Microscopa

una habilidad importante para los patlogos de plantas

Bsica-

Riley, M. 2003. Microscopa Bsica - una habilidad importante para los 2003-0130-02

patlogos de plantas. El Instructor de Sanidad Vegetal . DOI: 10.1094/PHI-I-

Melissa B. Riley , Departamento de Fitopatologa y Fisiologa, Universidad de Clemson

OBJETIVOS:

Para familiarizarse con los componentes de los microscopios utilizados por los patlogos de plantas. Para familiarizarse con el cuidado y mantenimiento de los microscopios. observacin con un microscopio.

Para conocer los pasos para un enfoque apropiado sobre el material y la Para aprender a determinar el aumento de los materiales que se observan con un microscopio.

INTRODUCCIN: Vas a continuar en la aventura de su vida. Un microscopio es una de las herramientas ms tiles que un patlogo de plantas tiene al tratar de identificar los agentes causales de enfermedades de las plantas. A veces se le proporcionar la informacin que le permitir saber exactamente lo que est casos en los que la determinacin de ciertos patgenos no estn causando un problema. causando una enfermedad de la planta. Ellos pueden ser importantes en otros

Uso de microscopio adecuada es una de las habilidades ms importantes que una planta de principio patologa estudiante puede aprender. Los microscopios se desarrollaron durante el siglo 17 y siguen siendo

importantes en la identificacin de los hongos y otros agentes causales de a los estudiantes de los primeros en sus clases de ciencias, los estudiantes no clases de microscopios son creados por alguien ms y los estudiantes se les

enfermedades de las plantas. Aunque los microscopios menudo se introducen suelen aprender a usar y cuidar de los microscopios. De hecho, en muchas dice que no cambia nada que no sea posible el foco. Este material didctico se proporciona informacin bsica y las instrucciones sobre cmo instalar, usar y cuidar de los microscopios, las habilidades esenciales para los fitopatlogos.

Figura 1. Haga clic en la imagen para ver las partes etiquetadas.

Figura 2. Haga clic en la imagen para ver las partes etiquetadas.

Hay dos tipos de microscopios de luz se usan comnmente en la introduccin de plantas cursos de patologa. Estos microscopios son el microscopio 2 ). Microscopios de diseccin se utilizan comnmente para la observacin compuesto ( Figura 1 ) y la diseccin o en el estereomicroscopio ( Figura de los objetos ms grandes y generalmente tienen aumentos de menos de situado por encima de la platina del microscopio, o la luz puede transmitirse la observacin de los especmenes ms pequeos que se colocan en

100x. La fuente de luz utilizada con el microscopio de diseccin puede estar a travs de la base de la etapa. Los microscopios compuestos se utilizan para portaobjetos de microscopio y cubierto con una hoja de cubierta. Tales muestras deben ser transparentes o translcidos, porque la luz debe ser transmitida a travs de la muestra para alcanzar el objetivo del compuestos se encuentran entre 10x y 1000x. Los componentes de este ejercicio son:

microscopio. Aumentos que se encuentran comnmente en los microscopios

Las partes de microscopios

Cmo mover y transportar adecuadamente los microscopios Determinacin de la magnificacin Ajuste de los oculares

La colocacin y la concentracin de portaobjetos

La orientacin de los materiales en una diapositiva

HAGA CLIC AQU PARA LAS NOTAS DEL INSTRUCTOR. MATERIALES:

Microscopio compuesto Microscopio de diseccin y la fuente de luz Portaobjetos y cubreobjetos

Tijeras

Frasco cuentagotas con agua Inmersin en aceite La letra "e" escrito en letras de seis puntos y se imprime en una hoja de que se puede cortar en individual "e" para cada estudiante (tamao final de la "e" es de 0,6 x 0,45 mm)

papel blanco que luego se redujo en un 50% en una transparencia clara,

PROCEDIMIENTOS: Partes Usted debe familiarizarse con las diferentes partes de los microscopios antes de Microscopios

de usarlos, ya que necesitar saber dnde estn las diferentes partes se pueden estar situados en posiciones ligeramente diferentes en diferentes

pueden encontrar en sus microscopios. Algunos de estos componentes modelos de microscopios. Tmese unos minutos para estudiar las figuras 1 y microscopios de diseccin y sus efectos se describen en la Tabla continuar.

