PREPARACIN DE LA MUESTRA PARA EL ANLISIS

En esta tarea se han de determinar las etapas, por orden de realizacin, que se deberan utilizar para la preparacin de la muestra (en nuestro caso se corresponde con un preparado farmacutico con cido acetilsaliclico o paracetamol como principios activos). Recordemos que la realizacin del anlisis est precedida por una serie de pasos muy elaborados, tanto o ms que la medicin en s. Por lo general se distinguen los siguientes pasos: Definir la problemtica analtica (el objeto de estudio). Realizar operaciones previas (toma de la muestra, preparacin de la muestra, eliminacin de interferencias, etc.). Medicin del analito (anlisis en s). Clculos (adquisicin de datos). Anlisis e interpretacin de los resultados. El punto que trataremos sobre estas lneas se corresponde con lapreparacin de la muestra. Al igual que nos ocurri en trabajos anteriores, nos encontramos con el problema de que se nos asign una muestra genrica: cualquier frmaco que contenga los analitos previamente citados, lo cual implica no slo que los excipientes que nos podamos encontrar (y por lo tanto las muestras) sean muy variables en funcin al laboratorio que las comercialice, sino que en funcin a cmo se presenten (comprimidos, supositorios, en suspensin lquida) el procedimiento de preparacin de la muestra podr ser diferente. Es por esto por lo que hemos decidido partir de una muestra slida, como por ejemplo

un comprimido masticable de Termalgin 500 mg, en donde adems de paracetamol como principio activo nos encontramos con una serie de excipientes: talco, povidona, almidn de maz, almidn de maz pregelatinizado, slice coloidal anhidra, celulosa microcristalina y cido esterico. Una vez seleccionado el objeto que se va a estudiar, hemos de caracterizarlo para saber cmo lo debemos tratar para su anlisis. Aunque podramos pensar que se trata de una mezcla homognea (ya que la industria farmacutica homogeniza muy bien la

mezcla para separar la dosis exacta en cada comprimido) es difcil que lo sea ya que en el proceso de compresin se suele diferenciar esa mezcla. Concluimos, pues, que estamos ante un objeto heterogneo cuyas propiedades van cambiando de forma discreta a travs del mismo (esto es lo que ocurre en la mayora de objetos a analizar en problemticas analticas reales).

Partiendo del objeto se ha de seleccionar la muestra, la cual ha de presentar una serie de caractersticas: Representar fielmente las propiedades del objeto. Presentar un tamao manejable. Conservar sus propiedades durante el transporte y anlisis. Transmitir la informacin requerida para resolver el problema. Mantener las mismas propiedades del objeto en el momento del muestreo.

En nuestro caso, el propio objeto en su totalidad (es decir, un comprimido de Termalgin 500 mg) cumple todas esas caractersticas, por lo que ya lo podramos considerar como nuestra muestra bruta. El siguiente paso consistira en obtener la muestra de laboratorio por reduccin directa de la muestra bruta, para lo cual estaran implicadas una serie de prcticas previas al trabajo en el laboratorio. Sin embargo, como el tamao que presenta ya es totalmente manejable (permite analizar al objeto en su totalidad) ya lo podramos considerar como nuestra muestra de laboratorio. De esta forma conseguimos evitar una serie de pasos previos al laboratorio que s seran necesarios en el caso de otras muestras, pero no en el caso de la nuestra: - Reducir el tamao de la muestra mediante diferentes mecanismos. En nuestro caso la muestra ya presenta un tamao totalmente manejable, por lo que prescindiremos de este paso.

