CRITERIOS DE SELECCIN BACTERIANA: SENSIBILIDAD BACTERIANA

Introduccin:

Por qu usamos antimicrobianos?

Un antibitico ha sido definido como una sustancia qumica producida

por un microorganismo capaz de inhibir el desarrollo de otros
microorganismos. Los antibiticos modificados por manipulaciones
qumicas aun se consideran como tales. Un agente antimicrobiano es
activo contra los microorganismos y puede ser producido en forma
natural por microorganismos o sintticamente en el laboratorio.
Criterios de seleccin de un antimicrobianos?
1)
2)
3)
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5)
6)
7)

Identificacin del agente causal

Susceptibilidad de la bacteria a diferentes frmacos
Localizacin de la infeccin
Va de administracin del frmaco y pauta
Efectos adversos
Alergias del paciente
Costos del Tto

Resistencia Bacteriana & Sensibilidad Bacteriana: =)

La utilizacin teraputica de la penicilina y otros antibiticos a partir de
los aos cuarenta ha sido uno de los logros ms importantes de este
siglo. Desde entonces se han obtenido, comercializado y utilizadouna
gran cantidad de antimicrobianos y sin embargo,as como al comienzo
de la era antibitica se tena la falsa esperanza de que las enfermedades
producidas por microbios desapareceran, pronto se puso de manifiesto
que las bacterias eran capaces dedesarrollar mecanismos de resistencia.
Desde un punto de vista prctico una bacteria essensible a un
antibitico, cuando el antibitico es eficaz frente a ella y podemos
esperar la curacin de la infeccin; por el contrario es resistente cuando
su crecimiento slo puede ser inhibido a concentraciones superiores a
las que el frmaco puede alcanzar en el lugar de la infeccin.
Por lo tanto, se define resistencia bacteriana como aquella capacidad de
una bacteria de multiplicarse en concentraciones superiores la CMI
definida frente a un antimicrobiano en particular. La resisitencia
presentada por un organismo puede ser de origen natural o adquirido.

La resistencia natural es un carcter constante de todas las cepas de

una misma especie bacteriana a un determinado farmaco como por
ejemplo la presencia de resistencia natural de la Klebsiella pneumoniae
a laspenicilinas (ampicilina, amoxicilina).Por otro lado, la resistencia
adqurida es una caracterstica propia de ciertas cepas, dentro de una
especie bacteriana naturalmente sensible, cuyo patrimonio gentico ha
sido modificado por mutacin o adquisicin de genes.
Contrariamente a las resistencias naturales, las resistencias adquiridas
son evolutivas, y su frecuencia depende a menudo de la utilizacin de
los antibiticos. En el caso de numerosas especies bacterianas, y
teniendo en cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas, el
espectro natural de actividad no es ya suficente para guiar la eleccin
de un tratamiento antibitico, siendo necesario aplicar un antibiograma.
Existe una resistencia cruzada que es cuando se debe a un mismo
mecanismo de resistencia. En general, afecta a varios antibiticos
dentro de una misma familia por ejemplo cuando la resistencia a la
oxacilina en los estafilococos se cruza con todas los -lactmicos. As
como una resistencia asociada es cuando afecta a varios antibiticos
de familias dferentes. En general, se debe a la. asociacin de varios
mecanismos de resistencia.
Actualmente el aislamiento de un agente infeccioso a partir de un
paciente no es suficiente para establecer la terapia adecuada, ya que
muchas bacterias presentan resistencia a los agentes antimicrobianos,
sumado a que estos patrones de resistencia cambian en forma
constante. En consecuencia ya que no se puede predecir la
susceptibilidad de las bacterias, por lo que es necesario estudiar la
sensibilidad individual de cada patgeno a estas drogas, pudindose
elegir entonces el agente apropiado (el ms activo contra el patgeno, el
menos txico para el husped, con las caractersticas farmacolgicas
apropiadas y el ms econmico), que proporciona mayores posibilidades
de una evolucin favorable. Es evidente, que la indicacin terapeutica
final va a depender de muchas otras variables, por ejemplo la presencia
de una enfermedad subyacente y condicin clnica del husped, las
propiedades
farmacolgicas
del
agente
antimicrobiano,
la
administracin de otros agentes teraputicos adicionales y otros factores
ejercern una fuerte influencia sobre el desenlace final.
Por lo tanto, sensibilidad bacteriana Se define como la capacidad de los
antibiticos de combatir a los microorganismos patgenos causantes de
las infecciones. Es un parametro cualitativo que se mide a partir de la
determinacin de la Concentracin Inhibidora Mnima (CIM), la que es la

