COD 11077 20 determinaciones

COD 11078 100 determinaciones

HEMOGLOBIN A2 HEMOGLOBINA A2

CONSERVAR A 15-30C Reactivos para medir la concentracin de HbA2 Slo para uso in vitro en el laboratorio clnico

INTERCAMBIO INICO - SIN INTERFERENCIA DE HbS

FUNDAMENTO DEL MTODO

Despus de preparar un hemolizado, las hemoglobinas son retenidas por una resina de intercambio aninico. La hemoglobina A2 (HbA2) se eluye de forma especfica bajo estrictas condiciones de pH y fuerza inica, cuantificndose por lectura fotomtrica a 415 nm1.

CONTENIDO
COD 11077 1. Reactivo 2. Microcolumnas 80 mL 1 x 20 COD 11078 400 mL 1 x 100

El volumen de HbA2 (VHbA2 ) es 3 mL, el volumen de Hb total (VHb TOTAL) es de 12 mL y la media de la recuperacin (Rec) es 0,82. Se deduce la frmula siguiente para el clculo de la concentracin: A HbA 2 x 30,5 = % HbA2 A Hb TOTAL

VALORES DE REFERENCIA
Intervalo de referencia: 1,3 - 3,7 % Rasgo -Talasmico: 4,0 - 10,0 % Estos valores2 se dan nicamente a ttulo orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.

COMPOSICIN
1. Reactivo. Tampn biolgico 15 mmol/L, detergente 0,1 g/L, pH 7,6. 2. Microcolumnas. Contienen resina de intercambio aninico equilibrada. Utilizar nicamente Reactivo 1 y Microcolumnas del mismo nmero de lote.

CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda el uso de los controles de Hemoglobina A2 , Normal (cod. 10000) y Elevado (cod. 10011), para verificar la funcionalidad del procedimiento de medida. Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno, as como procedimientos de correccin en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.

CONSERVACIN
Conservar a 15-30C. El reactivo y las microcolumnas son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminacin durante su uso. Indicaciones de deterioro: Reactivo: Presencia de partculas, turbidez. Microcolumnas: Ausencia de tampn sobre el lecho de la resina, coloracin amarillenta de la resina.

CARACTERSTICAS METROLGICAS
Repetibilidad (intraserie):
Concentracin media 2,5 5,3 CV 4,1 5,2 n 25 25

EQUIPO ADICIONAL
Fotmetro para lecturas a 415 nm (405-425).

Reproducibilidad (interserie):
Concentracin media 2,5 5,3 CV 5,7 5,4 n 25 25

MUESTRAS
Sangre total recogida mediante procedimientos estndar. La hemoglobina A2 es estable durante 8 das a 2-8C. Puede utilizarse heparina o EDTA como anticoagulante.

Veracidad: Se compar este mtodo con HPLC obtenindose la siguiente correlacin: y (% HbA2 -BioSystems) = 0,950 x (%HbA2 - HPLC) + 0,11 Los resultados obtenidos con este mtodo no muestran diferencias sistemticas significativas als ser comparados con HPLC. Los detalles del estudio comparativo se encuentran disponibles bajo solicitud.

PROCEDIMIENTO
Preparacin del hemolizado 1. Pipetear en un tubo de ensayo:
Sangre Agua destilada 50 L 200 L

Interferencias: Las variantes de hemoglobina S y F no interfieren. Lpidos (triglicridos 10 g/L) y bilirrubina (20 mg/L) no interfieren. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir3.

Agitar. Este hemolizado se utilizar en los pasos 3 y 7. Separacin y lectura de la HbA2 (Notas 1 y 2) 2. Destapar la parte superior de la Microcolumna (2), romper a continuacin la lengeta inferior y bajar el disco superior hasta el nivel de la resina, evitando comprimirla, con la ayuda del extremo plano de una pipeta. Dejar gotear hasta que el lquido alcance el nivel del disco, desechando el eludo. 3. Aplicar cuidadosamente sobre el disco superior:
Hemolizado 50 L Desechar el eludo

CARACTERSTICAS DIAGNSTICAS
La -talasemia es una hemoglobinopata hereditaria caracterizada por una produccin disminuda de cadenas globnicas . Estas cadenas forman parte de la estructura de la hemoglobina A (22). En el rasgo -talasmico la concentracin de hemoglobina A2 (22) en sangre se encuentra elevada ya que se produce un aumento de la sntesis de hemoglobinas no constitudas por cadenas . En el diagnstico del rasgo -talasmico, deben tenerse en cuenta tanto los niveles de hemoglobina A2 como el historial familiar y los datos de laboratorio, incluyendo el hierro en suero y la capacidad de fijacin del hierro, la morfologa de los hemates, la hemoglobina, el hematocrito y el volumen corpuscular medio. El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sin que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.

4. Cuando haya penetrado todo el hemolizado aadir, procurando arrastrar los posibles restos del mismo:
Reactivo (1) 200 L Desechar el eludo

5. Colocar la microcolumna sobre un tubo de ensayo y aadir:

Reactivo (1) 3,0 mL Recoger el eludo (Fraccin HbA2)

NOTAS
1. El almacenaje prolongado de las columnas puede ocasionar un excesivo empacado de la resina que disminuye el flujo. Para evitarlo, colocar la columna en posicin invertida unos 10 min, volverla a su posicin original y esperar que sedimente la resina antes de romper la lengeta inferior. 2. La ocasional presencia de burbujas no afecta la determinacin.
12,0 mL 50 L
TOTAL).

6. Agitar bien y leer la absorbancia (A) de la fraccin HbA2 a 415 nm frente a agua destilada (AHbA2). La absorbancia es estable al menos durante seis horas. Lectura de la hemoglobina total (HbTOTAL) 7. Pipetear en un tubo de ensayo:
Agua destilada Hemolizado

BIBLIOGRAFA
1. Abraham EC et al. Hemoglobin 1976-77; 1:27-44. La 2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed. Saunders Co, 1999. 3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.

8. Agitar bien y leer la absorbancia (A) a 415 nm frente a agua destilada (AHb absorbancia es estable al menos durante seis horas.

CLCULOS
El tanto por ciento de HbA2 en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general. A HbA 2 x VHbA 2 A Hb TOTAL x VHb TOTAL x 100 = % HbA2 Rec

M11077c-0604

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11/2006