Parte

de
malej
a

El nmero de vasos y el rea se determin en cuatro imgenes (Dos del epicardio, dos
del endocardio; X400) de las zonas de control del infarto, 1-semana y 4 semana, los
corazones se tieron con un anticuerpo anti-CD31. El nmero de vasos cada campo se
cont, se midieron las reas del vaso, y el anlisis se realiz en Excel. Los datos fueron
expresados como la media del nmero de vasos/mm 2, el rea media del vaso como un
porcentaje del rea total del tejido, y la superficie media por vaso.
LA INMUNOTINCIN

Muestras de tejido fueron desparafinadas en 2 x 5 minutos, luego enjuagues con xileno y

seguido de 2 x 5 minutos enjuagues con etanol al 100%. Se inactivaron las peroxidasas
endgenas en 0,3% H2O2 en metanol durante 20 minutos. Despus de enjuagar 3 x 5
minutos en PBS, los portaobjetos se incubaron durante la noche a 4 C ya sea con antiactina (musculo liso) (conjugado con peroxidasa anti-humano de ratn monoclonal,
U7033; DAKO, Carpinteria, CA) para miofibroblastos o monoclonal anti-CD31 (rata antiratn, no 553371, 1:. 2000; PharMingen, La Jolla, CA) para endotelial cells.2,9 El producto
de reaccin se visualiz con el cromgeno diaminobencidina (SK-4100; Vector
Laboratories, Burlingame, CA). Para BrdU doble etiquetado de los fibroblastos o clulas
endoteliales, las diapositivas previamente teidas con anti-msculo liso? Actina o antiCD31, respectivamente, se sumergieron en HCl 1,5 N a 37 C durante 15 minutos, se
enjuag brevemente en agua destilada, colocado en 2 x 5 minutos de tampn de brax
(pH 8,5), se enjuagaron en PBS, y se incubaron con anti-conjugado con peroxidasa BrdU
(n. 1.585.860, 1:25 y Roche, Indianapolis, IN) durante la noche a 4 C. El producto de
reaccin se visualiz con Vector VIP (SK-4600; Vector). Todas las diapositivas fueron
posteriormente contadas y teidas con verde de metilo, deshidratados, y posteriormente
deslizando la cubierta. Las clulas en crecimiento se contaron usando una retcula ocular
10x10 de la red mediante una encuesta de campos aleatorios de la zona del borde de un
extremo del infarto a la otra hasta que se hubiera contado con un total de 500 clulas.
Los fibroblastos se contaron en x400, y las clulas endoteliales se contaron en x600. Las
medidas se expresan como el porcentaje de clulas doble etiquetado en 500 clulas
positivas con diaminobencidina SEM.

FUNCION LV
Cuatro semanas despus de infarto de miocardio, los ratones fueron heparinizada (0,94 U
/ g i.p.) y se anestesiaron con un cctel que contiene intraperitoneal de ketamina (115
g/g), xilazina (3,5? G / g), y la buprenorfina (0,35? G / g). La temperatura del cuerpo se
regul usando una sonda rectal en conjuncin con un controlador de temperatura
(Harvard 7129; Harvard Apparatus, Holliston, MA). Se realiz una traqueotoma y los
ratones fueron ventilados (Harvard 687, Harvard Apparatus) de tal manera que la
espiracin de CO2 se mantuvo entre 2,8 y 3,2% (microcapnometer; Columbus

Instruments, Columbus, OH). Un catter de 1,4-francs (Millar, Houston, TX) se avanz

