28.

En una investigacin de la enzima fumarasa del corazn de cerdo, los parmetros cinticos de la
reaccin directa son Km = 1,7 mM, V mx = 2,5 mM/min y para la reaccin inversa Km = 3.8 mM, V mx = 1.1
mM/min. Estime la constante de equilibrio para la reaccin entre el fumarato y el malato. En un experimento
en una muestra de fumarasa de otra fuente, los parmetros cinticos informados son:
Km = 1.6 mM, V mx = 0.24 mM/min para la reaccin directa
Km = 1.2 mM, V mx = 0.12 mM/min para la reaccin inversa.

R.

Comente la factibilidad de este reporte.

Las constantes de equilibrio calculadas son diferentes, lo que indicara error experimental o
bien condiciones experimentales diferentes (p.e. temperatura; el pH no debera afectar (?)).

29.

La reaccin
CO2 + H2O H+ + HCO3catalizada por la enzima anhidrasa carbnica, se ha estudiado a pH = 7,1 y a una temperatura de 0,5C. Para
una concentracin inicial de enzima de 2,8 x 10 -9 mol/lt, las velocidades iniciales en funcin de la
concentracin de CO2 son:
[CO2] (mmol/lt)
1,25
2,50
5,00
20,00
a.
b.
c.
d.
a.

b.
c.

v (mmol/lt x seg)
0,028
0,048
0,080
0,155

Determine K m y V mx por el mtodo Hanes-Woolf.

Determine k cat.
A [S] << Km determine k obs. de la reaccin.
Determine el nmero de recambio de la anhidrasa carbnica.

a
40,05
Km = 8,99 mM
b
4,4537
Vmax = 0,2245 mM/s
R
0,9998
kcat
= 80190,32 s-1
kobs
= 0,0250 s-1
kcat/Km = 8916,6 mM s-1

30.

Cul es la actividad relativa y el porcentaje de inhibicin causado por un inhibidor competitivo si

[S] = Km y [I] = Ki?
R:
ar = 0,66
% i = 34 %
31.
Un microorganismo contiene una enzima que hidroliza la glucosa 6 sulfato (S). El ensayo se basa en la
velocidad de aparicin de la glucosa. La enzima presenta un Km = 6,7x10-4M y Vmx = 300 nmoles/lt x min.
11

La galactosa 6 sulfato es un inhibidor competitivo. A una concentracin de galactosa 6 sulfato de 10 -5M y

glucosa 6 sulfato de 2 x 10-5M, la velocidad es 1,5 nmoles/lt x min.
Calcular Ki para galactosa 6 sulfato.
R:
Ki = 2,02 x 10-6 M.
32.
Calcular Ki para un inhibidor no competitivo si la [I] = 2x10 -4M da un 75 % de inhibicin para una
reaccin catalizada enzimticamente.
R:
Ki = 6,67 x 10-5 M.
33.
Una enzima presenta un Km de 4,7x10-5 M. Si la Vmax de la preparacin es 22 (moles/l x min), qu
velocidad se observara en la presencia de 2x10-4 M de sustrato y 5x10-4 M de un inhibidor :
a) competitivo, b) no competitivo y c) acompetitivo. El Ki en todos los casos es 3x10-4 M. d) Cul es, en cada
caso, el grado de inhibicin?
34.

Cierta enzima es inhibida de modo competitivo, pero en diferentes grados, por tres inhibidores a igual
concentracin, I1, I2 e I3. Las constantes de disociacin de los inhibidores son Ki1 = 0,1 mM, Ki2 =
0,01 mM y Ki3 = 1,0 mM. Cul inhibidor ocasionara la inhibicin ms acentuada? Y cul la ms
leve ? Fundamente su respuesta.

R:

A menor Ki mayor inhibicin. FUNDAMENTO?

35.

A partir de los siguientes datos de velocidad, determinar la naturaleza de cada inhibidor y el Ki:
_____
[S] mM
0,200
0,250
0,333
0,50
1,00
2,00
2,50
3,33
4,00
5.00

R:

16,67
20,00
24,98
33,33
50,00
66,67
71,40
76,92
80,00
83,33

+I 6 M
vo
6,25
7,69
10,00
14,29
25,00
40,00
45,45
52,63
57,14
62,50

x 30 M
nmoles/min
5,56
6,67
8,33
11,11
16,67
22,22
23,81
25,64
26,67
27,77

inhibidor competitivo,

Ki = 2,98 M

X
Y

inhibidor no competitivo,
inhibidor acompetitivo,

Ki = 1,5 M
Ki = 1,0 mM

Y 4 mM

Z 0.2 mM

10,00
11,11
12,50
14,29
16,67
18,18
18,52
18,87
19,00
19,23

8,89
10,81
13,78
19,05
30,77
44,44
48,78
54,06
57,14
60,60

12

Z
inhibidor lineal mixto,
Ki = 0,2 mM
Vmax = 100 nmoles/min, Km = 1 mM.

