TLB U4 A1 Damu

UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA DE MXICO
TCNICAS DE LABORATORIO DE BIOLOGA

UNIDAD 4. USO DE COLORANTES Y REACTIVOS EN EL
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
ACTIVIDAD 1. DE TIN MARIN DE DO PINGE
ACTIVIDAD 1. DE TIN MARIN DE DO
PINGE
DAVlD ALEJANDRO MARlN URDAPlLLETA
MATRlCULA.- ALl2532846
LlCENClATURA EN BlOTECNOLOGlA
MXlCO, DlSTRlTO FEDERAL A l6 DE ABRlL DE 20l4
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
GLOSARIO SOBRE LOS TIPOS DE COLORANTES Y SU APLICACIN.

COLORANTE DESCRIPCIN y APLICACIN IMAGEN
AZUL DE
BROMOTIMOL
Color:
Azul
Azul de Bromotimol en solucin - Azul de Bromotimol
lndicador en solucin - 3,
3-Dibromotimolsulfontalena en solucin.
. El azul de bromotimol es una sal qumica utilizada en
solucin para identificar el nivel de pH de una sustancia
desconocida.
La solucin de muestra para resaltar las paredes de las
clulas bajo el microscopio.
VERDE DE
BROMOCRESOL
Color:
Verde
Es utilizado para medir el pH en el proceso de recurtido y
su rango de viraje se encuentra entre pH 3.0 y 6.0
ROJO DE
CLOROENOL
Color:
Rojo
Colorante que reacciona en el rango de pH entre 5,2 y
6,8. Este colorante es realmente fcil de observar dentro
del rango entre 5,8 a 6,6, el cual es el rango usual de
fluctuacin de una solucin nutritiva bien regulada.
Recordemos que en hidropona el punto de trabajo mas
adecuado est entre 5,8 y 6,2.
ROJO ENOL
Color:
Rojo
Se presenta en polvo o en cristales de color rojo, inodoro,
se descompone a temperatura de ebullicin,
su temperatura de fusin es de 285 C. Tiene
baja solubilidad en agua, soluble en disoluciones
de hidrxidos alcalinos y ligeramente soluble
en acetona y alcohol etilico.
en los medios de cultivo se utiliza como indicador de pH.
A pH inferiores a 6,8, el cultivo vira a amarillo, a pH
superiores a 8 el cultivo se torna de color rojo, los pH
entre 6,8 y 8 dan tonalidades graduales de color naranja.
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
TARTRAZINA
Color:
Amarillo
Originalmente el color amarillo del arroz de las paellasse
consegua con el valioso azafrn, que le otorgaba un
sabor y un color muy caracterstico y le aada
nutrientes.
La tartracina como colorante posee los
cdigos El02 (Unin Europea) y Amarillo 5 o Yellow
5 (FDA-USA), por lo que es posible identificar qu
alimentos, bebidas u otros productos contienen tartracina
al revisar sus ingredientes en la etiqueta.
AZORRUBINA
Color:
Frambuesa
Polvo fino granate rojizo (rojo rosado en solucin
acuosa).Usos: colorante en la industria alimentaria (E-
l22) .Soluble en agua.
Pertenece al grupo de los azoicos, usado para colorante
de caramelos
AZUL V
CELESTE!
Color:
verde ndigo
Colorante azul alimentario.
Muy soluble en agua.
Raramente ocurren efectos colaterales en las
concentraciones utilizadas en los alimentos.
Se han descrito muy pocos casos de reacciones alrgicas
debidas al acoplamiento del colorante a las protenas
(corporales). Tambin puede actuar como un liberador de
histamina
AZUL NILO
Color:
Azul
Este colorante comprende dos compuestos: una oxazona
roja que es soluble en lpidos neutros (insoluble en agua);
y una oxazina azul, que es bsica y reacciona con
fosfolpidos y cidos grasos libres.
