UNIVERSIDAD PRIVADA

ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA EN
INDUSTRIAS ALIMENTARAS

PROYECTO PARA EL FONDO DE APOYO A LA INVESTIGACIN 2014

OPTIMIZACIN DEL EFECTO DE LA INTENSIDAD DE DIODOS

ELECTROLUMINOSOS Y DEL FOTOPERIODO EN LA PRODUCCIN DE
BIOMASA DE Spirulina EN FOTOBIORREACTOR ABIERTO

DOCENTE RESPONSABLE (AUTOR):

Dr. Ing. VCTOR VSQUEZ

VILLALOBOS

COAUTORA: Dra. ELVA MEJA DELGADO

ASISTENTE: Vergaray Herera Danny Miguel

TRUJILLO PER
2014

DATOS GENERALES
1. TITULO
OPTIMIZACIN DEL EFECTO DE LA INTENSIDAD DE DIODOS
ELECTROLUMINOSOS Y DEL FOTOPERIODO EN LA PRODUCCIN DE
BIOMASA DE Spirulina EN FOTOBIORREACTOR ABIERTO
2. LINEA DE INVESTIGACIN
Concytec:
04030101: Inteligencia artificial y computacin emergente para la gestin del
conocimiento y la competitividad.
3. UNIDAD ACADMICA
Escuela de Ingeniera en Industria Alimentarias
Facultad de Ciencias Agrarias
4. EQUIPO INVESTIGADOR
- Autor: Vctor Javier Vsquez Villalobos
- Coautor: Elva Meja Delgado
-

Asistente (Estudiante de Ingeniera en Industrias Alimentarias): Vergaray Herera,

Danny Miguel (ID = 000040354)
5. RESPONSABLE DEL PROYECTO
-

Vctor Javier Vsquez Villalobos

6. INSTITUCION Y/O LUGAR DONDE SE EJECUTA EL PROYECTO

Laboratorio de Industrias Alimentarias
Escuela de Ingeniera en Industrias Alimentarias
Universidad Privada Antenor Orrego
7. DURACIN
Inicio: 07 Enero 2014
Trmino: 30 Noviembre del 2014

PLAN DE INVESTIGACIN

8. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Es optimizable el efecto de la intensidad de diodos electroluminosos y del fotoperiodo
en la produccin de biomasa de Spirulina en fotobiorreactor abierto?

9. ANTECEDENTES DEL PROBLEMA

Un diseo experimental por si solo tiene como objetivo localizar el tratamiento
ganador de entre todos aquellos que son probados; y la Metodologa de Superficie de
Respuesta (MSR) pretende localizar las condiciones ptimas de operacin del proceso,
de tal manera que esta plantea un reto mucho ms fuerte para el investigador y requiere
de una estrategia ms completa, que incluye la posibilidad de efectuar varios
experimentos secuenciales y el uso de tcnicas matemticas ms avanzadas (Cuesta,
2013).
Se han investigado a travs de la MSR los efectos de la intensidad de la luz y la
temperatura en el cultivo de Spirulina platensis con nitrato de potasio o urea como
fuente de nitrgeno, as como el contenido de clorofila en la biomasa de esta
cianobacterias. Los experimentos se realizaron a temperaturas de 25 a 34.5C e
intensidades de luz de 15 a 69 mol de fotones m 2s-1. Los mejores resultados fueron a la
temperatura de 30C y a intensidades de luz de 60 mol de fotones m 2s-1, en cultivos
con urea. Los klux fueron convertidos a densidad de flujo de fotones fotosintticos
(DFFF) expresada en mol de fotones m-2s-1, usando el factor de conversin (12 mol
de fotones m-2 s-1 klux-1), lo cual fue propuesto por McCree (1981) para luz blanca
fluorescente (Godoy et al., 2011).
El modelado de sistemas es en la actualidad uno de los problemas de mayor inters en
numerosas ramas de la ciencia. La resolucin de este problema se ha abordado
clsicamente usando tcnicas de regresin para minimizar una determinada funcin de
error, previo establecimiento por parte del investigador del tipo de modelo a aplicar. En
la mayora de los casos, el modelo funcional a aplicar es no lineal y adems suele
presentar una alta dimensionalidad, lo que complica considerablemente el proceso,
teniendo en cuenta que se dispone de poca o ninguna informacin adicional. En el
contexto de la presente investigacin del Castillo et al. (2013) presentaron una
metodologa de estimacin de modelos polinmicos de superficie de respuesta mediante
Algoritmos Genticos con Codificacin Real (AGCR) donde se utilizan operadores de

cruce multipadre. En la resolucin de modelos polinmicos de Superficie de Respuesta,

