Manual de Practicas de Hemostasia

Facultad de Bioanlisis, Veracruz
Manual de Prcticas de Hematologa
MANUAL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO
HEMOSTASIA
ELABOR:
Q.C. MARIA ESTHER DESCHAMPS

LAGO
Hemostasia
HEMOSTASIA: PRACTICA NO.1

OBTENCIN DE LA MUESTRA DE SANGRE
1. INTRODUCCIN
Obtencin De Sangre Capilar
Es el mtodo empleado cuando se necesita tan solo una pequea cantidad de sangre, ya
que los estudios a realizar as lo requieren.
El sitio ms apropiado para obtener sangre capilar es la yema del dedo. En los nios ms
pequeos, es ms conveniente obtenerla del taln del dedo pulgar del pie. Los detalles
relativos a los recipientes y portaobjetos que se utilizan, se indican a continuacin.
VENTAJAS.
d con que puede obtenerse
mente til en pacientes geritricos y en nios, en particular, recin nacidos.
Facilida
Especial
DESVENTAJAS.
Slo
logra obtenerse una pequea cantidad de sangre que puede ser insuficiente.
Es
un
mtodo por lo general tardado y que tiende a provocar hemlisis de la muestra
En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se
realiza la puncin despus de 8 a 10 min. de contacto con la piel con un buen
antisptico.
Obtencin De Sangre Venosa .
Es el principal mtodo de extraccin de sangre en el laboratorio de anlisis clnicos, ya
que es relativamente fcil de realizar.
VENTAJAS.
Nos permite hacer mltiples exmenes y en repetidas veces si se desea, con la
misma muestra.
Las alcuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia.
DESVENTAJAS
Puede provocar la coagulacin de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo.
Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada.
Puede dificultarse en nios, pacientes obesos en estado de shock.
Hemostasia
Puede ocasionarse hemlisis de las muestras afectando ciertas determinaciones,

por las siguientes causas:
Por forzar el paso de la sangre al tubo
Por agitar el tubo enrgicamente
Por extraer sangre de un hematoma
Anticoagulantes Empleados.
Estas sustancias impiden la formacin de cogulos. El mecanismo por el que se evita
la coagulacin, vara segn el anticoagulante; por ejemplo, EDTA, citrato y oxalato se
unen con el calcio, mientras que la heparina impide la conversin de protrombina en
trombina.
Ejemplos de anticoagulantes son EDTA, citrato de sodio, y heparina en forma de sal de
litio ,Los tubos deben invertirse varias veces para asegurar la mezcla adecuada
despus e la recoleccin, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA .
El sitio ms prctico para obtener sangre venosa es la flexura anterior del brazo, de
preferencia justo por arriba de alguna de las ramas venosas que all se encuentran. Las
venas superficiales de la cara anterior del antebrazo son las ms comnes para la
venopuncin. Las tres venas principales que se utilizan son:
1) vena ceflica, ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la
mano; 2) vena baslica, ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo
meique de la mano; y 3) vena cubital mediana, que conecta las venas baslica y
ceflica en la fosa antecubital ( flexin del codo) y es la vena de eleccin.Si el paciente
aprieta el puo despus de aplicar el torniquete, la vena se tornar ms prominente.
El torniquete facilita la obtencin. En los nios pequeos se pueden utilizar otros sitios; si
es as, es mejor que la sangre la obtenga alguna persona con experiencia. Usar una aguja
puntiaguda, nunca menor de calibre 21 y una jeringa de 5 ml de 10 ml. Tanto la aguja
como la jeringa debern estar limpias, secas y estriles. Con prctica se puede obtener
sangre usando slo una aguja con un tubo de goma por el que se deja correr la sangre
hasta los tubos en los que se recoge la muestra. Para esta tcnica se utilizan agujas de
calibre 19.
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Materiales de Laboratorio
CANTIDAD
2
1
1
1
1
1
1
Hemostasia
DESCRIPCIN
Tubos de recogida de muestras con EDTA
Aguja de Vacutainer
Contenedor de Vacutainer
Jeringa
Lanceta
Torundas de algodn con alcohol isoproplico
Ligadura
3
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Puncin Capilar
4.1.1 Indicaciones.
En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna externa del taln.En nios de
ms de un ao, en la superficie palmar de la ltima falange del segundo, tercero cuarto
dedo de la mano.La puncin no deber realizarse en una parte edematosa
congestionada, donde la piel se encuentra fra y ciantica.
4.1.2
Identificacin del Paciente
Asegurarse de que el paciente llegue en condiciones ptimas y

tranquilizarlo.
Colocar al paciente adecuadamente.
Checar el material para la extraccin:
4.1.3 Tcnica.
4.1.3.1 Limpiar cuidadosamente la piel en el sitio de puncin y a su alrededor con
algodn mojado en algn desinfectante , como alcohol de 70%.
4.1.3.2 Secar el rea con gasa estril seca.
4.1.3.3 Puncionar con una lanceta estril aguja desechable. El movimiento debe ser
rpido y la puncin suficientemente profunda para asegurar que la sangre
fluya libremente.La salida de la sangre puede facilitarse ejerciendo una suave
presin en la cara lateral del dedo. A corta distancia del sitio de puncin.
4.1.3.4 La sangre deber fluir libremente. Si se ejerce demasiada presin, se diluir
con los lquidos tisulares, lo que la puede hacer inapropiada para estudio.
4.1.3.5 Descartar siempre la primera gota de sangre, limpindola con una gasa seca y
dejar el sitio de puncin limpio y seco.
Hemostasia
4.3.1.6 Obtener la cantidad requerida de muestra, aspirando la sangre con pipeta

colocndola en un portaobjetos.
4.2 Puncin Venosa

4.2.1 Indicaciones.
Debe indicarse al paciente la posicin correcta, que puede ser sentado recostado,
apoyando bien el brazo en posicin horizontal.
Elegir la vena adecuada, prefirindose la cubital mediana, la vena baslica, la ceflica, las
venas de la mueca, tobillo y mano, ya que resultan fciles de palpar.
4.2.2 Tcnica
1. Desinfectar la piel en el sitio de puncin con algodn mojado en un desinfectante
apropiado como alcohol de 70%.
2. Preparar la jeringa y la aguja, en su defecto la aguja con el contenedor en el caso
del sistema de tubos al vaco, cuidando que la tcnica sea asptica.
3. Aplicar un torniquete en el brazo ( por arriba del sitio de puncin), suficientemente
apretado para que restrinja el flujo de la sangre venosa.
4. Desinfectar nuevamente el sitio de puncin, y secar la piel con algodn gasa
limpios, secos y estriles.
5. Asegurarse de que el mbolo de la jeringa est hasta el fondo , es decir, que la
jeringa no contenga aire. Insertar la aguja de la jeringa en una vena con un
movimiento preciso.
6. Jalar lentamente el mbolo y obtener 2 a 3 ml de sangre.
7. Retirar la jeringa de la aguja y sustituirla por otra jeringa que contenga la solucin
anticoagulante de citrato de sodio. O directamente introducir el tubo del sistema de
vaco.
8. Obtener el volumen de sangre deseado jalando el mbolo muy despacio.
9. Soltar el torniquete y colocar una gasa seca sobre el sitio de la puncin, retirando
despus la aguja con un solo movimiento.
10. Presionar ligeramente la gasa sobre el sitio de puncin
durante algunos
momentos y despus pedir al paciente que contine aplicando la presin durante
unos minutos.
11. Cuando la sangre se obtiene empleando slo una aguja sin jeringa, se emplea el
mismo procedimiento y cantidad de anticoagulante. Deben usarse tubos graduados
para obtener la proporcin adecuada de anticoagulante y sangre.
Actividades:
Hemostasia
- Practicar la toma de sangre capilar.