2 antes de continuar. Los principales componentes del compuesto y 1. Obsrvense las diferencias entre los dos tipos de microscopios antes de

P. Lo que los componentes estn presentes en el microscopio compuesto que no estn presentes en el microscopio de diseccin basado en las figuras 1 y 2?

P. Qu componentes estn presentes en el microscopio de diseccin que no estn presentes en el microscopio compuesto?

Tabla 1. Los principales componentes de los microscopios y su descripcin general y el propsito. Componente Base Descripcin Metal o parte de plstico sobre la que descansa

Tabla 1. Los principales componentes de los microscopios y su descripcin general y el propsito. Componente Brazo Etapa Condensador Iris palanca Descripcin microscopio Algo pilar en forma de C que surja de la base que soporta el escenario y los componentes oculares Plataforma plana unida a la porcin inferior del brazo sobre el cual desliza o muestras se colocan o Palanca debajo de la abertura en la etapa, consiste en un

diafragma Condensador Condensador Tubo / barril Torreta

de regula la cantidad de luz que entra por la diapositiva en el escenario

grupo como el disparador de las hojas de metal que

No est presente en todos los microscopios - recoge los rayos de luz iluminador y los focaliza - aumenta la resolucin, aumenta el contraste de la muestra Sube y baja el condensador Cilndrico / vertical parte unida en la parte superior del brazo de soporte del sistema ptico Placa giratoria que lleva la lente del objetivo, que se adjunta en el extremo inferior del tubo, se puede girar para cambiar la lente del objetivo Ampliar la perilla que se mueve el tubo hacia arriba o hacia abajo rpidamente para obtener la muestra en el foco grueso

perilla de ajuste

Enfoque grueso

Enfoque fino Transformador

Ms pequeo mando que mueve el tubo a travs de distancias cortas y poco a poco se utiliza para obtener la muestra sobre el tapete o Controla la cantidad de luz transferido a la muestra

Tabla 1. Los principales componentes de los microscopios y su descripcin general y el propsito. Componente el iluminador Ocular ocular) del ocular (lente Tubo extrable, el metal corta que contiene lentes que a 15 veces de aumento ojos encajan en la parte superior del tubo - generalmente 10 Descripcin

Anillo de enfoque Ajuste utiliza para compensar las diferencias entre los Pequeos tubos de metal atornillado en la torreta que denominado simplemente como objetivo)

Lente del objetivo aumentar la ampliacin de la muestra. (A menudo Espejo Espejo del eje Lente auxiliar Se utiliza para reflejar la luz a travs de una muestra Se utiliza para ajustar espejo para reflejar la luz a travs de una muestra Tambin se conoce como lente suplementario, se pueden la cubierta de objetivo o tubo y transportar

encontrar en los microscopios de diseccin en la base de

Cmo

Microscopios a menudo se almacenan en armarios cuando no estn en uso y deben ser removidos con el fin de usarlos. Para eliminar los microscopios del rea de almacenamiento, colocar una mano por completo alrededor del brazo, y luego coloque la otra mano debajo de la base del microscopio. Lleve siempre el microscopio en posicin vertical. La realizacin de cualquier otra para asegurarse de que los cables elctricos no estn entrelazados con los de o banco de laboratorio. manera puede permitir que las piezas a caer del microscopio. Tenga cuidado otros microscopios. Coloque el microscopio sobre una zona limpia de la mesa

mover

Correctamente

Microscopios

Las fuentes de luz son necesarias para la mayora de las observaciones microscpicas. El cable de la luz debe ser enchufado a una toma de corriente del microscopio. Estas luces pueden estar unidos al brazo para iluminar el adecuada. Diseccin luces microscopio son a menudo una unidad separada escenario desde encima de la muestra. Alternativamente, las fuentes de luz se puede colocar junto a la etapa en el plano de la muestra, o por debajo de la etapa.