El Azul Nilo es soluble en agua y puede ser usado como
colorante bsico, dando tonos del azul al verde en cortes
de tejido fijados en formalina e incluidos en parafina. Para
su uso en histoqumica esta oxazina es oxidada, por
calentado en una solucin de cido sulfrico diluido,
generando una oxazona conocida como Rojo Nilo.
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
ROJO DE
METILO
Color:
Rojo
Rojo de metilo, tambin llamado C.l. Acid Red 2, es un
colorante indicador que se convierte en rojo en soluciones
cidas. Es un colorante azoico, y es un polvo cristalino de
color rojo oscuro.
Rojo de metilo es un indicador de pH, sino que es de
color rojo en el pH bajo 4.4, amarillo en el pH sobre 6,2, y
naranja en el medio, con un pKa de 5,l.
En microbiologa, rojo de metilo se utiliza en el rojo de
metilo test, se utiliza para identificar las bacterias
productoras de cidos estables por los mecanismos de la
fermentacin de cido mixto de la glucosa.
La prueba de rojo de metilo es la porcin de "M" de las
cuatro pruebas lMViC utilizados para caracterizar las
bacterias entricas. La prueba de rojo de metilo se utiliza
para identificar las bacterias entricas en base a su
patrn de metabolismo de la glucosa. Todos los entricos
inicialmente producen cido pirvico a partir de
metabolismo de la glucosa. Algunos entrica
posteriormente usar la ruta del cido mixto para
metabolizar el cido pirvico a otros cidos, tales como
cidos lctico, actico, frmico y. Estas bacterias se
llaman positivos de rojo de metilo e incluyen Escherichia
coli y Proteus vulgaris. Posteriormente, otros entricos
utilizan la va butilenglicol para metabolizar el cido
pirvico a productos finales neutros. Estas bacterias se
llaman metil-red-negativo y Serratia marcescens incluyen
y Enterobacter aerogenes.
NARANJA DE
ACRIDINA
Color:
Naranja
A un pH bajo, cuando el naranja de acridina es excitado
por la luz azul, puede ser diferencialmente mancha verde,
mientras que las clulas humanas teir microorganismos
de color naranja brillante para la deteccin con un
microscopio de fluorescencia. Esta capacidad permite
tincin diferencial de barrido ms rpida de frotis con un
aumento menor, que por la tincin de Gram. Organismos
anaranjados brillantes son fciles de detectar en contra
de un negro a punto de desmayarse verde background6.
La estructura de anillo de la naranja de acridina puede
absorber la radiacin entrante. Se refiere a la naturaleza
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
hidrofbica del compuesto; naranja de acridina tiende a
difundirse de forma espontnea en la membrana que
rodea los microorganismos. El naranja de acridina es un
cido selectiva colorante fluorescente catinico nucleico
til para la determinacin del ciclo celular. Es permeable a
las clulas, e interacta con el ADN y ARN por
intercalacin o atracciones electrostticas,
respectivamente. Cuando se une a ADN, que es muy
similar espectralmente a la fluorescena, con un mximo
de excitacin a 502 nm y un mximo de emisin a 525
nm. Cuando se asocia con el ARN, la excitacin mxima
se desplaza a 460 nm y la emisin mxima se desplaza a
650 nm. Naranja de acridina tambin entrar en
compartimentos cidos como lisosomas y ser protonado y
secuestrado. En estas condiciones de pH bajo, el
colorante emite luz naranja cuando es excitado por la luz
azul. Por lo tanto, naranja de acridina se puede utilizar
para identificar las clulas apoptticas envueltos, ya que
ser fluorescente en inmersin. El colorante se utiliza a
menudo en la microscopa de epifluorescencia.
Naranja de acridina se puede utilizar para diferenciar
entre el cido desoxirribonucleico y cido ribonucleico
muy fcilmente. Cuando acridina lazos de color naranja
con el ADN y forma un complejo, la radiacin emitida es
de color verde. Cuando se une con el ARN y forma un
complejo, la luz emitida es de color naranja.
VIOLETA DE
GENSIANA
Color:
Violeta
Polvo cristalino verde oscuro brillante, higroscpico.
Bastante
soluble en agua, fcilmente soluble en etanol al 96%, y en
cloruro
de metileno.
