04/08/2016

Ciclo celular y su regulacin

Vas de transduccin de seales
implicadas en los procesos proliferativos

Fabiana Cornejo - 5 Agosto 2016

Mdulo 1: Proliferacin celular

Fases del ciclo celular.
Maquinaria del ciclo celular.
Puntos de control.
Regulacin (fosforilacin/defosforilacin, inhibidores CDKIs,
degradacin proteltica).
Vas de transduccin de seales implicadas en los procesos
proliferativos.
Supresores tumorales: pRB (protena del retinoblastoma) y p53.
Ciclo celular y cncer.
Mtodos de estudio para las distintas fases del ciclo.

Molecular Biology of the Cell

6 edicin - 2014
Bruce Alberts,
Alexander Johnson,
Julian Lewis,
David Morgan,
Martin Raff,
Keith Roberts,
Peter Walter

Marks' Basic Medical Biochemistry: A

Clinical Approach
4 Edicin - 2012
Michael A. Lieberman,
Allan Marks ,
Alisa Peet

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ESQUEMA
1 ciclo celular:
2 transduccin de seales: generalidades - detalles de las
vas de sealizacin activadas por receptores de membrana
3 control del ciclo celular: mecanismos de regulacin de la
actividad de Cdks otros componentes del sistema de
regulacin del ciclo celular - coordinacin temporal de la
regulacin del ciclo celular
4 desregulacin del ciclo celular cncer
5 mtodos de estudio del ciclo celular

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Control del ciclo celular

-ENTORNO
-CRECIMIENTO
CELULAR
-MAQUINARIA DE LA
DUPLICACIN DEL
ADN

-MAQUINARIA DE LA
MITOSIS

-ENTORNO
-CRECIMIENTO CELULAR

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ESQUEMA
1 ciclo celular:
2 transduccin de seales: generalidades - detalles de
las vas de sealizacin activadas por receptores de
membrana
3 control del ciclo celular: mecanismos de regulacin de la
actividad de Cdks otros componentes del sistema de
regulacin del ciclo celular - coordinacin temporal de la
regulacin del ciclo celular
4 desregulacin del ciclo celular cncer
5 mtodos de estudio del ciclo celular

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GEFs

GAPs

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CREB

CRE

LH

Leydig testicular cells

testosterone secretion

..
CRH, Dopamina, FSH, histamina, MSH, PTH, PGE1, PGE2,
serotonina (5HT1a, 5HT1b), TSH ..

10

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Angiotensin II

glomerulosa
adrenocortical cells

aldosterone secretion

.
PDGF, Serotonina (5HT1c), TRH .

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AP-1
other TF

myc
fos
Cell proliferation

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ESQUEMA
1 ciclo celular:
2 transduccin de seales: generalidades - detalles de las
vas de sealizacin activadas por receptores de membrana
3 control del ciclo celular: mecanismos de regulacin de
la actividad de Cdks otros componentes del sistema de
regulacin del ciclo celular - coordinacin temporal de la
regulacin del ciclo celular
4 desregulacin del ciclo celular cncer
5 mtodos de estudio del ciclo celular

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Control del ciclo celular

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, Cdk1

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Complejos ciclinaCdk en el
control del ciclo celular

Regulacin de la actividad de Cdk

Activacin por formacin del complejo ciclina-Cdk

Regulacin de la actividad de Cdk

Activacin por fosforilacin
(Tre-K)

(Tre)

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Regulacin de la actividad de Cdk

Inactivacin por fosforilacin
(Tyr)

M-

(Tre-Tyr)

(DAP)

(Tre)

M-Cdk

M-Cdk

Regulacin de la actividad de Cdk

Activacin por defosforilacin

(Tyr)

(Tre)

Regulacin de la actividad de Cdk

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Regulacin de la actividad de Cdk

Inactivacin por CKI

G1/S-Cdk
S-Cdk

Cdk Inhibitor protein

(CKI)

Regulacin de la actividad de Cdk

Inactivacin por protelisis de la ciclina

Regulacin de la actividad de Cdk

Inactivacin proteoltica de la ciclina por APC/C
(anaphase promoting complex, or cyclosome)

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Protelisis de Securin por APC/C

Regulacin de la actividad de Cdk

Inactivacin proteoltica de CKI por SCF

(S-Cdk)

G1/S-Cdk

APC/C
Securin (cdc20)
M-cyclin (cdc20)
S-cyclin (cdh1)
SCF
CKI --- S-Cdk
G1/S-cyclin

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Principales protenas regulatorias del ciclo celular

Sistema de control del ciclo celular

Control de la replicacin del ADN

G1

G2

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Control de la replicacin del ADN

G2

Control de la replicacin del ADN

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Seal
MYC, RAS, otros
Ciclina D
Ciclina D / CDK4

Fosforilacin de RB
E2F activo
Transcripcin de ciclina E, A, ADNpol, etc
Ciclina E / CDK2

G1

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ESQUEMA
1 ciclo celular:
2 transduccin de seales: generalidades - detalles de las
vas de sealizacin activadas por receptores de membrana
3 control del ciclo celular: mecanismos de regulacin de la
actividad de Cdks otros componentes del sistema de
regulacin del ciclo celular - coordinacin temporal de la
regulacin del ciclo celular
4 desregulacin del ciclo celular cncer
5 mtodos de estudio del ciclo celular

