Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
TESIS
PRESENTADO POR:
BACH. GAVIRIA TANANTA, NORA DANAE
BACH. VARGAS GATICA, CHRISTIAN
ASESORES:
Q.F. DELGADO WONG, HENRY VLADIMIR
ING. VILLACRS VALLEJO, JORGE YSAAC MGR.
IQUITOS- PER
2015
RESUMEN
Smallanthus sonchifolius Yacn se ha postulado que sus races y sus hojas tienen
efecto sobre la salud humana ya que posee valiosas propiedades dietticas y
medicinales. La presente investigacin, tuvo como objetivo evaluar la actividad
antibacteriana in vitro del extracto acuoso liofilizado de hojas de Smallanthus
sonchifolius Yacn sobre cepas de Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus
faecalis ATCC 29212 y Staphylococcus aureus ATCC 25923. Las hojas fueron
recolectadas en el departamento de Pasco y almacenadas en el rea de Desecado del
IMET - EsSALUD. Se evalu la actividad antibacteriana utilizando el mtodo de Kirby
Bauer, prueba que permite medir la susceptibilidad in vitro de los microorganismos
patgenos en funcin al tamao del halo de inhibicin, se realiz discos impregnados
del extracto acuoso liofilizado a concentraciones de 100 mg/mL hasta 900 mg/mL,
control positivo Gentamicina 10 g y control negativo agua destilada. La Concentracin
Mnima Inhibitoria (CMI) se determin por el mtodo de macrodilucin, que es la
concentracin ms baja de la sustancia que puede inhibir el crecimiento visible de un
microorganismo. Los resultados demostraron que el extracto acuoso liofilizado de hojas
de Smallanthus sonchifolius Yacn a la ms alta concentracin de 900 mg/mL
present sobre Staphylococcus aureus el mayor porcentaje de inhibicin de 96.67%,
respecto a la inhibicin producida por el control positivo, sobre Escherichia coli el
mayor porcentaje de inhibicin fue 75% y sobre Enterococcus faecalis el mayor
porcentaje de inhibicin fue 64.52% . La CMI fue de 10.67 mg/ml frente a Escherichia
coli, tambin de 10.67 mg/ml frente a Enterococcus faecalis y 4 mg/ml frente a
Staphylococcus aureus.
SUMMARY
Yacons roots and leaves has effect over the human health such valuable diet and
medical proprietaries. This research aimed to evaluate the antibacterial activity in vitro
of the freeze-dried aqueous extract of the Smallanthus sonchifolius "Yacn" leaves on
Escherichia
coli
ATCC
25922,
Enterococcus
faecalis
ATCC
29212
and
Staphylococcus aureus ATCC 25923. The leaves were collected in the department of
Pasco and stored in the Drying Area of IMET - EsSALUD. The antibacterial activity
was evaluated using the Kirby Bauer method, test for measuring the in vitro
susceptibility of pathogenic microorganisms according to the size of the inhibition halo,
impregnated disks of extract at concentrations of 100 mg/mL to 900 mg/mL, positive
control as gentamicin 10 g and distilled water as negative control. The minimum
inhibitory concentration (MIC) was determined by the macrodilution method, which is
the lowest concentration of the substance that can inhibit the visible growth of a
microorganism. The results demonstrated that the freeze-dried aqueous extract of the
Smallanthus sonchifolius "Yacn" leaves at the high concentration of 900 mg/mL
showed over Staphylococcus aureus strain the major inhibition percentage was 96.67
%, with respect to inhibition by the positive control, over Escherichia coli strain the
major inhibition percentage was 75% and over Enterococcus faecalis strain the major
inhibition percentage was 64.52 %. Showed MIC of 10.67 mg/mL against Escherichia
coli, also 10.67 mg/mL against Enterococcus faecalis and 4 mg/mL against
Staphylococcus aureus.
DEDICATORIA
A DIOS por su inmenso amor, estando siempre en mi vida, guiando mis pasos,
bendicindome cada da.
Nora Alejandrina Tananta Do Santos por todo el gran amor, apoyo y cuidado que me
brinda mostrado en el sacrificio que hace da a da, inculcndome buenos principios,
valores, ensearme el respeto, la honradez a nunca rendirme a luchar puesto mi
confianza en DIOS para alcanzar mis metas y a travs de sus consejos hacerme una
mejor persona.
Henry Ulises Gaviria Del Castillo, por darme una excelente educacin, por sus
consejos, buenos deseos para superarme y por el apoyo brindado.
A mi hermanito Henry Sebastin por ser lo ms valioso que llego a nuestras vidas,
trayendo alegra a mi hogar y mostrndome su amor a travs de su inocencia.
A mis abuelitos Alejandrina y Guillermo que aun estn a mi lado por la humildad que
los caracteriza el gran cario que me tienen y por todas sus oraciones. A Rosario y
Ulises que aunque no estn presentes fsicamente s que me desearan todo lo bueno,
los llevo en mi corazn.
A Nern mi amigo fiel, que me acompao, alegro mi vida con sus muestras de afecto y
por haber sido parte de mi familia.
Ante todo a Dios por darme las fuerzas diarias, las prueba, la sabidura y amor
que me ayuda a cumplir mis metas.
