaminantes
presentes en dicho suelo, especialmente si el suelo
presenta TABLA
bajas10.1.concentraciones
contaminantes
que han
Comparacin entre las de
tecnologas
de biorrecuperacin
estado presentes durante largos periodos de tiempo. Con
frecuencia, la flora autctona se puede estimular de forma que degrade un contaminante mediante la adicin de
un solo nutriente. Sin embargo, algunos suelos pueden
ser incompetentes debido a que el contaminante es txico
para los microorganismos que deben llevar a cabo el
metabolismo del compuesto, o debido a otros factores
ambientales.
Para mejorar la competencia biolgica de un suelo en
particular,
se
aaden
frecuentemente
inculos
microbianos. Los inculos microbianos tienen ms xito
si se trata de organismos obtenidos en el ambiente en el
que van a ser aplicados. Se ha ensayado el bioaumento
para la degradacin de contaminantes utilizando cepas de
laboratorio a partir de cultivos puros y/u organismos
modificados genticamente bajo condiciones ambientales,
pero no ha tenido el xito esperado, probablemente
debido 40 a la competencia realizada por la microflora
natural . La adicin de estircol y fangos de aguas
residuales a los suelos contaminados se ha utilizado
con
l5 35
xito para mejorar sus capacidades degradadoras .
Muchos contaminantes del suelo se pueden eliminar
mediante mtodos aerobios. Estos mtodos, que se
describen a continuacin, son los que se utilizan ms
ampliamente y los ms comprendidos para el tratamiento
de suelos. Cada mtodo se puede mejorar mediante los
procedimientos de bioaumento descritos anteriormente. La
Tabla 10.1 resume las ventajas e inconvenientes de las
tecnologas actuales de biorrecuperacin de suelos.
I
Tratamiento en lechos
El tratamiento en lechos es un mtodo de tratamiento

aerobio aplicable a muchos tipos de suelos contaminados.
El suelo contaminado se trata en lechos de tratamiento
sobre la superficie. Los lechos de tratamiento
normalmente son fosas revestidas con poliuretano de alta
densidad que despus se cubre con arena limpia para
permitir el drenaje. El drenaje, que se puede tratar por
Composta
je
In silu
(BIS)
Biorreact
or de
lechada
Ms rpidas tasas de
reaccin Poco costoso
Autocalentamiento
Relativamente
poco
costoso Bajos riesgos de
exposicin
No
es
necesaria la excavacin
Buen control sobre

parmetros Buen contacto
microorganismo/compuest
o Aumenta la adsorcin
del compuesto del suelo
Rpidas tasas de
degradacin Los periodos
de incubacin van de
das a semanas
i
Necesita agentes espesantes
Requiere aireacin A
menudo es necesaria la
adicin de nitrgeno
Altos
riesgos de exposicin
1
1
Contaminacin residual
Los perodos de incubacin
Van de meses a aos i
Bajas tasas de degradacin
i Menos control sobre los i
parmetros ambientales i
Necesita una buena
caracterizacin
hidrogeolgica del lugar ,
Los perodos de incubacin
vqn de meses a aos
Altos costes de inversin
Limitado por el tamao del
reactor Altos
riesgos de
1
exposicin
i
i
i
i
i
Proceso aerobio
Puede tratar niveles de
contaminacin altos
Explosivos nitroaromticos
Fangos de aguas residuales
aerobios Petrleo y gasolina
9,23,27,34,38,49,
50.54,59
Contaminacin profunda
1-6,12,13,22,30,
Condiciones reductoras
32,33,39-42,45,54
aerobias o de nitratos
Niveles de contaminacin
bajos a medios. Petrleo y
gasolina Aromticos clorados
Hidrocarburos clorados
Compuestos recalcitrantes
Suelos que enlazan el
compuesto fuertemente
7,10,11,16,29,31,
36,53,55,59
BIORRECUPERACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL...
225
efecto invernadero en un sistema cerrado. El

tratamiento en lechos se ha utilizado ampliamente en
zonas de refineras de petrleo y en zonas contaminadas
con
residuos
de
aromticos
polinucleares,
o
pentaclorofenol (PCP) (p. ej., zonas conectadas con la
Compostaje
El compostaje es una tecnologa de biorrecuperacin

aerobia similar al tratamiento en lechos. En esta tcnica,
el suelo contaminado se mezcla con astillas de madera,
paja, u otro agente espesante para proporcionar una
porosidad que permita un mejor flujo del aire. El
compostaje se puede llevar a cabo en un biorreactor con
el suministro de aire forzado para proporcionar la
aireacin, o en pilas abiertas (hileras), que se voltean
peridicamente para facilitar el contacto con el oxgeno.
Tambin se emplea la adicin de materiales espesantes
para aumentar la actividad microbiana mediante el
suministro de una fuente de carbono de fcil uso. El
metabolismo aerobio de grandes cantidades de carbono
genera calor, por lo tanto, los tratamientos de compostaje,
a menudo, se producen a altas temperaturas. Se pueden
conseguir tasas altas de degradacin, aunque el contacto
con el oxgeno tiende a ser pobre.
En el compostaje, como en cualquier mtodo de
tratamiento biolgico, se deben ajustar y controlar algunos
parmetros ambientales, como el contenido de humedad y
el pH. El contenido de nitrgeno de una pila de compost
requiere una atencin especial debido a los altos
contenidos en carbono de los agentes espesantes. A
menudo, se aade estircol a las operaciones de
compostaje como fuente de nitrgeno y fuente de
organismos. Las operaciones de compostaje normalmente
funcionan como operaciones discontinuas, reutilizando una
parte de una antigua pila de compost como inoculo para
las nuevas. Se han realizado operaciones de compostaje
experimentales con suelos contaminados con compuestos
nitroaromticos explosivos, como el 2,4,6-trinitrotolueno
17 ,3 27 59
(TNT)
.
Reactores agitados o de lechada
Durante aos, las aguas residuales contaminadas se han

tratado en biorreactores, un ejemplo seran las plantas
municipales de tratamiento de aguas residuales. La
22
4
BI
OT
RA
TA
M1
EN
TO
S
DE
RE
SI
DU
OS
T
XI
C
OS
Y
PE
LI
G
R
OS
OS
226
evitar una contrarreaccin inhibitoria. El operador del

reactor puede controlar el pH, la temperatura, el contacto
con el oxgeno y el contenido en humedad. Los reactores
agitados o de lechada pueden funcionar aerobia- o
anaerobiamente.
El uso de reactores agitados o de lechada para tratar
suelos contaminados ofrece la posibilidad de reducir el
tiempo de tratamiento de 6-8 meses a 1 o 2 semanas o
meses. Los sistemas agitados o de lechada ofrecen ventajas
sobre los otros sistemas de biotratamiento, ya que permiten
tener un mejor control del proceso y una mayor
disponibilidad de contaminantes para los microorganismos.
Esta tecnologa puede llegar a ser la ms ventajosa para la
recuperacin de suelos contaminados con compuestos muy
difciles de degradar (recalcitrantes) y para aquellos suelos
que son difciles de tratar mediante otras tcnicas.
Tratamiento in situ
Todas las tecnologas de biorrecuperacin mencionadas

anteriormente requieren la excavacin del suelo en la zona
contaminada. La excavacin del suelo contaminado es una
operacin muy cara que requiere personal cualificado y, en
algunos
casos,
un
equipo
especializado.
La
biorrecuperacin in situ es una tecnologa que no requiere
la excavacin de grandes cantidades de suelo. Este mtodo
implica la inyeccin de nutrientes y el suministro de
oxgeno mediante un lmedio
acuoso directamente en el
:t3 33;39
ambiente contaminado
. Til medio acuoso fluye a
travs del suelo contaminado, despus se recupera
mediante pozos de extraccin pendiente abajo del pozo de
inyeccin, y se oxigena antes de recircular por la zona
contaminada. Existen otros mtodos ms agresivos para el
tratamiento in situ, estos mtodos permiten la combinacin
de arrastre por vapor, tratamiento de aguas subterrneas, y
recuperacin biolgica. Es comn utilizar perxido de
hidrgeno para proporcionar oxgeno cuando
el suelo
522
presenta una baja permeabilidad al oxgeno . 42
Tambin se
ha realizado un tratamiento anaerobio in situ . En este
caso, se aadi acetato como fuente de carbono
complementaria con el fin de estimular a los organismos
que reducen los nitratos y sulfatos para degradar los
compuestos alifticos halogenados.
El proceso in situ normalmente se aplica cuando es
difcil excavar el suelo, por ejemplo, cuando la
227
Degradacin de compuestos nitroaromticos
Los compuestos nitroaromticos son importantes en la

industria qumica y se 21 emplean para fabricar miles de
productos de consumo *. Estos productos vienen representados por, al menos, cuatro grupos de productos
qumicos. El mayor y mejor conocido de estos grupos son
los poliuretanos, que se fabrican a partir de 2,4- y 2,6dinitrotolueno.
El
segundo
grupo
de
compuestos
nitroaromticos son los compuestos nitroaromticos
energticos peligrosos, como el TNT. Los compuestos
nitroaromticos se utilizan tambin en grandes cantidades
como pesticidas y herbicidas en la industria agrcola, y
como frmacos.
Las tecnologas actuales utilizadas para tratar suelos
contaminados con compuestos nitroaromticos, por ejemplo
el herbicida 2-sec-butil-4,6-dinitrofenol (dinoseb),
implican mtodos fsicos, como la incineracin o el
mtodo de transporte y almacenamiento. Estos mtodos son
costosos y ambientalmente no aceptables. Una incineracin
ineficaz puede producir emisiones peligrosas y dixido de
carbono. Este ltimo es un gas invernadero, y se cree que
su acumulacin en la atmsfera es daina para el medio
ambiente. El mtodo de transporte y almacenamiento slo
acumula los residuos peligrosos en un lugar. Segn la
legislacin actual, la responsabilidad a largo plazo de un
residuo peligroso corresponde al generador, incluso despus
de su evacuacin.
Se est investigando el desarrollo de mtodos biolgicos
para recuperar suelos contaminados con compuestos
nitroaromticos, pero ninguno ha sido explotado a nivel
comercial. Para poder evaluar un plan de biorrecuperacin
de suelos contaminados, se deben identificar los efectos de
los contaminantes sobre los microorganismos, y los efectos
de los microorganismos sobre los contaminantes. Aunque
muchas zonas de la costa noroeste de Estados Unidos
hayan sido contaminadas con pesticidas y herbicidas
nitroaromticos a causa de derrames y procesos de
tratamiento de las cosechas, se han realizado relativamente
pocas investigaciones sobre la biodegradacin de estos
compuestos.
Algunos estudios de laboratorio realizados con un
enriquecimiento del suelo han15 demostrado que el dinoseb
es biodegradable.
Doyle
et al. informaron de la formacin
l4
l4
de CO, a partir de C-dinoseb aadido al suelo, tanto si
el suelo era enmendado con fangos de aguas residuales, o
228
del dinoseb y de un herbicida anlogo, el 2,4-dinitro-ocresol (DNOC), han revelado que el ataque inicial de las
bacterias probablemente se sita en los grupos nitro.
Los primeros estudios sobre la degradacin del dinoseb
y DNOC mostraron que la Pseudomonas sp. podra iniciar
la conversin del DNOC en 6-amino-2- metil-4-nitrofenol y
3-metil-5-mtrocatecol , Otros investigadores han enriquecido y aislado, a partir de diversos suelos, varias cepas de
Pseudomonas capaces de metabolizar el DNOC. Estos
organismos decoloraron el DNOC y produjeron nitrito. No
se registraron otros compuestos intermedios metablicos.
Aunque el 4-nitrofenol y el 2,4-dinitrofenol fueron
atacados por estas bacterias, no 24
lo fueron el dinoseb 55
y
otros compuestos nitroaromticos . Wallnoefer et al.
comprobaron que la Azotobacter sp. converta el grupo
nitro de la posicin orto del DNOC o dinoseb en un grupo
acetamido.
En un estudio reciente, Stevens et al. utilizaron un
quimiostato (reactor que trabaja'en estado estacionario por
control de la alimentacin) para enriquecer y aislar los
organismos capaces de degradar el dinoseb en suelos
contaminados con esta sustancia. Estos organismos podan
transformar el dinoseb en productos reducidos bajo
condiciones microaeroflicas y desnitrificantes, pero no
fueron capaces de mineralizar completamente la molcula.
Los productos reducidos se polimeri- zaron, formando un
precipitado multimrico, El procedimiento de enriquecimiento del quimiostato tambin dio lugar a una asociacin
anaerobia que poda degradar 52completamente el dinoseb
convirtindolo en acetato y C0 2 . An est por dilucidarse
la ruta real de degradacin del dinoseb bajo condiciones
anaerobias.
Una gran parte de la literatura sobre la degradacin de
los compuestos nitroaromticos se ha centrado en los
compuestos nitroaromticos
explosivos y ha sido revisada
26
recientemente . La mayora de los resultados muestran que,
en condiciones aerobias y anaerobias, el primer paso en la
degradacin de los compuestos nitroaromticos es la
reduccin de los grupos nitro a hidroxilamino, y despus a
sustituyentes amino, tanto en los sistemas mamfero como
procaritico. En condiciones aerobias, algunas partes del
hidroxilamino se pueden polimerizar formando enlaces azo,
que son ms recalcitrantes y posiblemente ms txicos que
el compuesto original.
En condiciones
anaerobias, se forman amino compuestos
37
18
estables . Hallas
examin la degradacin anaerobia de
Parmetro
inorgnico
Nitrato (ppm)
Amonio (ppm)
Sulfato (ppm)
pH
P (ppm)
K (ppm)
Compuest
o*
Dinoseb
A
MCPP
Ioxynil
2,4-D
Dicamba
Suelo
contaminado de
forma continuada
134
144
No detectado
7,58
58
480
230
Suelo
contaminado de
forma aguda
294
217
84
7,52
45,1
288
BIOTRATAMIENTOS
DE RESIDUOS
TXICOS
YESCALA
PELIGROSOS
BIORRECUPERACIN
ANAEROBIA
AAESCALA
REAL...
BIORRECUPERACIN
ANAEROBIA
REAL..
231
229
dinoseb
se de
ensay
en mtodos
varios
experimentos
laboratorio
ciento
almidn
en mezclas,
que 25
sedeagitan
slo
puede
llevara
nuevos
de tratamiento
prometedores
ocasionalmente,
con
un
50
por
ciento
de
utilizando
suelos
de
dos
zonas
diferentes
.
Estos
suelos
para
los
residuos
contaminados
con
compuestos
suelo/tampn.
Estos
experimentos
se
realizaron
diferan
en
su
historial
de
exposicin
y
en
la
connitroaromticos.
utilizando
hasta 300
de suelo
contaminado.
Los
centracin
de dinoseb
y deg otros
contaminantes
presentes.
experimentos
para determinar
la biodegradabilidad
de
Ambos
suelos procedan
de aeropuertos
rurales utilizados
los
contaminantes
en
el
suelo
contaminado
de
forma
enEstudios
operaciones
de pulverizado
de cosechas.de En
el
de laboratorio
para
la se
biorrecuperacin
continuada
revelaron
que
trataba
de
un suelos
suelo
aeropuerto
de
Ellensburg,
Washington,
se
contamin
un
contaminados
con
dinoseb
.
Lay inundacin
del
suelomicrobiolgicamente
de marga
arenosacompetente.
con
dinoseb
otros
herbicidas
suelo
con
un
volumen
igual
a
50
mM
de
tampn
de
yEl fertilizantes
operaciones
limpieza
esquema
dedebido
biorrecuperacin
desarrollado
en
nuestro
fosfato
a un
pH
7 ya lalasadicin
de un 2depor
cimto
realizadas
durante
dcadas
el equipo derealizadas
pulverizadopor
laboratorio
surgi
de lassobre
observaciones
(en p^
-p/p)
52 almi dn, prnpnrrnnaron al suelo los
deStevens
cosechas.
Este
suelo
era
un
prototipo
excelente
de
et
al.
,
segn
estos
autores,
los
cultivos
anaenutrientes necesarios para crear un ambiente
contaminacin
continuada
o
crnica
a
bajo
nivel
durante
robios
eran
capaces
de
matabolizar
dinoseb
convirtindolo
anaerobio en el que era posible la degradacin del
un
tiempo
prolongado,
como ejemplo
en perodo
acetato de
C0
. La
mayordeparte
desirve
la literatura
relativa
dinoseb
y de
mayora
los ydems
contaminantes
2la
deal gran
parte
de
contaminacin
quepara
se la
puede
encontrarde
tema
indicaba
la ruta
inicial
presentes.
Loslaque
anlisis
mostraron
que
la degradacin
eliminacin
enloseldenoroeste
los nitratos
de Estados
comenzaba
Unidos.
casi inmediatamente
compuestos
nitroaromticos
era reductiva.y seLas
completaba
en 4-7 undias.
degradacin
Tambin
se anaerobias
obtuvo
suelo
arcilla del del
lododinoseb
de un
condiciones
queLa de
favoreceran
los
procesos
se inici cercano
despus de
perodo de favorables
espera de
2para
a 253la la
aeropuerto
aserun
Hagerman,
Idaho.
Aqu,
reductivos
podran
altamente
das
y,
generalmente,
se
completaba
en
10-20
das
.
contaminacin
fue
provocada
por
una
serie
de
escapes
en
degradacin completa de los compuestos nitroaromticos.
El
potencial
redox
descendi
por
debajo
de
-200
mV
los
en los anaerobias
que se almacenaba
estelas
Lasbarriles
condiciones
permitirandinoseb.
tambinEnque
ense 4-5
das.
La
inoculacin
de
las
deuna
caso,
trataba
de
un ejemplo
de suelo
quemezclas
ha recibido
reducciones
a
amino-compuestos
se
produjesen
a
ensayo
para
la
recuperacin
del
suelo
con
cultivos
de
un
alto
nivel
deenriquecidos
contaminacin
durante
un
perodo
velocidad
rpida
y, de esta noforma,
no
diesen
lugarcorto
a la
laboratorio
dio
lugar
a resultados
depolimerizacin
tiempo.
de
los
intermedios
hidroxilaminados.
muyla
diferentes
a en
losselaobtenidos
conloslosdeconstituyentes
cultivos
En
Tablapaso
10.2
comparan
El
primer
implantacin
un planno de
orgnicos
de los
dos
tipos elde suelo
suelo.enLos
constituyentes
recuperacin
era
convertir
anaerobio.
Es bien
10.3. Eliminacin de herbicidas en suelos contaminados
inorgnicos
encontrados
los dos suelos
indicaron
conocido TABLA
que
lo suelosensaturados,
al final,
llegan aqueser
stos
anaerobios,
contenan
cuandomuchos
el oxgeno
nutrientes
disponible
inorgnicos
es utilizado
parapor
8 n______________
soportar
los---------------------------------Concentraci
microorganismos
la actividad metabheterotrficos
lica microbiana;
. La velocidad
en ambos,
de este
la cantidad
de carbono
disponible
seproceso
deba depende
tener en de
cuenta
la presencia
de nitrato,
que para
se
sz
organismos que
hetertrofos
de su estado
metablico.
haloscomprobado
inhibe la ydegradacin
del dinoseb
,
Una elvezdiseo
que los
hetertrofos
hayan convertido
para
del organismos
procedimiento
de biorrecuperacin.
La
en anaerobio
un suelo,enutilizando
oxgeno disuelto
como
presencia
de sulfato
el sueloel contaminado
tambin
receptor ltimo de electrones para el metabolismo de la
fuente de carbono suministrada, se pueden mantener
TABLA 10.2.
Parmetros
inorgnicos
de los suelos
de ensayo
fcilmente
unas
bajas
potencias
redox
manteniendo las5
condiciones de saturacin. La difusin del 0 2 es unas 10
veces ms lenta a travs del agua que a travs del aire.
La difusin gaseosa cesa especialmente cuando la fraccin
de poros
llenos de aire en el suelo est por debajo de
57
0,12 ; por lo tanto, en los ambientes saturados entra muy
poco oxgeno en el suelo, ni siquiera en la fase acuosa.
Para establecer las condiciones anaerobias en el suelo
utilizamos varias fuentes de carbono poco costosas.
Ensayamos con fuentes de carbono solubles, como la
glucosa, y fuentes no solubles, como el almidn, los
cosustratos
o las con
fuentes
energa
para
Fuente: Reproducida
permiso de
de Kaake
et al.complementarias
(1992), Ref. 25.
las asociaciones
de
microorganismos
degradadores
de
su
Porcentaje
Suelo
Suelo
dinoseb
.
La
aplicacin
de
almidn
no
soluble
apoy
la
Efluente
de
inicial
final
(mediat) acuoso
(media separacin
160.000
1,02
74
99,95
1.210
17
440
63,64
888
0,17
io
98,87
153
0,35
94
38,70
106
2,60
24
77,04
232
B10TRATAMIENT0S DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
adicin del 10 por ciento o 25

del 50 por ciento (p/p) de
suelo seco previamente tratado . El suelo seco tratado era
suelo que proceda de una zona contaminada de forma
continuada en Ellensburg, Washington, este suelo se haba
tratado de la forma descrita anteriormente y, despus, se
haba secado y almacenado a 4 C para su posterior
utilizacin como inoculo. El inoculo ms eficaz 25pareca ser
la adicin de un 10 por ciento de suelo tratado .
Estudios piloto para la biorrecuperacin de suelos
contaminados con dinoseb
Los experimentos de laboratorio no siempre implican que

la tecnologa se pueda usar con xito a escalas mayores.
Por lo tanto, pensbamos que era importante demostrar la
recuperacin del dinoseb en suelos contaminados
empleando experimentos mayores. Se llev a cabo in situ,
en un reactor agitado on reactores estticos (cubos de
plstico), una demostracin inicial de la tecnologa
utilizando 45-50 kg de suelo contaminado de forma
continuada.
Los suelos se excavaron con palas y se tamizaron
mediante un tamiz de 6,35 mm en la zona. El personal
llevaba filtros anti-polvo y ropa protectora. Despus, se
pesaron los suelos antes de introducirlos a los reactores,
que contenan la cantidad adecuada de tampn fosfatos.
Posteriormente se aadi almidn, y se procedi a la
mezcla completa en los reactores. Los cubos y^t reactor
se" incubaron en _un-peqteo remolq renovado para
este fin. Los reactores estticos (por triplicado) recibieron
45 kg de suelo contaminado de forma continuada; 45 1 a
un pH 7, 50 mM de tampn fosfato; y 0,9 kg de
almidn. Los cultivos de control contenan suelo
contaminado, almidn y tampn; o suelo contaminado y
tampn,
almidn.
La demostracin
realiz
dos veces
_ * Lossin
anlisis
dejos herbicidas
y pesticidas se
fueron
realizados
por
a esta
escala.
La temperatura,
pH y el Se
potencial
Manchester
Laboratories,
Manchester,elWashington.
utilizaron redox
los
EPA 5
8.150
y 8.080.
Los compuestos
listados arriba
se mtodos
controlde cada
minutos
(primera
demostracin)
o cada
los nicos
encontrados.
dosfueron
(segunda
demostracin)
medante
fhoras
Las unidades
son fxg/kg;
los resultados son
la media deellos uso de
sondas
remotas
y
de
una
unidad
A/D
analgico-digital
de
anlisis
de tres muestras.
A
MCPP de
= cido
2-(2-metil-4-clorofenoxi)
propionico.
grabacin
datos
controlada mediante
un ordenador
Los compuestos
no se detectaron;
los valores
representan
la suelo
personal.
tomaron
muestras
acuosas
y Ref.
de
Fuente: Se
Reproducido
con permiso
de Kaake
et al. (1992),
25.
peridicamente, muestras que se analizaron para establecer
las concentraciones de dinoseb, cidos orgnicos voltiles,
nitratos, amonaco, almidn hdrolizado y de azcares
reductores solubles totales.
En las Figuras 10.1-10.3 se presentan los resultados de
233
60
10
15
20
25
30
35
Tiempo (d)
FIGURA 10.1. Separacin del dinoseb en el suelo y en las fases acuosas mediante
tratamientos con 50 kg de suelo contaminado de forma continuada.
Los reactores recibieron 45-50 kg de suelo contaminado, 1 kg de almidn y 45-50 I
de 50 mM de tampn fosfatos a pH 7. o = reactor agitado, acuoso.
= reactor agitado, suelo. V = reactor esttico, acuoso. = reactor esttico,
suelo.
hace pensar que el descenso inicial en el potencial redox

fue suficiente como para evitar que se produjesen
reacciones de polimerizacin.
La Figura 10.3 presenta la acumulacin y separacin
del dinoseb y los tres intermedios de biotransformacin
ms abundantes en ei suelo del reactor agitado. No se
identificaron los intermedios, por lo tanto, no se pudo
determinar
sus
concentraciones.
Estos
resultados
demuestran la necesidad de analizar los compuestos
intermedios. Si la concentracin de dinoseb se hubiese
utilizado como parmetro nico para establecer el final
del tratamiento, ste podra haber parado prematuramente,
despus de slo 9-10 das. Aunque se conoce poco sobre
los intermedios, sospechamos que el compuesto
intermedio identificado como 1 en la Figura 10.3 an
puede contener algunas propiedades txicas. La
235
Tiempo (d)
FIGURA 10.3. Separacin de dinoseb y acumulacin y separacin de compuestos

intermedios en las extracciones de suelo del reactor agitado. Los compuestos intermedios
no identificados se cuantificaron utilizando el tiempo de retencin de los picos. El DNOC se
utiliz como estndar interno para asegurar la eficacia de la extraccin y el rendimiento del
detector.
sobre la toxicidad de los compuestos intermedios de

transformacin. Adems, se identificarn estos compuestos.
Se realiz una demostracin a mayor escala de esta
tecnologa utilizando el suelo contaminado de forma
aguda procedente del aeropuerto cercano a Hager- man,
Idaho. La demostracin se llev a cabo en el propio
lugar en una fosa forrada. Todo el personal cont con
trajes Tyvek, respiradores de cara total, guantes y calzado
protector durante todo el trabajo realizado en la fosa. La
demostracin abarcaba tres etapas. Las Etapas I y 2 se
realizaron en reactores de fibra de vidrio de 2.600 l.
La Etapa 1 contaba con tres de estos reactores, que
fueron cargados con aproximadamente 350 1 de agua de
riego, 2.268 g de K 2HP04, y 686 g de KH 2P04. Los
ingredientes se mezclaron hasta la disolucin de las sales.
Entonces se aadi a cada reactor con una
236
los contenidos de cada reactor se ajust a 7 con una

disolucin saturada de hi- drxido de sodio o cido
fosfrico concentrado, y en cada reactor se instalaron los
electrodos de pH, temperatura y potencial redox. Los
datos se recogieron y registraron en una unidad A/D
analgco-digital de grabacin de datos conectada a una
batera de 12 V, Los reactores se cubrieron con
visqueen 6-mil, material que se asegur por debajo de!
borde de cada reactor mediante una goma elstica.
El contenido de los reactores se muestreaba a tiempo 0
y despus cada dos o tres das. Se procedi a la mezcla
en los reactores despus de 15 das de incubacin. No se
produjo ninguna prdida obvia por evaporacin en las
fases acuosas durante las incubaciones. La Etapa 1 se
llev a cabo durante el mes de agosto. La temperatura en
los reactores oscilaba diariamente entre 25 C y 32 C;
la temperatura media fue de 28 "C. Ei pH de la fase
acuosa qued dentro de un rango de 0,2 unidades en
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Tiempo (d)
FIGURA 10.4. Separacin de dinoseb y acumulacin y separacin de los compuestos
intermedios en los tratamientos de 315 kg de suelo contaminado de forma aguda. Los
reactores recibieron 350 I de 50 mM de tampn fosfatos a un pH 7, 6.3 kg de almidn, y 35
kg de suelo tratado como inculo. O = dinoseb acuoso, = dinoseb de suelo. 0 =
intermediato sin identificar.
237
La Etapa 2 contaba con cinco reactores montados de

la misma forma que en la Etapa 1, a excepcin de que
los contenidos de suelo de la Etapa 1 se repartieron
igualmente entre los cinco reactores como inoculo. Los
contenidos de los reactores se dejaron incubar durante 13
das. Esta etapa se dise con el fin de generar un
inoculo para la tercera etapa, por lo tanto, se sacaron
muestras solamente al principio y despus de los 13 das.
El dinoseb se haba eliminado del suelo y de la fase
acuosa al final de la incubacin, pero an estaba presente
el intermedio 1.
Los contenidos de los cinco reactores de la Etapa 2 se
utilizaron como inoculo para los reactores estticos de la
Etapa 3. Cada uno de los reactores tena una capacidad
de 6.000 1, y se cargaron con aproximadamente 2.000 1
de agua de riego, 12,4 kg de K 2HP04, 3,7 kg de
KH3P04, 32 kg de sustrato de almidn, y aproximadamente 2.000 kg de suelo contaminado. La
temperatura, el potencial redox y el pH se controlaron tal
y como se describi para la Etapa 1. Se sacaron
muestras del suelo y de la fase acuosa a tiempo 0 y,
despus, una vez por semana. La incubacin se llev a
cabo entre los meses de octubre y mayo.
Inicialmente, la temperatura media de la fase acuosa
estaba en torno a los 25 C, pero cuando el clima reflej
el cambio de estacin, las temperaturas en los reactores
sufrieron grandes fluctuaciones. El pH se mantuvo en un
rango de 0,2 unidades en tomo a un pH 7, y el redox
descendi por debajo de 0 mV en un perodo de dos a
tres das. La actividad biolgica se desaceler durante los
meses de invierno, pero se reactiv cuando el tiempo
mejor. Para mediados de mayo, el suelo de la fase
acuosa ya no contena ningn dinoseb detectable ni
intermedios de biotransformacin. La fase acuosa se
separ y aplic a una zona de terreno no contaminado en
forma de aguas residuales. El suelo se introdujo en la
fosa en la zona contaminada.
En la Figura 10.5 se resumen los resultados de los
anlisis HPLC de las muestras tomadas en los reactores
de la Etapa 3. Esta figura demuestra una vez ms la
importancia de controlar los compuestos intermedios en la
degradacin de un compuesto, en vez de solamente e!
propio compuesto. El tiempo global de incubacin para la
separacin del dinoseb de la mezcla suelo/tampn a esta
escala no fue significativamente diferente de los tiempos
de incubacin observados en los experimentos a escala
239
Una segunda aplicacin de la tecnologa sera una

variacin innovadora del tratamiento en lechos que
nosotros hemos denominado tratamiento en lechos anaerobio. Este mtodo usara una fosa forrada similar a la
utilizada en el tratamiento en lechos, pero no sera
necesario un drenaje de la fosa. El forro no solamente
servira para aislar el sistema de tratamiento de las zonas
no contaminadas, sino que adems mantendra la fase
acuosa en la zona de tratamiento, permitiendo la
saturacin del suelo. Para asegurar una humidifcacin
completa del suelo sera necesario mezclar el suelo
contaminado con la fuente de carbono, el inoculo de
suelo, y el tampn, pasando todo a travs de una tolva
antes de su introduccin en la fosa. Sera beneficioso
realizar una suave mezcla peridica de los contenidos de
la fosa anaerobia, esto asegurara unas rpidas tasas de
disolucin y degradacin, evitando la formacin de bolsas
de suelo no tratado. Esta clase de aplicacin sera ms
apta para grandes zonas que contienen la cantidad de
suelo suficiente como para hacer ms rentable el gasto de
excavacin y de forrado de la fosa, en vez del gasto que
supondra, en tiempo y dinero, el introducir varios lotes
de suelo en un reactor agitado o de lechada.
El proceso tambin podra funcionar como un
procedimiento in situ utilizando mtodos convencionales
de entrega de la fuente de carbono complementaria y
otros nutrientes, pero omitiendo el proceso de
oxigenacin. Si el sistema de transporte de nutrientes
funcionase como un crculo cerrado, se evitara la
oxigenacin involuntaria. Antes de realizar este tipo de
recuperacin, se deben investigar los efectos que
provocara el dejar grandes extensiones de suelo anaerobio
y rico en carbono.
Comparaciones de costes
Este tipo de consideraciones juegan un papel importante

en la seleccin de un proceso de recuperacin del suelo.
Hemos estimado los costes de diversas tecnologas en
base a la informacin procedente de especialistas en
recuperacin y a la literatura sobre el tema. La Figura
10.6 presenta una comparacin entre los costes totales
estimados para diferentes mtodos de tratamiento. A
continuacin se explican los componentes de cada
tratamiento.
240
Coste ($/Ton)
1.000$
800$
600$
400$
200
0$
Incineracin Compostaje Almacenamiento In silu
Mtodo
Pozo
Reactor mvil
FIGURA 10.6. Comparacin entre los costes de diversas tcnicas

de recuperacin,
Almacenamiento
Los suelos contaminados con dinoseb tambin se han

transportado hasta vertederos que los almacenan de forma
permanente. Estas instalaciones tan slo almacenan suelos
contaminados; es decir, los residuos no se eliminan. A
partir del 8 de mayo de 1992, las nuevas directrices
federales no permitirn el vertido de suelos contaminados
con dinoseb en concentraciones por encima de 2,5 ppm.
Envirosafe, instalacin para el almacenamiento de
residuos peligrosos del sur de Idaho, aprobada bajo el
Acta de Recuperacin y Conservacin de Recursos
(RCRA), cobra 120 $/tonelada a cambio de almacenar
suelo contaminado. Esto, de nuevo, excluye el coste de
excavacin y transporte del suelo, que supondra un coste
total de 220-270 $/tonelada para los propietarios de zonas
contaminadas en nuestra regin.
Tratamiento en lechos anaerobios
Hemos obtenido de la Divisin de Servicios Ambientales

de la empresa Morrison Knudsen Company de Boise,
BIORRECUPE RACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL...
241
y estara formado por varios materiales. Primero, se

colocara una capa de arcilla de 60 cm, y despus una
capa de polietileno de alta densidad (PE-HD). Esta capa
representa la parte de contencin secundaria del forro. La
seccin primaria estara formada por 30 cm de material
granular, una lmina geotextil, otros 60 cm de arcilla, una
capa de PE-HD, y, finalmente, 30 cm de material granular
para proteger el polietileno. Adems, se utilizara una
lmina de plstico o de espuma flotante para evitar la
evaporacin.
Una fosa de estas caractersticas puede acomodar entre
600 y 10.000 toneladas de suelo. Cuando se completa el
proceso de degradacin, el suelo se pondra de nuevo en
su localizacin original, y se separara y evacuara la parte
sinttica del forro. Se podra utilizar una sola fosa para
recuperar con xito varios lotes de suelo.
A una escala que acomodase 5.000 toneladas de suelo,
el coste2 medio sera de 40 $/tonelada para una fosa de
335 m . El coste aproximado de evacuacin del suelo y
de control de la fosa estara en torno a los 55 $-78
$/tonelada. Esto lleva a un coste tota! de recuperacin de
95 $ a 118 $/tonelada (los costes se han calculado a
partir de los datos suministrados por Morrison Knudsen).
Compostaje
Aunque el compostaje es un proceso aerobio, presentamos

sus costes para compararlos con los de otras tecnologas.
El rango de costes para el compostaje puede variar mucho
segn los materiales que se vayan a tratar y el tamao de
la operacin.
En 1978, el Ejrcito de Estados Unidos propuso una
operacin de compostaje que tratara tres toneladas/da de
suelo contaminado
con TNT a un coste medio de 287
38
S/tonelada . El coste inicial de construccin se estim en
376.750 dlares, esto permitira la construccin de una
instalacin permanente a gran escala que se utilizara para
tratar el suelo contaminado que se produjese de forma
continua.
Las instalaciones modernas de compostaje actualmente
son ms eficaces y menos caras debido a la incorporacin
de biorreactores. Por ejemplo, los fangos de aguas
residuales se pueden compostar en un biorreactor por i 50
$/tonelada para cubrir el coste del equipo de muestreo y
control, los mayores niveles de seguridad, y el transporte
del suelo contaminado. Por lo tanto, el compostaje de
suelos contaminados costara entre 200-250 $/tonelada.
242
Tratamiento in situ
Para evitar el coste de excavacin del suelo y cumplir

algunas de las normas ms complejas que tratan sobre la
evacuacin de suelos contaminados con residuos
peligrosos, se ha investigado la recuperacin in situ.
Habra que perforar varios pozos de control en toda la
zona contaminada, y utilizar un pozo de extraccin para
hacer circular una solucin acuosa en el suelo, mantener
el suelo saturado y evitar la contaminacin de las aguas
subterrneas. Peridicamente, se perforaran ms pozos
de control dentro y alrededor de la zona para obtener
muestras aleatorias de suelo.
El rango de costes para este mtodo de tratamiento
vara mucho segn el nmero y la profundidad de los
pozos, la hidrogeologa de la zona, y la extensin de la
contaminacin. Hemos hallado unos costes estimados
para el tratamiento, siguiendo este mtodo, de dos zonas
contaminadas con hidrocarburos.
El primer informe
3,l2)
presentaba un coste de 130 $/m
para tratar una zona
Resumen
Hemos tratado la biorrecuperacin de un suelo

contaminado con el herbicida recalcitrante nitroaromtico
dinoseb. La tecnologa aplicada es sencilla y no es cara,
si se compara con los mtodos fsicos actuales
empleados para la recuperacin de suelos. La
comercializacin de este proceso podra usar el diseo de
un reactor agitado o de lechada, o de una fosa anaerobia
de tratamiento en lechos^ segn las
caractersticas de la zona.
La tecnologa consiste en estimular los organismos
naturales presentes en el suelo inundando ste con un
tampn de pH y aadiendo una fuente rica en carbono
para proporcionar energa a los organismos heterotrficos.
La actividad meta- blica de los organismos
heterotrficos elimina el oxgeno y el nitrato (ambos
pueden inhibir la degradacin del dinoseb) de suelo,
reduciendo el potencial redox y permitiendo la
degradacin del dinoseb.
Hemos encontrado al menos un suelo contaminado con
niveles bajos de dinoseb durante largos perodos de
tiempo (forma continua) que contena los organismos
apropiados para facilitar el tratamiento, necesitando slo
una bioestimulacin con nutrientes y carbono. El largo
243
En otro suelo, contaminado de forma aguda con

grandes niveles de dinoseb, no existan organismos
apropiados, o fueron inhibidos por los altos niveles de
dinoseb.
Aadiendo
suelo
anteriormente
tratado
procedente de la zona contaminada se proporcionaron los
organismos necesarios para que se produjese la
biorrecuperacin.
La recuperacin de otros contaminantes que no eran
dinoseb en suelos multi- contaminados sugiere que el
tratamiento anaerobio es muy verstil. Las investigaciones en la recuperacin de suelos contaminados con
otros compuestos aerobiamente recalcitrantes puede
revelar otras aplicaciones para esta tecnologa.
Reconocimientos
Nos gustara agradecer los excelentes consejos y el

apoyo tcnico de FCeith Stormo y Karen Crossley. El
doctor Doug Sell de la empresa J. R. Simplot Company,
Boise, Idaho, ha sido fundamental para organizar la
demostracin en Hagerman y suministrar almidn. El
seor Marvin Thome de la empresa Morrison Knudsen
Company, de Boise, Idaho, ha aportado informacin
acerca del diseo de la fosa para el tratamiento en
lechos.
Esta investigacin recibi el apoyo de la Agencia de
1. Aggarwal, P. K., J. L. Means, and R. E. Hinchee.