Colorante derivado del trifenilmetano con accin
bactericida frente a
numerosas bacterias (sobretodo gram+ del grupo de los
estafilococos), antifngico, y contra algunas levaduras
(como
Candida). Su actividad se incrementa con el pH alcalino.
Se utiliza en la prevencin y tratamiento de las
infecciones de
lceras crnicas, lceras varicosas, y heridas, dermatitis
irritativas
crnicas, flebitis y tromboflebitis, eczemas hmedos,
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
sabaones,
forunculosis, dermatomicosis, imptigo, quemaduras,
leucorrea,
vaginitis, candidiasis oral y vaginal, y angina de Vincent.
TINTA C"INA
Color:
Negro
Tincin negativa. Este mtodo de tincin utiliza colorantes
neutros o cidos ya que tienen poca afinidad por la clula
bacteriana por lo tanto como no se absorben se colorea el
fondo en el que estn las bacterias pero la clula queda
incolora y transparente, as pues las bacterias aparecen
como pequeas reas iluminadas en un fondo oscuro. La
tincin acdica con nigrosina, o neutral ( con tinta china)
son las ms usadas.
La tinta lquida suele prepararse a partir de barras slidas.
Para ello hay que frotarlas en una piedra rugosa
especialmente diseada para tal efecto llamada en
japons suzuri
ENOLTALEN
A
Color:
Depende del pH,
cido-incoloro y
bsico rosa-
violeta
La fenolftalena es un colorante orgnico sinttico
ampliamente utilizado como indicador cido-base, debido
a su cambio de color de incoloro a rosa al reaccionar con
los iones hidrxido, OH -, entre pH 8 y l0.
Aunque menos conocida, la fenolftalena tambin
reacciona en medio fuertemente bsico, por ejemplo a pH
l3, decolorndose.
lndicador cido base: Un indicador de pH es una
sustancia que permite medir el pH de un medio.
Habitualmente, se utiliza como indicador sustancias
qumicas que cambia su color al cambiar el pH de la
disolucin. El cambio de color se debe a un cambio
estructural inducido por la protonacin o desprotonacin
de la especie. Los indicadores Acido-base tienen un
intervalo de viraje de unas dos unidades de pH, en la que
cambian la disolucin en la que se encuentran de un color
a otro, o de una disolucin incolora, a una coloreada.
ACEITE DE
PARAINA
Color:
Transparente a
blanca
La parafina, tambin conocida como parafina
lquida, aceite de parafina o queroseno, es un
hidrocarburo lquido combustible que se quema como
carburante.
La parafina, cuando se encuentran en forma slida, se
llama cera de parafina, mientras que la forma lquida se
conoce como aceite de parafina. El aceite de parafina
lquida es un aceite mineral que se presenta en dos
formas, ya sea aceite de parafina lquida pesado o aceite
de parafina lquida ligero.
El aceite de parafina tambin se ha usado como un
disolvente industrial y lubricante. Se puede utilizar para
almacenar sustancias que pueden ser daadas o son
voltiles en presencia de oxgeno. Histricamente, el
aceite de parafina ha sido aadido a aguas estancadas
para evitar que los mosquitos cren y ha sido aplicado a la
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
cabeza para matar piojos, aunque estas prcticas pueden
ser peligrosas y han cado en desuso. El aceite de
parafina tambin se utiliza en algunos espectculos de
entretenimiento, como el baile de fuego y la respiracin
de fuego, ya que se enciende a una temperatura
relativamente ms baja que otros combustibles.
CARMN
Color:
Rojo
El cido carmnico, E-l20, C.l. 75470, Natural Red 004,
es una
sustancia qumica compleja utilizada
como colorante rojoextrado de la cochinilla (Dactylopius
coccus) u otros insectos. Se utiliza como colorante
en cosmticos (pintalabios, etc.) y comoE-l20 en la
industria alimenticia para dar un color rojo a los alimentos
o a bebidas, aunque se sustituye cada vez ms por
colorantes sintticos ms baratos. Un sustituto
ampliamente utilizado es el Ponceau 4R , un colorante
azoico con el nmero El24.