A mis padres, que representan una gran bendicin: Roger Vargas Lozano y
Nilsa Gatica Ipushima por sus consejos e incondicional apoyo en todos los
aspectos de mi carrera y de mi vida, que desde muy pequeo me ensearon el
significado del esfuerzo, sacrificio y la dedicacin para alcanzar las metas. Que
demuestran su amor, comprensin, perdn, apoyo y
compromiso para el
A mi hermano Mario Rafael por su apoyo, cario y respeto que me muestra cada
da. Esperando ser un gran ejemplo para l, demostrndole que se puede
alcanzar las metas y se puede romper barreras.
A mis abuelos Jos, Adilia y Cesar por ser el gran cario para mi familia.
AGRADECIMIENTO
A DIOS, por darnos las fuerzas, salud, brindarnos sabidura y guiarnos en cada paso
para que este proyecto fuese llevado a cabo.
Al Ing. Jorge Ysaac Villacrs Vallejo y Q.F Henry Delgado Wong por su participacin
y asesoramiento en la revisin de la tesis y en la evaluacin durante las diferentes etapas
del trabajo.
A nuestros amigos Ericka, Fernando, Silvia, Jessica, Magaly, Nilton, Luisa y otras
personas que no se mencionaron por creer en nosotros mostrndonos su apoyo y
amistad durante la formacin de nuestra carrera.
INDICE
PRESENTACIN.
RESUMEN....
SUMARY..
DEDICATORIA....
AGRADECIMIENTO...................
INDICE DE CUADROS...
INDICE DE TABLAS...
INDICE DE GRAFICOS..
11
13
CAPTULO I
1.1. INTRODUCCIN 17
1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.................... 19
1.3. OBJETIVOS. 21
CAPTULO II
2.1. MARCO TERICO....
23
23
29
Clasificacin Taxonmica..
30
Distribucin
30
Sinonimias..
30
Nombres Comunes.
31
Descripcin Botnica.
31
Componentes Qumicos.
33
Usos Tradicionales.
33
34
Caractersticas.
35
Patologa.
35
Taxonoma..
36
Caractersticas.
36
Patologa.
38
39
Caractersticas.
39
Patologa.
40
41
41
41
42
42
42
42
45
CAPTULO III
3.1. METODOLOGA Y DISEO DE LA INVESTIGACIN...
47
47
47
48
52
52
Liofilizacin 52
Preparacin de los extractos a diferentes concentraciones.
53
53
56
59
61
CAPTULO IV
4.1. RESULTADOS 63
4.1.1. Actividad antibacteriana del Extracto Acuoso Liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn.. 63
4.1.1.1. Mtodo de disco difusin (Kirby Bauer).
63
80
4.2. DISCUSIN...
83
4.3. CONCLUSIN 85
4.4. RECOMENDACIONES.
86
4.5. BIBLIOGRAFA
87
4.6. ANEXOS
94
INDICE DE CUADROS
10
INDICE DE TABLAS
Tabla N 05. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresados en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC 25922...64
Tabla N 06. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresados en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC
29212..64
Tabla N 07. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresados en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Staphylococcus aureus ATCC
25923...65
11
Tabla N 11. Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn en sus diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC 25922...75
Tabla N 12. Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn en sus diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC 29212....76
Tabla N 13. Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn en sus diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de las colonias de Staphylococcus aureus ATCC 25923...........77
Tabla N 14. Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), del extracto acuoso liofilizado
de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn (expresado en mg/ml), sobre el
crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli
ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923.81
12
INDICE DE GRAFICOS
Grfico 01. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresado en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC 25922..65
Grfico 02. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresado en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC
29212...66
Grfico 03. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresado en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Staphylococcus aureus ATCC
25923...66
Grfico 04. Promedio de los dimetros de los halos de inhibicin (expresado en mm)
producido por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius
Yacn a 900 mg/mL sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis
ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC
25923...67
Grfico 05. Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido
por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn,
sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC 25922.72
Grfico 06. Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido
por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn,
sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC 2921272
Grfico 07. Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido
por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn,
sobre el crecimiento de las colonias de Staphylococcus aureus ATCC 25923..73
13
Grfico 08. Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido
por el extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn, a
900 mg/mL, sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC
29212, Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC 25923..73
Grfico N 09. Porcentaje de inhibicin del Extracto Acuoso Liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn, respecto al dimetro de inhibicin producido por el
control positivo sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC
25922...78
Grfico N 10. Porcentaje de inhibicin del Extracto Acuoso Liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn, respecto al dimetro de inhibicin producido por el
control positivo sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC
29212...78
Grfico N 11. Porcentaje de inhibicin del Extracto Acuoso Liofilizado de las hojas de
Smallanthus sonchifolius Yacn, respecto al dimetro de inhibicin producido por el
control positivo sobre el crecimiento de las colonias de Staphylococcus aureus ATCC
25923...79
Grfico N 12. Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojasde
Smallanthus sonchifolius Yacna 900 mg/mL, sobre el crecimiento de las colonias
de Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922 y
Staphylococcus aureus ATCC 25923.79
Grfico N 13. Concentracin Mnima Inhibitoria del extracto acuoso liofilizado de las
hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn (expresado en mg/mL) sobre el
crecimiento de Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922 y
Staphylococcus aureus ATCC 25923.82
14
Termino
Sigla/Abreviatura
Grados Celsius
Centmetro
cm
Miligramo
mg
mililitros
mL
milmetro
mm
microlitro
UFC
ATCC
CMI
MHB
NCCLS
OMS
IMET
15
CAPTULO I
16
1.1. INTRODUCCIN
ms
afectada
por
estas
clases
de
bacterias
enteropatgenos.
