LOS CIDOS FENLICOS EN CARIPSIDE DE DOS CULTIVOS DE TRIGO, CENTENO Y

TRITICALE QUE MUESTRAN UNA RESISTENCIA DIFERENTE A LA BROTACIN DE LA PRECOSECHA.

Resumen
Este estudio confirma el importante papel de compuestos
fenlicos en la latencia de la cariopsis de cereales.
Investigaciones se llevaron a cabo en dos cultivos de trigo
(Elena y Alba), centeno (Amilo y Dan' kowskie Zote), y
triticale (Ugo y Bogo), con caractersticas ms profundas o de
latencia baja, respectivamente. En estudios de la
germinacin, los cultivos susceptibles a la brotacin (Alba,
Dan' - kowskie Zote y Bogo) muestran mayor porcentajes de
germinacin que los resistentes a la brotacin (Elena, Amilo y
Ugo). El contenido de cido fenlico (es decir, libres, liberado
a partir de steres solubles, y liberado de glicsidos solubles)
en caripside fueron determinados por un Mtodo de HPLC.
Cafeico, p-cumrico, ferlico y sinpico fueron los cidos
fenlicos dominantes detectados. La mayora de los cidos
fenlicos se encuentra en la forma de steres solubles. Para
todas las especies examinadas, los niveles de cidos fenlicos
solubles liberados a partir de steres y el contenido total de
cidos fenlicos en caripsides que muestran una latencia
poco profunda fue mayor que en los que muestran ms
profunda
dormancia. Se muestran pequeas diferencias en los
espectros UV de extractos de compuestos fenlicos a partir
de caripsides.
Se tom nota de la latencia superficial o ms profunda.
Palabras clave: cidos fenlicos, trigo, centeno triticale,
latencia.

Introduccin

Un fenmeno generalizado y econmicamente negativo

asociado a la latencia en los cereales es la brotacin en la precosecha [1, 2]. Puede producirse la germinacin precoz,
especialmente en caripsides elsticos como el centeno,
triticale y trigo, ya a las 2-3 semanas despus de la floracin,
hasta la cosecha [3-5]. La interrupcin de la latencia de
cariopsis de cereales de estimuladores de crecimiento [3, 4,
6] y las bajas temperaturas [3], as como la "latencia"
demostrado de embriones en desarrollo aislados [3, 4, 7], han
indicado que un papel decisivo puede ser jugado por
fitohormonas, tales como cidos giberlico y abscsico [1, 8],
y/o inhibidores, tales como compuestos fenlicos, en la
germinacin. Varios experimentos han demostrado que los
compuestos fenlicos, especialmente cidos fenlicos,
pueden actuar como inhibidores de la germinacin [9-11]. La
presencia de catecol, clorognico, cidos saliclico y sirngico

puede causar letargo en pequeas semillas de Atriplex

triangularis. Sin embargo, estos cidos fenlicos no estaban
presentes en las semillas ms grandes [10]. Una correlacin
positiva entre la duracin de la latencia y el contenido de
compuestos fenlicos se destac por el desarrollo y la
maduracin de cariopses de la cebada [11]. Se encontr la
aplicacin exgena de fenoles para recortar y semillas de
malezas para inhibir la germinacin de semillas [10, 12] y
embriones [11].
Se encontr disminucin en los niveles de cidos fenlicos
libres, esterificados y glicosilada para el centeno, triticale,
cebada y avena durante varios meses de almacenamiento en
estado seco [13]. Los cidos ferlico y sinpico a una
concentracin de 1 mM retrasaron la germinacin de
embriones de cereales [14]. El objetivo de este estudio fue
comparar la composicin de los cidos fenlicos, incluyendo
formas libres, esterificados y glicosilada, en dos variedades
diferentes (con ms profunda o superficial latencia) de tres
especies de cereales (trigo, centeno y triticale).