Este colorante es utilizado como aditivo en alimentos,
medicamentos y cosmticos. Posee la clasificacin FD&C
de la Administracin de Drogas y Alimentos (FDA) de
los Estados Unidos y est incluido en la lista de aditivos
de la Comunidad Econmica Europea (actual Unin
Europea) bajo los parmetros de toxicidad permitida
-lngesta Diaria Admitida lDA-.
Es probablemente el colorante con mejores
caractersticas tecnolgicas de entre los naturales, pero
se utiliza cada vez menos debido a su alto precio.
Confiere a los alimentos a los que se aade un color rojo
muy agradable, utilizndose en conservas vegetales
y mermeladas (hasta l00 mg/kg), helados, productos
crnicos y lcteos, como el yogur y el queso fresco (20
mg/kg de producto) y bebidas, tanto alcohlicas como no
alcohlicas.
BISMARC#
BRO$N
Color:
Caf
Le imparte un color amarillo a las mucinas cidas. Se
puede utilizar con clulas vivas.
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
AZUL
BRILLANTE
Color:
Azul
Valioso para ciertos trabajos por sus propiedades
altamente metacromticas. Su principal empleo es en la
coloracin de la sangre, para demostrar los corpsculos
reticulados. Es un colorante caro, por las dificultades que
ofrece su manufactura y su escasa demanda comercial.
BROMURO DE
ETIDIO
Color:
Fluorescente rojo-
naranja
El bromuro de etidio (BrEt) es un agente intercalante
usado comnmente como marcador de cidos nucleicos
en laboratorios de biologa molecular para procesos como
la electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone
esta sustancia a luz ultravioleta, emite una luz roja-
anaranjada, que se intensifica unas 20 veces despus de
haberse unido a una cadena de ADN
NIGROSINA
Color:
Negro
Tincin negativa. Este mtodo de tincin utiliza colorantes
neutros o cidos ya que tienen poca afinidad por la clula
bacteriana por lo tanto como no se absorben se colorea el
fondo en el que estn las bacterias pero la clula queda
incolora y transparente, as pues las bacterias aparecen
como pequeas reas iluminadas en un fondo oscuro. La
tincin acdica con nigrosina, o neutral ( con tinta china)
son las ms usadas.
"EMATOXILINA
Color:
Morado, azul,
violeta
La Hematoxilina (C.l. 75290) es un compuesto que se
obtiene de la plantaleguminosa Haematoxylum
campechianum L., conocida tambin con el nombre
de palo de Campeche. Es un producto natural que al
ser oxidado constituye una substancia de color morado
oscuro denominada hematena.
Es una coloracin topogrfica de rutina ya que permiten
distinguir detalles morfolgicos de clulas y tejidos.
Existen mltiples variantes, segn se emplee un tipo u
otro de eosina y de hematoxilina (generalmente se
emplea la hematoxilina de Harris). Por lo comn, este
mtodo siempre consta de una etapa inicial, en la que se
colorean los ncleos celulares con la hematoxilina
(violeta), y en una fase ulterior de contraste citoplasmtico
y de los componentes extracelulares con la eosina (rojo-
rosado).
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
LUGOL
Color:
Violeta oscuro
lugol o disolucin de Lugol es una disolucin de yodo
molecular l2 y yoduro potsico Kl en agua destilada.
En microbiologa se emplea en la tincin de Gram para
retener el colorante cristal violeta. El l2 entra en las
clulas y forma con el colorante cristal violeta un complejo
insoluble en agua.
Tambin se utiliza como contraste visual en parasitologia.
Se utiliza esta disolucin como indicador en la prueba del
yodo, que sirve para identificar polisacridos como
los almidones, glucgeno y ciertas dextrinas, formando un
complejo de inclusin termolbil que se caracteriza por
presentar distintos colores segn las ramificaciones que
presente la molcula de polisacrido. El lugol no
reacciona con azcares simples como la glucosa o
lafructosa.