P. Nota la diferencia entre el microscopio compuesto y el microscopio lugares diferentes, estos lugares deben ser alterados se indica a continuacin.

compuesto se ilustra en la Figura 1. Si los componentes se encuentran en

P. Es su microscopio de diseccin diferente de la que se ilustra en la Figura 2? Si es as, por favor, las diferencias a continuacin la nota de su microscopio de diseccin. Determinacin

La ampliacin es una medida de la capacidad del microscopio para ampliar una imagen. La resolucin es una medida de la capacidad del microscopio ampliacin es de vital importancia cuando se comparan los tamaos de para separar los diferentes puntos de la imagen. La determinacin de la diferentes objetos que se est viendo con un microscopio. Tenga en cuenta el amplificacin se imprime o grabada en el lado del objetivo y en el lado o

de

la

ampliacin

aumento de los oculares y los objetivos diferentes en su microscopio. La parte superior del ocular. Este aumento se muestra como un nmero seguido de una X (por ejemplo 15x). La diseccin de microscopios pueden tener una lente adicional (referido como una lente auxiliar o complementaria) sobre la

base de la cubierta objetivo con el fin de aumentar la ampliacin. Tenga en cuenta si su microscopio de diseccin tiene como un objetivo auxiliar. Microscopios de diseccin tambin puede tener una perilla

magnificacin que cambia la amplificacin, cuando se volvi. Ntese las marcas en o cerca de este mando que se utilizan para determinar el aumento.

Los microscopios compuestos suelen tener objetivos que han sido diseados identifican por tener la palabra "petrleo" grabado en el lateral, cerca del

exclusivamente para su uso con aceite de inmersin. Estos objetivos se nmero que indica el aumento del objetivo. Objetivos del petrleo no se puede utilizar sin aceite de inmersin. Otros objetivos no se puede utilizar con aceite y se pueden daar si inadvertidamente sumergido en aceite. El uso de una lente de inmersin en aceite es esencial cuando se visualiza estructuras menos de 10 micras de tamao. Por ejemplo, una lente de aumento que requieren aceite de inmersin es necesario determinar la forma de una bacteria individual.Inmersin de aceite no aumenta el aumento de la objetivo. Cuando la luz pasa a travs de cualquier material a otro, tal como

lente, pero mejora la resolucin o nitidez de la imagen producida por el de vidrio al aire, la luz es refractada o doblado. Luz de curva longitudes de onda diferentes en diferentes ngulos. Estos resultados de la refraccin en la una gota de aceite de inmersin, que tiene el mismo ndice de refraccin distorsin que pueden ser importantes ampliaciones sean mayores. Al poner como el vidrio, entre el objetivo 100x y su diapositiva que reducen aumentando as la resolucin de la imagen.

significativamente la dispersin de la luz que de otro modo se producira,

Para determinar el aumento de cualquier imagen, tendr que multiplicar el

aumento del ocular por el aumento del objetivo. Si una lente auxiliar est presente en un microscopio de diseccin, su aumento debe ser multiplicado por el objetivo y aumentos del ocular. Es importante tener en cuenta la ampliacin en todos los planos para que pueda comparar los tamaos casos, usted tendr que utilizar dos o ms diferentes aumentos para ver todos los detalles de una muestra. relativos de las imgenes que se observan en varias ocasiones. En muchos

P. Cul es el aumento de los oculares en su diseccin y microscopios compuestos? Diseccin _______________

_______________ Compuesto

P. Cules son los aumentos de los objetivos de su microscopio compuesto? ____________

P. Su microscopio tiene una lente de inmersin en aceite? ______ P. Cul es su aumento? ___________ P. Cul es el aumento mximo que se puede obtener con su microscopio compuesto? Con el uso del petrleo? ____________________________ P. Sin el uso del petrleo? ___________________________

Figura 3.

P. Tiene su microscopio de diseccin tienen una lente de aumento auxiliar o complementario en la parte inferior de la cubierta de objetivo ( Figura 3 )?_____________________________ P. Si es as cul es su factor de

ampliacin? _______________________________

Figura 4. P. Cul es el aumento mnimo y mximo que se puede obtener cuando se usa el ajuste asociado con el mando de ampliacin situada en el lado de su microscopio de diseccin (Figura 4 )? __________________________ de diseccin?

P. Cul es el aumento mximo disponible cuando se utiliza el microscopio

P. Recuerda incluir el factor de la lente auxiliar o complementaria si se encuentra en el microscopio y el mximo de la perilla de ajuste de ampliacin y oculares.______________________

Figura 5A.

