Teora y prctica para la extraccin y

purificacin del ADN de palma de aceite

Theory and Practice for the Extraction and Purification
of the Oil Palm DNA
Pedro J. Rocha Salavarrieta 1

RESUMEN
Uno de los ms importantes aportes a la biologa ha sido el reconocimiento del ADN como la molcula de la
vida. El estudio de sus propiedades fisicoqumicas y biolgicas ha desarrollado, en menos de 50 aos, un enfoque
totalmente novedoso en lo referente al origen, flujo y almacenamiento de la informacin gentica en todo ser
vivo. Debido a que en el ADN se encuentran cifradas las instrucciones que definen las caractersticas propias de
cada organismo, diversas tecnologas y sistemas de anlisis se han desarrollado para la caracterizacin de esta
molcula. Los resultados de tales estudios demuestran que caractersticas como la resistencia a enfermedades,
potencialidades de produccin, tamao y color de los frutos, entre otros, son debidas a la expresin de la informacin
gentica y su interaccin con el medio ambiente. La aplicacin de este conocimiento se ha convertido en una
herramienta fundamental en programas de mejoramiento gentico. Por lo tanto, en la presente revisin se presentan
conceptos bsicos y explicaciones de los mtodos utilizados para la extraccin de esa informacin gentica
empleando, como ejemplo, el protocolo usado para el aislamiento de ADN de palma de aceite (Elaeis guineensis
Jacq.). Se espera que esta revisin sea el comienzo de una serie de artculos en los que se ver el vertiginoso
desarrollo de la gentica y la biotecnologa en los ltimos aos y la importancia de aplicar las tcnicas moleculares
en palma de aceite.

SUMMARY
One of the most important contributions to biology has been the recognition of the DNA as the lifes molecule.
The study of its physicochemical and biological properties has developed, in less than 50 years, a complete different approach in relation to the origin, flux, and storage of genetic information in all known living-forms. Because
inside the DNA molecule are ciphered the instructions that define all the characteristics of any organism, several
technologies and systems of data analysis have been developed for the characterization of this molecule. The
results of such studies have demonstrated that characters such as resistance against diseases, productivity potential, size and colour of fruits are due to the expression of genetic information and its interaction with the environment. Nowadays, the use of this knowledge is a fundamental tool in breeding programms. In this review, some
basic concepts and explanations about methods currently used for DNA extraction, in particular the protocol used
for oil palm, are presented. This review will be the starting point of a series of papers related with the importance
of applying molecular techniques in oil palm.
Palabras Claves: Biologa molecular, Palma de aceite, ADN, Marcadores moleculares.
1 PhD. Investigador Titular. Laboratorio de Marcadores Moleculares, rea de Fisiologa y Mejoramiento. Cenipalma.
Calle 21 No. 42C-47, Bogot, Colombia. E-mail: pedro.rocha@cenipalma.org.

P A L M A S - Vol. 23 No. 3, 2002

P. J. Rocha S.

INTRODUCCIN
Las caractersticas fisiolgicas y
bioqumicas de todo ser vivo estn
contenidas en sus respectivos
genomas (ver glosario). Los genomas de bacterias, hongos, plantas,
animales y algunos virus estn
compuestos por molculas de cido
desoxirribonuclico (comnmente
llamado ADN). El ADN es una
estructura qumica cuyos elementos fundamentales (nucletidos) se
organizan de manera lineal
generando enormes secuencias de
informacin (Fig. 1, Tabla 1). La
informacin que define y codifica
un carcter determinado se
denomina gen (Lewin 1995). Los
genes se organizan linealmente y
se agrupan formando estructuras
llamadas cromosomas, los cuales
pueden ser vistos bajo el microscopio durante ciertas etapas del
ciclo de vida de la clula.
Los genes que posee un individuo
en su genoma definen su genotipo.
La expresin del genotipo es
afectada en gran medida por el
medio ambiente, determinando as
la apariencia o rendimiento de un
individuo (fenotipo). La gentica
estudia cmo el genotipo y el

Figura 1. Niveles de organizacin del ADN. Toda clula posee un ncleo en

el cual se encuentra el ADN. La condensacin del ADN constituye
los cromosmas. El ADN es una doble hlice conformada por
nucletidos. A lo largo de la doble cadena de ADN se localizan los
genes, los cuales codifican protenas. La interaccin de los genes
con el medio ambiente define las caractersticas externas de un
individuo (fenotipo).