Otros
17
tanta importancia y sea indispensable para hacer de los antibiticos un uso racional
de agentes teraputicos.8
18
13
regin Loreto es similar a la de Ucayali con picos los meses de mayo, agosto, octubre
y noviembre, descenso al final del ao y tasas que oscilarn entre 50 y 55 episodios
por cada mil menores de cinco aos.14
19
20
1.3. OBJETIVOS
GENERAL:
ESPECFICOS:
21
CAPTULO II
22
2.1.1.1. Antecedentes
y una menor
20
23
morfoagronmicamente 18 descriptores
24
Holtzman,
25
26
aeruginosa,
Klebsiella
pneumoniae,
Escherichia
coli
Salmonella.34
27
que
proporciono
dos
nuevas
lactonas
sesquiterpenos
antibacterianos tipo melampolido, cido metil ster 8-tigloiloximelampoldo14-oico y cido metil ester 8-metacriloiloximelampolido-14-oico, al igual que
4 melampolidos que son sonchifolina, uvedalina, enhidrina y fluctuanina. El
nuevo compuesto identificado cido metil ester 8-metacriloiloximelampolido14-oico mostro actividad antimicrobiana contra Bacillus subtilis y Pyricularia
oryzae, mientras el cido metil ster 8-tigloiloximelampoldo-14-oico mostro
una baja actividad. Fluctuanina mostro la ms fuerte actividad antibacteriana
contra Bacillus subtilis sobre los otro seis compuestos. 35
fibras (0.9),
protena (1.0), lpidos (0.1) y ceniza (1.1 g). En minerales contiene K (334 mg),
F (34 mg), Ca (12 mg), Mg (8.4 mg), Na (0.4 mg) y Fe (0.2 mg). Vitaminas B1
(0.07 mg), B2 (0.31 mg), C (5.0 mg), caroteno (0.13 mg) y polifenoles (203 mg).
En hojas hay sesquiterpenos tales como cido ent-kaurenico (cido ent-kaur-16en-19-oico) y sus derivados cido 15--angeloyloxy-entkauren-19-oico 16epoxide. Un nuevo antifungico melampolido sesquiterpeno lactona llamado
sonchifolin, a la vez tres conocidas melampolidos, polimatina B, uvedalina y
enhydrina, fueron aislados del extracto de las hojas de yacn. 36
Otholobium pubescens(Culen)
28
29
Plantae
Divisin
Magnoliophyta
Clase
Magnoliopsida
Orden
Asterales
Familia
Asteraceae
Gnero
Smallanthus
Especie
Smallanthus sonchifolius
2.1.1.4. Distribucin.
En la Regin Andina de todos los Departamentos del Per desde Piura, Cajamarca
y Amazonas hasta Puno y Tacna.39
2.1.1.5. Sinonimias.
Polymnia edulis Wedd, Polymnia sonchifoliusPoepp.39
30
31
Temperatura
: 12- 26 C
Precipitacin
: 700- 2500 mm
Humedad
: 70-95 %
39
Distribucin latitudinal
: 3 - 18 L.S.
32
2.1.1.11.
Caractersticas fenolgicas:
poca de floracin
: Mayo a Julio.
2.1.1.12.
Componentes qumicos.
Potasio.
Compuestos Polifenlicos.
Derivados del cido Cafeico.
Sustancias Antioxidantes(cido clorognico y triptfano)
Fitoalexinas.
Fructooligosacridos (FOS).
Azcares simples (Glucosa, fructosa y sacarosa).
Sesquiterpenos.
Lactonas.
Flavonoides. 41
2.1.1.13.
Usos tradicionales.
Propiedadesmedicinales:
Fatiga
Calambres
Afecciones renales
Afecciones hepticas. 41
33
Forma de uso.
Cocimiento y al estado fresco. 39
Pasas, jugo, jarabe, mermelada, te filtrante, infusin, hojuelas. 41
2.1.2.1.Escherichia coli
2.1.2.1.1. Taxonoma
Dominio
: Bacteria
Filo
: Proteobacterias
Clase
: Gammaproteobacteria
Orden
: Enterobacteriales
Familia
: Enterobacteriaceae
Gnero
: Escherichia
Especie
34
2.1.2.1.2. Caractersticas
Escherchia coli es el organismo mejor conocido del mundo, ya que se ha
utilizado como modelo para estudiar todo tipo de aspectos de gentica y
fisiologa. Es una bacteria Gram negativa tpica de la familia
Enterobacteriaceae. El anlisis de 16rRNA muestra que pertenece a la
subclase de proteobacterias , incluye adems a organismos patgenos de
humanos, como Shigella, Salmonella, Vibrio y Haemophilus. Las bacterias
de la familia Enterobacteriaceae se caracteriza por ser capaces de respirar
facultativamente: anaerbicamente en el interior del intestino
Ella est integrada por bacilos Gram negativos no esporulados, mviles con
flagelos peritricos o inmviles, aerobios-anaerobios facultativos, capaces de
crecer en agar MacConkey y en medios simples con o sin agregado de
NaCl, fermentadores y oxidativos en medios con glucosa u otros
carbohidratos, catalasa positivos, oxidasa negativos, reductores de nitratos a
nitritos, y poseedores de una proporcin G+C de 39 a 59% en su DNA. Se
trata de bacterias de rpido crecimiento y amplia distribucin en el suelo, el
agua, vegetales y gran variedad de animales. En conjunto, la importancia de
las enterobacterias en patologa humana puede cuantificarse constatando
que constituyen el 50% aproximadamente de todos los aislamientos
clnicamente significativos en los laboratorios microbiolgicos, y hasta el
80% de todos los bacilos Gram negativos identificados. 44
2.1.2.1.3. Patogenia
Dentro de las bacterias causantes de enfermedades gstricas importantes, se
encuentra Escherichia coli, la cual puede ser responsable de diarreas y
enfermedades que llegan a ser muy graves, como la colitis hemorrgicas y
sndrome urmico. Sin embargo, existen varias maneras de interpretar con el
epitelio intestinal y de causar diarrea por Escherichia coli. 45
35
2.1.2.2.1. Taxonoma
Dominio
: Bacteria
Filo
: Firmicutes
Clase
: Bacilli
Orden
: Lactobacillales
Familia
: Enterococcaceae
Gnero
Especie
2.1.2.2.2.
