UNIVERSIDAD MEXIQUENSE DEL BICENTENARIO UNIDAD DE ESTUDIOS SUPERIORES TULTEPEC LIC.

NUTRICION

ANLISIS Y TECNOLOGA DE ALIMENTOS

INTEGRANTES: ROMERO RODRGUEZ CLAUDIA MILE ZARAGOZA SNCHEZ STEFANY MONSERRATH

EQUIPO: 14 PRACTICA 3 Electroforesis

FECHA: 20/02/2014

INTRODUCCIN La electroforesis es un mtodo analtico semipreparativo, en el que se separan biomolculas, en dependencia entre otros factores de su carga y bajo la accin de un campo elctrico, fue empleado por primera vez por Tiselius en el ao 1937. La electroforesis de protenas en geles con una matriz de poliacrilamida, comnmente denominada electroforesis en poliacrilamida (PAGE, 'polyacrilamide gel electrophoresis') es sin duda alguna una de las tcnicas ms ampliamente usada para caracterizar mezclas complejas de protenas. La electroforesis en poliacrilamida es un mtodo conveniente, rpido y econmico a nivel de muestra pues se requieren slo cantidades del orden de microgramos de protena. La electroforesis constituye parte importante del procedimiento rutinario del anlisis de los cidos nucleicos y protenas. Y as como el microscopio permite visualizar microorganismos y estructuras similares, la electroforesis nos ayuda a Observar los cidos nucleicos y protenas al final del procedimiento. El principio bsico de la electroforesis consiste en la migracin de las molculas a travs de un gel u otro tipo de matriz de naturaleza porosa, en el cual, por accin de un campo elctrico, sern separadas de acuerdo a su tamao o peso molecular. Para controlar el avance de la separacin de las molculas en la matriz y establecer un patrn de fragmentos, las molculas debern ser teidas con diferentes colorantes. Estos pasos facilitan la visualizacin de las molculas a manera de simples bandas las cuales sern posteriormente analizadas e interpretadas. Es importante sealar que la electroforesis en asociacin con otras tcnicas tales como PCR, e hibridacin, brinda una gran ayuda en el campo de la salud. Gracias a esta tcnica es posible visualizar las bandas de ARN o ADN de patgenos, detectar cambios o mutaciones a nivel gentico, visualizar una nueva protena, entre otros. Una ventaja importante de los geles de poliacrilamida es que son qumicamente inertes, transparentes y estables en un amplio rango de pHs, temperatura y fuerza inica.

FUNDAMENTO DE TCNICA
PREPARACIN DEL GEL DE RESOLUCIN El gel de resolucin es la matriz de poliacrilamida donde las molculas de ADN o protenas, van a migrar generando un perfil de bandas o patrn electrofortico. Dicho patrn vara de acuerdo al peso molecular de cada una de las molculas y a la concentracin del gel mismo. PREPARACIN DEL GEL DE EMPACAMIENTO El gel de empacamiento es la matriz de poliacrilamida que tiene como caracterstica retener a las protenas mantenindolas uniformes antes que ellas migren hacia el gel de resolucin. Este proceso permite mejorar la resolucin de las protenas en la electroforesis.

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES Micro pipetas para volmenes de 20 L. Cmara de electroforesis vertical y accesorios. Fuente de poder. Buffer de electroforesis para protenas (Anexo A). Guantes. Gradilla para tubos de 1,5 mL. Puntas para micro pipeta de 20 L. Envase con leja al 10% para descarte de puntas.. Buffer separacin ph 8.8 Bis-acrilamida 30% Persulfato de amonio

FORMULACION DE GEL Buffer OH 8.8 2ml Acril 3.2ml TEMED 100ml APS 200ml

PROCEDIMIENTO
ENSAMBLAJE DE LA CMARA DE ELECTROFORSIS El procedimiento para el ensamblaje de la cmara de electroforesis vara de acuerdo al modelo del equipo, en consecuencia el investigador deber seguir las instrucciones que recomienda el fabricante. Debido a que la mayora de las cmaras de electroforesis parten del mismo principio tcnico, hemos representado grficamente un modelo que permite orientar al investigador en el ensamblaje de este equipo. En general, una cmara de electroforesis vertical puede tener los siguientes componentes: Dos placas de vidrio del mismo grosor y anchura, de acuerdo al fabricante. En algunos modelos, la altitud de los vidrios es diferente (uno con mayor altitud que el

otro). En general, el tamao de los vidrios es variable, dependiendo de la dimensin de la cmara.

Procedimiento 1. Mezclar la protena con el buffer de la muestra concentrada por cuatro veces (4x) en proporcin 3:1 (tres partes de la muestra y una de buffer). 2. Asegurar la tapa de los tubos con lmina extensible de parafina y someter la muestra a una temperatura de 100 C durante 5 minutos. Para tal efecto colocar los viales en una gradilla para micro tubos dentro de un recipiente o vaso de precipitacin con agua hirviendo. 3. Controlar la temperatura con un termmetro adecuado. 4. Finalizado el procedimiento, retirar los tubos del vaso de precipitacin y centrifugarlos por diez segundos a 12 000 rpm. Mantenerlos en una gradilla para micro tubos dentro de un recipiente con hielo hasta el proceso de electroforesis.

CONCLUSIONES

REFERENCIASBIBLIOGRFICAS http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/poli.htm