Ki' = 0,8 mM

36.
Si el Km de una enzima para su sustrato es 10-5 M y el Ki de la enzima para un inhibidor competitivo es
10-6 M, cul es la concentracin del inhibidor que se requiere para que disminuya la velocidad de la reaccin en
un factor de 10, cuando la concentracin de sustrato es 10-5 M?, 0.01 M?
R:
[S] = 1,8 x 10-5 M, [S] = 9,0 x 10-3 M.
37.
Se estudi el efecto de uno de los productos (piruvato) en la reaccin catalizada por la lactato
deshidrogenasa de msculo de conejo con los siguientes resultados :
NAD+ + lactato NADH + piruvato
A una concentracin constante de NAD+ (1,5 mM)
[lactato] mM
[piruvato] M
1,5
2,0
3,0
0
40
80

1,88
1,05
0,73

.
10,0

velocidad ( moles / min)

2,36
3,10
1,34
1,88
0,94
1,34

.
5,81
4,19
3,27

A una concentracin constante de lactato (15 mM)

[piruvato] M
0
30
60

[NAD+] mM
1,0

0,5

0,7

2,0

3,33
2,65
1,97

velocidad ( moles / min)

3,91
4,50
5,42
3,13
3,60
4,33
2,30
2,66
3,21

Qu tipos de inhibicin se observan en estos casos?

Cul sera el mecanismo cintico de esta reaccin Bi-Bi?
Calcule los parmetros cinticos y termodinmicos correspondientes.

R:

A [NAD+] constante
Km = 5,94 mM,
Vmax = 9,20 moles/min,
A [lactato] constante
Km = 0,53 mM,
Vmax = moles/min,

Ki (pir) = 46,38 M,
Ki (pir) = 85,16 M.
13

[pir] = 0
5,8460
0,1087
0,9999

[pir] = 40M
1,2622
11,23
0,1124
8,90
0,9999

5,85
9,20

[pir] = 80M
1,8862
16,09
0,1172
8,53
0,9999

[I]
ap
K m = Km (1 + )
Ki

Km
ap
[I]
K m = Km +
Ki
5,9367
0,128
0,9996
[pir] = 0
0,077
0,1460
0,9999

Km = 5,9
Ki = 46,38

0,53
6,85

[pir] = 30 M
0,0963
0,53
0,1826
5,48
0,9999
V max
[I]
(1 +
)
Ki

ap
V max =
1
ap
Vmax

0,1415
1,662exp-3
0,9882

[pir] = 60 M
0,1311
0,53
0,2459
4,07
0.9999

1
Vmax

[I]
Vmax Ki

Vmax = 7,06
Ki = 85,16

14

38.
La carbobenzoxi-L-glutamil-L-tirosina es hidrolizada por la pepsinasa (catepsina) del rin de cerdo,
de acuerdo con la siguiente reaccin :
Carbobenzoxi-L-glutamil-L-tirosina + H2O cido carbobenzoxi-L-glutmico + L-tirosina
El curso de la reaccin puede seguirse manomtricamente mediante la adicin de tirosina descarboxilasa que
produce liberacin de CO2 y la formacin de tiramina.
L-tirosina tiramina + CO2
Se ha descubierto que el cido carbobenzoxi-L-glutmico formado en la hidrlisis tiene efecto inhibidor en la
reaccin. A partir de las cifras dadas demostrar este efecto, determinando el tipo de inhibicin, Ki y los
parmetros cinticos de la reaccin.
[S]
moles/ml
4,7
4,7
4,7
6,5
6,5
6,5
10,8
10,8
10,8
30,3
30,3
30,3

[P]
moles/ml
0,0
7,58
30.3
0,0
7,58
30,3
0,0
7,58
30,3
0,0
7,58
30,3

v
molesCO2/ml x min
0,0434
0,0285
0,0144
0,0526
0,0357
0,0192
0,0713
0,0512
0,0295
0,1111
0,0909
0,0619

39.
Se estudi la velocidad de la reaccin catalizada por la piruvato quinasa en funcin de la
concentracin del fosfoenol- piruvato (PEP) con los resultados indicados en la fila A.
PEP ADP

Mg

Piruvato ATP

(Se supone que el ADP est saturante).