hacia el ventrculo a travs de la arteria cartida derecha y la presin del LV y el
electrocardiograma fueron registrados. La primera curva derivada de presin del LV,
dP/dt, se calcul (software DataQ), y el +dP/dt a 20 mm/Hg por encima de la presin
diastlica final se utiliz para comparar la contractilidad entre los grupos experimentales.
De los 87 ratones que se tomaron para ser analizados, se obtuvieron 63 rastros vlidas y
24 ratones se perdieron debido a una hemorragia o un cateterismo sin xito.
ESTADSTICAS
Todos los datos de grupo se expresan como media SEM. La significancia estadstica
entre grupos se determin mediante pruebas de test o anlisis de varianza del estudiante
seguido de Student - Newman - Keuls para hacer mltiples comparaciones despus de
estos anlisis. Todas las estadsticas se realizaron con INSTAT, y los niveles de
significacin fueron P<0.05.
RESULtADOS
LA GEOMETRIA VENTRICULAR
La figura 1 muestra secciones representativas teidas con H&E de corazones no
infartados (control; Figura 1, A, D, G y J), 4-dias de infartos (Figura 1, B, E, H y K), y 4semanas infartos (Figura 1, C, F, I, y L) de WT, FGF2-KO, FGF2-NTG, y los ratones
FGF2-Tg, respectivamente. Estas micrografas muestran los cambios morfolgicos que se
someten los corazones del ratn despus de adelgazamiento de la pared MI-ventricular,
dilatacin de cavidades, y la transicin de la necrosis (N) encapsulados por tejido de
granulacin a los 4 das para madurar la cicatriz (S) por 4 semanas. Los corazones de los
ratones de control no infartados de todos los grupos mostraron la comparacin de la
morfologa y la geometra.
La Tabla 1 resume los datos morfomtricos de WT frente FGF2-KO corazones de ratn. El
tamao del infarto inicial a los 4 das despus de un IM fue del 38 5% en el WT y 37
4% en el grupo de FGF2-KO (P = NS). En WT corazones de ratn, el tamao del infarto
se redujo sustancialmente a causa de la contraccin de la cicatriz, alcanzando
aproximadamente la mitad del tamao del infarto original a 4 semanas (Figura 2E). A
pesar de tener el tamao del infarto inicial similar, los corazones FGF2-KO no se
sometieron a la contraccin de la cicatriz a lo largo del estudio de 4 semanas. Como era
de prever de esta falta de contraccin de la herida, la dilatacin del LV fue mucho ms
grave en los corazones FGF2-KO. Por ejemplo, en WT C57BL / 6 animales, el rea de la
cmara se aument a seis veces en 4 semanas, mientras que en FGF2-KO rea de la
cmara de los corazones se aument 10 veces a las 4 semanas (P = 0,004 frente a WT 4semanas del infarto). Aunque no hubo diferencias significativas en la composicin de
infarto (es decir, necrosis, tejido de granulacin, o una cicatriz como un porcentaje del
infarto) en cualquiera de los puntos de tiempo estudiado, en los corazones FGF2-KO hubo
una tendencia para la formacin de tejido de granulacin menos a los 4 das y 1 semana y
necrosis residual ms persistente (a lo largo de 4 semanas). Aunque el grosor de la
cicatriz no fue diferente entre los grupos, el ndice de expansin en los ratones FGF2-KO
fue el doble de la de los ratones WT a las 4 semanas (Figura 2A; 3,11 0,77 frente a 1,49
0,26), Lo que indica ms severa remodelacin LV. La tabla 2 resume los datos
morfomtricos de FGF2-NTG frente a ratones Tg FGF2. El tamao del infarto en FGF2-

NTG corazones de ratn (WT FVB / N cepa) 4 das despus de un IM fue de 34 6% del
VI y contrat a 16 4% a las 4 semanas. En los ratones que sobre expresan FGF2, Hubo
una tendencia no significativa para la cicatriz para promover an ms (30 5% a los 4
das frente a 11 3% a las 4 semanas).

Figura 1. Histologa de la reparacin del infarto en FGF2-KO y FGF2-Tg ratones.

Corazones no infartada de todos los grupos estudiados (A, D, G, y J) exhibi

espesor uniforme de la izquierda (LV) y las paredes del ventrculo derecho (RV),
rea de la cmara comparable, y la morfologa de los miocitos normal.
Cuatro das despus de un IM (B, E, H y K), el corazn de todos los grupos tenan
necrosis residual (N) rodeado por tejido de granulacin.
En todos los grupos estudiados a las 4 semanas despus del IM (C, F, I y L), no
hubo adelgazamiento de la pared ventricular, dilatacin de cavidades, y la cicatriz
de colgeno (S) formado para reemplazar el miocardio muertos. La mayor dilatacin
de la cmara y el adelgazamiento de la pared ventricular se produjo en el FGF2-KO
a las 4 semanas despus de un IM. El extenso adelgazamiento de la pared por lo
menos se produjo en los corazones FGF2-TG. Barra de escala = 1 mm.

Tabla 1: Morfometra ventricular izquierda en WT frente a FGF2-KO.

