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Produccin de biodiesel a partir

de aceites vegetales utilizando
enzimas libres:
Estudio Preliminar

Leandro Castao Chiguach.

Estudiante de Ingeniera Qumica
Universidad Nacional de Colombia
Sede Manizales-Colombia

RESUMEN

Julin Andrs Torres Montoya.

Estudiante de Ingeniera Qumica
Universidad Nacional de Colombia
Sede Manizales-Colombia
Carlos Ariel Cardona Alzate, Ph.D.
Profesor Departamento de Ingeniera Qumica.
Universidad Nacional de Colombia
Sede Manizales-Colombia
Carlos Eduardo Orrego, M.Sc.
Profesor Departamento de Fsica y Qumica.
Universidad Nacional de Colombia
Sede Manizales-Colombia

Grupo de investigacin de Procesos Qumicos, Catalticos y Biotecnolgicos

Universidad Nacional de Colombia sede Manizales

__________________________
* Recibido : Noviembre 2004
* Aceptado: Diciembre
2004

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Facultad de Ingeniera EIDENAR

Se estudian las principales variables que afectan el

rendimiento de la reaccin de transesterificacin de
aceites vegetales con etanol utilizando enzimas
(lipasas) libres de Cndida rugosa y Pseudomonas
fluorescens como catalizador, y se analiza tericamente la viabilidad de adaptar al proceso un sistema
hbrido reaccin-separacin que contribuya a mejorar
la rentabilidad del mismo. Para ello, inicialmente fue
necesario realizar ensayos utilizando un catalizador
alcalino con el fin de comprender mejor la naturaleza
de la reaccin. Los parmetros de operacin empleados fueron: temperatura (69.5 C), tipo de catalizador
(hidrxido de sodio y lipasas), concentracin de catalizador alcalino (0.34 wt %), concentracin de lipasa
(12.5 wt %), relacin molar aceite/etanol (1:7.4), masa
de aceite (8 g) y tiempo de reaccin (5 h para el
proceso qumico y 24 h para el proceso enzimtico).
Se probaron diferentes aceites vegetales, entre ellos el
de palma y el de higuerilla, ya que estos cultivos
representan un recurso abundante en nuestro pas que
podra ser aprovechado en aras de contribuir a la
economa, y se encontr que el aceite de palma

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refinado era el ms apropiado. De manera cualitativa peridicamente (Haas et al., 2002).
se verifica la formacin de etil esteres (biodiesel) al En un principio, los combustibles fsiles se apoderafinal del proceso qumico, empleando cromatografa de ron del mercado gracias a su bajo costo, a su eficiente
gases y una tcnica colorimtrica de identificacin. desempeo y, sobre todo, a su gran disponibilidad. No
Adems, por las caractersticas de la enzima, se logr obstante, en los ltimos aos el panorama energtico
establecer las condiciones adecuadas en las que mundial ha variado notablemente; la escasez de combustible de los aos 70s en los Estados Unidos y las
debe ajustarse sta para efectuar la reaccin.
The

PALABRAS CLAVES
Biodiesel, transesterificacin, lipasas, etil esteres,
sistema hibrido reaccin- separacin.
ABSTRACT
The purpose of the research was to study the principal
variables that affect the transesterification reaction of
vegetable oil with ethanol by using enzymes (lipases)
free from Candida rugosa y Pseudomonas fluorescens
as a catalyzer. It also includes the theoretical analysis
of the viability to adapt a reaction-separation hybrid
system to the process that contributes to increase its
profitability; for this, it was first necessary to try using
an alkaline catalyzer with the purpose of understanding
better the nature of the reaction. The operation
parameters used were: temperature (69.5 C), type of
catalyzer (sodium hydroxide and lipases), alkaline
catalyzer concentration (o.34 wt per cent), lipases
concentration (12.5 wt percent), molar relation oil/
ethanol (1:7.4), oil mass (8 g) and reaction time (5 hrs.
for the chemical process and 24 hrs. for the enzymatic
process). Different vegetable oils were tested such as
palm three and the castor-oil plant, because these
plantations represent a great resource in our country
and could be exploited to the advantage of our economy.
The results showed that the refined palm tree oil was
the most appropriate. In a qualitative manner the ethyl
esters formation was verified (biodiesel) at the end of
the chemical process, using gas chromatography and
an identification colorimetric technique. Besides this,
due to the enzyme characteristics, it was possible to
establish the optimal conditions in which the enzyme
must be adjusted to proceed with the reaction.

