Autor: FERNANDO MENDEZ
EFECTOS DE BACTERIA TIPO
RHIZOBIUM EN JITOMATE
SALADETTE.
RESUMEN:
El jitomate es uno de los vegetales más
consumidos en nuestro país sin embargo su
cultivo necesita grandes cantidades de
nitrógeno en comparación a otros cultivos,
dichas fuentes de nitrógeno rara vez pueden
ser obtenidas del suelo, es necesario
adicionar un agente fertilizante, en mucho
de los casos estos fertilizantes son
químicos, los cuales dañan el suelo, es por
ellos que se experimentó con Rhizobium
Melitoli para que esta bacteria fijara
nitrógeno a la planta mediante una
simbiosis, los resultados obtenidos
evidenciaron que si hay una mejora en los
cultivos de jitomate inoculados con la
bacteria, lo que deja un campo abierto a
nuevas investigaciones que mejoren las
características del jitomate utilizando
microorganismos.
OBJETIVOS:
- Observar los efectos de la bacteria
rhizobium melitoli obtenida de la
raíz de alfalfa en jitomate saladette.
- Observar si la bacteria se muestra
compatible con el jitomate.
- Cualificar y cuantificar los cambios
en cuanto a rendimiento físico de la
planta de jitomate infectada vs.
Semillas normales.
- Concluir si es beneficiosa la
infección de la rhizobium melitoli
en la producción de jitomate.
INTRODUCCION:
El jitomate en México forma parte
fundamental de la dieta de sus habitantes, a
pesar de que un alto por ciento de los suelos
mexicanos son pobres en nutrientes
esenciales (Coronado et al., 1995), como el
nitrógeno (N), necesario para la síntesis de
proteínas y clorofila, por ello se requiere
aplicar fertilizante nitrogenado. En general
la reserva de N en la naturaleza como N2 es
del 70%, aunque las plantas solo lo
absorben y asimilan como amonio y/o
nitratos, de ahí la necesidad de usar esta
clase fertilizantes químicos (Alexander,
1980), los que aplicados irracionalmente,
tienen un elevado costo, una acción
desgastadora del suelo y contaminan el
ambiente. Lo anterior obliga a buscar
alternativas de solución que reduzcan su
uso, pero que mantengan el rendimiento del
cultivo vegetal.
Se considera que la fijación biológica del
nitrógeno (FBN) es una de las alternativas
mas viables para recuperar N en el
ecosistema (Kimball, 1980), se ha estimado
que 175 millones de toneladas/año se fijan
biológicamente, del cual el 70% va al suelo
(Burity et al., 1989) y de éste, el 50%
proviene de asociaciones nodulares como
las causadas por Rhizobium (Carrera et al.,
2004; Long, 1989).
La FBN es una ventaja para las
leguminosas ya que pueden tomar nitrógeno
del aire a través de la simbiosis con
Rhizobium (Luna y Sánchez-Yáñez, 1991;
Sanaratne et al., 1987). Esta es una manera
de reducir la cantidad del N derivado de
fertilizantes al incrementar la proporción de
N2 fijado vía Rhizobium. Por eso se asegura
el máximo beneficio de la asociación
mediante el establecimiento de una bacteria
que reúna cualidades de competencia y
efectividad para fijar N2 en las raíces de la
leguminosa. En los suelos agrícolas la
asociación Rhizobium-leguminosa es la
más importante fuente de N, pues se ha
reportado que en las leguminosas
noduladas, bajo determinadas condiciones
ambientales (suelos pobres en este
elemento), pueden fijar hasta los 100 kg
N2/Ha/año (FAO, 1995). Este mecanismo
provee la demanda del N para satisfacer las
necesidades nutricionales más importantes
de la planta.
El propósito de está revisión es
proporcionar información esencial sobre la
asociación Rhizobium-leguminosa y su
potencial como inoculante en producción