base de la medida de la sensiblidad de una bacteria a un determinado

antibitico. La CIM se define como la menor concentracin de un
determinado numero de diluciones de antibitico que provoca una
inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible. Es el valor
fundamental de referencia que permite establecer una escala de
actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas.
Hay diferentes tcnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de
rutina, y de manera semicuantitativa, las CIM (mtodos manuales y
mtodos automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes
mtodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en
funcin de su sensibilidad frente al antibitico probado. Esta cepa se
denomina Sensible (S), Intermedia (MR) o Resistente (R) al antibitco.
Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es, segn la
NCCLS:
Sensible, si existe una buena probabilidad de xito
teraputico en el caso de un tratamiento a la doss habitual.
Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o
muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico
sea cual fuere el tipo de tratamiento.
MedianamenteResistente, cuando el xito teraputico es
imprevisible. Se puede conseguir efecto teraputico en
ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o
aumento de la posologa).
Antibiograma:
Objetivos: El primer objetivo del antibiograma es el de medir la
sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable
de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in
vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un
tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para
orientar las decisiones teraputicas individuales. El segundo objetivo del
antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas.
Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un
centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede
adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los
espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones

sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los

hospitales.
Cundo? Este se realiza siempre que una toma bacteriolgica de
finalidad diagnstica haya permitido el aislamiento de una bacteria
considerada responsable de la infeccin.
Interpretacin: Ciertos mecanismos de resistencia se expresan
dbilmente in vitro, cuando se inscriben en el DNA bacteriano. Su
expresin en el organismo, en donde las condiciones en cuanto a medios
son diferentes, expondra al riesgo de fracaso teraputico. Para evitar
esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera global a fin de
descubrir, a travs de la comparacin de las respuestas para cada
antibitico, un mecanismo de resistencia incluso dbilmente expresado.
As, gracias a la interpretacin, una cepa que aparece como falsamente
sensible ser categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella
pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las
cefalospornas de 3" generacin. El resultado de Sensible debe ser
corregido a Intermedio o Resistente, ya que la utilizacin de estos
antibiticos correra el riesgo de provocar un fracaso teraputico).
Pruebas de Sensibilidad in Vitro:
A) Mtodo base de dilucin en caldo: En los mtodos de dilucin en
caldo, base de casi todos los mtodos utilizados en la actualidad, se
colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano,
generalmente diluciones 1:2, en tubos con un caldo de cultivo que
sostendr el desarrollo del microorganismo. El caldo ms comnmente
usado para estas pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado con los
cationes magnesio y calcio. Los agentes antimicrobianos se preparan en
"soluciones madre" concentradas y luego se diluyen en caldo hasta
obtener las concentraciones apropiadas.
Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control negativo de
crecimiento. Luego de la incubacin adecuada (usualmente de un da
para el otro) se observa la turbidez de los tubos que indicar desarrollo
bacteriano. El microorganismo crecer en el tubo control y en todos los
otros que no contengan suficiente agente antimicrobiano como para
inhibir su desarrollo. La concentracin de antibitico que presente
ausencia de crecimiento, detectada por falta de turbidez (igualando al
control negativo), se designa como la Concentracin Mnima Inhibitoria
(CMI)

