UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE, FACULTAD DE CIENCIAS APLICADAS INGENIERA EN BIOTECNOLOGA, SANGOLQU - ECUADOR.

Establecimiento de callognesis a partir de raz de zanahoria

(Daucus carota)
Hernndez J.* y Paredes P.**
*Estudiante de la carrera de Ingeniera en Biotecnologa. Universidad de las Fuerzas Armadas.
jlhernandez@espe.edu.ec
**Estudiante de la carrera de Ingeniera en Biotecnologa. Universidad de las Fuerzas Armadas.
paparedes@espe.edu.ec

Resumen - Un callo es una masa de clulas desorganizadas que surgen del crecimiento descoordinado y
desorganizado de pequeos rganos de la planta, piezas de tejido de la planta o clulas previamente
cultivadas. La produccin de callo requiere de un explante inicial, el que puede tener una alta diferenciacin
de sus tejidos, como un trozo de raz, tallo u hoja, o bien la utilizacin de tejidos menos diferenciados. En el
presente trabajo se utilizan explantes de zanahoria para evaluar la formacin de callos y la contaminacin. Se
siguieron dos protocolos de preparacin de la muestras, uno en el que la zanahorias fue cortada en discos y
otro en el que la zanahoria no fue alterada antes de la desinfeccin. Debido al dao que sufrieron los
explantes se buscan soluciones alternativas para futuros ensayos ya que la oxidacin de los explantes puede
ser reducida, por medio de la disminucin del proceso de escisin y esterilizacin, evitando as el prolongado
contacto con los agentes qumicos, en nuestro caso la solucin de cloro.
Palabras Clave- Callognesis, zanahoria, cultivo, contaminacin, desinfeccin, explante
Abstract- A callus is a disorganized mass of cells arising from uncoordinated and disorganized growth of
small organs of the plant, parts of plant tissue or cells previously cultured. The production of callus requires
an initial explant, which can have a high differentiation of their tissues, like a piece of root, stem or leaf, or
the use of less differentiated tissues. In this paper carrot explants are used to evaluate callus formation and
pollution. Two protocols of preparation of samples, one in which the carrots was cut into discs and another in
which the carrot was not altered before disinfection is followed. Due to damage suffered by explants
alternative solutions are sought for further testing since oxidation of explants can be reduced, by decreasing
the cleavage and sterilization process, thus avoiding prolonged contact with chemical agents, in our case
bleach solution.
Key words- Callogenesis carrot culture contamination, disinfection, explant.

INTRODUCCIN
Gorge et al. (2008) definen un cultivo de callos o
bien cultivo de tejidos como el crecimiento y
mantenimiento de masas de clulas enormemente
desorganizadas que surgen del crecimiento
descoordinado y desorganizado de pequeos
rganos de la planta, piezas de tejido de la planta o
clulas previamente cultivadas.
La produccin de callo requiere de un explante

inicial, el que puede tener una alta diferenciacin de

sus tejidos, como un trozo de raz, tallo u hoja, o
bien la utilizacin de tejidos menos diferenciados
como hipoctilos y cotiledones de plntulas recin
germinadas e incluso embriones zigticos maduros e
inmaduros (Correia y Canhoto, 2010). Tambin,
aunque con menor frecuencia, se han utilizado
tejidos florales como estambres, ptalos y ovarios
(Stefanello et al., 2005). En cualquier caso, la
induccin de callo representa un proceso de
desdiferenciacin y divisin celular intensiva, el

ESTABLECIMIENTO DE CALLOGNESIS A PARTIR DE RAZ DE ZANAHORIA (DAUCUS CAROTA)

cual depende principalmente del explante, genotipo,

medio de cultivo, tipo de regulador de crecimiento
como tambin su concentracin y combinacin
(Feeney et al. 2007, Rashmi y Trivedi, 2014).

manipulacin, un grupo de zanahorias fueron cortadas

en forma de discos antes de la desinfeccin y otro
grupo no fue cortado; se lavaron cuidadosamente y se
sometieron a un protocolo de desinfeccin. Primero
se enjuagaron en una solucin a 1% (p/v)de detergente
durante 15 min., A continuacin se lavaron las
muestras dos veces con agua destilada y una con agua
esteril. Posteriormente se sumergieron en una solucin
de cloro al 5% durante 15 min. Finalmente se
trasladaron las muestras a la sala de siembra

Desde el descubrimiento de la embriognesis

somtica por Stewart y Reinert la zanahoria ha sido
empleada como sistema modelo para investigar la
gran cantidad de aspectos bioqumicos, fisiolgicos y
genticos del cultivo de clulas. (McDonald et al.,
1995).
Para la induccin de callos de zanahorias se
utilizan reguladores de crecimiento como el cido 2,4
diclorofenoxiactico (2,4D) al igual que la mayora de
los reguladores de crecimiento se utilizan a muy bajas
concentraciones ya que as son capaces de modificar
el crecimiento y morfognesis de la planta.
A nivel celular el cido 2,4 diclorofenoxiactico
(2,4 -D) y la 6-benzilamino-purina (BAP) son
utilizados como reguladores de crecimiento con
frecuencia para el cultivo in vitro ya que este es capaz
de imitar a las hormonas naturales del crecimiento de
las plantas causando un crecimiento celular anormal y
acelerado (Bejarano et al., 2007); en general el 2,4-D
afecta el metabolismo de la planta, sntesis de cidos
nuclicos y protenas que alteran la actividad
enzimtica, respiracin y divisin celular, de ah que
su uso comercial ms comn es como herbicida ya
que ocasiona un crecimiento celular anormal
acelerado causando bloqueos y destruccin de los
sistemas de transporte dentro de la planta.
El objetivo de este trabajo fue desinfectar y
establecer callognesis a partir de la raz de zanahoria
con el propsito de evaluar la formacin de callos y si
existe o no contaminacin como la causada por
hongos, virus y bacterias.