Tambin se dan los datos de los efectos de dos inhibidores de est reaccin. En la fila B los datos se refieren al
2-fosfoglicerato 10 mM como inhibidor y en la fila C se refieren a la fenilalanina 10 mM como inhibidor.
Comentar estos datos.
[PEP] (mM)
15

0,25

R:

Inhibidor
A/ nada
B/ 2-fosfoglicerato
C/ fenilalanina

0,30 0,50 1,00

velocidad ( mM/min )
1,10 1,25 1,63 2,05
0,73 0,83 1,15 1,68
0,60 0,68 0,90 1,25

2,00

KiB = 12,86 mM,

alfa = 2,

KiC = 9,44 mM,

Ki'C = 19,2 mM
Vmax = 2,92 mM/min, Km = 0,41 mM.

2,43
2,08
1,50

40.
Se encuentra que los protones actan en un sistema enzimtico como inhibidores no competitivos.
Para una reaccin tipo Uni-Uni :
a.
Escriba el mecanismo general correspondiente.
b.
Haga la deduccin de la ecuacin de velocidad, suponiendo estado estacionario para el cambio
qumico y equilibrio rpido para las reacciones cido-base.
c.
Indique cmo puede obtener los parmetros cinticos V max y Km (independientes del pH) y la
constante de disociacin de la enzima libre y del complejo E-S.

=
Km

V max
[S]
[H+ ]
(1 +
)
KES
[H+ ]
(1 +
)
KE
+ [S]
[H+ ]
(1 +
)
KES

41.
Se encuentra que un in metlico A es un activador esencial de una enzima y que su unin es previa a
la del sustrato (S). Escriba el mecanismo general correspondiente, deduzca la ecuacin de velocidad
suponiendo equilibrio en los pasos anteriores al cambio qumico. Indique el significado operacional y fsico de
los parmetros V max ap y Km ap (cuando [A] = constante) y de V max y Km.

V max [S]
KEA
) + [S]
KESA (1 +
[A]

42.
La hidrlisis de la lactosa por la enzima -galactosidasa sigue aparentemente un mecanismo tipo pingpong. Indique cmo determinar el KmA (A = lactosa) y la velocidad mxima (V max) en un sistema acuoso.

16

lactosa + H2 0 glucosa + galactosa

V max [A] [B]

B
Km [B] + Km [A] + [A][B]
A

43.
Ud. desea determinar si una reaccin enzimtica, en la que participan dos sustratos (A y B) y dos
productos (P y Q), sigue un mecanismo tipo secuencial ordenado o tipo ping-pong.
Indique
A + B P + Q
la forma
de
discriminar entre estos mecanismos. Fundamente su respuesta en base a las ecuaciones y rficos
correspondientes.
Ecuaciones de velocidad :
Mecanismo secuencial ordenado :

v =

Vmax [A] [B]

B
A
B
K A Km + Km [B] + Km [A] + [A][B]

Mecanismo ping-pong :

v =

Vmax [A] [B]

A
B
Km [B] + Km [A] + [A][B]

Puede
Ud.

distinguir en la misma forma entre un mecanismo secuencial ordenado y uno secuencial desordenado?
Fundamente su respuesta.

17

44.

Se hizo un estudio de la reaccin catalizada por creatinaquinasa de msculo de conejo :

creatina + MgATP 2

fosfo - creatina + MgADP-

Se

obtuvieron los siguientes datos :

[creatina](mmol/lt)
6
10
20
40

0,46

0,62

0,377
0,555
0,845
1,180

0,463
0,678
1,005
1,378

[ATP] (mmol/lt)
1,23
velocidad (catal/Kg)
0,660
0.950
1,338
1,718

3,68
0,968
1,308
1,803
2,295

Calcular los parmetros cinticos para esta reaccin. De otros datos parece ser que la reaccin tiene lugar va
un mecanismo de complejo ternario formado de una manera desordenada. Qu puede deducirse de la unin
de los sustratos a la enzima?

