LABORATORIO DE BIOQUMICA I

Informe N6 Cromatografa de Intercambio Inico

Integrantes: Vanessa Bozo
Claudia Iturriaga


Profesores: Jos Miguel Villarreal
Bernardo Collao

Carrera: Bioqumica

Curso: BIO-267 LA

Seccin: 1

Fecha de entrega: 18 de noviembre de 2010


INTRODUCCIN


OBJETIVO




































METODOLOGIA














































RESULTADOS

A continuacin se muestra una fotografa de la electroforesis realizada, dnde la columna
N5 corresponde a la nuestra y la N1 al estndar.















DISCUSIONES

Escherichia coli, es una de las bacterias ms utilizadas en cualquier tipo de ensayo que
involucre plsmidos, debido a que esta se encuentra naturalmente en el tracto digestivo de
mamferos el riesgo de infeccin disminuye si se manipula de manera correcta y con
precaucin(1).
El mtodo utilizado en el prctico se basa en las diferencias con respecto
a la forma y tiempo de desnaturalizacin y renaturalizacin del DNA de los plsmidos
con respecto al DNA cromosomal de la bacteria.(2)
(3)
La lisis alcalina a pesar de ser una metodologa muy utilizada, no garantiza que en la
muestra final no hayan trazas de DNA cromosomal, y que la integridad de todos los
plsmidos de la solucin se haya mantenido.
Los plsmidos de estructura circular se encuentran sper enrolladlos de forma natural, pero
en la solucin analizada se pueden encontrar con diferentes grados de sper enrollamiento
(Lk) (4). Cuando se trata de DNA con estructuras circulares, la movilidad electrofortica
aumenta con el grado de enrollamiento, mientras ms compacto este el DNA circular,
atravesar mejor el gel y tendr mayor movilidad, por lo que avanza ms. As mismo los
plsmidos de la solucin que tengan menor grado de enrollamiento se mueven ms
lentamente.
(5)
Tambin debemos tener en cuenta que la solucin probablemente no slo contena DNA plasmidial,
si no tambin ARN, tanto mensajero, de transferencia como ribosomal y ADN cromosomal.
El tamao de los plsmidos naturales vara desde aproximadamente 1 kpb hasta ms de
1Mbp. (6)
En este caso diremos que las diferentes bandas corresponden a:


(*) Para las 3 bandan correspondientes al plamidio con diferente estructura y grado de
enrollamiento podramos aproximar su estructura y un tamao en pares de bases, con
respecto al marcador o estndar de DNA utilizado:









Bandas que pueden corresponder
a parte del DNA cromosomal,
que pudo haberse separado de la
membrana al hacer una inversin
muy brusca. Es importante
mencionar que es slo una
porcin de este.
Bandas que pueden corresponder
plsmidos de la bacteria con
diferentes grados de
enrollamiento, como se
mencion anteriormente.(*)
Diferentes RNAs celulares:
Transferencia
Mensajero
Ribosomal
Son manchas tpicas de las
electroforesis de ste tipo.
Fragmento Tamao [pb] Plamidio
1 10000
2 8000 (1)Circular abierto
3 6000
4 5000
5 4000
6 3500 (2)Linear
7 3000
8 2500
9 2000 (3)Super-enrollado
10 1500
11 1000
12 750
13 500
14 250



(1)



(2)

(3)


















































BIBLIOGRAFA
1. http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva505_Practica6.pdf
2. http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva505_Practica6.pdf
3. http://www.umce.cl/delgenalaproteina/modulos/modulo08.php
4. http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-Electroforesis-
protocolos.pdf
5. http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-Electroforesis-
protocolos.pdf
http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:D1qwn3eubOEJ:docencia.i
zt.uam.mx/hgm/bioquimicaIII/material_adicional/quimica_dna.ppt+Estructura+gen
eral+de+nucle%C3%B3tidos&cd=1&hl=es&ct=clnk&gl=cl&client=firefox-a
6. Brock, Biologa de los microrganismo, 2009, Ediciones Pearson Educacin, S.A,
12 Edicin, Captulo 11, pgs.: 305-309