crecientes preocupaciones sobre el inminente dao

que causan al planeta las emisiones producto del
consumo masivo de este tipo de combustibles en los
motores de automocin, han motivado el inters de
muchos investigadores en el mundo por desarrollar
nuevas fuentes de produccin de energa. Producto de
estas investigaciones surgi el biodiesel, para ser
empleado como un sustituto del diesel de petrleo.
Sin embargo uno de los principales problemas que
enfrenta hoy por hoy el proceso de produccin de
biodiesel es su baja rentabilidad, debido al elevado
costo de sus materias primas, ya que se requiere que
stas posean un bajo contenido de humedad y un bajo
contenido de acidez, lo que obliga al uso de aceites
refinados y alcoholes y catalizadores de alta pureza.
Por tal motivo, nuestra investigacin se ha enfocado en
el estudio de diversos aceites vegetales propios del
pas, as como en el uso de enzimas como agente
cataltico, y la adaptacin de un sistema simultneo
reaccin separacin, con el fin de desarrollar un
proceso ms rentable, mediante el uso de materias
primas que no requieran costosos tratamientos y la
reduccin del nmero de etapas de separacin.
2. TRANSESTERIFICACION Y BIODIESEL
Transesterificacin es el nombre con el que se conoce
al tipo de reaccin en la que los triglicridos (TG)
presentes en los aceites vegetales y grasas animales
se combinan con un alcohol (alcohlisis) en presencia
de un catalizador, para formar una mezcla de steres
grasos (biodiesel), cuyos tamaos y propiedades son
similares a las del diesel de petrleo y glicerina
(Encinar, 2002). La reaccin global de transesterificacin
puede ser representada por (Schuchardt, 1998):

KEY WORDS
Biodiesel. Transesterification. Ethyl esters. Lipases.
Hybrid system reaction-separation.

1. INTRODUCCION
Desde que en 1897 el ingeniero alemn Rudolf Diesel
present en la Asamblea General de Ingenieros de ese
pas un motor de combustin interna que llevaba su
nombre y el cual, segn haba demostrado, poda
funcionar con aceite vegetal, la idea de usar diferentes
variedades de aceites vegetales como sustitutos del
combustible diesel convencional ha sido reintroducida

La transesterificacin consiste de una secuencia de

tres reacciones reversibles consecutivas. El primer
paso es la conversin de triglicridos a diglicridos,
seguido por la conversin de diglicridos a
monoglicridos y, finalmente, monoglicridos a glicerina, producindose una molcula de ster por cada
glicrido en cada paso. Estequiomtricamente se
requieren tres moles de alcohol por mol de triglicrido,
pero en la prctica se emplea un exceso de alcohol
para desplazar el equilibrio hacia una mayor formacin

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Produccin de biodiesel a partir de aceites vegetales utilizando enzimas libres: estudio preliminar