1991. Formulation of nutrient solu- tions for in situ
biodegradation, pp. 51-66. In R. E. Hinchee and R, F.
Olfenbuttel (eds.), In Situ Bioreclamation: Applications
and Investigations for Hydrocarbon and Contaminated
Site Remediation, Butterworth-Heinemann, Stoneham,
Mass.
2. Alfoldi, L. 1991. Hydrogeologic considerations for in
situ bioremediation, pp. 33-50. In R. E. Hinchee and
R. F. Olfenbuttel (eds.), In Situ Bioreclamation:
Applications and Investigations for Hydrocarbon and
Contaminated Site Remediation, Butterworth-Heinemann, Stoneham, Mass.
3. Atlas, R. M. 1991, Bioremediation of fossil fuel
contaminated soils, pp. 14-32. In R. E. Hinchee and
244
5. Barenschee, E. R., P. Bochem, O. Helmling, and P.

Weppen. 1991. Effectiveness and kinetics of hydrogen
peroxide
and
nitrate-enhanced
biodegradation
of
hydrocarbons, pp. 103-124. In R. E. Hinchee and R. F.
and lnvestigations for Hydrocarbon and Contaminated
Mass.
6. Beli, R. A., and A. H. Hoffman. 1991. Gasoline spill in
fractured bedrock addressed with in situ bioremediation,
pp. 437-443. In R. E. Hinchee and R. F. Olfenbuttel
(eds.), In Situ Bioreclamation: Applications and
lnvestigations for Hydrocarbon and Contaminated Site
Remediation, Butterworth-Heinemann, Stoneham, Mass.
7. Black, W. V., R. C. Ahlert, D. S. Kosson, and J. E.
Brugger. 1991. Slurry-based biotreatment of
contaminants sorbed onto soil constituents, pp. 408-422,
ln R, E, Hinchee, and R. F. Olfenbuttel (eds.), On-Site
Bioreclamation:
Processes
for
Xenobiotic
and
Hydrocarbon
Treatment,
Butterworth-Heinemann,
Stoneham, Mass.
8. Bouwer, E. J,, and G. D. Cobb. 1987. Modeling of
biological processes in the subsurface. Water Sci,
Technol. 19:769-779,
9. Bradford, M. L and R. Krishnamoorthy. 1991. Consider
bioremediation for waste site cleanup. Chem. Eng. Prog.
87:80-85.
10. Brauer, H. 1987. Development and effciency of a new
generation of bioreactors. Part
1. Bioproc. Eng. 2:149-159.
11. Brauer, H. 1988, Development and effciency of a new
generation of bioreactors. Part
2, Description of new bioreactors. Bioproc, Eng. 3:11-21.
12.
Brown, K. A., J. C. Dey, and W. E. McFarland.
1991. Integrated site remediation com- bining
groundwater treatment, soil vapor extraction, and
bioremediation, pp. 444-449. In R. E. Hinchee, and R.
F.
Olfenbuttel
(eds.),
In
Situ
Bioreclamation:
Applications and lnvestigations for Hydrocarbon and
Contaminated Site Remediation, Butterworth- Heinemann,
Stoneham, Mass.
13.
Davis-Hoover, W. J., L. C. Murdoch, S. J. Vesper,
H. R. Pahren, O. L. Sprockel, C. L. Chang, A. Hussain,
and W. A. Ritschel. 1991. Hydraulic fracturing to
improve nutrient and oxygen delivery for in situ
bioreclamation, pp. 68-82. In R. E. Hinchee and R. F.
Olfenbuttel (eds ), In Situ Bioreclamation: Applications
and lnvestigations for Hycarbon and Contaminated Site
Remediation, Butterworth-Heinemann, Stoneham, Mass.
14.
Doyle, J. D., K. A. Short, G. Stotzky, R. J, King,
BIOR RECUPE RACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL...
245
20.
Hartter, D, R. 1985. The use and importance of
nitroaromatic compounds in the che- micat industry, pp.
1-14. In D. E. Rickert fed.), Chemical Institute of
Toxicology
Series:
Toxicity
ofNitroaromatic
Compounds, Hemisphere Publishing, Washington, D.C.
21.
Hathaway, J. A. 1985. Subclinical effects of
trinitrotoluene: A review of epidemiolo- gy studies, pp.
255-274. In D. E. Rickert (ed.), Chemical Institute of
Toxicology
Series:
Toxicity
ofNitroaromatic
Compounds, Hemisphere Publishing, Washington, D.C.
22.
Huling, S. G., B. E. Bledsoe, and M. V. White,
1991. The feasibility of using hydrogen peroxide as a
source of oxygen in bioremediation, pp. 83-102. In R.
E. Hinchee and R. F. Olfenbuttel (eds.), n Situ
Bioreclamation: Applications and Investigations for
Hydrocarbon and Contaminated Site Remediation,
Butterworth-Heinemann, Stone- ham, Mass.
23.
Isbister, J, D., G. L, Anspach, J, F. Kitchens, and
R. C. Doyle. 1984. Composting for decontamination of
soils containing explosives. Microbiologica 7:47-73.
24.
Jensen, H. L., and Lautrup-Larsen. 1967.
Microorganisms
that
decompose
nitroaromatic
compounds with special reference to dinitro-ort/ocresol. Acta Agrie. Scand. 17:115-126.
25.
Kaake, R. H., D. J. Roberts, T. O. Stevens, R. L.
Crawford, and D. L. Crawford. 1992. Bioremediation of
soils contaminated with 2-ec-butyl-4,6-dinitrophenol
(dinoseb). Appi. Environ. Mierobiol. 58:1683-1689.
26.
Kaplan, D. L. 1990. Biotransformation pathways
of hazardous energetic organonitro compounds, pp. 155182. In D. Kamely, A. Chakrabarty, and G. S. Omenn
(eds.), Advances in Applied Biotechnology, 4:
Biotechnology and Biodegradation, Portfolio Publishing,
The Woodlands, Tex.
27.
Kaplan, D. L., and A. M. Kaplan. 1982.
Thermophilic
biotransformations
of
2,4,6-trinitrotoluene under simulated composting conditions.
Appl. Environ. Mierobiol. 44:757-760.
28.
Klausmeier, R. E., J. L. Osmon, and D, R, Walls.
1973. The effect of trinitrotoluene on microorganisms.
Dev. Ind. Mierobiol. 15:309-317.
29.
Kleijntjens, R. H., K. C. A. M. Luyben, M. A.
Bosse, and L. P. Velthuisen. 1987. Process development
for biological soil decontamination in a slurry reactor,
pp. 252255. In O. M. Neijssel, R. R. van der Meer,
and K. C. A. M. Luyben (eds.), Proc. 4th European
Congress on Biotechnology, 1987, vol. 1, Elsevier
Science, Amsterdam.
30.
Kukor, J. J., and R. H. Olsen. 1989. Diversity of
toluene degradation following long term exposure to
246
por\um. Proceedings of the Institute of Gas Technologys

Second International Sym- posium on Gas, Oil, Coal and
Environmental Biotechnology, pp. 2.3.1-22.
35.
Mikesell, M. D., and S. A, Boyd. 1988.
Enhancement of pentachlorophenol degradation in soil
through induced anaerobiosis and bioaugmentation with
anaerobio sewage sludge. Environ. Sci. Technol
22:1411-1414.
36.
van den Munckhof, G. P. M., and M. F. X. Veul.
1991. Production-scale triis on the decontamination of
oil-polluted soil in a rotating bioreactor at feld
capacity, pp. 441-451. In R. E. Hinchee and R. F.
Olfenbuttel (eds.), On-Site Bioreclamation: Processes
for
Xenobiotic
and
Hydrocarbon
Treatment,
Butterworth-Heinemann, Stoneham, Mass.
37.
Naumova, R. P., S. Y. Selivanovskaya, and F. A.
Mingatina. 1988. Possibility of deep bacterial
destruction of 2,4,6-trinitrotoluene. Mikrobiologiya
(USSR) 57:218-222,
38.
Osmon, J. L., C. C. Andrews, and A. Tatyrek.
1978. The biodegradation of TNT in enhanced soil and
compost systems. Report No. ARLCD-TR-77032. U.S.
Army Ar- mament Research and Development
Command. Large Caliber Weapon Systems Laboratory, Dover, N.J.
39.
Porta,
A.
1991.
A
review
ofEuropean
bioreclamation practice, pp. 1-13. In R. E. Hinchee and
Contaminated
Site
Remediation,
ButterworthHeinemann, Stoneham, Mass.
40.
Salkinoja-Salonen, M., P. Middeldorp, M. Briglia,
R. Valo, M. Haggblom, and A. McBain. 1989. Cleanup
of od industrial sites, pp. 347-368, In D, Kamely, A.
Chakra- barty, and G. S. Omenn (eds.), Advances in
Biotechnology
Series,
4:
Biotechnology
and
Biodegradation, Portfolio Publishing, The Woodlands,
Tex.
41.
Schmitt, E. K., M. T. Lieberman, J. A. Caplan,
D, Blaes, P. Keating, and W. Richards. 1991.
Bioremediation of soil and groundwater contaminated
with stoddard solventand mop oil using the PetroClean
bioremediation system, pp. 581-599. In R. E. Hinchee
and R. F. Olfenbuttel (eds.), In Situ Bioreclamation:
Contaminated
Site
Remediation,
ButterworthHeinemann, Stoneham, Mass.
42.
Semprini, L., G. D. Hopkins, P. V. Roberts, and
P. L. McCarty. 1991. In situ biotransformation of
carbn tetrachloride, freon-113, freon-11, and 1,1,1-
48.
247
Spanggord, R. J., J. C. Spain, S. F, Nishino, and

K. E. Mortelmans. 1991. Biode- gradation of 2,4dinitrotoluene by a Pseudomonas sp. Appl. Environ.
Microbiol. 57:3200-3205.
49.
Stegmann, R., S. Lotter, and J. Heerenklage.
1991. Biological treatment of oil-contaminated soils in
bioreactors, pp. 188-208. In R. E. Hinchee and R. F.
and Investigations for Hydrocarbon and Conta- minated
Mass.
50. Stevens, T. O. 1989. Ph. D. dissertation, University of
Idaho, Moscow, Idaho.
51.
Stevens, T. O., R. L. Crawford, and D. L.
Crawford. 1990. Biodegradation of dinoseb (2-sec-butyl4,6-dinitrophenol) in several Idaho soils varying in
dinoseb exposure history. Appl. Environ. Microbiol.
56:133-139.
52.
Stevens, T. O., R. L. Crawford, and D. L.
Crawford. 1991. Selection and isolation of bacteria
capable
of
degrading
dinoseb
(2-sec-butyl-4,6dinitrophenol). Biodegradation 2:1-13.
53.
Tewfik, M. S., and W. C. Evans. 1966. The
metabolism of 3,5-dinitro-o-cresol (DNOC) by soil
micro-organisms. Biochem. J. 99:31.
54.
Visscher, K., J. Brinkman, and E. R. Soczo.
1989. Biotechnology in hazardous waste management in
the Netherlands, pp. 389-403. In D. Kamely, A.
Chakrabarty, and G. S. Omenn (eds.), Advances in
Applied Biotechnology Series, 4: Biotechnology and
Biodegradation, Portfolio Publishing, The Woodlands,
Tex.
55.
Wallnoefer, P. R., W. Ziegler, G. Engelhardt, and
H. Rothmeier. 1978. Transformaron of dinitrophenol
herbicides by Azotobacter sp. Chemosphere 7:967-972.
56.
Webb, O. F., T. J. Phelps, P. R. Bienkowski, P.
M. Digrazia, G. D. Reed, B. Applega- te, D. C. White,
and G. S. Sayler. 1991. Development of a differential
Nivel de tratamiento
Porcentaje del total de instalaciones
Slo primario
11
Primario y secundario
Primario, secundario y ms
Otros
54
21
14
250
252
BJOTRATAMIENTOS
DE
TXICOS
PELIGROSOS
BIOTRATAMIENTOS
DE RESIDUOS
RESIDUOS
YYPELIGROSOS
TRATAMIENTO BIOLGICO
DETXICOS
AGUAS RESIDUALES.
251
TABLA
mnimos
en Estados
Unidos
para
delde
tratamiento
secundario
radoras
de 11.2.
AguasNiveles
Residuales
Urbanas
(EDARU)
ms
deel60efluente
millones
kg de re siduos
qumicos
(Reg. Fed., 1988, 1989)
(Thayer, 1992).
Sin embargo, el diseo estndar clsico de los sistemas de tratamiento de aguas residuales
no consigue degradar muchos de los productos qumicos qe se han inventado en el siglo xx y
que ahora aparecen en las aguas residuales industriales y domsticas. Se deben desarrollar
nuevas o mejores tecnologas capaces de utilizar procesos biodegradadores basados en
microorganismos.
Este captulo proporciona una visin globalizada del estado actual de trata miento a gran
primarios
escala de las aguas residuales
industriales y peligrosas. En primer lugar, se resume la capacidad
de las EDARUs para tratar aguas residuales urbanas tpicas. Muchos de los procesos que tratan
FIGURA 11.1. Esquema de un tratamiento tpico primario y secundario combinado.
aguas residuales industriales y peligrosas esencialmente son versiones a pequea escala de las
EDARUs. Despus, se discuten las limitaciones de los procesos de tratamiento convencionales
respecto a la destruccin de compuestos no convencionales, como, por ejemplo, los orgni cos y
metales txicos que se pueden encontrar en algunas aguas residuales indus triales y peligrosas.
ambiente. se
El examinarn
fango secundario,
enriquecido
slidos,
que se estas
separa
en el decan
Finalmente,
los procesos
pionerosen
capaces
de superar
limitaciones
de tador
forma
secundario
se puede
recircular
al biorreactor
aumentary se
la maximice
concentracin
de biomasa
que
se minimice
la emisin
de compuestos
txicospara
al ambiente
su destruccin.
presente en el reactor. Una parte del fango secundario sufre un trata miento biolgico
adicional para reducir su DBO. Finalmente,
el D.
fango
estabiliza do se evaca en un vertedero o
Gregory
Sayles
se
incinera.
El
tratamiento
de
los
residuos
indus
triales
quizs node
requiera
tratamiento
Tratamiento
biolgico
lquidos
Agencia
de Proteccin
Ambientalconvencional
U.S.A. Laboratoriode
de residuos
Reduccin
RiesgosunCincinnati,
Ohio
primario si el agua residual industrial (AR1) no contiene material insoluble.
T.las
Suidan
Los objetivos de
paraobjetivo
elMakram
efluente
EDARU debiolgico
Estados Unidos
se dictan
por
Tradicionalmente,
el calidad
principal
en de
el
tratamiento
de aguas
resi duales
Departamento
de
Ingeniera
Civil
y
Ambiental
Universidad
de
Cincinnati
Cincinnati,
Ohio
ley
y
se
resumen
someramente
en
la
Tabla
11.2.
domsticas ha sido la reduccin de la demanda biolgica de oxgeno (DBO), de forma que el
Este
captulo
se centrar
estudio con
del reactor
biolgico
delsobre
proceso
(bio rreactor).
lquido
tratado
se pueda
emitiren
al el
ambiente
un impacto
mni mo
la ecologa
local. La
Por
parte
de objetivo
los biorreactores
de tratamiento
de laaguas
residuales
dependen
de procesos
lomayor
general,
este
se consigue
mediante (1)
separacin
biolgica
de los
orgnicos
biolgicos
aerobios,
se microbianas
utilizan biorreactores
no compuestos
ae robios, esorgnicos
decir, anaerobios
o
solubles,
de modo
que aunque
las clulas
degraden los
para generar
anxicos
con fines
concretos.
Lascon
caractersticas
generales
de los ybiorreactores
aerobios
energa
y materia
prima
gentica
el fin de crear
ms clulas,
(2) la separacin
de yla
anaerobios
empleados
instalaciones
convencionales
de tratamiento
discuten
por
materia
orgnica
residualenenlassuspensin
(slidos
en suspensin,
biolgicos se
y no
biolgicos)
separado
a
continuacin.
Estos
reactores
utilizan
una
poblacin
mezclada
de
utilizando la decantacin (sedimentacin).
microorganismos
que
se
desarrollan
a
partir
de
los
microorganismos
presentes
en
el
afluente
En las EDARUs estas tareas se suelen llevar a cabo mediante procesos en serie de
y detecnologas
las condiciones
del reactor.
tratamiento
primario operativas
y que
secundario
(que se muestran
esquemticamente naturales
en la Figura 11.1).
Las
emplean
microorganismos
Captulo
11
TRATAMIENTO
BIOLGICO DE AGUAS
RESIDUALES
para
la destruccin
de compuestos
han sido,
Actualmente,
se utiliza una combinacin
del tratamientoorgnicos
primario y secundario
en al menos el
histricamente,
las detecnologas
de Tabla
tratamiento
msprimario
75 por ciento de las EDARUs
Estados Unidos (vase
11.1). El tratamiento
utilizadas
por
su
bajo
coste
frente
a
los
mtodos
fsicos
consiste en el tamizado y la sedimentacin del lquido afluente de aguas residuales para separar
y losqumicos.
Estas
tecnologas
son secundario
menos incluye
costosas
materiales grandes
no solubles.
El tratamiento
el uso porque
de un biorreactor,
las
reacciones
de
degradacin,
medidas
por
la
normalmente, con una decantacin posterior. El objetivo del biorreactor esactividad
mineralizar la mate TABLA 11.1. Nmero
de instalaciones
de tratamiento
aguas residuales domsticas
biocataltica
natural,
se producen
adevelocidades
rpidasenaEstados
ria orgnica soluble en dixido de carbono y agua. Sin embargo, ningn reactor puede destruir
Unidos
segn
el
nivel
de
tratamiento
en
1988
(total
=
15.708)
(adaptado
de
U.S.A., 1989)
temperatura
ambiente. Por lo tanto, los EPAcostes
el 100 por cien de la DBO afluente, y una fraccin de sta se con vertir en masa celular
energticos
del tratamiento son relativamente bajos.
adicional debido al crecimiento celular. En la decantacin posterior, los slidos suspendidos en
A lo largo del ltimo siglo, el desarrollo de
el efluente del biorreactor (principalmente material celular) se separan del efluente.
tecnologas
basadas en microorganismos para el
Normalmente, parte
lquido residuales
ya reducido en slidos,
que sale
tanque de sedimentacin, se
tratamiento
de del
aguas
urbanas
hadelproporcionado
desinfecta
y
descarga
al
excelentes procesos para la destruccin de los
constituyentes fcilmente biodegradables en condiciones
aerobias. Por lo tanto, en el tratamiento de muchas
aguas residuales industriales y peligrosas se han aplicado
249
Caracterstica del
efluente
Separacin
inedia (%)
Concentracin
en 30 das
media Concentracin media

en' 7 das
DBO s (mg/l)
>85
<30
<45
Slidos suspendidos (mg/l)

PH
>85
<30
Entre 6,0 y 9,0
en todo momento
<45
TABLA 11.3. Descripcin de ios reactores tpicos de tratamiento biolgico aerobio a gran escala
Descripcin
Nombre del reactor
Esquema
Procesos con biomasa en

Biorreactores
aerobios
suspensin:
Reactor
flujo
TR
AT
AM
IE
NT
O
BI
OL
G
IC
O
DE
AG
UA
S
RE
SI
DU
AL
ES.
..
25
3
o de mezcla com-
Las fuentes orgnicas solubles de demanda qumica de oxgeno se pueden elimi nar
Fangos activados
anque
de
pistn
mediante cualquier proceso biolgico
viable, aerobio,
anaerobio, u otro. Sin embargo, los
sedimenpleta seguido por
procesos aerobios son los que
sllidos como mto do principal para !a
un:se emplean normalmente
reduccin de la DBO en tacin;
las aguas
residuales
domsticas, ya que las reacciones
sedimentaparte de
los
se devuelven
al das que en los procesos
microbiolgicas son rpidas,dos
normalmente
(fango activo)10 veces
ms rpi
que
de
reactor
y
anaerobios. Por lo tanto, losreactor;
reactores
aerobios
pueden ser relativamente
pequeos y
sedimentatan
permanecer abiertos a la atmsfera,
dando lugar a la
forma ms econmica de reduccin de
la atmsfera; aicin estn abiertos
la DBO.
zado
por
la
reacin
forzada:
_ La^principaJLdesventaja de-los-proc-esos-aerobiosHfrente a los no _ aerobios _ en et
mayoUtil
tratamiento de aguas residuales,
de materia celular
que se pro duce. En
para
el
ria es ladegran cantidad
los
el biorreactor
aerobio
se
produce
una
tasa
relativamente
alta
de
biomasa
debido a que el
Estanques, lagunas
Esencialmente, un qstanque excavado
crecimiento biolgico (masa
producida
por unidad
la atmsfera.
Pue- de ma teria orgnica
en elcelular
suelo, abierto
biodegradable) para los organismos
aerobios es arelativamente
alto, ms o menos 4 veces
totalmente aeroa
aero- celular residual y otros
mayor que el producido por los
La materia
de organismos
funcionar anaerobios.
de combinacin
ultativo) segn
el
materiales insolubtes (fangos)fonr
presentes en el efluente
del reactor
pueden contener una
bia
o
mediante
una
de
aireacin
em-finalmente se evacuar
DBO residual que deber reducirse en un proceso adicional, y que
bia y anaerobia
mezcla. Aireacin
como residuo slido.
(fac
^ireadores superfiLa estequiometra no ajustada de un proceso microbiolgico aerobio es
tipo de mecanismo
ultativo se emplea en comunidades e industrias pequeii
pleadoyel grado de
reduccin aerobia del DBO y la estabilizacin anaerobi
.y| C u O /l H r N ( S + s 2 0 2 -> 3 C0 2 + s 4 H 2 0 + C 5 H ? N0 2 + + sb (otros productos)
pasiva o mediante
uye un revestimiento del suelo si existen residuos pelig
ciales. El diseo
os de bajas concentraciones como, por ejemplo, el trata
donde C/^H^S es la composicin elemental del afluente; a, b, c, d y e se determinan segn
fac
Barnhart, 1968; Metcalf y Eddy, Inc., 1991; Middleb
la composicin especfica delcostoso;
agua residual;
permitey C 5 H 7 N0 2 es la composicin media de una
clula (Metcalf y Eddy, Inc., 1991). Si se pueden despreciar los otros productos
formados, entonces la estequiometra (,, $2, etc.) de la reaccin se determinar segn la
composicin del afluente (a, b, c y d) solucionando los balances elementales para C, H, O
y N. Suponiendo que la reaccin se comple te, entonces se podr calcular la tasa de
suministro de oxgeno necesario y la tasa de produccin de fangos celulares a partir de la
ecuacin ajustada, conocida la tasa del afluente del reactor.
Existen varios diseos comunes de reactores aerobios, y se resumen en la Tabla U .3. El
ms comn de estos diseos para el tratamiento secundario es el de los
as para un tratamiento secundario poco

a de los fangos en un mismo depsito. El
rosos. Los estanques aerobios se utilizan
ihiento final de los efluentes secundarios,
ooks et al., 1982; Thirumurthi, 1969.)
TABLA 11.3. Descripcin de los reactores tpicos de tratamiento biolgico aerobio a gran escala (continuacin)
Nombre del reactor
Descripcin
Procesos con biomasa adherida:

Lechos bacterianos
Torres rellenadas con un medio soporte

que apoya el crecimiento celular; el flujo
de residuos se distribuye sobre la parte
superior del medio y despus se filtra
entre el medio donde hace contacto con
la biomasa; aireacin pasiva desde arriba
y abajo de la torre donde est abierta a la
atmsfera; el medio puede ser grava
(filtro lento) o estructuras huecas de
plstico con un rea superficial alta
(filtro rpido). Se puede emplear para
el tratamiento secundario. El filtro lento
tambin
puede
propiciar
una
desnitrificacin.
El
filtro
rpido
normalmente supone la recirculacin
parcial del efluente. (Vase Bailey y
Ollis, 1986; Aryan y Johnson, 1987;
Harrtson y Dagger, 1987; Met- calf y
Eddy, Inc., 1991.)
Esquema
25
4
BI
OT
RA
TA
MI
EN
TO
S
DE
RE
SID
UO
S
T
XIC
OS
Y
PE
LIG
RO
SO
S
Biodiscos
Discos slidos donde se adhiere la biomasa, que giran sobre un eje horizontal que
contacta de forma alterna con el flujo de los
residuos abajo y el aire arriba. Se utilizan
mltiples discos por reactor, a menudo los
reactores
funcionan
en
serie
y
paralelamente porque el tamao de cada
reactor viene limitado por el peso de los
discos con la biomasa adherida. Se puede
emplear para el tratamiento secundario.
(Vase Metcalf y Eddy, Inc., 1991; EPA
U.S.A, 1984a; EPA U.S.A., 1984*.)
Proceso aerobio
Eliminacin Tasa
tpica
de Tiempo
tpica de DBO eliminacin de DBO retencin
(%)
lquido
de
del
Procesos de fangos activados

Convencional
(flujo
pistn)
Mezcla completa (CSTR)
85-95
85-95
240-640(15-40)*
640-1.760 (40110)*
Estanques/lagunas
Aerobioanaerobio Aerobio (tasa baja)
80-95
80-95
14,4-64(0,9-4)1
5-30 das 10-40
17,6-40 (1,1 -2,5 )* das
256
Lechos bacterianos Medio

rocoso (tasa baja) Medio
plstico (tasa muy alta)
Biodiscos
80-90
65-90
4-8 h 3-5 h
64-400 (4-25)*
320-1.280 (20-80)*
fangos activos (Fig.l 1.3). En la Tabla 11.4 se resumen los parmetros operativos tpicos
y las capacidades de los biorreactores aerobios.
60-95
32-56 (2-3,5)*
Biorreactores no aerobios
0,7-1,5 h
Aunque los reactores aerobios normalmente son la forma ms econmica de des truir la
DBO no peligrosa, los biorreactores no aerobios se pueden emplear con juntamente con el
tratamiento convencional cuando existen unas necesidades es peciales de tratamiento. Los
biorreactores no aerobios pueden jugar un papel elemental en el tratamiento de los
residuos peligrosos, tal y como se discute ms adelante en este captulo.
Los tres procesos microbiolgicos no aerobios utilizados con ms frecuencia son: (1)
anaerobio, es decir, metanognesis; (2) anxico, es decir, reduccin de nitratos, y (3)
reduccin de sulfatos. Los procesos metanognicos se caracterizan por un bajo
crecimiento celular y una gran tolerancia a las concentraciones orgni cas altas,
caractersticas que deberan convertirlos en una eleccin lgica para el tratamiento
de
TR
AT
residuos. Sin embargo, su baja tasa de utilizacin de materia org nica, su sensibilidad
a la
AM
temperatura (la temperatura ptima es 37 C), y el alto coste del reactor limitan
su uso a
IEN
aplicaciones sobre pequeos caudales de aguas residuales, como por ejemplo
la
TO
BI
estabilizacin de fangos (reduccin adicional de la DBO en los fangos del tratamiento
OL
secundario), y al tratamiento industrial de residuos orgnicos de alta concentracin.
G
IC
O
DE
AG
UA
TABLA 11.4. Valores tpicos de los procesos aerobios de tratamiento biolgico (adaptado
de
S
RE
Metcalf y Eddy, Inc., 1991)
SID
UA
LE
S...
255
258
Compuesto
BIOTRATAMIENTOS
DE RESIDUOS
Y PELIGROSOS
TRATAMIENTO BIOLGICO
DE TXICOS
AGUAS RESIDUALES..
257
Constante de la Constante de la Ley de Constante

de
tasa
de Henry (H x 10 3 atm distribucin entre las
La reaccin
metanognica
tpica y(no
es biolgicas y fsicas asociadas (de una
TABLA
11.5. Algunos
contaminantes
susajustada)
propiedades
biodegradacin {kb x
mVmol)
fases octanol-agua (*,)
base
de
datos
perteneciente
a
Govind
et al., 1991a)
10 2 1/mg h)
s1CaHbOcNdS --->s 2 CH 4 + s3CO 2 + s4H2O+ C 5 H 7 NO 2 + s5NH 3 + s 6 H 2 S
Acetona
calientan para acelerar la reaccin. Con