Tabla 1. Variacin del tamao del genoma para algunos genomas vegetales. (basado en Bennet y Leitch 2001).

Nombre comn
Trigo
Tabaco
Caa de azcar
Maz
Caf
Palma de aceite
Papa
Yuca
Frjol
Arroz
Uva
Arabidopsis

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PALMAS

Nombre cientfico
Triticum aestivum L.
Nicotiana tabacum L.
Saccharum officinarum L.
Zea mays L.
Coffea arabiga L.
Elaeis guineensis Jacq.
Solanum tuberosum L.
Manihot esculenta Krantz
Phaseolus vulgaris L.
Oryza sativa L.
Vitis vinifera L.
Arabidopsis thaliana

Tamao del genoma

(en pares de nucletidos)

Nmero de
cromosomas

16.978.500
5.733.000
3.969.000
2.670.500
1.176.000
980.000
858.000
808.500
588.000
490.000
417.000
171.500

42
48
80
20
44
32
24
72
22
24
38
10

Teora y prctica para la extraccin y purificacin del ADN de palma de aceite

fenotipo son transmitidos de padres a hijos y junto

con la biologa molecular han desarrollado tcnicas
de anlisis de poblaciones y de individuos que
permiten ubicar, caracterizar y explicar la heredabilidad de genes u otros fragmentos de ADN
(Lewin 1995).
La linealidad de la molcula de ADN y la consecuente disposicin de los genes en cromosomas
hacen posible que genes vecinos se hereden juntos. Este hecho, junto con las herramientas
experimentales y de anlisis, han permitido generar
mapas, en los cuales cualquier fragmento de ADN
(marcador molecular) puede ser utilizado como una
va indirecta para seguir el patrn de herencia de
una caracterstica. Los marcadores moleculares
establecen relaciones de vecindad con genes de
inters, determinando su localizacin dentro del
genoma del organismo estudiado. En Arabidopsis
thaliana, la primera planta cuyo genoma fue
secuenciado completamente, existen alrededor de
25.500 genes (The Arabidopsis Genome Initative
2000). Cada uno de ellos vara en longitud,
teniendo la mayora de ellos entre 500 hasta varios
miles de nucletidos. Sin embargo, con base en la
informacin obtenida para A. thaliana y las
estimaciones para otras plantas, se calcula que slo
del 15 al 30% del genoma contiene secuencias
codificantes (genes). El restante 85 a 70% se
distribuye en secuencias reguladoras indispensables
para la expresin de los genes y en secuencias
repetidas que varan entre una y miles de copias
por clula (The Arabidopsis Genome Initative 2000).
Estas secuencias repetidas se pueden encontrar
agrupadas en regiones particulares del cromosoma
(centrmeros y telmeros) o dispersas a lo largo
del genoma (Flavell y Twell 1996). A la determinacin de la posicin de genes particulares,
secuencias reguladoras y repetidas dentro del
genoma se le denomina mapeo gentico.
Para mapear genes, es decir, para determinar la
ubicacin de una caracterstica (gen) en el genoma,
se hace necesario realizar cruzamientos y analizar
sus progenies con procedimientos estadsticos
relativamente sencillos (Fig. 2). El fitomejoramiento
tradicional ha dado las herramientas conceptuales
para analizar la herencia de caracteres fenotpicos
evidentes, tales como tamao, color, productividad,
forma de frutos, etc. (Griffiths et al. 1993). Por su
parte, el rea de marcadores moleculares ha

permitido generar y analizar mltiples puntos de

informacin independientemente de su
funcionalidad. Y es la integracin de las dos
disciplinas la que permite acelerar el proceso de
mejoramiento gentico de poblaciones e individuos
por correlacin entre la informacin fenotpica y
la molecular.
A continuacin se describen algunas de las tcnicas
empleadas para manipular el ADN de plantas. En
la actualidad, la aplicacin de esas tcnicas es de
especial inters para la exitosa ejecucin de
programas de mejoramiento gentico.