los operadores de cruce especficos aportan al AGCR un valor aadido al poder utilizar
informacin de varios individuos para formar uno nuevo, a ser posible de mejor aptitud.
En este sentido elaboraron un modelo predictivo de crecimiento del microorganismo
alterante Leuconostoc mesenteroides sp. mesenteroides utilizando curvas de condiciones
experimentales diferentes segn un Diseo Central Compuesto, constituidas por: sealtiempo de crecimiento microbiano del Leuconostoc bajo diferentes condiciones de
temperatura, pH, concentracin de NaCl, y NaNO2. El nmero de genes para cada
individuo de la poblacin dependi del grado de la superficie de respuesta escogida para
hacer la bsqueda del modelo. Se comprob experimentalmente como, en primer lugar
partiendo de modelos de superficies de respuesta sobredimensionados, la metodologa
encuentra el modelo al que responde el fenmeno, mejorando su interpretabilidad y su
capacidad de generalizacin. Este procedimiento representa una ventaja frente al uso de
tests estadsticos para eliminar coeficientes e identificar el modelo con exactitud, mucho
ms tedioso y, en algunos casos, sesgado por apreciaciones subjetivas del investigador.
Comprobaron que adems que con este algoritmo se pueden alcanzar resultados que
mejoran los obtenidos mediante regresin no lineal (donde hay que conocer la forma
exacta del modelo).
Por otro lado Santilln (2010) ha reportado la aplicacin del agua de cola como
nutriente en el medio de cultivo de Spirulina sp. El agua de cola es subproducto de
desecho de la industria pesquera, con un alto contenido de protenas (18 a 20%), que
adems contiene aceite, slidos en suspensin, minerales y vitaminas. En esta
investigacin se encontr que Spirulina platensis llego a producir 34800 celulas/mL con
medio de cultivo a base de 15 mL de agua de cola, 985 mL de agua de mar y 17 g de
bicarbonato, el que fue comparado con un medio control con 1000 mL de agua de mar y
17 mL de bicarbonato con el obtuvo 20800 celulas/mL. El cultivo fue llevado a cabo
con luz fluorescente de 40W durante un fotoperiodo de 12 horas/da y mantenido por
agitacin de aire durante el fotoperiodo. El cultivo con agua de cola mostro una fase lag
de 14.5 horas y el control tuvo una fase lag de 17.5 horas.
Kebede y Ahlgren (1996) reportaron mayores valores de intensidad en condiciones de
crecimiento ptimas en un turbidostato. Desarrollaron cultivos en medio modificado de
Zarrouk y expuestos a un rango de intensidad de luz (20-500 mol fotones m-2s-1),
mostraron una tasa mxima de crecimiento especfico (max) de 1.78 d-l, rendimiento

cuntico para el crecimiento () de 3.8 en condiciones ptimas de 330 mol fotones m2 -1

s , oscilaron entre 2.8 al 9.4%.

Singh, et al. (2010) han reportado que se han desarrollado cultivos en diferentes lugares
con diferentes intensidades de luz. Los lugares fueron: (1) laboratorio, 1800100 L (2)
invernaderos 1600100 L (3) al aire libre 200100 L con luz natural. Los cultivos que
se mantuvieron bajo invernadero, obtuvieron una mayor cantidad de masa seca
(0.623g/L) y la intensidad de 1600100 L fue la mejor.
Otros autores como Rodrguez y Triana (2006) han mencionado que la intensidad
lumnica a escala de laboratorio puede variar entre 2000 y 5000 luxes (1 lux = 0.011953
molquanta/m2.s (microeistein). Habib et al. (2008) han presentado las actuaciones del
crecimiento de Spirulina platensis y S. maxima bajo fotoiluminacin limitada, para lo
cual utilizaron una solucin del cultivo estndar de bicarbonato-carbonato a pH 9-9.5
con burbujeo de aire 1% de CO2. Encontraron que la tasa ms favorable de crecimiento
de S. platensis ocurre en la presencia de 2.57 g/Litro de KNO3 con una tasa de
crecimiento de 0.3-0.4/da. Asimismo reportan la posibilidad de utilizar bacterias
nitrificantes para cubrir el requerimiento de la fertilizacin de nitrgeno en un cultivo
msico de Spirulina sp. Para lo cual, primero adaptaron las bacterias nitrificantes a pH
8-10, 0.62.2% de sal y 6 a 12 mg/Litro de NaHCO3 en la solucin del cultivo.
Encontraron que la concentracin de NO3-N alcanz 20 mg/Litro despus que, las
bacterias nitrificantes fueron inoculadas en la solucin del cultivo de Spirulina sp. y de
una incubacin por 6 das a 25 C. Ceniza de cscara de arroz (CCA y NaHCO3 fueron
utilizados como fuente de carbono en el cultivo de Spirulina sp. Reportndose que la
adicin de 2.0 g NaHCO3/Litro cada dos das, permite un mejor crecimiento Spirulina
sp. que 1.0 g CCA/Litro cada da, pero esto no tiene soporte econmico.
Vsquez (2013) en un trabajo de investigacin no publicado (presentado al
Vicerrectorado de Investigacin de la UPAO y aceptado para su publicacin en la
revista Agroindustrial Science) realiz el modelamiento matemtico y por redes
neuronales artificiales del crecimiento de Spirulina sp. en fotobiorreactor con fuente de
luz fluorescente e iluminacin en estado slido LED (Light Emitting Diode ),
encontrando que la iluminacin LED, permiti obtener un valor elevado de biomasa de
Spirulina sp. () de 0.90, en comparacin con la obtenida con iluminacin fluorescente de
0.82; as como una mayor velocidad de crecimiento de 0.63 h-1, precedida de un menor
tiempo de latencia de 0.34 h. La iluminacin fluorescente fue de 40W y la iluminacin LED
de 1W; obteniendo con ambos sistemas 11.0 klx. Los niveles de aire dosificacin de aire

fueron de 3 L/min. Esta investigacin apertura la posibilidad de una mejora en la tecnologa

de produccin de biomasa de Spirulina sp. Andrade y Costa (2007) usaron melaza para el

cultivo de Spirulina sp., encontrando que la produccin de biomasa es estimulada por la