- Practicar la toma de sangre venosa.
-Realizar esquemas de puncin capilar .
-Realizar esquemas de puncin venosa y de las principales venas empleadas.
Hemostasia
-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extraccin: jeringa y sus partes; sistema
vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema
vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .
Hemostasia
- Reporte de resultados.____________________________________________
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HEMOSTASIA:PRCTICA No. 2
EXTENDIDOS DE SANGRE
1. INTRODUCCIN.
Los extendidos de sangre se realizan dentro del estudio del hemograma completo, bien de
manera aislada .En ellos se pueden estudiar los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas, y
el propsito de ello es determinar las caractersticas morfolgicas de cada tipo celular y
evaluar la frecuencia relativa de los distintos tipos de leucocitos.
Se deben teir con una de las tinciones de Romanowsky las cuales varan en sus propiedades
de tincin, y por lo tanto, es importante seleccionar una y familiarizarse con ella. La coloracin
de Wright es muy confiable y sencilla, pero otras tambin lo son, tales como la de Giemsa.
Leishman May-Grnwald, las cuales son igualmente satisfactorias, aunque puede variar la
tincin de un lote a otro de colorante.
Los frotis de sangre deben confeccionarse con lminas portaobjetos de vidrio que
previamente se hayan lavado y secado de manera conveniente, con la finalidad de eliminar
cualquier resto de grasa que pudiera quedar en ellos y evitar as una mala calidad en la
tincin. Los frotis de sangre son esenciales para el estudio morfolgico y cuantitativo de las
clulas sanguneas. Cuando un frotis se encuentra bien realizado, se podrn distinguir en
l tres reas importantes: la cabeza zona de inicio, el cuerpo zona media y la cola
rea final del mismo. Un frotis no deber ser ni grueso ni delgado, pues en ninguno de
ellos se podrn apreciar bien las reas antes mencionadas. En un frotis bien realizado, la
tincin ser de mejor calidad.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS
Hemostasia
4. PROCEDIMIENTO.
Tcnica de los dos Portaobjetos.
1. Colocar a una distancia de 1.5-1.9 cm del extremo derecho de un portaobjetos, una
pequea gota desangre ( del tamao de 3 cabezas de alfiler) obtenida por puncin
capilar del taln, del lbulo de la oreja por extraccin venosa.
2. Si se emplea sangre venosa mezclada con anticoagulante, el frotis deber realizarse lo
ms pronto posible, debido a que el contacto prolongado con ste altera la morfologa
celular.
3. Aproximar el portaobjetos extensor a la gora, dejando que hagan contacto y que por
capilaridad ste se extienda a lo largo del borde.
4. Se desliza el portaobjetos extensor hacia el extremo contrario, para lograr una pelcula
delgada de sangre.
5. dejar secar y teir.
NMERO
DESCRIPCIN
2
Tubos de recogida de muestras
1
Aguja de Vacutainer
1
1
Jeringa
1
1
Ligadura
1
Caja de portaobjetos limpios
ACTIVIDADES:
-Realizar 10 frotis correctamente confeccionados.
-Realizar esquema que muestra las partes de un frotis .
Hemostasia
-Realizar esquema de tres frotis: demasiado grueso, demasiado delgado y correctamente

realizado.
Hemostasia
10
- Reporte de resultados.____________________________________________
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HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 3

TINCIN DE WRIGHT Y REACTIVOS
COMUNMENTE EMPLEADOS EN HEMATOLOGIA
1. INTRODUCCIN
La finalidad de la tincin de Wright es lograr que el alumno se sienta capacitado para
preparar adecuadamente algunos de los reactivos y colorantes ms comnmente
empleados en las reas de hematologa y microbiologa, que como qumico clnico tiene la
obligacin de conocer y dominar.
COLORANTES.
A los colorantes de les puede clasificar en tres grupos:
1) Acidos. Son aquellos constitudos por sales cuya base es incolora y cuyo cido
es coloreado. A este grupo pertenecen las eosinas. Estas soluciones se usan para la
coloracin citoplasmtica coloracin de fondo.
2) Basicos. Son aquellas sales de cido incoloro y base coloreada como el
clorhidrato de azul de metileno. Estos colorantes tien por lo general algunos elementos del
ncleo.
Hemostasia
11
3) Neutros. Son aquellas sales con el cido y la base coloreados, por ejemplo, los
eosinatos de azul y azur de metileno , los ms empleados en hematologa. El mtodo de
Romanowsky, que emplea estos colorantes, ha sido la base de las coloraciones
panpticas utilizadas en la actualidad ya que ha tenido un gran xito en la tincin
diferencial de la mayora de las estructuras normales y anormales de la sangre. La mayor
parte de estos colorantes policromos derivados del mtodo de Romanowsky, se disuelven
en alcohol metlico, combinando as, la fijacin con la tincin. Los ms conocidos de todos
ellos, son los de Giemsa y de Wright.
Tipo de Error
Tincin demasiado azul
Causas
Tiempo excesivo de tincin
Lavado deficiente
Ph muy alcalino
Como se Corrige
Disminuir el tiempo de tincin
Lavar adecuadamente
Acidificar el pH
Tincin demasiado rosa
Tiempo insuficiente de tincin Aumentar el tiempo de tincin

Lavado excesivo
Lavar adecuadamente
pH muy cido
Elevar el pH
Precipitacin de colorante
Colorante no filtrado
Filtrado de colorante
Secado de la laminilla durante laProcurar que siempre haya un
tincin.
buen menisco de colorante durante la
tincin.
ANTICOAGULANTES.
Los 4 anticoagulantes ms usados son: mezcla de oxalato amnico y de potasio (
simplemente oxalato amnico ), citrato trisdico, sequestrene ( EDTA ), y heparina.
Los 3 primeros impiden la coagulacin sustrayendo el calcio del plasma sanguneo
por precipitacin fijacin en forma no ionizada. La heparina neutraliza la trombina y otras
fases de la activacin de los factores de coagulacin.
El citrato trisdico, el EDTA y la heparina, pueden emplearse para impedir la
coagulacin de la sangre destinada a transfusiones, sin embargo, la mezcla de oxalatos,
no, por ser txica.
Los oxalatos pueden usarse para determinaciones como hemoglobina, hematocrito y
recuentos globulares, aunque para extensiones sanguneas puede usarse tan slo en los
primeros minutos, pues ms tarde pueden desarrollarse alteraciones de las clulas
sanguneas como formas dentadas de los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los
granulocitos, fagocitosis de los cristales de oxalato, artefactos en los ncleos de los
linfocitos y monocitos, etc.Adems no deben emplearse para determinaciones qumicas de
nitrgeno y potasio. Para investigaciones de coagulacin, es muy til el citrato trisdico.
El EDTA sequestrene es tal vez el anticoagulante ms usado para el recuento de
clulas sanguneas. Se le compara con el oxalato para el estudio del hematocrito y
hemoglobina, pero para estudios morfolgicos, es todava mejor, pues con l, no se forman
Hemostasia
12
alteraciones ni artefactos en las clulas sanguneas, an despus de un buen tiempo de

estar hecha la mezcla, si la sangre se refrigera ( 2 horas a 24 horas ).
La heparina tambin puede usarse para determinaciones como hematocrito y
hemoglobina, pero no de ptimos resultados en las extensiones sanguneas, ya que
produce un fondo azul en aqullas que son teidas con el colorante de Wright.
3.1 Reactivos.
NUM.
1
2
3
4
5
6
7
NOMBRE DEL REACTIVO

Colorante de Wright
Metanol
Na2HPO4
KH2PO4
EDTA
Oxalato de amonio
Agua destilada
CANTIDAD
0.1 g
60 ml
2.56 g
6.66 g
3g
0.8g
1.5L
3.2 Equipo de Laboratorio

Balanza Granataria
Balanza Analtica
CANTIDAD
1
2
1
4
1
3
1
1
10
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DESCRIPCIN
Mortero
Probetas de 100 ml
Matraz Volumtrico de 100 ml
Varillas de vidrio
Frasco de vidrio color ambar de 1L de capacidad
Frascos de vidrio color mbar de 150 ml de capacidad
Jeringa sistema vacutainer para toma de muestra
Ligadura
Portaobjetos
3.4 Preparacin de los reactivos

3.4.1Colorante de Wright:
Colorante de Wright:
Metanol:
0.1 g
60 ml
Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; sto se hace poco a poco. Esta
operacin debe durar 30 min. hasta completar disolucin. Se deja reposar dos das y se
filtra.
3.4.2 - Amortiguador Buffer de fosfatos

Na2HPO4
KH2PO4
Agua destilada para aforar a
2.56 g
6.66 g
1L
Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando poco a poco
ms agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco mbar de 1 L.
3.4.3- EDTA.
EDTA
Agua destilada
3g
100 ml
Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.
3.4.4 -Solucin de Oxalato de amonio.