Figura 5B. Ajuste varios ajustes necesarios antes de examinar las muestras. En microscopios binoculares (microscopios con dos oculares) la distancia entre los oculares debe ajustarse de modo que usted puede mirar por ambos oculares facilidad, de Oculares

al mismo tiempo y ver una sola imagen. Hay varios mtodos diferentes de ajuste de esta distancia en funcin del microscopio que se utiliza. En algunos microscopios hay una perilla en la parte superior del microscopio entre los

oculares que ajusta la distancia ocular ( Figura 5A ). Otros microscopios se ajustan empujando en los oculares ( Figura 5B ).Este ajuste es especfico para cada persona para ajustes de menor importancia puede ser necesaria cuando

una persona mira a travs de un microscopio creado por otra persona. Haga este ajuste antes de continuar. Ajuste de las diferencias entre los ojos de una persona con la manga se centra en la izquierda o ambos oculares es otro ajuste importante para evitar las molestias y la fatiga del usuario inicial ya una muestra tiene que ser observable para hacer los ajustes. La colocacin y la concentracin de muestras de

microscopio. El procedimiento para realizar este ajuste sigue el enfoque diapositivas

de colocacin portaobjetos y el enfoque son las primeras tcnicas que deben

tenerse en cuenta.Para continuar, obtener una "e" proporcionado por el la orientacin de los materiales en la diapositiva.

instructor. Despus de enfocar la "e" se utilizar para ilustrar el movimiento y

1. Recorte alrededor de una "e" de aproximadamente 0,5 cm.

2. Colocar una gota de agua sobre el portaobjetos y puso una seal a uno de los lados largos de la diapositiva. la meta, en la diapositiva. 3. Coloca el "e" en un portaobjetos para que la parte superior de la "e" es a 4. Obtener una hoja de cubierta y recogerlo por los bordes. Coloque uno de los bordes de la diapositiva junto a su "e". Baje lentamente el otro extremo de la hoja de la cubierta lentamente a lo largo de la "e" para

que el agua se extiende por debajo de la hoja de la cubierta. Podr tomar cualquier exceso de agua con papel secante o una toalla de papel. La "e" Ahora debe permanecer en la posicin en la diapositiva a medida que se observan bajo el microscopio.

5. Asegrese de que su microscopio compuesto se encuentra en una - ajustar la altura de la silla y la anchura del ocular cuando sea

posicin donde usted puede buscar fcilmente a travs de los oculares necesario. Asegrese de que la fuente de luz (iluminacin) est conectado y encendido. Tenga cuidado de poner el cable elctrico en una posicin en la que alguien no se tropiece con l o cuando le sea posible sacar el microscopio de la mesa de forma accidental.

Figura 6. 6. Levante el tubo usando el botn de ajuste grueso para ofrecer mayor acceso a la etapa (Figura 6 ). (En algunos casos, la etapa se mueve en lugar del tubo.)

Figura 7. 7. Gire la torreta para que usted est utilizando el objetivo de menor aumento (por lo general 4x o 10x) ( Figura 7 ).

Figura 8. 8. Usando la palanca del condensador, abrir el diafragma condensador 9. Colocar el portaobjetos en el escenario con la marca en la diapositiva forma aproximadamente la mitad ( Figura 8 ).

en el lado opuesto de usted. Tambin colocar la "e" directamente encima del centro del condensador (que se encuentra debajo de la etapa), moviendo la corredera, segn sea necesario.

Figura 9.

10.

condensador (si est disponible) hasta la parte superior del condensador es de aproximadamente el grosor de una hoja de papel debajo de la diapositiva ( Figura 9 ).

Elevar el condensador microscopio por medio de la perilla de

Figura 10. 11. 12. Gire la perilla de enfoque de ajuste fino para que sea Gire la perilla de ajuste grueso ( Figura 6 ) para bajar el tubo

aproximadamente en su punto medio (Figura 10 ).

hasta que la diapositiva est casi tocando el objetivo o el tope de

seguridad que se alcanza. Asegrese de observar desde el lado del microscopio mientras se baja el tubo. Usted no quiere a la fuerza el objetivo en la diapositiva. Esto podra romper la diapositiva o el ms 13. importante daar el objetivo. Si bien la utilizacin de su ojo derecho y el ocular, gire

lentamente la perilla de ajuste grueso para levantar el tubo hasta la "e" mejor enfoque posible.

aparece en el enfoque. Ajuste el ajuste aproximado para obtener el 14. Utilice el botn de enfoque fino para enfocar la imagen tanto

como sea posible ( Figura 10 ). Si ms de una persona est utilizando el microscopio, cada persona es probable que tenga que ajustar el enfoque de precisin para enfocar la imagen.

