INMOVILIZACIN DE ENZIMAS: UNA VISIN GENERAL SOBRE LAS TCNICAS Y MATERIALES DE APOYO

Resumen:
Las exigencias actuales de las industrias biotecnolgicas del mundo son la mejora de la productividad y el desarrollo de
nuevas tcnicas para aumentar su vida til enzima. Estos requisitos son inevitables para facilitar a gran escala y la
formulacin econmica. Inmovilizacin de enzimas proporciona una base excelente para aumentar la disponibilidad de la
enzima al sustrato con mayor volumen de ventas durante un perodo considerable de tiempo. Varios soportes naturales y
sintticos han sido evaluados por su eficacia para la inmovilizacin de enzimas. Hoy en da, las enzimas inmovilizadas se
prefieren sobre su contraparte libre debido a su disponibilidad prolongada que limita los procesos de acabado y
purificacin redundantes. Las investigaciones futuras deberan esforzarse en la adopcin de tcnicas de atrapamiento de
logstica y sensibles, junto con soportes modificados de forma innovadora para mejorar el estado de inmovilizacin de
enzimas y proporcionar nuevas perspectivas para el sector industrial.
Palabras clave: enzima de inmovilizacin, tcnicas, soportes, aplicaciones
Introduccin
Enzimas o biocatalizadores son notables descubrimientos en el campo de la tecnologa de bioprocesos. Biocatlisis ha
sido ampliamente aceptado en diversos sectores debido a su facilidad de produccin, la especificidad de sustrato y la
qumica verde. Sin embargo, en gran medida para la comercializacin de estos catalizadores de origen biolgico, su
factor de reutilizacin se convierte en obligatoria, so pena de que ya no sera econmico. El mantenimiento de su
estabilidad estructural durante cualquier reaccin bioqumica es muy difcil. En consecuencia, las enzimas inmovilizadas
con eficacia funcional y una mayor reproducibilidad se utilizan como alternativas a pesar de su elevado coste.
Biocatalizadores inmovilizados pueden ser enzimas o clulas completas. La inmovilizacin de la enzima es el
confinamiento de la enzima a una fase (matriz / soporte) diferente de la de sustratos y productos. Polmeros inertes y
materiales inorgnicos se utilizan por lo general como matrices portadoras. Aparte de ser asequible, una matriz ideal
debe incluir caractersticas como la inercia, la fuerza fsica, estabilidad, capacidad de regeneracin, capacidad de
aumentar la especificidad de la enzima / actividad y reducir la inhibicin del producto, la adsorcin no especfica y la
contaminacin microbiana. La inmovilizacin genera continuas operaciones econmicas, automatizacin, alta relacin de
inversin / capacidad y recuperacin de producto con mayor pureza. Se utilizan varios mtodos para la inmovilizacin y
varios factores influyen en el rendimiento de las enzimas inmovilizadas (tabla 1). Adsorcin / mtodo de unin portadora
utiliza portadores insolubles en agua, tales como derivados de polisacridos, polmeros sintticos y vidrio. En el mtodo
de reticulacin covalente, reactivos multifuncionales / bi, tales como glutaraldehdo, bisdiazobenzidine y hexametil
endiisocianato se utilizan. Los polmeros como el colgeno, celulosa y -carragenina se emplean por el mtodo de
atrapamiento, mientras que el mtodo de confinamiento de membrana incluye formulacin de liposomas y microcpsulas.
Tabla 1. Factores que influyen en el rendimiento de las enzimas inmovilizadas.
Este artculo revisa las tcnicas existentes que se utilizan para la inmovilizacin adems de proporcionar una visin de
los ltimos desarrollos para cada uno de ellos. Hemos tratado de arrojar luz sobre las modificaciones importantes con
respecto a las tcnicas y los materiales de apoyo innovadores utilizan para la inmovilizacin de biocatalizadores que
tienen implicacin potencial en el mercado de enzimas futuro.
DIFERENTES TCNICAS USADAS PARA LA INMOVILIZACIN
Adsorcin
Los resultados de adsorcin de la enzima a partir de las interacciones hidrofbicas y los enlaces de sal, donde ya sea el
soporte est baado por la enzima para la adsorcin fsica o la enzima se seca sobre superficies de los electrodos.