Oxalato de amonio
Agua destilada
0.8 g
80 ml
Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada.

En ambos, se utiliza 1 gota de solucin por ml de sangre.
Hemostasia
14
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica: Tincin de Wright.
4.1.1. Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos,
que tenga la orilla relativamente lisa.
4.1.2 Obtener una pequea cantidad de muestra de sangre perifrica.
4.1.3Colocar una pequea gota de sangre a 2 3 mm de la orilla de un portaobjetos
limpio y seco. Colocar el portaobjetos para hacer extendido en un ngulo de 30 a 45
grados con respecto al portaobjetos que tiene la muestra y hacer contacto cn la gota. Esta
debe extenderse rpidamente a lo largo de la orilla del portaobjetos para hacer los
extendidos. Deslizar el portaobjetos de extensin sobre la superficie dispersando la
muestra de sangre. El extendido de sangre debe medir aproximadamente 30 mm de
largo . El portaobjetos de extensin no se despegar hasta haber extendido toda la
sangre. El grueso del extendido de sangre puede regularse modificando el ngulo del
portaobjetos de extensin, variando el tamao de la gota de sangre, la presin la
velocidad de extensin.
4.1.4 El extendido de sangre se seca con el aire. Una vez seco, se escribe con lpiz
el nombre del paciente en una orilla del portaobjetos.
4.1.5 Fijar el extendido de sangre en alcohol metlico absoluto durante 2 a 3 minutos.
El color del extendido de sangre cambiar de rojo a caf claro. Esta fijacin es
recomendable aunque el colorante que se vaya a emplear se encuentre diludo en alcohol
metlico absoluto.
4.1.6 Cubrir el portaobjetos completamente con el colorante. Despus de 3 minutos
aadir un volumen igual de amortiguador. Soplar ligeramente para mezclar uniformemente.
Aparecer un brillo metlico verde.
4.1.7 Despus de 5 minutos enjuagar cuidadosamente con agua de la llave
amortiguador de fosfatos, al principio con chorro delgado y suavemente y despus con el
chorro fuerte para eliminar todo exceso de colorante. Limpiar el reverso del portaobjetos en
posicin erecta. Cuando se haya secado, cubrir el portaobjetos con un cubreobjetos
rectangular y fijarlo con una gota de lquido de montaje. Se puede usar slo aceite de
inmersin en una preparacin temporal.
El alumno deber ensayar tiempos hasta ajustar aquellos que ms convengan para
una ptima coloracin. As, con tres frotis ms deber ensayar: 2 minutos de colorante y 4
de amortiguador; 6 minutos de colorante y 6 minutos de amortiguador; 6 minutos de
colorante y 11 minutos de amortiguador.
4.2 Resultados Esperados.
Los resultados esperados en la tincin sern los siguientes:
Hemates en color rosa.
Ncleos de los leucocitos de azul prpura, con la cromatina y paracromatina netamente
diferenciadas.
Hemostasia
15
Grnulos neutrfilos del citoplasma, lila violeta