- Mezclar las partculas de la muestra: a ms cantidad de la muestra a considerar, menos error. En nuestro caso, como la muestra es el objeto en su totalidad, este paso tampoco sera necesario y adems apenas cometeramos error ya que podremos hacer el anlisis de todo el contenido del frmaco, es decir, de todo el objeto. Una vez sealadas dichas aclaraciones sobre el trabajo previo al laboratorio podemos pasar ya al trabajo en laboratorio en s. Habr que tener en cuenta que el tratamiento de la muestra depender de diversos factores, entre ellos: Su estado fsico (en nuestro caso slido). El tipo de matriz (en nuestro caso es un componente orgnico sinttico). El tipo de analito y su concentracin (en nuestro caso tenemos 500 mg de paracetamol en la muestra, por lo que se tratara de un componente macro). Otro aspecto importante a tener en cuenta es que en todos los pasos se deben evitar errores sistemticos (de laboratorio) que originaran una variacin en la composicin qumica de la muestra, tales como: La contaminacin de la muestra (es decir, que caiga en la muestra alguna sustancia que no tena). La prdida de analitos (por ejemplo, si hay que hacer algn trasvase, que no queden gotas por el camino, etc.). Veamos, pues, cules seran los pasos que tendramos que llevar a cabo para el procesado de nuestra muestra en el laboratorio: 1) PULVERIZACIN: Los slidos pueden pulverizarse con un mortero, cuyo material depender de la dureza de la muestra a pulverizar. En nuestro caso podemos prescindir de un previo paso de trituracin con molino de discos o de bolas ya que nuestra muestra es pequea y de poca dureza con lo que es suficiente con el uso del mortero, el cual podr ser de porcelana o vidrio (si la muestra fuese dura, como muchos minerales, podramos usar un mortero de acero o gata). Al pulverizar conseguimos reducir el tamao de partcula, de tal forma que al poseer mayor rea superficial se disolver mejor. Habr que tener especial cuidado de evitar contaminaciones que puedan ser responsables de la aparicin de errores de tipo sistemtico: los morteros ms econmicos tienden a ser ms porosos y a rayarse con mayor facilidad, lo cual podra provocar contaminacin de la muestra con el material del mortero.

2) HOMOGENEIZACIN: Una vez pulverizada la muestra ser necesario homogeneizar el polvo obtenido. Para ello simplemente lo hacemos rodar sobre unahoja de papel satinado (muy liso y resbaladizo). Dado que es fcil de obtener mediante el uso del mortero el frmaco totalmente desmenuzado en un polvo fino y homogneo, podemos prescindir del proceso de tamizado. 3) CONSERVACIN: Es probable que se desee conservar la muestra si no se quiere

analizar de forma inmediata. Entonces, para evitar que se produzca su degradacin o la prdida del analito, se deber almacenar y etiquetar en las condiciones ms favorables y encontenedores adecuados (si no es as, debido a factores fsicos como la temperatura, la exposicin a la luz o la naturaleza del contenedor se podran producir cambios en la muestra que alteraran los resultados). De igual modo, para garantizar una mnima variabilidad de los componentes de la muestra al mismo tiempo que se protege de la degradacin se debe almacenar en un contenedor que no contamine a la muestra ni adsorba analitos en sus paredes. La eleccin del material del contenedor depender del tipo de muestra: en nuestro caso, como se trata de una muestra orgnica (aunque sinttica) se usarn preferentemente contenedores que no sean de plstico (ya que stos tambin son de naturaleza orgnica y podra haber interferencias) como frascos de cermica: cuarzo, cristal, porcelana 4) SECADO: Antes del anlisis, los slidos suelen secarse a 110C a presin atmosfrica a fin de eliminar el agua adsorbida. Adems, en el caso de que se quisiera almacenar, las muestras secas se conservan mejor. Por otra parte, en el caso de querer analizarla, la muestra de anlisis debe tener una composicin constante con respecto a la humedad que la impregna ya que sta puede afectar a operaciones posteriores. Al mismo tiempo, los resultados suelen expresarse

en funcin del peso seco de la muestra.