0,020 A menudo, los reactores
2,5 x 10 2metanognicos se0,57
Antraceno
Benceno
Clorobenceno
Cloroformo
Clordan
2,4-diclorofenol
0,30
8,6 x 10- 2
2,8 x io 4
Los procesos anxicos (reductores de nitratos) se emplean como paso final en la
2,9
5,5
140
oxidacin del amonaco. Los niveles de amonaco
altos se deben eliminar del flujo de
0,30
3,6
6,9 x 10 2
3 residuos por su alto valor nutritivo. Normalmente, un biorreactor aerobio, durante el
<io3,4
91
proceso de tratamiento
de fangos activos), oxida el amonaco
5
9,4 x (por
io- 2 ejemplo,
3,0 un
x 10proceso
3,0 x 10-4
presente
en
el
agua
residual
y
el
amonaco
generado
en el reac tor mediante la
3
10
2,8 x JO
790
frecuencia, el calentamiento se realiza recolectando y quemando el gas metano producido.
descomposicin de las protenas para formar nitratos (nitrifica cin). El nitrato retiene el
valor nutritivo y es una toxina humana. Por lo tanto, si existen altos niveles de nitratos en
el efluente secundario, se puede aadir un reac tor anxico en serie para reducir los
nitratos con virtindolos en gas nitrgeno (des nitrificacin) segn la ecuacin no
equilibrada
s1CaHbOcNdS + s2NO-3 + s2H+ --->s 3 N 2 + s 4 CO 2 + s 5 H 2 O + C 5 H 7 NO 2
Por lo tanto, debe haber compuestos biodegradables en el afluente del reactor anxi co,
bien como remanentes del reactor aerobio, o bien como un aadido al agua residual
(normalmente metanol).
Para las ARIs que contienen altos niveles de sulfatos y compuestos orgnicos, se
puede emplear el proceso microbiolgico de reduccin de sulfatos; en este caso, los
sulfatos se reducen a sulfuros mediante la oxidacin del afluente orgnico. La reduccin
no ajustada es
s1CaHbOcN d S + s2SO-2 4 --> s2 S 2 + s 3 CO 2 + s 4 H 2 O+ C 5 H 7 NO 2
Limitaciones de los procesos biolgicos

convencionales para el tratamiento de productos
qumicos peligrosos
La Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos (EPA, U.S.A.) controla las
emisiones al ambiente de unos 120 compuestos procedentes de operaciones industriales
activas mediante el Acta de Recuperacin y Conservacin de Recur sos (RCRA), de 1976,
y las emisiones al ambiente procedentes de los lugares no activos, abandonados o
cerrados, mediante el Acta Global de Responsabilidad, Compensacin y Respuesta
Ambiental (CERCLA o Superfondo), de 1980. Se ha establecido una lista de compuestos
peligrosos, es decir, de compuestos que pre sentan riesgos para el ecosistema o para la
salud pblica. En la Tabla 11.5 se recoge una muestra representativa de los compuestos
orgnicos listados. Tambin se citan como peligrosos varios metales, entre los que se
incluyen: arsenio, cromo, mercurio, selenio, vanadio, y zinc.
* Medida en mg/l.d (Ib/10 +3ft 3 da),
* Medida en mg/l.d (Ib/10+3ft 3 da). 1
Ib/10+3ft3 d = 16 mg/l.d.
Endrin
Etilbenceno
Fluoreno
Hexaclorobenceno
Naftaleno
Nitrobenceno
Pireno
T etracloroetano
Tolueno
Triclorometileno
Cloruro de vinilo (VC)
1,0
3,0
1,0
3,0
10
1,5
1,0
3.0
x 10
x 10-
x 10 2
x io 4
10
1,0 x 10^
0,30
4,0 x 10-*
6,4
6,4 x io 2
0,68
0,46
1,3 x lo 2
5,1 x 10 3
1L0
6,7
9,1
11,9
3,4 x io 4
1.400
1,5 x 10 4
2,6 x 10*
2.000
72
8,0 x 10 6
i ion
620
260
140
Compuesto
Biodegradacin
Evaporacin
Adsorcin
Escape
2,4-diclorofenol
81
10
Endrin
Tetracloroetileno
26
2
3
91
34
0
37
7
260262
TABLA 11.7.
BIOTRATAMIENTOS
DEDE
RESIDUOS
TXICOS
Y PELIGROSOS
TRATAMIENTO
BIOLGICO
AGUAS
TRATAMIENTO
BIOLGICO
DE RESIDUALES.
AGUAS
RESIDUALES..
BIOTRATAMIENTOS
RESIDUOS
TXICOS
V PELIGROSOS
259
261
sos deelTABLA
tratamiento
biolgico
con
frecuencia
seprocedentes
Destino
algunos
compuestos
orgnicos
voltiles
seleccionados
rante
tratamiento
real,aunque
odebien
una
simulacin
aseparan
escala ypiloto
las metales
instalaciones
compuestos
de 11.8.
este tipo,
sean
peligrosos,
deprecipitan
unadefuente
in dustrial en de
el
(combinacin
de biodegradacin
adsorcin
a fangos,alguno
evaporacin
y escape)
en la en la
pesados.
tratamiento.
sistema
de alcantarillado
urbano, no y
supondr
problema
para su
tratamiento
instalacin
de aguas
tratamiento
Lakeview*,
Ontario,
Canad.
de Bell
al.,
4. instalacin
Escape.
Losprocesos
compuestos
quedeno
se urbanas,
biodegradan
completamente,
volatili
zan,etomate
se 1988)
En los
deresiduales
tratamiento
convencionales
existen
modelos
mticos
de
siempre
que (Adaptado
lasvarios
concentraciones
no
sean
adsorben a para
los txicas
slidos
saldrn
delmicroorganismos.
biorreactor
en elAlternati
flujotxicos
delvamente,
efluente
lquido,
intrnsecamente
disponibles
establecer
parael los
destino
de los compuestos
(p. ej.,
estos
Petrasek
compuestos
et al.,
descargndose
posiblemente
al 1987;
ambiente
enenaguas
superficiales
o Govind
marinas.et al., 199le). Los
podran
ser tratados
de
forma convencional
la ypropia
fuente
industrial.
1983;
Barton,
1987;
Blackburn,
Namkung
Rittman,
1987;
Sin embargo,
muchos
de los
productos
qumicos
peligrosos,de entodas
apariencia,
no son
modelos
no pueden
simular
de igual
forma,
el rendimiento
las plantas
de
Los diferentes
destinos que procuramediante
el tratamiento
convencional
se ilustran convenciona
en la Figura les los
fcilmente
los procesos
tratamiento biodegradables
porque las premisas de simplificacin
de de
los tratamiento
modelos no siempre
se cumplen en
11.2. principales destinos son: evaporacin, adsorcin y escape. Estos des tinos son indeseables
la instalacin real. Sin embargo, los modelos permiten una variacin independiente de los
El destino
un compuesto
en particular
establece
tasas relati
vas de
para
losdecompuestos
peligrosos
porqueseimplican
su mediante
salidaresultante.
al las
ambiente
consecuencias
parmetros
del sistema
y la simulacin
del rendimiento
Porcon
ejemplo,
el anlisisa
los procesos
mencionados
anteriormente.
Estas
tasas
se
determinan
segn
las
siguientes
su
indeseables,
como
se resume
en la Tabla
Se han
varios
estudios
de vez
optimizacin
de un
biorreactor
de fangos
activos11.7.
respecto
a la realizado
aireacin se
puede
lograr
propiedades
biolgicas ya fsicas
de losy compuestos:
kh,Bell
constante
la tasa
de degradacin
experimentales
escala
piloto
ej.,
al.,de
1088;
Bhattacharya
1990;
mediante el uso
de unreal
modelo
que(p.calcule
la ettasa
de
biodegradacin
yet laal.,tasa
de
biolgica de los fangos activos; H, constante de Henry para el reparto agua-aire; y kow,
Bums
y Roe de
Industrial
Service orgnicos
Corporation,
1982; Hannah
et de
al.,aireacin.
1986; Thompson et al.,
evaporacin
los compuestos
en funcin
de la tasa
constante de reparto octanol-agua; esta constante se ha mostrado como una buena forma
1990).
Bell etseal.
(1988) estudiaron
la evaporacin
lossimular
compuestos
orgnicos
voltiles en
Cuando
eligieron
los parmetros
operativos de
para
una planta
con vencional
de
de medir el coeficiente de adsorcin agua-fango (Dobbs et al., 1989). Todas estas
varias
instalaciones
canadienses
de tratamiento
de ms
aguassofisticados
residuales (Govind
municipales
a 1991a)
escala
tratamiento
de
aguas
residuales,
uno
de
los
modelos
et
al.,
propiedades se resumen en la Tabla 11.5. El destino de un compuesto se puede estimar
real.
En la Tabla
11.8 se
resumen parte
de
datos recogidoselenTCE,
la planta
tasa
estableci
una serie
pararecogidos
el los
2,4-diclorofenol,
y elLakeview.
pesticida La
endrin,
comparando
los valores
de de
los destinos
parme tros
en la Tabla 11.5. Por
ejemplo,
de
separacin
combinada
mediante
biodegradacin
y adsorcin,
mostrada
en laeste
Tabla
11.8,
destinos
que
se
muestran
en
la
Tabla
11.6,
el
clculo
realizado
mediante
modelo
comparando los valores de los parmetros en el caso del 2,4-diclorofenol, el
se
calcul utilizando
un balance de masas
de los gases
de chime
neaparmetros
y del efluente
lquido.y
concuerda
con yla el
estimacin
utilizando
slo
biolgicos
tricloroetileno
(TCE),
herbicidarealizada
endrin,previamente
la estimacin
razonable
de los destinos
Obviamente,
la
evaporacin
puede
ser
un
destino
frecuente
para
los
productos
qumicos
fsicos.
sera: biodegradacin,
evaporacin, y adsorcin con el fango, respectivamente.
peligrosos
que entran
en instalaciones
convencionales
Porporque
ejemplo,
y segn
Los de
metales
peligrosos
no entre
se han
endetambin
latratamiento.
Tabladepende
11.5
El destino
un compuesto
que
en incluido
una planta
de loshay poca
la
Tabla
11.8,
ms
del
50
por
ciento
del
dicloroetano
y
ms
del
25
por
ciento
del
tolueno
y
informacin
sobre el reparto
agua-fangos
metales pesados.
parmetros
operativosdisponible
de la instalacin:
por ejemplo,
la tasadedelos
aireacin,
el tiem poSin
deembargo,
del
TCE
que
haban
entrado
en
la
planta,
se
emitieron
a
la
atmsfera
mediante
evaporacin.
norma general,
mayor
parte para
de los
metales
pesados
que entran
en unadel
instalacin
retencincomo
del lquido,
y otros.laPor
lo tanto,
realizar
una
estimacin
ms exacta
de los
tratamiento
se dividen
a, conven
y separndose
los fangos.
destino de
productosconvencional
qumicos peligrosos
enadhirindose
el tratamiento
cional secon,
requiere,
o
El destino principal
qumicos
la biodegra
un modelo matemtico
de tododeelmuchos
procesoproductos
de tratamiento
quepeligrosos
incorporees los
distintosdacin; es
la tasa de
biodegradacin
es destinos
mucho ms
destinos,decir,
o mediciones
experimentales
de los
du- rpida que la tasa de evaporacin o de
adsorcin a slidos en un reactor optimizado. Por ejemplo, y tomando como referencia la
Tabla 11.5, el destino principal del benceno, nitrobenceno y tolueno probablemente ser la
biodegradacin. La Tabla 11.6 muestra que tambin se biodegrada la mayor parte del 2,4diclorofenol. La introduccin de
El xito de los tratamientos convencionales en la degradacin de estos com puestos
peligrosos depende del destino final del compuesto en la instalacin de tratamiento. Existen
Evaporacin
Evaporacin
varios procesos en el mercado que procuran un destino final para un compuesto:
Impacto ambiental de los destinos de compuestos peligrosos en

instalaciones convencionales de tratamiento
1. Biodegradacin. El compuesto
se destruye al menos parcialmente. Es posible
Biodegradacin
TABLA 11.6. Destino calculado para algunos compuestos seleccionados Escape
en una instalacin
que la biodegradacin no se produzca porque los organismos aero bios no sean
del compuesto
convencional
Impacto
de tratamiento
ambiental
de aguas residuales* utilizando el modelo FATE (Govind et al.,
capaces de degradar el compuesto.
1991a)
Biodegradacin Ninguno, el resultado deseado.
2. Evaporacin. Los compuestos con constantes de la Ley de Henry relati vamente
altas (compuestos voltiles) pueden salir de la instalacin cuando se encuentran
Evaporacin Emisin a la atmsfera en
decantador voltiles;
primario, exposicin
en el biorreactor,
de elFcompuestos
de sereso en el decanta dor secundario,
angos
primarios
humanos a cancergenos; contribuye
a
la
degradacin
de
la
capa
de
mediante su evaporacin a la atmsferaozono.
en la interfase aire- agua, o por la
aireacin o ventilacin forzada del
biorreactor.
Adsorci
3. Adsorcin a slidos ynprecipitacin.
Los compuestos orgnicos que se
a
Adsorcin
Los compuestos txicos van al vertedero
junto con preferentemente
losfangos
fangos; puede
dividen o seccionan
pasando desde el agua a los slidos
11.2. Destino
productos
qumicos en
tratamiento
provocar la FIGURA
contaminacin
de de
las los
aguas
subterrneas,
lo etque
podra convencional de las aguas
* Tamao
planta = 1 MGD
(3.785
incluye
tratamiento secundario(con
de los
fangos primarios
en eldebiorreactor,
como
pormVd),
ejemplo
losel microorganismos
coeficiente
de y
residuales.
amenazar a los suministros
de agua mediante
potable.burbujas gruesas
activados,reparto
aireacin
difundidas,
relacin
recirculacin
0,5, tasa de produccin de
octanol-agua relativamente alto), al finaldesaldrn
de la =instala
fangos = 32 mVdia, caudal = 3.785 mVda, volumen = 646 m\
en laaguas
evacuacin
de los fangos.
Engos,
los fangos residuales de los proceEscape
Emisin de compuestos txicoscin
a las
superficiales
(ros, la
Destino
ocanos); puede contaminar fuentes de agua potable, daar el ecosistema

local.
Compuesto
Benceno
Cloroformo
Diclorometano
Tasa de separacin
(g/da) por:
Carga Biodegr
afluente adacin
(g/da)
y
adsorci
31
27
435
4.198
271
514
Evap
o
raci
n
4
85
2.316
Porcentaje de separacin
por:
Escap Biodegra- Evapo
e
dacin y racin
adsorcin
Escape
ND 87
13
79 62
1.368 12
20
55
18
33
Etilbenceno
Tolueno
Tricloroetileno
215
1.469
72
120
1.091
36
92
361
21
3,5 56
17 74
15 50
43
25
29
1
1
21
Fcil de biodegradar
aerobiamente (k h alto)
Ninguna necesaria.
Voltil (//alto)
Arrastrar con el aire del afluente, tratar el aire con un

biofiltro para fase gaseosa. Tratar los gases del fango
activado utilizando un biofltro para fase ga seosa. Proceso
PACT*. Pretratamiento anaerobio.
Adsorcin a fangos
Estabilizacin de fangos anaerobios.
(*alto)
Escape
Pretratamiento
o tratamiento
con reactor
biopelcula
miento convencional,
estosnico
organismos
se inoculan
directamente en el biorreactor,
aerobio
o anaerobio.
Proceso
PACT.
o bien
se dejan para
que se
aclimaten a los compuestos txicos antes de la inocu lacin. En el
Pretratamiento
o tratamiento
nico. biolgicos que utilicen cultivos puros de
futuro se anaerobio
podr disponer
de procesos
( 6 , H, y k l)w bajos)
Proceso PACT.
TRATAMIENTO BIOLGICO DE AGUAS RESIDUALES.
263
microorganismos, alterados de forma natural o genticamente. Estas po sibilidades no sern

tratadas aqu. En la Tabla 11.9 se citan las caractersticas bio lgicas y fsicas de los residuos
peligrosos junto con una seleccin de las tcnicas desarrolladas para tratar estos compuestos.
A continuacin se examina cada una de estas tecnologas.
Digestin anaerobia de fangos

En muchas plantas de tratamiento de aguas residuales, municipales e industriales, el fango
efluente de los tratamientos primario y secundario se lleva a un biorreac tor anaerobio
(frecuentemente denominado digestor o estabilizador anaerobio) para reducir la DBO
residual de los fangos (Metcalf y Eddy, 1991). Las condiciones anaerobias dan lugar a la
degradacin biolgica metanognica de la DBO, dejando a los fangos aptos para su
evacuacin en el vertedero. Si ios compuestos orgnicos txicos se adsorben a los fangos,
Reactor de grava: volumen = 683 m\ caudal de aire = 10,4 mVmn. Depsito de aireacin de fangos
las condiciones
metanognicas del digestor pueden estimular la degradacin de muchos de
activos; volumen = 16.070 m 3 , caudal de aire = 2,064 mVmin., difusor grueso. Tiempo de retencin de
estos
compuestos
txicos
(Govind
eth, tasa de aire global = 46 m 3 aire/m 3 agua.
tratamientos primario
y secundario
- 6,0
A continuacinlse discuten las correcciones^ afrnTivas'biofgicas que per^ mitirn

variar los destinos no aceptables de los productos qumicos peligrosos en las instalaciones
convencionales de tratamiento.
TABLA 11.9. Alternativas/complementos con procesos biolgicos para el tratamiento

convencionai
de compuestos
peligrosos procesos
con caractersticasbiolgicos
fsicas y biolgicas diferentes
Soluciones
medante
a las
limitaciones
de
convencionales
los
tratamientos
biolgicos
Caractersticas de los compuestos

Alternativas/adiciones al tratamiento
La discusin
anterior pone de relieve que las limitaciones
del tratamiento conven cional
peligrosos
convencional
respecto a muchos de los compuestos peligrosos dependen en gran medida de la naturaleza del
residuo peligroso que estemos considerando. Por lo tanto, la solucin a estas limitaciones
depende de los compuestos presentes en el agua residual.
Las plantas de tratamiento, municipales o industriales, que no puedan tratar de forma
satisfactoria los residuos peligrosos afluentes se deben modificar para tratar estos compuestos
de modo que se pueda evitar una emisin ilegal o poco tica al ambiente. Estas modificaciones
tambin sern necesarias en el diseo de las insta laciones nuevas que traten estos residuos;
cuando se disea una instalacin nueva, existe la posibilidad de optimizar el diseo y de poder
integrar el tratamiento convencional a los procesos necesarios que permitan el tratamiento de
los residuos peligrosos.
Se han desarrollado muchos sistemas biolgicos para apoyar o sustituir el tra tamiento
convencional con el fin de eliminar los residuos peligrosos. Estos proce sos emplean
asociaciones microbiolgicas extradas de las instalaciones de trata
264
al., 1991/). Por lo tanto, si el destino primario de los compuestos orgnicos txi cos
afluentes en el tratamiento convencional es su adsorcin a los fangos, su des tino ltimo ser
su biodegradacin en el digestor anaerobio. Los parmetros ope rativos tpicos para el
digestor anaerobio son: un tiempo de retencin de entre 10 y 20 das para lquidos y slidos,
y una temperatura de 35 C. El metano producido por la actividad microbiana metanognica
a menudo se quema para ayudaral calentamiento del biorreactor.
Proceso PACT
El proceso patentado PACT , proceso de tratamiento con carbono activado en polvo (proceso
PACT), implica la adicin continua de carbono activo, en forma de polvo, al biorreactor de
fangos activados con el fin de adsorber los compuestos orgnicos txicos, y evitar as
destinos no deseados para estos compuestos (Eck- enfelder, 1989). El carbono activado
adsorbe orgnicos de todo tipo, es decir, voltiles, recalcitrantes, u orgnicos que se
adhieren a fangos. Por lo tanto, el proceso PACT permite que las plantas de tratamiento
puedan operar con un caudal afluente mayor, y ayuda a estabilizar el proceso frente a las
cargas de choque de DBO o de orgnicos txicos en el afluente. Despus del biorreactor, el
polvo de carbono activo con compuestos orgnicos adsorbidos se sedimenta junto con los
fangos en el decantador. Las plantas municipales que emplean el proceso PACT
normalmente incineran la mezcla de fangos y carbono, destruyendo de esta forma los
orgnicos adsorbidos. Una tcnica alternativa de evacuacin es la oxidacin por aire hme do, que provoca la solubilizacin o la destruccin de la biomasa, y una regenera cin parcial
del carbono. La mezcla fangos-carbono tambin se puede tratar me diante digestin
anaerobia; en este caso, muchos de los compuestos orgnicos adsorbidos en el carbono se
destruyen con la actividad microbiana metanognica. El carbono se evacuara con los
fangos digeridos. Las concentraciones de carbono utilizadas normalmente en el proceso
PACT estn en tomo a 20-200 mg/1 (Metcalf y Eddy, 1991).
Adsorcin CAG/estabilizacin anaerobia

Una variante del proceso PACT, que ofrece una mayor flexibilidad operativa, es el proceso
de tratamiento de adsorcin por carbono activado granular (CAG)/estabilizacin anaerobia.
Este proceso se puede aplicar especialmente al tratamiento de aguas residuales peligrosas,
por ejemplo: aguas residuales industriales o lixi viados de vertederos, antes de su
tratamiento convencional. El proceso implica dos procesos unitarios: (1) un tanque de
mezcla CAG/agua residual, en el cual el afluente de un pretratamiento secundario pasa a
travs de un lecho CAG para separar los compuestos orgnicos solubles mediante
adsorcin, y (2) un biorreactor anaerobio, donde se coloca el CAG del tanque de mezcla
para permitir la regeneracin anerobia del mismo. El carbono regenerado sustituye al
carbono gastado en el tanque de mezcla, e, idealmente, durante su manipulacin, las
prdidas de CAG sern limitadas. El proceso se ha ensayado a escala de laboratorio
(Kupferle et al.,
* Powdered Activated Carbn Treatment (Tratamiento con carbono activado en polvo) (Eckenfelder, 1989).
TRATAMIENTO BIOLGICO DE AGUAS RESIDUALES..
265
1992) durante casi un ao de operacin continua. Los tiempos de retencin para lquidos y
CAG en la etapa de adsorcin fueron de 30 min. y 2 das, respectiva mente, y el tiempo de
retencin del CAG en el biorreactor anaerobio fue de 15 dias. Se trat con xito un agua
residual compleja que contena nueve compuestos orgnicos voltiles y cinco compuestos
orgnicos semivoltiles. El grado de eliminacin del clorobenceno, cloruro de rntileno,
TCE, dibutilftalato, y fenol fue de un 96, 50, 95, 66, y 85 por ciento, respectivamente.
Reactores biopelcula anaerobios
Se sabe que los procesos microbianos anaerobios presentan varias ventajas impor tantes
frente a los aerobios: (1) menor tasa de produccin de fangos, (2) operativi- dad con una
mayor DBO afluente y mayores niveles txicos, (3) ningn coste aso ciado con el
suministro de oxgeno al reactor, y (4) generacin de un producto secundario til, el
metano. Sin embargo, los procesos anaerobios presentan mayo res gastos de inversin y
operacin que los aerobios, ya que los sistemas anaero bios deben permanecer cerrados y
calientes. Por lo tanto, los procesos biolgicos anaerobios para el tratamiento de aguas
residuales peligrosas normalmente estn limitados al tratamiento de flujos con bajas tasas,
como por ejemplo: efluentes industriales, lixiviados de vertedero, aplicaciones tipo
Superfondo. Boyle y Swit- zenbaum (1990) han estudiado la aplicabilidad de los procesos
anaerobios al tratamiento de grandes volmenes.
La tasa intrnseca de destruccin biolgica de los orgnicos peligrosos en los sistemas
anaerobios es ms lenta que en los procesos aerobios; sin embargo, la tasa de destruccin
global de un biorreactor anaerobio se puede maximizar me diante la inmovilizacin de la
biomasa sobre un medio de soporte. Habitualmente, se utiliza un medio plstico muy
poroso en un lecho compacto, o un CAG en una columna fluidizada.
El reactor anaerobio CAG con lecho expandido (Fig. 11.3) se ha mostrado ideal para
el tratamiento de residuos que contienen mezclas de compuestos orgni cos fcilmente
biodegradables y biolgicamente refractarios. El medio CAG sirve para adherir a los
constituyentes inhibitorios de la fase acuosa, permitiendo de esta forma el uso de los
constituyentes fcilmente biodegradables. Cuando los consti tuyentes inhibitorios
adsorbidos resisten la biodegradacin, se puede poner en prc tica una estrategia que
implica la sustitucin peridica de parte del CAG para re poner la capacidad de adsorcin
del CAG y convertir ai residuo en biodegradabie. Las caractersticas de adsorcin del
CAG permiten la retencin de los orgnicos de biodegradacin lenta. En estos casos, la
capacidad de adsorcin del CAG se puede ampliar indefinidamente debido a la
regeneracin promovida biolgicamente. Se ha demostrado que el CAG tiene propiedades
de acoplamiento microbiolgico superiores a las que presentan otros medios en los lechos
fluidizados (Khan et al., 1982; Gardner et al., 1988; Fox et al., 1990). Adems, se ha
demostrado que el CAG proporciona una resistencia a las cargas de choque y facilita la
puesta en marcha de un sistema (Sudan et al., 1981; Khan et al., 1982).
1 Salida
JL_ de efluente
150
0,215-100
30
100
0,5-100
10
10,0-755
12
10
20
0,4
1,2-20
20-400
0,1
20
10-20
1,1-20
0,2
0.6
0,3
0,002-0,8
0,24
0,8
0,005-0,8
0,08
0,10-4,0
0,10
0,01
0,16
0,004
0,01-0,16
0,04-0,8
0,001
0,16
0,08-0,16
0,01-0,16
0,002
0,006
266

267
TABLA 11.10. Rendimiento del lecho fluidizado anaerobio CAG (Schroeder et al., 1991)
Efluente final
Compuesto
Concentracin
Carga
afluente
afluente
(mg/1) . (g/kg CAG/da) separacin
Porcentaje
de
Catecol
200-1.000
1,29-6,45
>99
Fenol
3-2.959
0,03-8,0
>97
p-cresol
70-280
0,19-0,76
>99
Indol
50-300
0,14-0,80
>99
Quinolena
50-300
0,14-0,80
>99
o-clorofenol
2.000
4,0
>98
2, 4-diclorofenol --------------------------------------400------------------------0*8______________>99,99
2,4,6-triclorofenol
>99,99
Di--butil ftalato
>83
Naftaleno
>99,9
p-Nitro fenol
>99,9
Nitrobenceno
>98
Lindano
>99,9
Acetona
>96
Metil-etil-cetona Metil>97
isobutil-cetona
>94
Tetracloroetileno
>99,9
Trcloroetileno Cloruro
9
de metileno
>98
1.1.1trie
>96
Bomba de recrculacin
Salida de
CAG
loroetano
>99,9
1.1- dicloroeta
7
no
>87
Entrada
Lecho de CAG>99,9
fluidizado
Tetracloru
de
ro
de
>97
E2 Grava
afluente
carbono
>85
Vlvula
Cloroform
>93
Junta
>86
FIGURA 11.3. Reactor anaerobio CAG con lecho fluidizado.
Filtracin biolgica de la fase gas

El reactor anaerobio CAG de lecho expandido se ha mostrado muy eficaz en el
Muchos procesos
sonresiduos
capacesbiolgicamente
de generar fluidos
gaseosos
residuales
que los
contie
nen
tratamiento
de varios
inhibitorios,
como
por ejemplo:
baos
compuestos
orgnicos
peligrosos.
En
el
tratamiento
de
las
aguas
residuales,
ia
de quitaesmaltes (Khan et al., 1982), las aguas residuales de gasificacin del carbn
evaporacin
mediante
aireacin
(por
arrastre)
en
el
proceso
secundario
es
el
desti
no
de
(Nakhla et al., 1990) y los lixiviados de vertederos peligrosos (Schroeder et al., 1991). En
compuestos
orgnicos
(COVs)
que entran en
las plantas
tratamiento
lamuchos
Tabla 11.10
se presentan
datosvoltiles
que resumen
el rendimiento
observado
en de
la eliminacin
convencional.
Las
soluciones
de
bombeo
y
tratamiento
para
las
aguas
subterrneas
de algunos compuestos problemticos mediante este proceso.
contaminadas pueden requerir el arrastre por aire para limpiar los COVs; de esta forma,
se genera un fluido gaseoso peligroso. Los procesos indus triales a menudo emplean los
COVs como reactivos o disolventes, y su uso puede
268
provocar un flujo de gas contaminado. En muchos pases, y en Estados Unidos con la

aprobacin de las enmiendas de 1990 al Acta del Aire Limpio, se controla de forma estricta
la emisin de compuestos txicos. El tratamiento biolgico de los COVs en los gases
residuales puede separar y destruir estos compuestos, y evitar as su emisin al medio
ambiente. La alternativa ms comn, el tratamiento mediante adsorcin en carbono
activado, es costosa y, por s misma, no da lugar a la destruccin de los contaminantes.
Histricamente, se ha utilizado el biotratamiento de la fase gaseosa para con trolar los
olores en las instalaciones de tratamiento convencional, donde el H 2 S y otros gases
olorosos se recogen y hacen pasar por un lecho de suelo o compost que contiene
microorganismos (Carlson y Leiser, 1966; Metcalf y Eddy, Inc., 1991). Los tiempos de
retencin en los sistemas de control de olores pueden ser de tan slo 15-30 s (ASCE,
1989).
La aplicacin de biofiltros para la destruccin de los COVs actualmente es un rea de
desarrollo muy activa en Estados Unidos {Leson y Winer, 1991). En Alemania y Holanda,
sin embargo, ya estn funcionando hasta 500 biofiltros a escala real que tratan los gases
procedentes de fuentes muy diversas, como fbricas de productos qumicos, imprentas,
plantas de coccin de pescados, plantas de tratamiento de aguas residuales industriales, y
vertederos (Leson y Winer, 1991).
El diseo general de un biofiltro es el de un reactor de lecho con material de relleno.
Sin embargo, existe poca o ninguna fase lquida (retencin con lquidos) en el biofiltro; la
mayor parte del volumen es un flujo de gas o un material slido de soporte con
microorganismos acoplados. El flujo lquido proporciona los nu trientes necesarios y la
humedad a los microorganismos, aunque se utiliza turba o compost como soporte slido,
los nutrientes se pueden lixiviar directamente del soporte. En Europa, los biofiltros han
seguido los diseos tradicionales utilizados para el control de olores, empleando lechos de
suelo o de compost, horizontales y paralelos, de aproximadamente 1 m de altura (Leson y
Winer, 1991). La mineralizacin del medio y el crecimiento celular excesivo, a menudo,
requieren una mezcla peridica y la sustitucin eventual del medio. Bohn (1992) constat
una eliminacin del 90 por ciento de los alcoholes y aldehidos en tiempos de residencia
comprendidos entre 30 segundos y varios minutos.
En la Figura 11.4 se muestra una fotografa del diseo tradicional europeo de un
biofiltro a escala real. El biofiltro mostrado es el sistema Bioton, construido por ClairTech
b.v. en Holanda y comercializado en Estados Unidos por Ambient Engineering, Inc.
ClairTech posee unidades en funcionamiento con tasas de flujo que alcanzan los 75.000
m 3 /h; estas unidades tratan los gases de chimenea procedentes del tratamiento de aguas
residuales con el fin de controlar los olores y los COVs (incluyendo el cloruro de metileno
y el cloroformo).
Los diseos actuales de biofiltros en Estados Unidos han seguido muy de cerca los
diseos europeos; sin embargo, se estn investigando otros diseos que utili zan materiales
de bajo mantenimiento, como CAG en lechos con material de relle no (Utkigar et al., 1991),
o novedades en materia de soporte, como trozos de celita extrusionada (Govind et al.,
1992).
269
Conclusin
Aunque el tratamiento biolgico del material residual orgnico haya sido estudia do
durante ms o menos un siglo, los nuevos retos en el tratamiento de aguas resi duales, por
ejemplo: el tratamiento biolgico de los productos qumicos peligrosos y las normas ms
estrictas sobre efluentes, siguen motivando pl desarrollo de pro cesos nuevos e
innovadores. Muchos de estos nuevos procesos se han descrito en este captulo. Al mismo
tiempo que aumenta nuestro conocimiento sobre los pro cesos fundamentales que tienen
lugar en estos sistemas metabolismo microbiolgico de mezclas de productos
qumicos peligrosos, ecologa de asociaciones microbianas, procesos de transporte en
biopeculas, propiedades de adherencia de la biomasa a superficies slidas, destino de los
productos qumicos txicos en los reactores, tambin aumenta nuestra capacidad para
disear bioprocesos rentables y con altos rendimientos.
Renuncia
Este captulo ha sido revisado y aprobado para su publicacin siguiendo la poltica de
revisin de la Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos. La men
270
cin de productos comerciales no supone su aprobacin ni recomendacin de uso por