15.

slo, slo con el ocular izquierdo. Gire el anillo de enfoque del ocular del ocular izquierdo en sentido antihorario hasta la "e" est fuera de

Sin perturbar el botn de enfoque, ver la "E" con el ojo izquierdo

foco. An con el ojo izquierdo solamente, gire el anillo de enfoque del reducir la fatiga ocular.

ocular hacia la derecha hasta un enfoque ntido se obtiene. Este ajuste 16. Ahora debe proceder a realizar observaciones de la muestra. de los materiales en una diapositiva

Orientacin

Hacer dibujos precisos de sus observaciones puede ser extremadamente importante. Estos dibujos sern especialmente importantes cuando se estn haciendo comparaciones de los dibujos realizados en diferentes

momentos. Puede ser ventajoso para dibujar un crculo que representa su campo de visin y luego agregar una cuadrcula. El crculo y la cuadrcula le ayudar en la elaboracin de los detalles en el lugar correcto y el tamao. Asegrese de tener en cuenta el aumento en la parte inferior de su crculo.

P. Dibuja lo que observas. Tenga en cuenta la parte superior de la "e", como superior de la "e" comparar con lo que se observa cuando usted no est buscando a travs del microscopio?Son diferentes? Es esto importante?

se mira a travs del microscopio. De qu manera la posicin de la parte

P. Si usted necesita mirar el material en el lado izquierdo de la imagen de qu manera se tiene que mover la diapositiva? _______________________

P. Si usted necesita mirar el material en la parte superior de la imagen de qu diapositiva? ___________________________ P. Por qu es importante esto? 17. manera se tiene que mover

la

manera: Asegrese de que su muestra est en el foco con el objetivo de potencia inferior.

Para aumentar la ampliacin se debe proceder de la siguiente

18.

soporte de diapositivas y diapositivas de forma segura, gire a la torreta

Mientras observa el objetivo de asegurarse de que se borra el

que contienen los objetivos de prximo objetivo poder superior y mayora de las torretas tienen posiciones que los objetivos se encajan en lo que indica que estn en la posicin correcta. Si la luz no es torreta est en la posicin correcta.)

asegrese de que est en la posicin correcta sobre la muestra. (La

observable o el crculo de luz no est centrada asegurarse de que la 19. 20. Utilice el enfoque fino para enfocar la imagen. Usted no debera Si es necesario aumentar las medidas de aumento ms repetidas

tener que usar el ajuste aproximado. 17-19.

Figura 11. 21. Si el objetivo de inmersin en aceite es necesario, tendr que

aadir una gota de aceite de inmersin a la diapositiva. (El aceite mineral y otros aceites no deben ser utilizados.) Cuando se activa la petrolero y el objetivo de inmersin en aceite ( Figura 11 ). parada de la torreta a medio camino entre el objetivo de inmersin no 22. Aadir una gota de aceite de inmersin en la parte superior de la

corredera en el centro de luz observada viene a travs de la diapositiva.

23.

directamente sobre la diapositiva.La gota de aceite debe formar un puente de aceite entre el objetivo y la corredera. Utilice el enfoque fino para obtener la imagen ms ntida.

Gire la torreta por lo que el objetivo de inmersin en aceite

24. 25.

disminuir la cantidad de luz que entra a travs del condensador utilizando el nivel de refrigerante ( Figura 8 ). objetivos, ya que puede daarlos. Nota especial: Asegrese de no conseguir el aceite en otros Cuando termine con un objetivo de inmersin en aceite de

Es posible que tenga que ajustar el condensador para aumentar /

26. 27.

elevar el tubo y limpiar el aceite fuera el objetivo inmediato y extraiga

la diapositiva con el petrleo. Limpiar aceite de diapositivas si se van a

utilizar ms o son lminas permanentes de laboratorio. Los objetivos pueden ser limpiados con papel lente y agua destilada. Use papel para lentes para la limpieza de objetivo, porque otros materiales Kimwipes, 28. toallas de papel, etc), lo perjudican.

siempre elevar el tubo antes de retirar el porta para asegurar que usted no daar inadvertidamente un objetivo ponindose en contacto con la diapositiva.