Para medir la capacidad de un antimicrobiano para matar a un

microorganismo (CMB) se debe realizar la prueba de actividad
bactericida, que emplea el mismo sistema de dilucin en caldo que para
medir la sensibilidad.
Al mismo tiempo que la suspensin inicial del microorganismo es
inoculada en los tubos de caldo, se toma una alcuota del tubo de control
de crecimiento, inmediatamente despus de ser sembrado, y se inocula
tambin en una placa de agar para determinar el nmero real de
unidades formadoras de colonias (UFC) del inculo. Este nmero se
obtiene al contar las colonias presentes luego de la incubacin de la
placa de agar hasta el da siguiente y por multiplicacin por el factor de
dilucin. Por ejemplo, usando un asa calibrada de 0,01 ml para sembrar
la placa y contando unas 250 colonias, en 1 ml del tubo original habr
250/0,01.
Una vez determinada la CMI, se siembra una cantidad conocida de
inculo de cada uno de los tubos de caldo que no presentaban turbidez
en placas de agar (la pequea cantidad del agente antimicrobiano que
es llevada junto con el inculo se elimina por dilucin en el agar), y el
nmero de colonias que crece en estos subcultivos, despus de incubar
durante la noche, se compara con el nmero de UFC/ml del cultivo
original. Dado que incluso las drogas bactericidas no siempre esterilizan
totalmente una poblacin bacteriana, la mnima concentracin del
agente antibacteriano que permite sobrevivir a menos de 0,1 % del
inculo original se denomina concentracin bactericida mnima (CBM) o
concentracin letal mnima (CLM).
Las CMI y las CMB de un agente antimicrobiano pueden ser
determinadas, con este mtodo o con alguna variante, para cualquier
bacteria que crezca en un medio liquido.
Pero segn se pudo disponer de mayor nmero de agentes
antimicrobianos para el tratamiento de una gran variedad de bacterias,
se hicieron aparentes las limitaciones del macromtodo de dilucin en
caldo y se desarrollaron variantes de esta tcnica que permitieran, por
ejemplo, probar simultneamente un gerrnen aislado de un paciente
frente a ms de un agente antimicrobiano.
b) Mtodo de difusin de agar: Una vez demostradas las grandes
ventajas de las tcnicas de dilucin en caldo, el paso siguiente,
pensando sobre todo en poder realizar fcilmente pruebas de
sensibilidad de un microorganismo frente a mltiples antibiticos a la

vez, consisti en buscar la manera de aplicar la idea directamente a las

placas de agar.
Las primeras pruebas se realizaron inoculando la superficie de una placa
de agar con el microorganismo en estudio, colocando pequeas cubetas
(de metal o vidrio) sobre el agar y agregando las soluciones de los
diferentes antimicrobianos dentro de dichas cubetas. Los agentes
antimicrobianos difundan en el medio en forma radial alrededor de la
cubeta e inhiban el desarrollo del microorganismo en la zona donde su
concentracin era suficientemente alta. Las reas de inhibicin grandes
indicaban una actividad antimicrobiana ms efectiva.
Este mtodo fue modificado en 1947 por Bondi y col. incorporando el
agente antimicrobiano a discos de papel de filtro. Fue un paso adelante
gigantesco ya que el uso de los discos de papel permita preparar un
gran nmero de pruebas idnticas y almacenarlas para uso futuro.
En 1966, despus de los estudios realizados por Bauer, Kirby, Sherris y
Turk, ensayando diferentes cepas bacterianas, el empleo de los discos
de papel de filtro para las pruebas de sensibilidad fue estandarizado y
correlacionado definitivamente con las CMI correspondientes.
Durante muchos aos, y a pesar de ser una tcnica puramente
cualitativa, el mtodo de difusin por disco (o mtodo Kirby-Bauer), en
funcin sobre todo de su comodidad, economa y fiabilidad, ha sido, y
aun es, uno de los ms utilizados en los laboratorios de todo el mundo.
El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar
y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios
antibiticos. Se incuban las placas durante 16-24 horas a 35C y al cabo
de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas. Se valora el dimetro
de la zona de inhibicin que se forma alrededor de cada disco y se
compara con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS. Con
esta referencia podemos informar si el microorganismo es Sensible,
Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibiticos
ensayados en las placas.
C) Mtodo de E-Test: Es uno de los mtodos ms recientes que se han
presentado en el mercado y se trata de una tcnica cuantitativa en
placa que permite obtener una lectura directa de CMI en g/ml, ya que
se emplean tiras plsticas impregnadas en concentraciones crecientes
de antibitico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.