agrícola, en un marco del uso razonable de
los recursos naturales sin daño ambiental.
Fijación biológica del nitrógeno.
La FBN es un proceso exclusivo de algunos
procariotes para usar el N2 del aire y
reducirlo a amoniaco con la enzima
nitrogenasa, (Kimball, 1980) para la síntesis
de proteínas. De acuerdo con el mecanismo
bioquímico para obtener la energía que les
permita fijar el N2 existen bacterias
fotoautotróficas, quimiolitotróficas y Las leguminosas son angiospermas del
heterotróficas de vida libre en el suelo,
asociados o en simbiosis en las hojas y/o
raíces de plantas. El ejemplo más conocido
e investigado incluso a nivel molecular
(Vanderleyden y Pieternel, 1995), es la
relación entre las leguminosas y
Rhizobium. Aunque los dos simbiotes
pueden supervivir independientemente, solo
cuando la bacteria coexiste íntimamente
con la leguminosa se da la fijación del N2
(Sandowsky et al., 1995).
Potencial de la asociación rhizobium-
leguminosa
Bajo condiciones favorables, leguminosas
como haba y chícharo pueden utilizar el 80-
90% de sus requerimientos de nitrógeno a
través de la fijación simbiótica, mientras
que la soya obtiene del 40 al 60%
(Sánchez-Yáñez, 1997). En experimentos
realizados con R leguminosarum en haba,
lenteja y soya se incrementó
significativamente la nodulación, el peso
seco de las leguminosas, su contenido en
nitrógeno y su rendimiento (Carrera et al.,
2004).
Los simbiotes
La bacteria Rhizobium es un bacilo corto
algunas veces pleomorfico, Gram negativo,
aerobio, no forma espora, móvil por
flagelos perítricos o un solo flagelo lateral
(FAO, 1995). Pertenece a la familia
Rhizobiacea, este es un género heterótrofo,
común en el suelo, su temperatura óptima
de crecimiento en condiciones artificiales es
de 25oC y su tolerancia al pH entra de 5 a 8.
La base para su clasificación es su
capacidad para nodular con leguminosas
específicas (Kimball, 1980). El nódulo es
una hipertrofia de la raíz, un órgano
especializado donde se realiza la fijación
del N2 (Sanaratne et al., 1987). Existen tres
géneros de esta familia: Rhizobium,
Bradyrhizobium (Badar y Moawad, 1991) y
Azospirillum (Burity et al., 1989) de clara
diversidad genética entre sí, por ello es bien
conocido que los tres géneros están
lejanamente relacionados (Vanderleyden y
Pieternel, 1995).
phyllum Rosaseae y se clasifican en las
subfamilias: Mimosoidea, Caesalpinoidea y
Papilionoidea (Long, 1989), esta es una
familia diversificada que incluye árboles,
arbustos, plantas herbáceas y cultivadas
para el consumo humano, la ganadería y la
industrial (maderas, aceites), etc. Otras
especies no cultivadas son importantes en la
naturaleza, pero solo 20 especies de la
familia Papilionoideae son de consumo
humano. En las familias existen géneros
que forman nódulos, pero el porcentaje de
nodulación es diferente y dependiente de
sus características genéticas, ya que el
genotipo de la planta en las raíces,
restringen la nodulación (Thies et al.,
1992).
Simbiosis rhizobium-leguminosa
El establecimiento de la simbiosis para
atrapar el N2 entre Rhizobium y la
leguminosa es un proceso complejo, donde
la formación de nódulos la captación del N2
se da en etapas sucesivas. Rhizobium
induce en la leguminosa el desarrollo de
nódulos en su raíz, los dos organismos
establecen una cooperación metabólica, las
bacterias reducen N2 a amonio (NH4), el
cual exportan al tejido vegetal para su
asimilación en proteínas y otros compuestos
nitrogenados complejos, las hojas reducen
el C02 en azúcares durante la fotosíntesis y