Para secar nuestro homogeneizado en polvo de comprimido de paracetamol podramos usar unaestufa a unas temperaturas sobre los 100C. El secado se considerar completo cuando el peso de la muestra sea constante. La utilizacin de liofilizadores no sera necesaria en este caso ya que no existe riesgo elevado de descomposicin o prdida del analito a esas temperaturas. Una vez seca, la muestra debe guardarse en un desecador para que no vuelva a adsorber humedad. Los desecadores contienen en su interior un desecante, como la slica gel, que adsorbe todo el agua. En funcin al color que tome el desecante sabremos que se ha captado ms o menos agua (cuando se hidrata la slica gel se vuelve de color rosa y para que siga funcionando habr que quitarle el agua: la ponemos en una estufa hasta que pierda la humedad, lo cual es fcil de saber ya que se vuelve de color azul).

5) PESADO: Habr que saber la cantidad de muestra que se va a analizar para posteriormente ser capaces de hacer bien los clculos. Para ello usaremos una balanza y, en funcin a la

precisin que requiera nuestro anlisis, sta podr ser: De tipo granataria: precisin hasta la centsima o milsima de gramo (para pesos aproximados). Balanza analtica: como mnimo una precisin de dcimas de miligramo. Sera mejor usar este tipo de balanzas ya que es ms precisa (incluso estn cerradas mediante vidrios para que no afecten las corrientes de aire). Usemos la balanza que usemos la pesada podr ser directa (por adicin: se aade la cantidad en la balanza y se lee el resultado) oindirecta mediante el mtodo por diferencia (primero pesamos el contenido total, luego le sacamos a ste la cantidad con la que vamos a trabajar y luego pesamos lo que queda: habr que calcular la diferencia). De todas formas, en nuestro caso podemos pesar la muestra pulverizada entera (es decir, el comprimido entero) de tal forma que usaremos la pesada directa. 6) DISOLUCIN: Una vez hechos todos los pasos anteriores, slo nos queda disolver la muestra para el anlisis de los constituyentes deseados (en la mayora de los procedimientos analticos la medida del analito en una muestra se realiza va disolucin). Es importante disolver toda la muestra o de lo contrario existir la duda de si se disolvi todo el analito de inters.

En funcin a la naturaleza de la muestra y al tratamiento al que va a ser sometida posteriormente se usarn distintos mtodos para disolverla. El disolvente no debe adicionar ningn componente que luego modifique el anlisis y adems debe disolver a la muestra completamente. En nuestro caso podremos disolver la muestra por va hmeda usando agua como disolvente (la solubilidad del paracetamol en agua es de 1,4 g/100 ml a 20C). Al usar agua, no se llevarn a cabo reacciones qumicas. El hecho de emplear agua presenta una serie de ventajas: -No se suelen producir prdidas del analito. -No se producen ataques en las paredes del recipiente donde se produce la disolucin. -No existen riesgos para el analista. Si por ejemplo en vez de considerar un comprimido de paracetamol considerramos una aspirina efervescente, bastara con introducir sta en agua a temperatura ambiente gracias a las propiedades de la muestra. Se deben evitar otros mtodos de disolucin que puedan destruir la materia orgnica ya que nuestro analito presenta esa misma naturaleza. Para llevar a cabo la disolucin basta con aadir la muestra a un volumen determinado de agua en un vaso de precipitados u otro recipiente de laboratorio similar y agitar para facilitar el proceso. No hace falta usar recipientes cerrados ya que la prdida del analito es nula (el punto de ebullicin del paracetamol es superior a los 500C).

VALIDACIN DE CIDO ACETILSALICLICO Y PARACETAMOL EN PREPARADOS FARMACUTICOS

1. INTRODUCCIN: La validacin analtica consiste en comprobar que los procedimientos e instrumentos utilizados en los anlisis son seguros y fiables. Si los mtodos analticos no se validaran podran producirse valores falsos que comprometeran la calidad de los mismos. En el desarrollo de un mtodo de validacin analtica es necesario considerar diferentes parmetros tales como la precisin (es decir, la determinacin sobre mltiples muestras del mismo parmetro varias veces, comprobando la coincidencia entre s) o