Enzimas adsorbidas estn protegidos de la agregacin, la protelisis y la interaccin con interfaces hidrfobos (spahn y
minteer 2008 ). Los investigadores han utilizado soportes ecolgicos como fibras de coco que tiene buena capacidad de
retencin de agua y la propiedad intercambio catinico; celulosa microcristalina con capacidad de unin irreversible;
caoln con alta capacidad de retencin de la enzima por acetilacin qumica; y / materiales mesoporosos micro haber tiol
funcionalizado, gran superficie ideal para las reacciones de reduccin y oxidacin (dey et al. 2002 ; hernndez et al.,
2007 ; karagulyan et al. 2008 ; brgida et al. 2010 ; mitchell y ramrez 2011 ; huang et al. 2011 ). Tamices moleculares
silanizada tambin se han utilizado con xito como soportes para la adsorcin de la enzima debido a la presencia de
silanoles en paredes de los poros que facilitan la inmovilizacin de enzimas por enlace de hidrgeno (daz y balkus
1996 ). Diversas modificaciones qumicas de los soportes utilizados en la actualidad sin duda contribuir a una mejor
inmovilizacin. Los perfiles de actividad de agua de la lipasa adsorbidos utilizando grnulos hidrfobos a base de
polipropileno / ha informado accurel ep-100 (persson et al. 2000 ). Sera importante sealar que accurel con tamaos de
partcula ms pequeos aumenta las velocidades de reaccin y las proporciones enantiomricas durante biocatalyzation
(sabbani et al. 2006 ).
Para un mejor control del proceso y la produccin econmica, yarrowia lipolytica lipasa se inmoviliza sobre octil-agarosa
y octadecil-sepabeads apoya por adsorcin fsica que result en rendimientos ms altos y mayor estabilidad (diez veces)
que la de la lipasa libre. Esto se explica por la hidrofobicidad de octadecil-sepabeads que mejora la afinidad entre la

enzima y el apoyo (cunha et al. 2008 ). Candida rugosa lipasa adsorbida en poli biodegradable (3-hidroxibutirato-cohidroxivalerato) mostr 94% de actividad residual despus de 4 h a 50 c y la reutilizacin hasta 12 ciclos (cabrerapadilla et al. 2011 ). Estos soportes se prefieren porque son menos dura y cristalina de polihidroxibutirato. 1, 4-butenodiol
hilos de biso ter de diglicidilo activado han sido stano adecuado para la ureasa que el aumento de la estabilidad de ph
y retuvo 50% de actividad enzimtica en condiciones secas (mishra et al. 2011 ). Soportes ecolgicos de origen biolgico
no slo evitar un recorte de las cuestiones ticas, sino que tambin retardan los costes de produccin. En los ltimos
tiempos, biocompatibles nanopartculas de slice mesoporosos (msn) soportes se han utilizado para la biocatlisis en
aplicaciones de energa debido a su durabilidad a largo plazo y la eficiencia (popat et al. 2011 ).
La unin covalente
Asociacin covalente de enzimas a soportes se produce debido a sus laterales aminocidos de cadena como arginina,
cido asprtico, histidina y el grado de reactividad con base en diferentes grupos funcionales tales como imidazol,
indolilo, hidroxilo fenlico, etc. (d'souza 1998 ; singh 2009 ). Superficies de pptidos modificados cuando se utilizan para
resultados de la vinculacin de la enzima en la actividad y la estabilidad especfica ms alta con la orientacin de
protena controlada (fu et al. 2011 ). Bromuro de ciangeno (cnbr) -agarosa y cnbr-sepharose activada con resto que
contiene carbohidrato y glutaraldehdo como un brazo espaciador han impartido estabilidad trmica a las enzimas unidos
covalentemente (hsieh et al. 2000 ; cunha et al. 2008 ). Biocatalizadores altamente estable y hiperactivos han sido
reportados por unin de enzimas a los portadores de gel de slice modificados por silanizacin con la eliminacin de
grupos aldehdo sin reaccionar y para sba-15 soportes que contienen poros de jaula revestidos por si-f restos (lee et al
covalente. 2006 ; szymaska et al., 2009 ). Aumento de la vida media y la estabilidad trmica de las enzimas se ha
conseguido mediante el acoplamiento covalente con diferentes soportes como slice mesoporosa, quitosano, etc. (hsieh
et al. 2000 ; ispas et al. 2009 ). La reticulacin de las enzimas para electrospun nanofibras ha demostrado una mayor
actividad residual debido a la mayor rea superficial y porosidad. El uso de tales soportes nanodiametric han trado un
punto de inflexin en el campo de la inmovilizacin biocatalizadores (wu et al., 2005 ; kim et al., 2006 ; ren et al. 2006 ; li
et al., 2007 ; huang et al., 2008 ; sakai et al . 2010 ). Unin de la alcohol deshidrogenasa de nanofibras de atapulgita
(silicato de magnesio hidratado) covalente se ha optado por su resistencia trmica y tamaos variables nano (zhao et al.