Grnulos eosinfilos, rojo tirando a naranja.
Grnulos basfilos, prpura tirando a azul oscuro.
Plaquetas, color lila oscuro.
Citoplasma de los linfocitos, azul claro.
Citoplasma de los monocitos, ligero azul.
Actividades:
-Practicar la tincin de Wright con frotis de sangre perifrica.
-Corregir de acuerdo al recuadro , errores encontrados en la tincin.
- Reporte de resultados
.________________________________________________________________________
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HEMOSTASIA:PRCTICA No. 4
EVALUACIN DE SANGRE PERIFRICA
1.INTRODUCCIN.
Una vez que se ha hecho y teido un frotis satisfactorio, ste puede ser evaluado en
bsqueda de anormalidades. Cada examen debera incluir anlisis con bajo poder ( 10X ),
con alto poder ( 40 45 X), e inmersin ( 100X ).Un error comn consiste en comenzar el
examen con el objetivo de inmersin.Ciertos problemas de la muestra y anormalidades
morfolgicas significativas pueden pasarse por alto a menos que todos los objetivos sean
empleados.
La presencia de eritrocitos anormales en el frotis de sangre perifrica a menudo
brinda importantes claves en el diagnstico diferencial de las anemias, y puede ser
tambin de ayuda en el diagnstico de otras enfermedades.
La morfologa de los
eritrocitos puede verse alterada con cambios en el tamao, en la forma, en las propiedades
tintoriales de clulas individuales por la presencia de ciertos materiales dentro de ellas.
Hemostasia
16
Incluso, la presencia de solo una nica clula con ciertos cambios, puede considerarse
significativa; en otros, la anormalidad se considera importante slo si un nmero
significativo de clulas se ven afectadas.
Asimismo, en la serie blanca, es importante realizar el recuento diferencial, an
cuando los nuevos contadores electrnicos den un resultado anticipado del mismo, ya que
slo puede confirmarse ste por medio de dicha lectura. Del mismo modo, se buscarn
anormalidades en las clulas blancas y stas se reportarn, as como la presencia de
clulas que normalmente no se ven en sangre perifrica, sino nicamente en mdula sea,
a menos que exista alguna patologa presente.
Lo mismo aplica para las plaquetas, las clulas ms pequeas de sangre
perifrica.Se puede hacer un recuento indirecto de las mismas cuando as se requiera, y
buscar anormalidades en su forma y en su tamao. Algunas anormalidades pueden
requerir que se indique le severidad del cambio. Todas estas determinaciones pueden
diferir de observador a observador, conduciendo a una variacin considerable en el anlisis
del mismo frotis de sangre.
Los laboratorios actualmente tratan de controlar estas inconsistencias
desarrollando criterios para estandarizar la evaluacin
de la morfologa. As, muchos
laboratorios usan un mtodo semicuantitativo de evaluacin, consistente en los trminos:
leve, moderado severo. O bien un sistema " por cruces" :1+, 2+, 3+, etc.
Tan importante como el que haya consistencia entre los observadores, es importante
tambin la seleccin de una rea apropiada del frotis para la evaluacin. En un frotis en "
cua ", en el rea "aplumada" terminal del frotis, demuestran cambios que pueden
considerarse patolgicos, p.e. macrocitosis, esferocitosis, clulas en "diana ", etc. En el
rea gruesa del frotis, las clulas pueden interpretarse como microcticas en forma
equivocada, y la morfologa puede ser difcil de evaluar. Tambin tendern a formar
apilamientos ( rouleaux ) en esta rea. Por ello, el rea ideal para examinar un frotis, es
aquella que contiene aproximadamente 200-250 clulas por campo a seco fuerte. Esto
corresponde a una rea en donde los eritrocitos se tocan pero no se enciman. En el
verdadero Roleaux, los mrgenes individuales de las clulas son difciles de distinguir y dan
una imagen como de pilas de monedas que han sido empujadas y tiradas, imagen que
persiste an en las reas ms delgadas del frotis, aunque ah exista menor cantidad de
clulas. La intensidad de la formacin de "rouleaux" depende de la concentracin de las
protenas plasmticas, especialmente el fibringeno. En enfermedades inflamatorias, los
niveles de fibringeno pueden aumentar. Tambin la elevacin de gama globulinas, como
se observa en el Mieloma mltiple, provoca formacin de "rouleaux".
Hemostasia
17
2.1 Anlisis con bajo poder.
Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tincin.Las clulas blancas
deberan verse fcilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente
teido.El borde aplumado debe ser examinado para buscar cmulos de plaquetas
filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta
evidencia de coagulacin podra interferir con muchas pruebas hematolgicas. Los
extremos laterales y aplumado deben evaluarse en bsqueda de un nmero
desproporcionado de leucocitos.,Las clulas ms grandes ( por ejemplo los neutrfilos y los
monocitos, tienden a acumularse ms en estos lugares y si el frotis est mal hecho, se
acumularn ms en estas reas, las cuales estn fuera del rea ideal de observacin.Si la
mayora de las clulas se encuentran en el borde aplumado, el frotis deber descartarse y
prepararse uno nuevo.
2.2 Anlisis con alto poder.
Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe
seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los
eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un rea en donde se encuentren
200 eritrocitos por campo. Si la cuenta de leucocitos es muy baja, puede ser necesario
incluir reas fuera del rea ideal con el fn de encontrar suficientes clulas blancas.El
segundo problema por resolver con este objetivo, ser estimar la cuenta total de leucocitos.
Estando en el rea ideal, contar el nmero de clulas blancas observadas en cinco a diez
campos y determinar el promedio. El promedio, multiplicado por un factor de correccin
que a menudo est entre 2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representar la cuenta total del
leucocitos.
2.3 Anlisis con objetivo de inmersin.
Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de
plaquetas, tambin debe poder estimarse y los tres tipos de clulas ( leucocitos , eritrocitos
y plaquetas ) deben observarse en bsqueda de anormalidades morfolgicas.
La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos,
y reportar estos valores como un porcentaje. Es importante incluir las clulas de los
mrgenes, as como las del cuerpo del frotis. As, para lograr esto, debe seguirse el patrn
de observacin de la imagen siguiente:
Hemostasia
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El nmero de plaquetas tambin puede ser estimado con este objetivo. Empleando
la misma rea que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero
no se sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este nmero
ser convertido en
no. de plaquetas/l de sangre, como se hizo con la cuenta de
leucocitos. Deber calcularse el nmero promedio de plaquetas por campo, y dicho nmero
se multiplicar por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinacin
de los objetivos y oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta,
observada representa 15,000 plaquetas 20,000 / l. Si se llegaron a observar un
promedio de 12 plaquetas por campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sera de
180,000/ l en el primer caso, 240,000 / l en el segundo caso.
La ltima actividad a realizar con este objetivo, sera evaluar la morfologa celular.
Esto puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier
anormalidad inclusin en clulas rojas y blancas, deber reportarse. Tambin es
importante evaluar la forma y el tamao de los eritrocitos en esta misma rea. Las clulas
suelen distorsionarse en reas muy delgadas, demasiado gruesas. Las plaquetas
tambin debern evaluarse en su tamao y forma. Ms de una forma inusualmente grande
de plaquetas, en cada cinco campos debern ser reportadas .
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Equipo de laboratorio.
Microscopio de Luz
CANTIDAD
1
DESCRIPCIN
Frotis de sangre perifrica teidos con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
4.1 Anlisis con bajo poder.
4.1.1Evaluar la calidad de la tincin.
Hemostasia
19
4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en bsqueda de cmulos de plaquetas
filamentos de fibrina.
4.1.3Evaluar extremos
laterales y aplumado en bsqueda de leucocitos
desproporcionados.
4.2 Anlisis con alto poder.
4.2.1Seleccionar el rea apropiada para iniciar la cuenta diferencial.
4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos.
4.3Anlisis con objetivo de inmersin.
4.3.1Realizar el recuento diferencial, contando cien clulas en total, y diferenciando
la lnea celular a la que pertenecen.
4.3.2Realizar el recuento indirecto de plaquetas.
4.3.3Buscar anormalidades morfolgicas tanto de los leucocitos como de los
eritrocitos y de las plaquetas.
ACTIVIDADES:
1. Anlisis con bajo poder.
1.1 Calidad de la tincin:_________________________________________________
__________________________________________________________________
1.2 Examen del borde aplumado del frotis ___________________________________
__________________________________________________________________
1.3
Examen de los extremos
laterales y aplumado
del
frotis.____________________________________________________________________
_________________
2. Anlisis con alto poder.
2.1
Seleccionar el rea ideal para bsqueda de anormalidades en las clulas:
(donde los eritrocitos se tocan, pero no se sobreponen, en el cuerpo del frotis )_que es la
misma
donde
se
realizar
el
recuento
diferencial
de
Hemostasia
20
leucocitos.________________________________________________________________
__________________
3. Anlisis con objetivo de inmersin.
3.1 Recuento indirecto de plaquetas
3.2 Bsqueda de anormalidades morfolgicas de:
plaquetas___________________________________________________________

RECUENTO DIRECTO DE PLAQUETAS
1. INTRODUCCIN.
El recuento de plaquetas puede hacerse de manera directa y de manera indirecta.
El mtodo directo, a su vez, requiere de un contador electrnico que sea capaz de
hacer el recuento de las diferentes clulas sanguneas ( leucocitos, eritrocitos y
plaquetas), en su defecto, podr hacerse mediante el mtodo manual, en el que
se emplear la cmara de Neubauer y la pipeta de Thoma. El mtodo indirecto es
muy til cuando se tiene dudas sobre los resultados emitidos por cualquiera de los
mtodos directos, y/ como modo de confirmar stos.Esto sucede por ejemplo,
cuando la muestra no fue adecuadamente anticoagulada a la hora de ser tomada,
cuando se tienen cifras anormalmente altas anormalmente bajas,
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA
En el recuento directo de las plaquetas mediante la cmara de Neubauer, se mezcla
la sangre en la pipeta de Thoma con un diluyente que cause la hemlisis de los
eritrocitos. Se llena el hemocitmetro con dicha mezcla y se recuentan las plaquetas
en la cuadrcula central, de preferencia con microscopio de contraste de fases y con
el objetivo de 40X.
Hemostasia
21
NMERO
2
1
1
1
1
1
1
1
1
DESCRIPCIN
Tubos de recogida de muestras con EDTA
Aguja de Vacutainer
Jeringa
Ligadura
Cmara de Neubauer
Pipeta de Thoma
Boquilla y manguera para aspiracin
3.1 Reactivos
NUMERO
1
NOMBRE DEL REACTIVO

Oxalato de amonio

3.2.1 Centrfuga
3.2.2 Agitador elctrico
3.2.3 Microscopio de luz
Hemostasia
22
CONCENTRACIN
1%
CANTIDAD
1 ml
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica
4.1.1 Si se obtiene la muestra por puncin digital, el sitio debe estar limpio y la sangre
debe fluir libremente. Limpia la primera gota. Si la muestra es de sangre venosa
debe obtenerse con una jeringa de plstico seca ( de vidrio siliconizado ) con
aguja corta, de calibre no menor al 21.Retirar la aguja antes de poner la sangre
en un tubo de plstico con EDTA. La sangre y el anticoagulante deben
mezclarse inmediata y cuidadosamente, para evitar la formacin de espuma.
4.1.2 El mezclado de la sangre con anticoagulante debe realizarse suavemente y
durante unos cinco minutos.
4.1.3 Con la pipeta de Thoma, aspirar sangre hasta la marca de 1.0 y se diluye hasta
la marca de 101 con el oxalato de amonio ( dil.1:100).Hacer por duplicado.
4.1.4 Colocar las pipetas en el agitador de 10 a 15 minutos.
4.1.5 Llenar la cmara de Neubauer con el contenido de las pipetas debidamente
mezclado, desechando las primeras 4-6 gotas.
4.1.6 Cubrir la cmara con una caja de Petri de 10 a 20 min, para permitir que las
plaquetas se sedimenten. Colocar un pedazo de algodn de papel filtro
mojados dentro de la caja para evitar la evaporacin.
4.1.7 Empleando el microscopio de contraste de fases, contar las plaquetas en la
cuadrcula central destinada a la cuenta de glbulos rojos ( 25 cuadros
centrales )calculando la cifra de plaquetas como sigue:
No. De plaquetas /l= No de plaquetas contadas X factor de dilucin( 100) X factor de
correccin de volumen ( 10)= No de plaquetas contadas X 1000.
Hemostasia
23
Cuadrculas ( L ) para recuento

de glbulos blancos
El recuento de plaquetas se
realiza en los 25 cuadros del
cuadrante central.
4.2 Factores de Error en las Cuentas Celulares.