Caractersticas
36
ms
un
aminoglucsido
como
la
gentamicina
37
2.1.2.2.3. Patogenia
Existen diferentes determinantes de patogenicidad entre ellos podemos
mencionar:
-
Citolisina
38
2.1.2.3.Staphylococcus aureus
2.1.2.3.1. Taxonoma
Dominio
: Bacteria
Filo
: Firmicutes
Clase
: Cocci
Orden
: Bacillales
Familia
: Staphylococcaceae
Gnero
: Staphylococcus
Rosenbach 1884
Especie
: Staphylococcus aureus
2.1.2.3.2. Caractersticas
Staphylococcus aureus es un patgeno importante para el ser humano ya
que puede causar una variedad de infecciones en individuos sanos como en
inmunodeficientes. Tambin puede colonizar la piel y las fosas nasales
facilitando su transmisin en particular en ambientes hospitalarios a menos
que se sigan prcticas apropiadas de control de infecciones. La resistencia a
los antibiticos comnmente usados est aumentando a nivel mundial. Ms
39
2.1.2.3.3. Patogenia
El Staphylococcus aureus elabora una variedad de toxina extracelulares,
incluyendo a -, -, y - hemolisinas, coagulasas, hialuronidasas,
exfoliatina, leucocidina y lipasa. La coagulasa puede proteger a las clulas
bacterianas de la fagocitosis
intercelular
facilitando
de
los
tejidos,
la
diseminacin
de
los
la
diseminacin
del
microorganismo.
Las
enterotoxinas
40
2.1.3.1.Difusin en agar
Este mtodo, que es el ms frecuentemente usado, es tambin llamado
difusin por disco o Kirby-Bauer, En este caso, el microorganismo es
inoculado en la superficie de una placa de agar, sobre el cual se colocan
discos impregnados con una concentracin conocida del antibitico. Las
placas se incuban por 16-18 horas a 35 C. Durante la incubacin, el
antibitico difunde radialmente desde el disco a travs del agar, por lo que
su concentracin va disminuyendo a medida que se aleja del disco. En un
punto determinado, la concentracin del antibitico en el medio es incapaz
de inhibir al germen en estudio. El dimetro del rea de inhibicin alrededor
del disco puede ser convertido a las categoras de susceptible, intermedio o
resistente (S, I, o R) de acuerdo a las tablas publicadas por el National
Committee for Clinical Laboratories Standards. Si las recomendaciones para
realizar este mtodo son fielmente seguidas, las categoras se correlacionan
muy bien con los resultados de los otros mtodos.
2.1.3.2.Dilucin en agar
Es considerado el mtodo de referencia. En este mtodo, placas conteniendo
una determinada concentracin de un antibitico son inoculadas con el
microorganismo en estudio y luego incubadas por 16 a 18 horas. Despus de
la incubacin, se examina si el organismo crece o no en cada una de las
placas, con lo cual se determina la concentracin inhibitoria mnima (CIM)
para el antibitico.
2.1.3.3.Dilucin en caldo
En este caso, tubos (macrodilucin) o microplacas (microdilucin)
contienen concentraciones crecientes de un determinado antibitico. El
organismo en estudio es inoculado en los diferentes tubos o pocillos de la
microplaca y la CIM es determinada despus de la incubacin, de la misma
forma descrita anteriormente para el mtodo de la dilucin en agar.51
41
2.2.DEFINICIONES OPERACIONALES
2.2.1. VARIABLES.
2.2.1.1.Variable Independiente:
2.2.1.2.Variable Dependiente:
2.2.2. INDICADORES.
42
TABLA N 1
VARIABLE
INDEPENDIENTE
(X)
DEFINICIN
CONCEPTUAL
DEFINICIN
OPERACIONAL
INDICADOR
INDICE
ESCALA
1. Prueba de sensibilidad:
Extracto
acuoso
liofilizado de las
hojas
de
Smallanthus
sonchifolius
Yacn.
Producto de la
extraccin
por
coccin de la
especie vegetal
para luego ser
congelado
y
liofilizado.