Materiales y Mtodos

El estudio se realiz en caripsides de trigo con la latencia

ms profunda y superficial (cv. Elena y cv. Alba), centeno (cv.
Amilo y cv. Dan' kowskie Zote) y triticale (cv. Ugo y cv. Bogo)
cultivadas en un campo experimental de la Universidad de
Agricultura y Tecnologa en Olsztyn, Polonia.
Para la prueba de germinacin, caripsides frescas se lavaron
con agua, seguido por 70% (v/v) de metanol. Se realizaron
entonces estudios de germinacin mediante la incubacin de
las caripsides en papel de filtro humedecido en placas de
petri (12015 mm) a 21-22 C durante 14 das. Todas las
operaciones se llevaron a cabo en una campana laminar.
Hubo seis rplicas por fecha de muestra.
Inmediatamente despus de la cosecha de las caripsides, los
compuestos fenlicos se extrajeron dos veces con 80% (v/v)
de metanol durante 15 min a 80 C [15]. Despus de evaporar
el disolvente orgnico en un evaporador rotatorio a 45 C, la
solucin acuosa restante se liofiliz. La concentracin de
compuestos fenlicos en el extracto se determin usando el
reactivo de Folin-Ciocalteu [16] y (+) catequina fue utilizada
como un estndar. Los espectros UV de los extractos se
registraron con un espectrofotmetro de matriz de diodos
Beckman DU 7500.
Los cidos fenlicos (es decir, liberados de los steres
solubles y de glucsidos solubles) se aislaron a partir del
extracto de acuerdo con un mtodo descrito anteriormente

[17, 18]. Una suspensin acuosa del extracto (800 mg en 20

ml de agua) se ajust a pH 2 (HCl 6M), y cidos fenlicos libres
se extrajeron 5 veces en 20 ml de ter de dietilo usando un
embudo de separacin. El extracto de ter se evapor a
secado con vaco a temperatura ambiente. La solucin acuosa
se neutraliz y despus se liofiliz. El residuo se disolvi en 20
ml de NaOH 2 M y se hidroliza durante 4 h bajo una atmsfera
de nitrgeno a temperatura ambiente. Despus de la
acidificacin a pH 2 usando HCl 6M, cidos fenlicos liberados
de steres solubles se extrajeron del hidrolizado de 5 veces
en 30 ml de ter de dietilo usando un embudo de separacin.
Para la solucin de agua, se aadieron 15 ml de HCl 6M, y la
solucin obtenida se coloc en una atmsfera de nitrgeno y
se hidroliza durante 1 h en un bao de agua a 100 C. Los
cidos fenlicos liberados de glucsidos solubles se separan
del hidrolizado 5 veces en 45 ml de ter dietlico. Despus de
la evaporacin de ter, el residuo seco se disolvi en 10 ml de
metanol y se filtr a travs de un filtro de nylon de 0,45 mm.
La muestra obtenida se inyect en una columna de HPLC. Se
emple un sistema Shimadzu HPLC (bomba LC-6A, SPD-6AV
UV-VIS detector espectrofotomtrico, controlador del
sistema SCL-6B y CR 501 Chromatopac). Las condiciones de
las separaciones fueron los siguientes: pre-envasados
LiChrospher 100 RP-18 columna (5 m, 4 mm 250; Merck);
fase mvil, acetonitrilo- cido actico - agua (88:10:2, v/v/v)
[19]; velocidad de flujo de 1 ml/min; volumen de inyeccin,
20 l; el detector se fij en 300 nm.
Discusin y Resultados
El porcentaje de germinacin de las caripsides de dos
cultivares de trigo, centeno y triticale se muestra en la Figura
1. Durante todo el perodo de la prueba, los cultivares
susceptibles a la brotacin (Alba, Dan' kowskie Zote y Bogo)
muestran un porcentaje de germinacin ms alto que el de
brotacin resistente (Elena, Amilo y Ugo).
Adems, el porcentaje de germinacin tambin fue diferente
para las especies seleccionadas; por ejemplo, la germinacin
de las caripsides centeno fue menor que el del trigo y
triticale.
Los cidos fenlicos libres que se encuentran en las
caripsides investigadas fueron: cafeico, p-cumrico, ferlico
y cidos sinpico. Masoveros, se detectaron trazas de cido
sirngico libre (Tabla 1). Las concentraciones de cidos
fenlicos libres en caripsides de trigo y de centeno con
profundidad o poco profundo letargo eran prcticamente el
mismo: 3,44 g/g (dm) en trigo cv. Elena, y 3,52 mg/g (d.m)
en trigo cv. Alba; 15.01 mg / g (d.m) en el cv centeno. Amilo,
y 14,62 g/g (d.m) en el cv centeno. Dan' kowskie Zote. La
mayor concentracin de cidos fenlicos libres en caripsides
de triticale cv. Ugo con latencia ms profunda en
comparacin con la de triticale cv. Bogo con latencia
superficial [5,71 y 8,38 mg / g (dm), respectivamente] era
debido a un alto nivel de cido cafeico en la antigua [3,42
g/g (dm)].