4.2.1 Cuando se use sangre capilar se requiera una gota que fluya
libremente.
4.2.2
Las muestras de sangre anticoagulada se deben mezclar
cuidadosamente invirtiendo el tubo de sangre por lo menos 20
veces. No se debe agitar el tubo pues se forma espuma que impide
medir cantidades exactas. Inclinar el tubo bien mezclado a un ngulo
de 45, ligeramente mayor, y pipetear del borde superior del tubo
siguiendo las mismas indicaciones que para sangre capilar.
4.2.3 Las pipetas deben estar limpias y secas.
4.2.4 Tomar las muestras con la pipeta en forma rpida y precisa. Si se
rebasa la lnea del volumen deseado ligeramente, ajustar tocando un
papel absorbente con la punta de la pipeta,
Hemostasia
24
4.2.5 Limpiar el exterior de la pipeta antes de introducirla en la solucin

disolvente.
4.2.6 La cmara se llena por accin capilar, regulando el flujo del lquido
de la pipeta, para que fluya suave y rpidamente, Llenar la cmara
completamente, sin permitir que el lquido rebase los lmites. Esperar
de 10 a 20 minutos a que las clulas se asienten en el rea de
conteo. Proseguir con el conteo.
4.2.7 La cmara del hemocitmetro y el cubreobjetos deben estar limpios
y secos antes de usarse. Esto evita errores graves que se producen
por las huellas digitales y las superficies aceitosas.
ACTIVIDADES.
1. Reportar resultados
.________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________
2. Enumerar todos los casos en que pueda haber aumento

disminucin de plaquetas.
Hemostasia
25

TIEMPO DE COAGULACIN
1. INTRODUCCIN.
El tiempo de coagulacin es un estudio creado en 1939. Nos da un indicio
aproximado de la eficacia global del mecanismo intrnseco de la coagulacin.
La prueba carece de valor para las insuficiencias ligeras de distintos factores, porque basta
con una pequea cantidad de trombina para producir un cogulo fibrina. Todava es menos
til para las anomalas de las ltimas etapas de la coagulacin.
El tiempo de coagulacin mide el intervalo de tiempo necesario para que una muestra de
sangre completa recin obtenida coagule in vitro a 37C y evale en forma general el
mecanismo de coagulacin intrnseco.
Dos son las finalidades ms relevantes de este mtodo:
1. Evaluar la funcin del sistema intrnseco de la coagulacin
sangunea.
2. Vigilar la eficiencia de la administracin de heparina.
3 .LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1Equipo de laboratorio.
3.1.1Bao Mara a 37C
3.1.2Cronmetro
3.2Material de Laboratorio.
CANTIDAD
3
1
Hemostasia
26
DESCRIPCIN
Tubos de vidrio de 12X75
gradilla
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Mtodo de Lee-White
1. Se extrae sangre venosa con una jeringa de 5 ml, y una aguja gruesa ( del No.18
19 ). La puncin venosa debe ser perfecta, pues la contaminacin con linfa puede
modificar los resultados.
2. Preparar el bao Mara a 37C, colocando una gradilla dentro de l, con 3 tubos de
12 X 75.
3. Se le realiza al paciente una puncin de 3 ml poniendo en marcha el cronmetro en
el momento en que entra la sangre a la jeringa.
4. Terminada la puncin, se deposita 1ml de sangre en cada tuboy se vigilan cada 30
seg., inclinndolos suavemente y anotando el tiempo en que coagula cada uno de
ellos.
5. Se suman los tres tiempos, y se calcula el promedio, obteniendo as el resultado.
6. Durante el proceso, evitar la agitacin, que podra retardar el tiempo de coagulacin.
4.2 Valores de Referencia: 4-10 minutos
ACTIVIDADES.
Realizar la toma se muestra sangunea como se indica y continuar con los dems pasos de
la tcnica.
Realizar clculos y obtener resultados.
.________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________
Anotar observaciones.
Hemostasia
27

OBSERVACIN DEL COGULO
1. INTRODUCCIN.
La observacin del cogulo formado en un tubo de ensayo proporciona informacin
sobre:
a) La concentracin del fibringeno,b) el nmero y funcin de las plaquetas y c) la
actividad del sistema fibrinoltico.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA.
2.1
Aproximadamente el 30% del volumen total de sangre en el tubo debe