2010 ). Biocatalticas membranas han sido tiles para desentraar las interacciones covalentes eficaces con las enzimas
de silicio recubierto de (hilal et al. 2006 ). Cross-ligado agregados enzima producida por la precipitacin de la enzima de
la solucin acuosa mediante la adicin de disolventes orgnicos o polmeros inicos han sido reportados (sheldon 2011 ).
Diferentes orientaciones de enzima inmovilizada sobre nanoacumulaciones magnticos obtenidos mediante la unin
covalente han encontrado sus aplicaciones en las industrias farmacutica, debido a su mayor longevidad, estabilidad
operacional y reutilizacin (yusdy et al. 2009 ). El mantenimiento de la propiedad estructural y funcional de las enzimas
durante la inmovilizacin es una de las principales funciones desempeadas por un agente de reticulacin. Uno de tales
agentes es glutaraldehdo, utilizado popularmente como reticulante bifuncional, ya que son solubles en disolventes
acuosos y pueden formar enlaces covalentes inter- e intra-subunidad estables.
Inmovilizacin de afinidad
Inmovilizacin afinidad explota la especificidad de la enzima para su apoyo en diferentes condiciones fisiolgicas. Esto se
logra mediante dos maneras: o bien la matriz se preacopladas a un ligando de afinidad para la enzima diana o la enzima
se conjuga a una entidad que desarrolla afinidad hacia la matriz (sardar et al. 2000 ). Adsorbentes de afinidad tambin se
han utilizado para la purificacin simultnea de enzimas (ho et al. 2004 ). Afinidad complejo apoya como cuentas de
quitosano alcalinos estables recubiertas de slice porosa y mayores cantidades de agarosa ligada multicapa
concanavalina un puerto de enzimas que conducen a una mayor estabilidad y eficiencia (shi et al. 2003 ; sardar y gupta
2005 ). Estratificacin de bioafinidad es una improvisacin de esta tcnica que aumenta exponencialmente la capacidad
de unin a enzima y la reutilizacin, debido a la presencia de fuerzas no covalentes, tales como culmbica, enlace de
hidrgeno, fuerzas de van der waals, etc. (sardar y gupta 2005 ; haider y husain 2008 ).
Atrapamiento
Atrapamiento es introducir en la jaula de las enzimas mediante enlaces covalentes o no covalentes dentro de geles o
fibras (singh 2009). Encapsulacin eficiente se ha logrado con vehculos hbridos alginato-gelatina-calcio que impidieron
la fuga de enzima y proporcionan una mayor estabilidad mecnica (shen et al. 2011). Atrapamiento por nanoestructurado
apoya como nanofibras electrospun y materiales vrgenes han revolucionado el mundo de la inmovilizacin de enzimas
con sus aplicaciones de amplio alcance en el campo de la qumica fina, biosensores biomedicina y biocombustibles (dai y
xia 2006;. Kim et al 2006; wang et al. 2009; wen et al. 2011). Prevencin de la friabilidad y la lixiviacin y el aumento de la
eficacia de captura y la actividad enzimtica por candida rugosa se ha informado de lipasa atrapado en quitosano. Este
apoyo tambin se ha informado de que no es txico, biocompatible y susceptibles de modificacin qumica y altamente
afn a la protena debido a su naturaleza hidrfila (betigeri y neau 2002). Atrapamiento por slice mesoporosa se atribuye
a su gran rea superficial, distribucin de poros uniforme, tamao de poro sintonizable y alta capacidad de adsorcin
(ispas et al. 2009). Atrapamiento simultneo de lipasa y de magnetita nanopartculas con slice biomimtico mejor su
actividad en diversos aditivos de silano (chen et al. 2011a). Matrices sol-gel con polmeros supramoleculares calixareno

se han utilizado para el atrapamiento de c. Rugosa mantenimiento de la lipasa en vista de sus capacidades de unin y
que llevan selectivos (erdemir y yilmaz 2011). Las lipasas atrapado -carragenina se ha informado para ser altamente
termoestable y orgnica tolerante disolvente (tmtrk et al. 2007; jegannathan et al. 2010).