v =

Vmax [A] [B]

K A KB + K A [B] + KB [A] + [A][B]

[ATP] = 0.46 mM
Kmap/Vmaxap
12.8129
pendiente
0.5296
0.9999

Km = 24.1941 mM
Vmax = 1.8883 catal/Kg

[ATP] = 0.62 mM
Kmap/Vmaxap
10.1459
pendiente
0.7444
0.9997

Km = 21.3878 mM
Vmax = 2.1080 catal/Kg

Km = 15.3942 mM
Vmax = 2.3783 catal/Kg

Km = 13.1852 mM
Vmax = 3.00388 catal/Kg

[ATP] = 1.2 mM
Kmap/Vmaxap
6.4729
pendiente
0.4205
0.9999
[ATP] = 3.68 mM
Kmap/Vmaxap
4.3389
pendiente
0.3291
0.9997

18

Vmax [B]
[A]
KB + [B]
K A KB + K A [B]
+ [A]
KB + [B]

ap
V max

1
V max
R:

V max [B]
KB + [B]

KB
+
V max [B]

Vmax = 3,36 cat/Kg

KA ' = 10,60 mM
KA = 35,83 mM
KB ' = 0,40 mM
KB = 1,36 mM

1
V max

alfa = 0,30

45.
Se obtuvieron los siguientes datos estudiando la reaccin catalizada por la deshidrogenasa alcohlica
de la levadura de cerveza :
etanol + NAD+

[etanol]
(mmol/l)
10
20
40
200

acetaldehdo + NADH + H

0,05
0,30
0,44
0,57
0,76

[NAD+] (mmol/l)
0,1
velocidad (catal/Kg)
0,51
0,89
0,75
1,32
0,99
1,72
1,31
2,29

0,25

1,0
1,43
2,11
2,76
3,67

Determinar los parmetros cinticos para esta reaccin.

Proponer el mecanismo involucrado.
R:

Km (etanol) = 17,9 mM
Km (NAD+) = 0,25 mM
Vmax
= 5,01 catal/min.
19

46.-

La enzima nuclesido difosfoquinasa cataliza la siguiente reaccin :

GTP dGDP

Mg

GDP dGTP

En un experimento con el enzima aislado de eritrocitos se obtuvieron los siguientes resultados :

22
[dGDP] (mol/l)
20
0,095
25
0,102
40
0,112
100
0,125

[GTP] (mol/l)
30
50
velocidad (catal/Kg)
0,112
0,141
0,120
0,155
0,136
0,180
0,156
0,218

200
0,196
0,223
0,284
0,385

Qu puede decirse de estos datos en cuanto al mecanismo probable para la reaccin enzimtica?
Calcule los parmetros cinticos (KmA, Km B, V max).

20

36.

A partir de los siguientes datos de velocidad, determinar la naturaleza de cada inhibidor y el Ki:
_____
[S] mM
0,200
0,250
0,333
0,50
1,00
2,00
2,50
3,33
4,00
5.00

R:

16,67
20,00
24,98
33,33
50,00
66,67
71,40
76,92
80,00
83,33

+I 6 M
vo
6,25
7,69
10,00
14,29
25,00
40,00
45,45
52,63
57,14
62,50

inhibidor competitivo,

x 30 M
nmoles/min
5,56
6,67
8,33
11,11
16,67
22,22
23,81
25,64
26,67
27,77

1,00 mM
100,00

[x] = 30 M
0,030
1,00 mM
0,030
33,33
0,9999

Z 0.2 mM

10,00
11,11
12,50
14,29
16,67
18,18
18,52
18,87
19,00
19,23

8,89
10,81
13,78
19,05
30,77
44,44
48,78
54,06
57,14
60,60

Ki = 2,98 M

X
inhibidor no competitivo,
Ki = 1,5 M
Y
inhibidor acompetitivo,
Ki = 1,0 mM
Z
inhibidor lineal mixto,
Ki = 0,2 mM
Vmax = 100 nmoles/min, Km = 1 mM.
[I] = 0
0,010
0,010
0.9999

Y 4 mM

[I] = 6M
0,030
0,010
0,9999
[Y] = 4mM
9,97x100,030
0,9999

Ki' = 0,8 mM

3,00 mM
100,00

0,20 mM
19,82

[Z] = 0,2 mM
0,020
2,00 mM
0,0125 80,00
0,9999

21