Figura 2. Esquema paraseguir el comportamiento de una

caracterstica (gen responsable del color) en una
poblacin hipottica. Una planta femenina que
expresa el color (gen dominante) se cruza con
una planta masculina que no lo exhibe (gen
recesivo). El resultado del cruce es una
descendencia en la que todas las plantas de esa
primera generacin filial (F1) presentan color. Si
se cruzan dos miembros de esta descendencia se
genera una poblacin (F2), en la cual se puede
apreciar que tres de las cuatro individuos posee
color y uno no. Este modelo de herencia de
genesha sido observado para muchas
caractersticas. Es conocido como la ley de
segregacin de caracteres y fue propuesta de J.G.
Mendel hacia 1865. La aplicacin de este
concepto permite predecir las proporicones
esperadas para algunas caractersticas en
cruzamientos particulares. (Lewin 1995).

PALMAS - Vol. 23 No. 3, 2002

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P. J. Rocha S.

AISLAMIENTO DEL ADN

El primer paso para desarrollar experimentos con
marcadores moleculares es la extraccin del material gentico de plantas que, por sus caractersticas
fenotpicas, poseen caracteres agronmicos de
inters. Para la extraccin del ADN vegetal es
necesario tener en cuenta tres factores:
1. El tipo de planta y de tejido que se va a emplear
como fuente. Por ejemplo, los tejidos jvenes
contienen ms ADN que los tejidos viejos.
Adems, es necesario considerar la composicin
bioqumica de los tejidos. Por ejemplo, el
mtodo de extraccin del material gentico
proveniente de tejidos ricos en compuestos
fenlicos es diferente al mtodo empleado con
tejidos ricos en carbohidratos o aceites.
2. El tipo de ADN que se va a extraer. Las plantas
poseen tres tipos de ADN: el nuclear, el
mitocondrial y el cloroplstico. Reciben estos
nombres dependiendo del tipo de organelo
celular en el que el ADN se encuentre. Los
distintos tipos de ADN tienen caractersticas
bioqumicas semejantes. Sin embargo, el tipo de
informacin biolgica que codifican es
completamente diferente.
3. El tipo de anlisis a realizar (RFLP, RAPD, AFLP,
secuenciacin, etc). Con base en la cantidad y
la calidad del ADN se pueden desarrollar diversas
tcnicas de anlisis, algunas de las cuales sern
explicadas con mayor detalle en prximos
artculos.
El objetivo principal en un experimento de
extraccin de ADN es obtener una preparacin de
buena calidad y en gran cantidad. La calidad se
refiere a la posibilidad de almacenar el ADN por
tiempo indefinido, manteniendo su estructura y
propiedades y es la calidad del ADN el factor
responsable de la reproduciblidad en experimentos
posteriores. La cantidad, por su parte, es un
concepto relativo que depende, entre otros, del
nmero y estado de las clulas propias del tejido a
estudiar. Por lo tanto, como regla general, un buen
mtodo de extraccin debe mantener la integridad
fsica y bioqumica del ADN e incrementar sus
rangos de pureza y concentracin (Sambrook et al.
2001).

12

PALMAS

En plantas existen mltiples protocolos para extraer

y purificar el ADN. Sin embargo, todos ellos
incluyen cuatro pasos indispensables:
1. Ruptura de tejidos y paredes celulares. Este paso
consiste en pulverizar el material vegetal a bajas
temperaturas, generalmente empleando nitrgeno lquido o hielo seco (Rogers y Bendich
1988). Tambin existe la pulverizacin en seco,
un proceso en el cual los tejidos se deshidratan
por secado en un horno o con silicagel. Sin
embargo, este procedimiento no es de aplicacin
general y en palma de aceite, por ejemplo, el
tratamiento de secado no permite recuperar
ADN de buena calidad. Para degradar paredes
celulares se pueden utilizar, adems, enzimas
tipo celulasas.
2. Ruptura de membranas. Una vez el tejido es
disgregado en clulas, se hace necesario romper
las membranas celulares para liberar el ADN.
Esto puede ser llevado a cabo qumicamente con
detergentes (SDS, Triton o detergentes
comerciales). Tambin se emplean mtodos
fsicos, como aquellos basados en ultrasonido.
3. Inhibicin de enzimas que destruyen al ADN.
Como un mecanismo de defensa natural, las
clulas contienen enzimas que destruyen al ADN
(ADNasas). Estas enzimas deben ser inactivadas
para garantizar la calidad de las preparaciones
de ADN. La inhibicin puede realizarse
mediante mtodos fsicos, tales como desnaturalizacin por calor (a temperaturas de 65 C) o
con mtodos qumicos (Tablas 2 y 3). Estos
ltimos incluyen tratamiento con solventes
orgnicos (fenol y cloroformo), con antioxidantes (Ditiothreitol y -mercaptoetanol), con
agentes quelantes (EDTA, EGTA) que capturan
los iones magnesio necesarios para la funcionalidad de las ADNasas, o con agentes
caotrpicos que actan removiendo el agua
estructural de las protenas (Rogers y Bendich
1988). Por lo general se utlizan mezclas de varios
de estos reactivos para asegurar la inhibicin de
tales enzimas.
4. Extraccin de contaminantes. El objetivo de extraer ADN es obtener preparaciones enriquecidas
en esta molcula. Sin embargo, el ADN est
asociado con protenas (histonas) e inmerso en