melaza la cual tiene un bajo costo.
El cultivo industrial de Spirulina sp. se ha realizado tradicionalmente en sistemas
abiertos conocidos como raceways, pero la necesidad de contar con sistemas de cultivo
ms higinicos y eficientes ha hecho que cientficos de todo el mundo diseen sistemas
cerrados conocidos como fotobioreactores (FBR) (Barra y Guartatanga, 2013). Los
investigadores plantearon una fotoplataforma FBR bajo invernadero (temperatura del
lugar: 4-12C) conformado por un solo canal angosto, inclinado, y dispuesto en
serpentina; asimismo un tanque que, a ms de permitir el bombeo del cultivo a la
fotoplataforma durante su operacin en el da, no permita que el cultivo se enfre
durante la noche. FBR diseado vendra a ser una combinacin del tipo plano inclinado
y del de serpentina, con una fotoplataforma de 10 m de ancho y 100 m de largo (1000
m2), conformada por un canal de 600 m de largo y 1.66 m de ancho dispuesto en
serpentina. El canal tiene la pendiente necesaria para asegurar una adecuada velocidad
de flujo y est construido con liner (geomembrana) de polietileno de alta densidad,
estacas, y cables, sobre una rampa conformada en la tierra. En la fotoplataforma se
produce la fotosntesis en una fotocapa de apenas 3 cm de altura. La pendiente del canal
(0.16%) fue calculada utilizando la teora de flujo en canales abiertos para garantizar
una velocidad de flujo de 30 cm/s. El caudal de la bomba se calcul utilizando el rea
tangencial y la velocidad de flujo requerida en el canal. El clculo de la altura dinmica
total (14.4 pies) y el caudal de bombeo (240 gpm) permitieron dimensionar la bomba. El
volumen del tanque (40 m3) se calcul en 1.3 veces el volumen de la fotoplataforma (30
m3). Se calcul que la exposicin real del cultivo a luz solar es de 46 min/h. Manifiestan
que en condiciones normales, el cultivo amanece con pH de 9.8 y en el transcurso del
da puede llegar hasta 10.3; por lo que durante la noche es necesario inyectar CO2 en el
tanque. La bomba consume 1000 watss (1.3 HP); por lo que el ndice de consumo de
energa es de 1 watt/m2. Al comparar este valor con el ndice de consumo de energa de
Aldanempres Cia. Ltda. (4 watt/m2) y el ndice de energa tpico de un raceway (3
watt/m2) se puede observar que, en trminos energticos, el sistema diseado es mucho
ms eficiente. La acumulacin del oxgeno fotosinttico que es un gran limitante en
FBR tubulares, no es un problema en el sistema diseado debido a que se libera con
facilidad en el canal de la fotoplataforma y en el tanque.

ncel y Akpolat (2006) reportaron un sistema de fotobiorreactor integrado para la

produccin de Spirulina sp. El diseo integrado consiste de un tanque para la
produccin principal y una unidad helicoidal con la iluminacin (fotobiorreactor tubular
helicoidal). La mejor iluminacin se realiz al interior del tanque en un ciclo 12/12 de
luz/oscuridad. El mejor valor obtenido fue de una intensidad de 11000 lux a 7 cm s -1.

10. JUSTIFICACIN DEL PROYECTO

La microalga Spirulina sp. es una cianofita filamentosa no diferenciada, habitante de
cuerpos de agua alcalinos y que se cultiva para consumo humano debido a su contenido
nutricional. En los ltimos aos se le han atribuido diversos efectos positivos que han
determinado considerarlo un alimento promotor de la salud o nutracetico (Ramirez
y Olvera, 2006). Proporciona una alta protena fcilmente digestible (c. 60 por ciento)
con altos niveles de -caroteno, vitamina B12, hierro, trazas de minerales y el cido
graso esencial raro -linolnico, Adicionalmente no tiene negativa cultural y religiosa
para su consumo (Habib et al., 2008).
Los cultivos de Spirulina sp. tienen un potencial considerable de desarrollo,
especialmente a pequea escala, para mejora nutricional, mitigacin ambiental y
desarrollo de medios de subsistencia. Pudiendo desarrollarse en zonas costeras y
alcalinas donde la agricultura tradicional sufre con la escasez de agua y la salinizacin.
A pequea escala puede ser orientado a: (i) como suplemento nutricional para uso
generalizado en zonas rurales y comunidades urbanas donde la dieta bsica es pobre o
inadecuada; (ii) permite la diversificacin del tradicional cultivos en donde los recursos
de tierra o agua son limitados; (iii) una solucin integrada para el tratamiento de aguas
residuales, produccin de la acuicultura en pequea escala y suplemento de
alimentacin en ganado; y (iv) como una solucin de mediano plazo en situaciones de
emergencia donde un suministro sostenible de alto valor protenico/vitamnico es
requerido (Habib et al., 2008).
Segn Habib et al. (2008) la Spirulina sp. utiliza menos agua por kilo de protena
(aproximadamente 2100 Litro/kg de protena) que otros cultivos. El agua utilizada en su
cultivo puede ser reciclada y la mayor prdida de agua importante es por evaporacin.
El cultivo de Spirulina sp. utiliza el 25 por ciento del agua que utiliza la soya, el 17 por
ciento del maz y 2 por ciento el agua que se requiere la protena de carne, asimismo
puede utilizar agua salina. Requiere menos consumo de energa por kilo de la soya,
maz o carne, incluyendo la energa solar y la energa generada. Su eficiencia energtica

es 5 veces ms mayor que la soya, 2 veces mayor que el maz y ms de 100 veces
superior al alimento grano-carne.
En este contexto la presente investigacin se busca dilucidar la posibilidad de obtencin
de mayor produccin de biomasa de Spirulina sp. por rea de cultivo en fotobiorreactor
abierto a la atmsfera, empleando diodos electroluminosos, variando los tiempo de
exposicin lumnica a travs de diferentes fotoperiodos y a la vez contrastar la
eficiencia productiva a travs de la utilizacin de modelos matemticos alternativos
obtenidos por MSR y AG, lo cual podra beneficiar la economa de un proceso, por el
nivel los bajos costos de consumo energtico que poseen estos diodos, los cuales
inclusive podran ser alimentados en el futuro por energa proveniente de paneles
solares.

