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Accion de Los Microorganismos Sobre Diversos Sustratos
Accion de Los Microorganismos Sobre Diversos Sustratos
INTRODUCCION
Saber el comportamiento de los microorganismos sobre diversos sustratos desde un
aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de
caractersticas y diferentes criterios en la evaluacin de similitudes.
Los ensayos bioqumicos tradicionalmente utilizados llamadas pruebas bioqumicas
convencionales, generalmente determinan la actividad de una va metablica (conjunto de
reacciones qumicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y
que la bacteria al crecer transforma o no.
Existen diferentes sistemas que facilitan la realizacin de tales ensayos, porque proponen
el mejor conjunto de pruebas bioqumicas para la identificacin de un grupo bacteriano,
porque simplifican la interpretacin de un resultado utilizando un valor numrico, porque
proveen los reactivos prontos para su uso o porque son totalmente automatizables.
Las pruebas o ensayos bioqumicos, son pruebas simples que se han desarrollado para
demostrar en forma clara una determinada caracterstica bioqumica como presencia o
ausencia de una determinada actividad enzimtica, grupo de enzimas o determinada va
metablica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de
inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo
bacteriano.
Para realizar las pruebas bioqumicas se dispone de mltiples medios, los cuales
se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
Entre las pruebas que utilizamos en esta prctica fueron: Hidrlisis del almidn,
fermentacin de azucares, reaccin de Vogues Proskauer, Formacin del indol,
Produccin del hidrogeno sulfurado, Hidrlisis de la urea, asimilacin del citrato.
I. DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS
Las pruebas de hidrlisis y fermentacin de carbohidratos son muy importantes para la
identificacin de las bacterias. Los medios, para estudiar la degradacin de estos
compuestos, se preparan por lo general aadiendo 0.5% del carbohidrato a un medio
bsico sin carbohidrato.
Algunas bacterias son capaces de usar molculas complejas como fuentes de carbono,
utilizan hidrolasas, que fragmentan sus molculas y liberan otras ms pequeas, que
pueden ser transportadas al interior de la clula bacteriana.
En trminos generales, las hidrolasas son enzimas inducidas. Po lo tanto para estudiar la
capacidad hidrolitica de determinada bacteria, es deseable cultivarla previamente en un
medio cuya fuente de carbono sea nicamente la sustancia cuya hidrolasa se desea
detectar, para que la bacteria induzca su sntesis.
a) HIDRLISIS DEL ALMIDN
El almidn es un homopolisacarido de la glucosa, cuyos componentes son la amilosa
lineal y la amilopectina ramificada. Para utilizarlo, algunas bacterias sintetizan una
exoenzima llamada amilasa que hidroliza los enlaces glucosidicos alfa1-4, liberan maltosa
Para la demostracin del metabolismo bacteriano sobre las protenas, se realizaran las
siguientes pruebas produccin de indol y produccin de H2S.
Otras sustancias nitrogenadas susceptibles a ser descompuestas por los
microorganismos son la urea y los nitratos.
a) FORMACION DE INDOL
El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar
tres metabolitos principales: indol, escatol e indol actico. Diversas enzimas intracelulares
que intervienen en ste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el
sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin del indol. El principal
intermediario en la degradacin del triptfano es el cido indol pirvico.
La degradacin del triptfano libera indol, cido pirvico, amoniaco y energa. El cido
pirvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucoltico o entrar en el
ciclo de Krebs para liberar CO de energa. El NH y H2O y una gran produccin
Puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminocidos empleando la energa que se
encuentra para la reaccin anablica.
La prueba de indol se bas en la formacin de un complejo de color rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehdo de p-dimetilaminobenzaldehdo (sustancia activa del
reactivo de Kovacs).
La formacin de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de
fermentar los hidratos de carbono.
La elevada acidez producida por la fermentacin de la glucosa puede impedir el
crecimiento del organismo o inhibir la enzima.
El agregado de triptfano estimula la produccin de indol mientras que la glucosa la
inhibe.
PRUEBA DE INDOL
Reactivo de Kovacs
* Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo
Interpretar inmediatamente.
Conservacin: Los reactivos debern guardarse en el refrigerador (4 C) mientras no se
usan, su estabilidad es variable, por lo tanto se har todas las semanas un control de
calidad, desechndolos si muestran una reaccin dbil o negativa con un organismo
positivo conocido.
bacterianas son capaces de liberar azufre enzimticamente de los diferentes aa. Que as
contienen, produciendo el gas cido sulfhdrico (SH).
La peptona, cistena y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies
utilizan distintos compuestos o aa. Que contienen azufre para producir S2H. La enzima
responsable de sta actividad es la cisteinasa.
TSI
Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico
incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con
la determinacin de posible cido sulfhdrico.
El agar AHK es un medio diferencial que determina tanto la fermentacin de los hidratos
de carbono y la produccin de cido sulfhdrico. Las bacterias pueden utilizar cualquiera
de los sustratos incorporados en el medio y ser metabolizados, caractersticas que son
utilizadas para la diferenciacin de stas, principalmente para las Enterobacterias.
Este medio contiene lactosa con una concentracin de 1% y glucosa 0.1%, lo cual permite
la observacin de la fermentacin de uno o de ambos carbohidratos por parte de
Las bacterias, adems de la produccin de gas y de cido sulfhdrico.
Primera etapa:
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reaccin de reduccin
que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiracin anaerbica donde el
tomo de azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidacin de los sustratos
orgnicos. El tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente
de azufre para el organismo.
Segunda etapa:
El gas incoloro S2H reacciona con una sal pesada, citrato frrico de amonio para producir
un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.
Bacteria (medio cido) + tiosulfato de sodio gas S2H
S2H + iones frricos sulfuro ferroso (pp. negro)
INTERPRETACIN
1. cido sulfhdrico
* Positivo: Ennegrecimiento del medio
* Negativo: Sin ennegrecimiento
2. Indol
Piruvato + CO
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:
pH bsico:
Citrato CO2 + cido frmico + 2 cido actico
pH cido:
2 Piruvato acetato + CO2 + lactato
2 Piruvato acetona + 2CO2
PRECAUCIONES
REPORTE DE RESULTADOS
A = cido
K = Alcalino
N = Neutra
R = Rojo (desanimacin oxidativa)
INTERPRETACIN
K/K = azul de Prusia /azul de Prusia Desaminacin oxidativa / descarboxilacin
K/A= azul de Prusia / lila No desanimacin
Produccin de H2S = Ennegrecimiento del medio
Produccin de gas = Burbujas o levantamiento del medio de cultivo de las paredes del
tubo.
Conclusin
Mediante diferentes pruebas bioqumicas se puede ver que no todo los microorganismos
reaccin igual en cada una de las pruebas, algunos no presentaran cambios en el medio
mientras que otros s. Otros necesitan de otros aditivos para poder ver como acta con el
medio como es el caso de la prueba del rojo de metilo y otras pruebas ,mientras que otras
solo basta el tiempo de incubacin para poder ver como se han comportado con el medio
donde se encuentran.