lo transportan a la raíz donde los
bacteroides de Rhizobium lo usan como
fuente de energía para proveer ATP al
proceso de inmovilizar N2.
La asociación se inicia con el proceso de
infección, cuando las bacterias son
estimuladas por los exudados radicales y
proliferan lo que induce un alargamiento y
curveado de los pelos radicales y posterior
formación de una estructura tubular llamada
cordón de infección (Long, 1989). Este se
desarrolla en el interior del punto de
adhesión a la bacteria y forma un canal en
en interior del pelo. Rhizobium es
conducido a través del cordón hasta la base
del pelo (Burity et al., 1989). El cordón de
infección atraviesa la pared de la célula
cortical adyacente, ahí al perder la pared
celular, se establece Rhizobium; después se
engloba por la membrana plasmática del
hospedero, lo que resulta en la formación
del nódulo. Las bacterias y las células de la
corteza radical se diferencian y comienza la
fijación simbiótica del N2 y el intercambio
metabólico fijado el N2, se transporta
rápidamente del nódulo al resto de la
planta. La reducción de N2 molecular a
amonio, se lleva a cabo por la nitrogenasa,
que requiere ATP y de la leghemoglobina,
una proteína globular cuya función es
atrapar el oxígeno para facilitar el trabajo
de la nitrogenasa, además de transferir 02 y
estimular la oxidación de la reserva del
carbono, cubrir el alto gasto de energía que
Rhizobium requiere para incorporar el N2.
La leghemoglobina es codificada por un
gen de la leguminosa, esta proteína se
localiza en el nódulo fuera de la bacteria y
es distinta para cada tipo de Rhizobium.
Inoculación
A pesar de que Rhizobium es un habitante
común en los suelos agrícolas,
frecuentemente su población es insuficiente
para alcanzar una relación benéfica con la
leguminosa, o bien cuando los rhizobios
nativos no fijan cantidades suficientes de N2
para las leguminosas es necesario inocular
la semilla a la siembra y asegurar la fijación
biológica del N2.
La utilización de un Rhizobium infectivo
(capacidad de nodular) y efectivo
(eficiencia para la fijación del N2) en la
leguminosa, implica determinar la
necesidad de inoculación. Para ello se
corrobora la existencia del tipo de
Rhizobium nativo en el suelo, su eficiencia
para fijar N2, la concentración de N del
suelo y si la leguminosa elegida se siembra
con frecuencia en la región para mantener
su rendimiento. Lo ideal es seleccionar un
Rhizobium altamente infectivo y efectivo
para lograr una disminución máxima del
fertilizante nitrogenado sin decremento en
el rendimiento de la leguminosa.
En general, la inoculación se puede
recomendar para una zona agrícola que se
sembrará con una nueva especie de
leguminosa. Para controlar la calidad de un
inoculante de una leguminosa específica, es
necesario mantener un número de
Rhizobium de aproximadamente 106
bacterias/g de inoculante (FAO, 1995) y
determinar si es específico para la
leguminosa a prueba. Así, un producto
microbiano o inoculante, debe por lo menos
mantener la productividad de un cultivo
agrícola con menos dosis de fertilizante
nitrogenado y con ello un ahorro en el costo
de producción, minimizar la contaminación
de aguas superficiales y mantos acuíferos y
por supuesto la conservación del suelo, en
un esquema de producción sustentable.
Existen varios tipos de inoculantes, pero el
más común es un soporte a base de turba
impregnada con un cultivo bacteriano. A
pesar de que desde 1880 los inoculantes han
sido comercializados, como un producto