Fig 1. La germinacin de trigo, centeno y triticale caripside

Toda la caripside con latencia ms profunda posea una alta
concentracin de cidos fenlicos en la forma de sus steres
solubles (Tabla 2). Las diferencias ms notables eran para
caripside centeno: 151,92 g/g (dm) para Amilo con latencia
ms profunda, y 89.91 g/g (dm) para Dan' kowskie Zote con
latencia superficial. Para los tres cereales, las
concentraciones de los cidos ferlico y sinpico, y en el caso
del trigo y el centeno tambin p-cumrico, fueron mayores
en caripsides con latencia ms profunda que en caripsides
con latencia superficial. Por ejemplo, la concentracin de los
steres solubles de cido ferlico para trigo cv.
Elena con la latencia ms profunda fue casi dos veces tan alta
como la de trigo cv. Alba con latencia superficial; la
concentracin de cido sinpico en triticale cv. Ugo con
latencia ms profunda fue 43,06 g/g (dm), mientras que en
Bogo con latencia superficial que era slo 27,36 g/g (dm).

Tabla 1 Las concentraciones de cidos fenlicos libres

[g/g (dm)] en cariopsis de cereales.

Tabla 2 Las concentraciones de cidos fenlicos solubles

liberados a partir de steres [g/g(DM)] en cariopsis de
cereales

Tabla 3 concentraciones de cidos fenlicos liberados de

glicsidos solubles [mg / g (dm)] en cariopsis de cereales

Un alto nivel de cidos fenlicos liberada de glucsidos

solubles en correlacin con la latencia de caripsides slo
para el trigo (Tabla 3). La concentracin en el trigo cv. Elena
con la latencia ms profunda fue 9,83 g/g (dm), mientras
que para Alba con latencia superficial que era slo 3,68 g/g
(dm). Cariopsis de cv centeno. Dan' kowskie Zote y cv. Amilo
mostr casi las mismas cantidades de cidos fenlicos en la
forma de glucsidos solubles: 16,87 y 17,45 g/g (DM),
respectivamente.
La suma de los cidos fenlicos que estaban libres, liberados
a partir de steres solubles, y liberado de glucsidos solubles
fue mayor para cereales con la latencia ms profunda que la
de latencia con poca profundidad (Fig 3). Para el trigo y el
centeno estas diferencias fueron mayores que los de triticale.
Sin embargo, las diferencias en las concentraciones de
fenoles totales fueron menores para los cultivos de cereales
con diferentes niveles de latencia (Fig. 4). Caripsides de trigo
cv. Elena con latencia ms profunda mostr incluso una
concentracin ligeramente inferior de fenoles totales que las
de Alba con latencia superficial.
Una comparacin de los resultados en las Figs. 3 y 4
mostraron que para caripside de ambos cultivos de
centeno, triticale y trigo, los cidos fenlicos constituan
aproximadamente el 10% de la fraccin total fenlico.
Nuestra investigacin indica que los cidos fenlicos en
forma de steres probablemente determinan el perodo de
reposo vegetativo de trigo, centeno y triticale cariopsis.
Weidner et al. [13] confirm el papel de los cidos fenlicos
en la latencia de la cebada, avena, centeno y triticale, como
las concentraciones de cidos fenlicos libres en caripsides
latentes (en todas las especies examinadas) eran mucho ms
altos que los de los nondormant, incluso cuando se analiza
despus 6 meses de almacenamiento en estado seco.