1
2
3
4
5
6
7
8
9

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Tamao del grupo.

rea LV (mm2)
rea de la Cmara (mm2)
Tamao del infarto (% LV)
Tejido de Granulacin
(% Infarto)
Necrosis (% infarto)
Cicatriz (% del infarto)
grosor de la cicatriz (mm)

Los ratones FVB / N mostr dilatacin ventricular menos que lo hicieron los ratones
C57BL / 6, con tamao de la cmara aumentando slo doble a las 4 semanas. Aunque el
tamao de la cmara fue ligeramente menor en los ratones FGF2-Tg a los 4 das despus
de un IM (0,42 0,15 frente a 0,55 0,22 mm2, P = 0,04), la dilatacin a las 4 semanas
no fue significativamente diferente entre los genotipos. El grosor de la cicatriz en ratones
FGF2-Tg era dos veces la de los ratones FGF2-NTG a las 4 semanas (0,64 0,07 frente

a 0,30 0,04 mm, P = 0,05), lo que resulta en la diferencia observada en el ndice de

expansin (Figura 2B, 0,77 0,13 frente 1,91 0,15).
Se midi el rea de seccin transversal de los miocitos para determinar si los miocitos
FGF2-KO tienen una respuesta hipertrfica intacta despus de infarto de miocardio en
comparacin con WT. El rea de seccin transversal de los miocitos en el WT a las 4
semanas de infartos aument en un 19% (P < 0,05 frente al control no infartado). En los
corazones infartados FGF2-KO, sin embargo, haba un aumento insignificante de slo el
4% (versus control no infartada, la Figura 2C). Por el contrario, los ratones FGF2-Tg
mostraron un aumento de la hipertrofia de los cardiomiocitos despus de un infarto. El
rea de seccin transversal de los miocitos aument 19% en los corazones FGF2- NTG
(P < 0,01) en comparacin con 47% en los corazones FGF2-Tg de ratn
(P < 0,001, Figura 2D).

PROLIFERACIN DE FIBROBLASTOS Y FIBROSIS

La proliferacin de fibroblastos se marcaron con anticuerpos actina del msculo liso y
BrdU (Adicional Figura 2 en la direccin http: //ajp.amj pathol.org)?. No hubo una
proliferacin significativa de cualquier tipo de clula en los corazones 2 das despus de
MI (Figura 3A) WT C57BL/6 corazones o FGF2-KO. Todos los grupos mostraron una
explosin de la proliferacin de fibroblastos a los 4 das, lo que fren el de 1 semana y
dejaron a las 2 semanas. En los ratones FGF2-KO, la proliferacin de fibroblastos fue
33% inferior a los 4 das (10,6 1,1% frente a 15,4 1,1%, P < 0,01) y un 59% inferiores
a la semana 1 (1,7 0,2% frente a 4,1 0,6%, P < 0,05) que en los ratones WT. En los
corazones de los ratones que sobre expresan FGF2, la proliferacin de fibroblastos
(Figura 3B) era ms del doble que la de corazones WT a los 2 das (2,5 1% versus 1,0
0,4%, P < 0,05), a los 4 das (7,5 1% frente a 3,8 0,5%, P < 0,05), y tambin en 1
semana (1,7 0,5% versus 0,8 0,2%, P < 0.05). Vale la pena sealar que las tasas de
proliferacin de fibroblastos cardacos en WT FVB/N ratones fueron menores que en WT
C57BL/6 ratones, aunque la duracin total de la proliferacin de fibroblastos era ms
tiempo. Debido a que los fibroblastos son las clulas responsables de la deposicin de
colgeno, que cuantifica la fibrosis intersticial en la remota regin, no infartada y
correlacionado con las diferencias observadas en la proliferacin de fibroblastos.
Secciones representativas del control de corazones no infartados (columna izquierda) y 4
semanas de edad corazones infartados (columna derecha) fueron teidas con picrosirius
rojo/rpido verde para ilustrar el depsito de colgeno (Adicional Figura 3 en
http://ajp.amjpathol.org). La fibrosis intersticial aument un 167% en los infartos WT a las
4 semanas (0,9 0,1% frente a 2,4 0,4% de la superficie del miocardio, P < 0,05) en
comparacin con el WT no infartada controles (Figura 3C), pero no aument despus de
un infarto en FGF2-KO ( 1,2 0,4% en el control frente al 1,3 0,1% en infartados, P=ns).
La sobre expresin transgnica de FGF2 aument el contenido de colgeno intersticial en
un 75% en los corazones no infartados. En los corazones FGF2-NTG, infarto result en
un aumento del 58% en la fibrosis en comparacin con los corazones de control (1,2%
0,1 versus 1,9 0,4%, P=ns; Figura 3D). Los corazones que sobre expresan FGF2
mostraron una respuesta fibrtica exagerada despus de un infarto, con el aumento del
contenido de colgeno en un 81% (2,1 0,5% frente a 3,8 0,8%, P < 0,05) en
comparacin con los controles no infartados. Estos resultados sugieren que la

disminucin de la proliferacin de fibroblastos llevado a una reduccin en la deposicin de

colgeno en ratones FGF2-KO; por el contrario, en los ratones que sobre expresan, el
aumento de la proliferacin de fibroblastos por lesin result en un aumento de la fibrosis
intersticial.