LOS MATERIALES UTILIZADOS PARA LA FABRICACIN DE SOPORTES DE INMOVILIZACIN
Los polmeros naturales como soportes
Alginato
El alginato derivado de las paredes celulares de las algas marrones son sales de calcio, magnesio y sodio del cido
algnico y se han utilizado ampliamente para la inmovilizacin en forma de perlas de xantano-alginato, geles de alginatopoliacrilamida y perlas de alginato de calcio con actividad enzimtica mejorada y reutilizacin. La reticulacin de alginato
con iones divalentes (como ca 2+ ) y glutaraldehdo mejora la estabilidad de las enzimas (elin 1995 ; flores-maltos et al.
2011 ).
Chitosan y quitina
Polmeros naturales como la quitina y el quitosano han sido utilizados como soportes para la inmovilizacin (vaillant et al.
2000 ; kapoor y kuhad 2007 ). Las protenas o carbohidratos restos de las enzimas se utilizan para ellos de unin al
quitosano (hsieh et al. 2000 ). Chitosan se ha utilizado en combinacin con alginato donde las enzimas de quitosano
recubierto tenan efecto menos lixiviacin en comparacin con alginato debido a las interacciones fsicas y inicas entre
la enzima y el apoyo (betigeri y neau 2002 ). Del mismo modo, un material compuesto hmedo de quitosano y arcilla
demostr ser ms fiable para la captura de la enzima, debido a que tiene grupos hidroxilo y amino, que enlazan
fcilmente con enzimas, junto con una buena hidrofilia y de alta porosidad. Chitosan en forma de perlas puede atrapar el
doble de las enzimas (chang y juang 2007 ). Segn chern y chao ( 2005 ), el dominio de unin a quitina de quitinasa a1
de bacillus circulans tiene una alta afinidad para la quitina; por lo tanto, esta propiedad se ha explotado para retener dhidantoinasa.
El colgeno
Al ser un polmero natural, el colgeno se ha utilizado para la inmovilizacin de tanasa glutaraldehdo empleando como
agente de reticulacin (katwa et al. 1981 ). Fe 3+ fibras: el colgeno demostraron ser excelente matriz de soporte para la
catalasa inmovilizacin mediante la retencin de la actividad significativa incluso despus de 26 reutilizaciones (chen et
al. 2011b ).
Carragenina
Carragenano, un polisacrido sulfatado lineal, se ha usado consistentemente para la inmovilizacin de una variedad de
enzimas, como la lipasa para mejorar la estabilidad (tmtrk et al. 2007 ). Este apoyo es pseudoplstico en la naturaleza,
que le ayuda a adelgazar bajo una tensin cortante y recuperar su viscosidad una vez que se elimina la tensin.
Jegannathan et al. ( 2010 ) podra lograr una eficiencia de encapsulacin de 42,6% por el mtodo de co-extrusin usando
el mismo soporte para la produccin de biodiesel. Carragenina ha sido reportado como un soporte barato y duradero con
una mejor atrapamiento de la enzima cido -galactosidasa y lctico (rao et al., 2008 ; girigowda y mulimani 2006 ).
Gelatina
La gelatina es un material hidrocoloide, alta en aminocidos, y puede absorber hasta diez veces su peso en agua. Su
vida til indefinida ha atrado la atencin para la inmovilizacin de enzimas. La gelatina se ha utilizado en sistema de
soporte mezclado con poliacrilamida donde reticulante con cromo de etilo (iii) result mejor que el cromo y potasio sulfato
de cromo (iii) sulfato (iii) (emregul et al. 2006 ). Alginato de calcio con gelatina forma una buena plantilla para la
deposicin de fosfato de calcio para la inmovilizacin de enzimas, y la gelatina en combinacin con lminas de polister
promovi el 75% la eficiencia de carga, en comparacin con estudios anteriores que tenan la eficiencia de carga del 50%
(shen et al. 2011 ; ate y dogan 2010 ).