11. OBJETIVOS
- Disear y construir un fotobiorreactor abierto de vidrio de plano inclinado.
- Optimizar el efecto de la intensidad de diodos electroluminosos y de la relacin de
fotoperiodo en la produccin de biomasa de Spirulina sp. mediante una Metodologa
de Superficie de Respuesta - Diseo Compuesto Central Rotable y Algoritmos
Genticos.
- Determinar los valores ptimos de produccin de biomasa.

12. MARCO TERICO

12.1.Microalga Spirulina
Son algas microscpicas filamentosas multicelulares azul-verdosas, pertenecientes a dos
gneros separados Spirulina y Arthrospira con ms de 15 especies. De stos,
Arthrospira platensis es la que ms publicaciones cientficas tiene. Crece en el agua, y
puede ser cosechado y procesado fcilmente y tiene significativamente altos contenidos
de macro y micronutrientes. En muchos pases de frica, se utiliza como alimento
humano como una importante fuente de protena que se recoge de agua natural, para que
despus de un secado es utilizada en la alimentacin. Ha ganado considerable
popularidad en la industria de alimentos de salud humana y en muchos pases de Asia se
utiliza como suplemento de protena y como alimento humano (Habib et al., 2008)
12.2.Condiciones de cultivo
Ocho importantes factores ambientales influyen en la productividad de Spirulina sp:
luminosidad (fotoperiodo 12/12, 4 luxes), temperatura (30C), tamao del inoculo,

velocidad de agitacin, slidos disueltos (10-60 g/Litro), pH (8.5-10.5), calidad del agua
y presencia de macro y micronutrientes (C, N, P, K, S, Mg, Na, Cl, Ca y Fe, Zn, Cu, Ni,
Co, Se) (Habib et al., 2008).
Habib et al. (2008) reportan que Zeng, Cai y Ouyang (2001b) han encontrado que la
introduccin del 1 por ciento CO2 en el sistema de cultivo contribuye a aumentar la
concentracin final de clulas y estabilizar el pH del cultivo. Asimismo se ha
encontrado que el fotoperiodo ptimo es 16 horas/da basado en la evaluacin de la
densidad ptica y contenido de clorofila de S. platensis. Cultivo masivo de Spirulina sp.
suele llevarse a cabo en estanques poco profundos, equipado con ruedas de paleta para
mezclar el cultivo. Normalmente se usan dos tipos de estanques al aire libre: el de
concreto que se constituye en un costo elevado, y el segundo constituido por canales en
el la tierra cubiertas con cloruro de polivinilo (PVC) o algn otro material plstico
durable. El revestimiento de los canales incrementan el costo de produccin de la
biomasa algal, por lo tanto, es importante la bsqueda de materiales ms baratos y
procesos, tales como el sellado con arcilla de bajo costo. La superficie de cultivo
comercial vara entre 0.1 y 0.5 hectreas y la profundidad del cultivo generalmente se
mantiene a 18 cm. Una rueda de paleta, grande (con un dimetro de hasta 2.0 m y una
velocidad de 10 rpm) o pequea (con un dimetro de 0.7 m y una velocidad de 2 a 3
veces ms rpida que la paleta de 2.0 m de dimetro), es el ms comn dispositivo de
agitacin. Una dificultad de esta paleta de agitacin es que el flujo no es
suficientemente turbulento para producir un patrn de luz ptima para las algas
unicelulares. Por lo tanto, otros medios se han utilizado para aumentar la turbulencia en
estanques poco profundos y consecuentemente la eficiencia fotosinttica.
Habib et al., (1980) reportan que en 1996, en el Departamento de bioqumica, Facultad
de Ciencias, Chulalongkorn University, Bangkok, la Spirulina platensis fue cultivada en
un medio Zarrouk normal y el efecto de varios factores medioambiental sobre el
contenido de -caroteno retardaron el crecimiento de las clulas a pH 10.5 y 11.0. Una
temperatura superior a 35C caus una disminucin en el contenido de -caroteno. Un
incremento en la intensidad de la luz hasta 10000 lux dio lugar a un contenido mayor caroteno. Cuando las clulas se cultivaron bajo iluminacin de luz roja, contenido de caroteno fue el ms alto, seguida por el ms alto bajo con luz azul y luz blanca,
respectivamente.
La deficiencia de nitrato en el medio de crecimiento no parece causar un incremento en
el contenido de -caroteno contenido. Tambin se encontr que el contenido de -