Cada vez que usted est listo para eliminar una diapositiva,

P. Nota las diferencias que se pueden ver dentro de la "e" cuando se cambia a un aumento mayor a continuacin. El uso de

Hay varias diferencias entre el uso de un microscopio compuesto y utilizando un microscopio de diseccin (a veces referido como un estereomicroscopio porque es como dos microscopios que figuran a concentrarse en un punto que proporciona una vista 3-dimensional o estereoscpica de la muestra ). En general, la mayora de los microscopios de diseccin no tiene una perilla de ajuste fino. La fuente de luz (iluminador) tambin puede ser separado y

diseccin

Microscopio

puede ser montado en el brazo, por debajo de la placa de fase, o en el nivel de la etapa. Su instructor le dar instrucciones especficas relacionadas con su microscopio. Muchos microscopios de diseccin no tiene objetivos distintos

para aumentar la ampliacin, pero tienen un botn de ampliacin que se microscopios de diseccin tambin tienen una lente auxiliar o

puede girar para aumentar o disminuir la ampliacin. Nota: Algunos complementario en la parte inferior de la cubierta de objetivo o el cuerpo. Si esta lente est presente, debe incluirse en la determinacin de magnificacin.

Las muestras se colocan en la placa de fase y se mueven con la mano. La luz puede ser transmitida a travs de la corredera mediante el ajuste del espejo por debajo de la muestra o la muestra puede ser visto con la luz que viene desde arriba. Al ver la muestra con la luz que viene desde abajo, puede que tenga que ajustar el espejo para que la luz est bien ajustada para su omiso de los que no se aplican a su microscopio.

visualizacin. Siga los pasos que se indican a continuacin, haciendo caso

Figura 12. Para ver la "e" es mejor tener la luz que viene de abajo de la muestra ( Figura 12 ). Siga los pasos 1-4 para el microscopio compuesto, segn corresponda.

5. Coloque la diapositiva con la "e" en el escenario con la parte superior de la "e" lejos de ti (la marca de la diapositiva debe estar lejos de ti).

6. Ajuste el eje de simetra ( Figura 12 ) para obtener la luz transmitida a travs de la muestra, a continuacin, utilice el botn de enfoque para que la "e" en el foco.

7. Dibuje la orientacin de la "e" dentro de un crculo. P. Hay alguna diferencia de lo que observ antes, con el microscopio compuesto? Si es as, cules son?

8. Determinar la ampliacin de la muestra utilizando la siguiente frmula. Usted podra tener que estimar el valor de aumento en la para estimar el aumento asociado con el botn de ampliacin. perilla de la ampliacin. Hay una lnea que indica el punto en el cual

P. ocular X auxiliar lente de aumento Posicin del mando X = aumento total de ________ X ________ X ________ = __________ 9. Al mover los materiales a la izquierda o lejos de usted, que como lo hace la imagen que se observa a travs del movimiento microscopio?

P. Es esto diferente o el mismo que lo que observ con el microscopio compuesto?

P. Cundo desea utilizar una fuente de luz que incide directamente sobre la muestra (la luz situado encima de la muestra)? P. Cul es la ventaja de esto? Cuando haya terminado de usar el microscopio para el da, se debe tener

cuidado en el almacenamiento correctamente. Asegrese de que los objetivos los cables y sin apretar envolver alrededor de la base.Quite las luces que

estn limpias y las diapositivas se retiran. Apague todas las luces. Desenchufe estn asociadas con los microscopios de diseccin. Coloque todos los

microscopios y las luces con cuidado de nuevo en su rea de adicionales, segn corresponda. NOTAS IMPORTANTES

almacenamiento adecuada. Los instructores podrn dar instrucciones

Si usted tiene cualquier problema, consulte a su instructor para obtener ayuda. No desmonte microscopios. REFERENCIAS TILES http://www.microscopyu.com - sitio Web de Microscopa Nikon - contiene artculos y tutoriales, as como imgenes microscpicas. Tambin incluye desarrollos tcnicos relacionados con las nuevas tcnicas y microscopios.