parte de la Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos.
American Society of Civil Engineers (ASCE). 1989. Sulfide in Wastewater CoUection and
Treatmeni Systems. ASCE Manuals and Reports on Engineering Practice No. 69, ASCE.
Aryan, A. F., and S. H. Johnson. 1987. Discussion Of; A Comparison of Trickling Filter
Media. J. Water Pollut. Contr. Fed., vol. 59, no. 10, pp. 180-183.
Bailey, J. E., and D. F. Ollis. 1986. Biochemical Engineering Fundamentis, 2nd edition.
Chapter 14. McGraw-HiU, New York.
Barton, D. 1987. Intermedia Transpon of Organic Compounds tn Biological Wastewater
Treatment Process. Environ. Progr., vol. 6, pp. 246-256.
Bell, J, P., I. Osinga, and J. Meleer. 1988. Investigation ofStripping of Voladle Organic
Contaminants in Municipal Wastewater Treatment Systems, Phase I. Ontario Ministry of
the Environment, Ottawa.
Bhattacharya, S. K., R V. R. Angara, D. F. Bishop, Jr., R. A, Dobbs, and B. M. Austem.
1990, Removal and Fate of RCPA and CERCLA Toxic Organic Pollutants in Wastewater
Treatment. U.S. EPA Project Summary, EPA-600/S2-89/026, Washington, D.C.
Blackbum, J. W. 1987. Prediction of Organic Chemical Fates in Biological Treatment
Systems. viro#. Progr, vol. 6, pp-2F7-223. ~
Bohn, H. 1992. Consider Biofltration for Decontaminating Gases. Chem. Eng. Progr.,
April, pp. 34-40.
Boyle, W. C., and M. S. Switzenbaum. 1990. Anaerobio Treatment of Municipal Wastewaters: Status of the Technology-1990. Report for U.S. EPA Ris'k Reducton Engi neering Laboratory, Cincinnati, under Contract No. 68-03-3429.
Bums and Roe Industrial Services Corporation. 1982. Fate of Priority Pollutants in Publicly-Owned Treatment Plants. Final Report, U.S. EPA Report 1440/1-82/303, Washington, D.C.
Carson, D. A., and C. P. Leiser. 1966. Soil Beds for the Control of Sewage Odors. J.
Water Pollut. Contr. Fed., vol. 38, p. 829.
Dobbs, R. A., L. Wang, and R. Govind. 1989. Sorption of Toxic Organic Compounds on
Wastewater Solids; Conrelation with Fundamental Properties. Environ. Sci. Technoi,
vol. 23, pp. 1092-1097.
Eckenfelder, W. W., Jr., 1989. Industrial Water Pollution Control, 2nd edition. McGrawHill,
New York.
Federal Register (Fed. Reg.). 1988. Secondary Treatment Regulation. 40 CFR Part 133,
July 1.
Federal Register (Fed. Reg.). 1989. Amendment to the Secondary Treatment Regulations:
Percent Removal Requirements during Dry Weaiher Periods for Treatment Works Served by Combined Sewers. 40 CFR Part 133, January 27.
Fox, P., M. T. Suidan, and J. T. Bandy. 1990. A Comparison of Meda Types in Acetate
Fed Expanded-Bed Anaerobio Reactors. Water Res., vol. 7, no. 7, pp. 827-835.
Gardner, D. A., M. T. Suidan, and H. A. Kobayashi. 1988. Role of GAC Activity and
Particle Size during the FIuidized-Bed Anaerobic Treatment of Refinery Sour Water
Stripper Bottoms. J. Water Pollut. Contr. Fed., vol. 60, no. 4, pp, 505-513.
271
Govind, R., L.'Lai, and R. Dobbs. 199la. Integraed Model for Predicting the Fate of Organics in
Wastewater Treatment Plants. Environ. Progr., vol. 10, no. 1, pp. 13-23.
Govind, R., P. A. Flaherty, and R. A. Dobbs. 1991>. Fate and Effects of Semivolatile Organic
Pollutants during Anaerobio Digestin of Sludge. Water Res., vol. 25, no. 1, pp. 547-556.
Govind, R., V. Utkigar, Y. Shan, W. Zhao, G. D.'Sayles, D. F. Bishop, and S. I. Safferman. 1992.
Development of a Novel Bioflter for Aerobic Biodegradation of Volatile Organic Compounds.
!8th Annual Risk Reduct. Engin. Lab. Res. Symp.: Abstract Proc., EPA/600/R-62/028.
Hannah, S. A., B. M. Austem, A. E. Eralp, and R. H. Wise. 1986. Comparative Removal of Toxic
Pollutants by Six Wastewater Treatment Processes. J. Water Pollut. Contr. Fed., vol. 58, no. 1,
pp. 27-34.
Harrison, J. R., and G. T. Dagger. 1987. A Comparison of Trickling Filter Media. J. Water Pollut.
Contr. Fed., vol. 59, no. 7, pp. 276-283.
Khan, K. A., M. T. Suidan, and W. H. Cross. 1982. Role of Surface Active Media in Anaerobic
Filters, J. Env. Eng., ASCE, vol. 108, no. EE2, pp. 269-285.
Kupferle, M. J., T. Chen, V J. Gallardo, D. E. Lindberg, P. L. Bishop, D. F. Bishop, and S. I.
Safferman. 1992. Treatment of Dilute Hazardous Waste Streams by Sorption/Anae- robic
Stabilization. I8th Annual Risk Reduct. Engin. Lab. Res. Symp.: Abstract Proc., EPA/600/R62/028.
Leson, G., and A. M. Winer. 1991. Bioflltration: An Innovative Air Pollution Control Technology for
VOC Emission. y. Air Waste Manage. Assoc., vol. 41, no. 8, pp. 1045- 1054.
Mancini, J. L., and E. L. Barnhart. 1968. Industrial Treatment in Aerated Lagoons. In Advances in
Water Quality Improvement. Edited by E. F. Gloyna and W. W. Eckcnf el- der, Jr., University of
Texas Press, Austin.
Metcalf and Eddy Inc. 1991. Wastewater Engineering: Treatment, Disposal and Reuse, 3rd edition.
Edited by G. Tchobanoglous and F. L. Burton. McGraw-Hill, New York.
Middlebrooks, E. J., C. H. Middlebrooks, J. H. Reynolds, G. Z. Waters, C. S. Reed, and D. B. George.
1982. Wastewater Stabilization Lagoon Design, Performance and Upgra- ding. Macmillan,
New York.
Nakhla, G. F., M. T. Suidan, and J. T. Pfeffer. 1990. Control of Anaerobic GAC Reac- tors Treating
Inhibitory Wastewaters. J. Water Pollut. Contr. Fed., vol. 62, no. 1, pp. 65-72.
Namkung, E., and B. E. Rittmann. 1987. Estimating Volatile Organic Compound Emis- sions from
Publiely-Owned Treatment Works. J. Water Pollut. Contr. Fed., vol. 59, pp.670-678.
Petrasek, A. C., I. J. Kugelman, B. M. Austern, T. A. Pressley, L. A. Winslow, and R. H. Wise. 1983.
Fate of Toxic Organic Compounds in Wastewater Treatment Plants. J. Water Pollut. Contr.
Fed., vol. 55, no. 10, pp. 1286-1296.
Schroeder, A. T., M. T. Suidan, R. Nath, E. R. Krishnan, and R. C. Brenner. 1991. Car- bon-Assisted
Anaerobic Treatment of Hazardous Leachates. Proc. of the I7th Annual RREL Haz. Waste
Res. Symp., pp. 626-648.
Stall, T. R., and J. H. Sherrard. 1978. Evaluation of Control Parameters for the Activated Sludge
Process, J. Water Pollut. Contr. Fed., vol. 56, no. 4, pp. 336-345.
Suidan, M. T., W. H. Cross, M. Fong, and J. W. Calven, Jr. 1981. Anaerobic Carbn Filter for
Degradation of Phenols. J. Env. Eng., ASCE, vol. 107, no. EE3, pp. 563-579.
Thayer, A. M. 1992. Pollution Reduction. Chem. Eng. News, vol. 70, no. 46, pp. 22-52.
272
Thirumurthi, D. 1969. Design of Waste Stabilization Ponds, J. San. Eng. Div.. ASCE, vol. 95, no.
SA2, pp. 516-523.
Thompson, D., J. Bell, H. Melcer, and J. Kemp. 1990. nvestigation ofStripping ofVolatile Organic
Contaminants in Municipal Wastewater Treatment Systems, Phase //. Ontario Ministry of
the Environment, Ottawa.
U.S. Environmenta! Protection Agency (U.S. EPA). 1984a. Review of Current RBC Performance
and Design Procedures. EPA-600/2-85-033, Washington, D.C.
U.S. Environmental Protection Agency (U.S. EPA). 19846. Summary of Design Information on
Rotating Biolgica! Contactors. EPA-430/9-64-008, Washington, D.C.
U.S. Environmental Protection Agency (U.S. EPA). 1989. Assessment ofNeeded Publicy Owned
Treatment Facilities in the United States, 1988 Needs Survey Report to Con- gress. EPA430/09-89-0-001, Washington, D.C.
Utkigar, V., Y. Shan, and R. Govind. 1991. Biodegradation ofVolatile Organic Com- pounds in
Aerobic and Anaerobic Biofilters. Proc. I7th Annual RREL Hazard. Waste Res. Symp.,
EPA/600/9-91/002.
Water Pollution Control Federation (WPCF). 1987. Activated Siudge. Manual of Practice OM-9.
Captulo
12
CUESTIONES
REGLAMENTARIAS Y DE
EFICACIA EN LA
BIORRECUPER4CIN DE LOS
DERRAMES DE PETRLEO:
EXPERIENCIAS CON EL
DERRAME DEL EXXON VALDEZ
EN ALASKA
P. H. Pritchard
Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos Laboratorio de Investigacin
Ambiental Sabine Island, Gulf Breeze, Florida
Resumen
El uso de la biorrecuperacin como tecnologa adicional para la limpieza del de rrame de
petrleo del Exxon Valdez, en Prince William Sound, Alaska, ha sido un buen ejemplo de
los problemas y xitos que presenta la aplicacin de esta tecnolo ga. Los estudios de
campo llevados a cabo por los cientficos de la Agencia de Proteccin Ambiental de
Estados Unidos han demostrado que se poda acelerar la degradacin del petrleo
realizada por la microflora autctona de las playas de Prince William Sound aadiendo
fertilizante directamente a las playas contamina das con petrleo. Los resultados que
hemos obtenido en la aplicacin de un fertilizante oleoflico se presentan como ejemplos
de trabajos de campo y de laboratorio. El fertilizante aument la biodegradacin del
petrleo, que fue aproximadamente
273
274
el doble que en las zonas no tratadas, tal y como se puede comprobar por los cam bios en la
composicin del petrleo y el peso bruto del petrleo por unidad de material de playa.
Los estudios realizados apoyaron el uso de la biorrecuperacin como alternati va de
limpieza y, posteriormente, Exxon la utiliz a gran escala. Estos estudios ofrecieron
tambin algunas lecciones poco agradables, pero relevantes para los esfuerzos futuros en la
biorrecuperacin del petrleo. Este captulo trata estas lecciones y examina los problemas
y dificultades que presenta la evaluacin del rendimiento de la biorrecuperacin en este
campo.
Estudios de campo posteriores realizados en una playa contaminada con petr leo (que
contena menos material energtico y mayores cantidades de materia or gnica no
petrolfera), en los que se utiliz un granulado fertilizante de emisin lenta aplicado a
diferentes concentraciones, mostraron el escaso efecto que produ ca la aplicacin del
fertilizante. Se discuten tambin las precauciones que se de ben tomar para extrapolar
resultados desde trabajos de laboratorio hasta trabajos de campo, o desde una zona real a
otra.
Como sucede con muchos tipos de biorrecuperacin, es necesario contar con
protocolos para generar series de datos uniformes y relevantes que permitan tomar
decisiones correctas en relacin al uso del proceso o producto adecuado en una operacin
real de limpieza. La base conceptual de estos protocolos es un asunto complicado y su
desarrollo recibe la influencia de_las_experiencias reales^como el derram de~petrleo
del Exxon Valdez. La discusin de estos conceptos proporciona el marco de los problemas
y suposiciones que surgen cuando hay que decidir sobre cundo y cmo se aplica una
tecnologa de biorrecuperacin.
El uso de la biorrecuperacin para la limpieza de suelos, sedimentos, y acuferos
contaminados con hidrocarburos del petrleo y aceite es un hecho ampliamen te aceptado
(Lee y Levy, Bortha y Pramer). El xito ha sido posible gracias a la biodegradabilidad
relativa del petrleo y a que los degradadores de hidrocarburos pueden ser enriquecidos en
muchos, si no en la mayora, de los ambientes (Levy, Atlas). Adems, la biorrecuperacin
est ganando terreno como tecnologa viable; si se utiliza con prudencia, puede
proporcionar una limpieza eficaz, poco costosa y ambientalmente segura de los productos
qumicos residuales. Por lo tanto, cuando se sugiri usar la biorrecuperacin a modo de
herramienta adicional para la limpieza del derrame del Exxon Valdez, en Prince William
Sound, Alaska, se acept rpidamente como una tecnologa nueva lista para una
demostracin real (Prit- chard y Costa). La implantacin de estudios de campo con el
objeto de establecer que se poda acelerar significativamente la degradacin del petrleo
por la accin de la microflora autctona en las playas de Prince William Sound medante la
aplicacin de un fertilizante, y la aplicacin final de fertilizantes a gran escala por parte de
Exxon, proporcion varias lecciones y experiencias tiles que, si se con sideran en un
contexto correcto, pueden tener una influencia considerable sobre el futuro de la
biorrecuperacin del petrleo.
Este captulo se centrar en algunas de las dificultades y de los problemas aso ciados a
la aplicacin de fertilizantes, y en el efecto de stos sobre la degradacin del petrleo.
Fundamentalmente, se tratar la aplicacin de un fertilizante oleofii-
CUESTIONES REGLAMENTARIAS V DE EFICACIA.
275
co en una zona llamada Snug Harbor, en Knight, Prince William Sound, y la apli cacin
lenta de granulados de fertilizante que se llev a cabo en Disk sland, Prin ce William
Sound. Estas aplicaciones proporcionan unos resultados opuestos e instructivos, tanto en
lo que se refiere al xito como ai fracaso. (Nota: se realiza ron aplicaciones adicionales de
fertilizantes en estas y otras zonas, y existen res menes de los resultados; Pritchard et al.,
1991.) .
Asociadas a estas aplicaciones de fertilizantes en trabajos de campo estn las
cuestiones relativas a qu productos comerciales se deben utilizar, y cmo se de ben elegir
los mejores. Esto incluye no solamente los fertilizantes, sino tambin, los
microorganismos y otros agentes y conceptos estimuladores de la biodegrada cin. En
Alaska, muchos de estos productos comerciales no podan ser considera dos debido al poco
tiempo del que se dispona para realizar demostraciones en trabajos de campo, pero
tambin porque los datos existentes para cada producto eran tan variados y/o insuficientes
que no se podan realizar elecciones razonables en el tiempo adecuado. Sin embargo,
despus del derrame del Exxon Valdez, la Oficina de Investigacin y Desarrollo de la
Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos (EPA) empez a desarrollar una serie
de protocolos de rendimiento y de ensayos medioambientales seguros con el objetivo de
establecer una base de datos uniforme y relevante que posibilitase en el futuro el uso de
productos comerciales concretos. Algunos de estos protocolos ya se han desarrollado y
estn siendo validados mediante estudios de laboratorio. El desarrollo de una base con ceptual para estos protocolos se ha mostrado como un ejercicio til, y depende en
-gramnedida de las^ leceiones aprendidas en Alaska y en- otros derrames de. petrleo.
La descripcin parcial de dicho desarrollo conceptual sirve aqu para com prender mejor
las complicaciones reglamentarias que entran en juego a la hora de aplicar la
biorrecuperacin a la limpieza del petrleo. Espero que esta informacin ayude a que
otros consideren cuidadosamente el proceso mediante el cual van a medir en el trabajo de
campo el xito de la biorrecuperacin. Es esta cuestin del xito, junto con los aspectos de
seguridad ambiental, la clave para una buena toma de decisiones.
Introduccin
En cualquier trabajo de biorrecuperacin, el xito invariablemente implicar una
demostracin cientfica vlida de la eficacia del proceso y de su seguridad am biental.
Eficacia, en el caso de la biorrecuperacin del petrleo, significa que (1) la separacin o
desaparicin del petrleo se produce gracias a la biodegradacin, y no es atribuible a otros
procesos no biolgicos, y (2) las tasas de biodegradacin del petrleo son mayores que las
tasas naturales, es decir, lo suficientemente altas como para justificar el esfuerzo que
supone la implantacin del proceso de biorre cuperacin a gran escala. Aunque aqu no se
plantearn las cuestiones de seguridad ambiental, se deben considerar en profundidad para
verificar que no se va a producir ningn efecto ecolgico adverso por la aplicacin del
fertilizante.
En el derrame del Exxon Valdez, ambos aspectos fueron cruciales para que el
276
Ant) Hti Hp
BIOTRATAMIENTOS
DE RESIDUOS TXICOS
PELIGROSOS
CUESTIONES REGLAMENTARIAS
V DE Y
EFICACIA.
277
* nfp. Mediana de clulas MPN ni feMediana de clulas

MPN (10 4 ) por g de
(10 4 ) por g de sedimento
TABLA
12.1.
Medianas
(nsuperficial
= 5 a 9 muestras)
de microorganismos
degradadores
de la
pblico
y
las
agencias
reglamentarias
estatales
y federales MPN
aceptasen
finalmente
sedimento superficial
jUIM Uc Lila UC
playa muestreo
KN-135B 0
2,62
4,79
15,50
hidrocarburosControlar
por gramoel(peso
seco) de sedimento
las zonasdetratadas
(T) yloga,
de ha
biorrecuperacin.
excepticismo,
dadas laspara
sutilezas
la biotecno
referencia
(R)*
sido y seguir siendo un reto en casi cualquier caso de biorrecuperacin, para el petrleo u
R
une- qumicos.
T Las cuestiones
R
otros
productos
derente?f
eficacia y de segu ridad ambiental que se
rente?f
plantearon en Prince William Sound, donde el tratamiento se concentr en playas de grava y
4,24
No
1,63por su puesto,
No son muy diferentes a las que se pueden
guijarros
contaminadas
con petrleo,1,66
plantear
en playas
de arena, marismas
hmedas contaminadas con petrleo. Sin
1,58
No
0,47 y zonasNo
1,02
embargo,
la No
enseanza10,30
extrada en trminos de cmo
demostrar una tecnologa de limpieza
4,20
S
1,00
viable no tendr este tipo de limitaciones.
Las suposiciones iniciales de los cientficos de EPA y sus colaboradores, cuando se
comenz a planificar el proyecto, dieron lugar a unas revelaciones importantes y tiles.
Varias suposiciones, discutidas en relacin a lo que realmente ocurri en los trabajos de
campo, proporcionaron una serie de enseanzas instructivas que podran influir en las
respuestas dadas a la biorrecuperacin en otros derrames de petrleo. Aunque la confianza
que dan casi veinte aos acumulando datos de in vestigacin sobre la biodegradacin del
petrleo sirvi de base para estas suposiciones, habramos sido ingenuos si no hubisemos
esperado ninguna sorpresa!
Enriquecimiento de fas comunidades

microbianas degradadoras de petrleo
Evidentemente, era razonable esperar, incluso en las aguas fras de Alaska, un aumento
importante de la poblacin de microorganismos degradadores de petr leo en las playas
despus de su exposicin a este producto. La investigacin, rea lizada por Atlas y sus
colaboradores, apoy esta idea (Atlas, 1981). Al final, para principios de junio de 1989
(aproximadamente dos meses despus del derrame), la concentracin de degradadores del
petrleo estaba en tomo a 10 6 /g de material de playa, lo que supona un incremento de hasta
10.000 veces el nmero de degradadores en comparacin con las playas no contaminadas
con petrleo. Los estudios llevados a cabo por Lindstrom et al. (1991) han mostrado
tendencias similares, y en la Tabla 12.1 se muestra un ejemplo de los resultados. Un
enriquecimiento de esta magnitud sugera que el petrleo se estaba degradando (estudios
previos haban demostrado que el petrleo de Prudhoe Bay era muy biodegradabie), que ha ba nitrgeno y fsforo suficientes para soportar el crecimiento de los microorga nismos
degradadores de hidrocarburos, y que las bajas temperaturas (10-16 C) no eran demasiado
estrictas para la microflora autctona. La informacin no sola mente implicaba la posibilidad
de una biodegradacin limitada por el nitrgeno (es decir, un exceso de carbono orgnico
degradable procedente del petrleo frente a un suministro limitado de nitrgeno en el agua),
sino que adems habra la posibilidad de acelerar la biodegradacin del petrleo mediante la
superacin de este nico obstculo.
En este caso, creimos que era innecesario volver a verificar experimentalmen te en el
laboratorio, incluso utilizando muestras de las playas contaminadas con petrleo de Prince
William Sound, el efecto estimulador del nitrgeno para la bio-
15
52
56
70
78
KN-211B 0
4
16
31
45
102
112
KN-132B 0
2
4
16
29
43
60
95
1,56
15,60
13,70
139,0
0149,0
0185,0
0
0,96
15,60
9,75
23,40
17,90
25,20
No
No
No
S
S
No
4,63
77,00
9,55
45,40
23,94
30,83
18,10
3,19
10,10
16,20
75,40
582,00
126,00
170,00
2,27
2,34
36,00
9,78
13,00
117,00
No
No
No
S
S
No
No
4,60
1,63
No
127,00
48,00
44,44
98,78
53,23
8,51
11,70
No
No
No
No
No
No
No
193,00
81,93
46,22
99,80
33,18
3,72
8,51
2,23
80,35
97,49
24,95
25,32
0,96
1,28
S
No
No
No
No
No
S
24,90
23,00
No
155,0
077,70
160,0
097,30
28,00
135,0
084,10
117,00
21,70
16,00
37,10
15,70
16,00
0,59
1,78
53,20
No
No
No
S
No
S
S
S
122,00
278
degradacin del petrleo, ya que experiencias previas y numerosos informes pu blicados en

la literatura sobre el tema apoyaban esta idea. En cambio, si pensba mos que, debido a la
magnitud del problema en ese momento, era mejor ir directa mente al trabajo de campo y
llevar a cabo una demostracin prctica del principio. Por lo tanto, en las primeras etapas
del programa de limpieza del derrame en Alas- ka, la medicin relativamente sencilla del
nmero de degradadores del petrleo, junto con la informacin relevante disponible sobre ei
tema, proporcionaron un indicador razonable de primera lnea en relacin a la efectividad
de la biorrecuperacin del petrleo.
Ensayo de mineralizacin como indicador de la

actividad degradadora del petrleo
SegnJa situacin medioambiental implicada en el derrame de petrleo, puede ser deseable
contar con una serie de indicadores de primera lnea sobre el potencial de biorrecuperacin.
Siempre existe la tendencia, cuando se implica al pblico local, de generar una informacin
especfica del medio, al menos para lograr un mayor grado de confort. Merece la pena, por
lo tanto, tratar estos temas aqu, aunque no se utilizasen inicialmente en Alaska.
Probablemente, en otros derrames se darn una serie de circunstancias en las que no ser
suficiente, para la toma de decisiones, el contar con una informacin sobre el
enriquecimiento de los degradadores del petrleo solamente en las zonas contaminadas.
Los estudios de mineralizacin que implican la medicin del C0 2 total producido pueden
proporcionar una excelente informacin de primera lnea. La aproxi macin proporciona
datos temporales rpidos y relativamente inequvocos aptos para proceder al ensayo de
diferentes alternativas de tratamiento (p. ej., efectos al aadir nitrgeno). Si se produce una
degradacin natural del petrleo en el material de la playa contaminada, entonces, se
generarn unas considerables cantidades de C0 2 debido a la mineralizacin del petrleo.
Para este tipo de mediciones se pueden utilizar varios sistemas de laboratorio. Los sistemas
con medidores (Bartha y Pramer, 1965), diseados para atrapar el C0 2 en brazos laterales
que contienen una disolucin alcalina, se pueden adaptar para medir estas tasas de
mineralizacin en el material contaminado (Mueller et al., 1992). Tambin se pueden
utilizar sistemas respiromtricos comerciales, como el Micro-Oxymax (Columbus Ins truments, Columbus, Ohio). El sistema Micro-Oxymax, adaptable a los matra ces estndar
de laboratorio, mide tambin ei consumo de oxgeno. El procedimiento implica colocar el
material contaminado procedente de la playa (una mezcla de arena y grava en el caso de
Prince William Sound), y su comunidad microbiana asociada, directamente en los matraces,
e introducir y sacar agua de mar fresca para simular el cambio de mareas (Mueller et al.,
1992). En la Figura 12.1 se muestra un ejemplo de los datos generados mediante este tipo de
ensayo de mineralizacin. Este experimento se realiz con material contaminado procedente
de la* Todos
playalosdevalores
Princeobtenidos
William
Sound,
material
obtenido
tiempo
despus deldecomienzo
de
cada
da estuvieron
sujetos
a un ensayo
U Mann-Whitney
dos muestras
nuestra
demostracin
de biorrecuperacin
el trabajo
campo.
El mtodo
queciento.
utiliza
para determinar
si las poblaciones
muestreadas eranen
diferentes
a un de
nivel
de confianza
del 95 por
KN-el
135B serespiromtrico
trat inicialmente es
despus
del da de
0 y los
se refertiliz
da 52.llevar
KN21 IB
se trat inicialmente
matraz
indicativo
ensayos despus
que sedel
pueden
a cabo
despus del da 0 y se refertiliz el da 42. KN132B se fertiliz des pus del da 0 y de nuevo el da 40.
t Se presentan las diferencias estadsticamente significativas para los sedimentos superficiales y
subsuperficiales.
CUESTIONES REGLAMENTARIAS Y DE EFICACIA..
279
como ejercicio de toma de datos para un derrame de petrleo en particular. Desta ca el

efecto de aumento que provoca el aadir fertilizante de nitrgeno (Fig. 12.1).
Comparando las tasas de produccin de C0 2 , se puede obtener una estimacin del
aumento que se produce en la biodegradacin del petrleo. El sistema se puede
adaptar fcilmente para el ensayo del material de playa procedente de otros derra mes
de petrleo.
Como cualquier otro tipo de materia orgnica presente en la playa tambin puede
generar C0 2 , hay que tomar las debidas precauciones para asegurarse de que se est
midiendo ia mineralizacin del petrleo. Adems de trabajar con ma traces de control
que contengan material de playa no contaminado, tal y como se
o- Nivel 1 Nivel 2 o Nivel 3

Agua PWS* Estril
Nivel 4 *
Leyenda
Nivel 1 = 350 ppm N/70
ppm P Nivel 2 = 35 ppm N/7
ppm P Nivel 3 = 3,5 ppm
N/0,7 ppm P Nivel 4 = 0,35
ppm N/0,07 ppm P PWS =
Prince Willam Sound
FIGURA 12.1. Actividad del fertilizante (consumo de Oa, produccin de C02)

para seis tratamientos.
Nombre comercial
Woodace
Fabricante
Forma
Tamao
Customblen
Inipol EAP 22
Vigoro Industries
Sierra Chemical Co.
Briqueta
Grano
5 x 5 x 5 cm
2- a 3-mm dim.
280
Elf Aquataine
Lquido
-
BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS V PELIGROSOS

CUESTIONES REGLAMENTARIAS Y DE EFICACIA...
281
indic anteriormente (sin o con la adicin de nutrientes de nitrgeno), para com probar que la
naturaleza altamente porosa de las playas las altas concentraciones de oxgeno en el
mineraizacin en presencia de petrleo es mayor que la que se pro duce normalmente en el
agua fra de mar, y el efecto de lavado de las mareas de 5 m.
ambiente, tambin se puede aadir un hidrocarburo radioetiquetado. Si se activa la
degradacin del petrleo, la produccin de C0 2 radioetiquetado debera ser significativa e
inmediata.Eleccin
Hemos descubierto
que ei fenantreno funciona
bien porque es adsorbido por el
de formulaciones
de fertilizantes
suelo rpida y completamente (Mueller et al., 1992; Pritchard et al., 1991)- El ciclo de mareas
Se supona
que en
playas en
de la
Alaska
se debay aplicar
nitrgeno
(y fsforo),
forma
lav cualquier
fenantreno
quelas
quedase
fase acuosa,
la produccin
posterior
de C0de
2 se
que
las
comunidades
microbianas
degradadoras
del
petrleo
quedasen
ex
puestas
debi principalmente a las comunidades bacterianas asociadas a las superficies de petrleo.
pasivamente a unas elevadas concentraciones de nutrientes durante un pe rodo de tiempo
amplio. Dado elde
gran
ciclo de mareas
la importante
accinpaso
de las final
olas, los fertilizantes
Biorrecuperacin
derrames
de ypetrleo
como
que se colocasen sobre la superficie de la playa probable mente desapareceran en unos
pocos das.
Para superar
se de
consideraron
inicialmente
dos tipos
Tambin hicimos
la suposicin
inicial,este
muyproblema,
importante,
que la biorrecupera
cin sera
ms de
fertilizantes
de del
emisin
lenta: de
dosificaciones
slidas
en forma
de grano
y dosificaciones
eficaz como
paso final
programa
limpieza. Tal
y como
suce di,
el lavado
fsico
oleoflicas
la Tabla
12.2 sedel
resumen
las pero
caractersticas
de cadabastante
fertilizante
realizado por
Exxon lquidas.
consiguiEnquitar
el grueso
petrleo,
dej las playas
considerado.
contaminadas,
con una baja calidad esttica, y con petrleo ecolgicamente disponible. Como
relevante
resumir algunos
de los criterioslleg
utilizados
para realizar
laspaso
elec final.
ciones, ya
haba pocasSera
alternativas
disponibles,
la biorrecuperacin
a ser admitida
como
que
esto
podra
ayudar
en
las
elecciones
futuras
de
fertilizantes.
Sin la separacin inicial del grueso del petrleo, la biorrecuperacin no hubiese sido factible Los
en el contexto de Alaska. Es decir, incluso con una biodegradacin activa del petrleo, funda mentalmente se trata de un fenmeno de superficie, y tardara mucho tiempo en completarse
12.2. Descripcin
de losrelativamente
fertilizantes sometidos
ensayos
(en Alaska, existe TABLA
una posibilidad
de perodo
corto ena los
meses de verano,
cuando las temperaturas del agua permiten una buena biodegradacin del petrleo). Para
acelerar el proceso, primero hay que distribuir el petrleo por todo el material de la playa, con
el fin de incrementar la relacin superficie-volumen. Y como el volteo no era razonable en la
mayora de las playas de guijarros de Alaska, cuanto ms petrleo se separase fsicamente y
cuanto ms petrleo residual se pudiese dispersar en el material de playa, como se logr con el
lavado fsico, ms eficaz sera la biorrecuperacin. Para otros tipos de materiales de playa ser
necesario establecer una serie de consideraciones similares.
En las playas altamente porosas, como las de Prince William Sound, el petr leo se difunde
en parte entre la grava, con lo que aumenta la superficie contamina da. El lavado fsico puede
incrementar este proceso. Sin embargo, con un litoral de arena o barro, donde la porosidad es
mucho ms baja, la mayor parte del petrleo se concentrar preferentemente en la superficie.
Inicialmente, el material contaminado se puede separar muy bien fsicamente. Pero el material
contaminado que quede se podr tratar de forma eficaz mediante biorrecuperacin, de nuevo
como paso final. En este caso, se puede utilizar el volteo para dispersar ms el petrleo
restante entre el material de la playa, aumentando as la relacin superfi cie-volumen, y
mejorando las posibilidades de xito de la biorrecuperacin. El volteo tambin consigue airear
el material de playa y ayuda a diseminar los fertili zantes aadidos, de esta forma, se evita que
la disponibilidad de oxgeno o de nutrientes inorgnicos se convierta en un factor limitante
para la biorrecuperacin. En Alaska la limitacin de oxgeno nunca lleg a ser algo a
considerar, debido a la
Fuente de N
N:P:K
Gravedad especfica
Viscosidad
Tasa de aplicacin
en parcelas de I2m x
35 m
Mtodo de
Isobutiraldehdodiurea
Nitrato de
amonaco
14:3:3
28:8:0
1,8
1,8
986 g/m
Bolsas (11,8 kg c.u.)
aplicacin
Zonas de ensayo
7,3:2,8:0
0,996 g/ml
100 g/m
250 cSt
2
Distribuidor
de fertilizante
Snug Harbor
Urea
Snug Harbor Passage

Cove
284 g/m 2
Rociador
porttil
Snug
Harbor
Passage
282
tres criterios principales fueron: (1) facilidad de aplicacin y potencial para man tener su
posicin en la playa, (2) caractersticas de emisin de nutrientes, (3) resis tencia fsica. Al
final, los granos fertilizantes parecan encajar mejor en estos cri terios (Pritchard et al., 1991).
Eran fciles de aplicar sobre una gran superficie y se pegaban muy bien al material de playa
contaminado con petrleo; adems, se podan introducir bajo los guijarros, de donde era
difcil desalojarlos. Las caractersticas de emisin de nutrientes, establecidas mediante unos
sencillos sistemas de ensayo en el laboratorio (Venosa et al., 1990; Glaser et al., 1991),
mostraron que la mayor parte de la emisin de nitrgeno (amoniacal y nitrito) y de fsforo
(fosfato) procedente de los granos tena lugar en las primeras 24-72 h (Fig. 12.2). Sin
embargo, se siguieron emitiendo cantidades constantemente durante mucho tiem po despus.
Por lo tanto, mientras las mareas entraban y salan de las playas, los nutrientes se distribuan
entre las comunidades microbianas asociadas al petrleo durante un perodo de 2-3 semanas o
ms. Aunque la condicin fsica de los gra nos se deterior lentamente por el contacto con el
agua de mar, observamos sobre la playa granos que tenan fertilizante transcurridas 2-3
semanas desde su aplicacin. Al final, Exxon utiliz los granos de fertilizante en combinacin
con el fertilizante oleoflico lquido para todas las operaciones a gran escala en Prince
William Sound.
FIGURA 12.2. Liberacin acumulativa de amonio y nitrato a partir de los granos SIERRA
CHEMICAL en equipos de matraz esttico.
CUESTIONES REGLAMENTARIAS Y DE EFICACIA.
283
Las briquetas de fertilizantes tambin dieron resultados satisfactorios en base a los

criterios anteriores (Venosa et al., 1990). Estas briquetas son aproximadamen te del tamao de
las briquetas de carbn vegetal, y contienen fuentes orgnicas de nitrgeno y fsforo que se
hidrolizan lentamente por emitir urea y fsforo durante un perodo de tiempo. Las emisiones
de nutrientes de las briquetas fueron muy similares a las conseguidas mediante los granos.
Aunque las briquetas mantenan mucho mejor su integridad fsica, desaparecan sobre la
superficie de la playa, es decir, eran fciles de mover por la accin de las mareas y olas,
provocando unas distribuciones muy heterogneas. Por ello, se tenan que empaquetar en
bolsas de red y asegurar a la playa mediante estacas metlicas. Aunque esto era eficaz, pre sent importantes problemas logsticos cuando se plante a gran escala. No obs tante, las
briquetas se utilizaron como parte de nuestra demostracin de biorrecuperacin en el trabajo
de campo, y se mostraron eficaces a la hora de aumentar la biodegradacin del petrleo
(Pritchard et al., 1991).
En vez de distribuir los granos y briquetas de fertilizante sobre la superficie de la playa,
tambin se pueden enterrar en la misma, pongamos por ejemplo, en zan jas paralelas al litoral
en la zona contaminada intermareal. Segn la porosidad de las playas, las mareas y el
movimiento del agua podran distribuir eficazmente los nutrientes entre las bacterias. Debido
a la integridad fsica de las briquetas, seran ms aptas para este tipo de aplicacin. En
Alaska, el enterramiento se consider inicialmente, pero no se prob, de nuevo debido a las
restricciones que se perciban de tipo logstico (posteriormente sin fundamento). Sin
embargo, Exxon y el Estado de Nueva York aplicaron granos de fertilizante siguiendo este
mtodo en una playa de arena contaminada con gasleo en PralFs Island (localizada en un
estuario al suroeste de la Ciudad de Nueva York). Los primeros informes (Madden, 1991)
mostraron que la aplicacin tuvo xito y logr aumentar la biodegradacin del gasleo. La
distribucin de nutrientes, por supuesto, depende de la hidrodin mica de las aguas en la
playa, y, en muchos casos, no se contar con una informa cin especfica relacionada con esta
cuestin. En vez de proceder segn estos xi tos limitados, se podra realizar fcilmente un
estudio piloto de varios das de duracin con el fin de medir los movimientos reales de los
nutrientes en las aguas (Madden, 1991).
Desde un punto de vista prctico, el mejor criterio para determinar cunto fer tilizante de
emisin lenta se debe colocar en una playa dada, fue aplicar el mximo posible sin exceder
las concentraciones txicas de amonio y/o nitrato. Estos nu trientes son txicos (96 h, LC 50 )
para los invertebrados marinos (un buen bioensa- yo para la mayora de las especies
sensibles) en concentraciones acuticas en torno a 10-15 ppm (Pritchard et al., 1991). Nuestra
experiencia ha demostrado que se llegar al umbral de efectos ambientales adversos mucho
antes de que se sature la demanda de nitrgeno de las comunidades microbianas degradadoras
del petrleo. Se debe tener en cuenta, respecto al umbral del efecto txico, la gran emisin
inicial de nutrientes que se produce con las dosis de fertilizantes mencionadas. Por otra parte,
es complejo determinar la tasa de aplicacin del fertilizante en base a la cantidad de petrleo
presente en el ambiente, ya que el petrleo se distribuye y concentra de forma muy
heterognea en la zona afectada.
284
Fertilizante oleoflico
El concepto de fertilizante oleoflico se basa en el uso de fuentes orgnicas de nitrgeno y
fsforo en un portador liquido que se puede mezclar con el petrleo. En teora, cuando se
aplica el portador lquido, los nutrientes se disuelven en ei petrleo, y, de esta forma, se
ponen en contacto durante largos periodos de tiempo con las bacterias que crecen sobre la
superficie del petrleo. Se han probado con xito, tanto en el laboratorio como en los
experimentos de campo a pequea escala, varios tipos de fertilizantes oleoflicos. La mayor
parte de estos fertilizantes se disearon y probaron para tratar petrleo sobre superficies de
agua, y no sobre material de playa. Unos estudios pioneros llevados a cabo por Atlas y Bartha
(Atlas y Bartha, 1973), demostraron que la adicin de urea parafinizada y de octilfos- fato al
petrleo de Prudhoe Bay, petrleo que se encontraba sobre la superficie del agua, aumentaba
de forma significativa la biodegradacin del crudo. Se ha infor mado de xitos similares con
un producto comercial, el Victawet 12, o fosfato de xido 2-etilhexil-dipolietileno (Bergstein
y Vestal, 1978); con varias fuentes naturales de nitrgeno y fsforo lipoflicos, como lecitina
de soja y etil alofanato (Oli- vieri et al., 1978); y con MgNH 4 P04 incorporado a una base de
apoyo de parafma (Olivieri et al., 1976). La aplicacin de estos productos quizs se haya visto
limitada por las inquietudes que se plantean con algunos mecanismos especficos cuando se
hace aumentar la velocidad de degradacin del petrleo; por los factores que inciden sobre las
tasas de emisin fsica de los nutrientes in situ; y por los efectos que se pueden producir al
aadir grandes cantidades de carbono orgnico al petr leo. Adems, varios informes
mostraron pocas diferencias entre la degradacin del petrleo potenciada por fertilizantes
oleoflicos o normales (Lee y Levy, Halmo). Por lo tanto, an no se ha establecido claramente
qu ventajas lleva consigo la utilizacin de fertilizantes oleoflicos. No obstante, el concepto
de fertilizante oleoflico era inquietante para nosotros, dado que se trataba del mtodo ms
utilizado a la hora de colocar nutrientes directamente en contacto con las comunidades micro bianas, y, por lo tanto, pareca justificado el realizar ms ensayos en los trabajos de campo.
Seleccionamos el fertilizante oleoflico Inipol EAP 22, producido por Elf Aqua- taine
Company en Francia, ya que era la nica fuente comercial disponible con una gran capacidad
de produccin inmediata. Este producto es una microemulsin estable formada por un corazn
de urea (fuente del nitrgeno) rodeado por un por tador de cido oleico. El laurilfosfato
(surfactante y fuente de fsforo) acta como estabilizante de la emulsin, y el 2-butoxietanol
(metil celosolve) reduce la viscosidad. Esta dosificacin se ha mostrado prometedora en los
ensayos llevados a cabo en el laboratorio y en grandes depsitos exteriores, en estos ensayos
se han utilizado diferentes tipos de materiales contaminados procedentes de playas y de
lugares medioambientalmente distintos (Lee y Levy, 1987; Sveum y Ladousse, 1989; Tramier
y Sirvins, 1983). Se obtuvieron unos interesantes resultados en una playa contaminada con
petrleo en Spitsbergen, Noruega (Sveum y Ladousse, 1987); segn estas pruebas pareca que
el Inipol incrementaba las tasas de degradacin del petrleo cuando se aplicaba a material de
playas de grava gruesa pero no cuan
286
Minutos desde el comienzo del
Amonio emitido (mg N/l)f