de ster.
El biodiesel es un biocarburante oxigenado que puede
ser utilizado como un aditivo del diesel de petrleo en
mezclas del 10% (B10) y el 20% (B20), y en algunos
casos, dependiendo de su pureza, usado directamente en motores de ignicin (Stratta, 2000). Entre las
principales ventajas que ofrece su uso, se encuentran
la reduccin de emisiones gaseosas contaminantes y
de materia slida, as como el mantenimiento de un
equilibrio neto en el balance de CO2 atmosfrico, ya
que se considera que todo el CO2 emitido durante su
combustin, haba sido tomado previamente por la
planta para su proceso fotosinttico.
2.1Sistema Hidricos
Recientemente los procesos simultneos se vienen
desarrollando como alternativa a los procesos convencionales. La reaccin puede ser combinada con tcnicas de separacin como destilacin, cristalizacin,
extraccin lquido lquido, adsorcin y separacin
por membranas, para conseguir ciertas ventajas como
reducir la inversin de capital o sobrepasar las limitaciones del equilibrio impuestas por las reacciones
reversibles, lo que no se puede conseguir con los
procesos convencionales.
2.1.1 Procesos de reaccin-extraccin
La reaccin extractiva es un mtodo hbrido que
involucra simultneamente la reaccin y la separacin
de fases lquido lquido (Rivera, 2003). La inmiscibilidad
de estas fases se puede dar naturalmente dentro del
sistema de reaccin (p.e. por la formacin de un
producto parcialmente miscible con los reactivos) o la
segunda fase puede ser introducida con la adicin de
solventes, logrando la separacin selectiva de compuestos intermedios o productos, previniendo su posterior reaccin o la inhibicin de biomasa en sistemas
biolgicos, consiguiendo as un mayor rendimiento.
La reaccin extractiva se ha venido implementando de
manera exitosa en el campo biotecnolgico, aplicndose en la sntesis de productos qumicos. En este
campo se agrupan procesos de fermentacin extractiva
y reaccin enzimtica extractiva.
2.1.2 Reactores de membrana
Un reactor de membrana es una combinacin de un
reactor y una membrana en lnea, para la separacin
(Agar, 1999). La membrana obstaculiza el paso de uno
o varios de los componentes, a la vez que es
selectivamente permeable a otros, siendo til en
reacciones que se encuentran limitadas por el equilibrio, desplazando ste hacia la derecha, logrndose
as altas conversiones.
Estos reactores pueden ser utilizados en reacciones
de hidrlisis catalizadas por lipasas. Una de las
posibles configuraciones es aquella en la que la lipasa
es inmovilizada por la membrana en la interfase aceite/
agua y stos pasan a cualquiera de los lados de la
membrana, mientras los productos son retenidos al
otro lado para ser posteriormente extrados del reactor.

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Esta alternativa puede ser muy efectiva; sin embargo,
tiene diferentes desventajas, entre las que se encuentran las bajas velocidades de permeabilizacin, los
elevados costos debido a los materiales de la membrana, la baja estabilidad mecnica y una compleja
construccin del reactor, necesario para proporcionar
un rea suficiente para un volumen de catalizador
dado.

2.1.3 Destilacin Reactiva

La destilacin reactiva es un proceso combinado, en
el cual la reaccin qumica y la destilacin son
llevadas a cabo en una sola unidad de proceso. El
desarrollo de la reaccin con separacin en una sola
unidad ofrece distintas ventajas sobre la configuracin
convencional, ya que sta reduce costos de capital y
operacin, adems de aumentar la conversin de los
reactantes, selectividad y transferencia de masa (Cardona, 2001).
La destilacin reactiva es utilizada principalmente en
reacciones limitadas por el equilibrio, tales como,
esterificacin, alquilacin y reacciones de hidrlisis
de steres, donde la conversin puede ser
incrementada ms all de la conversin de equilibrio
debido a la continua remocin de los productos en la
zona de reaccin. Esto permite, entonces, una
enorme reduccin de capital y costos de inversin, por
lo que en los ltimos aos algunos trabajos se han
enfocado en el empleo de esta tcnica en las reacciones de esterificacin de cidos grasos (Omota et al.,
2003).
3. MATERIALES
El aceite de palma crudo y refinado fue suministrado
por la ALIANZA TEAM S.A. (Bogot). El aceite de
higuerilla fue adquirido en una farmacia local. Las
enzimas de Cndida rugosa (lipasa AY) y
Pseudomonas fluorescens (lipasa AK) fueron
gentilmente proporcionadas por Amano Enzyme Inc.
(Nagoya, Japn). El etanol y el NaOH utilizados fueron
de grado analtico (Sigma Chemical Co.). Todos los
dems reactivos empleados fueron de grado analtico
y fueron suministrados por un proveedor local.

4. METODOS
4.1 Caracterizacin de los aceites
Cada uno de los aceites se caracteriz siguiendo los
mtodos del Instituto Colombiano de Normas Tcnicas ICONTEC (Gaviria). Se estableci el contenido de
cidos grasos libres mediante el ndice de acidez
(Norma 218), el grado de saturacin mediante el ndice
de yodo (Norma 283), el contenido de materia
saponificable mediante el ndice de saponificacin
(Norma 335), y el contenido de humedad mediante el
mtodo Karl Fischer. Adems se determinaron propiedades como la densidad (Norma 336) y el ndice de
refraccin (Norma 289).