Concentracin
del extracto
acuoso
liofilizado de
las hojas de
Smallanthus
sonchifolius
Yacn.
2. Prueba de sensibilidad:
Concentracin de 512, 256,
128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1,
0.5, 0.25mg/ml
43
Intercalar.
Tipo
cuantitativo.
TABLA N 2
VARIABLE
DEPENDIENTE
(Y)
DEFINICIN
CONCEPTUAL
Capacidad de una
sustancia
Actividad
cualquiera
para
antibacteriana de inhibir
el
las
hojas
de crecimiento
y/o
Smallanthus
producir la muerte
sonchifolius
de una o ms
Yacn.
bacterias.
DEFINICIN OPERACIONAL
Sensibilidad bacteriana
Grado de susceptibilidad de los
microorganismosfrente al extracto
de la especie vegetal en estudio, con
la formacin de un halo de
inhibicin.
INDICADOR
Dimetro en
milmetros (mm)
del halo
inhibicin.
Concentracin
inhibitoria
mnima
Es la mnima concentracin con la
cual el extracto de la especie vegetal
en estudio es capaz de inhibir el
crecimiento de los microorganismos.
Presencia de
precipitado en el
fondo del tubo de
ensayo.
Turbidez del
medio de cultivo.
INDICE
1. Grado
de
sensibilidad.
Inactivo <40%
Poco activo 40-50%
Moderado
activo
51-75%
Buena
actividad
>76%
2. Capacidad
inhibitoria.
Inactivo >16mg/ml
Poco activo 615mg/ml
Moderado activo 15 mg/ml
Buena
actividad
<1mg/ml
44
ESCALA
Intercalar.
Tipo
cuantitativo.
2.3. HIPOTESIS
antibacteriana
sobre
Escherichia
coli,
Enterococcus
45
faecalis
CAPTULO III
46
47
3.2.
POBLACIN Y MUESTRA.
Poblacin vegetal.
Muestra vegetal.
Criterios de inclusin.
Hojas adultas.
Hojas sanas.
Hojas en buen estado de conservacin.
Hojas libre de excremento animal.
Criterios de exclusin.
Poblacin bacteriana.
48
Muestra bacteriana.
El nmero de colonias de Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus
faecalis ATCC 29212 y Staphylococcus aureus ATCC 25923, que se
emplearon para la preparacin del inoculo bacteriano de tamao similar.
Criterios de inclusin.
Colonias que renan las caractersticas microscpicas y macroscpicas
del microorganismo.
Colonias con resultado positivo a las pruebas bioqumicas propias del
microorganismo.
Criterios de exclusin.
Colonias
que
no
renan
las
caractersticas
microscpicas
49
3.3.MATERIALES E INSTRUMENTOS.
Equipos
Agar Nutritivo.
Agar Tripticasa de Soya.
Caldo Tripticasa de Sosya.
Agar Mueller Hinton.
Caldo Mueller Hinton.
Cloruro de Bario.
cido sulfrico concentrado.
Cristal violeta.
Lugol.
Acetona.
Safranina.
Fucsina bsica.
Etanol q.p.
Etanol 96 %.
Agua destilada.
50
Materiales de laboratorio.
51
3.4.PROCEDIMIENTOS,
TCNICA
INSTRUMENTOS
DE
RECOLECCIN DE DATOS.
Liofilizacin.
52
53
55
56
57
Incubacin.
%INHIBICIN:
PORCENTAJE DE
INHIBICIN
Inactivo
<40%
Poco activo
40 50%
Moderado activo
51 75%
Buena actividad
>76%
58
59
ACTIVIDAD
CONCENTRACIN
ANTIMICROBIANA
MNIMA INHIBITORIA
Inactivo
>16 mg/ml
Poco activo
6 15 mg/ml
Moderado activo
1 5 mg/ml
Buena actividad
< 1 mg/ml
60
3.5.PROCESAMIENTO DE LA INFORMACIN.
61
CAPTULO IV
62
4.1. RESULTADOS:
4.1.1.1.
El mayor halo de inhibicin sobre el crecimiento de las colonias de las tres cepas
estudiadas, se obtuvo a concentracin de 900 mg/mL del extracto acuoso
liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius. Se demostr que el
promedio de dimetro sobre Escherichia coli fue 13.5 0.5, sobre
Enterococcus faecalis fue 12.0 1.0 y sobre Staphylococcus aureus fue 16.9
0.4.