Divisin celular, apoptosis y tumorignesis

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Mutaciones dominantes y recesivas en cncer

OVERACTIVITY

UNDERACTIVITY

A) dominant mutation (gain of function) OVERACTIVITY

A) dominant mutation (gain of function) OVERACTIVITY

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A) dominant mutation (gain of function) OVERACTIVITY

Mutation in the coding sequence: EGF receptor

Accin de drogas en la va de sealizacin

RasMAPK

Glioblastoma

Melanoma

A) dominant mutation (gain of function) OVERACTIVITY

Chromosome rearrangement: Bcr and Abl to Bcr-Abl

(TK)

(hyperactive)

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A) dominant mutation (gain of function) OVERACTIVITY

B) recessive mutation (loss of function) UNDERACTIVITY

B) recessive mutation (loss of function) UNDERACTIVITY

The genetic mechanisms that cause retinoblastoma

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B) recessive mutation (loss of function) UNDERACTIVITY

B) recessive mutation (loss of function) UNDERACTIVITY

B) recessive mutation (loss of function) UNDERACTIVITY

Tumor supressors
Adhesion protein
receptor

Signal transduction

Transcription factor cell

cycle regulator

Cell cycle/apoptosis
DNA repair

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ESQUEMA
1 ciclo celular:
2 transduccin de seales: generalidades - detalles de las
vas de sealizacin activadas por receptores de membrana
3 control del ciclo celular: mecanismos de regulacin de la
actividad de Cdks otros componentes del sistema de
regulacin del ciclo celular - coordinacin temporal de la
regulacin del ciclo celular
4 desregulacin del ciclo celular cncer
5 mtodos de estudio del ciclo celular

Cells Can Be Isolated from Tissues

Cells Can Be Grown in Culture
Cells Can Be Seen in a Microscope
Cellular Macromolecules Can Be Identified in vivo and in vitro
Protein expression Can Be Manipulated

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Anlisis del contenido de ADN por

incorporacin de 3H-timidina

Anlisis del contenido de ADN por

marcacin fluorescente

Anlisis del contenido de ADN por

marcacin fluorescente
cells in G1 phase

cells in G2
and M
phases
cells in
S phase

relative amount of DNA per cell

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Anlisis de interacciones moleculares por single-molecule

fluorescence resonance energy transfer (FRET)
Activacin transitoria de Ras

A) dominant mutation (gain of function) OVERACTIVITY

Chromosome rearrangement: Abl and Bcr to Bcr-Abl

(TK)

(hyperactive)
(p210- p190)

Anlisis de Bcr-Abl1

Diagnstico de LMC

Seguimiento del tratamiento

Monitoreo de recurrencia

Deteccin de resistencia al tratamiento

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Anlisis de Bcr-Abl1
Citogentica - Cariotipo

9 q+
9

22
Ph
(or 22q-)

bcr

bcr-abl
abl

Protena de fusin
Actividad Tirosina
Kinasa

Anlisis de Bcr-Abl1
Fluorescence In Situ Hybridization (FISH)

Labeled DNA probe

(fluorescent)

Nuclear
DNA
bcr-abl gene
Separate DNA strands
and add labeled probe

Interphase

Metaphase

Labeled bcr-abl gene

Anlisis de Bcr-Abl1
Estructura gen bcr-abl

Cromosoma 22

Cromosoma 9
c-bcr

2-11
2-11

2-11

c-abl

p210Bcr-Abl
p185Bcr-Abl

Exones
Intrones
CML Breakpoints
ALL Breakpoints

Western blot
Secuenciacin de ADN

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Anlisis de Bcr-Abl1
Gentica molecular: RT-PCR
Estructura gen bcr-abl

Cromosoma 22

Cromosoma 9
c-bcr

2-11

c-abl

p210Bcr-Abl

2-11
2-11

p185Bcr-Abl

Exones
Intrones

MTODO
Obtencin de Clulas
Obtencin de ARN
Transcripcin reversa RT (obtencin ADNc)
Amplificacin - PCR
Visualizacin del producto amplificado

CML Breakpoints
ALL Breakpoints

Anlisis de Bcr-Abl1
Gentica molecular: RT-PCR

PM

Cont Ph+
DNA

Anlisis de Bcr-Abl1
Gentica molecular: RT-qPCR
- BCR-ABL1, p210, mRNA Detection, Reverse Transcription-PCR (RT-PCR), Quantitative,
Monitoring Chronic Myelogenous Leukemia (CML)
- BCR/ABL, p190, mRNA Detection, Reverse Transcription-PCR (RT-PCR), Quantitative,
Monitoring Assay
- BCR/ABL, Tyrosine Kinase Inhibitor Resistance, Kinase Domain Mutation Screen
- BCR/ABL1 Translocation (9;22), FISH
- BCR/ABL1, Qualitative, Diagnostic Assay

BCR-ABL One-Step
Detection Kit

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Imatinib (Gleevec, STI571)

Inhibidor de la actividad de la tirosina quinasa Bcr-Abl1

MUCHAS GRACIAS POR LA ATENCIN!!

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