Celulosa
Este polmero natural ms abundante ha sido ampliamente utilizado para inmovilizar lacasa hongos, penicilina g acilasa,
glucoamilasa, -amilasa, la tirosinasa, la lipasa y la -galactosidasa (al-adhami et al. 2002 ; mislovicov et al. 2004 ;
bryjak et al. 2007 ; namdeo y bajpai 2009 ; labus et al. 2011 ; huang et al., 2011 ;. Klein et al 2011 ). Dietilaminoetilo
(deae) modificada con soportes celulsicos tienen ms capacidad de almacenamiento (al-adhami et al. 2002 ).
Nanopartculas de magnetita de celulosa recubiertos se han utilizado para la degradacin del almidn en el que el
acoplamiento de -amilasa a la celulosa nanopartculas de magnetita dialdehdo recubierto como resultado la formacin
de un nuevo sistema de degradacin del almidn (namdeo y bajpai 2009 ). Inmovilizacin con pelcula lquida-celulosa
inico activado por glutaraldehdo dio mejor conformabilidad y flexibilidad (klein et al. 2011 ).

Almidn
Hecho de amilasa lineal y unidades de amilopectina ramificada, almidn ha sido utilizado como inmovilizador enzima.
Calcio soportes hbridos alginato de almidn se aplicaron para la inmovilizacin de la superficie y el atrapamiento de la
peroxidasa calabaza amarga. Enzima atrapada fue ms estable en presencia de agentes desnaturalizantes como la urea
debido a restos de hidratos de carbono internos, mientras que la enzima inmovilizada en la superficie tena una actividad
superior (matto y husain 2009 ). Injerto por radiacin de sustancias como la acrilamida y metacrilato de dimetilaminoetilo
onto almidn son algunas de las tcnicas industriales ampliamente utilizados para un alto rendimiento de producto
(estircol et al. 1995 ;. Raafat et al 2011 ).
Pectina
Este heteropolisacrido estructural junto con 0,2 a 0,7% de glicerol acta como plastificante para reducir la fragilidad del
soporte y se ha utilizado para inmovilizar la papana y para el desarrollo de nuevos materiales para el tratamiento de
lesiones en la piel (ceniceros et al. 2003 ). La pectina-quitina y el apoyo alginato de pectina-calcio han mejorado la
resistencia trmica y desnaturalizante y las propiedades catalticas de las enzimas atrapados debido a la formacin de
los altos complejos de polielectrolitos estables entre la enzima y el apoyo pectina recubiertos (gmez et al. 2006 ; satar et
al. 2008 ).
Sepharose
Activada con cnbr sepharose-4b se ha utilizado para inmovilizar amilasa y glucoamilasa debido a su porosidad y fcil de
adsorcin de macromolculas. Otras modificaciones de la matriz como alquilo sustituido sepharose con el accesorio de
multipunto entre los grupos hidrfobos de los residuos de la enzima y de alquilo del soporte juegan un papel importante
en la retencin de las propiedades catalticas en los extremos de ph, las concentraciones elevadas de sal y temperaturas
elevadas (hosseinkhani et al. 2003). Otro ejemplo de matriz de sepharose modificada se concanavalina a (con a)
sepharose 4b donde bioespecfica interaccin entre las cadenas de glicosilo de la enzima y con a desempea un papel
fundamental en la fabricacin de diversos biosensores (mirouliaei et al. 2007).
Los polmeros sintticos como soportes
Resinas de intercambio inico / polmeros son soportes insolubles con superficie porosa para la captura de la enzima.
Amberlite y DEAE celulosa, matrices renovables con gran rea superficial, se han utilizado para la inmovilizacin de amilasa (Kumari y Kayastha 2011 ). Durante blanco inmovilizacin rbano peroxidasa, glutaraldehdo y acto
polietilenglicol como aditivo y la capa protectora alrededor del centro activo de la enzima para evitar el ataque de los
radicales libres (Ashraf y Husain 2010 ). Algunos polmeros sintticos utilizados como soportes de enzimas se expresan
como sigue: cloruro de polivinilo que previene la enzima, la ciclodextrina glucosiltransferasa de la inactivacin trmica;
micropartculas de poliuretano derivados de alcohol de polivinilo y hexametil diisocianato en una proporcin de 1: 3 con la
carga y la alta eficiencia de la enzima; UV-curable modificado con cido epoxi metacrilado / fumrico que se propone
para ser til para aplicaciones industriales; polianilina en dos formas diferentes, a saber. emeraldina sal y la base
emeraldina polvo utilizado para la unin covalente de la amilasa -; nylon con glutaraldehdo activado para inmovilizar la
lipasa y polietilenglicol activado mediante luz ultravioleta que tiene una alta porosidad empleada para el tratamiento de
aguas residuales (Abdel-Naby 1999 ; Kahraman et al. 2007 ;. Pahujani et al 2008 ; Romaskevic et al. 2010 ; Xiangli et al.