PROLIFERACIN DE CLULAS ENDOTELIALES, MORFOMETRA VASCULAR

Las clulas endoteliales que fueron doblemente marcadas con anticuerpos CD31 y BrdU
para cuantificar su proliferacin (Adicional Figura 2 en http://ajp.amjpathol.org). Estudios
de pulso-marcaje mostraron que la proliferacin de clulas endoteliales tambin alcanz
su punto mximo a los 4 das despus de un IM en ambos WT y FGF2-KO proliferacin
endotelial significativa observada en los corazones de control no infartados o ms all de
1 semana despus de MI en cualquiera de los grupos estudiados.
PROLIFERACIN DE CLULAS ENDOTELIALES, MORFOMETRA VASCULAR
Las clulas endoteliales fueron doble marcadas con anticuerpos CD31 y BrdU para
cuantificar su proliferacin (Adicional Figura 2 en la direccin http: //ajp.amj pathol.org).
estudios Pulse-etiquetado mostraron que la proliferacin de clulas endoteliales tambin
alcanz su punto mximo a los 4 das despus de un IM, tanto en corazones FGF2-KO y
WET. La tasa de proliferacin endotelial fue mucho menor que la observada para los
fibroblastos, sin embargo, el anlisis estadstico es difcil por el uso de etiquetado BrdU de
pulso simple. Por lo tanto, se determin la proliferacin de clulas endoteliales acumulada
mediante la infusin de BrdU durante 4 das a travs de minibombas osmticas. Esto
revel que la tasa acumulada de la proliferacin de 4 das despus de la ligadura fue 65%
menos en los corazones FGF2-KO (1,9? 0,5% versus 5,4? 1,5%, P 0,05) que en WT
corazones (Figura 4A). En los corazones de los ratones que sobreexpresan FGF2,
aument significativamente la proliferacin endotelial se detect por marcaje por pulsos, y
por lo tanto, no se llev a cabo el etiquetado acumulativo. A los 2 das despus de la MI, la
proliferacin celular endotelial en FGF2-Tg corazones de ratn era tres veces mayor que
la de los corazones FGF2-NTG (Figura 4B, P 0.05). A los 4 das despus de la MI, la
proliferacin endotelial en FGF corazones 2-Tg fue 1,7 veces mayor que los corazones
FGF2-NTG. No hubo proliferacin endotelial significativa observada en los corazones de
control no infartadas y ms all de 1 semana despus de MI en cualquiera de los grupos
estudiados.
observ en los corazones de control no infartados o ms all de 1 semana despus de MI
en cualquiera de los grupos estudiados. Para correlacionar los cambios observados en la
proliferacin de clulas endoteliales con los cambios en la densidad vascular, contamos
con vasos, cuantificamos rea del vaso, y se calcul el rea /la media del vaso. la
densidad vascular fue comparable en no infartado WT y no infartado FGF2-KO en
corazones de ratn (3644 frente a 2963 82 227 vasos / mm2, respectivamente; figura 4C).
La densidad vascular se redujo significativamente despus de un infarto en ambos
corazones WT y FGF2-KO, pero esta disminucin fue ms dramtico en el grupo de
FGF2-KO: 74 frente a 25% en 1 semana y 91 frente a 75% a las 4 semanas despus de
un IM (P 0,01 en ambas veces). Curiosamente, no haba ninguna diferencia en el rea del
vaso (expresado como un porcentaje del rea de infarto total) entre los seis grupos
analizados (Figura 4E). La discrepancia entre la disminucin del nmero de vasos / mm 2