Durante este tiempo steres de cidos fenlicos podran
haber sido hidrolizado enzimticamente para producir cidos
libres.
Los espectros UV de los compuestos fenlicos extrados de
cariopsis de cereales se presentan en la fig. 2. Estos espectros
se caracterizan por mximos o los hombros que van desde
313 hasta 324 nm (es decir, caracterstica de los cidos
fenlicos [20, 21]) y por mximos a wavelenths ms cortos
atribuidas a otros compuestos fenlicos.
Se observaron ligeras diferencias en los espectros UV de los
extractos de las caripsides con diferentes niveles de
latencia. Para trigo cv. Elena con latencia ms profunda se
observ el mximo a 324 nm, mientras que para el trigo cv.
Alba con latencia superficial se observ slo un hombro en
este avelength.
El cambio en los mximos de los espectros UV entre cultivares
con diferentes niveles de latencia fue de 2 y 3 nm para el
centeno y triticale, respectivamente.

Fig 2. Espectros UV de extractos de caripside de trigo,

centeno y triticale

Fig. 3 cidos fenlicos totales (libres, liberados de steres

solubles y glicsidos) en cariopsis de cereales. S2 Los
cultivares con latencia ms profunda (Amilo, Elena, Ugo),
cultivares S1 con latencia poco profunda (Dan' kowskie Zote,
Alba, Bogo)

Fig 4. Compuestos fenlicos totales en cariopsis de cereales.

S2 cultivares con latencia ms profunda (Amilo, Elena, Ugo),
cultivares S1 con dormancia superficial (Dakowskie Zote,
Alba, Bogo)
Al comparar nuestros resultados con los de la literatura es
difcil debido a las concentraciones de cidos fenlicos en los
granos de cereales que no se ha informado adecuadamente.
Algunas variaciones en los resultados en la literatura podran
haber sido causados por los diferentes mtodos utilizados
para el anlisis [22]. P-hidroxibenzoico, protocatquico,
sirngico, p-cumrico, ferlico, gentsico, cidos cafeico y
isoferulico estuvieron presentes en el trigo, siendo el cido
ferlico el ms abundante [23, 24]. Pussayanawin y Wenzel
[25] informaron en concetrations de 500 g/g y 41 g/g en el
trigo y su harina, respectivamente. Sosulski et al. [23] inform
de cido ferlico en una concentracin de 64 g/g en la
harina de trigo recin molido, mientras que Rybka et al. [24]

encontr tanto como 199 g/g en el mismo material. Rybka

et al. [24] inform de que el cido fenlico dominante en
grano de centeno fue el cido ferlico, aunque isoferulic, pcumrico, sirngico, tambin se detectaron p-hidroxibenzoico
y cidos cafeico en cantidades menores por TLC.
Maga y Lorenz [26] encontraron p-hidroxibenzoico, saliclico,
gentsico, protocatquico, vanlico, sirngico, p-cumrico,
cidos ocoumaric, ferlico y isoferulic en todo el triticale
y en el salvado, cortos, y la harina. Nuestro conocimiento
sobre la composicin de la fraccin de flavonoides en los
cereales es fragmentaria. Dos di-C-glycosylflavones se
aislaron a partir del salvado de varias variedades de trigo [27].
En el salvado de trigo, la concentracin total de flavonoides
vari desde 149 hasta 406 g/g [28]. Cianidina 3-glucsido y
peonidina 3-glucsido se encontraron como los principales
antocianinas de centeno [29] y el trigo [30].