laexactitud (es decir, la comparacin del resultado aceptado o real de la muestra con el obtenido en el resultado analtico o con la media de un conjunto de resultados). A continuacin se hablar de diferentes mtodos y materiales que se pueden utilizar en el proceso de validacin de la determinacin de cido acetilsaliclico y paracetamol en preparados farmacuticos, seguido de un ejemplo en el que se calcula la exactitud y precisin de la determinacin de uno de esos analitos (paracetamol) en una muestra concreta. 2. MTODO PARA LA VALIDACIN DE CIDO ACETILSALICLICO EN PREPARADOS FARMACUTICOS: 2.1. INTRODUCCIN: Para realizar la determinacin de un analito en una muestra se emplea un mtodo oficial de anlisis. En nuestro caso queremos determinar la presencia de cido acetilsaliclico en preparados farmacuticos y para ello utilizaremos un mtodo de tipo experimental denominado Cromatografa Lquida de Alta Eficacia oHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC), una tcnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatogrfica. 2.2. CROMATROGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC): La HPLC es un tipo de cromatografa en columna muy utilizado en bioqumica y qumica analtica para la separacin y anlisis cuantitativo de una amplia variedad de mezclas, especialmente aquellas en las cuales sus componentes no son voltiles o son trmicamente inestables para ser separados por cromatografa de gases o en capa fina dado que esta tcnica evita el contacto con el aire y la luz. El compuesto se hace pasar por la columna cromatogrfica a travs de la fase estacionaria (normalmente un cilindro con pequeas partculas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de un lquido ( fase mvil) a alta presin a travs de la columna (lo cual permite que los compuestos avancen ms rpidamente a travs de la columna acelerando el proceso). Los componentes de la muestra a analizar se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones con la fase estacionaria a medida que atraviesan la columna. El grado de retencin de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, as como de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil.

El objetivo es la separacin y determinacin cuantitativa del cido acetilsaliclico en nuestra muestra (frmaco analgsico) a travs de un calibrado con patrones. Los datos cromatogrficos sern procesados por un ordenador que contiene un programa de integracin.

MATERIAL: El material de laboratorio necesario para este anlisis incluye los siguientes aparatos o instrumentos:

- Cromatogrfo de lquidos de alta eficacia Perkin Elmer con detector UV-visible - Columna cromatogrfica C18 de 15 cm de longitud, 4.0 mm de dimetro interno y 5 m de tamao de partcula. Filtros para disolventes de 0.40 m. 8 matraces aforados de 10 mL. 2 matraces aforados de 100 mL. 1 matraz aforado de 500 mL. 1 matraz aforado de 1000 mL. Pipeta graduada de 10 mL. Pipeta graduada de 5 mL.

REACTIVOS Y DISOLUCIONES: Los reactivos que requerimos son cido acetilsaliclico (slido), metanol, cido fosfrico y agua destilada. Con estos reactivos preparamos las siguientes disoluciones: -Disolucin de 500 mg/L de cido acetilsaliclico. Para ello pesamos una cantidad adecuada del analito para preparar 100 mL de disolucin y la disolvemos en metanol. -Fase mvil: mezcla de metanol/agua/cido fosfrico formada por 40% de metanol, 59.92% de agua y 0.08% de cido fosfrico. PROCEDIMIENTO: En primer lugar, para la obtencin del calibrado, se preparan disoluciones patrn que contengan entre 20 y 100 g/mL de aspirina en la fase mvil. Se fija la longitud de onda de deteccin en 254 nm y el caudal en 1.0 mL/min. Una vez obtenidas las disoluciones del analito con la fase mvil se inyectan en el cromatgrafo de lquidos las mezclas preparadas y se registran las reas resultantes. Con esos datos se construye una curva de calibrado en la cual enfrentamos las reas

de los picos cromatogrficos con la concentracin correspondiente en cada caso. Esta curva se puede representar a travs de programas informticos del tipo hoja de clculo, donde adems se calculan las ecuaciones automticamente. RESULTADOS:

Finalmente, concluiremos nuestro estudio con la determinacin de la concentracin de cido acetilsaliclico en la muestra de preparado farmacutico. Para ello se inyectan 20 l de muestra tres veces y se cuantifican los picos correspondientes a aspirina a partir de la curva de calibrado obtenida en el apartado anterior. El resultado se expresa como g de aspirina por mL de muestra. Necesitaremos las ecuaciones de la curva de calibrado y el clculo de la regresin lineal o calidad de ajuste, as como tambin el clculo del intervalo de confianza y precisin. 3. MTODO PARA LA VALIDACIN DE PARACETAMOL EN PREPARADOS FARMACUTICOS: 3.1. INTRODUCCIN: La Food and Drug Administration (FDA) establece laespectrofotometra UV como mtodo de referencia para la cuantificacin de paracetamol. Esta tcnica es el mtodo deanlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas ybiolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. La espectrofotometra UV usa haces de radiacin del espectro electromagntico en el rango UV de 80 a 400 nm (principalmente de 200 a 400 nm) y en el de la luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro. En este trabajo vamos a validar el mtodo conductimtrico(basado en la diferente conductividad del sistema a distintos intervalos de tiempo debido a las diferentes concentraciones de solutos) teniendo en cuenta el mtodo de referencia para la validacin de calidad del paracetamol, valorando su exactitud, rapidez, precisin en el anlisis. 3.2. MATERIALES Y MTODOS: Materia Prima: - Paracetamol principio activo, Lote N0220436, origen Dinamarca. - Comprimidos de paracetamol 500 mg, Lote N018, preparado por PLAMECOR. Reactivos: - Soluciones estndar de NaOH 0.130N y 0.036N.

- Hidrxido de amonio concentrado (26% p/p) p.a. Equipos: - Conductmetro Digital Prsec. Rango de lectura: 0,1 - 2 .105 S. Exactitud: 0,5%. - Celda de titulacin de vidrio con encamisado p/ termostatizacin. Volumen til: 150 mL. - Agitador magntico. - Bureta de 25 mL con llave de tefln. - Balanza analtica. 3.3. PROCEDIMIENTO DEL MTODO CONDUCTIMTRICO: Se estandariza el conductmetro utilizando distintas masas de la droga base llevndolas a un volumen final de 150 ml con agua destilada. Para los anlisis se parte, en cada caso, de una solucin homognea preparada a partir de 1 comprimido de paracetamol en 500 ml de agua destilada. Una alcuota de 150 mL, tericamenteequivalentes a 150 mg de paracetamol, se transfiere al vaso de valoracin y se adiciona un volumen dado de amonaco. Una vez sumergidos los electrodos y la barra magntica se conecta el conductmetro. Se registra la conductancia despus de cada agregado del valorante (NaOH). Graficando el volumen de NaOH (mL) con respecto a la conductancia (L, en s) se localiza el punto final y se determina la masa de paracetamol presente en la muestra.

Como conclusiones del mtodo conductimtrico: - Es lineal en el rango de 50 a 300 mg de paracetamol (es decir, puede dar lugar a resultados proporcionales a la concentracin del analito en la muestra). - Su precisin y exactitud son comparables con las del mtodo de referencia (Espectrofotomtrico UV). - Es simple y utiliza un equipo de bajo costo. - Aplicable para el anlisis de rutina de formulaciones farmacuticas sin interferencias de los excipientes comunes. - Es rpido y fcilmente automatizable. 4. CLCULO DE LA PRECISIN Y EXACTITUD DE LA DETERMINACIN DE PARACETAMOL EN COMPRIMIDOS DE 500mg MEDIANTE EL MTODO CONDUCTIMTRICO: Tomando estos datos como referencia:

PRECISIN: comparacin de varianzas mediante un test F de dos colas.

Podemos aceptar con un 95% de probabilidad que las varianzas del mtodo de referencia (espectrometra UV) y del mtodo a evaluar (conductimetra) son comparables. Como sabemos que las varianzas son comparables y como el mtodo de referencia es preciso afirmamos que el mtodo a evaluar (conductimetra) tambin es PRECISO. EXACTITUD: comparacin de medias.

Como las varianzas son comparables hacemos una varianza conjunta.