2010 ; Ashly et al. 2011 ).
Los materiales inorgnicos como soportes
Las zeolitas
Las zeolitas o tamices moleculares '' son slidos cristalinos microporosos con estructuras bien definidas y propiedades de
forma selectiva y son ampliamente utilizados en la adsorcin molecular. Zeolitas microporosas se encontraron para ser
un mejor apoyo para la inmovilizacin de -quimotripsina que los desaluminizada microporosos debido a la presencia de
ms grupos hidroxilo que se forman fuertes enlaces de hidrgeno con la enzima (Xing et al. 2000 ). Del mismo modo, se
us Na zeolita Y para inmovilizar lisozima porque tena una actividad ms alta en comparacin con otros soportes segn
lo informado por Chang y Chu ( 2007 ). La superficie heterognea de zeolitas con mltiples sitios de adsorcin se
consideran adecuados para la modulacin de las interacciones de la enzima y de apoyo (Serralha et al. 1998 ).
Cermica
Inmovilizacin de Candida antarctica lipasa en membrana cermica mostr que este soporte inerte podra ser explotada
para llevar a cabo reacciones hidrolticas y sintticos mediante la limitacin de la inhibicin por retroalimentacin
(Magnan et al. 2004 ). Se encontr espumas cermicas que contienen tanto macro (77 nm) y microporos (45 m) para ser
eficaz en la reduccin de la velocidad de difusin y el aumento de la superficie especfica (Huang y Cheng 2008 ). Otro
ejemplo de la cermica es toyonite cuya estructura de poros variable de pueden ser modificados utilizando diferentes
revestimientos orgnicos (Kamori et al. 2000 ).
celita

Celite es de diatomeas, el material de bioafinidad altamente porosa y se ha utilizado para la inmovilizacin de la lipasa,
polifenol oxidasas y -galactosidasa, porque es un soporte de bajo costo que tiene una baja polaridad y gran rea de
adhesin (Khan et al. 2006 ;. Liu et al 2009 ; Ansari y Husain 2011 ). Proporciona resistencia a la alta temperatura o pH,
urea, detergentes y disolventes orgnicos (Khan et al. 2006 ). Celite acta como un aditivo en la matriz sol-gel para wtransaminasas inmovilizacin. Se ha preferido debido a su inercia qumica y la estructura de poros interconectados
(Koszelewski et al. 2010 ).
Slice
Enzimas como la peroxidasa de lignina y la peroxidasa de rbano picante (HRP) inmovilizado en slice activada se han
utilizado eficazmente para la eliminacin de chlorolignins de kraft de eucalipto efluente (Dezott et al. 1995 ). a-amilasa
inmovilizada sobre nanopartculas de slice mejora el rendimiento de limpieza de los detergentes. Se han utilizado debido
a sus estructuras de tamao nanomtrico con gran rea superficial, ordenada disposicin y alta estabilidad a las fuerzas
qumicas y mecnicas (Soleimani et al. 2011 ). Modificaciones de la superficie de la slice por aminacin de hidroxilo y
grupos siloxano reactivos y la adicin de grupos metilo o alcohol de polivinilo fortalecer los lazos de enzimas y de apoyo
(Rao et al., 2000 ;. Shioji et al 2003 ;. Pogorilyi et al 2007 ).
Vaso
El vidrio es un lquido altamente viscoso y se ha empleado en la inmovilizacin de -amilasa; perlas de vidrio
funcionalizado cloruro de ftaloilo grupo que contiene amino se encontr que era robusta y renovable para el proceso
(Kahraman et al. 2007 ). Otra nitrito reductasa enzima se inmoviliz sobre perlas de vidrio de poro controlado, que
sirvieron como un dispositivo de biosensores para la monitorizacin continua (Rosa et al. 2002 ). La ureasa inmovilizada
sobre vidrio electrodos de pH ha proporcionado un biosensor estable para el seguimiento de tan bajo como 52 g de urea /
ml en muestras de sangre (Sahney et al. 2005 ).