y ningn cambio en el rea de los vasos en los infartos de 4 semanas de ratones FGF2KO se explica por el calculado aumento de 10 veces en la zona / vaso (control: WT, 13,4
0,4 m2; FGF2-KO, un 12,8 0,5 m2; 4 semanas del infarto: WT, 38,7 7,9 m2;FGF2-KO,
122,9 23,4 m2; p = 0,001) (Figura 4E). Estas grandes vasos sinusoidales a menudo
carecan de inversin muscular / pericitos lisos. Aunque la proliferacin de clulas
endoteliales alcanz su punto mximo a principios de FGF2-Tg en comparacin con
FGF2-NTG en los corazones de ratn (P 0,05), no se observaron cambios significativos
en la densidad vascular, rea vascular o rea / vaso, o la musculatura vaso (Figura 4, FH).
FUNCIN DEL VENTRICULO IZQUIERDO
Un catter de 1,4-French Millar introducido en el ventrculo izquierdo a travs de la arteria
cartida se utiliz para medir la presin de LV en los corazones de control de ratones
noinfartados y corazones 4 semanas despus de MI. La primera derivada de la presin LV
con respecto al tiempo (dP / dt; mm Hg / segundo) a 20 mm Hg se midi para revelar
diferencias en la contractilidad (Figura 5; conjunto completo de datos en la Tabla
Suplementaria 1, ver http: // AJP. amjpathol.org). En los ratones WT, hubo una disminucin
del 11% en la dP / dt a las 4 semanas despus de un IM versus control (4807 333 frente a
4247 188 mm Hg / segundo; P = NS) en comparacin con una reduccin del 20% en
FGF2-KO corazones 4 semanas despus de un IM en comparacin con los corazones no
infartados FGF2-KO (5107 245 4110 frente a 339 mm Hg / segundo; P 0,02) (Figura 5). En
los ratones FGF2-NTG, LV dP / dt se redujeron en un 20% (5194 134 frente a 4171 171
mm Hg / segundo, P 0,04??), En comparacin con slo el 12% en el grupo de FGF2-Tg
(4459 377 frente a 3906 y 129 mm Hg / segundo;P ns) (Figura 5B). Aunque hubo
diferencias de las cepas de la frecuencia cardaca, no hubo diferencias significativas en la
HR dentro de los grupos experimentales (Figura 5, A y B).
DISCUSIN
Hemos demostrado que la eliminacin gentica de FGF2 marcadamente empeor el
proceso de reparacin del infarto de miocardio. A pesar de no tener efecto en tamao
inicial del infarto, la supresin de FGF2 dio lugar a la proliferacin de fibroblastos y la
deposicin de colgeno reducida, disminucin de la proliferacin endotelial vascular y la
densidad, y la disminucin de la hipertrofia de los cardiomiocitos. Adems, los ratones
FGF 2-KO demostraron una ausencia completa de la contraccin de cicatrices, lo que
resulta en el aumento de tamao del infarto final y marcados aumentos en la rea de la
cmara y la expansin del infarto. Estos dficits en ltima instancia, deterioro de la funcin
cardaca. Por el contrario, la sobreexpresin de FGF2 se demostr para aumentar la
proliferacin de fibroblastos y la deposicin de colgeno, la velocidad proliferacin
endotelial, y mejorar la hipertrofia de los cardiomiocitos. Estos cambios frenan la
expansin del infarto y conservan la funcin del ventrculo Izquierdo. FGF2 se ha
estudiado extensamente por su capacidad para promover la angiognesis en modelos de
isquemia crnica. FGF2 tambin ha sido estudiado por su papel en la reparacin de
tejidos, ms comnmente en la curacin de heridas de la piel por escisin. A pesar de que
la administracin exgena de miembros de la familia FGF acelera la reparacin de
heridas, los ratones que carecen FGF2 o que carecen tanto de FGF2 y FGF1 (FGF cido)
mostr slo una modesta ralentizacin del cierre de la piel de la herida. Estos hallazgos
indican que no exista ni se FGF2 ni FGF1 para la cicatrizacin de heridas de la piel. Por el

contrario, los datos presentados en el presente informe demuestran que FGF2 es una
molcula clave en el control de la reparacin de infarto de miocardio. Una razn para la
diferencia entre la piel y el corazn puede estar en la carga mecnica en las que se
produce la reparacin cardaca. Como una especie de piel suelta, el ratn probablemente
requiere menos tensin a partir de fibroblastos de contraer una cicatriz de la piel, mientras
que en el corazn, la contraccin de la cicatriz se produce bajo el estrs de pared
constante.
Algunos otros estudios tambin han abordado las posibles funciones de FGF 2 en la
reparacin del infarto de miocardio, con resultados contradictorios. En ratas, la
administracin sistmica (intraperitoneal) de FGF2 de 1 semana despus de un IM se
muestra para evitar la dilatacin ventricular y promover la hipertrofia para la supervivencia
del miocardio, mientras que en un estudio posterior del mismo grupo, un FGF2 eluyendo
bomba osmtica no afect a la proliferacin celular o la geometra ventricular. Alguna
discrepancia puede ser el resultado de la biodisponibilidad de factores de crecimiento de
protenas, que puede ser limitada por su corta vida media cuando se administra
sistmicamente. Para el presente estudio, se opt por eludir estos problemas mediante la
eliminacin gentica o sobreexpresin transgnica.
Tabla 2. Morfometra ventricular izquierda de FGF-2 NTG Versus FGF2-TG de Corazones

de ratn

Figura 3. proliferacin de fibroblastos y fibrosis miocrdica.

