VISITA A :

FACULTAD DE
CIENCIAS

Nataly Gimeno Carla Mazza 5 B4

 OBJETIVO:

OBSERVACIN,
COMPRENSIN Y
USOS de:

Microscopio electrnico de Transmisin

Microscopio electrnico de Barrido

NDICE

Microscopio (Breve definicin o funcin)

Historia (Breve repaso de algunas fechas importantes)
Primeros Microscopios

Tipos
Principal diferencia entre estos
Esquema (DIFERENCIAS)
Mediciones
Para tener en cuenta: Equivalencias
Microscopa Electrnica

Microscopio Electrnico de Transmisin (T.E.M.)

Repaso y caractersticas principales
Estructura y procesos internos
Proceso de funcionamiento
Caractersticas de la imagen obtenida
Preparacin de muestras
Galera de imgenes obtenidas por microscopa electrnica de
transmisin.

NDICE
Microscopio Electrnico de Barrido (S.E.M.)

Caractersticas
Caractersticas del funcionamiento
Estructura
Funcionamiento
Preparacin de muestras
Aplicaciones
Galera de imgenes obtenidas por microscopa electrnica de Barrido

Resumen comparativo de los tipos de microscopios

Bibliografa

Primeras
lentes:
Algunos microscopios
antiguos:

Dependiendo de la fuente energtica que utilizan, se pueden

distinguir dos tipos de microscopio:

MICROSCOPIO PTICO, FOTNICO O COMPUESTO:

utiliza la luz como fuente energtica.

MICROSCOPIO ELECTRNICO:
cuando emplea un haz de electrones.

Microscopio
Fotnico

Microscopio
Electrnico

La principal diferencia entre ellos,

estriba en la mayor potencia que
tienen los microscopios
electrnicos.

Esto se debe por las siguientes causas

que se explican en el siguiente
esquema:

Trmino

Tipos

Fuente
energtica

Longitud de
onda

Poder de
Resolucin*

ptico

Luz

Mayor

Menor P.R.

Electrnico

Electrones

Menor

Mayor P.R.

Microscopio

Poder de Resolucin*: Es la capacidad del microscopio que permite

distinguir cun separadas estn dos estructuras que se encuentran muy
prximas

MEDICIONES:
EN MACROSCOPA
Se mide en MILMETROS (mm)

EN MICROSCOPA PTICA
Se miden en MICRAS ()

EN MICROSCOPA ELECTRNICA
Se miden e NANMETROS (nm)
Se miden en ANGSTROM ()

PARA TENER EN CUENTA:

1000

MILMETRO

MICRAS

(mm)

()

EQUIVALENCIAS

1
milln
Nanmetro
s

(nm)

10
millones

Angstroms
()

Cabe destacar que la misma, involucra

caractersticas generales de los microscopios
fotnicos y electrnicos y no considera las
diferencias particulares entre TEM y SEM.

MICROSCOPIO

ILUMINACIN

LONGITUD DE ONDA

FOTNICO

MICROSCOPIO
ELECTRNICO

Haz de luz

Haz de electrones

2000
7500

0.037 0.086

LENTES

Vidrio

Electromagnticas

MEDIO

Atmsfera

Vaco

RESOLUCIN

2000

MAGNIFICACIN

10 x 2000 x

100 x 450000 x

FOCALIZACIN

Mecnica

Elctrica

Teniendo en cuenta los dos tipos de microscopios (FOTNICO Y

ELECTRNICO), sus caractersticas y sus diferencias podremos
profundizar con:

Barrido

Transmisin

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE
TRANSMISIN
(T.E.M.)*

*Transmission
Electron Microscope

REPASO:
El T.E.M. utiliza un haz de electrones para visualizar la muestra a
diferencia de aquellos que utilizan la luz. El haz de electrones posee menor
longitud de onda que el haz de fotones por lo que el M. electrnico posee
mayor poder de resolucin.

CARACTERSTICAS
El microscopio electrnico de transmisin utiliza
electroimanes (bobinas electromagnticas)
para que el haz de electrones atraviese la delgada
muestra, que pasa por un proceso de cortado
con algunas excepciones (por ejemplo:
macromolculas aisladas o bacterias)

ESTRUCTURA y
PROCESOS INTERNOS:
Las partes principales en las cuales se
producen procesos y funciones internas
en un microscopio electrnico de
transmisin son:
Can de electrones, que emite los
electrones que atraviesan la muestra.