Medio de cultivo: El medio utilizado fue Murashige y

Skoog enriquecido con: 30g/L de azucar, 6g de agar,
0.5 mgL-1 de BAP y 3mgL-1 de 2,4-D.
Siembra del material: Se realizaron tres lavados con
agua estril dentro de la cmara de siembra, se tom
una muestra de zanahoria y se le realizaron finos
cortes transversales sobre una servilleta estril, luego
se elimin todo el tejido quemado por el cloro y se
cortaron las rebanadas por la mitad. Se colocaron 4
explantes por frasco de medio y antes de sellar el
frasco se flame la boca. Se sellaron los frascos y se
llevaron para incubacin en oscuridad.
RESULTADOS
Se realizaron tomaron datos de los explantes durante
tres semanas posteriores a la siembra, se busc
evidenciar la presencia de contaminacin as como el
porcentaje de desdiferenciacin para la formacin de
callo, este porcentaje se mantuvo en cero durante las
cuatro semanas (Tabla 1.); se puede apreciar que los
explantes que fueron cortados en discos tenan un
color blanco desde el momento en que fueron
sembrados hasta la cuarta semana, sin evidenciarse
cambios en su estructura (Fig 1, 2, 13). El color
blanquesino indica que los explantes han muerto, no
existe contaminacin bacteriana o fngica.

MATERIALES Y MTODOS
Preparacin de la sala de siembra: Se desinfect el
piso con Kalipto, seguidamente se limpiaron las
cmaras de siembra con papel toalla estril y alcohol
al 90%. Se introdujo en la cmara todo el material
para luego encender las lmparas UV de las cabinas
de flujo durante 20 min.
Preparacin de la muestra: Se adquirieron varias
zanahorias de tamao pequeo para la fcil

Figuras 1 y 2: Explantes en primera semana,

Tabla 1: Porcentaje de contaminacin y
desdiferenciacin para explantes cortados en forma de
discos.
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discos fue sembrado a la par y se obtuvieron

resultados positivos para contaminacin sin embargo
la desdiferenciacin fue nula (Tabla 2).
Tabla 2: Porcentaje de contaminacin y
desdiferenciacin para explantes cortados en cmara.

Controles en las semanas posteriores no arrojaron

resultados favorables para desdiferenciacin o
contaminacin, el color de los explantes segua siendo
blanco (Fig 3 y 4)
Los explantes que fueron desinfectados y luego
cortados en cmara posean un color naranja claro,
con una ligera capa blanquesina (Fig 7 y 8)

Figuras 3 y 4: Explantes a la segunda semana

Para la ltima semana los explantes no mostraron
signos de desdiferenciacin o contaminacin, se
asumi que los explantes muerieron (Fig 5 y 6).
Figuras 7 y 8: Explantes en primera semana

Figuras 5 y 6: Explantes en tercera semana

Para la segunda semana la capa blanquesina se volvi

un poco ms gruesa e incluso los explantes perdieron
su coloracin inicial, se asumi que era debido a
contaminacin, con respecto a la desdiferenciaicin
no se observaron resultados favorables (Fig 9 y 10)

Debido a la muerte del explante los porcentajes finales

de desdiferenciacin y callognesis fueron de cero, no
se obtuvieron resultados favorables.
El otro grupo de explantes que no fue cortado en
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ESTABLECIMIENTO DE CALLOGNESIS A PARTIR DE RAZ DE ZANAHORIA (DAUCUS CAROTA)

buscan soluciones alternativas para futuros ensayos,

asi Yadav explica que la oxidacin de los explantes
puede ser reducida, por medio de la disminucin del
proceso de escisin y esterilizacin, evitando as el
prolongado contacto con los agentes qumicos, en
nuestro caso la solucin de cloro.
Figuras 9 y 10: Explantes en segunda semana.
Para la tercera semana los explantes mantuvieron la
coloracin blanquesina lo que nos indica
contaminacin bacteriana, con respecto a callognesis
los resultados fueron nulos (Figuras 11 y 12 ).

Finalmente en nuestro caso particular la prolongada

exposicin de los explantes a la solucin de cloro,
produjeron danos en los tejidos, algo que Wijesekara
indica en sus ensayos donde el agente desinfectante es
el causante del dao en los explantes, se debe realizar
el cambio del mismo para evitar asila muerte de los
mismos. As este autor indica que en su estudio la
utilizacin de NaOCl a diferentes concentraciones y
tiempos, provoco el oscurecimiento de los tejidos,
provocando as su muerte.
CONCLUSIONES

Figuras 11 y 12: Explantes en tercera semana

En cuanto a porcentajes obtenidos, de contaminacin,
diferenciacin y formacin de callo, se puede apreciar
que hubo contaminacin en todos los explantes, y
debido a la muerte del explante la callognesis fue
negativa (Fig. 13)

La formacin de callo en zanahoria (Daucus

Carota) fue negativo en todos los explantes, esto
debido al dao ocasionado en los tejidos de la
muestra, provocados por una permanencia excesiva
en la solucin de cloro, a lo largo del proceso de
desinfeccin.
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Figura 13: Resultados en porcentajes

DISCUCIN
Como indican George, Uddin y Titov muchos
radicales libres son liberados a lo largo del proceso de
desinfeccin del explante, el exceso de estos lleva al
dao de tejidos, incluso a la muerte. Siendo as la
presencia de estos radicales los posibles causantes del
dao en los tejidos de los explantes obtenidos en esta
prctica.
Debido al dao que sufrieron los explantes se

Feeney M, Bhagwat B., Mitchell J., Lane W,.

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