Universidad El Bosque

Microbiologa Ambiental
Laboratorio de Suelos
Andrea Carolina Dueas, Camila Gaitn, Santiago Gonzlez, Vernica Nieto Pea,
Andrea Tavera

PRE-INFORME LABORATORIO NO 7. Anlisis microbiolgico del agua.

OBJETIVO.
Conocer e interpretar un anlisis microbiolgico en agua, mediante diferentes mtodos
estndar para la determinacin de coliformes totales y otros microorganismos.
MATERIALES Y MTODOS.
Materiales.

Filtros de 47 mm de dimetro y poro de 0.45 m

Unidad de filtracin
Bomba de vaco
Pnzas estriles
Pipetas de vidrio de 1 ml estriles
Pipeteadores
Gradillas

Medios de cultivo

Agar EMB
Agar Mac Conkey
Agar PDA
Tubos de ensayo tapa rosca con 9 ml de solucin salina estriles
Tubos de ensayo tapa rosca con campana Durham y caldo lauril triptosa estriles
Tubos de ensayo tapa rosca con campana Durham y caldo bilis verde brillante
estriles

Muestra. 500ml de agua del grifo.

MTODOS:
Filtracin por membrana

Enjuagar
embudo con
agua destilada

Realizar
filtracin

Colocar con
pinzas el filtro

Situar el
embudo sobre
el receptculo.

Verter 100mL
de la muestra
sobre el
embudo

Retirar el
embudo.

Transferir con
pinzas la
membrana al
medio de
cultivo

Incubar a 37C
durante 24
horas.

Mtodo NPM

Llevarlo a un tubo
con 9mL de agua
de dilucin esteril
(10-1)

Agitar la
muestra.

Preparar las
diluciones.

Tomar una
alcuota de 1mL
de la muestra

Agitar tubo (101) y tomar una

alcuota.

Aadir a otro
tubo para
obtener dilucin
(10-2)

Prodecer hasta
obtener una
dilucin (10-3)

Inocular
aspticamente
con 1mL de la
muestra por
triplicado.

Tubos con caldo

lauril triptosa, a
partir de las 3
diluciones

Incubar a 35C
por 24 horas.

Repetir proceso
con caldo bilis
verde brillante.

Despus de 24
horas realizar
primera lectura.

CUESTIONARIO
1. Cmo se interpretan los resultados para filtracin por membrana?

El recuento de coliformes se calcula de la siguiente forma

Coliformes totales /100 mL=

N colonias coliformes contadas x 100

mL de muestra filtrada

Porcentaje de coliformes verificadas =

N de colonias verificadas x 100

N total de colonias coliformes sujetas a verificacin

En el caso de presentarse crecimiento confluente que no permite diferenciar separacin entre las
colonias, expresar el resultado como Desarrollo confluente por 100 mL con o sin presencia de
organismos coliformes. Cuando el nmero de colonias tanto coliformes como no coliformes es mayor
a 200 colonias por membrana o si las colonias no son distinguibles para realizar un recuento preciso,
expresar el resultado como Muy Numerosas Para Contar o Confluente, respectivamente.
(Gobierno de Chile, 1992)
2. Cmo se interpretan los resultados para NPM?
La determinacin del nmero ms probable de microorganismos coliformes fecales se realiza
a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la capacidad de las
bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura
de 44.5 0.1C por un periodo de 24 a 48 h. (Camacho, 2009)
BIBLIOGRAFA
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. (2009). Tcnicas para el
Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico. Archivo digital.
Disponible
en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Colif-tot-fecales-EcoliNMP_6529.pdf
Gobierno de Chile (1992) Mtodo de filtracin por membrana para determinacin de coliformes y E.
coli en agua. Seccin Microbiologa de Alimentos. Archivo Digital. Disponible en:
http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT-009.pdf