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EL MICROSCOPIO.

El microscopio fue inventado en el ao 1610 por Zacharias Janssen aunque tambin hay quien
afirma
que
fue
Galileo
Galilei
el
verdadero
autor.
Este primer instrumento era unmicroscopio ptico en el que gracias a la refraccin poda
obtener
un
gran
aumento
gracias
a
dos
lentes.
A mediados del siglo XVI, Anton van Leeuwenhoek ser quien describa protozoos, glbulos
rojos, bacterias y espermatozoides gracias a microscopios que l mismo construa tallando
pequeas esferas de cristal que no superaban el milmetro de dimetro.
Gracias a este invento Robert Hooke logr observar en el ao 1665 un pequeo trozo de
corcho y observ que este era poroso y que cada cavidad formaba una especie de pequeas
celdas. Esta fue la primera vez que se observaron clulas muertas. Tiempo ms tarde Marcello
Malpighi ser quien estudie por primera vez tejidos vivos en microscopio.
Ya en el siglo XIX, comienzan a fabricarse microscopios acromticos que mejorarn
notablemente
las
imgenes
obtenidas.
En el ao 1931, Max Knoll y Ernst Ruska desarrollaron el primer microscopio electrnico de
transmisin con el que se consigue aumentos de 100.000X. Recin en el ao 1942 se crea
el microscopio electrnico de barrido.
Breve historia del Microscopio

1608

Z. Jansen construye un microscopio con dos lentes convergentes.

1611

Kepler sugiere la manera de fabricar un microscopio compuesto.

1665
Hooke utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes de corcho y describe
los pequeos poros en forma de caja a los que l llam "clulas". Publica su libro Micrographia
1674
Leeuwenhoek informa su descubrimiento de protozoarios. Observar bacterias por
primera vez 9 aos despus.
1683

Leeuwenhoek observa bacterias por primera vez.

1828

W. Nicol desarrolla la microscopa con luz polarizada.

1833
Brown publica sus observaciones microscpicas de orqudeas y describe claramente
el ncleo de la clula.
1849

J. Quekett publica un tratado prctico sobre el uso del microscopio.

1838
Schleiden y Schwann proponen la teora de la clula y declaran que la clula
nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales.
1857

Kolliker describe las mitocondrias en clulas del msculo.

1876
Abb analiza los efectos de la difraccin en la formacin de la imagen en el
microscopio y muestra cmo perfeccionar el diseo del microscopio.
1879
Flemming describe con gran claridad el comportamiento de los cromosomas
durante la mitosis en clulas animales.

1881
Retzius describe gran nmero de tejidos animales con un detalle que no ha sido
superado por ningn otro microscopista de luz. En las siguientes dos dcadas l, Cajal y otros
histlogos desarrollan nuevos mtodos de tincin y ponen los fundamentos de la anatoma
microscpica.
1882
Koch usa tinte de anilina para teir microorganismos e identifica las bacterias que
causan la tuberculosis y el clera. En las siguientes dos dcadas, otros bacterilogos, como
Klebs y Pasteur identificarn a los agentes causativos de muchas otras enfermedades
examinando preparaciones teidas bajo el microscopio.
1886
Zeiss fabrica una serie de lentes, diseo de Abb que permiten al microscopista
resolver estructuras en los lmites tericos de la luz visible.
1898
Golgi ve y describe por primera vez el aparato de Golgi tiendo clulas con nitrato
de plata.
1908

Khler y Siedentopf desarrollan el microscopio de fluorescencia.

1924
Lacassagne y colaboradores desarrollan el primer mtodo autoradiogrfico para
localizar polonium radiactivo en espcimenes biolgicos.
1930

Lebedeff disea y construye el primer microscopio de interferencia.

1932

Zernike inventa el microscopio de contraste de fases.

1937
Ernst Ruska y Max Knoll, fsicos alemanes, construyen el primer microscopio
electrnico.
1941
Coombs usa anticuerpos acoplados a tintes fluorescentes para estudiar antgenos
celulares.
1952
Nomarski inventa y patenta el sistema de contraste de interferencia diferencial para
el microscopio de luz.
1981
1.

Aparece el microscopio de efecto tnel (MET).


Estructura y manejo del microscopio ptico

Las partes esenciales que componen un microscopio ptico (ver figura adjunta) son:
Parte mecnica
Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en l se encuentra la fuente de
iluminacin.
Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se encuentra
un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema de pinza o similar,
para sujetar el portaobjetos con la preparacin, y unas escalas que ayudan a conocer qu parte
de la muestra se est observando. La platina presenta 2 tornillos, generalmente situados en la
parte inferior de la misma, que permiten desplazar la preparacin sobre la platina, en sentido
longitudinal y transversal respectivamente.

Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de
oculares y objetivos.
-

Revlver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.

Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomat el microscopio para
trasladarlo de lugar.
Tornillo macromtrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque de la
muestra al utilizrse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina verticalmente de forma
perceptible.
Tornillo micromtrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque precidso de la muestra,
una vez que se ha realizado el enfoque con el macromtrico. Tambin desplaza verticalmente
la platina, pero de forma prcticamente imperceptible. Es el nico tornillo de enfoque que se
utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

Parte ptica
Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador, situados en la
parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo
aumento se resea en la parte superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios
que se utilizarn en esta prctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los
microscopios pueden se mono o binoculares.
Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revlver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados
de forma creciente segn sus aumentos, en el sentido de las agujas el reloj). Un anillo
coloreado es distintivo de los aumentos de cada objetivo, que tambin van reseados en el
lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la preparacin al aire, y se deben de
utilizar con un aceite de inmersin (normalmente van marcados con un anillo rojo).
Estos objetivos de inmersin no se utilizarn normalmente en estas prcticas.
Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los concentra
sobre la preparacin, de manera que proporciona mayor o menos contraste. Se regula en
altura mediante un tornillo (letra J de la figura).
Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminacin est
constituido por una lmpara halgena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del microscopio.
La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que enva los rayos luminosos hacia la
platina.
Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo o cerrndolo
permite graduar la intensidad de la luz.
Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es necesario
para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en el pie del
microscopio. Adems, el transformador dispone de un potencimetro para regular la
intensidad de la luz.

1.1. Montaje y enfoque de una preparacin microscpica

Antes de observar la preparacin al microscopio, esta debe de ser montada sobre vidrio. Para
ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos (porta), que, como su nombre
indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos (cubre) que siempre ha de
colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la muestra en el porta, se debe aadir una gota
de agua, o de la solucin acuosa pertinente, antes de colocar el cubre, para evitar interfases
agua-aire, que provocan zonas ciegas.
Para enfocar la preparacin se ha de seguir de forma minuciosa el protocolo descrito debajo
de la figura.
Consejos prcticos
En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red y desenchufe debe
hacerse sobre el transformador, y nunca debe desenchufarse el microscopio del
transformador.
Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se est utilizando, ya
que la vida media de la bombilla es corta.
-

Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento.

Anotar siempre el nmero de aumentos con el que se observa la preparacin. Para


calcularlo basta multiplicar el nmero de aumentos del objetivo por el de los oculares. Hacer
esquemas y dibujos de lo observado con cada aumento.
Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de inmersin, ya que se
requiere un aceite especial sin el que, adems de no enfocar bien, existe una gran probabilidad
de daar la lente al rozar con el cubreobjetos.
Una vez enfocada, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la
preparacin. EL MICROSCOPIO, ADEMS DE UNA GRAN HERRAMIENTA EN BIOLOGA, ES UN
GRAN JUGUETE PARA DISFRUTAR DE L DESCUBRIENDO EL APASIONANTE MUNDO DE LO
PEQUEO, para ello, hay que rastrear todo este mundo.
TIPOS, CLASIFICACION Y PARTES BASICAS
MICROSCOPIO

OPTICO

El microscopio ptico es el primero que se invent Se emplea para aumentar o ampliar las
imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista.. Se trata de un instrumento ptico
que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y
que funciona por refraccin. El microscopio ptico puede ser monocular, y consta de un solo
tubo. La observacin en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos
tubos. La observacin se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor
percepcin de la imagen, ms cmoda la observacin y se perciben con mayor nitidez los
detalles.
Est

conformado

por

tres

sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las
lentes
que
permiten
el
movimiento
para
el
enfoque.

El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el
aumento
de
las
imgenes
que
se
observan
a
travs
de
ellas
El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y
regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio.
El

sistema

mecnico

lo

conforman:

BRAZO.- Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el
revolver. Adems sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro.
BASE O PIE.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del
microscopio.
PLATINA.- Es una pieza metlica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la
que pasar la luz del sistema de iluminacin. Aqu se coloca el portaobjetos con la muestra a
observar
PINZAS DE SUJECION.- Parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin. La mayora de los
microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten
un
avance
longitudinal
y
transversal
de
la
preparacin.
TORNILLO MACROMETRICO: Permite hacer un movimiento rpido hacia arriba o hacia abajo
del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar.
TORNILLO MICROMETRICO O DE ENFOQUE SUAVEREVOLVER.- Parte mecnica de movimiento
giratorio que nos permite colocar en posicin cualquiera de los objetivos que se encuentran en
l.
TUBO.-

Parte

mecnica

que

proporciona

sostn

los

oculares

objetivos.