Carbn activado
Tanto el carbn activado modificado con cido clorhdrico natural y ha proporcionado un valioso apoyo para la adsorcin
de la enzima (Alkan et al. 2009 ). ltimamente, partculas de carbn mesoporosos activadas que contienen sitios de
contacto grandes para inmovilizacin de enzimas se han utilizado para la inmovilizacin de proteasa cida y lipasas
cidas donde la eficiencia cataltica se ha mantenido de manera significativa despus de 21 ciclos de reutilizacin (Kumar
et al. 2010 ; Ramani et al. 2011 ). Tambin se encontr que el carbn activado con una gran rea superficial (600-1000 m
2 g -1 ) y una fraccin significativa de su volumen de poros en el rango de 300-1.000 era adecuado para la
inmovilizacin de enzimas (Daoud et al. 2010 ).
Carbn
La modificacin qumica de carbn mediante la adsorcin de papana con grupos sulfhidrilo aument el nmero de sitios
activos y se ha utilizado para la recuperacin de mercurio de la solucin acuosa y se emplea de manera eficiente para el
tratamiento de aguas residuales industriales (Dutta et al. 2009 ). Soportes de carbn han sido tambin utilizado en las
industrias de alimentos para la inmovilizacin de amiloglucosidasa para la hidrlisis de almidn sin ningn agente de
reticulacin y tiene 90% de actividad cataltica (Rani et al. 2000 ). Como se inform anteriormente por Kibarer y Akovali
( 1996 ), el carbn vegetal es un excelente adsorbente con una alta capacidad de adsorcin y liberacin mnima de
material particulado fino.
APLICACIONES Y ALCANCE
Biocatalizadores son los actores clave en diversos procesos industriales. Se estn realizando constantes esfuerzos para
mejorar de la actividad enzimtica, la eficiencia, reproducibilidad y estabilidad durante los procesos industriales (Wang et
al. 2010 ). Produccin de compuestos regioselectivas y enantioselectivas para aplicacin biomdica ha sido posible por
enzimas inmovilizadas (Ren et al. 2006 ; Lee et al. 2009 ). Biosensores de glucosa se han desarrollado utilizando PVA
electrospun y nanotubos de carbono de superficie modificada (Wen et al. 2011 ). Biosensores de perxido de hidrgeno
se han ideado el uso de nanopartculas trixido de -aluminio / electrodo modificado pelcula de quitosano (Liu et al. 2010
). Agarosa-guar se ha utilizado con xito para el diseo de biosensores fenol (Bagal y Karve 2006 ). Actualmente, se
estn tomando esfuerzos agudos para aumentar la estabilidad de los biosensores. La inmovilizacin de enzimas en
biosensores nanocavidades mostr resultados significativos (Vamvakaki y Chaniotakis 2007 ). Biosntesis de polister ha
sido facilitada por inmovilizada C. antarctica lipasa B, una alternativa ms ecolgica a los catalizadores convencionales
basados en el petrleo (Idris y Bujari 2011 ). Con el advenimiento de la nanotecnologa, las nanopartculas de slice con
lacasa inmovilizada se han aplicado para la eliminacin de microcontaminantes de las aguas residuales (Zimmermann et
al. 2011 ). La creciente preocupacin por el medio ambiente han llevado al uso de biocatalizadores inmovilizados para la
produccin de biodiesel (Jegannathan et al. 2010 ).
Los diferentes factores que influyen en la inmovilizacin de enzimas y las posibles modificaciones para su mejora en la
actividad se han dibujado con yeso en la Fig 1.

Figura 1. Determinantes de la inmovilizacin y la actividad enzimtica.

CONCLUSIN
Con la gran cantidad de investigacin sobre la inmovilizacin de enzimas, podemos concluir que es una de las tcnicas
ms prometedoras para procesos biotecnolgicos altamente eficientes y econmicamente competentes en el mbito de
las vigilancias del medio ambiente, la biotransformacin, diagnsticas, farmacuticas y de alimentos. las estrategias
basadas en enzimas estn reemplazando cada vez ms mtodos qumicos convencionales, tanto en laboratorios e
industrias con atributos como la eficiencia, el rendimiento ms rpido y el uso mltiple. Sin embargo, la comercializacin
de enzimas inmovilizadas se encuentra todava en un ritmo ms lento debido a sus costos y problemas de
almacenamiento. La investigacin debe centrarse para superar las limitaciones actuales relacionados con las tcnicas de
inmovilizacin, con el fin de ampliar el horizonte para la aplicacin integral.