5
15
30
60
120
BIOTRATAMIENTOS
RESIDUOS TXICOS
PELIGROSOS
CUESTIONES DE
REGLAMENTARIAS
Y DE YEFICACIA..
Tiempo de contacto 5 Tiempo de contacto

minutos *
6 horas *
285
TABLA
Emisin
de amonio,
nitrgeno
total
Kjeldahl
(NTK)
fsforo total
(PT) a partir
do se 12.3.
aplicaba
a material
de playa
de arena
fina.
Segn
estosy estudios,
el Inipol
tena del
un inipol
gran
22 durante un Cuando
experimento
de inmersin
potencial para la EAP
biorrecuperacin.
se aplic
Inipol aintermitente
una mezcla de grava y arena
contaminada con petrleo procedente de Prince Willian Sound, en unos estudios de
laboratorio diseados para realizar una inmersin intermitente en agua de mar,
aproximadamente
(medida como nitrgeno total Kjeldahl, NTK)
1,1 el 60 por ciento de la urea0,5
sali a los pocos
minutos de la aplicacin0,4
(Tabla 12.3). Las mediciones del fsforo total
1,1
1,4 un porcentaje similar. Despus de
0,56 horas de la primera inmersin se obtuvieron
mostraron
1,3
0,7
los mismos resultados que despus de 5 minutos,
lo cual sugera que el Inipol fraguaba
1,4
muy rpido. Sin embargo, despus de 0,7
esta explosin inicial de NTK y fsforo,
esencialmente, no haba ninguna emisin de estos materiales. Presumiblemente, el nitrgeno
y fsforo residuales, aunque fuertemente sujetos al material de playa contaminado con
petrleo, de hecho, se encontraban disponibles para las bacterias que estaban degradando el
petrleo. Demostrar experimentalmente esta disponibilidad era difcil, tal y como se discute
a continuacin.
La aplicacin de Inipol en Prince William Sound se llev a cabo inicialmente mediante
un aspersor porttil que permitiese extender una capa fina sobre el mate rial de playa
contaminado con petrleo (Pritchard et al., 1991). Las capas se po dan controlar porque el
petrleo apareca mojado y de un color negro ms oscuro despus de cubrirlo con Inipol.
Este efecto visual desapareca varias horas despus de la aplicacin. Cuando Exxon us
Inipol a gran escala, se aplic en una cantidad aproximada de 0,3 1/m 2 , cifra basada en gran
medida en la cobertura superficial obtenida en nuestro proyecto de demostracin.
Cambios visuales. Las playas de ensayo de Snug Harbour, donde se aplic Ini pol como
parte de una demostracin de campo para probar su efectividad, ofrecie ron algunos
resultados visuales sorpredentes (Pritchard y Costa, 1991). Estas pla yas estaban
moderadamente contaminadas con petrleo y no haban sido sometidas al proceso de lavado
fsico en el momento de nuestro ensayo. Fueron elegidas como representativas de aquellas
que no recibieron lavado fsico. Visualmente, las zonas de guijarros tenan una capa fina de
petrleo viscoso que cubra las piedras, y una zona de arena y grava por debajo de los
guijarros. El petrleo no penetraba ms de unos pocos centmetros por debajo de la
superficie de grava. En algunas zonas, se podan encontrar pequeos parches gruesos de
petrleo y mousse (mezcla de petrleo/agua/aire en forma de coloide).
Aproximadamente, unos 10-14 das despus de aplicar el fertilizante oleoflico, la
reduccin de la cantidad de petrleo sobre las piedras fue visualmente apa rente. El cambio
fue especialmente evidente en las observaciones areas, donde se puso de manifiesto que el
contraste con las restantes zonas contaminadas era dra mtico, dando lugar a un rectngulo
limpio (12 * 28 m) sobre la superficie de la playa. El contraste tambin fue impresionante
a nivel del suelo; haba una lnea precisa entre las zonas tratadas y no tratadas con
fertilizante. En este momento, las zonas de control no tratadas no haban cambiado
visualmente.
Un examen ms de cerca mostr que gran parte del petrleo haba desapareci do de la
superficie de Ips guijarros, sin embargo, quedaron importantes cantidades
0,2
0,1
0,0
510 a
540
600
FT emitido (mg P/l)
5
15
30
60
510 a
540
600
1,3
120
1,5
1,0
1,1
0,9
0,9
1,2
1,0
1,4
1,2
U
1,3
1,0
NKT emitido (mg N/l)t

5
15
30
60
510 a
540
600
120
24,6
26,1
27,2
32,5
29,4
4,6
4,6
4,3
29,8
34,8
35,5
34,3
32,3
287
Nosotros pensbamos que la desaparicin visual del petrleo sobre los guija rros, 2-3
semanas despus de la aplicacin de Inipol, se deba fundamentalmente a la biodegradacin y
no a un fenmeno de lavado qumico. Los datos qumicos que apoyan esta creencia se
presentan a continuacin. Adems, intentamos forzar los efectos del lavado qumico aadiendo
repetidamente grandes concentraciones de Inipol sobre varias zonas pequeas en Snug
Harbour, y no afect a la eliminacin del petrleo; era necesario un perodo d al menos 2-3
semanas para poder ver cualquier efecto de lavado independientemente de la cantidad de
Inipol dada. La aplicacin de disoluciones acuosas fertilizantes (probadas en otra playa), que
contenan slo productos qumicos inorgnicos y no materiales orgnicos tipo surfactante,
tambin produca el efecto de limpieza ms o menos en el mismo pe rodo de tiempo,
apoyando an ms la idea de la biodegradacin (Pritchard et al., 1991). Finalmente, algunos
experimentos realizados por investigadores de Exxon (R. Prince, S. Hinton, y J. Bragg,
mediante comunicados personales) han mostra do que, en unos ensayos especiales diseados
para medir la efectividad de diversos productos comerciales de limpieza de rocas, el Inipol no
era eficaz. Tambin, observaron, en estudios de microcosmos, que el Inipol pareca llegar a
asociarse ms estrechamente con el material de playa; es decir, el petrleo tena mucha ms
tendencia a moverse hacia las paredes de vidrio de los microcosmos en ausencia del Inipol.
Despus de 6-8 semanas desde la aplicacin del fertilizante, haba bajado el contraste
entre las zonas tratadas y no tratadas en la playa de guijarros. Probable mente, este descenso
del contraste se debi a la subida a la superficie del petrleo desde el material contaminado
debajo de la superficie en la zona tratada con Inipol, y/o a la lenta eliminacin del petrleo
sobre la superficie de la playa que rodeaba las zonas tratadas. A finales del verano, la zona
utilizada para los estudios de biorrecuperacin lleg a estar ms limpia, incluyendo las zonas
de control. Varias tormentas y un incremento de las lluvias, as como la biodegradacin
natural, contribuyeron sin duda a estos cambios.
Globalmente, la rpida desaparicin del petrleo provocada por la aplicacin del
fertilizante oleoflico hizo que estas playas fuesen ms compatibles con la fau na local (menor
tendencia a que la fauna local padeciese las manchas de petrleo en piel y plumas). Estos
importantes cambios sucedieron en un periodo de tiempo ms corto que los cambios limitados
en zonas no tratadas, y posiblemente ayuda ron a acelerar la recuperacin biolgica de la zona
intermareal.
Medicin del rendimiento

Obtener informacin definitiva sobre el papel de la biodegradacin en la separa cin de
residuos de petrleo en el material de playa, o de hecho, sobre cualquier matriz ambiental
* Tiempo entre la aplicacin del fertilizante y la inmersin inicial, f
compleja,
es una
difcil.
lo general, para la biorrecupe racin de derrames de
Concentracin
inicialtarea
de nitrgeno
= 57Por
mg/1.
A
petrleo,
seeldebe
informacin
cualitativa
lossecambios
en la
composicin
Se dren
agua, producir
el material tanta
de playa
qued fuera del
agua durantesobre
6 horas;
puso de nuevo
el agua
de mar.
del petrleo indicativos de los procesos bio lgicos, como informacin cuantitativa en
relacin a las tasas de degradacin
de petrleo debajo de los guijarros, en la mezcla inferior de arena y grava. El pe trleo que
permaneca no era seco y mate como el petrleo de las playas de control no tratadas, sino ms
blando y mojado. Tambin era muy viscoso al tacto, sin tendencia a separarse de las piedras.
Cuando se realizaron estas observaciones, no se vio salir de la playa con las mareas ninguna
marea negra de petrleo ni materiales petrolferos.
288
del petrleo, o de algunos de sus hidrocarburos, lo que tambin es indicativo de los procesos
biolgicos que se estn desarrollando. La informacin cualitativa es tablece el alcance de la
biodegradacin; sin embargo, cuando se cuenta con una mezcla qumica compleja, como
suceda en el caso del petrleo de Prudhoe Bay, lo deseable es lograr la eliminacin de algo
ms que unos pocos hidrocarburos de cadena corta (que suponen slo un pequeo porcentaje
del petrleo), o la fraccin aliftica del petrleo (es decir, se tratara de no dejar atrs los
hidrocarburos aromticos, heterocclicos y ramificados, los productos qumicos polares,
etc.).
De forma simultnea, una informacin cuantitativa que estableciese que el au mento de
la biodegradacin del petrleo mediante tratamientos con fertilizantes era suficiente como
para merecer una operacin a gran escala, generalmente un aumento de! doble o triple sobre
los controles no tratados, probablemente sera aceptable para muchos ejecutivos y grupos
reglamentarios, aunque esta decisin no se asentase sobre una base de datos global. De todos
modos, ambos tipos de informaciones fueron difciles de obtener en los trabajos de campo
debido a los numerosos problemas que se plantearon.
Cualquier programa de ensayo sobre biorrecuperacin que se base en tcnicas analticas
que impliquen la desaparicin de residuos de petrleo o de hidrocarbu ros medidos mediante
cromatografa gaseosa, est abierto a crticas cientficas porque existen varios procesos
(incluyendo: fotosntesis, disolucin fsica, lavado qumico, volatilidad, etc.) que pueden
afectar o contribuir a la desaparicin de los residuos. _Para_hacer frente a-estas posibles
crticas^ elegimos una aproximacin que integraba varios procedimientos analticos con
diversas suposiciones clave. En primer lugar, supusimos que la desaparicin de algunos
grupos de hidrocarburos se poda utilizar como indicador definitivo de la biodegradacin.
Adems, suponamos que los indicadores de la biodegradacin estaran asociados a cambios
sustanciales en la composicin de varias fracciones del petrleo, especialmente
hidrocarburos aromticos. Por lo tanto, atribuimos estos cambios composicionales a la
biodegradacin.
En segundo lugar, supusimos que si se pudiese establecer una correlacin en tre los
cambios en la composicin de los hidrocarburos y los cambios en el peso residual del
petrleo, entonces, se podran emplear las tasas de desaparicin de los pesos residuales
como primer indicativo cuantitativo de! efecto de! fertilizante. Despus, esta informacin se
podra emplear para estimar la eficacia de la limpie za durante perodos de tiempo ms
amplios.
Sin embargo, hay que tratar la razn por la cual se eligieron estos parmetros ya que los
criterios sobre lo que constituye la biodegradacin del petrleo son complejos y
controvertidos. Muchos estudios han considerado que la reduccin de la concentracin de
hidrocarburos alifticos es, en general, un indicativo de la bio degradacin, pero su valor a
menudo se cuestiona, ya que estos hidrocarburos son: (1) con frecuencia, la fraccin ms
fcil de biodegradar, (2) los menos txicos, y (3) a menudo solamente suponen un pequeo
porcentaje (en peso) del petrleo. Medir los cambios composicionales de la fraccin
aromtica aade una dimensin ms, ya que estos hidrocarburos son menos propensos a
biodegradarse y, potencialmente, ms txicos de forma crnica. Sin embargo, la mayor parte
de los pro
289
cedimientos ms comunes utilizados para medir los hidrocarburos aromticos se basan en el

anlisis espectral de masas, este anlisis se concentra en tan slo 10-20 compuestos
seleccionados, lo que supone una fraccin muy pequea de los arom ticos totales. No se ha
establecido an si estos hidrocarburos aromticos seleccio nados son buenos representantes
de la degradacin que se produce en el resto de los compuestos aromticos. Sin embargo, si
se presta atencin tan slo a los hidro carburos aromticos y se comprueba que se degradan,
existe la ventaja de poder suponer que tambin se degradarn ampliamente los
hidrocarburos alifticos.
Independientemente de los cambios composicionales parece razonable exigir que la
biodegradacin, como herramienta de limpieza ptima, debera lograr la eliminacin de la
mayor parte del material; los cambios en la composicin sin eliminacin del petrleo
residual slo son una parte de la cuestin. Adems, la biodegradacin del petrleo en las
condiciones ptimas del laboratorio da lugar a una reduccin del 40-60 por ciento del peso
total del petrleo (Atlas y Bartha, 1973), y, por lo tanto, sera razonable esperar que se
produjese alguna reduccin del petrleo residual en las condiciones de campo. La ltima
forma de medir la biodegradacin consiste en dividir el petrleo en diversas fracciones:
aliftica, aromtica, heterocclica, polar y asfltica, y determinar la reduccin en peso de
cada una de ellas. Estas fracciones se pueden analizar generalmente mediante cromato grafa
de gases para determinar los cambios de composicin. Este procedimiento analtico ha sido
utilizado por Westbake y sus colaboradores en varios estudios ( .lohson et al., 1972).
_________________________________________________________________________________
Cambios en las relaciones alcanos

normales a alcanos ramificados
Los resultados obtenidos en Alaska para el fertilizante oleoflico son instructivos a la hora
de proporcionar una perspectiva que permita medir el rendimiento de la biorrecuperacin en
los trabajos de campo. El anlisis qumico del material de playa contaminado con petrleo,
expuesto y no expuesto al fertilizante oleoflico, se realiz recogiendo el material de playa
segn un diseo de bloque (21 muestras tomadas en cada momento del muestreo, 7 en cada
bloque contiguo a lo largo de una lnea en las zonas de pleamar, media, y bajamar de la
playa) y, despus, extrayendo muestras (con cloruro de metileno) de la superficie de los
guijarros y de la mezcla de arena y grava por debajo de ellos. El peso del petrleo
recuperado (medido en mg/g de material de playa) se determin gravimtricamente, y se
estableci su composicin inyectando extractos en un cromatgrafo de gases segn pro cedimientos analticos normalizados (Pritchard et al. 1991).
Los cambios en la composicin se determinaron examinando primero los alcanos
determinables. Histricamente, esto se ha realizado mediante el clculo de la relacin en
peso entre un hidrocarburo de biodegradacin fcil conocida (general mente los alcanos
normales C17 y C18) y un hidrocarburo que se biodegrade ms lentamente (generalmente
los alcanos ramificados pristano y fitano, con tiempos de retencin cromatogrficos muy
similares a los alcanos n-C17 y n-C18) (Atlas). Nosotros nos centramos principalmente en
la relacin n-C 18/ftano, ya que en oca-
290
BIOTRATAMIENTOS 0E RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
siones se encuentra pristano de forma natural en el agua del mar. El concepto de relaciones se
basa en la idea de que la mayora de los procesos no biolgicos de destino (erosin fsica,
evaporacin, lixiviacin, etc.) no darn lugar a prdidas significativas de hidrocarburos
alifticos y ramificados que tienen comportamien tos cromatogrftcos y qumicos similares. Este
concepto se apoya en algunos estudios biogeoqumicos realizados sobre el petrleo (Kennicutt,
1988). Sin embargo, como los alanos ramificados, de hecho, se biodegradan (Prinik et al.,
1977; Mue- ller et al., 1992), solamente se tienen que degradar ms lentamente que los alanos
lineales para aprovechar el mtodo de relacin.
Centrndonos en los efectos del fertilizante oleofJico Inipol EAP22, los re sultados de la
Figura 12.3a muestran que, despus de un retraso inicial, se produjo una gran degradacin en la
relacin n-C18/fitano para las muestras de guijarros. Tambin se produjo una degradacin en la
playa de control no tratada, pero a una velocidad de aproximadamente la mitad de la velocidad
de biodegradacin de la playa tratada con fertilizante (Fig. 12.36). A pesar de la gran
variabilidad alrededor de los valores de las medianas, las pendientes de las curvas de
degradacin (siguiendo la muestra del 17 de junio, y sin incluir la muestra del 9 de septiembre)
eran estadsticamente diferentes a cero, y de una a otra, con un intervalo de con fianza del 95
por ciento. Segn las suposiciones anteriormente descritas sobre el significado de los cambios
en la relacin, se produjo la biodegradacin en ambas playas, y aument por la aplicacin del
fertilizante. Hay que destacar que el petrleo ya 4iaba-sufrdo wia biodegradacin_antes deda
aplicacin_del fertilizante* ya_ que la relacin para el petrleo de Prudhoe Bay erosionado y
no degradado estaba en torno a 2,0. Adems, los grandes descensos de las relaciones
invariablemente estuvieron relacionados con una considerable reduccin, si no eliminacin
completa, de los alanos analizados mediante cromatografa de gases, del n-C17 al n-C30.
La gran variabilidad de las relaciones mostradas en la Figura 12.3 (es decir, algunas
muestras dieron evidencia de una gran biodegradacin mientras otras evi denciaron muy poca)
estaba relacionada con la distribucin altamente heterognea del petrleo en la playa.
Posiblemente, sobre la superficie de la playa se produca la misma biodegradacin, pero el
muestreo aleatorio (casi inevitable en este caso) necesariamente englobaba suficientes
cantidades de petrleo no degradado procedente de debajo de la superficie como para diluir la
medida de biodegradacin.
En la mezcla de arena y grava por debajo de los guijarros se dio un cambio mucho menor o
inexistente en la relacin n-C 18/fitano, tanto para la playa tratada con fertilizante oleoflico
como para la playa de control no tratada (Figs. 12.4# y \2Ab). Igual de sorprendente, sin
embargo, fue la diferencia inesperada en la rela cin inicial entre las muestras de la superficie
de guijarros y las muestras de la mezcla de arena y grava (considerandos = 0, el muestreo del 8
de junio de 1989). En ambos casos, se haba producido una biodegradacin sustancial del
petrleo antes de aplicar el fertilizante, pero era mucho ms pronunciada en las muestras de
arena y grava mezcladas. No estaba claro el porqu de esta relacin menor. Quizs la
biodegradacin era ms aparente debido a una menor disolucin del petrleo no degradado
durante el muestreo.
CUESTIONES REGLAMENTARIAS V DE EFICACIA.
Re
la
ci
n
nC
18
/fi
ta
no
Re
la
ci
n
n'
C
18
/fi
ta
no
291
08 Jun 89 24 Jun 89 10 Jul 89 26 Jul 89 11 Ago 89 27 Ago 89 12 Sep 89
(a)
08 Jun 89 24 Jun 89 10 Jul 89 26 Jul 89 11 Ago 89 27 Ago 89 12 Sep 89 Fecha de

toma de muestra
o Valor del anlisis Mediana
(b)
FIGURA 12.3. Cambios en las relaciones n-C18/fitano en las playas de guijarros tratadas
y de control.
292
Re
la
ci
n
nC1
8/
fit
an
o
Re
la
ci
n
nC1
8/
fit
an
o
(a
)
Fecha de toma de muestra
o Valor del anlisis Mediana
(b)
FIGURA 12.4. Cambios en las relaciones n-C18/fitano en las playas de arena y grava
tratadas y de control.
293
Biodegradacin del titano
Siguiendo la lgica establecida anteriormente, la ausencia de un cambio en la rela cin nCI8/ftano para las muestras de arena y grava mezclada sugiri que no se estaba dando
una biodegradacin del petrleo a pesar de su estado degradado an tes de la aplicacin del
fertilizante. La baja relacin inicial puede limitar la obser vacin de los cambios. Sin
embargo, parte de este efecto se puede explicar me diante otro proceso. Un examen del
propio fitano en Ja mezcla de arena y grava debajo de los guijarros en la playa tratada con
Inipol mostr que su degradacin era tan rpida como la del alcano n-C18 (Fig. 12.5). Por
lo tanto, o la biodegradacin no tena lugar (es decir, algn proceso no biolgico estaba
separando ambos hidrocarburos de forma simultnea), o el fitano se estaba degradando
tan rpido como el n-C18. La degradacin del fitano no es comn, pero existe (Pirink et
al., 1977; Mueller et al., 1992), y se aislaron fcilmente microorganismos degradadores
de fitano en las playas de Prince William Sound. Por lo tanto, las comunidades
microbianas de las playas de Alaska pueden tener una gran capacidad de degrada-
Das
FIGURA 12.5. Cambios en la concentracin de fitano y n-Cl8 (expresado como cambio porcentual en
relacin a ta concentracin media a t = 0) en las muestras de petrleo en la arena y grava mezcladas
(bajo los guijarros) de las playas tratadas con Inipol en Snug Harbour.
294
Petrleo de
Prudhoe Bay
n-C 18
Fitano
C3/Naftalenos
C3/Fluorenos
C3/Fenantrenos
Dibenzotiofeno
C3/Dibenzotiofeno

Playa no
fertilizada
Playa
fertilizada
295
TABLA
Concentraciones
(mediana*
y desviacin
tpica) dedelosusar
hidrocarburos
cin
de los12-.4.
alanos
ramificados, yrelativas
en ese caso
se comprende
el concepto
fitano como
aromticos,
heterocclicos
y
cclicos
comparados
con
el
hopano
marcador
biolgico
interno.
Las
muestras
tomadas
de
los
guijarros
tambin
evidenciaron
con el
52,9
1,14 (1,43)
0,96 (0,78)
tiempo un importante descenso del fitano, pero a una velocidad menor que el n-C18.
28,3
13,80 (2,30)
6,63 (3,63)
los (0,13)
resultados obtenidos
en las muestras de arena y grava extra das de
31,9 Por otra parte,0,15
0,08 (0,04)
debajo de los guijarros
sugirieron la posibilidad
de que el Inipol estuviese actuando de forma
5,30
1,74 (0,38)
1,01 (0,89)
qumica (efecto surfactante)
los(1,35)
hidrocarburos al- fticos y ramificados. Sin
5,40 (0,25) para separar
3,36
10,0
5,93
(0,03) desaparecieron
0,04a(0,03)
embargo, el n-C18 y0,07
el fitano
la misma velocidad que en las muestras de arena
9,49
5,34
(0,64)
3,42
(1,43)
y grava tomadas en la playa de control (datos no mostrados). Como no exista la posibilidad de
un efecto qumico en la playa de control, hay que deducir que la separacin del fitano se debi
principal mente a la biodegradacin.
Cambios de composicin en los hidrocarburos aromticos

En este momento se puede concluir que se produjo una biodegradacin de la frac cin aliftica
del petrleo en las muestras tomadas en la superficie de guijarros, y, posiblemente, tambin en
las muestras de arena y grava. Tal y como se mencion anteriormente, creemos que la
biodegradacin de la fraccin aliftica no es sufi ciente en s misma como para poder hablar de
una biorrecuperacin efectiva. Otra aproximacin para examinar la biorrecuperacin global del
petrleo consiste en realizar una espectroscopia de masas como detector en la separacin del
cromatgrafo de gases (EM/CG). Utilizando este mtodo se pueden examinar diversos hi drocarburos aromticos que quizs son ms difciles de degradar que los alifticos (Kennicult,
1988; Rowland et al., 1986). Esto es importante no slo porque se sigue la huella de otra
fraccin degradable del petrleo, sino porque se sabe que algunos hidrocarburos policclicos
aromticos (HPAs) son precancergenos bajo ciertas condiciones. Por lo tanto, si se observa su
eliminacin, se est constatando una reduccin de los posibles efectos ecolgicos adversos. Si
esta cuestin de toxi cidad es realmente relevante o no (debido a que se trata de escenarios de
exposi cin improbables) se tom como un factor a considerar en las evaluaciones de
efectividad. Adems, como la baja solubilidad de los HPAs los hace difciles de degradar, se
pueden emplear para medir el alcance de la degradacin del petrleo. En la Tabla 12.4 se
muestra el anlisis espectral de masas de diversos hidrocarbu ros aromticos y heterocclicos de
varias muestras de petrleo con relaciones n-C18/fitano y concentraciones de hidrocarburos
alifticos muy reducidas. Los hi drocarburos aromticos seleccionados representan un grupo de
homlogos metil- sustitutos con un peso molecular cercano a una estructura qumica conocida.
Los valores de la tabla se comparan con el hopano (17 alfa, 21 beta), alcano cclico multianillo
(C30). El hopano y sus homlogos, bastante resistentes al ataque bio lgico, han sido utilizados
durante algn tiempo por los geoqumicos como bio- marcadores internos conservados en el
petrleo (Kennicutt, 1988). Sin embargo, a diferencia del caso de la relacin n-C 18/ftano, los
cambios relativos no se pueden atribuir a la biodegradacin con tanta confianza; la
descomposicin diferencial entre un hidrocarburo y el hopano podra deberse a procesos no
biolgicos, ya que
Crisenos
C3/Crisenos
Norhopano
Estearanos
1,22
2,49
0,56
5,5
0,89
1,13
0,62
5,91
(0,04)
(0,22)
(0,93)
(0,50)
0,71 (0,17)
1,03 (0,44)
0,59 (0,06)
5,15(0,42)

CUESTIONES REGLAMENTARIAS Y D EFICACIA.
296
297
la Tabla 12.4 muestra que existen varios casos en los que los descensos de las
concentraciones de hidrocarburos aromticos en las muestras de campo (relativas al
petrleo de Prudhoe Bay) son mayores para los hidrocarburos menos solubles. Por ejemplo,
haba un mayor descenso en C3-crisenos del que haba en el propio criseno, y haba un
mayor descenso en C3-fluorenos del que haba en C3-fenante- nos. Aunque estas
diferencias podran ser consecuencia del muestreo y/o anlisis, la biodegradacin es el
nico proceso en el que este efecto diferencial es una posi bilidad. Por lo tanto, en la
mayora de las muestras en las que se produjo una bio degradacin sustancial del petrleo
(tal y como se mide por las relaciones n-C18/ Titano), tambin se produjo un descenso
concomitante en muchos de los hidrocar buros aromticos de peso molecular alto.
Relacin entre el cambio de composicin y

el cambio en el peso residual
El siguiente paso era establecer una relacin entre los cambios de composicin y la prdida
de residuos petrolferos. Una correlacin positiva apoyaba la idea de que la prdida de
residuos de petrleo se deba a los procesos de biodegradacin. En la Figura 12.6 se
* N = los
8; seleccionado
aleatoriamente
del muestreo
del a7/29/89;
todas las en
muestras
son 50 mili
gramos de
muestran
cambios en
el peso residual
frente
los cambios
la relacin
n-C18/ftano.
residual
por mililitrode
extrado.
Espetrleo
evidente
la existencia
una correlacin positiva. Los resultados son interesantes ya que
FIGURAproducir
12.6. Relacin
de cambios
en elen
peso
y cambios
en la relacin
se podra
una rpida
reduccin
la residual
relacindel
sinpetrleo
un cambio
significativo
en el
c~C18/fitano (expresada como porcentaje del valor de medio a t = 0) de las muestras de
peso residual de? petrleo Sin embar^ go, ste no era el caso, y podemos concluir que una
petrleo tomadas de los guijarros de las playas de Snug Harbor tratadas con Inipol y no tratadas.
vez
comienza
la descom
posicin
de laqumica
fraccin aliftica,
tambin se
inicia y lael
es que
posible
exista
una menor
similitud
el hidrocarburo
objetivo
Los
datos deque
la esquina
izquierda
del grfico
representan entre
las muestras
tomadas ms
tarde en el
biodegradacin
de
muchas
otras
fracciones
del
petrleo,
a
velocidades
diferentes.
hopano. No obstante, el hopano proporciona
un estndar constante para norma lizar las
perodo de muestreo.
En este momento
puede obtener
una buena informacin cuantitativa sobre la
concentraciones
de los se
hidrocarburos
aromticos.
biodegradacin.
Como
la
velocidad
de
descomposicin
petrleo
residual
parece
En la Tabla 12.4, diferencia relativa de cantidad del
en cada
grupo
de homlo
gosser
de de
las
primer
muestras
orden,
de sepetrleo
puede calcular
de la playa
la vida
demedia
Prudhoe
del petrleo
Bay indica
(Ta bla
el grado
12.5). de
La aplicacin
cambio en dela
composicin
que tuvoprovoc
lugar en un
las incremento
muestras de de
playa.
de playa
tratadas con
fertilizante
oleoflico
msLas
delmuestras
doble en
la velocidad
de
Inipol, con del
muypetrleo
bajas relaciones
n-C 18/fitano,
mostraron
tambin grandes
en
desaparicin
residual sobre
los guijarros
en comparacin
con el cambios
control no
TABLA
12.5.
Anlisis
de
las
tasas
de
descomposicin
frente
a
los
pesos
residuales
del
petrleo
muchos
de
los
hidrocarburos
aromticos.
El
norhopano
y
los
estearanos
son
tan
tratado. La diferencia fue estadsticamente sig nificativa a pesar de la variabilidad de los
transformado
en las muestras
(slo
8dededescomposicin
julio deapoya
1989 al
de
julio de
resistentes
la(mg/g)
biodegradacin
comode
el
hopano,
y sudel
permanencia
el29
concepto
de
datos.
No se adetect
ninguna
diferencia
enguijarros
las velocidades
del
petrleo
1989)
para
las
playas
de
ensayo
de
Snug
Harbor
hopano
como
marcador
biolgico
interno.
De
nuevo,
no
hay
forma
explcita
de
asegurar
residual en la arena y grava mezcladas.
que
los la
cambios
de anterior,
los hidrocarburos
aromticos
heterocclicos
se en
deban
a la
Segn
discusin
atribuimos la
mayor tasay de
descomposicin
la playa
biodegradacin,
pero
la
posibilidad
es
grande.
De
hecho,
algunos
de
los
HPAs
de
mayor
tratada con fertilizante al aumento de la biodegradacin provocado por el suministro de
peso molecular
probablemente
no pueden
por los
qumicos
nitrgeno
y fsforo.
Es interesante
que el verse
efectoafectados
de aumento
del procesos
fertilizante
parezcay
fsicos,
y,
por
lo
tanto,
la
biodegradacin
puede
ser
el
nico
mecanismo
que
pueda
explicar
sostenerse durante 90 das. Este perodo de tiempo era mucho ms largo que el perodo
de
su
desaparicin.
Adems,
estas
muestras
se
tomaron
en
la
playa
aproximadamente
78 das
emisin de nutrientes o que el perodo en el que el fertilizante pudiese tener un efecto
de
despus
aplicacin
del fertilizante
Inipol;
cualquier efectocon
qumico
del ferti lavado.
Pordelola tanto,
favorecer
el proceso
de biodegradacin
unos residual
pocos nutrientes
lizantetener
que pudiese
provocar
estos cambios
en la composicin
era periodo
igual de de
impro
pareca
xito. Se
puede genera
lizar y decir
que durante un
120bable.
das (es
Si
suponemos
que
los
procesos
no
biolgicos
(como,
por
ejemplo:
decir, el periodo mximo, en Alaska, en el que las temperaturas del agua estnlixiviacin
por encimao
disolucin) separan grupos de hidrocarburos aromticos segn su solubilidad, los ms
de los 10 C y, por lo tanto, son adecuadas para la biodegradacin del petrleo), la
solubles se separarn primero, entonces, cualquier excepcin a esta ten dencia se podra
biorrecuperacin eli minara (suponiendo linealidad) aproximadamente 4 veces ms de
atribuir a la biodegradacin, ya que la solubilidad no es la nica caracterstica que
petrleo en los
determina la susceptibilidad al ataque biolgico. Un examen de
Playa
Importancia de la
pendiente, mayor que
cero
para
- Vida media Tiempo
separar el (90%,
(das)
das)
Pendiente
(desv. tpica)
valor-T
P*
Tratada
-0,016
80
-2,4
0,02
44
146
con Inipol
(0,007)
Control, no
-0,006
65
-0,56
0,58
124
411
tratada
(0,010)
Bloque*
1
35
Zona pleamar
Zona media
Zona bajamar
57
410
190
298
7
300
10
61
3

299
guijarros que en la playa de control no tratada. Por lo tanto, con una concentracin inicial
deTABLA
1,0 mg
de Nitrgeno
petrleo/gamoniacal
de material
de en
playa
(superficie
de intersticial
guijarros),tomadas
la biodegradacin
12.6.
(jM)
muestras
de agua
en una
potencialmente
puede
eliminar
la
mayor
parte
del
petrleo
en
un
solo
verano.
marea entrante, 2 das despus de la aplicacin del fertilizante oleoflico en
una Esto
coincida
condenuestras
playa
guijarrosobservaciones
en Snug Harborvisuales. La ausencia de cualquier efecto sobre el
petrleo residual en la arena y grava mezcladas debajo de los guijarros, sugera que el
petrleo quizs no se eliminaba en una capa lo sufi cientemente gruesa como para permitir
que la biorrecuperacin tuviese efecto du rante este perodo de ensayo. O, posiblemente, el
Inipol no era capaz de propor cionar nutrientes en esta parte de la playa: es decir, estaba
actuando principalmente en la superficie.
Nutrientes y biomasa microbiana

Despus de la aplicacin del fertilizante oleofilico, se tomaron muestras del agua
intersticial durante varios ciclos de mareas para determinar si se poda observar algn
incremento en las concentraciones de nitrgeno y fsforo. Las muestras de agua se
tomaron mediante un aparato modificado que muestreaba agua 10-15 cm por debajo de la
superficie de arena y grava mezcladas. El muestreo se realiz 2,
10 y 30 das despus de la aplicacin del fertilizante. Slo se observaron elevadas
concentraciones de nitrgeno en el muestreo del da 2 (Tabla 12.6), pero en las
zonas de la playa de ensayo se observaron concentraciones muy elevadas. Sin
embargo, la variabilidad era bastante grande con alguna inclinacin hacia una
par te de la zona tratada. Si en la pleamar todo el nitrgeno del fertilizante entrase
en un golpe hipottico de agua que cubriese la zona de ensayo de la playa, se
podran esperar unas concentraciones de aproximadamente 200-300 de N.
Obviamen te, estas concentraciones se alcanzaron en algunas zonas de la playa.
Como se haban producido tres ciclos de mareas antes del muestreo,
probablemente, gran parte del nitrgeno del fertilizante Inipol se haba emitido
durante los primeros das. Esto se corresponde con los datos de emisin de
nitrgeno generados en los estudios de laboratorio descritos anteriormente. Por lo
tanto, el efecto acelerador del fertilizante oleoflico sobre la biodegradacin del
petrleo puede haber sido resultado de un golpe inicial de nutrientes en vez de ser
el resultado de una con centracin de nutrientes sostenida en el tiempo. Otros
datos de laboratorio y de campo apoyan esta posibilidad (Pritchard et al., 1991).
El incremento de las tasas de biorrecuperacin por la aplicacin del fertilizante
tambin debera provocar un incremento en el nmero de bacterias degradadoras del
petrleo. Para determinar si ste era el caso, se analizaron muestras de playa (arena y
grava mezcladas) utilizando un procedimiento NMP (nmero ms proba ble) (Pritchard et
al., 1991), mediante este procedimiento se controlaban los cam bios en la consistencia
fsica del petrleo como indicadores de su biodegradacin. No hubo ninguna diferencia
significativa entre las playas de control y las tratadas durante los tres meses de muestreo
(datos no mostrados). Sin embargo, tal y como se indic anteriormente, las
concentraciones de organismos degradadores del pe trleo eran muy altas al principio, y,
con la gran variabilidad observada en los datos, haran falta unos incrementos de
aproximadamente dos rdenes de magni* La tasa del Inipol difiere de cero de forma importante nicamente a un nivel de confianza del 95 por 100.
300
Lnea de rboles
* Los bloques eran de 5 m de largo y 4 m de ancho y se situaban de forma paralela a la lnea del agua cubriendo
tres zonas paralelas, cada una de 4 m de anchura de lado a lado subiendo la playa. En cada zona no se muestreaban
los bloques 2, 4, y 6.
FIGURA 12.7. Mapa de actividad especfica del fertilizante en Disk Island y tasa de aplicacin de
granos de CUSTOMBLEN.
tud para ser significativos. Adems, el incremento de la biomasa poda verse oscu recido por
ridicamente para determinar el efecto del fertilizante sobre la biodegradacin del petrleo.
un desprendimiento de clulas o una conducta predatoria de los proto zoos. Los estudios de
La homogeneizacin reduca la variabilidad en las concentraciones de petrleo y, de esta
campo realizados el verano siguiente (1990), finalmente, fueron capaces de demostrar los
forma, simplificaba mucho los esfuerzos de muestreo.
importantes incrementos que se producan en re lacin a los organismos degradadores de
En la Figura 12.8 se pueden ver los cambios en la concentracin del amonio despus de
hidrocarburos, pero solamente en la sub- superficie de la playa (Lindstrom et al., 1991).
la aplicacin de los granos de fertilizante. Estos datos se obtenan des de pozos de muestreo
perforados en las playas para permitir el muestreo de las aguas intersticiales con las mareas
entrantes
y salientes.
Las en
mayores
Estudio
de campo
Diskconcentra
Islandciones de amonio se observaron con la
aplicacin de concentraciones mayores de granos {tasa 4; 1.000 g/m 2 ), pero estas
concentraciones
se sostuvieron
durante
de 1-2
das. De hecho,
concentraciones
En el verano deno
1990,
un ao despus
del ms
derrame
de petrleo,
se eligilascomo
zona de estudio
deuna
amonio
a los nive
ambientales
5 y 10 entre
das despus
la aplicacin,
parte se
delacercaban
litoral noroeste
de les
Disk
Island (islaentre
localizada
las islasde
Ingot
y Knight). El
independientemente
de laobtener
concentracin
de granos
Evidentemente,
estudio se dise para
informacin
de laderesfertilizante
puesta queaplicada.
se produca
segn la dosis
cuando
se est
observando Se
unaeligieron
respuestalos
relacionada
la dosis, se
apreciar
aplicada
de fertilizante.
gra nos deconfertilizante
porque
era un
fcilgolpe
aplicar
inicial
de
nutrientes
en
vez
de
concentraciones
sostenidas
en
el
tiempo.
Los
resultados
para
diferentes concentraciones de forma controlada.
la emisin
de fosfatos
y nitratos
similares.
La zona
de estudio
se eligifueron
porque
era uno de los pocos lugares que quedaban con playas
Un
examen
del
descenso
en
la
relacin
n-C18/ftano
lasexperi
muestras
tomadas en
moderadas o fuertemente contaminadas que
podan ser para
tiles
mentalmente.
Lalas
playa
playas
en
diferentes
momentos
despus
de
la
aplicacin
inicial
del
fertili
zante
mostr
que, por
seleccionada para el estudio, que no haba sufrido el proce so de lavado fsico utilizado
esencialmente,
no se
produca
un aumento
de la dad
biodegrada
ya que el descenso
no era era
Exxon, tena una
ligera
pendiente
y poca activi
de olas.cin,
La contaminacin
con petrleo
mayor
que
el
observado
en
las
zonas
de
control
no
tratadas.
En
la
Figura
12.9
se
muestra
superficial y subsuperficial, y ms densa en la arena y grava mezcladas de lo observado en
una
comparacin
entrecomo
las relaciones
de en
una
zonaWilliam
de control
y una zona que recibi la
otros
tipos de playas,
por ejemplo
Prince
Sound.
mayorSeconcentracin
de
fertilizante
en
grano.
Estaba
claro
que
biodegradacin
aplicaron diferentes cantidades de granos de fertilizante exista
en distintas
zonas, tal y(es
como
decir,
un descenso
continuo
enLa
lasconcentracin
relaciones), pero
no pareca
que por
fuese
estimulada
por el fue
se muestra
en la Figura
12.7.
de granos
aplicada
Exxon
a gran escala
2
fertilizante.
era un
sorprendente
porque las
revelaba
que de
quizs
no todas
las se
de 100 g/mste
. Antes
de resultado
la aplicacin
del fertilizante,
muestras
material
de playa
playas
sean receptivas
a la biorrecuperacin.
Debido
las caractersticas
de laestas
homogeneizaron
y colocaron
en cestas de muestreoalocalizadas
en cada energticas
zona. Despus,
pla
ya y de
a la
naturaleza
ms compacta
de su material, las limitaciones en el transporte de
cestas
muestreo
se trataron
pemasas (disponibilidad de nutrientes y/o oxgeno) pueden llegar a ser un proble-
301
3r
C
L
3
+ tf
I
z
----------22 Jun 90
29 Jun 90
06 Jul 90
13 Jul 90
Leyenda: x Control 1 Control 2 o Tasa