Se puede usar como un colorante para clulas, haciendo
el ncleo celular ms visible en microscopas y para
preservar muestras de fitoplancton.
En una colposcopia, la disolucin de Lugol se utiliza en
la prueba de Schiller en busca de tejido vaginal
canceroso.
Se puede usar la disolucin de Lugol para observar la
forma en la que la membrana celular
hace smosis, fagocitosis y difusin.
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
AZUL DE
METILENO
Color:
Azul
El azul de metileno, cuyo nombre cientfico esCloruro de
Metiltionina, es un colorante que seusa para tratar una
enfermedad llamadametahemoglobinemia. El azul de
metileno se usacomo tintura para teirciertas partes del
cuerpoantes o durante la ciruga.
Esta sustancia tiene forma de cristales o polvocristalino y
presenta un color verde oscuro, conbrillo bronceado. Es
lnodoro y estable al aire.Sus soluciones en agua o en
alcohol son de colorazul profundo.
La coloracin con azul de metileno tie a todas las
bacterias por igual. Se utiliza el colorante para teir las
estructuras presentes en el citoplasma de la bacteria. No
es diferencial porque cuando se tien microorganismos
con ste colorante tie a todos por igual, se comporta de
la misma forma con una bacteria u otra.
CRISTAL
VIOLETA
Color:
Violeta
La tincin de Gram es una tcnica diferencialcomnmente
empleada en el diagnstico microbiolgico,fue
descubierta por Hans Christian Gram en l884. La mayor
parte de las muestras sometidas a examencuando se
sospecha infeccin bacteriana deben serextendidas en
frotis sobre laminillas de vidrio, teidas yexaminadas en el
microscopio.Los reactivos empleados en la tincin de
Gram son elcristal violeta (colorante bsico), lugol
(mordiente), alcoholcetona (decolorante) y safranina
(colorante de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante bsico unindose a
lapared celular bacteriana, con ayuda del mordiente
(lugol) querefuerza la unin del colorante. Las bacterias
Gram positivas,debido a la estructura y composicin
bioqumica de su paredcelular retienen el complejo cristal
violeta-lugol y aun despus deltratamiento con el
decolorante conserva el colorante bsico, por loque se
observan de color prpura o violeta al microscopio. Las
bacterias Gram negativas pierden el colorante
bsicocuando son tratadas con el decolorante debido a
que el alcoholdisuelve el contenido lipdico de la pared
celular (lo que aumentala permeabilidad celular), dando
como resultado la prdida delcomplejo cristal violeta-
lugol. Las bacterias decoloradas captanentonces el
colorante de contraste, razn por la cual estasbacterias
se observan de color rojo al microscopio.
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
SARANINA
ROJO
Color:
rosa
La safranina (tambin llamada Safranina O o rojo bsico
2), es un colorante biolgico, de contraste que se utiliza
en la Tincin de Gram para proporcionar un color violeta
ms intenso a las bacterias Gram+ y tie de rosa a las
bacterias G- ; en histologa y en citologa. La safranina se
usa como lquido de contraste en algunos protocolos de
tincin, coloreando el ncleo celular de rojo. Tambin
para detectar cartlago, mucina y grnulos de mastocitos.
La safranina tambin se usa como indicador
redox enqumica analtica.
EOSINA ROJO
Color:
rosa
La eosina, colorante cargado en forma negativa, se une a
componentes celulares cargados positivamente. Estos
componentes cargados positivamente se denominan
acidfilos, porque tienen afinidad por los colorantes
cidos. Por ejemplo, estos colorantes se unen a
grupos aminos de las protenas. Estas protenas pueden
pertenecer al citoesqueleto de la clula o hallarse en la
matriz extracelular. Debido al elevado contenido de
protenas del citoplasma la eosina es un excelente
colorante citoplasmtico. La eosina se une tambin a las
membranas plasmticas, sin embargo, se desconoce la
naturaleza qumica de esta unin. Las clulas que
presentan un gran desarrollo de membranas (muchas
mitocondrias, mucho retculo endoplasmtico liso, etc.)
son sumamente acidfilas, o sea, se tien intensamente
con la eosina.