Teora y prctica para la extraccin y purificacin del ADN de palma de aceite

Tabla 2. Algunos agentes contaminantes en preparaciones de ADN y alternativas para su extraccin (basado en
Sambrook et al. 2001; Taylor et al. 1993; Rogers y Bendich 1988).

Contaminante
Polisacridos
Lpidos y grasas

Tratamiento
Uso de detergentes (CTAB).
Incubacin enzimtica (con lipasas).
Uso de detergentes (SDS, Triton).
Tratamiento con cloroformo, alcohol isoamlico.

Protenas

Incubacin enzimtica (con proteasas).

Extraccin con fenol y cloroformo.
Uso de detergentes.

Pigmentos

Uso de alcoholes.

ARN

Incubacin enzimtica (con ARNasa).

Electroforesis.
Cambios en el pH.

Alcoholes

Evaporacin a temperatura ambiente.

Compuestos fenlicos
Detergentes
Sales
Slidos insolubles

Tratamiento con cloroformo y alcoholes.

Uso de solventes orgnicos.
Uso de etanol al 70%.
Uso de soluciones acuosas con posterior centrifugacin.

un medio que contiene estructuras de

composicin qumica diversa. Adems, los
reactivos empleados en los procesos iniciales de
purificacin se convierten en agentes
contaminantes (Tabla 2). Las metodologas para
retirar los contaminantes de una preparacin de
ADN incluyen: la centrifugacin a altas
velocidades, la electroforesis, la separacin a
travs de columnas e incluso la utilizacin de
imanes (biomagntica) para obtener preparaciones de alta pureza. Un contaminante
generalmente presente en preparaciones de ADN
es el ARN (cido ribonuclico). Esta molcula se
degrada por incubacin con la enzima ARNasa.

a pH cido (menor de 4,0), es insoluble a pH 5.6,

pero es soluble a pH 8,0. Por lo tanto, los procesos
de extraccin, purificacin y almacenamiento del
ADN deben mantener el pH ptimo y brindar una
alta concentracin inica (Howell 1973).

Todos los pasos anteriormente mencionados se

basan en las caractersticas fisicoqumicas del ADN.
Pues aparte de ser una molcula de alto peso molecular, muy larga y delicada, es un cido capaz de
formar sales con iones cargados positivamente
(cationes). Adems, es soluble en soluciones concentradas de sales (sal de cocina, por ejemplo), pero
insoluble en alcoholes (tipo etanol o isopropanol).
Adicionalmente, el ADN es destruido (depurinado)

PROTOCOLO DE EXTRACCIN DE
ADN DE PALMA DE ACEITE
(CENIPALMA)

Ya con el conocimiento de las caractersticas generales de los procedimientos de extraccin de ADN,

a continuacin se presenta uno de los protocolos
de extraccin de ADN de palma de aceite utilizado
en Cenipalma (Villegas y Fuentes, datos sin publicar). Dicho protocolo es una variacin de la
metodologa propuesta por Dellaporta et al. (1983).

1.

Recolectar 8 g de tejido foliar jven y fresco.