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crudo y refinado y del aceite de higuerilla, se muestran
en la Tabla 1. Estos resultados muestran que, de las
4.2 Transesterificacin
La reaccin de transesterificacin fue llevada a cabo tres variedades de aceite analizadas, el aceite de
en un reactor de vidrio enchaquetado de 25 ml, equipa- palma refinado y el aceite de higuerilla poseen el
do con un bao termostatado y un agitador magntico. mayor grado de insatauracin; por otra parte, los
El procedimiento seguido se describe a continuacin. ndices de acidez del aceite de palma crudo y del
El sistema se calent hasta 70 C para eliminar la aceite de higuerilla fueron 8.98 y 5.55, respectivamenhumedad, y luego se adicionaron 8 g de aceite. te, los cuales son valores relativamente altos compaCuando el sistema alcanz de nuevo los 70 C, se rados con el valor del ndice de acidez para el aceite de
adicion una cantidad previamente establecida de una palma refinado el cual fue 1.52.
solucin de etxido de sodio. Se conect el sistema
de agitacin y se dio inicio a la reaccin. Cada 5.1 Efecto del catalizador
experimento se prolong durante 5 h, al cabo de las Para el proceso qumico se emplearon diferentes
cuales se asumi que la conversin a steres fue concentraciones de catalizador y se encontr que
completa. Se enfri el sistema y la mezcla reaccionante valores muy altos de stas conducan a la formacin
se transfiri a un embudo de separacin, donde luego de un gel en la mezcla reaccionante; en tanto con
de 2 h, se observ la formacin de dos capas, una concentraciones muy pequeas de catalizador, no se
superior formada principalmente por etil steres, y otra presentaba formacin de steres. Por lo tanto se
que contena la mayor parte del glicerol producido determin que existe una concentracin ptima de
durante la reaccin. Cuando se desarroll el proceso catalizador para la cual ste no interviene en el
enzimtico se prepar inicialmente una solucin de proceso, generando reacciones de saponificacin.
aceite-hexano 0.34M; esta solucin se llev al reactor, Esta concentracin corresponde, para los ensayos
donde se mezcl con etanol y agua, en unas propor- realizados, al 0.34% respecto a la cantidad total de
ciones definidas y se calent el sistema hasta 40 C. aceite utilizada. En el proceso enzimtico se observ
Una vez alcanzada esta temperatura se adicion la que el uso directo de la enzima sin ningn tratamiento
enzima y se fij una velocidad de agitacin tal que previo no favorece la formacin de steres.
asegurara que sta se mantuviera suspendida en la
mezcla reaccionante. En este caso la reaccin se
prolong durante 24 h.

4.3 Anlisis de steres

El contenido de la capa superior extrada del embudo
de separacin fue analizado por cromatografa de
gases y por un mtodo colorimtrico cualitativo de
identificacin de steres. El cromatgrafo empleado
fue un Perkin Elmer equipado con un detector de
ionizacin de llama. La columna capilar utilizada fue
una Perkin Elmer de polietilenglicol cido modificada
(PE-FFAP) de 30 m con un dimetro interno de 0.32
mm y un espesor de pelcula de 0.25 m. Se us
nitrgeno como gas de arrastre. La temperatura del
horno fue programada en un intervalo de 150 a 240 C
a una velocidad de calentamiento de 10 C/min., y las
temperaturas del inyector y el detector fueron 240 C
y 250 C, respectivamente.

Figura 1. Cromatograma del aceite de palma refinado.

Pico 1: isooctano.

5. RESULTADOS
Los ndices de saponificacin, de yodo, de acidez y de
refraccin, as como la densidad del aceite de palma
Tabla 1. Resultados de la caracterizacin de aceites
vegetales.
Parmetros
ndice saponificacin
ndice yodo
ndice acidez
ndice refraccin 22 C
Densidad 22 C

Refinado
200.56
37.8
1.52
1.47
0.91

Aceites
Crudo
197.66
52.61
8.98
1.47
0.91

Higuerilla
180.97
20.74
5.55
1.48
0.96

Figura 2. Composicin de los etil steres del aceite de

palma refinado. Pico 1: isooctano. Picos 2-5: etil
esteres de acido palmtico, esterico, oleico, y linolico.