1 oTasa2 Tasa 3 o Tasa 4
(a)
3 r
QO.
4X
A
22 Jun 90
29 Jun 90
06 Jul 90
13 Jul 90
Leyenda: x Control 1 * Control 2 Tasa

1 o Tasa 2 A Tasa 3 o Tasa 4
(b)
FIGURA 12.8. (a) Cambios en la concentracin de amonio para la marea entrante en

todas las zonas del Estudio sobre la Tasa de Aplicacin de Fertilizante en Disk Island.
(b) Cambios en la concentracin de amonio para la marea saliente en todas las
zonas del Estudio sobre ia Tasa cte Aplicacin de Fertilizante en Disk Island.
302
R
el
ac
i
n
nC
1
8/
fit
a
n
o
R
el
ac
i
n
nC
1
8/
fit
a
n
o
Leyenda: o o o Muestra homogeneizada A A A Muestra de

la cesta Mediana
(a)
Leyenda: o o O Muestra homogenezada A A A Muestra

de la cesta Mediana
(b)
FIGURA 12.9. (a) Cambios en la relacin n-Cl8/fitano para la aplicacin de 500 g/m2
de fertilizante en el Estudio sobre la Tasa de Aplicacin de Fertilizante en Disk
Island. (b) Cambios en la relacin n-C18/fitano para la zona de control no tratada
nmero 1 en el estudio de Disk Island.
303
ma importante, y ste es un factor clave que se debe considerar a la hora de usar la

biorrecuperacin en otros tipos de playas contaminadas con petrleo. Tambin sabemos
que el material de playa contena material hmico; esto puede haber in teractuado con las
comunidades microbianas degradadoras del petrleo, bien como competidor respecto al
oxgeno disponible, o bien como fuente de carbono degradable preferible para los
hidrocarburos petrolferos.
Esta experiencia proporciona una leccin acerca del uso de los ensayos de la boratorio
como indicador del potencial de biorrecuperacin. Si era un fenmeno de transporte de
masas lo que afectaba al xito de la biorrecuperacin en Disk Island, entonces, la
separacin del material de playa en el laboratorio y la realiza cin de ensayos similares a
los descritos anteriormente, con toda probabilidad, no hubiesen revelado las limitaciones
inherentes al trabajo de campo. La mayora de estos ensayos de laboratorio implican el uso
de matraces que, por su diseo, opti mizan el transporte de masas, y, por lo tanto, hay que
esperar que se muestren unas actividades engaosamente altas en comparacin a las que se
producen en campo. Esto viene ilustrado por los estudios de mineralizacin llevados a
cabo conjunta mente con el estudio de Disk Island. El material de playa de las cestas de
muestreo, cuando se coloc en matraces biomtricos, mostr unas actividades de mine ralizacin que reflejaron un efecto de aumento por la presencia del fertilizante (Fig.
12.10). Parte de la produccin total de C0 2 es posible que procediese del material orgnico
no petrolfero presente en el material de playa; sin embargo, unos estudios similares que
utilizaron hidrocarburos radioetiquetados revelaron que, probablemente, estaba teniendo
lugar en estos matraces una estimulacin de la degradacin del petrleo por la accin del
fertilizante. Tambin parece que existe una relacin dosis-respuesta en estos resultados,
pero al doblar las concentracio nes de fertilizante no se dobl la tasa de degradacin del
petrleo, tal y como se mide con la mineralizacin. Obviamente, esta relacin no se daba
en el trabajo de campo.
Por lo tanto, el efecto estimulador observado en el laboratorio no se reflej en el
trabajo de campo. Sin embargo, los estudios en matraces indicaron que exista algn tipo
de limitacin al transporte de masas que estaba afectando a la biorrecu peracin en los
trabajos de campo. La nica forma de protegerse de los problemas que plantea la
extrapolacin es realizar estudios de microcosmos; en estos estu dios se analizan en el
laboratorio las muestras intactas del material de playa bajo una serie de condiciones
similares a las que se dan en el trabajo de campo. De hecho, estos sistemas se
desarrollaron y probaron durante el proyecto del derrame de petrleo en Alaska (Pritchard
et al., 1991), pero implican mayores complejida des, tiempo y gastos.
Programa de EPA para ei desarrollo de un protocolo

de biorrecuperacin de un derrame de petrleo
Muy vinculada a los estudios de campo que se acaban de describir est la cuestin de
cules son los productos comerciales, sean microorganismos, nutrientes, sur-
304
Wr
1.000 g/m2
100 g/m
50 g/m
Control (sin
tratar)
0,005 0,01 0,015 0,02 0,025 0,03 Tasa de

aplicacin de fertilizante
_!__________I________I________I________I-----------1________I
400 500 600 700 800 900 1000
Concentracin de fertilizante aplicada (g/m2)
FIGURA 12.10. Tasa de produccin de C0 2 frente a la tasa de aplicacin

del fertilizante.
factantes, u otros, que se podran o deberan utilizar en un contexto de biorrecuperacin.

Tal y como hemos mencionado anteriormente, en Alaska, muchos de estos productos
comerciales no podan ser considerados debido al corto margen de tiempo que exista para
las demostraciones de campo, pero tambin porque los datos dis ponibles para cada
producto eran tan diversos y/o insuficientes que no se podan seleccionar razonablemente
en el tiempo disponible. El desarrollo de protocolos de ensayo sobre rendimiento y
seguridad ambiental que permita establecer una base de datos constante y relevante, sobre
la cual se puedan adoptar decisiones para el uso de productos comerciales especficos, ya
est en camino en la Oficina de Investigacin y Desarrollo de EPA. La formacin de una
base conceptual para estos protocolos ha resultado complicada debido a la necesidad de
mantener el alcance de los ensayos dentro de lo razonable. Sin embargo, los problemas
plan teados en cuanto a la variabilidad, tal y como se indicaba anteriormente, hace muy
difcil el diseo de protocolos que finalmente proporcionen el tipo de informacin
correcta para adoptar las decisiones reglamentarias apropiadas. De hecho, es importante
revisar la conccptualizacin inicial que hemos realizado hasta la fecha. Evidentemente,
mientras se ensayan y validan los protocolos, estos conceptos ten drn que ser modificados;
por lo tanto, la informacin que se presenta aqu no se debe considerar como una directriz
final.
Los protocolos para establecer el rendimiento de los productos de biorrecuperacin
del petrleo, al final, deben contener los siguientes componentes:
305
1. Un sistema experto simplificado (bsicamente un rbol de decisiones), utilizado

por los reguladores para considerar los factores perifricos que son fundamentales
para el xito de la biorrecuperacin en aguas abiertas (Nivel I, rbol de
decisiones).
2. Un ensayo de clasificacin que permita la evaluacin del rendimiento en relacin a
los distintos productos de biorrecuperacin segn su capacidad para promocionar
una biodegradacin importante del petrleo bajo una se rie de condiciones estndar
de laboratorio (Nivel II, informacin de clasifi cacin).
3. Un procedimiento para extrapolar la informacin obtenida en el laborato rio al
trabajo de campo sobre una base lugar-especfica, utilizando infor macin
definitiva sobre cintica y respuestas a la dosis en marcos predicti- vos
simplificados y cuantitativos (Nivel 111, informacin de extrapolacin al trabajo
de campo).
4. Un procedimiento para el uso de sistemas de microcosmos continuos con el fin de
establecer el efecto relativo de diferentes productos comerciales de
biorrecuperacin sobre los derrames de petrleo bajo las condiciones ambientales
probables durante un derrame de petrleo (Nivel III, informa cin de extrapolacin
al trabajo de campo).
5. Directrices para realizar estudios de campo controlados en cercados artifi ciales con
objeto de establecer claramente el destino del petrleo durante la biorrecuperacin
(Nivel IV, demostracin directa en campo).
Es prudente centrarse en una parte del desarrollo de los protocolos debido a las
limitaciones de espacio. Los ensayos se realizaran bajo los componentes del pro tocolo de
extrapolacin lugar-especfica (punto 3) y el ensayo de microcosmos (punto 4). Sin
embargo, primero se har una breve descripcin de los conceptos que se encuentran detrs
de un protocolo de ensayos del Nivel II como mtodo para establecer comparaciones.
El propsito de los ensayos del Nivel II es determinar la capacidad de un pro ducto en
particular a la hora de proporcionar una biodegradacin significativa del petrleo bajo una
serie de condiciones de ensayo estndar en el laboratorio. No se disea para plantear el
rendimiento en un producto de biorrecuperacin bajo con diciones lugar-especficas.
Adems, los ensayos del Nivel II se dividieron en partes: la que mide la activi dad de
los productos biolgicos y la que examina el rendimiento de los productos no biolgicos.
Los ensayos para los productos biolgicos implican la adicin del producto directamente
sobre el derrame de petrleo en la proporcin recomendada por el fabricante. Tambin se
aaden otros aditivos recomendados por el fabrican te. Se supone que no es necesaria la
flora microbiana del agua natural porque el producto proporciona la mayor parte de la
actividad microbiana. Los ensayos se realizaron sin y con los nutrientes aadidos al agua, y
con productos estriles (es terilizados) y no estriles. Los matraces se incuban mediante
agitacin a 20 C. Si el producto es eficaz, los resultados se comparan con una serie de
datos estndar desarrollados con una informacin que especifica la cantidad de actividad
mnima
306
necesaria (perfil de captacin del oxgeno y cambios en la qumica del petrleo) para que el
producto sea eficaz como agente de biorrecuperacin.
En el ensayo de productos no biolgicos, se supone que stos generalmente implican a
algn mecanismo o procedimiento para estimular las capacidades degradadoras de la flora
microbiana natural. En la mayora de los casos, esto supone el enriquecimiento rpido de los
microorganismos degradadores del petrleo den tro del conjunto de la poblacin bacteriana.
Como en el Nivel II de ensayo no es apropiado considerar los factores especficos de un lugar
determinado que afectan a la actividad o el enriquecimiento de los microorganismos
degradadores del pe trleo, se debe utilizar una mezcla estndar de cultivos bacterianos puros
que de graden todas las fracciones ms importantes del petrleo. Alternativamente, se puede
seleccionar un lugar especfico para el muestreo como fuente constante de pobla ciones
naturales de bacterias. Sin embargo, no hay garantas de que la sensibilidad de una muestra de
agua de este lugar siempre sea constante, y, por ello, el uso de una mezcla de cultivos puros
tiene diversas ventajas: (1) permite almacenar las bacterias durante largos perodos y
conservar su actividad, de esta forma, ser la misma cada vez que se utilice; (2) elimina las
variaciones probables cuando se utilizan las muestras naturales como inculos, de esta forma,
se suprime la necesi dad de utilizar productos de control cada vez que se hace un ensayo; (3) se
emplean unas condiciones de enriquecimiento ptimas, con lo cual la evaluacin del producto
de biorrecuperacin se proporciona bajo condiciones ideales. Si no ofre ce un buen
funcionamiento bajo estas condiciones, entonces ser muy poco proba ble que funcione en el
trabajo de campo, donde las condiciones sern mucho me nos idneas.
El rendimiento del producto se medir en tiempo real, tal y como tiene lugar bajo las
condiciones prcticas en una zona de derrame, y segn el tiempo que tarde en enriquecer el
cultivo mezclado hasta alcanzar el punto en el que afecte al petr leo. La mancha de petrleo
se puede romper sobre la superficie del agua rpida mente como consecuencia de la adicin del
producto. El sistema de ensayo se di sea no solamente para controlar este suceso, sino
tambin como sistema cerrado, para poder seguir el destino del petrleo durante las semanas
posteriores. Si se observa una degradacin importante durante el periodo de incubacin,
entonces se supone que el petrleo que quede en la superficie del agua se va a descomponer.
La investigacin que actualmente se est llevando a cabo bajo el Programa de Investigacin de
Derrames de Petrleo verificar esta suposicin.
Concepto y desarrollo de los protocolos de

ensayo del Nivel III para aguas abiertas
La idoneidad de los productos para la biorrecuperacin de petrleo en mar abierto se debe
ensayar en el laboratorio bajo una serie de condiciones razonablemente representativas de las
condiciones de campo. Aunque los ensayos de esta naturale za pueden llegar a ser bastante
complejos, se han diseado sistemas de microcos mos que modelan unas caractersticas
especiales que pueden ser la clave para el xito de la biorrecuperacin en aguas abiertas. La
caracterstica principal de los
307
microcosmos es la incorporacin de una capacidad de disolucin. Los microcos mos que

contienen un derrame de petrleo sobre la superficie del agua se utilizan en esta parte del
protocolo para evaluar:
1. La tendencia del producto de biorrecuperacin a quedarse con el petrleo el tiempo
suficiente como para ser eficaz.
2. El potencial de un producto para emulsionar el petrleo y provocar su dispersin.
Se utilizan sistemas de microcosmos que posibilitan la aplicacin de un pro ducto de
biorrecuperacin y los complementos necesarios a una superficie de pe trleo, y, despus,
permiten que el agua del mar fluya por debajo del petrleo a velocidades y turbulencias
distintas para crear la capacidad de disolucin necesa ria a partir de una situacin de campo
concreta. Este ensayo determinar el tiempo en el que el producto y sus complementos se
unirn al petrleo. Por supuesto, no indica que se vaya a producir una disolucin similar en
los trabajos de campo, pero proporcionar un mtodo para seleccionar los productos y el
rendimiento dentro de una estrategia de aplicacin. Si, por ejemplo, un producto (o
complemento ne cesario) se separa rpidamente del derrame de petrleo en el microcosmos, es
casi seguro que se separar an ms rpidamente en los trabajos de campo. Un produc to que
parezca eficaz (es decir, que se quede con el derrame y afecte al destino del petrleo) se
considerar para la realizacin de ms ensayos. Adems, las condiciones de flujo y de
turbulencia en los microcosmos se pueden modificar para proporcionar un rango de
condiciones bajo las cuales se pueda evaluar el rendimiento del producto.
El sistema de ensayo del Nivel III se basa en las cinticas de biodegradacin e implica el
uso de estudios de microcosmos para determinar el efecto de algunos parmetros ambientales
sobre la capacidad del producto biorrecuperador a la hora de aumentar las tasas de
biodegradacin del petrleo. La informacin cintica es muy importante para los protocolos
que se dedican al tratamiento del petrleo so bre aguas abiertas, ya que siempre ser
importante la cuestin de la velocidad a la que opera el producto bajo una serie especfica de
condiciones ambientales en relacin a la velocidad con la que el derrame se dispersa de forma
natural.
El uso de microcosmos continuos es imprescindible debido a la necesidad de establecer el
rendimiento de un producto bajo condiciones que no pueden ser mo deladas en un estudio de
matraces o en ensayos del Nivel II. Estas condiciones se definen de la siguiente forma:
1. La presencia de una mancha de petrleo intacta flotando sobre la superficie de una
columna de agua.
2. La capacidad de impartir y controlar la turbulencia de la columna de agua durante los
ensayos con la mancha de petrleo intacta.
3. La entrada continua de agua que contenga importantes concentraciones de partculas
en la columna de agua.
4. Condiciones de flujo continuo que permitan el intercambio de agua y diso lucin
debajo de la capa de petrleo.
308
5. La temperatura, especialmente porque afecta a la naturaleza fsica del pe trleo.

Concentraciones de nutrientes inorgnicos en el agua de flujo.
Actividad microbiana en el agua afluente.
Para realizar los ensayos de microcosmos del Nivel III, se deben considerar
cuidadosamente varios puntos:
1. Los ensayos con microcosmos son caros para el vendedor porque requie ren
instalaciones de ensayo bastante elaboradas, un anlisis qumico y am plio, y
sistemas sofisticados para interpretar los datos. Por lo tanto, los en sayos se deben
mantener en un mnimo.
2. Debido a estos gastos y complicaciones, los ensayos con microcosmos no se pueden
emplear para examinar la influencia que tienen los factores eco lgicos o los
derrames sobre el rendimiento del producto de biorrecuperacin.
3. Los microcosmos, por definicin, se disean para simular ciertas condicio nes
ambientales de forma ms realista que los ensayos ms sencillos, como sucede con
los matraces. Por lo tanto, las condiciones especficas que van a ser modeladas en el
microcosmos se deben evaluar crticamente, de *al for ma que el ensayo con
microcosmos no d lugar a datos que podran haber sido obtenidos ms fcilmente
mediante sistemas ms sencillos.
4. Cuando se est considerando la aplicacin de un producto biorrecuperador en aguas
abiertas, hay que tener en cuenta que la modelizacin de las con diciones tpicas de
un lugar de derrame ser muy compleja, hasta el punto de que ser cuestionable su
correcta modelizacin en el microcosmos. Por ejemplo, el rendimiento de un
producto de biorrecuperacin probablemen te depender, en parte, de las condiciones
de las olas y de la turbulencia. Es difcil desarrollar estas condiciones en un
microcosmos. Adems, la extra polacin al trabajo de campo de la informacin del
microcosmos es com plicada porque las condiciones varan de da en da, o incluso
cada hora. Se podra ensayar un rango de condiciones turbulencia/olas en el
microcos mos, pero esto se debe limitar por las restricciones de coste y tiempo.
5. Finalmente, se debe tener en cuenta que los ensayos del Nivel III implican guardar la
informacin utilizada en el momento del derrame (despus de un derrame no hay
tiempo para realizar ensayos tipo microcosmos). Por lo tanto, la informacin
recogida debe ser de tal naturaleza que permita su utilizacin eficaz en la toma de
decisiones cuando se produzca otro derra me de petrleo.
Tal y como se mencion anteriormente, uno de los factores ms crticos cuan do se
realizan estudios de microcosmos es la capacidad para interpretar los datos resultantes.
Cuanto mayor sea la base de datos disponible sobre el rendimiento del producto,
especialmente en trminos cinticos, mejor se podrn utilizar los resul tados del microcosmos
y extrapolar a una situacin lugar-especfica. Como cada
309
zona es diferente, es imposible tener informacin registrada de un producto en particular

idneo para cada zona. Por lo tanto, hay que saber cmo generalizar el mtodo de ensayo.
Esto se puede lograr, bien ensayando aguas procedentes de varias zonas designadas (Costa
Atlntica frente a Costa Pacfica o Costa del Golfo, aguas norteas frente a aguas sureas,
bahas protegidas frente a abiertas, tierras hmedas frente a marismas, etc.), o bien
examinando el efecto de algu nos parmetros ambientales seleccionados que engloben de
forma general todas las condiciones de estas reas diferentes y, despus, se tratara de
extrapolar los resultados generales a las condiciones lugar-especficas que se pueden deter minar en el momento del derrame. Esta ltima aproximacin parece ser la ms razonable.
Por consiguiente, se debe desarrollar un protocolo basado en una decisin ini cial acerca
de los factores ms importantes que probablemente afectarn al rendi miento del producto en
el tratamiento del petrleo. Por lo general, los factores ms importantes sern:
1. Temperatura.
2. Turbulencia.
3. Salinidad.
4. Concentracin existente de nutrientes inorgnicos.
5. Partculas en suspensin.
6. Actividades microbianas existentes.
7. Tipo y concentracin de petrleo.
Se debe determinar si los factores se pueden medir en el trabajo de campo en el momento del
derrame (en un perodo de 1 -2 das). Para los que se puedan medir, se establecern unas
relaciones cuantitativas entre el factor y el rendimiento del producto. Un buen ejemplo es la
turbulencia. El rendimiento del producto se pue de establecer bajo tres condiciones diferentes
de turbulencia: alta, media y baja. Los datos se introducen en un grfico (rendimiento frente
a turbulencia expresado en nmero Reynolds o equivalente), y se establece una relacin
(lineal, exponen cial, etc.) utilizando tcnicas estadsticas. Una vez conocida la relacin, se
puede predecir el rendimiento del producto en un lugar concreto. Es decir, se obtendr una
indicacin general de las condiciones de turbulencia en el lugar del derrame y se utilizar el
grfico para establecer el rendimiento del producto.
Como al final se tratarn varios factores ambientales juntos y varias condicio nes
ambientales especiales, se puede utilizar un sencillo marco de clculo. Un pro tocolo debe
contener, para cualquier producto, los factores ambientales clave que afectarn al
rendimiento en cualquier zona, y stos sern: turbulencia, temperatu ra, actividad microbiana,
tipo de petrleo, concentracin de nutrientes en la co lumna de agua, y partculas en la
columna de agua. Ningn otro factor deber ser considerado, ya que se supone que los dems
factores no sern significativos en la decisin global de utilizar o no el producto. Por lo
tanto, cada producto tendr datos registrados que relacionarn estos factores ambientales
clave con el rendi miento del producto.
310
BIOTR ATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
Resumen y conclusiones
Los resultados de nuestra demostracin de campo en relacin a la biorrecuperacin de un
derrame de petrleo en Prince William Sound indicaron que el fertili zante oleoflico Inipol
EAP 22 serva como fuente de nutrientes eficaz para las comunidades microbianas
degradadoras de petrleo. Este producto aument la biodegradacin del petrleo, tal y como
se midi mediante los cambios de composi cin del petrleo y los pesos residuales del mismo,
hasta doblar las tasas registra das en los controles no tratados. Esto supone una efectividad
suficiente como para merecer la incorporacin de la biorrecuperacin, a gran escala, en el
plan de recu peracin de las playas contaminadas con petrleo de Prince William Sound. A
pesar de este efecto de aumento, la importancia de la naturaleza oleoflica an no est clara,
por lo menos para el material de playa contaminado con petrleo de Prince William Sound.
Sin embargo, nuestros estudios confirman la creencia de que la observacin visual de la
eliminacin del petrleo en las playas 8-10 das despus de la aplicacin de Inipol se debi
fundamentalmente a la biorrecupera cin y no a un efecto de lavado qumico.
Globalmente, la rpida desaparicin del petrleo provocada por la aplicacin del
fertilizante oleoflico hizo que estas playas fuesen ms compatibles con la vida salvaje local
(menor tendencia a manchar la piel y las plumas de los animales con petrleo). Estos cambios
se producan en un perodo de tiempo ms corto que los cambios observados en las zonas de
control no tratadas, y posiblemente ayudaban a que se acelerase la recuperacin biolgica de
la zona de intermareas.
Tambin hemos tratado algunas de las cuestiones asociadas a la medicin del xito de la
biorrecuperacin en el trabajo de campo. Se han enfatizado como ele mentos clave las
mediciones eficaces de la biodegradacin y la interpretacin de los datos resultantes, dada la
naturaleza altamente variable de los estudios de cam po. Adems, se discutieron tambin las
complicaciones y dificultades que surgie ron durante nuestros trabajos de biorrecuperacin en
Alaska. Es de esperar que esto sirva de gua en aplicaciones similares de biorrecuperacin
para futuros de rrames de petrleo.
Atlas, R. and R. Bartha. 1973. Stimulated biodegradation of oil slicks using oleophilic fertilizers.
Environ. Sci. Technol. 7:538-541.
Atlas, R. M. 1981. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons: An environmental
perspectiva. Microbiol. Rev. 45:180-209.
Bartha, R. and D. Pramer. 1965. Features of a flask and method for measuring the persistence
and biological effects of pesticidas in soil. Soil Sci. 100:68-70.
311
Chianelli, R. R., T. Aczel, R. E. Bare, G. N. George, M. W. Genowitz, M. J. Grossman, C.

E. Haih, F. J. Kaiser, R. R. Lessard, R. Liotta, R. L. Mastracchio, V. Minal-Bernero, R. C.
Prince, W. K. Robbins, E, I. Stiefel, J. B. Wilkinson, S. M. Hinton, J. R. Bragg,
S. J. McMillem, and R. M. Atlas. 199L Bioremediation technology development and
application te the Alaskan spill. In Proceedings 1991 Oil Spill Conf, Am. Petroleum Inst.,
Washington, D.C., pp. 545-555.
Bergstein, P. E. and J. R. Vestal. 1978. Crude oil biodegradation in arctic tundra ponds. Arctic
31:159-169.
Glaser, J. A., A. D. Venosa, and E. J. Opatken. 1991. Development and evaluation of appli cation
techniques for the delivery of nutrients to contaminated shoreline in Prince William Sound.
In Proceedings 1991 Oil Spill Conf, Am. Petroleum Inst., Washington, D.C., pp. 556-562.
Halmo, G. 1985. Enhanced biodegradation of oil. In 1985 Proceedings Oil Spill Conf, Am.
Petroleum Inst., Washington, D.C., pp. 531-537.
Jobson, A. M., F. D. Cook, and D. W. S. Westlake. 1972. Microbial utilization of crude oil.
Appl. Microbial. 23:1082-1089.
Kennicutt, M. C. 1988. The effect of biodegradation on crude oil bulk and molecular composition. Oil Chem. Pollut. 4:89-112.
Lee, K. and E. M. Levy. 1987. Enhanced biodegradation of light crude oil in sandy beaches. In
1987Proceedings, Oil Spill Conf Am. Petroleum Inst., Washington, D.C., pp. 411- 479.
Lindstrom, J. E., R. C. Prince, J. C. Clark, M. J. Grossman, T. R. Yeager, J. F. and E. J. Brown.
1991. Microbial populations and hydrocarbons biodegradation potential in fer- tilized
shoreline sediments affected by the T/V Exxon Valdez oil spill. Appl. Environ. Microbiol.
57:2514-2522.
Madden, P. C. 1991. Final Report Pralis Island Bioremediation Project. Exxon Res. and
Engineering, Florham Park, N.J. 82 pp.
Mueller, J. G., S. M. Resnick, M. E. Shelton, and P. H. Pritchard. 1992. Effect of inoculation on
the biodegradation of weathered Prudhoe Bay crude oil. J. Ind. Microbiol. In press.
Olivieri, R., P. Bacchin, A. Robertiello, N. Oddo, L. Degen, and A. Tonolo. 1976. Micro- bial
degradation of oil spills enhanced by a slow-release fertilizer. Appl. Environ. Microbiol.
31:629-634. (57)
Olivieri, R., A. Robertiello, and L. Degen. 1978. Enhancement of microbial degradation of
oil pollutants using lipophilic fertilizers. Marine Pollut. Bull. 9:217-220. (59).
Pimik, M. P., R. M. Atlas, and R. Bartha. 1977. Hydrocarbon metabolism by Brevibac- terium
erythrogenes: Normal and branched alkanes. J. Bacteriol. 119: 868-878.
Pritchard, P. H., C. F. Costa, and L. Suit. 1991. Alaska Oil Spill Bioremediation Project. U.S.
EPA, Office of Res. and Dev. Report, EPA/600/9-91/046a, 522 pp. Washington, D.C.
Pritchard, P. H. and C. F. Costa. 1991. EPAs Alaskan oil spill bioremediation project. Environ.
Sci. Technol. 25:372-379.
Rowland, S. J., R. Alexander, R. 1. Kazi, D. M. Jones, and A. G. Douglas. 1986. Microbial
degradation of aromatic components of crude oils: A comparison of laboratory and feld
observations. Org. Geochem. 9:153-161.
Sveum, P. and A. Ladousse. 1989. Biodegradation of oil in the Arctic: Enhancement by oilsoluble fertilizer application. In 1989 Proceedings Oil Spill Conf, Am. Petroleum Inst.,
Washington, D.C., pp. 439-446.
Tramier, B. and A. Sirvins. 1983. Enhanced oil biodegradation: A new operational tool to
control oil spills. In Proceedings 1983 Oil Spill Conf, Am. Petroleum Inst., Washington,
D.C., pp. 155-219.
312
BfOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
Venosa, A. D., J. R. Haines, J. A. Glaser, E. J. Opatken, P. H. Pritchard, and C. F. Cos ta. 19 90.
Bioremediation treatabilty triis using nutrient application to enhance cleanup of oil
contaminated shoreline. In Proceedings 83rd Air and Waste Management Association Annual
Meeting, Air and Waste Management Assoc., Pittsburgh, Pa., pp. 90-22.3.
Captulo 13
ORIENTACIONES FUTURAS
EN LA BIORRECUPERACIN
Rita Colwell
Instituto de Biotecnologa de Maryland
Universidad de Maryland College
Park, Maryland
Morris A. Levin
Instituto de Biotecnologa de Maryland
Universidad de Maryland College
Park, Maryland
-------------Michael A. Gealt--------------Departamento de Biociencia y Biotecnologa