caroteno se increment con el aumento de NaCl en el medio. Sin embargo, podra

obtenerse un drstico aumento en el contenido de -caroteno, desarrollndose las
clulas inicialmente en el medio que con 10 g/Litro de NaCl y luego transferir las
clulas para el nuevo medio con 30 g/Litro de NaCl o con una aclimatacin inicial de
las clulas en un medio con 40 g/Litro de NaCl y luego transferirlos al nuevo medio que
contiene el mismo contenido de NaCl (40 g/litro) (Habib et al., 1980).
Se ha observado que las prdidas de biomasa debida a la respiracin nocturna fueron
significativamente mayores en un cultivo a 25C (6.8 por ciento de la biomasa seca en
promedio) que en un cultivo a 35C (4.4 por ciento de la biomasa seca en promedio).
Habib et al. (1980) reportaron que Vonshak y Guy (1988) fueron los primeros en
describir el fenmeno de la foto-inhibicin en cultivos de Spirulina al aire libre.
Siguiendo la actividad fotosinttica "in-situ" de los cultivos al aire libre y creciendo en
completa radiacin solar o bajo condiciones de sombra, observaron que esta condicin
puede aumentar la actividad fotosinttica. Se demostr que debido a cambios extremos
en el nivel de intensidad de luz, al menos en los cultivos de Spirulina sp., puede ocurrir
foto-inhibicin. El hecho de que los cultivos de Spirulina sp. fotoinhibidos tienen una
menor eficiencia fotosinttica, significa que requieren ms luz para alcanzar el mismo
nivel de actividad como clulas no-fotoinhibidas, haciendo al cultivo fotoinhibido luz
limitante. Esto conduce finalmente a lo que puede ser visto como la paradoja de la luz
en cultivos de Spirulina sp. al aire libre: durante una parte importante del da, los
cultivos al aire libre son fotoinhibidos y al mismo tiempo luz limitante.
Se recomienda limitar el rango de pH a valores alcalinos entre 8.8 y 9.2, pudiendo
emplear CO2 por periodos de tiempo para mejorar su productividad (Rodriguez y
Triana, 2006).
12.3.Cosecha y procesamiento de la biomasa de Spirulina
La cosecha de Spirulina sp., procesamiento y embalaje tiene ocho principales etapas de
principio:
- Filtracin y limpieza: a travs de un filtro de nylon en la entrada que es necesario en la
pileta.
- Pre-concentracin: Para obtener biomasa algal, la cual se lava para reducir las sales.
- Concentracin: Para remover la mayor cantidad posible de agua intersticial (situado
entre los filamentos).
- Neutralizacin: Para neutralizar la biomasa con la adicin de solucin cida.
- Desintegracin: Rompimiento de los tricomas con un molinillo;

- Deshidratacin por atomizacin: esta operacin tiene gran importancia econmica ya

que se trata de acerca de 20 a 30 por ciento de los costos de produccin;
- Embalaje: Es generalmente en bolsas de plstico selladas, para evitar el efecto
higroscpico de la Spirulina sp. seca; y
- Almacenamiento: Almacenar en fresco, seco, almacenes en oscuridad, libres de plagas
e higinicos, para evitar el deterioro de los pigmentos de la Spirulina sp.
12.4.Utilidad de la Spirulina
Se han atribuido efectos positivos en el tratamiento de algunos tipos de alergias, anemia
cncer, enfermedades virales y cardiovasculares. Muchas de sus propiedades son
consecuencia de la presencia de pigmentos como las ficobiliprotenas y los
carotenoides, as como otros compuestos como polisacridos, cidos grasos, destacando
el cido gama linoleico) protenas, vitaminas y minerales (Ramrez-Moreno y OlveraRamrez, 2006).
Se reporta que la Spirulina sp. tiene una calidad nica para detoxificar (neutralizar) o
quelar minerales txicos, una caracterstica que no se han confirmado con otras
microalgas. Spirulina sp. puede utilizarse para detoxificar arsnico del agua y los
alimentos. Tambin puede utilizarse para quelatizar o detoxificar el efecto txico de
metales pesados (minerales) de agua, alimentos y medio ambiente. En la Universidad de
Beijing se ha extrado molculas bioactivas de Spirulina sp. las cuales pueden
neutralizar o destoxificar el efecto de metales pesados, mostrando actividad antitumoral
(Habib et al., 2008).
Se reporta propiedades antidiabticas de la Spirulina sp., aspecto que fue investigado
con ensayos clnicos con un modelo animal. Los niveles de glucosa en sangre glucosa,
insulina en el plasma y pptido-C en el suero y actividad de la enzimas hexoquinasa y
glucosa 6-fosfato que metabolizan la glucosa fueron estimadas y estudiadas en ratas
diabticas. El efecto de la Spirulina sp. en una dosis de 15 mg/kg de peso corporal
proporcion un mayor ndice de significancia que una dosis 5 y 10 mg/kg de peso
corporal. La actividad de hexoquinasa en el hgado disminuy marcadamente, mientras
que la actividad de la glucosa-6 -fosfatasa increment significativamente en el control
diabtico (Layam y Kasi, 2007).
Rodrguez y Triana (2006) mencionan que Spirulina sp. protege contra el desarrollo de
alergias, se ha demostrado en ratas que disminuye las reacciones anafilcticas. Bloquea
la liberacin de la histamina y del factor de necrosis tumoral (TNF-a) inducida por IgE.
Asimismo que la Spirulina sp. incluida en la dieta de ratas a una concentracin del 45%