Podemos afirmar con un 95% de probabilidad que el mtodo a evaluar (conductimetra) es EXACTO porque damos por hecho que el mtodo de referencia (espectrometra UV) lo es.

Anlisis qumico
sbado, 12 de junio de 2010

TCNICAS DE DETERMINACIN
1. INTRODUCCIN: En esta ltima tarea se determinar la concentracin de nuestro analito (paracetamol o cido acetilsaliclico) en la muestra. Se pueden emplear diversos mtodos. Uno de ellos, como ya hemos introducido en la tarea anterior, es la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) que sirve tanto para separar e identificar los componentes de una muestra (desarrollado en el trabajo previo) como para cuantificarlos (lo cual se correspondera con esta tarea). As, para determinar la cantidad presente de cada sustancia, se valoran las reas bajo los picos del cromatograma o la altura de los mismos: sirven para determinar la cuanta de cada componente. El programa informtico asociado al sistema HPLC ya nos da estos datos. Sin embargo, dado que sobre el fundamento del HPLC ya hemos profundizado lo suficiente en trabajos anteriores, hemos decido centrarnos en otros tipos de tcnicas de determinacin: lastcnicas espectroscpicas.

2. DESARROLLO DE LA TCNICA: ESPECTROSCOPA MOLECULAR ULTRAVIOLETA-VISIBLE Usaremos esta tcnica debido a su sencillez instrumental y a su amplio rango de aplicacin. Como se fundamenta en la absorcin de radiacin electromagntica por las molculas de la muestra (siendo la cantidad absorbida proporcional a la concentracin de las molculas que se quieren determinar) debemos hacer que el paracetamol (o el cido acetilsaliclico) se una a un colorante o bien que cause su activacin de tal forma que ste, al absorber en el espectro visible, nos sirva para determinar la cantidad del analito.

Por ejemplo, podemos hacer que el paracetamol se una a uncolorante azoico, como la bencidina. Los colorantes azoicos forman parte de una familia de sustancias orgnicas caracterizadas por la presencia del grupo azo (N=N) como cromforo, asociados a grupos auxocromo de tipo amino o hidroxilo. Para la bencidina podemos obtener buenos resultados usando una longitud de onda de 495 nm.

Una vez aclarados estos aspectos previos sobre el fundamento de la tcnica, procedamos a su desarrollo:

2.1. Elaboracin de la recta de calibrado: Se puede definir calibracin como el conjunto de operaciones que se establecen para obtener la relacin entre las seales producidas por un instrumento analtico y los correspondientes valores de concentracin o masas del conjunto de patrones de calibrado. Para ello lo ms usado es la curva de calibrado, para cuya elaboracin se emplean cantidades perfectamente conocidas de analito (disoluciones patrn). En nuestro caso realizaremos, por ejemplo, una serie de disoluciones que contengan 0 mg/ml (el blanco), 3, 6, 9, 12 y 15 mg/ml de paracetamol, respectivamente. A cada disolucin le agregaremos tambin el reactivo de color (no entraremos en detalle en la explicacin de estos pasos). A continuacin leeremos en el espectrofotmetro cada una de las disoluciones de concentracin conocida a una longitud de onda de 495 nm. Imaginemos que los datos obtenidos fueran los siguientes:

Haciendo la representacin grfica, se observa lo siguiente:

Se aprecia que la relacin entre la concentracin del analito y la absorbancia es lineal. Ante nuestra muestra problema (la muestra de concentracin desconocida que queremos determinar), tras realizar la medida de su absorbancia, sta se interpola en la recta de calibrado para obtener as la concentracin del analito en esa muestra.