63
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONTROL
POSITIVO
CONTROL
NEGATIVO
CONCENTRACIN
(mg/mL)
(mm) X SD
100
200
300
400
500
600
700
800
900
7.4 0.3
7.5 0.5
7.8 1.3
8.5 1.0
10.6 0.6
11.3 1.2
13.0 0.0
13.2 0.6
13.5 0.5
GENTAMICINA
18.0 0.0
AGUA DESTILADA
6.0 0.0
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONTROL
POSITIVO
CONTROL
NEGATIVO
CONCENTRACIN
(mg/mL)
(mm) X SD
100
200
300
400
500
600
700
800
900
8.2 0.3
9.5 0.5
9.7 0.3
9.8 0.6
10.2 0.3
10.7 1.0
11.5 0.9
11.8 0.6
12.0 1.0
GENTAMICINA
18.6 0.5
AGUA DESTILADA
6.0 0.0
64
(mm) X SD
100
200
300
400
500
600
700
800
900
10.6 0.9
13.2 1.2
13.3 1.2
14.4 0.4
14.5 1.3
15.4 0.9
15.5 2.6
16.3 1.3
16.9 0.4
GENTAMICINA
17.5 0.4
AGUA DESTILADA
6.0 0.0
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONTROL
POSITIVO
CONTROL
NEGATIVO
Prueba de Sensibilidad
DIAMETRO DE INHIBICIN (mm)
18
20
15
10.6
10
7.4
7.5
7.8
11.3
13
13.2
13.5
8.5
6
5
0
65
Prueba de Sensibilidad
DIAMETRO DE INHIBICIN (mm)
20
15
10
8.2
9.5
9.7
9.8
10.2
10.7
11.8
11.5
12
6
5
0
Prueba de Sensibilidad
DIAMETRO DE INHIBICIN (mm)
13.2
15
13.3
14.4
14.5
15.4
15.5
16.3
16.9
17.5
10.6
10
5
0
66
13.5
12
15
10
5
0
E. coli
ATCC 25922
E. faecalis
ATCC 29212
S. aureus
ATCC 25923
67
68
TABLA N 08.- Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido por el extracto acuoso liofilizado de las
hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC 25922.
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
100
200
300
400
500
600
700
800
900
CONTROL
GENTAMICINA
POSITIVO
Fuente: Elaborado por los autores.
DIAMETRO DE LA ZONA DE
INHIBICIN
(DZI) *
(mm)
X SD
7.4 0.3
7.5 0.5
7.8 1.3
8.5 1.0
10.6 0.6
11.3 1.2
13.0 0.0
13.2 0.6
13.5 0.5
INTERPRETACIN
RESISTENTE
RESISTENTE
RESISTENTE
RESISTENTE
RESISTENTE
RESISTENTE
INTERMEDIO
INTERMEDIO
INTERMEDIO
18.0 0.0
SENSIBLE
69
TABLA N 09.- Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido por el extracto acuoso liofilizado de las
hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Enterococcus faecalis ATCC 29212
EXTRACTO ACUOSO LIOFILIZADO
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
100
200
300
400
500
600
700
800
900
CONTROL
GENTAMICINA
POSITIVO
Fuente: Elaborado por los autores.
DIAMETRO DE LA ZONA DE
INHIBICIN
(DZI) *
(mm)
X SD
8.2 0.3
9.5 0.5
9.7 0.3
9.8 0.6
10.2 0.3
10.7 1.0
11.5 0.9
11.8 0.6
12.0 1.0
INTERPRETACIN
INTERMEDIO
INTERMEDIO
INTERMEDIO
INTERMEDIO
SENSIBLE
SENSIBLE
SENSIBLE
SENSIBLE
SENSIBLE
18.6 0.5
SENSIBLE
70
TABLA N 10.- Interpretacin de los dimetros crticos de los halos de inhibicin producido por el extracto acuoso liofilizado de las
hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn sobre el crecimiento de las colonias de Staphylococcus aureus ATCC 25923.
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
100
200
300
400
500
600
700
800
900
CONTROL
GENTAMICINA
POSITIVO
Fuente: Elaborado por los autores.
DIAMETRO DE LA ZONA DE
INHIBICIN
(DZI) *
(mm)
X SD
10.6 0.9
13.2 1.2
13.3 1.2
14.4 0.4
14.5 1.3
15.4 0.9
15.5 2.6
16.3 1.3
16.9 0.4
INTERPRETACIN
RESISTENTE
INTERMEDIO
INTERMEDIO
INTERMEDIO
INTERMEDIO
SENSIBLE
SENSIBLE
SENSIBLE
SENSIBLE
17.5 0.4
SENSIBLE
71
Prueba de Sensibilidad
DIAMETRO DE INHIBICIN (mm)
14
11.3
10.6
12
10
8
8.5
6
4
2
0
RESISTENTE
INTERMEDIO
SENSIBLE
100 mg/ml
200 mg/mL
300 mg/mL
400 mg/mL
600 mg/mL
700 mg/mL
800 mg/mL
900 mg/mL
500 mg/mL
Prueba de Sensibilidad
DIAMETRO DE INHIBICIN (mm)
10
11.8 12
11.5
10.7
10.2
8
6
4
2
0
RESISTENTE
100 mg/ml
600 mg/mL
200 mg/mL
700 mg/mL
INTERMEDIO
300 mg/mL
800 mg/mL
SENSIBLE
400 mg/mL
900 mg/mL
500 mg/mL
72
Prueba de Sensibilidad
DIAMETRO DE INHIBICIN (mm)
15.4
14.414.5
13.3
13.2
16
16.316.9
15.5
10.6
10
8
6
4
2
0
RESISTENTE
INTERMEDIO
SENSIBLE
100 mg/ml
200 mg/mL
300 mg/mL
400 mg/mL
600 mg/mL
700 mg/mL
800 mg/mL
900 mg/mL
500 mg/mL
16.9
13.5
15
12
10
5
0
RESISTENTE
INTERMEDIO
SENSIBLE
74
TABLA N 11.- Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn en sus
diferentes concentraciones,respecto al diametro de inhibicin producido por el control positivo sobre el crecimiento de las colonias de
Escherichia coli ATCC 25922.