ORCENA
Color:
Fucsia y morado
La orcena, tambin conocida con el nombre de "rojo
ctrico", es un colorante natural empleado en la industria
alimentaria y obtenido de diversos lquenes. a orcena es
un colorante de color rojo violceo (prpura) que se
extrae de forma natural de diversos lquenes (orchella).
Se emplea en la industria alimentaria con el cdigo El82.
La sntesis artificial es descrita por Cocq en el ao l8l2
La produccin comenz de orcena en l758, fue
patentado anteriormente en l766, siendo la patente 727
en Gran Bretaa. Los componentes qumicos de la
orcena se elucidaron en la dcada de l950s por Hans
Musso. Uno de sus componentes el Orcinol se extrae del
liquen archil denominado Roccella tinctoria.
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
UCSINA %CIDA
Color:
Rojo, rosa
Hay varios compuestos conocidos con este nombre. Es
uno de los colorantes nucleares ms enrgicos, con
tendencia a la sobre-coloracin, por lo que no resulta
bueno, para los trabajos histolgicos delicados. Es muy
empleado en el diagnstico de la tuberculosis. La fucsina
bsica decolora con el sulfito y es empleada en qumica
como indicador para detectar aldehdos, ya que estos
toman color rojo-violeta con este colorante. lgual empleo
tiene en histologa para determinar la presencia de
aldehdos en el ncleo. En bacteriologa se usa en
solucin fenicada semejante a la de la violeta de
genciana. Esta solucin se prepara triturando en un
mortero l g de fucsina bsica en l0 ce de alcohol de 90,
y cuando est bien disuelta se aade lentamente, y sin
dejar de agitar, 4 g de cido fnico. En el mortero se
vierten varios centmetros cbicos de agua destilada para
arrastrar el colorante al echarlo en el frasco, el cual se
completa el volumen de l00 ce. A las 24 horas se filtra la
solucin.
La fucsina bsica se usa tambin en solucin acuosa o
hidroalcohlica. La coloracin se obtiene en l5-20', y
debe diferenciarse en alcohol absoluto.
ROJO CONGO
Color:
Rojo
Rojo Congo es una sal de sodio de 3,3'-([l,l'-bifenil]-4,4'-
diyl)bis(4-aminonafhalene-l-sulfonic cido)(frmula:
C32H22N6Na2O6S2; peso molecular: 696.66 g/mol). Es un
secundario del Azoderivado. El Rojo Congo es soluble en
agua, conformando una solucin roja coloidal; su
solubilidad es mucho mejor en solventes orgnicos como
el etanol.
Tiene una gran afinidad, aunque aparentemente, por las
fibras de celulosa. Sin embargo, el uso de rojo congo en
la industria de la celulosa (algodn textil, pulpa de rbol y
papel) ha desaparecido, en parte por su tendencia a
cambiar de color una vez que se toca con los dedos
manchados de sudor, al correr, y por su toxicidad.
Aunque se usa tambin como indicador, se emplea
PROCESAMIENTO DE
MUESTRAS.
preferentemente en histologa para demostrar los
cilindroejes en el tejido nervioso y como colorante en
contraste con la hematoxilina.
NEGRO SUDAN El colorante Negro Sudan es un colorante de auxocrmo
azul-negro en etanol acuoso indiferente y por solubilidad
tiene preferencia por los lpidos del tejido, tindolos de
color negro azulado, ms especficamente, esta tcnica
colora las vainas mielnicas de las fibras nerviosas que
estn compuestas por lpidos.
El negro de sudn o sudn iv, se emplea en la coloracin
de las vainas mielnicas de las fibras nerviosas
compuestas por lipoprotenas.
REERENCIAS&
entrodeartigos.com/articulos-para-saber-mas/article_4l209.html
http://www.acofarma.com/
http://histo-inmediata.webnode.es/news/tipos-de-tincion/
http://www.ht.org.ar/
es.wikipedia.org/wiki

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