CREMALLERA.- Permite que el movimiento de los tornillos macro y micromtrico sea de mayor
o
de
menor
amplitud.
El

sistema

ptico;

OCULAR.- Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la
imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir,
posean una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se
les
llama
binoculares.
OBJETIVOS: Se encuentran incrustados en el revolver Son unos pequeos cilindros colocados
en el revolver que proporciona el poder de resolucin del microscopio y determinan la
cantidad
total
de
aumento.

Existen

1.-

La

lupa

tipos

(4

X)

que

entre

sirve

para

los

hacer

que

observaciones

se

encuentran:

bajo

aumento.

2.- El objetivo seco dbil (10 X) que se utiliza para localizar la imagen que se va a observar.

3.- El objetivo seco fuerte (40 X) aumenta la imagen anterior, para poder observar se necesita
primero acercar el objetivo al portaobjetos y posteriormente, enfocar el objetivo hasta que
aparezca
la
imagen.

4.- El objetivo de inmersin (100 X) es un lente especial para observar imgenes tan pequeas
como las bacterias. Y se requiere del aceite de inmersin para lograr una buena observacin.

La parte ptica del microscopio es la que determina el nmero de aumentos que presenta la
imagen observada .El aumento total que permite un microscopio ptico se calcula
multiplicando la magnificacin que producen el objetivo por la que producen los oculares.
Num.

del

objetivo

nm.

de

ocular

nm.

de

aumentos

Ejemplo, si estamos usando un objetivo de 40x (aumenta 40 veces) y un ocular de 10x


(aumenta 10 veces), el resultado final ser de 400x, es decir, vemos la muestra aumentada 400
veces.
Seco
fuerte
(40
x)
x
ocular
(10
x)
=
400
aumentos
Usando microscopios pticos avanzados se consiguen unos 1000-1500 aumentos (objetivo de
100x ms oculares de 10x o 15x). Algunos microscopios pticos tienen lentes internas que
producen aumentos adicionales que tendremos que tener en cuenta para calcular la
magnificacin
de
la
imagen
que
se
observa.
El sistema iluminacin:
La fuente luminosa consiste en un espejo o una fuente de luz elctrica que dirige un haz de luz
hacia el condensador.
CONDENSADOR.- Es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor parte
de los rayos luminosos en la preparacin. En nuestro microscopio est integrado en la platina y
tiene
un
diafragma
unido
en
la
parte
inferior.
DIAFRAGMA: Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad
para
tener
una
buena
iluminacin
del
objeto
a
observar
FUENTE DE LUZ.- Para observar la muestra microscpica es necesario que sta se ilumine con
algn tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energa elctrica que
dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.
Los microscopios simples:
Son lentes de aumento de 8 a 20 aumentos, como las lupas que es un instrumento ptico cuya
parte principal es una lente cncava que se emplea para ampliar la visin de un objeto
Los microscopios compuestos:
Llamados tambin pticos o fotnico, porque se utiliza una fuente de luz que atraviesa la
muestra, entre stos tenemos los microscopios que utilizamos en nuestro laboratorio de

biologa, Utilizan uno o mas lentes para aumentar los objetos se utilizan para observar clulas
vivas y organismos pequeos, estos microscopios pueden agrandar la imagen hasta 1500
veces.
El microscopio Electrnico.
Utiliza una fuente de electrones para observar la muestra y se clasifican en dos:
1.-De Transmisin lineal porque los electrones atraviesan la muestra y la reflejan en una
pantalla fluorescente, aumentando la imagen a unas 200,000 veces ms que el ojo humano.

2.-De Barrido Superficial porque los electrones no atraviesan la muestra, solamente recorren la
superficie como si la barrieran, proyectndola en una pantalla de televisin, aumentando la
imagen hasta 1,000,000 de veces.
Microscopio de fluorescencia
.- El microscopio de fluorescencia se utiliza para observar sustancia fluorescentes denominadas
fluorforos. Una molcula fluorescente es aquella que es capaz de captar radiacin
electromagntica con una longitud de onda determinada y emitir otra radiacin
electromagntica con otra longitud de onda diferente, normalmente dentro del espectro de la
luz visible.
Microscopio de contraste de fases
.- Realiza modificaciones en la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes
notables en la preparacin.