biológico requiere de un riguroso control de
calidad de tipo microbiológico que
garantice el éxito esperado con la
leguminosa seleccionada. Ya que un
manejo inadecuado en su producción y
manejo trae en consecuencia una baja
efectividad al aplicarse en la leguminosa,
debido a (Sánchez-Yáñez, 1997):
1. Deficiente preparación a nivel de
laboratorio, manejo, almacenamiento
a nivel de comercialización y
aplicación del inoculante por parte de
los fabricantes, comerciantes y
agricultores.
2. Incompatibilidad del tipo de
Rhizobium comercial y la leguminosa
seleccionada.
3. Condiciones adversas para la
infección y la actividad bacteriana,
como concentraciones elevadas de N,
metales pesados y antagonismo
 microbiano nativo del suelo no de se
pretende aplicar.
Actividad del Rhizobium nativo del suelo
contra el introducido, en general por que los
rhizobios autóctonos son infectivos, pero no
son eficientes en la fijación de N2. Por lo
cual para mejorar el rendimiento de soya y
otras leguminosas, ha sido necesario
seleccionar un nativo altamente infectivo y
efectivo y ademas agregar pequeñas
cantidades de fertilizante nitrogenado,
aproximadamente 20 kg N/Ha, lo cual
estimula la nodulación, para alcanzar hasta
un 70-75% de nitrógeno fijado proveniente
de la atmósfera (Thies et al., 1992); este
fenómeno depende de la interacción entre
los genotipos del hospedero y el tipo de
Rhizobium, mientras que con altas
concentraciones de fertilizante nitrogenado,
se inhiben la fijación simbiótica del
nitrógeno (Tamez y Peña-Cabriales, 1989).
PROCEDIMIENTO:
1ª Parte ( extracción y propagación)
- Se desenterraron plantas de alfalfa
cuidando que la raíz no fuese
dañada.
- Las raíces se examinaron en busca
de nódulos que nos indicaría la
presencia de la bacteria.
- Los nódulos se extrajeron, se
lavaron y se pulverizaron en agua
destilada en una campana de flujo
laminar.
- Se preparo un medio de cultivo rico
en nitrógeno para la propagación de
la bacteria.
- La solución de nódulos se embarró
cuidadosamente formando zurcos
en el medio de cultivo, el medio de
cultivo se cerró y selló.
- La sepa se mantuvo durante una
semana a 18C.
2ª Parte ( inoculación).
- Se lavaron con hipoclorito .5M las
semillas de jitomate.
- Se enjuagaron con agua destilada.
- Se preparó una solución de agua
destilada con nuestra bacteria
propagada en la cual se
introdujeron 20 semillas de
jitomate durante 20 min.
- Las semillas se secaron para quedar
listas para la siguiente parte
experimental.
NOTA: para mayor rendimiento se
utilizaron semillas certificadas.
3ª parte (almácigo)
- Las semillas se llevaron a germinar
a un almácigo con agrolita donde
serían almacenadas hasta alcanzar
5cm de tallo.
- Se preparo un control de semillas
normales o sin infectar que fueron
lavadas y puestas en almácigo.
4ª Parte (transplante a sistema hidropónico
y control de crecimiento).
- Se prepararon cilindros de PVC
con ventanas de 10cm x 10cm
intermitentes a 120º, de manera de
que se almacenaran
individualmente las semillas, el
sustrato fue arena, y se irrigó con
sistema de goteo a gasto
volumétrico de 2lt/dia con una
solución ideal que contiene:
Nota: Los cilindros fueron pesados a
manera de calcular el diferencial de
biomasa entre los tipos de semilla.
COMPUESTO GRAMOS
Nitrato de calcio 23
Nitrato de potasio 11.7
Fosfato mono 5.5
potásico
Sulfato de magnesio 12
- Se dejaron crecer manteniendo un
control semanal de longitud del
tallo y cantidad de biomasa.
- El experimento se tomó 14
semanas.
Resultados.