coagularse
En casos de trombocitopenia de disfuncin plaquetaria muy anormal,
como en la trombastenia, se forma un cogulo grande de estructura dbil.
Asimismo, en casos de paraproteinemia ( mieloma macroglobulinemia de
Waldenstrom), la retraccin del cogulo puede estar muy trastornada.
Un cogulo pequeo de forma regular ocurre cuando la concentracin del
fibringeno es baja.
Un cogulo pequeo de forma irregular se observa cuando el incremento en
la actividad fibrinoltica lo digiere, como ocurre en la coagulacin
intravascular diseminada ( CID ).
No se observa formacin de cogulo alguno.
2.2
2.3
2.4
2.5
1
2.6
Causas de error
Tubos de ensayo sucios
Contaminacin de sangre con anticoagulante
Hemostasia
28
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1Equipo de Laboratorio.
Bao Mara a 37C
3.2Material de Laboratorio
CANTIDAD
2
1
1
1
1
1
1
DESCRIPCIN
Tubos de vidrio de 13 X 100 de fondo redondo
Gancho de alambre
Aplicador de madera
Caja Petri con papel filtro dentro de ella
Jeringa de 5 ml Sistema Vacutainer
Ligadura
Torunda con alcohol isoproplico
4. PROCEDIMIENTO
4.1 Tomar una muestra de sangre y depositar la muestra en un tubo de vidrio
de 13 X 100
4.2 Colocar el tubo con la muestra de sangre en el bao Mara a 37C
durante 3 horas.
4.3 Observar despus de transcurrido este tiempo, la forma del cogulo,
rodeado de suero
4.4 .Ayudarse con el gancho de alambre para vaciar el contenido del tubo
lentamente a la caja de Petri con un papel filtro dentro de ella.
4.5 Observar y buscar un cogulo pequeo en caso de que en el tubo no se
haya apreciado un cogulo grande.
ACTIVIDADES
Reportar resultados mediante la descripcin del cogulo formado, reportar
la ausencia de ste.
.________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
Hemostasia
29
________________________________________________________________
___________________________
HEMOSTASIA: PRCTICA NO 8
TIEMPO DE SANGRADO
1.INTRODUCCIN.
El tiempo de sangrado es una medida de Integridad vascular y plaquetaria. Las
plaquetas se adhieren a la colgena expuesta ( subendotelial) y despus entre ellas,
para formar un agregado que obtura la herida. Para la agregacin plaquetaria, tambin
es necesario un factor del plasma: el factor de Von Willebrand.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA
El tiempo de sangrado se mide determinando el tiempo necesario para que dejen de
sangrar los pequeos vasos subcutneos que han sido lesionados por una Incisin
estandarizada. Uno de los mayores problemas que confronta la medicin del tiempo de
sangrado es la reproducibilidad. Por esta razn se han desarrollado tres generaciones
de pruebas, cada una con aumento en la estandarizacin de la herida en profundidad y
longitud.
El mtodo ms antiguo es el de Duke, que consiste en hacer una puncin del lbulo de
la oreja con una lanceta estril. La desventaja de este mtodo es que es muy difcil
estandarizar la profundidad de la incisin. Adems, si el paciente tiene un serio
problema hemorrgico, el sangrado en el tejido celular blando del lbulo de la oreja
puede causar un hematoma grande.
El mtodo de Ivy est mejor estandarizado que el de Duke. Se utiliza una lanceta
estilete para producir una incisin en la cara anterior del antebrazo. La navaja tiene un
tope que "mita la profundidad de la Incisin. Adems, como la cara anterior del
antebrazo es suficientemente larga para permitir varias incisiones, pueden hacerse dos
tres de ellas y promediar sus resultados. Adicionalmente, en este mtodo est mejor
estandarizada la presin del sistema vascular, ya que un esfingomanmetro que se
coloca en el brazo (40 mmHg), mantiene la presin venosa dentro de lmites reducidos.
Hemostasia
30
Esfingomanmetro
Cronmetro.
3.2Material de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
1
DESCRIPCIN
Lancetas desechables estriles
Tiras de papel filtro
Torundas de algodn con alcohol
4.PROCEDIMIENTO
4.1 Tcnica: Mtodo de Duke.
1. Limpiar perfectamente el lbulo de la oreja o la yema de un dedo con una torunda
con alcohol. Dejar secar .
2. Puncionar el sitio elegido con la lanceta, echando a andar al mismo tiempo, el
cronmetro. La puncin debe hacerse en un solo movimiento, introduciendo la lanceta
hasta el fondo y sin hacer movimientos laterales de sta para no rasgar la piel o hacer
ms amplia la puncin.
3. Sin tocar la piel, con una t'ra de papel filtro, secar la gota de sangre que salga por el
sitio de pund6n cada 30 segundos, hasta que ea papel flltro ya no absorba sangre.
4. Anotar el tiempo en que deje de sangrar .
Ventajas: es muy sencillo de realizar .
Desventajas: Las condiciones de la prueba no son constantes, por lo tanto los
resultados son imprecisos.
4.2 Tcnica: Mtodo de Ivy.
1. Colocar el brazalete del esfingomanmetro en el brazo del paciente. limpiar la cara
anterior del antebrazo con una torunda de algodn mojada en alcohol y dejar secar .
Hemostasia
31
2. Inflar el brazalete a 40 mmHg y esperar 30 segundos para permitir que el llenado

capilar se equilibre.
3. Hacer tres incisiones en la cara anterior del antebrazo, de preferencia donde no
existe vello y evitando las venas superficiales.
4. Poner a andar un cronmetro para cada herida en el momento en que comience el
sangrado, lo que ocurre, generalmente, de 15 a 30 segundos despus.
5. Si el sangrado no se inicia antes de 30 segundos de efectuada la incisin, oprimir
suavemente la herida entre dos dedos ( esto no modifica el resultado final).
6. Absorber la sangre con el papel filtro circular cada 15 segundos. Debe evitarse el
contacto directo entre el papel filtro y la herida.
7. El tiempo de Sangrado corresponde al momento en que la sangre ya no mancha el
papel filtro. Registrar el tiempo en el que esto ocurre para cada incisin .
8. Sacar el promedio del tiempo de las tres heridas.
9. Limpiar los sitios de incisin y cubrirlos con vendas adhesivas estriles.
Ventajas: Las condiciones de prueba son constantes, por lo que tiene mayor
reproducibilidad.
Desventajas: Es un poco ms laboriosa para realizar.
4.3 Valores de Referencia.
Mtodo de Duke: 1 a 4 minutos
Mtodo de Ivy: de 2 a 6 minutos
.________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________
Hemostasia
32
HEMOSTASIA: PRCTICA No.9

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR
1. INTRODUCCIN.
La Velocidad de Sedimentacin Globular ( VSG ) es til para monitorizar la evolucin de
una enfermedad inflamatoria diferenciar enfermedades similares. la VSG es normal en
los pacientes con artrosis, pero est elevada en los que presentan fiebre reumtica,
artritis reumatoidea o artritis pigena. Esta elevada en las fases iniciales de la
enfermedad inflamatoria pelviana aguda o de un embarazo ectpico roto, pero es
normal en las primeras horas de una apendicitis aguda. Puede usarse para indicar
tuberculosis pulmonar activa.
Cuando Se deja sangre anticoagulada en reposo un tiempo a temperatura ambiente, los
eritrocitos sedimentan hacia el fondo del tubo. La VSG es la cantidad de milmetros que
los eritrocitos sedimentan en 1 hora, y es afectada por los eritrocitos, el plasma y
factores mecnicos y tcnicos.
Los eritrocitos tienen una carga superficial neta negativa, por consiguiente tienden a
repelerse entre s. Las fuerzas repulsivas se neutralizan en forma parcial total si hay
aumento de la cantidad. de protenas plasmticas con carga positiva; los eritrocitos
sedimentan con mayor rapidez debido a la formacin de agregados de eritrocitos o
"rodillos". Los ejemplos de macromolculas que pueden producir esta reaccin son:
fibringeno, beta globulinas e inmunoglobulinas patolgicas.
Los eritrocitos normales tienen una masa relativamente pequea y sedimentan
despacio. Algunas enfermedades como el mieloma mltiple, pueden causar la formacin
de "rodillos" debido a la alteracin del fibringeno y las globulinas plasmticas. Esta
alteracin cambia la superficie del eritrocito, lo que genera su aglutinacin, aumento de
su masa, y una VSG ms rpida. esta ltima es directamente proporcional a la masa del
eritrocito e inversamente proporcional a la viscosidad del plasma.
3.1 Material de Laboratorio
CANTIDAD
1
1
Hemostasia
33
DESCRIPCIN
Tubio de Wintrobe graduado
Pipeta Pasteur

1
1
Gradilla para tubos de Wintrobe

Tubo con sangre anticoagulada
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Tcnica
1. Llenar la pipeta de Wintrobe graduada hasta la marca cero con sangre
anticoagulada con EDTA.
2. colocar la pipeta en el soporte y dejar sedimentar sin tocar 60 min
3. registrar la cantidad de milmetros que descendieron los eritrocitos. La capa
leucocitaria no debe incluirse en la Lectura.
4. La VSG se informa como 1 hora= _________mm
4.2 Valores de Referencia.
Edad
VSG (mm/hr)
Nios
0 a 10
Hombres <50 aos

>50 aos
0 a 15
0 a 20
Mujeres <50 aos

>50 aos
0 a 20
0 a 30
ACTIVIDADES
Reportar los resultados obtenidos.
.______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
____________________________________________________________________
Hemostasia
34
HEMOSTASIA: PRCTICA No.10