Universidad de Drexel Philadelphia,
Pennsylvania
Los pronsticos para las tendencias futuras se deben basar en los hechos y descu brimientos
del pasado inmediato y del presente. Las reas en las que la investiga cin actual est
avanzando ms rpidamente son: la aplicacin de la gentica mo lecular al desarrollo de
nuevas cepas bacterianas capaces de degradar ms los compuestos o de metabolizar a
aquellos que de otra forma resultaran refracta rios al metabolismo microbiano; y el
desarrollo de nuevas tecnologas de inge niera para aumentar la velocidad y el alcance de la
degradacin. Se han realizado observaciones similares 414247 en las que se han discutido
ejemplos de aplicaciones especficas que combinan las aproximaciones microbianas y de
ingeniera. Desde el principio destacamos la importancia de plantear la infraestructura
reglamentaria paralelamente a las innovaciones cientficas y de ingeniera en la
biodegradacin, ya que no se pueden utilizar nuevas cepas fuera del marco reglamentario.
Se est progresando mucho en la ciencia y tecnologa de la biodegradacin y
biorrecuperacin. En 1991, el mercado de biorrecuperacin de residuos peligrosos
313
314
supuso unos 60 millones de dlares y se estima que crecer hasta 125-300 millo nes de
dlares para 1995. La prediccin es una tasa de crecimiento del 65 por ciento anual l6 . Otro
indicativo importante de la madurez de la industria se ve en los esfuerzos de los miembros
de la Asociacin de Biotecnologa Aplicada, quie nes estn utilizando, hasta la fecha, slo
microorganismos no modificados. La aso ciacin se form en 1988 para promocionar los
intereses de las empresas implica das en el biotratamiento 3 . Ha preparado un compendio de
los xitos y actualmente est buscando una forma de acreditacin para los proveedores que
utilizan micro organismos modificados en el tratamiento de residuos.
La importancia de la estructura reglamentaria es cada vez ms evidente. Por ejemplo,
los factores reglamentarios especficos que influyen en el desarrollo de Ja industria de
biotratamiento son: (1) los reglamentos de limpieza federales y estata les, y (2) las
cuestiones de transferencias inmobiliarias. Muy importante es la ne cesidad de demostrar
inequvocamente que la degradacin microbiana es el mejor mtodo para la desaparicin de
los contaminantes, y que el proceso dar lugar a la mineralizacin o produccin de
sustancias inocuas.
Desgraciadamente, en algunas reas el progreso es menos rpido. Despus de analizar
Ja literatura relativa al tema en busca de evidencias sobre el xito del bio tratamiento,
Madsen 31 slo pudo recoger siete casos en los que se pudiese docu mentar sin dudas una
biodegradacin originad^ por la actividad microbiana. Estos siete casos incluyeron tres
aplicaciones en suelo, dos acuticas y dos marinas. Solamente _uno_de ios tratamientos, de
jjuelo^ cont con adicin de microorganis mos; los otros tuvieron una adicin de nutrientes
en forma de fertilizante. Ninguna de las pruebas marinas o acuticas utiliz la adicin de
fertilizantes. Madsen 31 pudo identificar otros estudios en los que el trabajo de laboratorio
avalaba la capacidad de los microorganismos autctonos para degradar residuos concretos,
pero los es tudios de campo asociados no generaron datos concluyentes para apoyar la idea
de que la biodegradacin se deba a la accin microbiana. Obviamente, es necesario contar
con ms datos que detallen los efectos in situ de la accin microbiana antes de que los
polticos, el pblico y los posibles clientes acepten el biotratamiento como alternativa
viable, segura y rentable.
En un artculo reciente, Alexander' constat que las reas de investigacin prio ritarias
incluan: (1) el incremento de la biodisponibilidad de contaminantes, (2) la mejora de los
diseos para la recuperacin en reactor e in situ, (3) la superacin de los problemas de
escalas, y (4) la bsqueda de procesos mejores de biorrecuperacin. Aunque cuando
existe suficiente tiempo, los microorganismos degradan casi la totalidad de los compuestos,
en la prxima dcada se debe lograr un incremento del rendimiento de los microorganismos
autctonos y reactores (o prcticas in situ) para que la tasa de degradacin supere a la tasa
de deposicin.
reas de progreso
Los residuos cianognicos se estn tratando mediante degradacin utilizando mi croorganismos. Es decir, el cianuro se genera a partir de diversos procesos indus
ORIENTACIONES FUTURAS EN LA BIORRECUPERACIN
315
trales, incluyendo la electrodeposicin y la fabricacin de acero y pintura. Debido a !a

toxicidad del cianuro, es necesario conseguir su degradacin antes de permitir elvertido al
ambiente de los residuos que contienen cianuro. Como existen aproxi madamente 2.000
especies de plantas verdes que producen ciangenos (compues tos orgnicos que contienen
cianuro), que se convierten en HCN cuando la planta es atacada por los hongos, no es
sorprendente que stos, como mecanismo de de fensa, hayan desarrollado enzimas (p. ej.,
hidratasa de cianuro) capaces de des- toxifcar el HCN convirtindolo en formamida 58 .
Estos mecanismos de destoxifi- cacin estn bajo investigacin para su aplicacin en el
tratamiento del cianuro residual. Ya se ha demostrado la conversin estequiomtrica del
cianuro en for mamida utilizando un hongo inmovilizado en una columna. La empresa
Imperial Chemical Industries (ICI) ha desarrollado un sistema enzimtico que se puede uti lizar para tratar altas concentraciones de cianuro en un flujo continuo, que puede variar
desde unos pocos a varios cientos de metros cbicos al da. La empresa Homestake
Chemical Company, en Dakota del Sur, ha desarrollado un sistema de biotratamiento que
utiliza biodiscos (RBCs). La empresa eligi un proceso biol gico para el tratamiento de los
residuos cianognicos despus de evaluar cuidado samente los tratamientos qumicos y
fsicos, que se rechazaron por su rendimien to, costes de inversin, y altas concentraciones
de cianuro en los efluentes (hasta 20 mg/1). Tambin se ha informado de xitos en la
degradacin del cianuro utili zando bacterias metanognicas en condiciones anaerobias l2 .
Queda claro, entonces, que se pueden citar muchos ejemplos del uso de orga nismos
vivos para la recuperacin ambiental. En general, stos incluyen plantas microorganismos.
Las plantas se han utilizado para la acumulacin y separacin de residuos txicos en el
agua y suelo, especialmente cuando los residuos txicos contienen metales pesados. Los
pioneros en esta aplicacin fueron Minguzzi y Ver- gano en 1949, en esta ocasin, las
plantas acumularon nquel procedente del suelo [hasta niveles (sim) del 1 por ciento] 2! . Se
utiliz el trmino hiperacumuiadoras para las especies de plantas que acumulaban 0,1 por
ciento de metal, medido en las hojas secas. Ms de 50 especies de alheles pueden
hiperacumular metales pe sados. Homer et al. informaron sobre la captacin de nquel, cobre
y cobalto. Otros han constatado que algunas plantas acumulaban entre el 0,1 y 5 por ciento
de su peso seco total en contenido en metales. En base a estos descubrimientos se ha
propuesto que las plantas sean utilizadas para acumular metales y que el tejido de las
mismas sirva como fuente para la recuperacin de dichos metales. Baker 5 esta bleci una
hiptesis segn la cual la acumulacin es lineal hasta alcanzar un nivel a altas
concentraciones de metal en el suelo.
La investigacin en la biorrecuperacin marina utilizando microorganismos marinos
que poseen una amplia gama de capacidades degradadoras y pueden so brevivir en
condiciones adversas se sigue realizando y ha sido revisada reciente mente 60 . Se estn
estudiando diversas capacidades en el ambiente marino por el inters que existe en la
codificacin de genes para las enzimas de degradacin, y la necesidad de capacidades
genticas que continen activas bajo condiciones ad versas (p. ej., altas presiones en las
profundidades marinas y altas temperaturas en los sistemas de ventilacin hidrotrmicos).
316
8IOTRATAMJENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
Desarrollo de cepas
Se han realizado muchos estudios que describen cepas bacterianas y hongos que pueden
descomponer uno o ms tipos de residuos peligrosos. Es casi axiomtico que las nuevas
cepas puedan ser aisladas fcilmente. Por ejemplo, recientemente se inform de que la
Alcaligenes sp. 0-1 mineralizaba el cido o-sulfanlico 22 y se ha descrito que la Nocardia
sp. HB descompone los 1,2-epoxialcanos 57 . Con una mayor investigacin, se puede esperar
que se consigan nuevas cepas para la des composicin de materiales nocivos que los
organismos actualmente no pueden degradar con facilidad l - 45 .
Antes de utilizar organismos modificados en los trabajos de campo se deben tener en
cuenta las cuestiones de seguridad y de inquietud pblica 4I - 42,43 . Inicial mente, es necesario
realizar demostraciones en el laboratorio y a escala piloto para comprobar que los
microorganismos modificados genticamente (MMGs) ofrecen una clara ventaja sobre los
organismos convencionales y no suponen ningn peli gro. Obviamente, hay que cumplir los
reglamentos en vigor. Adems, las cuestio nes econmicas, de mercado, los obstculos
sociales y el ambiente poltico, todos estos factores juntos, jugarn un papel importante en
la biorrecuperacin. Estas cuestiones se discuten ms ampliamente en el Captulo 2.
Se estn desarrollando varias estrategias para utilizar los MMGs en la supera cin de los
problemas que plantea el uso de bacterias autctonas. Por ejemplo, es nprmal que cuando se
tienen muchos productos residuales diferentes sea necesario el desarrollo simultneo de
varias rutas para que se produzca la degradacin. Va rios investigadores 1,23 - 56 han sugerido la
posibilidad de obtener diferentes funcio nes en una sola especie, que despus podra entrar
en el ambiente para degradar un compuesto complejo o mezcla de compuestos.
Alternativamente, puede ser ms idneo controlar la proporcin de diferentes especies de
bacterias dentro de una asociacin para conseguir la misma mezcla de actividades 34 .
Desgraciadamente, falta informacin sobre cmo funcionan las especies asociadas.
Obviamente, se trata de una cuestin que se debe resolver, bien de un modo general, o caso
por caso, para obtener la informacin deseada.
Uno de los impedimentos para introducir los MMGs en el medio ambiente es el
requisito legal de que sean seguidos y controlados despus de su emisin deli berada o
escape desde un reactor. Se han desarrollado diversos mtodos con el fin de seguir a los
MMGs; el ms comn es el uso de secuencias nicas como objeti vos, bien para la
hibridacin o para la reaccin en cadena polimerasa (RCP) 36,5 '. Se ha sugerido el uso de
mtodos selectivos de placa que emplean caractersticas especiales clonadas. Por ejemplo,
Nakamura et al. 37 propusieron un mtodo de cul tivo en placas para detectar a una
Pseudomona sp. capaz de asimilar el monofluoroacetato como fuente nica de carbono 37 .
El control, una vez desarrollado el mtodo de deteccin, es ms difcil cuando !a
secuencia de ADN se transporta entre cepas o especies bacterianas en el am biente. Se ha
demostrado que el transporte de genes se produce tanto en sistemas acuosos 13 ,4 ' I5 ' 24 32 ' 3S ' 48
como en suelos 17 49 59 . Este transporte necesita el uso de son das de ADN y RCPs para
controlar los MMGs emitidos, ya que estos mtodos son
317
sensibles al ADN modificado y no al organismo anfitrin (que puede cambiar de bido al

transporte de genes). Un trabajo reciente confirma que las bacterias pueden recibir ADN
libre del medio 36 .
Quizs ms fructfera que la adicin de nuevas funciones metablicas a aa sola bacteria
es decir, la creacin de un superbicho sea la modificacin de las actividades
metablicas de los microorganismos autctonos y la creacin de asociaciones. Por ejemplo,
la simple modificacin de la actividad promotora pue de incrementar la cantidad de enzima
producida por un organismo. Muy pocos cambios en la secuencia primaria de los
aminocidos pueden alterar la estructura enzimtica, posiblemente se logre aumentando su
estabilidad, haciendo descender la especificidad del sustrato (incrementando el nmero de
posibles sustratos), o ampliando el rango de condiciones ambientales bajo las cuales
funcionar la enzi ma (pH, temperatura, etc.). La posibilidad de llevar a cabo estos logros
mediante ingeniera gentica ya ha sido demostrada y probada mediante la modificacin de
la subtilisina (vase Ensley y Zylstra, Captulo 3).
Las mezclas de materiales txicos vertidas en los flujos residuales se pueden tratar
mejor con mezclas de microorganismos que trabajen asociados o en consor cios. Sin
embargo, puede haber ocasiones en las que los microorganimos trabajen ms eficazmente
cuando se aplican especies o cepas individuales, en vez de toda la mezcla al principio de la
recuperacin. Se ha demostrado 34 que los microorga nismos producidos de forma natural,
pero seleccionados, se pueden aplicar con xito a escala comercial en tales situaciones. La
empresa Waste Stream Technolo gies (WST) ha informado sobre el tratamiento con xito de
mezclas de contami nantes con compuestos voltiles, semivoltiles y alifticos. La empresa
utiliz la introduccin secuencial de microorganismos, con la aplicacin de un organismo
para degradar los compuestos voltiles, seguido de la adicin de una serie de mi croorganismos para continuar el proceso; de esta forma se degradan los pirenos y los
compuestos con mayores pesos moleculares. Se han seleccionado microorga nismos que
metabolizan especficamente cada grupo de compuestos. WST ha de mostrado que, utilizando
todas las especies microbianas de forma simultnea, la degradacin se inhibe, una
observacin interesante e importante. La empresa se leccion microorganismos
termoespecficos (termofilicos, psicroflicos, y/o meso- flicos), de esta forma, se consigui
la biodegradacin durante todas las estaciones del ao. En uno de los casos, el suelo
contaminado con gasleo se trat con pseudomonas psicroflicas a finales del otoo, el
resultado fue que no se detect gas leo en el suelo durante la primavera. En otro caso, se
inocularon en noviembre entre 6.000 y 7.000 m 3 de suelo que contena naftaleno a un nivel
de 8.000-12.000 ppm. Cuando se comprob el suelo en marzo, la concentracin haba
descendido a 100 ppm 33 . WST tambin apoya el uso de grandes cantidades de
microorganismos, con una sustitucin continua cuando puedan ser problemticas las
cuestiones de toxicidad o de deficiencia de nutrientes. Esta aproximacin se basa en la
suposi cin de que algunos de los microorganismos digieren parte del material, y el pro pio
inoculo generar una fuente de nutrientes durante algn perodo corto de tiempo.
El rendimiento de la degradacin depende de las rutas y de los receptores ter minales de
electrones disponibles en la cepa o asociacin microbiana utilizada 52 .
318
BIOTRATAMiENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS
La diferencia fundamental no estar en si una reaccin es anaerobia o aerobia; el xito

depender de los factores ambientales que favorezcan las reacciones realiza das por aquellos
microorganismos para los cuales el sustrato es accesible. Esta clase de informacin, obtenida
de la ecologa microbiana, se puede utilizar para modelar el destino y el transporte de los
compuestos, as como de las propias bac terias, y es til en el diseo de tratamientos
especficos. Alexander et al. 2 seala ron que como la adsorcin contribuye en gran parte a la
retencin y el movimiento de las bacterias en los acuferos, la manipulacin de los
constituyentes inicos puede facilitar el funcionamiento de los microorganismos.
En el futuro, no existe ninguna duda de que la degradacin se mejorar me diante
ingeniera gentica. Se incrementarn las tasas de degradacin y el rango de materiales que se
pueden tratar. La aplicacin de la tecnologa del cido nucleico conseguir grandes avances
en microbiologa ambiental y en el biotratamiento de los materiales residuales 40 . Las
aplicaciones ambientales de los microorganismos no modificados, junto con el uso de las
sondas de cido nucleico y RCP, para identificar a los microorganismos implicados en los
procesos de biorrecuperacin y control ambiental harn del campo del biotratamiento un
componente importan te en la biorrecuperacin.
Si la industria del biotratamiento va a prosperar es imprescindible que el pbli co acepte
el biotratamiento y el uso de microorganismos modificados en biorrecu peracin. La
aceptacin por parte de la comunidad industrial y del pblico no se basa slo en el xito de
las aplicaciones sin efectos adversos, sino tambin en datos slidos que demuestren un
tratamiento con xito a un coste reducido (en tiempo y/o dinero). Existen muchos datos
disponibles en los trabajos de laborato rio sobre la capacidad de un microorganismo dado para
degradar un compuesto en particular bajo una serie de condiciones controladas. No se puede
enfatizar dema siado la importancia que tiene el demostrar que un proceso se puede aplicar a
es cala real y operar bajo condiciones reales. De hecho, ste es un gran obstculo en el
desarrollo de la biotecnologa, y especialmente de la biorrecuperacin 39 42 .
El uso especfico de MMGs en biorrecuperacin es una cuestin de seguridad, debido a
la posible emisin al ambiente del propio MMG o del ADN modificado genticamente, con
su potencial de transporte entre los microorganismos natura les. Una aproximacin que ha
logrado algunos apoyos es la incorporacin de un gen suicida a la bacteria propuesta para
su emisin deliberada 9 . La funcin de autodestruccin se puede combinar con las funciones
degradadoras modificadas, de modo que la bacteria muera cuando desaparezca el residuo
peligroso, es decir, cuando se metabolice el sustrato. Un ejemplo sera la insercin de una
protena (la protena GEF) en la membrana celular. Cuando cesa la degradacin, esta protena
facilita el flujo sin restriccin hacia dentro y fuera de la clula, provocando su muerte. El
funcionamiento del sistema basado en la GEF se ha demostrado en va rias especies con
posibilidades de emisin deliberada.
Existen datos que demuestran que los organismos modificados quizs no pros peren, o
incluso resistan, en algunas condiciones ambientales 27 . Es posible que no sobrevivan lo
suficiente como para lograr el objetivo deseado. Los ensayos en el laboratorio se han
realizado con cepas mutadas, y se han planificado ensayos simi
319
lares para las cepas modificadas 7 . Celgene y Envirogen han investigado las venta jas de usar
microorganismos modificados y han comenzado a desarrollar cepas para su uso en el futuro;
creen que los MMGs sern emitidos con el beneplcito del pblico l0 .
Un rea que ha conseguido grandes mejoras durante los ltimos aos es el desarrollo de
mtodos de control. Se estn desarrollando modelos para controlar la degradacin: un buen
ejemplo son los hidrocarburos de una zona en recuperacin 4 . En el futuro, cuando el uso in
situ de los MMGs sea rutinario, la actividad degradadora se medir construyendo el MMG
de modo que incluya al gen Luxe de Vibrio harveyii. Tal construccin permitir la generacin
de luz (que se puede con trolar) mientras sube el ATP intracelular durante la degradacin 25 .
Sin duda, algunos residuos proporcionarn una visin impresionante durante la noche! En
cualquier caso, la presencia de organismos que contengan genes degradadores especficos se
podr controlar mediante hibridacin clsica 44 o mtodos RCP 26 , cuando se consi ga mejorar
estas tcnicas.
Mtodos de tratamiento
Los nuevos mtodos de biotratamiento en desarrollo incluyen tecnologas para tratar los
hidrocarburos clorados voltiles y los aromticos ligeros en las aguas subterr neas y en los
flujos de aire 8,55 . Center et al. 8 revisaron diversos procesos innovado res para la recuperacin
de ambientes subsuperficiales contaminados, especialmente flujos que contenan
hidrocarburos alifticos clorados y constituyentes aromticos ligeros procedentes de
productos petrolferos. Estos investigadores llegaron a la conclusin de que se poda
conseguir una separacin del 60-90 por ciento utilizan do las tcnicas existentes. El grado de
separacin dependa del tipo de material, tipo de sustrato utilizado en el reactor, tasa de flujo,
temperatura, y de otros par metros ambientales relevantes. Obviamente, la investigacin
adicional conseguir mejorar el rendimiento.
Venterea y Fogel 55 han estudiado los mtodos para la biofiltracin de flujos de aire,
sealando que la adsorcin de los contaminantes mediante carbono, por ejemplo la adsorcin
de tricloroetileno (TCE), requiere entre 5 y 10 veces ms carbono en peso que TCE adsorbido
y que el material no cambie, sino que sencillamente se adsorba. En contraste, la biofiltracin
da lugar a la mineralizacin del contami nante, sin productos secundarios (p. ej., cloruro de
vinilo) que puedan contener propiedades adversas. La tcnica ya se ha mostrado eficaz para
el tratamiento de flujos gaseosos que contengan bajas concentraciones de compuestos
orgnicos.
Se estn desarrollando activamente tcnicas de biorrecuperacin para flujos con altas
concentraciones. Tambin se ha utilizado con xito la biofiltracin cuan do se usa la
ventilacin como proceso de recuperacin. Un estudio reciente de las Fuerzas Areas de
Estados Unidos mostr que se consegua separar 50 g/h de com bustible de reactores
utilizando un biofiltro 55 . Los costes de inversin y operacin para la biofiltracin se estiman
en ms o menos los mismos que para los sistemas de oxidacin cataltica. Los costes
operativos han supuesto la tercera parte de los costes empleados en los sistemas de adsorcin
mediante carbono.
320
El tratamiento de tos lixiviados de vertederos es una aplicacin cada vez ms comn en

biotratamiento. Con el uso incrementado (y obligatorio) de verte deros con revestimientos, la
recoleccin y tratamiento de los lixiviados pre senta mltiples problemas. El tratamiento de
modo semicontinuo posibilita el mantener el tratamiento durante periodos de tiempo
prolongados. El biotratamien to semicontinuo de un lixiviado de vertedero que contenia un
producto qumico herbicida fenoxi permiti el tratamiento de una carga diaria media de 1,6 kg
de herbicida y de 0,5 kg de fenoles, con una descomposicin superior al 98 por ciento para
ambos 6 .
El uso de condiciones reductoras en degradacin ha permitido abrir un nuevo campo.
Actualmente, muchos compuestos halogenados se deshalogenan utilizan do organismos
anaerobios, despus de lo cual se produce rpidamente una ruptura de los anillos bajo
condiciones aerobias. Para el tratamiento anaerobio de los resi duos se pueden emplear
sistemas con lecho fluidizado 50 54 . De hecho, se estn de sarrollando diversos reactores
anaerobios, como el lecho de biomasa con flujo as cendente y el reactor de filtro, para tratar los
residuos del azcar sinttico l7 . Las condiciones anaerobias tambin ayudan a la degradacin
de cianuro, cuya biodegradacin se trat anteriormente l2 .
Los reactores de lecho fluidizado tambin se utilizan ampliamente para los re siduos que se
degradan de forma aerobia, incluyendo la degradacin de aguas re siduales industriales que
contienen S-triazina. Se pueden separar hasta 18 g/1 de slidos voltiles en suspensin con las
S-triazinas como fuente nica de nitrgeno para los microorganismos que llevan a cabo la
degradacin. Se ha registrado una eliminacin mxima del 80 por ciento l9 . Tambin se ha
demostrado que los culti vos mezclados de microorganismos degradan la 3,4-dicloroanilina en
un reactor fluidizado de tres fases con un rendimiento del 95 por ciento 29 .
Aunque muchas reacciones degradadoras se producen cuando se emplean cul tivos en
suspensin, puede ser til el inmovilizar las clulas antes de empezar el tratamiento. La
ingeniera de bioprocesos ha demostrado que la inmovilizacin conduce a una mayor
estabilidad de la reaccin, evitando quizs la degradacin de los organismos biocatalizadores.
Una especie de la Arthrobacter (NCIB 11075) inmovilizada cataliza ei paso que limita la
velocidad de degradacin del plomo trimetilo en plomo dialquilo 30 . Se han tratado aguas
contaminadas subte rrneas durante ms de 90 das, con un caudal de flujo de 300 1/dia,
utilizando un reactor de lecho con clulas inmovilizadas 46 . Tambin se ha informado de que las
clulas inmovilizadas del hongo Phanerochaete chrysosporium degradan el pentaclorofenol 23 .
Aunque no son nuevos, algunos usos bastante innovadores de los mtodos tra dicionales de
degradacin, como el compostaje o el tratamiento terrestre, se estn mostrando muy tiles para
la degradacin de los residuos peligrosos. Se pueden lograr mejoras en el rendimiento de estos
mtodos mediante un perfeccionamiento continuo. El compostaje se ha utilizado para
descontaminar fangos que contenan el explosivo trinitrotolueno (TNT), reduciendo el peligro
de frma notable. Los datos de un estudio a gran escala en Oregn indican que el compostaje
puede ser entre un 50 y un 67 por ciento ms barato que la incineracin 20 .
321
Procesos reglamentarios
Se han producido unos cambios importantes en el marco reglamentario de los pro cesos de
biotratamiento; muchos de estos cambios se han producido a nivel fede ral, y Giamporcaro los
describe en el Captulo 6. Estos cambios han dado lugar al desarrollo de nuevas tcnicas y a
una mayor aplicacin de los mtodos existentes en los trabajos de campo. La aceptacin de la
bioingeniera desde el mbito fede ral ha posibilitado el que se preste una mayor atencin a la
biodegradacin. La presin de esta atencin y los costes asociados a los mtodos fsicoqumicos son fuerzas motrices que impulsan el desarrollo de un mayor inters hacia los
proyec tos de biotratamiento.
Al mismo tiempo, la importancia de la influencia de las normativas estatales y locales
sobre el estado actual y las posibilidades futuras de la biorrecuperacin es cada vez ms
evidente. Desgraciadamente, las distintas estructuras reglamentarias estatales y locales han
frenado el desarrollo de la industria, ya que las empresas deben estar preparadas para cumplir
multitud de normativas ambientales. En algu nos casos, las normas federales pueden ayudar al
desarrollo sencillamente porque obligan a la limpieza de los residuos. En otros casos, se
mezclan o son negativas. En muchos estados los derechos de propiedad no se pueden
transmitir de forma legal si no se cubren las responsabilidades respecto a la contaminacin 5J ,
lo que obliga a que la empresa limpiadora ofrezca una serie de garantas sobre el xito del
tratamiento esto, a su vez, requiere que los ingenieros y bilogos unan sus esfuerzos para
desarrollar tecnologas a gran escala que sean factibles, rentables y contrastadas. Como las
alternativas al biotratamiento incineracin, enterra miento, o vertido al mar ya no tienen
el visto bueno del pblico y son costosas, el biotratamiento se sita en el primer lugar como
mtodo preferente de recupera cin de zonas contaminadas en el futuro.
1.
2.
3.
4.
5.
Abramowicz, D. A. 1989. Biodgradation of PCB contaminated soil using recombinant DNA bacteria. In: Proc. A&WMA/EPA Symp., Cincinnati, OH, Feb. 1989, pp.
301-312.
Alexander, M., R. J. Wagenet, P. C. Baveye, J. T. Gannon, U. Mingelgrin, and Y.
Tan. 1991. Movement of bacteria through soil and aquifer sand. U.S. Environmental
Pro- tection Agency, U.S. EPA 600/s2-91/010, June 1991, Washington, D.C.
Applied Biotreatment Association, 1989. Compendium of Biotreatment Applications.
ABTA, Washington, D.C.
Baehr, A. L., J. M. Fischer, M. A. Lahvis, R. J. Baker, and N. P. Smith. 1991.
Method for estimating rates of microbial degradation of hydrocarbons based on gas
transpon in the unsaturated zone at a gasoline-spill site in Galloway Township, New
Jersey, ln: The Proceedings of the U.S. Geological Survey Toxic Substance
Hydrology Techni- cal Meeting, Monterey, CA, March 1991, pp. 129-141.
Baker, A. J. M. 1981. Accumulators and excluders-Strategies in the response
ofplants to heavy metis. J. Plant. Nutr. 3:643-654.
322
6.
Bhamidimarri, S. M. R., D. Catt, and C. Mercer. 1990. Semi-continuous biotreatment

of a landfill leachate containing phenoxy herbicida chemicals. ]n: CHEMECA 90.
Pro cessing Pacific Resources. I8th Austratasian Chemical Engineering Conference,
Auc- kland, New Zealand, Vol. II, pp. 1039-1044.
7. Bioremediation Report. 1991. Waste Stream Technology Not Slowed by Winter. Dec.
1991, 1:1-2. Cognis, Santa Rosa, CA 95407.
8. Canter, L., L. E. Streebin, M. C. Arquiaga, F. E. Carranza, D. E. Miller, and B. H.
Wilson. 1990. Innovative processes for reclamation of contaminated subsurface environments. U.S. Environmental Protection Agency, U.S. EPA 600/S2-90/017, July
1990, Washington, D.C.
9. DePalma, A. 1992. GX Biosystems targets various markets with its suicide gene
technology. Genet. Eng. News, 12:13, 27.
10. Dwyer, D. F. 1992. Evaluation ofGEMs for environmental bioremediation in microcosms and in situ (abstract). Biosafety ResuJts of Field Tests with Genetical
Modiiled Organisms, pp. 141-149, Publisher: Biologische Bundesenstalt Fur Land
und Forstwir- tschast, Braunschweig, Germany.
11. Dwyer, D. F., F. Rojo, and K. N. Timmis. 1988. Fate and behavior in an activated
sludge microcosm of a genetically-engineered microorganism designed to degrade
un- substituted aromatic compounds. Presented at First International Conferences on
the Release of Genetically-Engineered Microorganisms (REGEM I), In: The Release
of Genetically-Engineered Micro-Organisms. (ed.: M. Sussman, C. H. Collins, A.
Skin- ner, D, E. Stewart-Tull), pp. 77-88, Academic Press, London.
12. Falln, R. D D. A. Cooper, R. Speece, and M. Henson. 1991. Anaerobic biodegradation of cyanide under methanogenic conditions. Appl. Environ Microbial 57:16561662.
'
13. Fulthorpe, R. R. and R. C. Wyndham. 1991. Transferand expression of the catabolie
plasmid pBRC60 in wild bacteria recipients in a freshwaterecosystem. Appl. Environ.
Microbtol. 57:1546-1553. Gealt, M. A. 1988. Recombinant DNA plasmid transmission to indigenous organisms during waste treatment. Water Sci. Technol 20:179-184.
14. Gealt, M. A. 1992. Gene transfer in waste treatment. In: Microbial Ecology: Princi pies, Methods, and Applications (ed.: M. A. Levin, R. J. Seidler, and M. Rogul).
McGraw-Hill, New York, pp. 327-343.
15. Gealt, M. A., M. Chai, K. Alpert, and J. Boyer. 1985. Transfer of plasmids pBR322
and pBR325 from laboratory strains of Escherichia coli to bacteria indigenous to the
waste disposal system. Appl. Environ. Microbio/. 49:836-841.
16. Glaser, V. 1992. Strong growth in biotechnology market sectors predicted for 1991 2002. Genet. Eng. News. 12:3, 6-7.
17. Guiot, S. R., M. F. Podruzny, and D. D. McLean. 1989, Assessment ofmacroenergetic
parameters for an anaerobic upflow biomass bed and fllter reactor. Biolechnol
Bioens 34:1277-1288.
18. Henschke, R, B., and R. J. Schmidt. 1990. Plasmid mobilization from genetically
engineered bacteria to members of the indigenous soil microflora in situ. Curr
Microbial 20:105-110.
19. Hogrefe, W., H. Grossenbacher, A. M. Cook, and R. Hutter. 1990. Biotreatment of striazine-containing wastewater in a fluidized bed reactor. Biotechnol Bioena 28:15771581.
20. Hom, S. S. M. 1992. Composting explosivas now competitive. Bioremediation Reo
KDl-
21. Homer, F. A., R. S. Morrison, R. R. Brooks, J. Clemens, and R.
J.
Reeves. Compara-
323
tive studies of nickel, cobalt and copper uptake by nickel hyperaccumulators of the
genus Alyssum. In press.
22. Jahnke, M., T. El-Banna, R. Klintworth, and G. Aulng. 1990. Mineralizaron of orthanilic acid is a plasmid-associated trait in Alcaligenes sp. O-l.y Gen Microbiol
136:2241-2249.
23. Kellogg, S. T., D. K, Chatteijee, and A. M. Chakrabarty. 1981. Plasmid-assisted
mole cular breeding: New technique for enhanced biodegradation of persistent toxic
chemical. Science 214:1133-1135.
24. Khalil, T. and M. A. Gealt. 1987. Effect ofexogenous compounds on the
mobilization of plasmids in synthetic wastewater. Can. J. of Mierobiol, 33:733-737.
25. King, J. M. H., P. M. DiGrazia, B. Applegate, R. Buriage, J. Sanseverino, P. Dunbar,
F. Larimer, and G. S. Sayler. 1990. Rapid and sensitive biotuminescent reprter technology for naphthalene exposure and biodegradation. Science 249:778-781.
26. Knight, I. T., W. E. Holben, J. M. Tiedje, and R. R. Colwell. 1992. Nucleic acid
hybridization techniques for detection, Identification, and enumeration of microorganisms in the environment. In: Microbial Ecology: Principies, Methods, and
Appli cations (ed.: M. A. Levin, R. J. Seidler, and M. Rogul). McGraw-Hill, New
York, pp. 65-91.
27. Lenski, R. E. 1991. Quantifying fitness and gene stability in microorganisms. In:
As- sessing Ecological Risks of Biotechnology (ed.: L. Ginzburg). Butterworth,
Boston, pp. 173-190.
28. Lin, J-E., H. Y, Wang, and R. F. Hickey. 1991. Use of coimmobilized biological systems to degrade toxic organic compounds .Biotechnol. Bioeng. 38:273-279.
29. Livingston, A. G. 1991, Biodegradation of 3,4-dichloroaniine in a fluidzed
bedt>io- reactor and a steady-state biofilm kinetic model. Biotechnol. Bioeng.
38:260-272.
30. Macaskie, L. E. and A. C. R, Dean. 1990. Trimethyl lead degradation by free and
immobilized cells of an Arthrobacter species and by the wood decay fungus
Phaeolus schweintzii . Appl. Microbiol. Biotechnol. 33:81-87.
31. Madsen, E. L. 1991. Determining in situ biodegradation. Environ. Sci. Technoi.
25:1663 1673.
32. Mancini, P S. Fertels, D. R. Nave, and M. A. Gealt. 1987. Mobilization of plasmid
pHSV106 from Escherichia coli in a laboratory waste treatment facility. Appl. Environ. Microbiol. 53:665-671,
33. Mayer, W. 1991. Company profile; Waste stream technology not slowed by winter.
Bioremediation Report Premiere Issue 1-2, Cognis, Santa Rosa, CA.
34. Mayer, W, 1992. Boaugmentation: The bugs used do make a difference. Bioremediation Rep. 1:3-6. Cognis, Santa Rosa, CA,
35. McPherson, P, and M. A. Gealt. 1986. Isolation of indigenous wastewater bacterial
strains capable of mobilizing plasmid pBR325. Appl. Environ. Microbiol. 51:904-909.
36. Miller, R. V. 1992. Overview: Methods for the evatuation of genetic transport and
stability in the environment. In: Microbial Ecology: Principies, Methods, and Appli cations (ed.: M. A. Levin, R. J. Seidler, and M. Rogul). McGraw-Hill, New York, pp.
229-246.
37. Nakamura, Y., K. ltoh, N. Mikami, T. Matsuda, R. Kikuchi, M. Matsuo, H. Yamada,
and J. Miyamoto. 1991. A selective plating method to enumerase target microorga nisms in an environment. J. Gen. Appl. Microbiol. 37:85-92.
38. Neidle, E, L., M. K. Shapiro, and L. N. Omston. 1987. Cloning and expression in
Escherichia coli of Acinetobacter calcoaceticus genes for benzoate degradation.
J. Bacterio!. 169:5496-5503.
324
39. Office of Technology Assessment. 1988. New developments in Botechnology 4.