Se extrajeron los nódulos y se llevaron a la

campana de propagación para cultivar la
bacteria rhizobium melitoli.

IMAGE

IMAGEN 4. Muestra que las semillas infectadas y las

semillas control crecieron en una semana a 5cm de tallo, lo
que no nos muestra aún ningún beneficio de la bacteria
inoculada.

Las semillas fueron transplantadas en los

cilindros hidropónicos para su crecimiento.

N 1: Nos muestra la campana de flujo laminar, la cual

avienta aire para que otros microorganismos no invadan
nuestro medio de cultivo.

IMAGE

IMAGEN 5. Muestra la figura del cilindro hidropónico con

las plántulas transplantadas a la tercera semana.

N 2: Nos muestra los medios de cultivo en donde se propagó

la bacteria rhizobium melitoli. En ellos se observó una
propagación efectiva, lo que los mostraba que efectivamente
en los nódulos de alfalfa se encontraba la bacteria buscada.

IMAGEN 6. Nos muestra uno de los cilindros hidropónicos

donde se sembró la plántula ya con maduración de 8
semanas.

IMAGEN 3. Aquí se almacenó el medio de cultivo para su

propagación a 18C.
Los datos obtenidos en cuanto a longitud de
tallo y cantidad de biomasa fueron los SEMANA INFECTADAS CONTROL
siguientes: 1 12 11,3
2 15 14
TABLA DE MEDIA DE LONGITUD EN 3 30 29
CENTIMETROS DE SEMILLAS 4 69 52
INFECTADAS. 5 110 91
MEDIA 6 140 120
SEMANA (cm) 7 190 150
1 5,2 8 239 193
2 6 9 298 230
3 8,9 10 340 254
4 12,8 11 389 292
5 20,7 12 450 310
6 27,8 13 520 356
7 32,9 14 610 382
8 39,6 TABLA 3. Nos muestra la evolución de cantidad de
biomasa medida en gramos tomada cada semana durante las
9 45,2 14 semanas.
10 52,7
11 55,9 BIOMASA EN GRAMOS
12 60,8
13 67,2 700
600

14 73,5 500
GRAMOS

400
300
200
100
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

TABLA DE MEDIA DE LONGITUD EN SEMANA

CENTIMETROS DE SEMILLAS
CONTROL.
MEDIA GRAFICO 2. Nos muestra el incremento de biomasa (sin
contar los frutos obtenidos en la semana 12 y 13
SEMANA (cm) respectivamente) la línea superior pertenece a las semillas
1 5,3 infectadas y la inferior al control.
2 6,1
3 7,2 Se observo que las semillas infectadas con
4 10,1 rhizobium obtuvieron una semana antes sus
5 19,1 frutos con respecto al control, aunque a
6 23,5 simple vista no resultaron ser mejores, ni
7 28,2 peores. Aunque mostró un incremento en la
8 32,1 producción de 1,2kg a 1,8kg en racimo.
9 36,1
10 42,4
11 48,1
12 53,1
13 57,2
14 60,9
CRECIMIENTO
LONGITUD EN CM

80

60

40

20

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
IMAGEN 7. Nos muestra que se observo una alta calidad en
SAMANA los frutos obtenidos por los cultivos infectados con
rhizobium.

GRAFICO 1: Nos indica la forma en que el crecimiento se

llevó a cabo, la línea superior pertenece a las semillas
infectadas y la inferior a las semillas control.
DISCUSION DE RESULTADOS:
- La velocidad de crecimiento
observado en los resultados por
parte de las semillas infectadas es
explicable ya que gracias a la
fijación de nitrógeno extra por parte
de la planta aumenta la
concentración de clorofilas, esta
favorece la obtención de energía la
cual es utilizada para la fijación de
carbono, formando azúcares
estructurales que le permite
incrementar su biomasa.
- Al observar que las platas
infectadas obtuvieron productos
más rápido y en mayor cantidad
que las plantas control, se atribuye
directamente a la fijación de
nitrógeno ya que gracias a ella la
planta puede formar las proteínas
necesarias para la formación de
frutos, además de que estos podrían
contener un mayor índice
nutrimental, pero eso solo se sabría
al llevar los fruto a un análisis por
electroforesis.
- Se escogió la técnica de hidroponía
para asegurarnos que los dos tipos
de plantas recibieran los mismos
nutrientes en cantidad y variedad, y
se observara si realmente la fijación
de nitrógeno es más efectiva en las
plantas infectadas, además de abrir
la posibilidad de que las mismas lo
tomaran del aire, siendo reducido a
amonio por las bacterias rhizobium.
Otro aspecto importante sería el no
exponer a las plantas a otro tipo de
bacterias contenidas en el suelo que
alteraran el rendimiento.
- Al ser el tejido celular y las
características físicas diferentes el
jitomate de la alfalfa se piensa que
el rendimiento no fue total, aún así
gracias al alto índice de infección
del rhizobium melitoli se pudieron
observar resultados, por lo tanto el
rendimiento podría incrementarse
modificando genéticamente el
jitomate con los genes del
rhizobium lo que nos
proporcionaría plantas capaces de
fijar nitrógeno por ellas mismas.
- La planta infectada creó nódulos en
contacto con la solución nutriente
administrada y se encontró
mediante espectrofotometría que en
sistemas hidropónicos la planta
absorbió un 20% mas de nitratos
que las plantas control, por lo que
no solo absorben nitrógeno del aire
sino también del sustrato en forma
de nitratos esto podemos decir que
es debido al incremento de
biomasa.
CONCLUSION:
- El efecto simbiótico del rhizobium en
plantas de jitomate es claro según los
resultados de la investigación, se logró
observar un incremento en crecimiento y
producción, por lo cual es lógico pensar en
que el aprovechamiento de esta técnica
traería grandes beneficios a la agricultura
en nuestro país.
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