Si debido a razones logsticas no se puede
procesar el material el mismo da de la recoleccin, ni tampoco se cuenta con nitrgeno
lquido o hielo seco para almacenarlo, se puede

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mantener humedecido a temperatura ambiente por no ms de tres das. Sin embargo,

el tejido foliar se puede almacenar a 80C por
tiempo indefinido.
Pulverizar el tejido con nitrgeno lquido.
Aadir 8 ml de solucin de extraccin. Dicha
solucin contiene: 150 mM de Tris-HCl, pH
8,0; 15 mM de EDTA, pH 8,0; 1 M de cloruro
de sodio; 1% (peso/volumen) de CTAB; 1%
(peso/volumen) de PVP-3600 y 5% (volumen/
volumen) de -mercaptoetanol. Las funciones
de cada reactivo en la solucin se presentan
en la Tabla 3.
Incubar a 65C en bao Mara durante 30 min.
Mezclar el tubo delicadamente cada 10
minutos. Este paso permite desnaturalizar (destruir) las enzimas y dems protenas presentes
en el tejido foliar pulverizado.
Centrifugar a 2.000 x g, durante 15 min. Este
paso remueve todos los residuos slidos de la
preparacin.
Transferir la fase acuosa superior (sobrenadante) a un tubo limpio y aadir medio
volumen (4 ml) de fenol. Agitar suavemente.
En este paso se siguen destruyendo las
protenas (debido a la presencia del fenol).
Centrifugar a 2.000 x g, durante 20 min.
Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y
aadir medio volumen (4 ml) de cloroformo:octanol.
Incubar la mezcla con agitacin, durante una
hora, a temperatura ambiente.
Centrifugar a 2.000 x g, durante 20 min.
Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y
aadir 1/10 del volumen (aprox. 0,8 ml) de
acetato de sodio 3M, pH 5,2, fro (-20C) y 6/
10 del volumen (aprox. 5 ml) de isopropanol
fro (-20C).
Incubar a 20C durante dos das.
Despus de la incubacin, centrifugar a 2.000
x g, durante 30 min a temperatura ambiente.
Desechar el lquido teniendo cuidado de no
perturbar el botn de ADN que se forma al
fondo del tubo.
Aadir 2 ml de etanol al 70%. Esto ayuda a
retirar las sales que se precipitaron junto con
el ADN.
Centrifugar a 2.000 x g, durante 3 min a temperatura ambiente.
Dejar secar el botn de ADN a temperatura
ambiente.

PALMAS

18. Aadir 0,5 ml de agua destilada estril y resuspender el botn de ADN agitando suavemente.
19. Aadir 0,1 ml de una solucin de ARNasa de
0,1 mg/ml. Incubar durante una hora a 37C.
20. Almacenar el ADN extrado a 4C si se va a
utilizar en menos de tres das. Alternativamente, el almacenamiento por largos
perodos puede realizarse a 20C.
Con la aplicacin de este protocolo, se considera
una buena extraccin aquella que presenta niveles
muy bajos de agentes contaminantes y permite
obtener alrededor de 80 mg de ADN por cada
gramo de tejido foliar utilizado. Una muestra de
ADN con estas caractersticas puede almacenarse
durante varios aos a bajas temperaturas sin perder
sus caractersticas fsicoqumicas ni biolgicas.

VERIFICACIN DE LA CALIDAD Y
LA CANTIDAD DE UNA
PREPARACIN DE ADN
El ADN que ha sido extrado de un tejido debe ser
cuantificado y su calidad verificada. El mtodo ms
empleado para la determinacin simultnea de
estas caractersticas es la electroforesis en gel de
agarosa (Fig. 3). Esta tcnica se fundamenta en la
migracin de las molculas de ADN, a travs de
una matriz gelatinosa, debida a la aplicacin de
un campo elctrico. La deteccin visual del ADN
se lleva a cabo utilizando una sustancia sensible a
la luz ultravioleta, el bromuro de etidio (Sambrook
et al. 2002). Este compuesto es un agente carcinognico que actua intercalndose dentro de la doble
hlice del ADN.
La cuantificacin tambin se puede realizar
empleando un espectrofotmetro, el cual detecta
la radiacin emitida por las bases nitrogenadas
presentes en el ADN luego de ser excitadas con luz
de 260 nm. De igual manera se puede emplear un
fluormetro, el cual cuantifica la emisin de
energa de los compuestos qumicos (fluorocromos)
que se intercalan dentro del ADN.