U.S. Investment in Botechnology. Office of Technology Assessment, Washing ton,
D.C.
40. Olson, B. H. 1991. Tracking and using genes in the environment. Environ Sci Technol. 25(4):604-610.
'
41. Omenn, G. and A. Hollaender (eds.). 1983. Genetic Control of Environmental
Pollu- tants. Plenum Press, New York.
42. Omenn, G. and A. Hollaender (eds.). 1989. Environmental Botechnology. Plenum
Press New York.
43. Omenn, G. S. and A. W. Bourquin. 1990. Risk assessment of biodegradation in

pollution control and cleanup. Adv. Appl. Biotechnol. Ser. 2:443-465, Gulf Pubco
Houston Texas.
44. Pettigrew, C. and G. S. Sayler. 1986. Application of DNA colony hybridization to

the rapid isolation of 4-chlorobiphenyl catabolic phenotypes. J. Microbiol. Methods
13.
45. Pierce, G. E. 1982. Diversity of microbial degradation and its implications in
genetic engineering. In: mpact of Applied Genetics in Pollution Control (ed.: C. F.
Kulpa, R. L. Irvine, and S. J. Sojka). University of Notre Dame, IN, pp. 20-25.
46. Portier, R. J., J. A. Nelson, J. C. Christianson, J. M. Wilkerson, R. C. Bost, and B.
P. Flynn. 1989. Biotreatment of dilute contaminated ground water using an
immobilized microorganism packed-bed reactor. Environ. Progr. 8:120-125.
47. Roberts, L. 1987. Discovering mcrobes with a taste for PCBS Science 237975-977.
'
48. Saye, D, J. and R. V. Millcr. T989. The aquatic environment: Consfderation of hori zontal gene transmission in a diversified habitat. In: Gene Transfer in the
Environment (ed.: S. B. Levy and R. V. Miller). McGraw-Hill, New York. pp. 223259.
49. Selvaratnam, S. and M. A. Gealt. 1992. Plasmid gene transfer in amended soil
Water Res. 26:39-43.
'
50. Shieh, W. K., C. T. Li, and S. J. Chen. 1985. Performance evaluation of anaerobic
fluidized bed system: III. Process kinetics./ Chem. Technol. Biotechnol., Biotechnol
35B:229-234.
51. Steffan, R. J. and R. M. Atlas. 1988. DNA amplification to enhance detection of
genetically engineered bacteria in natural environments. Appl. Environ Microbiol
54:2185-2191.
'
52. Suflita, J. M. and G. W. Sewell. 1991. Anaerobic biotransformation of contaminants
in the subsurface. Env. Res. Brief U.S. Environmental Protection Agency, U.S. EPA
600/ M-90/024, February, Washington, D.C.
53. Thayer, A. M. 1991. Bioremediation: Innovative technology for cleaning up
hazardous waste. Chem. Eng. News, Apr. 26,1991, pp. 23-42.
54. Veeramam, H. 1987. Fluidized bed systems for anaerobic biotechnology in waste
management. Chem. Age India 38:543-546.
55. Venterea, R. T. and S. Fogel. 1991. Cleaning the air with biofiltration. ABB J. 4:6-7.
56. Walia, S., A. Khan, and N. Rosenthal. 1990. Construction and applications of DNA
probes for the detection of polychlorinated biphenyl-degrading genotypes in toxic
or- ganc-contaminated soil environments. Appl. Environ. Microbiol. 56:254-259.
57. Weijers, C. A. G. M. and J. A. M,, de Bont. 1990. Enantioselective degradation of
1,2- epoxyalkanes by Nocardia HB. Enzyme Microbiol. Technol 13:306-308.
'
58. Wyatt, J. M. and S. J. Palmer. 1992. Biodegradation of nitriles and cyande. In: Biode-
325
gradation: Natural and Synthetic Materials (ed.: W, T. Betts). Springer Verlag, London, pp. 69-88.
59. Zeph, L. R., M. A. Onaga, and G. Stotzky. 1988, Transduction of Escherichia coli by
bacteriophage P1 in soil. Appl. Environ, Microbial. 54:1731-1737.
60. Zilinskas, R. A. and C. G. Lundin. 1992. Marine Biotechnology for the Developing
Countries. World Bank, Washington, D.C.
Indice
Accin correctora, 142, 147-154, 165,

166
Aceite mineral, 163
Acetona, 188
Acido 4-clorobenzoico, 46 Acido 2,4diclorobenzoico, 46 Acido 2, 4liclorofenoxiacetico (2, 4- D), 203, 222
cido oleico, 32, 285 Acta de Agua
Limpia, 144, 153, 154 Acta de Aire
Limpio, 268 Acta de Recuperacin y
Conservacin de Recursos (RCRA), 11,
142,
144, 257
Acta de Responsabilidad, 142, 154, 257
Acta Federal Sobre Pestes Agrcolas,
11, 142, 165, 166, 167 Acta de
Control de Sustancias Txi cas,
11, 142, 159 Adaptacin
microbiana, 2-12, 21-33, 50,
75, 87-90, 98, 99, 109, 119,
173-177, 203, 283, 292, 297299, 307
Adaptacin, 42, 51, 174, 202, 205
ADN polimerasa RCP, 59, 60 ADN
recombinante, 61, 201 ADN, 201,
316, 317
de doble hlice, 43, 47-50, 53, 54,
56-62, 123, 124, 161 de una hlice, 5662 Adsorcin, 68, 95, 96, 172, 258-260,
261. 263. 264. 265. 317
Adveccin, 126
Aeropuerto Internacional de Miami, 184
Agencia de Proteccin Ambiental (EPA,
EPA, U.S.A.), t, 141, 142, 249, 257, 269,
273, 274, 275 Aguas subterrneas
cuestiones reglamentarias, 145-147,
150-154, 156, 161 pH, 2, 3, 5, 7, 9, 12,
178 temperatura, 2, 3, 5, 7, 12 Aireacin
in situ, 28-29, 189 Aireadores de
superficie, 79, 80, 87 Alaska, 13, 32, 273,
274, 275-278,
280, 281, 283, 289, 293, 297, 304,
310 Alcalgenos A5, 203
faecalis, 216 sp 0-1, 316
Alcanos, 289, 290, 294 Alcohol,
188 Aldehido, 23, 268 Alemania,
12, 173, 181, 183, 184,
188, 268 Algas, 27, 87, 99, 109
Alheles, 315 Alifticos, 201
Alquilbencenos, 29, 31
Almacenamiento, 3-5, 9, 14, 25, 27,
72, 119, 142-154, 172, 180, 201,
230, 240
American Creosote Works, 149, 150, 156157
328
NDICE
Amianto, 177
Bioestimulacin, 161, 213, 242
6-amino-2-metl-4-nitrofenol, 228
Biologa molecular, 6, 41, 56-58, 60,
Amoco Cdiz, 32
62, 205, 207 Biomasa
Amonaco, 13, 33, 67, 101, 180, 213 biorreactores, 69-71, 75, 76, 88-90, 94216, 257, 282, 283, 299, 300 Amonio,
96,98-108,110,263,269 modelizacin, 117175, 216, 232, 300 cloruro de, 181
128, 132, 133 139
sulfato de, 179 Ampicilina, 44
tratamiento de aguas residuales,
Anlogos fluorinados, 44 Anilina, 10,
250,251,262 Biopelcula, 27, 9923
102, 124 Bioplume, 178, 180 biorreactor,
Animal and Plant Health Inspection
146, 258, 261-264, 320 aerobio, 26, 27, 69,
Service (APH1S), 166 Anxico, 94,
70, 78, 83, 89, 90,225,250,251,252,257
175, 251, 256, 257 Antibiticos, 43, 55
anaerobio, 26, 69, 70-74, 188, 251, 252,
Arizona, 212, 213, 218 Arrastre por
262
aire, 171, 179 Arsenio, 1, 237
de fangos activados, 27, 69, 72, 88,
Asociacin de Biotratamiento Aplica 89, 250-252, 257-259 de filtro perculador,
do, 165, 166 ATP, 119, 131, 177, 178
27, 46, 69,
Autolimitacin, 122, 129 _ _ _ _
148, 159, 164, 165 _ de microbios
Azotobacter, 6, 228
inmovilizados, 69, 74, - 76, 83, 148, 158,
164, 320 de pelcula fija, 27, 67, 69, 74 de
pelcula suspendida, 69, 73-74,
75, 189
no aerobio, 27, 69, 74, 81, 256
superficial, 69, 74, 75-76, 83, 171,
172, 179, 189 Biorrecuperacin in situ, 11, 12,
23,
143, 170, 172, 183, 177, 187, 188,
Bacteria acetognica, 71 Bacterias
190,
191,
226 Biorrecuperacin, 29, 226
hidrocarbonoclsticas, 173 Bacterias
Biotratabilidad,
180, 212, 216, 218,
que utilizan metano, 23 Balance de
219
masas, 92, 117, 118, 125 126, 260
Bioventilacin, 171, 185-187, 202,
Barrow, 32
203
Base Area de Hill, 185 Base Area de
Bioventilacin
in situ, 186 Boise, 242
Tyndall, 185 Benceno, 5, 13, 25, 28,
Bombear
y
tratar,
31, 176, 179, 190,
29, 31, 124,
267
175,180,181,203,260,262
5-Bromouracilo, 43 Bromuro de
Benzotico, 46, 47, 50, 190 Benzoato
etileno, 174 BTEX, 180, 181, 186
dioxigenasas, 21, 22, 24,
BTX, 25, 27, 175, 178, 186
161,201,213,216,222,223 Bifenilos
policlorados (PCBs), 2, 23,
60,163,177,203 Bioaumento, 21, 22,
24, 161, 201, 213, 216, 222, 223
Biodisco, 27
Biodiscos (RBCs), 100, 315
Biodisponibilidad, 11-12, 175, 314
329
NDICE
Butilbencil ftalato, 212, 213

Butoxietanol, 283
Cadmio, 177
California, 149, 180, 190,211
Caractersticas climatolgicas, 12
Carbono, 3, 12, 22, 29, 32, 46, 87,
105, 107, 170, 213, 217, 229, 238,
267
Carbono, fuentes de, 213, 217, 218,
229
Carga orgnica, 90, 98, 99, 100, 103,
106, 107, 109, 117
Catecol, 49
Celgene, 319
Centrifugado, 43, 105, 106 Ciangenos,
315 Cianuro, 1, 314, 3 15 Cianuro,
residuos de, 319 Ciclo de azufre, 5, 53,
97, 98, 200,
203, 235, 236, 279, 282
Cicloserina, 44
Cimeno, 44
Cintica, 102, 104, 117-122, 127-132,
174, 175,214, 217, 225, 238, 242,
320
4-Cloroanilina, 51
Clorobenzoato,
50
Clorobenzoato,
50, 51, 56
Clorocatecol,
176
4- Clorocatecol,
50 4-Cloro2-metilfenol, 190
Cloramfenicol, 55, 61, 189,
267, 268 Clorobenceno, 13,
51, 61, 189, 267
268
Clorobenzoato, 50-51, 56
Cloroorgnicos, 46 Cloruro de
metileno, 81, 102, 103, 187,263,
268,289 Cloruro de vinilo, 5, 205
Clostridium, 6 Cobalto, 315 Cobre, 1,
315 Cofactor, 119, 123
Columna de burbujas, 95 Combustible

de reactores, 319, 320 JP-4, 31, 180,
184, 185 JP-5, 29, 157 Cometabolismo,
7, 10, 22-24, 121,
131, 132, 189, 202 Cometabolito,
121, 122 Competencia biolgica, 222,
223, 231 Compostaje, 9, 10, 26, 27, 72,
199, 202, 203, 224, 225, 241, 320
Compuestos alifticos clorinados, 5,
14,21,26, 29, 30, 44, 60, 177,
179, 180, 181-186, 191, 212
Compuestos aromticos
clorinados,
11 1
Compuestos fenlicos, 188 Compuestos

heterocclicos, 24, 188, 201, 226, 319
Compuestos nitro-aromticos, 225-231
Compuestos orgnicos voltiles, 260,
268'
Conductividad, 172, 180
Conroe, 174
Consideraciones reglamentarias factores
biolgicos, 46, 51, 52, 54 57, 176, 177,
186, 200-202,
204, 207 legales, 211,273, 275,
303, 313,
314, 315, 320 rutas biolgicas, 46,
50, 52, 54-57, 61, 200-202, 204
sistemas biolgicos, 47, 54-57,
61,
176, 177, 187, 188, 200-202,
204
Consorcio, 5, 6, 10, 11, 23, 24, 71, 159,
176-178, 202, 204, 228, 312
314
Consorcios, 6, 10, 70, 89, 103, 109,
178, 188, 229, 261, 269, 315, 316
Constante de Newton, 77
Contaminantes de prioridad, 68, 71
Cooxidacin, 10, 22 Corbett, 99
Corporacin Nacional de Aplicacin de
Tecnologas Ambientales, 157
330
Coste, 9, 23, 27, 314, 315

comparaciones, 2, 3, 11, 143, 239 242
estimaciones, 212, 219
investigacin y desarrollo, 43, 59, 207208
tratamiento convencional, 110,
249, 256,318 Cotransformacin, 22
Creosota, 5, 25, 174, 186-188, 191
Cresol, 2, 62, 174, 228 Criseno, 297
Cromo, 177, 257
Cromotografa de gas, 163, 164, 289,
290 CSTR, 92 Cultivo, 26 Customblen,
33 Chakrabarty, 201 Choque txico,
203
DCE, 5, 23, 189, 190 DDT, 23, 24

Decantador, 75, 89, 90, 91, 92-94, 96
98, 100, 101, 104, 105, 250, 258,
262
Degradacin cometablica, 23, 24,
131, 132, 204, 205 Demanda
biolgica de oxgeno (DBO), 27, 68,
250 Demanda qumica de oxgeno
(DQO), 68
Depsitos de almacenamiento subte rrneos, 25, 142, 144, 153, 159,
201
Descomposicin de petrleo, 201, 207,
276, 280, 283, 298, 300, 303, 304,
305
Desenlazador, 134, 135
Desgasificacin al vaco, 105
Deshalogenacin reductora, 24, 122,
190
Desnitrificacin, 71, 94, 181, 183, 257
Destino ambiental, 289
NDICE
3,
4-DicIoroanilna, 10, 23, 320

Diclorobenceno, 62
Diclorobifenilos, 62
Dicloroetileno, 5, 23, 189
Diclorometano, 23, 260
Difusor de aire, 28, 83
Difusores, 83, 86, 87, 90
Digestin
aerobia, 3-5, 97, 101, 102, 110,
261, 262
anaerobia, 3-5, 102, 104, 108, 110,
261, 262 Digestores
aerobios, 3, 4,
101 anaerobios, 3, 4
Dimetianilina, 188
4-dinitrofenol, 228
2, 4-dinitrotolueno, 228
Dinoseb, 7, 203, 221, 227232, 236 240, 242
Dixido de carbono, 70, 89, 95, 101,
102, 105, 110, 227, 250
Dioxina, 3, 149, 150
Disk Island, 275,
299, 303 Di urea
isobutiraldehdo, 33
DNOC, 228
Donante de electrones 120, 124, 125,
128
DQO, 68, 105-107 Duplicaciones, 5152 dUTPasa, 59
East Bay, 180 Edificio de contencin,

153 Efluente, calidad de, 250
Electrodilisis, 68 Elf Aquitaine, 285
Ellensberg, 230, 231, 238 Emisiones
ambientales, 55, 56 Emparejamiento,
48, 51, 53 Endrin, 259, 260
Enriquecimiento, 44, 177, 202, 203,
229, 231, 276, 278, 303, 304, 305
Ensayos geotcnicos, 172
NDICE
Envirogen, 41, 319 Environmental

Technology Applica tions, 170, 188
Envirosafe, 240 Enzimas inductoras, 10
Escala piloto, 260 Escherichia coli, 47,
55 Especies de plantas verdes, 315
Especificidad, 23, 42, 46, 50, 55, 57,
59,316
Especificidad de sustrato, 46, 50, 57,
59, 60, 316 Espectrometra inica
de masas, 296 Espesante, 96
Esponjamiento, 26, 72, 90, 93, 96, 98,
99, 225
Estabilizacin, 86, 87, 221, 256, 262
Estabilizante, 28, 261, 283, 284
Estacin Area de Guardacostas de
Traverse, 180 Estado provisional, 147149, 154 Estudio de factibilidad, 155,
188 Estudios de tratabilidad, 154, 155,
171, 176-178, 187, 188, 222 Etano,
189 Etanos, 201 Etenos, 201
4- etilbenzoato, 47-57 Etil
benceno, 12-13, 28, 180, 184
Evacuacin terrestre, normas
de, 149 Exenciones, 150, 152,
303 Exenciones nacionales,
151, 152, 167 Exxon, 2, 14,
33, 211, 273, 274, 282, 283,
285, 286, 299 Exxon Vaidez,
2, 13, 33, 211, 273, 274 Fago,
57, 59, 61
331
Fangos de aguas residuales, 223,227,278

Fenol, 9, 46, 54, 62, 124, 174, 190, 206,
265, 267 Fenotipo, 201 Fenoxi, 319
Fertilizante, 30, 31, 32, 108, 280-284,
297-300
Fertilizante oleoflico, 31, 32, 273, 274285, 287 Fijacin, 205, 219 Filtracin de
arena, 68 Filtro percolador, 4 Fitano,
290, 292, 293-297, 302 Flotacin, 68
5- fIuorosalicilato,
44 Fluoranteno, 5
Formamido, 315
Fosfato, 31-33, 103, 175, 180, 222, 229232, 282-284, 300, 301 Fsforo, 7, 13,
21, 29, 30, 32, 70, 276, 280-285, 297
Fsforo total, 285 Francia, 32, 284
Ftalato, 211-216, 218, 263 Fuel, 30
Fuerzas areas, 185, 319
Fusiones, 51
GAC, 9, 262-264, 268
Gasleo, 28, 283, 317
Gasolina, 5, 10, 2830, 173, 179, 180,
184, 185,242 Genes suicidas,
206 Geoqumica, 172,
173, 175, 177 Glucosa,
70, 229 Guardacostas,
29, 180, 181, 183
Halobenzoatos, 50
Herbicidas, 5, 6, 227, 230
Hidratasa de cianuro, 315
Hidrocarburos
alifticos, 5, 14, 22, 29, 30, 186, 319
aromticos, 5, 14, 22, 24-26, 29, 30.
44, 177, 186, 318, 319
Fangos activados
climatizacin de, 27, 71-73, 76, 83,
88-90, 92, 101, 104, 110, 203,
259
proceso de, 27, 71-74, 76, 83, 88 90,
92-101, 104, 108, 110, 127, 133,
253, 257, 259, 262
332
INDICE
Hidrocarburos (cont.)
de petrleo, 5, 14, 22, 24, 30, 174,

179-185, 202, 212, 273-300, 303
no petrolferos, 4, 14, 22
Hidrocarburos aromticos policclicos,
26, 296
Hidrocarburos clorinados, 22, 24
Hidrocarburos halogenados, 23, 24,
31, 44, 48, 50, 189, 201, 226, 319
Hidrocarburos poliaromticos, 5, 14,
177, 186
Hidrocarburos ramificados, 287, 289,
296
Hidrologa del lugar, 12
Hidroxibenzoatos, 44 Hidroxilamina,
43 Hierro oleofilico, 31, 32 Historias
de casos, 211 Holanda, 184, 268
Homestake Chemical Company, 315
Homogeneizacin, 68 Hongo camc de
gallina, 184, 229 Hopano, 295, 299
HPAs cancergenas, 186-188
Humedad, 7, 9, 12-13,21,26, 171, 184186, 214, 223, 225, 268 Hmicos, 186
Hyphomicrobium, 102
Imperial Chemical Industries, 315

Implantacin en el campo, 206, 214,
217
Inactivacin insercional, 54
Incineracin, 15, 67, 143, 149-152,
164, 179, 201, 221, 227, 239, 242, 262
Inductor, 10, 46, 47, 61, 123, 189
Inductores de dioxigenasa, 189
Informe de decisin (IDD), 156
Ingeniera gentica, 15, 47, 48, 50, 52,
56, 162, 201, 204-207, 316, 317 Inhibicin de
sulfato, 215 Inhibidores, 122, 129, 131,
132, 175
Inipol, 32, 33, 284-287, 290, 294, 296,

298,310
Inoculacin microbiana, 2, 5, 7, 9, 12,
32, 75, 92, 207, 309, 310
Inquietud del pblico, 3,
315, 316 Insecticidas, 190
Instalacin de tratamiento completa mente
cerrada, 147 Instalacin de tratamiento
mvil, 241 Intergenrico, 161
Introduccin secuencial, 313 Inventario
de sustancias qumicas, 160 Inversiones,
51
Investigacin de recuperacin, 156, 212
Kanamicina, 55 Karlsruhe, Alemania,
186 Keystone, 12, 13, 15
LacZ, 55 Laguna
aireada, 27, 87, 110 facultativa, 27, 88,
109 sistemas de, 27, 88, 102, 103, 110
Lagunas
aerobias, 33, 87 anaerobias,
70, 102, 103 de estabilizacin,
70, 87 facultativas, 70, 103,
109 Larvas de insectos, 99
Laurilfosfato, 32, 284 Lecitina
de soja, 32, 283, 284 Lechos
bacterianos, 99 Ligninas, 186
Lista de Prioridades Nacionales (NPL),
142 Lixiviacin, 3, 4, 148, 179, 289, 296
Long Island, 180
M13, 57, 59
Magnesio, 9, 25, 31, 68, 92, 103, 105,
110, 134, 135, 181-185, 203, 231,
262,315
INDICE
333
Mancha contaminada, 31, 173, 181,

Modificacin microbiana, 2, 5, 7, 9 185, 186, 188-190 Marco Coordinado
13,31,32, 48,75, 76, 201,207 Modulador,
para la Regulacin de la
121, 123 Moffit Field (base area), 190
Biotecnologa, 161 Marina, 25,
Monod, 92, 128, 129, 130, 131
26, 29, 31, 33, 174, 258, 283,
Monofluoroacetato, 316
314, 315, 316 Material de
Monooxigenasa, 23, 61, 121, 122,
relleno, 74, 75, 80, 106
123, 190
Mecanismos de destino, 258
Morrison Knudsen Company, 242
Mercurio, 152, 177, 257
Movilizacin metales, 48, 177 MTDD,
Metabolismo endgeno, 127
151, 152, 156, 167 Municiones, 27, 204,
Metales pesados, 53, 54, 258,
205 Mutagnesis, 6, 42-44, 46, 47, 51,
260,
56,
315
57, 60, 200, 201,204
Metano, 14, 23, 29, 70, 71, 103-110,
Mutgenos, 41-44, 46,
122, 181-190, 206, 256, 262, 263
54, 204
Metano monooxigenasa, 23,
122, 189, 190
Metanognicos, 23, 24, 71, 188, 190,
256, 262, 315 Metangenos, 24, 71,
N-C18/fitano, relaciones de, 290, 295
103, 108, 229 Metanosulfonato
297
de etilo, 43 Methylococcus
Naftaleno, 25, 51, 61, 62, 188, 201,
capsulatus, 23
______317__________
metilsalieilato, 50
NET (Normas de Evacuacin Terres tre),
Metil metanosulfonato, 43 Mezclas de
151, 153 Neutralizacin, 68 Nquel, 315
materiales txicos, 316 Microbios
Nitrato, 24-31, 71, 103, 175, 178, 181,
autctonos, 10 Microcosmos, 287, 304183, 188, 216, 226-232, 242, 256,
308 Microorganismos
257, 282, 283, 300 Nitrato de
naturales, 3, 10, 21-33, 41-46, 48 sodio, 103, 181, 183
56,59, 60, 62,87, 119, 120, 159-174,
Nitrificacin, 94, 257
200, 305-306 psicroflicos, 3, 87, 317
Nitrobenceno, 260
psicrotolerantes, 3, 87, 317
4- nitrofenol, 228 Nitrgeno
termofilicos, 3, 87, 89, 317
ambiente limitador de nitrgeno, 7,
termotolerantes, 3, 87, 317
29, 33, 103, 213-216, 222,
Microorganismos nuevos, 161, 162 163
276
Michigan, 29, 180, 181 Minerales, 12,
como nutriente, 13, 24, 20, 276 285
13, 160 Mineralizacin, 11, 13-15, 24,
en reactores, 68-71, 175 receptor de
42, 87, 174, 176, 177, 200-202, 227,
electrones, 181, 183 Nitrgeno
268, 278, 279, 303, 314, 316 MMGs
oleoflico, 31, 32, 283-285
(Microorganismos Modifica dos
4- nitroquinolena, 43 Nocardia sp.
Genticamente), 2, 56, 223, 315, 316,
HB 10, 315, 316 Norhopano,
318, 319 Modelos, 117, 119, 259; 260,
296,
318, 319
334
NDICE
Normas, 9, 12, 13, 57, 144, 149-156,

transferencia de, 7, 26, 27, 33, 69.
167,241,242,295 estatales, 241, 242,
70, 77-88, 93-95, 121, 122, 177-183,
314, 315, 320 federales, 11, 12, 142,
229, 251, 252, 280 Oxgeno
144, 146
complementario, 24, 215
150, 152, 153, 154, 163-167, 223,
227, 241, 242, 268, 314,
315, 320 Normas de mezcla, 145
PCBs, 14, 62, 163, 164, 165, 177
Notificacin de comienzo,
Penicilina, 43, 44 Pensacola (Florida),
160 Nucleacin de hielo, 205
188 Pensilvania, 1, 169, 179, 199, 313
Nueva York, 180, 283 Nuevas
Pentaclorofenol (PCP), 5, 187, 188,
sustancias qumicas, 159-161 200, 225, 320
Nmeros microbianos, 2, 12,
Perodo evolutivo unitario (PEU), 205
21, 33, 71,75,92,98, 109, 119,
Permiso de Investigacin, Desarrollo y
Demostracin (ID&D), 153 Permisos
203,
I&D, 164-165 Perxido de hidrgeno,
298,'309 Nutricin
13, 28, 29,
de acufero, 30 Nutriente
178, 180, 181, 183, 226 Pesticidas,
aumento de, 14, 21, 33, 280-283
22, 24, 60, 145, 158, 159,
control de niveles de, 9, 68, 88,
201, 205, 227
172
Petrleo, 2, 5, 21, 25-33, 61, 68, 142,
disponibilidad de, 177-190, 222 153, 157, 163, 164, 174, 179-185,
226
191, 202, 211, 212, 213, 219, 223,
tratamiento terrestre con, 7
273-310
Petrleo crudo, 26, 29, 32, 61, 200, 211,
276, 283, 284, 287, 296, 297 pH, 7, 9,
Octano, 201 Octil fosfato, 31, 32
12, 30, 68, 70, 178, 214,
Oficina de Evaluacin Tecnolgica,
222, 231, 236-238, 242, 316
33,158
Phanerochaete chrysosporium , 190,
Oficina de Investigacin y Desarrollo,
228, 320 Plantas de coque, 186, 187,
158, 274, 275, 304 Opern, 52
188 Plantas resistentes a
Organismos autotrficos, 87 Organismos
herbicidas, 205 Plsmido, 6, 46,
modificados, 6, 202 Organismos
59, 61, 62, 123, 124, 201
modificados genticamen te (vase
Plsmido ayudante, 47 Plsmido
OMGs)
pUC, 61 Plsmidos catablicos, 174,
Osmosis inversa, 68 Oxidado, 22, 101,
211 Playas, 5, 33, 273, 274, 276, 280102, 127, 132, 172,
283, 286, 288, 291, 294, 299, 300, 310
173, 175, 216, 228 Oxigenasa, 25,
Polietileno, 242
298 Oxgeno
Polietileno de alta densidad, 242
solubilidad de, 7, 12-14, 25, 28, 69,
Polimerizacin, 14, 229, 232
70, 79, 80, 85-88, 93-95, 226, 229, 280
Polmeros, 14 Poliuretanos, 227
lquido, 7, 12-14,-28, 71, 99, 226
Porosidad de lecho, 82
NDICE
Potasio, 1, 175
Potencia, 77-78, 83, 84, 88, 90, 94,
95, 102, 103, 109, 127 Prall's
Island, 283 Prevencin de
contaminacin, 141, 143,
157 Pristano, 290 Proceso de
contacto, 104 Proceso semicontinuo, 74 Programa de
aplicacin in situ, 158
Programa de investigacin
de los derrames de petrleo,
306 Promotor Pm, 47
Promotores, 54, 61 Propano,
190
Protena GEF, 315, 316, 318
Protocolos
de biorrecuperacin, 157, 303, 305,
306
de seguridad, 204, 205, 206, 276,
303, 305, 306 Protonoforos, 131
Prudhoe Bay, 32, 277, 285, 288, 291,
296, 297 Pseudomonad, 6, 53, 190, 229
Pseudomonas
BI3, 6, 50-51, 56, 201 cepacia, 6, 9
fluorescens, 6, 9, 10 G4, 6
LB400, 6, 9 P. cepacia G4, 189 p51,
6
pulida, 6, 9, 44, 50, 51, 62 sp., 6, 10,

53,201,205,228,316 stutzeri, 188
Rabia, 205
Radiacin, 42, 43, 46, 107 Reaccin en
cadena polimerasa (RCP), 59, 316
Reactores, 76-109, 270, 319
aerobios, 26, 82-86, 93, 102, 254
agitados, 77, 82-86
335
aireados en superficie, 9,75-76,86,87

anaerobios, 82-86, 108, 251, 252,
256, 265 anaerobios/aerobios,
111-112 Bayer tower, 24, 8386 BIOHCOH, 83-86, 95
continuos, 83-86, 232-238 de
aire ascendente, 83-86 de
biodiscos, 9, 69-74, 76, 85 de
chorro, 83-86, 157 de chorro
zambullidor, 83-86 de fangos
activos, 83-86, 93, 251, 252,
256 de flujo pistn, 74, 83-86
de lechada, 9, 97, 111, 112,
225, 232-238 de lecho
bacteriano, 9, 76 de lecho
fluidizado, 76, 83-86 de
lecho relleno, 83-86 de
mezcla completa, 9, 74, 88,
90, 97, 98, 232-242 de pozo
profundo, 83-86 encerrado,
83-86 secuenciales
discontinuos, 9, 74,
97, 98
Recalcitrante, 21, 23, 50,62, 71,90, 177,
186, 201-205, 221-228, 231, 242
Receptor de electrones, 13,
29, 71,
120, 128, 171, 175, 178, 181, 183,
229, 230 Recirculacin, 74, 75, 92, 94
Redox, 21, 25, 176-178, 188, 222,
229, 231,232, 235-238, 242
Reilly, William, 2, 143, 158
Relaciones alcanos, 289
Rendimiento, 27, 33, 156158, 164,
165, 166, 200, 201, 278, 286-289,
295, 303, 308, 317 Residuos, 27, 9, 15, 21, 170, 261 de
pesticidas, 227-229, 239 lista
de California, 149 normas, 144147, 149-153, 161, 164
organismos modificados, 205,
206 tratamiento convencional,
170, 177,
201, 249-253, 256, 264-268
336
NDICE
Residuos costeros contaminados con

petrleo, 10, 26 Residuos listados,
144-146 Residuos slidos, 72, 144146,148,
149, 152, 153, 164, 251, 252
Respiracin de nitrato, 188
Respuesta a dosis, 299, 303,
304 Rhizobium, 205 Riesgo
no razonable, 159, 162 Ruta
clorocatecol, 50
sedimentacin, 68, 75, 88, 89, 93,

96, 103, 107, 250 St,
Louis, 188
Streptomyces, 43
Subsuperfcie, 12, 24, 33, 171, 172 180,
190, 191, 387, 299, 319 Subtilisina, 57,
59, 319 Succinato, 46 Suelo
composicin, 1-3, 170-172, 179,
180, 181-188, 221-223, 225 233,
315-317 fertilizacin, 1-3, 2433, 72, 170 172, 212-216, 235242 lechada, 1-3, 10, 27, 30,
170-172, 181-188, 221-223,
S-triazinas, 320
225-233, 235-242
Salicilato, 44, 201
normativas de limpieza, 143, 146,
SARA, 156
151, 152, 153, 55, 156, 161,
Secuencias de insercin, 55
164, 167
Sedimentacin, 68, 96, 97-98, 103,
tipo, 1-3, 10, 12, 31, 72, 170-172,
105, 250 Segundo Tercio, 149, 150
181-188, 212-216, 221-223
Seguridad, 4, 7, 11, 206, 233, 241,
tratamiento, 1-12, 24, 33, 72,
242, 274, 275, 314, 215, 316
156, 161, 164, 170-172, 183Seleccin, 4, 7, 13, 42, 50, 53-55, 59,
188, 212-216, 221-223
174, 180, 181, 200-206, 239, 261
ventilacin, 1-3, 170-172, 181 Seleccin gentica, 4, 204
188
Selenio, 257 Sembra, 21
Suelo y escombros contaminados, 151,
Separador de fangos, 89 Sierra
152, 156, 167 Sulfuro de hierro, 233
Chemical Company, 223, 227,
Superfondo, i, 142, 149-166, 188,
281, 282 Simulacin,
257, 263, 265 Supervisin, 7, 13, 29, 30, 148,
205, 259, 279
153,
Sntesis letal, 44
Sistema Nacional de Permisos para el 172, 173, 180, 181, 185, 186, 226, 237, 241,
242, 316-319 Sustrato primario, 120Vertido y Eliminacin (NPDES),
122, 129, 132 136
144
Sustrato secundario, 117, 120-121,
Sistemas discontinuos, 72 Sistemas
125, 126, 129, 131, 132-137
mezclados, 90, 108, 109 Sistemas
Sustratos secundarios de baja concen microbianos, evolucin de, 2-12, 21tracin, 121
32, 49, 87-90, 98, 99, 109, 201, 203,
207,213, 308 Snug Harbor, 275, 281,
287 Sobrecarga hidrulica, 71 Slidos
en suspensin, 67, 83, 102, 103,
107, 124, 250
flotacin, 67,
103, 107
Tasa de oxigenacin, 86 Tasa de
respiracin, 92
INDICE
337
Tcnicas convencionales, 68, 97, 98,

tn 4655, 51-56 tn5271, 51, 56
100, 142, 151,201,202, 239, 250, 256- tn 5280, 51, 56 Tratamiento, 2, 4, 9, 13,
261 Tecnologa de reactores, 9
15, 22-33, 43,
Tecnologas innovadoras, 150,
44, 54, 67-77, 80-82, 85-89, 95 103,
156, 157, 159 Tecnologas
107-111, 118, 127, 142-159,
nuevas, 158 Tejas, 174, 239
163-166 Tratamiento acuoso,
Temperatura, 7, 12, 27, 53, 70, 72, 87
226 Tratamiento alternativo,
90, 100-104, 08, 109, 177, 180,
149, 150, 156-157
181, 213-218, 222-226, 232, 306,
Tratamiento biolgico, 3, 4, 67, 68,
308, 315-317 Tendencias, 276,
70, 87, 200, 221, 225, 250-253,
313 Tetracloroetileno, 5, 24, 190
258, 260, 265, 269 Tratamiento de
Tetracloruro de carbono, 13, 24,
aguas residuales, 27, 68-74, 76,
190 Tiempo, 87, 95, 104, 108,
80-82, 85-88, 96, 98,
128, 134 137, 176 Tiempo de
103, 107, 108, 109, 148, 163, 164,
contacto, 7 Tiempo de mezcla,
200, 203, 225, 249-252, 261-268
69 Tiempo de retencin, 70, 71,
Tratamiento del terreno, 30, 148
75, 92, 94,
Tratamiento in situ, 10, 15, 164,
98,102,103,259,262,263,265,268
172, 188,226,242 Tratamiento
TNT, 27, 190, 225, 227-229,
primario, 68, 101, 102,
241, 242, 320 TOL
108,109,250,251 Tratamiento
genes, 50
secundario, 68, 15f, 250, 256,
plsmido, 6, 47, 51, 54, 56
261, 267 Tratamiento terciario,
ruta, 47, 50
68 Tratamiento terrestre, 4, 7,
sistema, 46, 47, 49, 50, 56 Toluato 1,
15, 199,
2-doxigenasa, 56 Tolueno, 5, 6, 28, 54,
203, 223, 225, 238, 242, 320
61, 62, 175, 181,213-218, 222-226,
Triclorobenceno, 203
307,310, 315-317 TPH, 186
Tricloroetileno, 5, 23, 54, 151,
Transferencia de genes, 60, 316
190,
Transformacin, 6, 22, 110, 118, 121
205, 259, 319
124, 126, 128, 131-133, 176, 177,
2, 4, 6-Trinitrotolueno, 190,
202, 222, 228, 233 Transporte,
225 Trinitrotolueno
3, 7, 12, 124, 131, 132,
(vase TNT)
165, 166, 167, 180, 181, 202, 226,
Turbinas de discos, 77 Tyvek, 234
239, 269, 300, 303,317
Transposasa, 55 Transposn, 43,
Unidad de gestin de residuos slidos,
51 Tn5, 51, 56 tn 501, 51, 56 tn
149
1721, 51-56
Uracil glicosidasa, 59 Urea, 32, 212-216,
283, 284 Urea parafinizada, 32, 285 UV,
46
Vaccinia, 205
Valle del Rhin, 13, 181, 183
338
Vanadio, 257
Velocidad de fluidizacin, 82
Vertedero de residuos, 1
Vibrio harveyii, 319
Victawet, 285
VISITT,157
Visqueen, 236
Vitrificacin, 152, 201, 221
Volatilizacin, 258-260, 267, 268, 289
NDICE
Waste Stream Technologies, 316
Xileno, 28, 62, 181

XylE,
55
.
Zona vadosa, 171, 172, 184-186

Biotratamieno 3

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Biotratamieno 3

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

204

BtOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

mos nuevos que requieren mltiples ensayos; antes de su

Cuando los protocolos de mutacin y seleccin se

USO DE MICROORGANISMOS MODIFICADOS PARA LA BIODEGRADACIN... 205

proceso es muy lento. Se puede demostrar en el

Durante la ltima dcada, una de las esperanzas de

Aunque hay que afrontar diversos problemas importantes,

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

manipulacin de la secuencia gentica correcta que

USO DE MICROORGANISMOS MODIFICADOS PARA LA BIODEGRADACIN... 207

duccin de residuos proporciona un fuerte incentivo para

Varios factores han frenado la utilizacin de la ingeniera

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

ganismos recombinantes con fines de biorrecuperacin no

Los autores desean expresar su agradecimiento a James

lvarez-Cohen, L., and P. L. McCarty. \99\a. Effects of

USO DE MICROORGANISMOS MODIFICADOS PARA LA BIODEGRADAC1N... 209

Fox, B. G., J. G. Borneman, L. P. Wackett, and J. D.

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

suitability of different continuum dielectric and hydrogen

Divisin de Servicios de Biorrecuperacin RESNA Industries, Incorporated Los

La tecnologa de biorrecuperacin aplicada se est

8IOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

cia, los mtodos de biotratamiento utilizados en estas

Al final del invierno de 1987, se produjo el

BIOTRATAMIENTO APLICADO A SUELOS CONTAMINADOS.

inicia una investigacin de este tipo, es importante plantear

A favor de la bioestimulacin. Gran proporcin de

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

Despus de una investigacin de seis semanas, se

Se construy una clula forrada de biotratamiento en la1

ureasa (la urea- sa es una enzima, producida solamente

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

rango de temperatura. El uso de esta informacin en el

BIOTRATAMIENTO APLICADO A SUELOS CONTAMINADOS..,

explicacin as encaja con las circunstancias y est en

Las investigaciones de biotratabilidad llevadas a cabo al

1. Applied BioTreatment Association. 1989. Compendium of

BIOTRATAMiENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

4. Berkey, Edgar. 1991. Evaluation process for the

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

ganismos para transformar los compuestos txicos en

* Publicacin N." 91.521 de Idaho Agricultural Experimental Station

BIORRECUPERACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL.

Otra caracterstica importante del suelo que se debe

El tratamiento en lechos es un mtodo de tratamiento

Buen control sobre

BIORRECUPERACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL...

efecto invernadero en un sistema cerrado. El

El compostaje es una tecnologa de biorrecuperacin

Durante aos, las aguas residuales contaminadas se han

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

evitar una contrarreaccin inhibitoria. El operador del

Todas las tecnologas de biorrecuperacin mencionadas

BIORRECUPERACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL...

Degradacin de compuestos nitroaromticos

Los compuestos nitroaromticos son importantes en la

BIOTRATAMIENTOS DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

B10TRATAMIENT0S DE RESIDUOS TXICOS Y PELIGROSOS

adicin del 10 por ciento o 25

Los experimentos de laboratorio no siempre implican que

BIORRECUPERACIN ANAEROBIA A ESCALA REAL...