Adems del mtodo grfico previamente explicado, tambin se puede hallar la ecuacin de la recta. Para ello usaremos la tcnica de regresin por mnimos cuadrados. La recta tendr una ecuacin genrica del tipo y = mx + b, siendo y la absorbancia y x la concentracin del analito (en nuestro caso paracetamol). Para hallar la pendiente de la recta (m)usaremos la siguiente frmula:

Siendo n el nmero de pares de valores. Si sustituimos:

Calculamos ahora el valor de la ordenada en el origen (b):

por lo que

Nuestra ecuacin de la recta de calibrado sera, pues:

De esta forma, sabiendo la absorbancia de nuestra muestra problema y sustituyendo en la frmula podremos saber la concentracin de paracetamol en la muestra problema. Por ejemplo, si la absorbancia de la muestra cuya concentracin de paracetamol desconocemos fuese de 0.236:

mg de paracetamol por ml (tambin se podra calcular interpolando en la grfica, pero as es ms exacto).

2.2.Determinacin de algunos parmetros de calidad del mtodo realizado:

Existen una serie de parmetros cuantitativos que sonindicadores de la calidad de las metodologas analticas. Nosotros hallaremos algunos de ellos:

A) Sensibilidad: expresa la respuesta del instrumento analtico para una concentracin determinada de analito. Un mtodo analtico ser ms sensible cuanto mayor sea la variacin de la seal analtica y para una variacin de la concentracin del analito x dada. Por ejemplo, en nuestro caso, si para 3 mg/ml de paracetamol la absorbancia fuese de 0.070 en vez de 0.052, ese otro mtodo sera ms sensible. La sensibilidad viene dada por la pendiente de la curva de calibrado m, que en nuestro caso es igual a 0.0176. Cuanto mayor sea, ms sensible ser el mtodo.

B) Lmite de deteccin (yLOD): Es la mnima concentracin de analito que proporciona una seal en el instrumento analticosignificativamente diferente de la seal del blanco. Para determinarlo hay que hacer un total de 30 blancos: obtendramos 30 seales de absorbancia para el blanco. Imaginemos que esas 30 seales fueron: 0.000 nos dio 24 veces 0.001 nos dio 5 veces 0.002 nos dio 1 vez La frmula que nos permite calcular el lmite de deteccin es:

Por lo que si sustitumos:

yLOD = 0.00023 + 30.00049 = 0.0017 El resultado viene en forma de seal (absorbancia). Para obtener la concentracin habr que sustituir en la recta de calibrado: 0.0017 = 0.0176x 0.0008 x = 0.142 mg/ml (esta es la mnima concentracin de paracetamol que proporciona una seal en el instrumento analtico significativamente diferente a la seal del blanco).

C) Lmite de cuantificacin (yLOQ): Expresa la concentracin del analito que puede determinarse con seguridad (la mnima concentracin a partir de la cual podemos cuantificar). La frmula que nos permite calcularlo es:

Al sustituir:

yLOQ = 0.00023 + 100.00049 = 0.00513

De nuevo, el resultado viene en forma de absorbancia. Para obtener la concentracin habr que sustituir en la recta de calibrado:

0.00513 = 0.0176x 0.0008

x = 0.337 mg/ml (esta es la mnima concentracin de paracetamol a partir de la cual podemos cuantificar con seguridad).
Publicado por Gonzalo, Gabriela, Isabel, Adrin, Andrea en sbado, junio 12, 2010 2 comentarios:

lunes, 24 de mayo de 2010

TCNICAS DE SEPARACIN
1) Introduccin a las tcnicas de separacin: En esta cuarta tarea partiremos de un preparado farmacutico, nuestra muestra, a partir de la cual queremos obtener mediante tcnicas de separacin el analito (cido acetilsaliclico o paracetamol). Recordemos que habamos dejado nuestra muestra completamente diluda en agua tras un previo proceso de preparacin de la muestra tratado en la tarea anterior. Existen muchas tcnicas de separacin, empleando una u otra en funcin de cada caso particular (deberemos fijarnos en el estado de la muestra y en las propiedades especficas del analito). En nuestro caso, hemos escogido como tcnica ms adecuada la cromatografa. Esta eleccin se centra fundamentalmente en que se trata de uno de los mtodos ms utilizado en todas las reas de la ciencia y que permite la separacin e incluso la identificacin y determinacin de los componentes qumicos de mezclas complejas. Adems ningn otro mtodo de separacin es tan potente y de aplicacin tan general, y es totalmente compatible con nuestra muestra. 2) Caractersticas generales de la cromatografa: Todos los mtodos cromatogrficos tienen en comn el uso de una fase estacionaria y una fase mvil. La muestra se desplaza con la fase mvil, que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que se fija a una columna o a una superficie slida. Las dos fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario, los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria se movern con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

