Universidad Catlica del Norte

Departamento de Ciencias Farmacuticas

GUA DE LABORATORIO DE TOXICOLOGA

CUANTIFICACIN DE CIDO ACETILSALICLICO POR

ESPECTROFOTOMETRA UV-VISIBLE
Caractersticas
Sinnimos: Aspirina; Acido 2-acetoxibenzoico
Frmula: C9H8O4
Peso molecular: 180 g/mol
N CAS 50-78-2
pKa= 3,5 (25C)

Aspirina

Propiedades Fisicoqumicas
Incoloro o polvo cristalino blanco o grnulos. Es estable en aire seco pero
gradualmente se hidroliza en contacto con la humedad generndose una mezcla de
cido actico y cido saliclico. Soluble 1 parte en 300 de agua, 1 en 5 de etanol, 1 en
17 de cloroformo, 1 en 1015 de ter etlico, soluble en soluciones de acetato, citratos,
y se descompone en soluciones que contengan hidrxidos alcalinos y carbamatos.
Accin toxicolgica
El cido acetilsaliclico (AAS) es el derivado de cido saliclico ms
frecuentemente usado. Se utiliza como analgsico, antiinflamatorio y antipirtico y
tambin es el metabolito de aloxiprina y benorilato. La dosis letal mnima estimada en
un adulto es 15 g. Una concentracin plasmtica mayor de 300 mg/L produce
reacciones txicas y mayor de 500 mg/L est asociada con intoxicacin moderada a
severa.
Los primeros sntomas de toxicidad estn caracterizados por nuseas y vmitos,
sensacin de calor con rubefaccin, hipersudoracin, hipertermia, e hiperventilacin y
alteraciones neurosensoriales como vrtigo, zumbido en odos y cefaleas.
Metabolismo
El cido acetilsaliclico se metaboliza rpidamente por esterasas del plasma in
vivo a cido saliclico el cual se excreta principalmente por la orina conjugado con
glicina formando el cido salicilrico.

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Laboratorio
Muestras: resto de la escena, fluido biolgico (orina, contenido estomacal,
sangre) o tejido homogeneizado (1mL).
Reactivos y estndares: Salicilato de sodio, Nitrato frrico (Fe(NO3)29 H2O) o
cloruro frrico, cloruro de mercurio, cloroformo
Fundamento: En presencia de sales frricas los salicilatos producen un color
violeta y su absorbancia es proporcional a su concentracin. La intensidad del color en
la muestra biolgica puede ser comparada en una curva estndar de salicilato inmerso
en la matriz correspondiente. Esto, junto a un inmunoensayo especfico para
salicilatos es una prueba til para confirmar la presencia de salicilatos.
Soluciones, estndar interno, calibradores y controles:
HCl 1M: 8,3 mL de HCl concentrado para solucin acuosa a un volumen final de
100 mL, almacenaje a T amb hasta por 2 aos.
Reactivo de Trinder: disolver 8 g de cloruro de mercurio en 170 mL de H2Od
calentando. Enfriar y agregar 24 mL de HCl 1M y 5 g de nitrato frrico. Una vez
disuelto el nitrato llevar a volumen final de 200 mL con H2Od, almacenar a T amb
hasta por 2 aos.
Solucin stock de salicilato (2 mg/mL): pesar 232 mg de salicilato de sodio y
transferir a frasco de 100 mL. Disolver en H2Od hasta dicho volumen. Adicionar unas
gotas de cloroformo como preservante y almacenar a 2-8 C hasta por un ao.
Curva de calibracin: pipetear los volmenes indicados en la tabla salicilato 0,5
mg/mL a la solucin matriz en tubos rotulados. Eliminar previamente el solvente de
las soluciones preparadas.
Cantidad de sln salicilato 5
mg/mL en matriz (mL)
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0

Cantidad de matriz blanco

(mL)
0,8
0,6
0,4
0,2
0

Concentracin final de
salicilato (mg/mL)
100
200
300
400
500

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Controles:
Control de salicilato: se prepara utilizando frmacos de diferente manufactura.
Control negativo: Muestra o fluido biolgico sin salicilato
Equipos y aparatos:
Espectrofotmetro UV-VIS, centrfuga (2000-3000 rpm), Vrtex.
Procedimiento:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.

Marcar tubos con rtulos correspondientes a soluciones de calibracin,

control y muestra(s).
Preparar soluciones para curva de calibracin y control.
Preparar el blanco con 1 mL de H2Od.
Agregar 1 mL de muestra al tubo correpondiente.
Agregar 5 mL del reactivo de Trinder a cada tubo agitando.
Continuar agitando hasta dispersar el precipitado.
Centrifugar a 2.500 rpm por 15 min.
Transferir el sobrenadante a una cubeta.
Leer el blanco a 540 nm.
Leer cada muestra a 540 nm.

Clculos:
Graficar la curva estndar de las diferentes concentraciones de salicilato versus
la absorbancia a 540 nm. Utilizando la regresin lineal determine el coeficiente
regresin lineal y la lnea de regresin. Calcule la concentracin de salicilato en la
muestra problema a partir de la curva estndar.
Caso reporte de la muestra
Una mujer joven (15 aos de edad) de peso 64 Kg se presenta a las 4 a.m. en el
Servicio de Urgencias de Hospital Regional de Antofagasta luego de una sobredosis
aguda de aspirina. La paciente indica que consumi alrededor de 20 (20?)
comprimidos de Ecotrin de 325 mg, sin recubrimiento entrico a las 11p.m.
Aproximadamente a las 2 a.m. sinti nauseas por lo que tuvo un episodio de vmito,
en el cual no identific trozos de comprimido. La paciente indica una disminucin en
la audicin, dolor de cabeza y un terrible zumbido en la cabeza.
Usted se encuentra en el laboratorio clnico del hospital realizando su prctica
profesional y le solicitan realizar el anlisis de una muestra de orina de la paciente a

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fin de confirmar la presencia del frmaco y determinar la concentracin presente en

ella.
En base a estos antecedes y en relacin a los resultados experimentales
responda:
1.
2.
3.
4.
5.

Cul es la dosis txica de AAS?

Cul es la concentracin de AAS presente en la muestra?
Qu cintica de eliminacin tiene el AAS?
Qu diferencias existe entre una sobredosis aguda y crnica de AAS?
Explique la relacin entre el mecanismo de toxicidad del AAS y la
sintomatologa de la paciente.