CONSIDERACIONES FINALES
El desarrollo de la gentica y la biotecnologa ha
sido vertiginoso en los ltimos aos y ha hecho

Teora y prctica para la extraccin y purificacin del ADN de palma de aceite

Tabla 3. Caractersticas y funciones de algunos de los reactivos empleados en la extraccin de ADN proveniente de
diversas fuentes vegetales (Sambrook et al., 2001).

Reactivo
Tris (hidroximetil amino metano)
EDTA (cido etilendiamintetractico)

Caracterstica
Tampn biolgico
Agente quelante

Funcin
Estabiliza el pH de la solucin (entre 7,0 y 8,0)
Atrapa los iones magnesio presentes en el medio
para evitar la accin de enzimas que degradan al
ADN.

Cloruro de sodio.

Sal

A altas concentraciones solubiliza al ADN.

Cloruro de potasio

Sal

Equilibra fuerza inicas.

Acetato de sodio

Sal

Precipita al ADN.

Acetato de potasio

Sal

Precipita protenas.

Fenol

Solvente orgnico
(TXICO)

Denatura protenas.

Cloroformo

Solvente orgnico
(TXICO)

Denatura protenas.
Remueve lpidos.
Solubiliza al fenol y lo elimina de la solucin.

SDS (dodecil sulfato de sodio)

Detergente aninico
(TXICO)

Solubiliza protenas y membranas.

Sarkosyl (lauril sarcosina)

Detergente aninico

Inhibe hexoquinasas.
Solubiliza protenas y membranas.

CTAB (hexadecil trimetil

bromuro de amonio)

Detergente catinico

Solubiliza polisacridos.

Triton X-100

Detergente

Solubiliza protenas y membranas.

-Mercaptoetanol

Antioxidante

Inactiva protenas por reduccin de los puentes

disulfuro.

DTT (ditiothreitol)

Antioxidante

Reduce los grupos sulfuro de las protenas.

Octanol:isoamilalcohol

Alcoholes

Etanol

Alcohol

Agente antioxidante.
Disminuye la formacin de espumas e interfases.
Elimina compuestos fenlicos que pueden
inhibir la actividad de enzimas.
Precipita cidos nuclicos.

PVP (polivinil pirrolidona)

Detergente

Isopropanol

Alcohol

Precipita cidos nuclicos.

ARNasa

Enzima

Degrada ARN.

posible incrementar la productividad y generar

nuevos cultivares. Diversas tecnologas y sistemas
de anlisis se han introducido como herramientas
fundamentales para ser aplicadas en programas de
mejoramiento. Sin embargo, con base en todos

estos avances y descubrimientos, el actor principal

sigue siendo la informacin gentica, especficamente el ADN. En esta revisin se presentaron
algunos conceptos bsicos para la extraccin del
ADN. En prximos artculos se describirn algunas

PALMAS - Vol. 23 No. 3, 2002

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P. J. Rocha S.

(A)

(B)

(C)

(D)

Figura 3. Electroforegramas de preparaciones de ADN proveniente de diversas palmas de aceite. Se muestran geles de
agarosa al 0,8%, teidos con bromuro de etidio. (A) ADN de buena calidad. (B) ADN con impurezas. (C) ADN
con presencia de ARN contaminante. (D) ADN degradado por accin mecnica o presencia de ADNasas.
Registros tomados del centro de documentacin de geles del Laboratorio de Marcadores Moleculares de
Cenipalma.

de las tcnicas que permiten obtener la informacin

cifrada en esta molcula.

DELLAPORTA, S.L.; WOOD, J.; HICKS, J.B. 1983. A plant

DNA minipreparation: Version II. Plant Molecular Biology Reporter (Estados Unidos) v.1 no.14, p.19-21.

AGRADECIMIENTOS

FLAVELL, R.B.; TWELL, D. 1996. Plant genome constituents

and their organisation. In: G.D. Foster; D. Twell. (Eds.).
Plant Gene Isolation. John Wiley & Sons, London.

El autor expresa sus agradecimientos a Colciencias

por el apoyo brindado durante su formacin doctoral. Adicionalmente, agradece a la Dra. Esperanza
Torres (Centro Internacional de Fsica, CIF) por su
opinin crtica sobre este texto y a los compaeros
de Cenipalma por sus valiosos comentarios. Esta
publicacin hace parte del proyecto financiado por
Cenipalma y FONTAGRO, Convenio de Cooperacin Tcnica IICA-BID-FTG-5811999, FTG0111999 y FTG-2411999. La investigacin de
Cenipalma es apoyada por el Fondo de Fomento
Palmero de Fedepalma.