la proliferacin de fibroblastos fueron detectados por el doble etiquetado con actina

msculo liso y anticuerpos BrdU (ver Adicional Figura 2 en http://ajp.amjpathol.org para
una imagen histolgica). El tamao del grupo vari de 7 a 14 ratones por punto de tiempo
(en los cuadros 1 y 2). A: la proliferacin de fibroblastos alcanz su punto mximo a los 4
das despus de un IM en ambas FGF2-KO y WT corazones de ratn; sin embargo, hubo
una reduccin del 30% en la respuesta proliferativa en los corazones FGF2-KO (* P 0.05).
B: la proliferacin de fibroblastos en los ratones Tg FGF2 fue el doble de la de los ratones
FGF2-NTG a los 2 das, 4 das y 1 semana despus de MI (* P 0,05), C: La deposicin de
colgeno se midi mediante tincin con rojo picrosirio en la regin posteroseptal no
infartado. D: La deposicin de colgeno en el FGF grupo 2-Tg despus de un IM era el
doble del de los corazones FGF2-NTG de ratn (P 0,05 frente ns P, respectivamente). Ver
Adicional Figura 3 en http://ajp.amjpathol.org para imgenes histolgicas.
PAPEL DE FGF2 EN LA HIPERTROFIA CARDACA Y LA PROLIFERACIN CELULAR
Se ha observado una respuesta hipertrfica romo en los miocitos de la regin no infartada
en ratones FGF2-KO, mientras que la hipertrofia se increment en ratones Tg FGF2.

Figura 4. proliferacin celular endotelial y morfometra vascular. El tamao del grupo vari
de 7 a 14 ratones por punto de tiempo, como se indica en las Tablas 1 y 2. A: La
proliferacin de las clulas endoteliales fueron detectados por el doble etiquetado con
anticuerpos CD31 y BrdU. Ver Adicional Figura 2 (disponible en http:. // AJP amjpathol.org)
para una microfotografa representativa. proliferacin de clulas endoteliales fue mitigado
significativamente en los ratones FGF2-KO, tal como se determina por una infusin BrdU
4-das acumulativa (* P? 0.05). B: la proliferacin endotelial en ratones Tg FGF2
(determinado por medio del etiquetado pulso de 1 hora antes del sacrificio) alcanz su
punto mximo antes que en los ratones FGF2-NTG (* P 0,05?). C: En corazones WT, la
densidad vascular se redujo a 1 semana y adems se neg a las 4 semanas despus del
IM ( P 0,001 versus control no infartada; P 0,001 frente al anterior punto de tiempo??).
Aunque la densidad vascular inicial fue comparable en los corazones FGF2-KO no
infartados, se produjo una disminucin ms pronunciada en la densidad en 1 y 4 semanas
despus de un IM (* P? 0,001 frente a WT C57 en el mismo punto de tiempo). D: No hubo
diferencias en la densidad vascular entre FGF2-Tg y corazones FGF2-NTG. E y F: El rea
ocupada por luz vascular (expresado como un porcentaje del rea total) no variaron entre
los puntos de tiempo o entre los grupos en FGF2-KO o estudios FGF2-TG. G: El rea /
recipiente de promedio se increment de manera significativa al 1 (* P 0,05?) Y 4
semanas (P ** 0.001?) Despus de un IM en el grupo de FGF2 KO en comparacin con
WT. H: El rea / recipiente aument comparativamente tanto en el FGF2-Tg y corazones
FGF2-NTG despus de un infarto.

Estos resultados concuerdan bien con el trabajo previo en modelos de hipertensin.

coartacin artica transversal en FGF2-KO ratones resultados en significativamente
menos hipertrofia de los miocitos en comparacin con los ratones WT (de 4 a 24% versus
50%). 6 De manera similar, despus de 4 semanas de recorte de la arteria renal, los
ratones hipertensos que carecen de FGF2 exhibi ms severa dilatacin cmara,
disminucin fraccin de acortamiento, y no desarrollaron hipertrofia compensatoria.
Curiosamente, los experimentos in vitro implicados fibroblastos cardacos como una
fuente importante de FGF2 para la hipertrofia y tambin demostraron que los miocitos de
los ratones FGF2-KO hipertrofiados normalmente en respuesta a FGF2.25 exgeno

