Universidad de la

AMAZONIA

Qumica, VII Semestre

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PROTENAS SOLUBLES

POR EL MTODO DE BIURET
Andrs Ortiz, Yury P. Garca
24 de Marzo del 2015
Resumen
1.1 En la determinacin cuantitativa de protenas solubles por el mtodo biuret extrajimos
por solubilidad en cloruro de sodio las protenas, albminas y globulinas
presentes en una muestra de maicena de igual forma Realizamos la curva
de calibracin para la determinacin cuantitativa de las protenas solubles,
de acuerdo a las leyes de Lambert Beer donde obtuvimos como resultado
las concentraciones de la muestra 6 : 0,125 ppm y la muestra 7 : 0,043
pmm indicndonos una concentracin muy baja por no haber utilizado una
muestra ms concentrada.

Introduccin
Las protenas son el principal nutriente para la formacin de los msculos del
cuerpo. Adems cumplen una funcin esencial de transportar las sustancias
grasas a travs de la sangre, elevando las defensas del cuerpo. Las protenas
estn compuestas de carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. La mayora
tambin contienen azufre y fsforo. Las mismas estn formadas por la unin de
varios aminocidos, unidos mediante enlaces peptdicos, son macromolculas
que son solubles en agua, estas se pueden clasificar de manera general en
protenas globulares y protenas fibrosas. Las protenas globulares son
aquellas que tienden a agregarse en formas esferoidales y no establecen
interacciones intermoleculares como lo son puentes hidrogeno (caractersticas
de las protenas fibrosas) siendo solubilizadas y las protenas fibrosas son
molculas muy alargadas, cuyas estructuras secundarias constituyen sus
motivos estructurales predominantes. Muchas protenas fibrosas desempean
un papel estructural, en funciones de conexin, de proteccin o de soporte.
Otras, como las protenas ciliares y musculares presentan funciones motrices.

Los compuestos que tienen dos o ms enlaces peptdicos, dan un color rosado
o lila caracterstico, cuando se trata con reactivo de Biuret. El reactivo de Biuret
consiste en una solucin de sulfato cprico a la que se le adicionan otros
compuestos que evitan que los iones cprico puedan reducirse. El color es
debido al complejo de coordinacin del tomo de cobre con cuatro tomos de
nitrgeno provenientes de los enlaces peptdicos. Los espectros de absorcin
de los complejos de cobre formados por diferentes protenas son similares y
por consiguiente es posible utilizar una protena cualquiera como patrn de
coloracin
Materiales y Mtodos
Preparacin de la muestra
Pesamos 2.0 gramos de maicena, adicionamos 10 ml de NaCl al 5%, agitamos
durante 10 minutos, seguidamente centrifugamos a 2.800 r.p.m. y recibimos el
sobrenadante en un matraz aforado de 25 ml, realizamos esta ltima operacin 2
veces y aforamos con un volumen de NaCl 5%. Descartarmos el residuo. Y obtuvimos
un extracto de protenas que contiene albminas y globulinas, con ste extracto de
protena proseguimos a la determinacin espectofotomtrica.
Para la determinacin de protena por el mtodo de Biuret se realizo una curva de
calibracin utilizando un patrn de albmina a una concentracin de 5 mg / mL.
Rotulamos 8 tubos de ensayo y procedimos de la siguiente manera:
MUESTRA / TUBO
Patrn de albmina
Muestra
Agua
Biuret

B
0.0
0.0
2.0
4.0

1
0.2
0.0
1.8
4.0

2
0.4
0.0
1.6
4.0

3
0.6
0.0
1.4
4.0

4
0.8
0.0
1.2
4.0

5
1.0
0.0
1.0
4.0

6
0.0
0.5
1.5
4.0

7
0.0
1.0
1.0
4.0

Se mezcl bien y a la vez se dej en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente

para el desarrollo del color, seguidamente se ley la absorbancia a 540 nm y
respectivamente elaboramos la curva de calibracin,

Resultados y Discusin
se realiz la curva patrn de protena, obtenida por el mtodo de regresin lineal de
mnimos cuadrados; donde las abscisas (x) representan la concentracin en ppm de
protena, y las ordenadas (y) los valores de la absorbancia de cada concentracin,
grfica 1.

curva de calibrado
0.3
f(x) = 0.21x + 0.1
0.2
R = 0.98
absorbancia a 540 nm

0.1
0
0

0.5

Concentracin en ppm

Grafica 1curva de calibracin para un patrn de albumina.

Calculo para determinar la concentracin de protenas solubles en una muestra

de maicena.

La determinacin de la cantidad de protena en las muestras problema, tubos seis y siete,

se obtuvo con el valor de la absorbancia obtenida por el espectrofotmetro para cada
muestra, mediante la interpolacin de estos valores en la curva patrn (grafica 1) y
despejado los valores respectivos de x de la ecuacin 1 tal como se muestra a
continuacin.
y=mx +b Ecuacin 1

Despejando
x=

yb
m

Ecuacin 2

Por lo tanto la concentracin de protenas solubles en la muestra de maicena para el

tubo nmero 6 se determina mediante la ecuacin 2, de la siguiente manera.
concentracion=

0,1230,097
=0,125 ppm
0,2076

De igual forma para el tubo nmero 7 se hace el clculo utilizando la ecuacin 2.

concentracion=

0,1060,097
=0,043 ppm
0,2076

Debido a que el mtodo de biuret se basa en la formacin de un complejo coloreado

entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. La intensidad

de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces

peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias
interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la
cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados, es debido a esto que en
nuestro caso nos dio una concentracin muy baja. Por lo tanto se asumieron valores para
la muestra problema dentro del rango de la curva de calibracin.
Conclusiones
De acuerdo a los resultados obtenidos en la determinacin de la concentracin de
protena solubles en la muestra de maicena, que aunque no son los esperados, la
concentracin de protenas tendra que ser mayor debido a que el mtodo es poco
sensible pero a concentraciones ms altas este mtodo es muy selectivo.