BIBLIOGRAFA
BENNET, M.D.; LEITCH, IJ. 2001. Angiosperm DNA C-values database (release 3.1, Sept. 2001). http://
www.rbgkew.org.uk/cval/homepage.html

16

PALMAS

GRIFFITHS, A.J.F.; MILLER, J.H.; SUZUKI, D.T.; LEWONTIN,

R.C.; GELBART, W.M. 1993. An Introduction to Genetic
Analysis. 5th ed. W.H. Freeman and Company, New York.
LEWIN, B. 1995. Genes V. Oxford University Press, New York.
ROGERS, S.O.; BENDICH, A.J. 1988. Extraction of DNA from
plant tissues. Plant Molecular Biology Manual. A6: 110. Kluwer Academic Publishers, Belgium.
SAMBROOK, J.; RUSSELL, D.W.; SAMBROOK, J. 2001. Molecular Cloning. 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory,
New York.
TAYLOR, B.H.; MANHART, J.R.; AMASINO, R.M. 1993. Isolation and characterisation of plant DNAs. In: B.R. Glick;
J.E. Thompson. (Eds.). Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology. CRC Press. Florida. p.37-47.
The Arabidopsis Genome Initiative. 2000. Analysis of the
genome sequence of the flowering plant Arabidopsis
thaliana. Nature (Inglaterra) v.408, p.796-815.

Teora y prctica para la extraccin y purificacin del ADN de palma de aceite

GLOSARIO
ADN: (cido desoxirribonuclico). Es la molcula responsable de almacenar todas las
caractersticas (genes) de un individuo y transmitirlas a su descendencia. Qumicamente es
una estructura qumica compleja cuyos componentes (denominados nucletidos) se organizan
de manera lineal, generando enormes secuencias de informacin.
Cromosoma: Es un paquete de genes y ADN presente en el ncleo de una clula. Diferentes
clases de organismos tienen diferentes nmeros de cromosomas. El ser humano, por ejemplo,
tiene 23 pares de cromosomas, mientras la palma de aceite tiene 32 pares. Cada miembro del
par de cromosomas es aportado por el padre y por la madre del individuo.
Fenotipo: Es el resultado de la expresin del genotipo, es decir, es la apariencia externa de
un individuo. Tambin se expresa como el resultado de la influencia del medio ambiente
sobre el genotipo.
Gen: Es un fragmento de ADN que codifica para una caracterstica determinada. En otros
trminos, es la unidad fsica y funcional de la herencia pasada directamente de los padres a
su descendencia. Por ejemplo, caractersticas tales como color, altura y forma estn codificadas
por uno o ms genes.
Genoma: Es la dotacin gentica completa de cada ser vivo. En otros trminos, es la coleccin
de informacin hereditaria que un individuo ha recibido de sus progenitores.
Genotipo: Representa los genes transportados por un individuo.
Marcador Gentico o Marcador Molecular: Es un segmento de ADN que puede ser
identificado y localizado fsicamente sobre un cromosoma y cuya herencia puede ser seguida.
Un marcador puede ser un gen, o puede ser una seccin de ADN sin funcin conocida.
Ejemplos de tcnicas que generan marcadores moleculares son los RFLP, RAPD y AFLP, entre
otros.
AFLP = Polimorfismos en la longitud de fragmentos amplicados.
RAPD = Polimorfismos de ADN amplificados aleatoriamente.
RFLP = Polimorfismos en la longitud de fragmentos de restriccin.
Mapeo de genes: Es un mtodo de anlisis que permite la determinacin de las posiciones
relativas de los genes en un cromosoma y las distancias entre ellos. La representacin grfica
que muestra las localizaciones fsicas de los genes y marcadores en cada cromosoma se
denomina mapa fsico.
Nucletido: Es el componente estructural bsico del ADN. Qumicamente es una molcula
compuesta por una base nitrogenada, un azcar de cinco carbonos y un grupo fosfato. Debido
a que el ADN es una doble hlice, su longitud se mide en pares de nucletidos (o pares de
bases).
Secuenciacin: Es una tcnica que permite conocer el orden de los nucletidos en una
molcula de ADN

PALMAS - Vol. 23 No. 3, 2002

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