Figura 5. LV funcin. La derivada de la curva de presin LV a 20 mm Hg se utiliz como

ndice de la contractilidad (dP / dt). El tamao del grupo se muestran dentro de las barras
que aparecen entre parntesis. Las frecuencias cardacas A continuacin se indican los
tamaos de los grupos en latidos por minuto (lpm). R: No haba una depresin
significativa de la funcin contrctil del corazn en WT 4 semanas despus de un IM; Sin
embargo, la funcin cardiaca se vio afectada en el grupo de FGF2-KO (P? 0,05). B: La
funcin cardaca se deprimi significativamente a las 4 semanas despus del IM en
comparacin con el control de corazones FGF2-NTG (? P 0,05); Sin embargo, no hubo
disminucin significativa de contractilefunction en el grupo de FGF2-Tg.

Dada la importancia de la proliferacin celular en la formacin de tejido de granulacin

cardaco y el papel demostrado de FGF2 en la reparacin vascular, 26,27 postulamos
FGF2 sera regular la proliferacin de fibroblastos y fibrosis miocrdica despus de un
infarto. Se observ una reduccin significativa en la proliferacin de fibroblastos en los
corazones FGF2-KO, y proponemos que esto llev a la deposicin de colgeno intersticial
reducida y el aumento de la expansin del infarto en estos corazones. Por el contrario, la
proliferacin de fibroblastos y fibrosis resultante fueron mayores en los corazones
infartados FGF2-Tg, y razonamos que ello ha contribuido a la reduccin de la expansin
del infarto observada en estos corazones.
FGF2 es un factor angiognico bien descrito que induce la migracin endotelial y la
proliferacin. Tambin se observ reduccin proliferacin endotelial vascular y la densidad
reducida en los corazones infartados FGF2-KO. Pintucci y colleagues28 han informado de
que la migracin de las clulas endoteliales FGF2-KO se embota en respuesta a una
lesin in vitro, y esta atenuacin fue mediado por la reduccin de la sealizacin de ERK.
Curiosamente, las clulas FGF2-KO son capaces de responder a FGF2 exgeno, lo que
indica que sus vas de sealizacin corriente abajo se mantienen intactos. Un hallazgo
sorprendente de nuestro estudio fue que, aunque el nmero de buques se redujo
significativamente en los infartos FGF2-KO, los vasos que quedaron fueron notablemente
dilatado y, a menudo carente de clulas de msculo liso (de tal manera que la superficie
total vascular de la seccin transversal se mantuvo constante). Hay una creciente
evidencia de que las clulas endoteliales reclutan clulas mesenquimales y dirigir su
diferenciacin en clulas murales a travs de sealizacin paracrina, y de manera similar,
las clulas murales promover la maduracin de las clulas endoteliales y survival.29 la
hiptesis de que la interrupcin de FGF2 la sealizacin entre las clulas endoteliales y
de msculo liso como resultado la disminucin de la densidad de los vasos y
excesivamente vasos de gran calibre observadas en los FGF2-KO de 4 semanas de
infartos.
Curiosamente, Bryant y colleagues30 han informado de que el anti-FGF-2 anticuerpos
reducen lumen estrechamiento en un modelo de ligadura de la arteria coronaria en
ratones. Nuestros resultados estn de acuerdo en general con Bryant y colegas, 30
aunque el mecanismo a travs del cual los controles FGF2 dimetro de la luz no est
claro. Zhou y colegas7 han demostrado ratones FGF2-KO son hipotensor que resulta de
disminucin de la contractilidad del msculo liso vascular. Despus de la lesin de la
cartida, se observ la proliferacin de clulas normales, lo que sugiere que FGF2 es ms
importante para la regulacin del tono vascular. Por el contrario, nuestros datos muestran
una reduccin de la proliferacin y remodelado vascular anormal, pero no observaron
diferencias en la presin desarrollada 4 semanas despus del IM entre cualquiera de
nuestros grupos experimentales, lo que sugiere que las acciones de FGF2 dependen del
estmulo.