Distintos grupos de lentes magnticas

para crear campos que dirigen y enfocan
el haz de electrones, ya que las lentes
convencionales utilizadas en los
microscopios pticos no funcionan con
los electrones.
Placa fotogrfica o pantalla
fluorescente que se coloca detrs del
objeto a visualizar para registrar la
imagen aumentada.
Sistema de registro que muestra la
imagen que producen los electrones, que
suele ser una computadora.

Se forma una corriente de nube de electrones

en el can electrnico
Esta es acelerada por un alto voltaje y
focalizados por medio de lentes magnticas
Esta nube se enfoca en la muestra a travs
de las lentes (bobinas electromagnticas
o electroimanes)

Se forma un haz de electrones que se

desprenden del filamento, atraviesan la
muestra donde se ve la imagen en la
pantalla.
Este haz de electrones de va dirigido hacia el
objeto que se desea aumentar. Una parte de los
electrones rebotan o son absorbidos por el
objeto y otros lo atraviesan formando una
imagen aumentada de la muestra.

- Fundamentalmente permite ver secciones o cortes de las

muestras a analizar con espesores comprendidos entre
50- 200 nanmetros

La imagen de los microscopios electrnicos slo se puede

ver en blanco y negro puesto que no utilizan la luz, pero
se le pueden dar colores en el ordenador.

Para esto
Para que el haz de electrones atraviese la muestra esta
tiene que ser muy delgada y bien preparada (debidamente
deshidratada) (Ver preparacin de muestras)

-Fijar la estructura con mucha precisin

-Deshidratar la muestra

-Algunas de las muestras tienen la excepcin de no

pasar por el proceso de cortado (macromolculas
aisladas y bacterias), mientras que otras tienen que
ser cortadas quedando con un espesor de 40 a 60
nm.
Para esto se utiliza el ultra micrtomo; con este
instrumento tambin se usa una resina en la cual se
incluye el material para que tenga la solidez necesaria
que nos permita hacer rodajas ms finas denominada
araldita.

ULTRAMICRTOMO

PORTAMUESTRAS

Bacilos* en divisin

*Bacteria de forma
alargada, que suele tener
carcter patgeno.

MITOCONDRIA

Morfologas tpicas de los procariotas marinos. A) Clulas

pertenecientes al gnero bacteriano Beggiatoa, tpica de sedimentos
marinos. B) Clulas de la bacteria Thalassospira lucentensis, aislada por
primera vez a partir de muestras marinas tomadas en la costa. C)
Clulas del microorganismo fitoplanctnico Prochlorococcus marinus en
proceso de divisin. En los bordes de estas clulas se pueden visualizar
las membranas fotosintticas. D) Clulas de la especie Rhodospirillum
rubrum.

Citoplasma de cianobacterias envueltas en polisacridos

*Scanning Electron
Microscope

CARACTERSTICAS
REPASO:El microscopio electrnico de barrido funciona, utilizando un
haz de electrones para formar la imagen, a diferencia de aquellos
que utiliza un haz de luz.
Los microscopios electrnicos slo pueden ofrecer imgenes en
blanco y negro ya que no utilizan la luz.

Las principales utilidades son:

la alta resolucin
le da una gran profundidad de campo la cual nos permite
que enfoquemos una gran parte de la muestra que le da
apariencia tridimensional a las imgenes
y la sencilla preparacin de las muestras.

CARACTERSTICAS DEL
FUNCIONAMIENTO:
- Para que este mismo no se incendie, debido al
aceleramiento de los electrones cuando el microscopio esta
en uso, tiene un sistema de refrigeracin utilizando
nitrgeno lquido, este tambin se usa para mantener
muestras de clulas refrigeradas, estas se pueden
mantener por mucho tiempo.

Lugar donde se encuentra

almacenado el nitrgeno

Barra de Nitrgeno

-Se utilizan diferentes voltajes, estos voltajes pueden

variar dependiendo el preparado, se utilizan menos
voltaje, por ejemplo para las muestras biolgicas.
(Los altos voltajes se utilizan por ejemplo en muestras
metlicas ya que estas no sufren tantos daos como las
biolgicas y adems se obtiene un mayor
aprovechamiento de las longitudes de onda para tener
una mayor resolucin)
-Este microscopio posee menor aumento que el
microscopio de transferencia, sin embargo este permite
apreciar con mayor facilidad texturas y objetos en tres
dimensiones que hayan sido pulverizados
metlicamente (Ver Preparacin de muestras) antes de
su observacin. Por esta razn solamente pueden ser
observados organismos muertos, y
no se puede ir ms all de la textura externa que se
quiera ver.