MEDICIN DEL SISTEMA EXTRNSECO
TIEMPO DE PROTROMBINA ( TP } EN UNA ETAPA
1. INTRODUCCIN.
El anlisis de tiempo de Protrombina es sensible a las deficiencias del sistema extrnseco
de la coagulacin ( factores I, II, V, VII X ). El TP se utiliza como exploraci6n prequirrgica
para detectar posibles problemas hemorrgicos. Un TP prolongado Generalmente es
indicativo de un nivel bajo en uno o ms de los factores del sistema de coagulacin
extrnseco comn, cuya causa pueden ser trastornos hereditarios de la coagulacin, una
deficiencia de vitamina K, problemas hepticos ingestin de frmacos. El TP es el anlisis
de laboratorio ms corriente empleado para monitorizar la terapia anticoagulante oral,
puesto que es sensible a los factores VII y X.
No es sensible a las deficiencias del sistema intrnseco ( factores VIII. IX. XI y XII ) a las
disfunciones plaquetarias. No puede utilizarse para la monitorizacin de la terapia de
heparina, para la cual est recomendada la determinacin del Tiempo de activacin Parcial
de Tromboplastina ( ATTP)
El TP es el tiempo requerido para que se coagule el plasma despus de agregarle
tromboplastina tisular v una cantidad ptima de cloruro de calcio, reponiendo el calcio que
fue inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina completa para activar
la va extrnseca. El mtodo de referencia de la Prueba del TP en una etapa es el
recomendado por el Consejo Internacional de Estandarizacin en Hematologa/Consejo
Internacional de Trombosis y Hemostasia (CIEH/CITH).
Los resultados obtenidos dependen de numerosos factores como la temperatura, la calidad
del agua, el pH, la fuerza inica, el mtodo de ensayo utilizado, la recogida y conservacin
de las muestras, y la poblacin de pacientes en consideracin. Los rangos normales de
muestras deben ser establecidos para cada laboratorio.
Para cada nuevo lote de tromboplastina ( preparada en el laboratorio comercial ), se
deben establecer valores normales en muestras de plasma, de aproximadamente 20
Hemostasia
35
hombres mujeres que no estn tomando anticonceptivos. Para ello, no es necesario que
todas las pruebas se efecten el mismo da. Es preferible hacerlas en das distintos pues
as se consigue agregar la variabilidad de da a da. La media y la desviacin estndar se
calculan a partir de los resultados.
El resultado de la prueba en segundos se convierte a Porcentaje de Actividad normal por
medio de una curva de referencia.
El ndice de tiempo de Protrombina se calcula dividiendo el TP por el TP medio Del rango
normal del laboratorio, representado por una muestra testigo normal.
Para emplearse en el control de la medicacin anticoagulante, el ndice de Protrombina
debe designarse en los informes de laboratorio de manera estndar como Tasa
Normalizada Internacional de Protrombina INR del ingls International Normalizad Ratio.
SE SUGIERE PUES, REPORTAR DE LA SIGUIENTE MANERA:
TIEMPO DE PROTROMBINA:
Testigo del dia ..X segundos
Plasma Problema .... X segundos
Porcentaje de actividad .%
INR X
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos
NUM
NOMBRE DEL REACTIVO
1
Reactivo de Tromboplastina.*
2
Diluyente**
3
Anticoagulante Citrato de sodio
CONC
3.2 a3.8%
CANTIDAD
200l
10 ml
1gota/ml de sangre
*Reactivo de Tromboplastina: Tromboplastina tisular procedente de cerebro de

conejo, iones de Caldo V estabilizador .
**Diluyente. Estabilizadores y Conservantes. Contiene azida sdica al 0.05% como
conservante.
- Bao Mara con termostato a 37 C
- Cronometro.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
1
Micropipeta con punta desechable
Hemostasia
36

1
1
3
1
Tubos de recogida al vaco con citrato de sodio al 3.2% 3.8%.

Gradilla.
Tubos de ensayo de fondo redondo que quepan en la Gradilla.
Gancho de alambre metlico,
4.PROCEDIMIENTO
4.1Tcnica..
4.1.1 Calentar previamente un volumen suficiente del reactivo de tromboplastina
reconstituido a 37C .Tomar las precauciones necesarias para Impedir la evaporacin y no
mantener a 37C sin tapn durante ms de 60 minutos antes del uso.
4.1.2. Etiquetar un tubo de ensayo para cada muestra ( paciente y control) del anlisis.
4.1.3. Agregar 0.1 ml de muestra al tubo apropiado.
4.1.4 Incubar cada muestra y control a 37C de 3 a 10 min.
4.1.5 Con fuerza, agregar 0.2 ml del reactivo de tromboplastina precalentado, y al mismo
tiempo, iniciar el cronometraje de deteccin de coagulacin.
4.1.6 Anotar el tiempo en segundos requerido para detectar la coagulacin.
4.2 Preparacin de la Muestra y del Reactivo.
4.2.1Muestra: No es necesario que el paciente est en ayunas ni se someta a otra
preparacin especial. Se recomienda plasma con anticoagulante de citrato de sodio al 3.2%
en una proporcin de nueve partes de sangre por una de anticoagulante.
4.2.2Reactivo: El reactivo se prepara de la siguiente manera:
Reconstituir un vial de reactivo de tromboplastina con un vial de diluyente. Los dos
componentes deben ser del mismo lote del kit. Volver a tapar el vial e invertirlo suavemente
varias veces para garantizar una rehidratacin completa. Dejar reposar durante 30 min. A
temperatura ambiente. Invertir suavemente antes de su uso para garantizar
homogeneidad .El reactivo permanece estable durante cuatro das si se mantiene en el vial
original, tapado hermticamente y se almacena a 2-8C, y registrar la fecha de la
reconstitucin en la etiqueta del vial.
ACTIVIDADES:
- Realizar la determinacin del TP problema y del TP del testigo normal y reportar en
segundos.
Hemostasia
37
TIEMPO DE PROTROMBINA:
Testigo del dia ..segundos
Plasma Problema .... segundos
Porcentaje de actividad .%
INR
- Realizar un esquema ( dibujado) de la va de la reaccin de la coagulacin de TP en la

que se agrega reactivo de tromboplastina, que incluye factor tisular, fosfolpido y Ca++.
- Explicar, en base al esquema, un TP prolongado, para deficiencias de qu factores es
ms sensible y para cules es menos sensible.
Hemostasia
38
HEMOSTASIA: PRACTICA NO.11

"CURVA DE CALIBRACIN PARA TIEMPO DE
PROTROMBINA"
1. INTRODUCCIN.
El resultado de la prueba de TP ( en segundos) se convierte a porcentaje de actividad
normal por medio de una curva de calibracin.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGA.
La Curva de Calibracin se prepara mediante el anlisis de diluciones de una mezcla de
plasmas citratados normales o material de referencia.
3.1 Reactivos
NUM
NOMBRE DEL REACTIVO
1
Reactivo de Tromboplastina.*
2
Diluyente**
3
Anticoagulante Citrato de sodio
4
Solucin Salina Fisiolgica
CONC
3.2 a3.8%
CANTIDAD
200l
10 ml
1gota/ml de sangre
10 ml
*Reactivo de Tromboplastina: Tromboplastina tisular procedente de cerebro de

conejo, iones de Caldo V estabilizador .
**Diluyente. Estabilizadores y Conservantes. Contiene azida sdica al 0.05% como
conservante.
- Cronometro.