(equivalente al 22% de protena) proporcionada sola o en combinacin con gluten de

trigo durante la primera semana de gestacin y lactancia, aumenta el contenido de hierro
y hemoglobina ms que la de la casena y gluten de trigo de trigo juntos. El estudio
mostro un buen potencial hematolgico de Spirulina sp. durante la gestacin y lactancia.
Por otro indican que la administracin de Spirulina sp. aument en 10000 veces la
actividad antitrombina del cofactor II de la heparina e indujo eficientemente la
produccin de un activador de plasmingeno especfico en tejidos a travs de un
proceso de translocacin, cuyo mecanismo se desconoce.
Dosis de 100 y 200 mg/kg de ficocianina C, obtenida de Spirulina sp. administrada
oralmente a ratones, redujeron la inflamacin de extremidades posteriores, producidas
por glucosa oxidasa. Tambin se encontr que este pigmento disminuy
significativamente el edema producido por cido araquidnico y acetato de 12-Otetradecanoil forbol. Igualmente redujo, lo causado por la inoculacin de carragenina en
la extremidad posterior de ratas y el granuloma provocado por la implantacin de
algodn. Posteriormente se encontr que la ficocianina C inhibi significativamente el
edema y las concentraciones de leucotrieno TB4 inducidos por cido araquidnico.
Adems se encontr efecto antiinflamatorio en la colitis, originado en ratas por edema.
Admistrando Spirulina sp. en dosis de 800 mg/kg a ratones albinos Swiss, antes y
despus con acetato de plomo, aumento su tiempo de supervivencia y protegi del
efecto del metal como el peso de los testculos, peso corporal y dimetro tubular de
espermatogonias A y B, espermatocitos primarios y secundarios. Tambin se ha
observado que en la intoxicacin con este metal, el cido 5-aminolevulnico genera
radicales libres de oxgeno que conducen a muerte celular y por otra parte disminuye la
sntesis del DNA. Al ser la Spirulina sp. una fuente rica en antioxidantes y capaz de
aumentar su sntesis, protege y evita el dao causado por este metal.
Se ha evaluado en ratas el efecto de la administracin oral de Spirulina sp. durante 2
semanas, sobre las respuestas vasomotoras de anillos de aorta con y sin endotelio.
Spirulina sp. Tuvo un efecto sobre las respuestas vasomotoras dependientes del
endotelio y disminuy el tono vascular al incrementar la sntesis y liberacin de xido
ntrico, as como de un eicosanoide vasodilatador dependiente de la ciclooxigenasa. Al
disminuir la sntesis y liberacin de un eicosanoide vasoconstrictor, se previenen los
efectos vasomotores, causados por una dieta rica en fructosa, cuando fue administrada
durante 6 semanas.

Se ha informado que el tratamiento de cultivos de macrfagos de pollo con un extracto

de Spirulina sp. aument su capacidad fagoctica intrnseca, aunque no mejor la de
partculas opsonizadas. Adems los macrfagos tratados produjeron una sustancia
soluble capaz de matar clulas tumorales.
12.5. Optimizacin por Metodologa de Superficie de Respuesta (MSR)
Los orgenes de la MSR (en ingls, Response Surface Methodology - RSM) se remiten
al trabajo de Box y Wilson (1951); pero ha sido durante los ltimos 20 aos en que
dicha metodologa ha tenido un desarrollo considerable tanto en aspectos tericos, como
en aplicaciones en escenarios reales. Inicialmente debut con considerable xito en la
industria qumica y ltimamente ha encontrado amplia aplicacin en procesos de
fabricacin y se ha constituido como facilitador de los sistemas computacionales, el cual
ha permitido el desarrollo de grficos que facilitan el anlisis de los resultados. La MSR
es una estrategia de experimentacin secuencial y modelacin que permite estimar las
condiciones ptimas de operacin de un proceso y mejorar significativamente su
resultado en cuanto a costos, tiempos, eficiencia, productividad, cumplimiento de
especificaciones y en fin, mejorar su calidad. Un proyecto bien planeado y ejecutado
adecuadamente debe reflejar sus resultados no slo en los indicadores de productividad
y de gestin del proceso, sino que en el mediano plazo dichos resultados deben
reflejarse en los estados financieros de una empresa (Cuesta, 2013).
Se han realizado varios estudios sobre la optimizacin los cuales son laboriosos y
consumen tiempo y no describen el efecto interactivo entre las variables. Por el
contrario el mtodo experimental estadstico basado en la MSR es un mtodo que ahorra
de tiempo y puede representar el efecto interactivo entre las variables. Para la aplicacin
de un modelo de MSR, el modelo (cuadrtico) generalmente es usualmente construido
para describir el efecto interactivo entre las variables y, a continuacin, este modelo se
puede utilizar para modelar y optimizar bioprocesos.
Para aplicar la MSR se requiere reducir la dimensionalidad , lo que algunos autores
llaman cribar,

otros tamizar; pero consiste esencialmente en seleccionar de entre

muchos, los factores que ms significativamente afectan la caracterstica de lo que se

pretenden optimizar. Si bien debe ser claro que el resultado de cada caracterstica se
produce por la interaccin de miles y hasta millones de otras variables que la afectan en
mayor o menor proporcin; ser bastante complicado y adems costoso manipular
muchos factores, por experiencia se conoce que al manejar informacin con ms de