Este instrumento permite la observacin de

materiales orgnicos e inorgnicos y
obtenemos informacin morfolgica
del material analizado.
A partir de l se producen distintos tipos de
seal que se generan desde la muestra y
se utilizan para examinar muchas de sus
caractersticas.
Para su mayor entendimiento de sus
funciones, pasaremos a estudiar su
ESTRUCTURA

Las lentes, tanto la condensadora como la lente objetiva, son lentes electromagnticas.

FUNCIONAMIENTO
Los electrones acelerados salen del can, y
son enfocados por la lente condensadora y
objetiva, cuya funcin es reducir la imagen del
filamento.

Las bobinas deflectoras barren el fino haz de

electrones sobre la muestra. (al incidir en la
muestra un haz de electrones lo mas pequeo
posible se obtiene una mejor resolucin).
Cuando el haz de electrones incide sobre la
muestra, reproducen interacciones entre los
electrones del mismo haz, y los tomos de la
muestra, cuando estos interactan podemos ver
lo que los electrones estn recorriendo.
Luego el micro analizador de sonda de
electrones analiza los rayos x de alta energa
que produce el objeto al ser bombardeados con
los electrones. Mediante este proceso podemos
averiguar que elementos componen al
objeto analizado y tambin obtenemos una
mayor visin del mismo.

Preparacin de muestras:
Se extrae el agua de el objeto a estudiar,
Esto se realiza agregando concentraciones
creciente de acetona
Se extrae la acetona
Se metaliza, esto se hace colocando el objeto en
un aparato que calienta el disco de oro que tiene
en su tapa ocasionando un bao sobre la
muestra.

Aparato con
el cual se
pulverizan
metlicamente las
muestras

Muestras biolgicas, como lo puede ser en el caso de una

clula.

Paleontologa y Arqueologa: Caracterizacin de aspectos

morfolgicos, por ejemplo Trozos de meteoritos.

Odontologa: Se pueden observar dientes, para saber con que

sustancias se pueden tratar.

Control de Calidad: En este campo, el microscopio electrnico

de barrido es de gran utilidad para el seguimiento morfolgico de
procesos y su aplicacin en el control de calidad de productos de
uso y consumo: Se utilizan para los tratamientos de la lana con
perxido de hidrgeno (agua oxigenada) para que pierda las
escamas quedando un producto de mejor calidad para el mercado
y su diferencia entre la lana y las fibras denominadas fibras
especiales .El precio de las fibras especiales es mayor que el de la
lana, por lo que el fraude se puede presentar por etiquetar
prendas de lana como compuestas por fibras especiales

En el mbito de la investigacin se puede utilizar para detectar

fibras de la ropa, comparar cabellos etc.

Comparacin entre una fibra de lana y una especial, sealando con

flechas las medidas de los bordes distales de las clulas cuticulares
(con altura superior a 0,7 micras para la lana e inferior a 0,5 micras
para la fibra especial.

GRANO DE POLEN

GLBULO ROJO

GLBULO BLANCO

RESUMEN COMPARATIVO

DE LOS TIPOS DE MICROSCOPIOS

CARACTERSTICA

MO*

SEM*

TEM*

Porttil

si

no

no

Aumento

x2500

X20.000

X 500.000

Tamao
mnimo
observable

120 nm

10 nm

1 nm

Fotografa

B/N Y color

B/N

B/N

Observacin
in vivo

si

no

no

REFERENCIAS
*MO: Microscopa ptica

*SEM: Microscopa Electrnica de Barrido

*TEM: Microscopa Electrnica de Transmisin

Bibliografa

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm (Imgenes sacadas por microscopa

electrnica de Barrido y Transmisn)

www.micomania.rizoazul.com/objetos/micro%2087 (Historia, Diferencias microscopios

fotnicos. barrido, transmisin e imgenes varias)

http://www.criba.edu.ar/cribabb/servicios/secegrin/microscopia/apunte_col.htm (Diferencias
entre microscopio fotnico y electrnico)

Zoologa (ANZALONE) (Funcionamiento microscopio fotnico)

http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3%B3nico_de_barrido (M.E.Barrido)

Pginas varias Internet (Imgenes en general)

Libro Esto es Vida! (Imagen Grano de Polen)

Prctico Biologa 5B4 - IAVA (Tabla de valores utilizadas en macroscopa, microscopa y

microscopa electrnica y Diferencias entre microscopio fotnico y electrnico)

Visita a Facultad de Ciencias - UDELAR - rea Microscopa Electrnica(Fotos, apuntes, grabaciones de: Diferencias entre microscopio fotnico y electrnico,
Microscopio electrnico de Transmisin, Microscopio Electrnico de Barrido)