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Produccin de biodiesel a partir de aceites vegetales utilizando enzimas libres: estudio preliminar

5.2Anlisis de la transesterificacin
La formacin de etil steres en el proceso qumico, fue
verificada mediante cromatografa de gases. La Figura
1 muestra el cromatograma correspondiente al aceite
de palma refinado diluido en isooctano. Como se
puede apreciar, hasta un tiempo de retencin de 20
minutos solo se observa el pico correspondiente al
isooctano, pero no los correspondientes a los cidos
grasos del aceite de palma. La Figura 2 corresponde
al cromatograma de los etil steres obtenidos durante
la reaccin qumica, diluidos en isooctano; en ella se
observa la formacin de 4 picos (picos 2-5) que
corresponden a los etil steres de los cidos grasos
del aceite de palma; adems se presenta una superposicin de los picos correspondientes al etanol y al
isooctano (pico 1), debido a que poseen los mismos
tiempos de retencin. Por lo tanto, puesto que ambos
cromatogramas fueron obtenidos operando el
cromatgrafo bajo las mismas condiciones, se comprueba la formacin de etil steres; resultados que
coinciden bastante bien con los reportados en la
literatura (Gupta, 2004).
6. CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos de la caracterizacin de los
aceites sugieren que el aceite de palma refinado es el
ms apropiado para emplearse como materia prima en
la reaccin de transesterificacin utilizando
catalizadores alcalinos, debido a que posee una cantidad importante de cidos grasos insaturados, lo cual
permite obtener un biocombustible con buenas propiedades a bajas temperaturas; adems, su bajo contenido de cidos grasos libres no representa una condicin limitante para el uso de catalizadores alcalinos.
La concentracin de catalizador alcalino es un factor
importante a tener en cuenta en reacciones de
transesterificacin con aceites vegetales, especialmente cuando su contenido de cidos grasos libres es
considerable, ya que valores elevados de ste contribuyen a la aparicin de reacciones indeseadas que
reducen el rendimiento global de la reaccin.
Cuando se emplea la enzima como agente cataltico,
es necesario el uso de un solvente que ayude a la
hidrlisis de sta. Tambin se deben ajustar las
condiciones de pH y actividad del agua debido a que
constituyen factores importantes en la reaccin.
Dado que para las condiciones empleadas en la
cromatografa, el solvente (isooctano) y el etanol
eluyen al mismo tiempo, es necesario, con el fin de
cuantificar la cantidad de etanol presente al final de la
reaccin, utilizar un solvente diferente que garantice
que no ocurra una superposicin de los picos.

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investigacin Obtencin de biodiesel a partir de aceites de palma y de higuerilla por un proceso de reaccin
separacin catalizado por enzimas inmovilizadas

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constituyentes principales del biodiesel.
Investigacin y Desarrollo Departamento de
Capacitacin y Desarrollo de Mercado. Agosto

7. AGRADECIMIENTOS
A la Universidad Nacional de Colombia sede Manizales
a travs de la Direccin de Investigacin DIMA y a
COLCIENCIAS por el apoyo financiero a travs de la

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Carlos Ariel Cardona Alzate. IngeAUTORES
niero Qumico de la Academia Estatal de Ingeniera Qumica Fina de
Julin Andrs Torres Montoya.
Mosc. M.Sc. en Ingeniera Qumica
Estudiante de Ingeniera Qumica.
de Sntesis Orgnica de la citada
Universidad Nacional de Colombia
academia, 1995. Ph.D. en Ingeniera
sede Manizales.
Qumica de la citada academia, 2001.
Jtorres@unalmzl.edu.co
Director Grupo de investigacin en
Procesos Qumicos Catalticos y Biotecnolgicos.
Trabaja como profesor asistente en la Universidad
Nacional de Colombia sede Manizales. Carrera 27 No.
64-60, Of. F-505. Tel.: 8810000 Ext. 417. Manizales,
Leandro Castao Chiguach.
Colombia. E-mail:
Estudiante de Ingeniera Qumica.
ccardona@nevado.manizales.unal.edu.co.
Universidad Nacional de Colombia
sede Manizales.
Leandrocastano@unalmzl.edu.co

Carlos Eduardo Orrego. Ingeniero Qumico, Especialista en Fsica,

Especialista en AlimentosProfesor
Departamento de Fsica y Qumica.
Universidad Nacional de Colombia
sede Manizales.
corrego@nevado.manizales.unal.edu.co.

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