cuatro factores los anlisis comienzan a ser muy dispendiosos y los efectos tienden a
confundirse.
12.6.Optimizacin por Algoritmos Genticos
Los AG son una bsqueda heurstica la cual modela el proceso de la evolucin natural.
Esta heurstica es utilizada en la bsqueda de soluciones a problemas de optimizacin.
Los AG son una forma novedosa de atacar el problema de buscar el extremo de una
funcin. Al examinar el desarrollo evolutivo, el hombre se ha dado cuenta que la
naturaleza, durante el transcurso de los siglos, ha ido optimizando a todas las especies
vivas para que puedan dominar mejor el mundo que las rodean para poder sobrevivir, y
se ha dado cuenta tambin de que esta optimizacin es realizada a travs de la gentica
y la seleccin natural. Por tanto, no resulta descabellado pensar en simular estos
mecanismos y utilizarlos para resolver el problema de la optimizacin de sistemas de
otro tipo. Los primeros estudios dentro del rea fueron desarrollados por Joan Holland
en 1975. La principal ventaja de los AG radica en que son capaces de evadir los
extremos locales de las funciones, pero tienen en su contra la cantidad de operaciones
que hay que realizar. Los AG trabajan directamente sobre la funcin y no sobre la
derivada ni ninguna otra funcin auxiliar. Tiene tres operadores bsicos que son:
seleccin, cruce y mutacin. Los parmetros que controlan el desempeo del AG son la
probabilidad de cruce (Pc), probabilidad de mutacin (Pm), tamao de la poblacin,
etctera (Cabezas, 2002).
Los AG exploran todas las regiones del espacio usando una poblacin de individuos,
Cada individuo representa un conjunto de variables independientes. Inicialmente, se
forma una poblacin de individuos al azar. La aptitud de cada individuo es evaluada
mediante una funcin de la aptitud. Al trmino de la evaluacin de la aptitud, se aplican
operaciones genticas como mutacin y cruce que son aplicados a individuos
seleccionados segn su aptitud para producir la prxima generacin de individuos para
la evaluacin de la aptitud. Este proceso contina hasta que se encuentre una solucin
ptima (Wang y Wan, 2009).

13. HIPTESIS
Es optimizable por algoritmos genticos con elevada precisin el efecto de la intensidad
de diodos electroluminosos y del fotoperiodo en la produccin de biomasa de Spirulina
en fotobiorreactor abierto.

14. METODOLOGA
14.1.Materiales y equipos
- Cultivos stock de Spirulina sp.
- Medio modificado para Spirulina sp. (Aiba y Ogawa, 1977 y Ayala et al., 1985)
- Fotobiorreactor de vidrio triple
- Medidor de Lux
- Microscopio ptico 40X
- Cmara Neubauer
- Espectrofotmetro
- pHmetro
- Medidor de oxgeno
- Medidor de conductividad elctrica
- Rotmetro de aire
- Rotmetro de gas carbnico
- Soporte de acero
- Diodos electroluminosos
- Bomba de agitacin
- Compresora
- Tanque de gas carbnico
- Sistema de tuberas para cosecha y evacuacin
- Filtro prensa de laboratorio
- Computadora y software Statistica
14.2.Metodologa experimental
En la Figura 1 se observa la secuencia del diseo experimental. Para el desarrollo del
experimento se disear y construir un fotobiorreactor de plano inclinado de vidrio
triple, el cual ser abierto a la atmosfera y contara con un tanque de recepcin del
cultivo y una bomba de recirculacin. Una vez probado en cuanto a velocidad de flujo
adecuado y la correcta posicin de las luminarias, se realizar el cultivo de Spirulina sp.
diseando la matriz experimental para los dos niveles planteados (intensidad lumnica y
fotoperiodo) de acuerdo al planteamiento factorial: 2n +2*n + 4 puntos centrales. La
amplitud de las variables independientes se determinar a travs de un DCCR con un
valor = 1.4142 de acuerdo a la Tabla 1.

El cultivo de Spirulina sp. en tubo inclinado con agar, ser mantenido utilizando el
medio modificado por Aiba y Ogawa (1977) y para la secuencia de la investigacin
experimental se utilizar el medio reportado por Ayala et al. (1985) de acuerdo a (g/L):
NaHCO3:3.0, K2HPO4:0.07, FeSO4:0.005, salitre:0.2 (aproximadamente NaNO3: 0.1;
KNO3: 0.1), sal cruda de mar:9.1. Durante el crecimiento del cultivo se controlara:
tiempo, iluminacin, oxgeno disuelto, conductividad elctrica, pH, temperatura,
recuento de clulas y la densidad ptica del cultivo. Al entrar en la fase de mxima
estacionaria se proceder a realizar la recuperacin y evaluacin de la biomasa,
procedindose estimar los valores ptimos de la produccin de biomasa mediante la
Metodologa de Superficie de Respuesta y Algoritmos Genticos.

Tabla 1. Valores utilizados en el DCCR para los factores intensidad lumnica y

fotoperiodo
Variables
X1: intensidad lumnica (klux)
X2: fotoperiodo (horas de luz/da)

-2
1.25
12

-1
7.2
13.8

0
21.475
18

+1
35.8
22.2

+2
41.7
24

Con los valores de la Tabla 1 se establecer la matriz de desarrollo experimental con

cuatro (04) puntos axiales, cuatro (04) repeticiones en el punto central, totalizando once
(12) ensayos con dos (02) una variable dependiente: produccin de biomasa de acuerdo
a la Tabla 2. En la Figura 1 se observa el desarrollo de la secuencia experimental.
Tabla 2. Matriz para la obtencin de los datos experimentales y optimizacin
empleando Metodologa de Superficie de Respuesta (MSR) y Algoritmos Genticos
(AG)
Ensayos
X1
X2
X1
X2
Y
intensidad fotoperiodo Produccin
lumnica
(horas de
de biomasa
(klux)
luz/da)
(g)
1
-1
-1
7.2
13.8
Y1
2
1
-1
35.8
13.8
Y2
3
-1
1
7.2
22.2
Y3
4
1
1
35.8
22.2
Y4
5
-2
0
1.25
18
Y5
6
2
0
41.7
18
Y6
7
0
-2
21.475
12
Y7
8
0
2
21.475
24
Y8
9
0
0
21.475
18
Y9
10
0
0
21.475
18
Y10
11
0
0
21.475
18
Y11
12
0
0
21.475
18
Y12