Una de sus grandes ventajas, dadas sus caractersticas, es que resulta

un mtodo ideal para estudiar cualquier tipo de microorganismo, aerobio
o anaerobio, incluyendo aquellos llamados "fastidiosos" o los que tengan
requerimientos especiales para crecer.
El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se
deposita la tira del antibitico (o antibiticos) a ensayar. Tras la
incubacin de 16-24 horas a 35C se observan las placas y se valora la
zona de inhibicin, de forma elptica, alrededor de cada tira. La CMI se
lee directamente observando el punto ms bajo de la elipse que
presente crecimiento.
D) Metodos automatizados: La mayora de estos novedosos mtodos
utilizan sistemas de microdilucin en medio lquido sobre microplacas
con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en los
diferentes pocillos por medio de un autoanalizador (mediciones por
turbidez o fluorescencia) o, en el caso de los sistemas ms sencillos, por
simple lectura ptica del tcnico a travs de un visor invertido de espejo.
Su manipulacin suele ser fcil y rpida, generalmente automatizada o
semiautomatizada, lo que los convierte en mtodos ideales para
grandes volmenes de trabajo. Una de sus grandes limitaciones es que
slo ofrecen garanta para investigar microorganismos de crecimiento
rpido y que no tengan requerimientos especiales.
APLICACIN EN VETERINARIA:
Conclusin:
En la prctica diaria, una buena parte de los tratamientos efectuados
tanto a nivel hospitalario como ambulatorio, se establecen con arreglo a
unos criterios derivados del estudio in vitro del comportamiento de las
distintas especies bacterianas frente a un determinado grupo de
antibiticos (tratamiento emprico). Ello se debe a que en muchas
ocasiones, no puede disponerse de la bacteria aislada del proceso
infeccioso y la eleccin teraputica, en esos casos, responde a criterios
de empirismo derivados precisamente del conocimiento del
comportamiento de distintos tipos de antibiticos frente a las bacterias
presuntamente responsables de la infeccin.
Por otra parte, cada vez se hace ms necesario contar con un diseo de
un programa de vigilancia de la resistencia a los antimicrobianos, a nivel
general, basado precisamente en el conocimiento que tanto a nivel

hospitalario como ambulatorio se tiene del comportamiento de los

distintos aislamientos de bacterias frente a los antimicrobianos para
poder disear las actuaciones que tiendan a superar la resistencia de las
mismas a los antibiticos.
Se hace necesario tambin contar no solamente con criterios de tipo
cuantitativo o cualitativo (sensible, intermedio, resistente), sino que
adems los resultados han de interpretarse adecuadamente para evitar
llegar a conclusiones errneas que pueden derivarse de atender
exclusivamente al dato que el sistema de realizacin del antibiograma
nos ofrece ya que existen muchas formas de interrelacin bacteriaantibitico que deben conocerse para llegar a ese objetivo final que es la
eleccin de la terapia ms adecuada.
Bibliografia:
http://www.msc.es/fr/biblioPublic/publicaciones/docs/bacterias.pdf

http://books.google.cl/books?
id=239cauKqSt0C&pg=PA187&lpg=PA187&dq=sensibilidad+antimicrobi
ana&source=bl&ots=2Ohzhd5HLe&sig=AxBEPhUCjXHogVcE4AFVtZivd9k
&hl=es419&sa=X&ei=GUFTUYO0G4nq8wS_zYHoCQ&sqi=2&ved=0CFYQ6AEwB
w#v=onepage&q=sensibilidad%20antimicrobiana&f=true
http://seq.es/seq/0214-3429/21/1/ripoll.pdf
http://es.scribd.com/doc/183630/MICROBIOLOGIA-

NOTA: ESTO TENEMOS QUE SABERLO POR ESO LO PONGO:

Mecanismos de la resistencia adquirida
El mecanismo gentico de adquisicin de una resistencia puede ser:
- La mutacin de un gen implicado en el modo de accin de un
antibitico: Este mecanismo afecta preferentemente a ciertos
antibiticos: quinolonas, rifampicina, cido fusdico, fosfomicina,
antituberculosos y a veces cefalosporinas (Ejemplo: La resistencia a las
quinolonas por modificacin del ADN grasa en las enterobacterias).
- La adquisicin de genes de resistencia transferidos a partir de una
cepa perteneciente a una especie idntica o diferente: Ciertos
Antibiticos estn particularmente afectados por este mecanismo: lactmicos, aminoglicsidos, tetraciclinas; cloranfenicol, sulfamidas
(Ejemplo: Resistencia a la ampicilina E. coli y del Proteus mirabilis).
El mecanismo bioqumico de la resistencia puede ser:
- una produccin por la bacteria de enzimas que inactivan el antibitico.
Ejemplo: Penicilinasa de los estafilococos, lactamasa de amplio
espectro (BLAE) de las enterobacterias.
- una modificacin del blanco del antibitico. Ejemplo: Modificacin de
las Protenas de Enlace con la Penicilina (PBP) de los estafilicocos
resistentes a la oxacilina (llamados estafilococos "Meti-R"). Neumococos
resistentes a la penicilina.
- una impermeabilidad de la pared bacteriana por modificacin o por
disminucion cuantitativa de las porinas. Ejemplo: Pseudomonas
aeruginosa resistente a la imipenem.
- un mecanismo de efusin: expulsin de la molcula por un transporte
activo. Ejemplo: Estafilococos resistentes a las tetraciclinas.