PRCTICA N 4

DOSAJE DE HEMOGLOBINA (Hb)

Hemoglobina
Forma el pigmento rojo de la sangre. Es una protena conjugada
perteneciendo al grupo de las cromo protenas o protenas
conjugadas.
Est constituida por una parte proteica, la globina, y un ncleo
prosttico coloreado, el hemo.
La patologa relacionada con la disminucin de la hemoglobina srica
es la Anemia. Esta patologa implica una reduccin en el nmero de
glbulos rojos en la cantidad de hemoglobina, y en el volumen
globular, y consecuentemente disminucin de la capacidad de
transporte de oxgeno en la sangre.
METODO
Mtodo colorimtrico para determinacin de hemoglobina
como Cianuro de Hemoglobina en sangre.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La Hemoglobina (Hb) presente en la muestra, en presencia de
ferricianuro, se oxida a hemoglobina (tambin llamada meta
hemoglobina) que a su vez, se combina con iones cianuro a pH 7,2
convirtindose en cianuro de hemoglobina (o
ciannometahemoglobina). Todos los homocromogenos, a excepcin
de la sulfohemoglobina, reaccionan completamente en 3 minutos y la
lectura se efecta a 540mm.
PROCEDIMIENTO
TUBOS

BLANCO

DESCONOCIDO

Reactivo de
Hemoglobina

5 ml

5 ml

Muestra de
Sangre
1.

20

Rotulamos 5 tubos de ensayo como Blanco

de reactivo y desconocido

2.

En el tubo rotulado Blanco, le aadimos con

ayuda de una pipeta graduada 5 ml de
Reactivo de Hemoglobina.

3.

En el tubo rotulado Desconocido, le

aadimos con ayuda de una micropipeta le
aadimos 20 microlitros de muestra de sangre
y con una pipeta graduada 5 ml de Reactivo
de Hemoglobina

4. Dejar en reposo por espacio de 5 minutos.

5. Leer en absorbancia verde a 540 nm llevando a cero el
espectrofotmetro con agua destilada o con el reactivo de
trabajo.
6. El color de reaccin es estable al menos 24 horas, por lo que
la absorbancia puede ser leda dentro de este tiempo.

MANEJO DEL ESPECTROFOTMETRO

Encender: ENTER
NUEVA FECHA: _/_/_. ENTER
PULSAR EL N 1= ABSORBANCIA
PUSALAR EL N 1= MONOCROMATICA

PULSAR EL N 5= 546/540 nm. ENTER

VOL. MUESTRA pulsar n 100 ENTER
TIEMPO pulsar n 0 ENTER
INTRODUCIR LINEA DE BASE: poner agua
destilada (o segn tcnica) y pulsar PUMP (Limpiar
con papel)
INTRODUCIR PATRON pulsando PUMP (limpiar con
papel)
INTRODUCIR MUESTRA pulsando PUMP(limpiar
con papel)
AL TERMINAR: lavar con Agua destilada
manteniendo pulsado WASH.

Calculo de los resultados

Hemoglobina g/dl = D x FACTOR
D=
Valores de Referencia:
Varones: 14-16 g/dl
Mujeres: 12-14 g/dl

CUESTIONARIO
1.- Interprete los valores de Hb obtenidos en la prctica
2.- Interprete si los valores estn disminuidos y si estn aumentados

Hemos decidido tomar los valores de la grfica y nos

ha salido: 16 g/dl en la muestra 1 y 14,5 g/dl en la
muestra 2, por lo que son valores normales dentro
de un adulto.

Si nos hubieran salido unos valores por debajo de

los valores normales: indica anemia que puede
obedecer a diferentes causas: anemia primaria,
cncer, embarazo, enfermedades renales o
hemorragias.

Por encima de los valores normales: puede

deberse a cardiopatas, deshidratacin o estancia en
lugares de gran altitud.
3.- Qu elemento transporta la hemoglobina, que es esencial para la
vida?
4.- Qu tipos de hemoglobina la transporta?
5.- Reporte lo realizado en la prctica.

Concentracin de hemoglobina= 11,5 g/dl y A540=

0,136
-Patrn 2:Concentracin de hemoglobina= 7,5 g/dl y
A540= 0,069
-Patrn 3:Concentracin de hemoglobina= 3,75 g/dl
y A540= 0,056

*A540 se refiere al espectrofotmetro.

xde glucosa
FxD
carol
ya estudiastge
semio
F= concentracion estandar(100) entre lecturaestandar
F= 31.15
no