Los valores experimentales obtenidos en la Tabla 2 permitirn con el empleo del

software Statistica, obtener valores de coeficientes de regresin de un modelo
matemtico de 2 orden de acuerdo a:

Y 0 1 X1 2 X 2 11X12 22 X 22 12 X1 X 2
Donde:
0, 1, 2, 11, 22, 12: coeficientes de regresin
X1, X2: variables independientes
Y: variable dependiente
Construccin de
fotobiorreactor abierto de
plano inclinado

Intensidad lumnica:
1.25 41.7 klux
Fotoperiodo:
12 -24 horas/da

Diseo Factorial Compuesto

(DCCR)

Crecimiento del cultivo

Obtencin de biomasa

Optimizacin

Medicin de iluminacin (lux)

Medicin del oxgeno
Medicin de la conductividad
Control del tiempo (horas)
Control de pH
Control de temperatura
Recuento celular y densidad ptica

- Peso hmedo
- Peso seco

- Metodologa de Superficie de Respuesta

- Algoritmos Genticos

Figura 1. Esquema del desarrollo experimental para la optimizacin del efecto de la

intensidad de diodos electroluminosos y del fotoperiodo en la produccin de biomasa de
Spirulina sp. en fotobiorreactor abierto
Con lo que determinar primeramente la significancia estadstica de los resultados
experimentales y en segundo lugar la significancia estadstica de las variables en el
contexto lineal, cuadrtico o de su interaccin que permita ajustar el modelo,
posibilitando elaborar la Superficie de Respuesta y Superficie de Contornos, ubicando la
regin de optimizacin. Esto se realizar igualmente utilizando el software Statistica.
La optimizacin de las variables utilizando Algoritmos Genticos se realizara utilizando
el software de Matlab. Se establecer poblaciones dentro de las restricciones, para la

variables dependiente: produccin de biomasa (Y), generando aleatoriamente

coeficientes de regresin (); donde la funcin objetivo o aptitud (fitness)
respectivamente ser maximizar una funcin matemtica de 2 orden para la produccin
de biomasa.
Inicialmente, se formara entre los rangos obtenidos experimentalmente, para la
produccin de biomasa, poblaciones de individuos al azar. Cada individuo ser evaluada
mediante la funcin de la aptitud. Al trmino de la evaluacin, se aplicarn operaciones
genticas como cruce y mutacin que sern aplicados a individuos seleccionados segn
su aptitud para producir la prxima generacin de individuos. Este proceso continuar
hasta que se encuentre una solucin ptima de maximizacin. El desarrollo de manera
general seguir de acuerdo a la secuencia que se observa en la Figura 2, donde (g) es el
nmero de generaciones o iteraciones (Castro, 2009).

Figura 2. Secuencia para un Algoritmo Gentico simple

14.3.Anlisis estadstico
La precisin de los modelos matemticos se evaluar a travs de coeficiente de
determinacin R2, entre los valores esperados y predichos tanto para el obtenido a travs

de la MSR y los AG e igualmente se realizar un anlisis de varianza (ANVA) entre los

valores predichos y los valores esperados.

15. BIBLIOGRAFA
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16. CRONOGRAMA DE TRABAJO

Cronograma de trabajo
Descripcin

Meses

Actividades/Tareas

Enero

Febrero

Diseo al detalle de
fotobiorreactor

Construccin
fotobiorreactor

del

Instalacin
fotobiorreactor

del

Compra
de
accesorios
fotobiorreactor

los
del

Marzo

Instalacin y prueba de
los sistemas

Preparacin del inculo

Desarrollo
de
experiencia

la

Tratamiento de datos
Redaccin del informa
final

Abril

Mayo

Junio

Julio

Agosto

Setiembre

Octubre

Noviembre

X
X

17. PRESUPUESTO DETALLADO

Descripcin
- Medidor de luz (lux)
TW-86536-10 (Cole-Parmer)
- Medidor de conductividad
elctrica
TW-35604-05 (Cole-Parmer)
- PHmetro porttil
TW-3663430 (Cole-Parmer)
- Bomba de agitacin (586.7 L/min)
TW-75506-01 (Cole-Parmer)
- Sistema de filtrado en bolsa
TW-01510-06 (Cole-Parmer)
- Filtros
TW-01516-32 (Cole-Parmer)
- Compresora regenerativa
TW-79607-10 (Cole-Parmer)
- Fotobiorreactor de vidrio triple
- Soporte del fotobiorreactor
- Tanque de gas carbnico
- Vlvula reductora de presin
- Diodos electroluminosos
- Tuberas de conexin
- Sistema de transporte de agua de
mar

18. HOJA DE INVESTIGADORES

Cantidad
01

Precio unitario S/.)

397.00

Subtotal (S/.)
397.00

01

1068.00

1068.00

01

257.00

257.00

01

1965.00

1965.00

01

640.00

640.00

10

27.00

270.00

01

991.00

991.00

01
01
01
01
06
10 m
01

500.00
300.00
350.00
250.00
60.00
10.00
552.00

500.00
300.00
350.00
250.00
360.00
100.00
552.00

TOTAL: S/.

8000.00