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
% INHIBICIN
RESULTADOS
100
200
300
400
500
600
700
800
900
41.11
41.66
43.33
47.22
58.88
62.77
72.22
73.33
75.00
POCO ACTIVO
POCO ACTIVO
POCO ACTIVO
POCO ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
CONTROL
GENTAMICINA
POSITIVO
CONTROL
AGUA DESTILADA
NEGATIVO
Fuente: Elaborado por los autores.
100.00
0.00
75
TABLA N 12.- Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn en sus
diferentes concentraciones, respecto al diametro de inhibicin producido por el control positivo sobre el crecimiento de las colonias de
Enterococcus faecalis ATCC 29212.
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONCENTRACIN
(mg/mL)
% INHIBICIN
RESULTADOS
100
200
300
400
500
600
700
800
900
43.91
51.08
51.97
52.87
54.66
57.35
61.83
63.62
64.52
POCO ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
CONTROL
GENTAMICINA
POSITIVO
CONTROL
AGUA DESTILADA
NEGATIVO
Fuente: Elaborado por los autores.
100.00
0.00
76
TABLA N 13.- Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn en sus
diferentes concentraciones, respecto al diametro de inhibicin producido por el control positivo sobre el crecimiento de las colonias de
Staphylococcus aureus ATCC 25923.
% INHIBICIN
RESULTADOS
100
200
300
400
500
600
700
800
900
60.48
75.24
76.19
82.38
82.86
88.10
88.57
93.33
96.67
MODERADAMENTE ACTIVO
MODERADAMENTE ACTIVO
BUENA ACTIVIDAD
BUENA ACTIVIDAD
BUENA ACTIVIDAD
BUENA ACTIVIDAD
BUENA ACTIVIDAD
BUENA ACTIVIDAD
BUENA ACTIVIDAD
GENTAMICINA
100.00
AGUA DESTILADA
0.00
HOJAS
PARTE DE LA
PLANTA
CONTROL
POSITIVO
CONTROL
NEGATIVO
77
GRFICO N 09.- Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius Yacn, respecto al dimetro de inhibicin producido
por el control positivo sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC
25922.
% INHIBICION
Escherichia coli ATCC 25922
100.00%
90.00%
80.00%
70.00%
60.00%
50.00%
40.00%
30.00%
20.00%
10.00%
0.00%
72.22% 73.33%
58.88%
41.11% 41.66% 43.33%
100%
75%
62.77%
47.22%
0%
% INHIBICIN
Enterococcus faecalis ATCC 29212
100%
100.00%
90.00%
80.00%
70.00%
60.00%
50.00%
40.00%
30.00%
20.00%
10.00%
0.00%
57.35%
52.87% 54.66%
51.08% 51.97%
65.52%
61.83% 63.62%
43.91%
0%
78
25923.
%INHIBICIN
Staphylococcus aureus ATCC 25923
100.00%
90.00%
80.00%
70.00%
60.00%
50.00%
40.00%
30.00%
20.00%
10.00%
0.00%
75.24% 76.19%
82.38% 82.86%
88.10% 88.57%
100%
93.33% 96.67%
60.48%
0%
GRFICO N 12.- Porcentaje de inhibicin del extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius Yacna 900 mg/mL, sobre el crecimiento de las
colonias de Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922 y
Staphylococcus aureus ATCC 25923.
100%
75%
64.52%
E. coli
ATCC 25922
E. faecalis
ATCC 29212
S. aureus
ATCC 25923
Gentamicina
79
80
TABLA N 12.- Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI), del extracto acuoso liofilizado de las hojas de Smallanthus sonchifolius Yacn
(expresado en mg/mL), sobre el crecimiento de las colonias de Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 29212,
Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Bacterias
Escherichia coli
Extracto
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
Smallanthus
1era Rep.
2da Rep.
3era Rep.
1era Rep.
2da Rep.
3era Rep.
1era Rep.
2da Rep.
3era Rep.
sonchifolius
8 mg/mL
16 mg/mL
8 mg/mL
8 mg/mL
8 mg/mL
16 mg/mL
4 mg/mL
4 mg/mL
4 mg/Ml
(mg/mL) X SD
10.67 3.8
10.67 3.8
4 0.0
81
10.67
12
10
8
6
4
2
0
E. coli
ATCC 25922
E. faecalis
S. aureus
ATCC 29212
ATCC 25923
Smallanthus sonchifolius
82
4.2.DISCUSIN
El uso de las plantas en medicina tiene una historia honorable, ya que en determinados
momentos todos los medicamentos se obtenan de fuentes naturales.54
83
84
4.3.CONCLUSIONES
85
4.4. RECOMENDACONES.
86
4.5. BIBLIOGRAFA
1. Aranda J, Villacrs J, Nonato L, Nina E, Ros F. Plantas Medicinales de la
Amazona Peruana. Iquitos: IMET EsSalud; 2010.
87
15. Kollef MH, Fraser VJ. Antibiotic resistance in the intensive care unit. Ann
Intern Med 2004; (134): 298-314.
18. Alonso, C., Lara, F., Esquivel, B. y Mata, R. Plantas medicinales de Mxico II.
Composicin, usos y actividad biolgica. Mxico: Instituto de Qumica, UNAM.
88
25. Cuadrado
L,
Vinueza
D,
Donoso
C.