CANTIDAD
DESCRIPCIN
1
Hemostasia
39

1
1
3
1
1

Gradilla.
Tubos de ensayo de fondo redondo que quepan en la Gradilla.
Pool de 5 6 plasmas citratados de pacientes normales.
4.PROCEDIMIENTO
4.1 Tcnica
4.1.1Preparar las diluciones en solucin salina fisiolgica segn el siguiente esquema.
Porcentaje de actividad
Dilucin
Plasma
Solucin salina
100%
Sin diluir
0.5ml
0.0ml
50%
1:2
0.5ml
0.5ml
25%
1:4
0.5ml
1.5ml
12.5%
1:8
0.5ml
3.5ml
4.1.2 Se toma 0.1 ml de cada una de las diluciones y se procede a determinar el tiempo de
protrombina por duplicado de cada una de ellas.
4.1.3 Con los datos obtenidos, se traza una curva en papel milimtrico, poniendo el tiempo
en segundos en el eje de las ordenadas y la concentracin en porcentaje en el eje de las
abcisas.
4.2 Resultados.
Porcentaje de actividad
100%
50%
25%
12%
Tiempo de protrombina en segundos
ACTIVIDADES:
Realizar las diluciones como se Indica en la tabla y seguir el procedimiento para las
determinaciones de Tp a cada una de ellas.
Transferir los datos en papel milimtrico como se indica arriba trazando la curva
correspondiente.
Efectuar lo mismo en la tabla que se presenta abajo.
Hemostasia
40
Hemostasia
41
Hemostasia

CONTROL DE LA TERAPUTICA ANTICOAGULANTE:
CLCULO DE LA TASA NORMALIZADA
INTERNACIONAL TNI INR
1.INTRODUCCIN.
El control de la medicacin anticoagulante oral se basa en el tiempo de protrombina en una
etapa ( TP ) con tromboplastina. El TP debe expresarse como la relacin del TP del
enfermo con la del plasma normal control. Para controlar de manera confiable la
teraputica anticoagulante, el laboratorista y el mdico deben estar capacitados para
comparar sus resultados con los de otros laboratorios y tambin con los de su propio
laboratorio, empleando diversos lotes de tromboplastina. Para este propsito, la OMS
recomienda que todas las tromboplastinas deban calibrarse comparndolas con un ndice
Internacional de Sensibilidad IIS. La OMS ha establecido un estndar primario
internacional de referencia de cerebro humano, y posteriormente, estndares de referencia
de tromboplastinas humanas, de res y de conejo. Estas preparaciones han sido calibradas
en relacin con el estndar primario original al que se le adjudic un IIS de 1.0 Debido al
riesgo biolgico implicado, el cerebro humano no debe utilizarse como fuente de
tromboplastina.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA.
2.1 Interpretacin.
La TNI o INR de los pacientes que estn bajo tratamiento con anticoagulantes orales, tales
romo la warfarina, debe mantenerse dentro de los lmites teraputicos, ajustando la dosis
ron determinaciones peridicas de TP, habitualmente cada 2 a 3 semanas. Se recomiendan
los siguientes lmites:
Condicin
-Profilaxis preoperatorio de trombosis venosa profunda
-Profilaxis para ciruga de cadera para operar un fmur fracturado
-Tratamiento de trombosis venosas profundas de embolia pulmonar
-Episodios Transitorios de Isquemia
-Trombosis venosas recurrentes profundas de embolia pulmonar
-Infarto del miocardio
-Injertos arteriales
-Prtesis valvulares cardiacas e injertos
Hemostasia
TNI o INR
2.0- 2.5
2.0- 3.0
2.0 -3.0
2.0 -3.0
3.0 -4.5
3.0 -4.5
3.0 -4.5
3.0 -4.5
Si se prolonga la TNI INR, ( > 5.0 },es probable que ocurran hemorragias espontneas.
Cuando el paciente informa alguna hemorragia, la TNI INR debe determinarse de
inmediato. Tambin debe efectuarse un seguimiento cuidadoso de la TNI INR en los
pacientes que se encuentran recibiendo otros medicamentos, particularmente aquellos que
se sabe aumentan 6 disminuyen el efecto de los anticoagulantes, como se muestra en la
tabla de abajo.
Los anticoagulantes orales pueden lesionar al feto. Deben interrumpirse al primer signo de
embarazo y sustituirse por heparina.
A diferencia de la teraputica anticoagulante por va oral, la anticoagulacin con heparina,
sin embargo, no est bien estandarizada.
INCREMENTAN SU EFECTO
CIRCUNSTANCIAS CLNICAS
Trastornos hepticos
Desnutricin
Esteatorrea
Diarrea
Carcinoma en Vsceras
fiebre e Infeccin
Insuficiencia cardaca
Insuficiencia renal
Tirotoxicosis
Radioterapia
Alcoholismo
MEDICAMENTOS
Acido acetilsaliclico
Alopurinol
Ampicilina
Esteroides anablicos
Aspirina
Cloramfenicol
Clofibrato
Medicamentos citotxicos
Neomicina
Fenilbutazona
Sulfonamidas
Antidepresivos tricclicos
DISMINUYEN SU EFECTO
Anticidos
Barbitricos
Colestiramina
Corticosteroides Diurticos
Estrgenos
Anticonceptivos orales
Fenitona
Rifampicina
2.2 Clculos.
El TNI INR ( por sus siglas en ingls Internacional Normalizad Ratio ) se calcula por
medio del ndice Internacional de Sensibilidad IIS y el ndice de Protrombina de la siguiente
manera:
ISI
ndice de TP = Tasa Normalizada Internacional o INR = (ndice de TP)
Hemostasia
Para cada lote de reactivo de tromboplastina, se determina su valor de IIS mediante su

calibracin relativa a un Preparado de Referencia Internacional, y se suministra en el
cuadro de valores de INR del reactivo.
ACTIVIDADES.
Efectuar el clculo del INR a partir de las determinaciones del TP realizadas a las muestras
problema.
Hemostasia

MEDICIN DEL SISTEMA INTRNSECO
TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA
( TTPa )
1. INTRODUCCIN
Esta prueba mide la actividad procoagulante intrnseca del plasma. Esta prueba es sensible
a todos los factores que intervienen en el sistema intrnseco, y no mide la actividad de los
factores VIl y XIII.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGA.
2.1 Principio.
La tromboplastina parcial es un sustituto del factor plaquetario 3 ( fosfolpidos de cerebro de
conejo). La activacin por contacto se estandariza aadiendo un activador como caoln,
celita cido elgico al reactivo.
2.2 Metodologa : Preparacin de las Muestras.
En un tubo limpio, conteniendo una parte de sol. Anticoagulante , aadir 9 partes de sangre
recin obtenida. Mezclar con suavidad. Conservar el tubo en refrigerador en hielo picado.
Antes de realizar la prueba, centrifugar y separar el plasma. Las pruebas deben
complementarse dentro de las 4 horas siguientes a la obtencin de la muestra.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos
NUM
NOMBRE DEL REACTIVO
1
Reactivo de Tromboplastina Parcial*
2
Cloruro de calcio
CONC
0.025 M
CANTIDAD
200l
10 ml
*Fosfolpidos de cerebro de conejo adicionado de partculas de slice micronizada que

actan como activador ( superficie de contacto) y tampn cido.

- Cronometro.
Hemostasia

CANTIDAD
DESCRIPCIN
1
1
1
Gradilla.
3
Tubos de ensayo de 12 X 75
1
3. PROCEDIMIENTO
3.1TCNICA. ( mtodo manual) .
3.1.1. Calentar previamente a 37C un volumen suficiente de solucin de cloruro de Calcio
0.025M.
3.1.2. Identificar un tubo de ensayo para cada muestra a analizar ( pacientes y controles).
Se aconseja hacer las pruebas por duplicado.
3.1.3 Dispensar 0.1 ml de plasma a su tubo correspondiente. Aadir 0.1 ml del reactivo de
tromboplastina parcial a cada tubo.
3.1.4. Incubar a 37C durante 5 minutos exactos ( tiempo de activacin).
3.1.5. Inmediatamente aadir 0.1 ml de solucin de Ca 0.025M. Simultneamente poner el
cronmetro en marcha y determinar la formacin del cogulo.
3.1.6. Anotar el tiempo en segundos, transcurridos hasta la formacin del cogulo.
ACTIVIDADES
- Efectuar la prueba de TTPa en el plasma problema y anotar el resultado en segundos.
- Realizar un esquema ( dibujado) de la va de la reaccin de la coagulacin de TTPa en la
que se agrega reactivo de tromboplastina parcial, sustituto de factor plaquetario 3.
- Explicar, en base al esquema, un TPT prolongado, para deficiencias de qu factores es
ms sensible y para cules es menos sensible.
- Anexar esquemas en donde se conjunten las posibles interpretaciones de los tiempo de
TP y TTPa realizados a un mismo paciente.
Hemostasia

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3.4.4 -Solucin de Oxalato de amonio.

Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada.

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