Papel de FGF2 en el infarto adelgazamiento de la pared ventricular y dilatacin

De acuerdo con la ley de Laplace, el adelgazamiento de la pared regional del infarto y la

dilatacin de la causa cmara del VI aument significativamente el estrs y la carga de

trabajo de la pared myocardium.31 no infartada (De hecho, el estrs de pared es

proporcional al ndice de expansin.) La expansin del infarto empeor notablemente
observado en los corazones FGF2-KO indica el papel central que desempea esta
molcula en el proceso de reparacin del infarto. Probablemente hay varios componentes
que causaron adelgazamiento de la pared del infarto empeor y dilatacin de cavidades.
Una de las causas claro es el fracaso de los infartos FGF2-KO a someterse a la
contraccin de la cicatriz. No se pudo contraccin cicatriz dio lugar a una duplicacin del
tamao del infarto a las 4 semanas en comparacin con los corazones infartados WT, que
correspondientemente sin mayor volumen de la cavidad LV. Debido a miofibroblastos son
el tipo celular responsable de la produccin de la cicatriz y la mediacin de su contraccin,
32 la explicacin ms simple para la contraccin no se reducira el contenido de
fibroblastos infarto debido a la proliferacin despuntada. Otros mecanismos que podran
contribuir a empeorar la contraccin de la cicatriz incluyen la generacin de la fuerza
contrctil por miofibroblastos, 32-34 reduccin de la expresin de metaloproteinasas
necesarios para la remodelacin de tejidos, de 35 aos redujo la hipertrofia de los
miocitos en la regin no infartada reducidos, y la reduccin de la perfusin del infarto
debido a la inhibicin de la angiognesis.
La mayora de los investigadores del corazn se combinan grandes alteraciones en la
anatoma ventricular (adelgazamiento de la pared y la dilatacin de la cmara) con los
hallazgos histolgicos de la hipertrofia de los cardiomiocitos y la fibrosis intersticial en el
rubro de remodelado del VI. Es notable que al cambiar la disponibilidad de FGF2 se
puede disociarse claramente estos hallazgos macroscpicos e histolgicos. FGF2 reduce
la dilatacin LV y el adelgazamiento de la cicatriz, al tiempo que mejora simultneamente
la hipertrofia de los cardiomiocitos y la fibrosis intersticial durante la reparacin del infarto,
todos los cuales estn asociados con una funcin mejorada. Por lo tanto, puede ser ms
apropiado para restringir la remodelacin del VI a los cambios anatmicos relacionados
con la funcin empeorado y no asociar una relacin histolgica con el trmino.
Papel de FGF2 en la funcin cardaca
FGF2 se administra antes de la lesin por isquemia / reperfusin ha informado para
activar una va de sealizacin que protege contra la disfuncin aguda y el tejido cardaco
damage.36-38 Especficamente, esta proteccin se ha demostrado ser mediada por la
fosforilacin de ERK y la inhibicin de p38 en ratones transgnicos FGF2; 39 en ratones
FGF2-KO, la proteccin contra la muerte celular y la disfuncin fue restaurada mediante la
inhibicin de JNK.40 en corazones aislados sobreexpresan FGF2, la viabilidad de los
miocitos se conserv y la densidad capilar se increment en 20% 0,41 Sin embargo, en
un modelo de corazn de trabajo de la isquemia de bajo flujo , cardioproteccin en FGF2
corazones de ratones transgnicos ha demostrado ser independiente de la densidad
capilar y el flujo coronario.
Estudios recientes realizados por Jiang y colleagues43 han demostrado que una forma
mutante de FGF-2 puede mediar la proteccin independiente de la angiognesis. En
nuestros experimentos, que
oclusin coronaria permanente utilizado en una especie carente de flujo sanguneo
colateral, sin proteccin miocrdica aguda se predijo u observado. Sin embargo, los
efectos estructurales de FGF2 en la reparacin del infarto traduzcan en diferencias

funcionales a las 4 semanas. De hecho, los ratones que carecen de infartados FGF2
exhibido ms pobre LV dP / dt, mientras que los ratones que sobreexpresan FGF2 no
tenan el decremento en LV dP / dt observ en los controles WT apropiados.

conclusiones

Esta investigacin proporciona informacin sobre el mecanismo de accin FGF2 durante

la reparacin del infarto de miocardio. Hemos demostrado que la falta de resultados de
FGF2 en ms grave adelgazamiento de la pared del infarto y la dilatacin ventricular,
embota hipertrofia de los miocitos, reduce la proliferacin celular, fibrosis, y la densidad
vascular, y que todos estos dficits conducir a la disfuncin cardiaca peor 4 semanas
despus de un IM. Por el contrario, la sobreexpresin de FGF2 aminora estos efectos
adversos y preserva la funcin cardaca. Estas observaciones sugieren que puede ser
posible utilizar FGF2 para optimizar la reparacin de infarto de miocardio y mejorar la
funcin cardaca en pacientes despus de un IM.