Determinacin
de
Actividad
26. Choi JG, Kang OH, Lee YS, Oh YC, Chae HS, Obiang-Obounou B et al.
Antimicrobial activity of the constituents of Smallanthus sonchifolius leaves
against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Eur Rev Med Pharmacol
Sci. 2010; 14: 1005-1009
27. Olaciregui PD, Yshikawa KD, Padilla FJ, Mondoedo CC, Roman AJ, Moya
CR, et al. Evaluacin de la toxicidad subcrnica del extracto acuoso de las hojas
89
(GRCF);
2008.
[sitio
en
internet].
Disponible
en:
http://www.conicet.gov.ar/new_scp/detalle.php?keywords=&id=38956&congres
os=yes&detalles=yes&congr_id=1092345 Consultado: 16 de Abril de 2014.
30. Mercado MI, Coll Aroz MV, Grau A, Cataln CAN. Constituyentes de la Cera
Foliar de Yacn (Smallanthus sonchifolius). Bol. Latinoam. Caribe Plant. Med.
Aromaticas. 2007; 6(5):260-261.
90
40. Muoz A. Monografa del Yacn Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.).
Lima: Per Biodiverso. 2009.
91
42. Bacteria in Photos [Serie en Internet] 2011; [2012 marzo 2]; [alrededor de 10
pginas].
Disponible
en:
http://fundacionio.org/img/bacteriology/img/Staph_aureus_03.jpg
46. Cavalieri SJ, Harbeck RJ, McCarter YS, Ortez JH, Rankin ID, Sautter RL et al.
Manual de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana. Coyle MB, editor.
Seattle: Departments of Laboratory Medicine and Microbiology, University of
Washington; 2005. p. 103, 119.
92
50. Velsquez
L.
Actividad
Antimicrobiana
de
Extractos
de
Franseria
en
internet].
Disponible
en
http//:escuela.med.puc.cl/publ/boletin/laboratorio/Interpretacion.html#.consultad
o:29 de Abril de 2014.
53. Carballo Ma, Cortada Cm, Gadano Ab. Riesgos y Beneficios en el Consumo de
Plantas Medicinales. Theoria, Vol. 14 (2): 95-108, 2005.
54. Fundacin Enfermedades Infecciosas en el tercer y primer mundo [Serie en
Internet]. 2011; [2012 marzo 2]; [alrededor de 10 pginas]. Disponible en:
http://fundacionio.org/img/bacteriology/img/Staph_aureus_03.jpg
93
4.6.ANEXOS
Anexo 01.-CONSTANCIA DE LA MUESTRA VEGETAL.
94
YACN
(HOJAS)
SECADO
RECOLECCIN DE LA
MUESTRA
LAVADO
COCCIN
FILTRADO
100gr. de la muestra
en 1L de agua
REFRIGERAR
CONCENTRAR
a 22C x 72 horas
80 rpm X 20 min X 60 oC
LIOFILIZAR
a -40C y 1.33x10-3
MBARR,mediante
sublimacin
95
Bao maria
Estufa esterilizadora
Incubadora
Rotavapor
Autoclave
Balanza analtica
Camara de flujo
laminar
Micropipeta
Vernier
96
97
Incubacin.
98
99
Anexo 12.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 100, 200 y 300mg/ml. Sobre el
crecimiento de Escherichia coli.
100
Anexo 13.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 400, 500 y 600mg/ml. Sobre el
crecimiento de Escherichia coli.
101
Anexo 14.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 700, 800 y 900mg/ml. Sobre el
crecimiento de Escherichia coli.
102
Anexo 15.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 100, 200 y 300mg/ml. Sobre el
crecimiento de Enterococcusfaecalis.
103
Anexo 16.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 400, 500 y 600mg/ml. Sobre el
crecimiento de Enterococcus faecalis.
104
Anexo 17.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 700, 800 y 900mg/ml. Sobre el
crecimiento de Enterococcusfaecalis.
105
Anexo 18.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 100, 200 y 300mg/ml. Sobre el
crecimiento de Staphylococcus aureus.
106
Anexo 19.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 400, 500 y 600mg/ml. Sobre el
crecimiento de Staphylococcus aureus.
107
Anexo 20.- Halos de inhibicin obtenidos por el extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius a concentraciones de 700, 800 y 900mg/ml. Sobre el
crecimiento de Staphylococcus aureus.
108
Anexo 21.- Concentracin mnima inhibitoria del extracto acuoso liofilizado de las
hojas de Smallanthus sonchifolius, sobre el crecimiento de Escherichia coli.
109
Anexo22.- Concentracin mnima inhibitoria del extracto acuoso liofilizado de las hojas
de Smallanthus sonchifolius, sobre el crecimiento de Enterococcus faecalis.
110
Anexo 23.- Concentracin mnima inhibitoria del extracto acuoso liofilizado de las
hojas de Smallanthus sonchifolius, sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus.
111
Especie:
1. CAPACIDAD ANTIMICROBIANA:
DZI (mm)
Microorganismos ATCC
Placa N01
Placa N02
Placa N03
X DZI Extracto
X DZI Control
112
%AA
Cepa I
Cepa II
Cepa III
Cepa IV
Cepa V
Cepa VII
Cepa V
Cepa VII
(mg/ml)
Cepa I
Cepa II
Cepa III
Cepa IV
113