3) Tipos de mtodos de separacin cromatogrfica y eleccin del que vamos a usar: Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de diferentes modos, entre los que destacamos dos de ellos: - El primero de ellos se basa en la forma en que las fases estacionaria y mvil se ponen en contacto (la tcnica cromatogrfica usada), diferencindose as la cromatografa en columna de la cromatografa en plano o plana. En nuestro caso hemos escogido la cromatografa en columna, donde un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a travs de la cual se hace pasar la fase mvil por presin o gravedad. - El segundo se centra en el tipo de fase mvil, diferenciando as la cromatografa de lquidos, cromatografa de gases y cromatografa de fluidos supercrticos (la cromatografa lleva el nombre de la fase mvil). Segn esto, nosotros hemos escogido la cromatografa de lquidos, ya que la fase mvil es un lquido (nuestro analito est completamente diluido en agua). Adems, esto lo podemos llevar a cabo perfectamente en columna. Dentro de la cromatografa de lquidos se diferencian la cromatografa de reparto (lquido-lquido) y la de adosrcin (lquido-slido), ambas con mltiples aplicaciones, entre ellas la separacin de los componentes de frmacos (antibiticos, sedantes y analgsicos, como en nuestro caso). 4) Desarrollo del mtodo de separacin: cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC): Los mtodos anteriormente explicados se pueden desarrollar con gran eficacia mediante un sistema HPLC: se utiliza un instrumento compuesto por un reservorio de la fase mvil, una bomba, un inyector, una columna de separacin y un detector. La muestra se hace pasar a travs de la columna (con la fase estacionaria) mediante el bombeo de la fase mvil lquida (de ah la necesidad de una bomba de alta presin que permita que el lquido fluya por la columna, evitando de esta

forma el posible estancamiento causado por la fase estacionaria). La muestra se introduce en pequeos volmenes gracias a la actuacin del inyector (que introduce de forma automatizada cantidades especficas de la muestra) y llegar a la columna en donde se retarda por medio de interacciones qumicas con la fase estacionaria. El retardo es eltiempo de retencin, nico para cada sustancia (de ah la base del estudio cualitativo: el tiempo de retencin depender de la naturaleza de la sustancia, de la fase estacionaria y de la composicin de la fase mvil). Si colocamos al final de la columna un detector que responde a la concentracin del soluto y se registra su seal en funcin del tiempo (o del volumen de fase mvil aadido) se obtienen una serie de picos que representan un grfico denominado cromatograma. Este grfico es til tanto para el anlisis cualitativo como cuantitativo: - La posicin de los picos en el eje del tiempo sirve para identificar los componentes de la muestra (anlisis cualitativo basado en el tiempo de retencin: el tiempo que transcurre desde la inyeccin de la muestra hasta que el pico de concentracin del analito alcanza el detector). - Las reas bajo los picos o la altura de los mismos proporcionan unamedida cuantitativa: sirven para determinar la cantidad de cada componente (aunque de esto nos ocuparemos en la tarea 5).

Un tipo de HPLC que podremos usar en nuestro caso es el de fase normal, el cual separa las sustancias segn su polaridad. Usa una fase estacionaria polar y una fase mvil no polar que se utiliza cuando el analito es polar (como el paracetamol). El analito polar es retenido por la fase estacionaria polar. La adsorcin aumenta con la polaridad del analito (aumenta la interaccin entre el analito y la fase estacionaria). Este mtodo presenta gran sensibilidad, permite hacer determinaciones cuantitativas exactas, separar especies no voltiles y tiene gran aplicabilidad: aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, frmacos (como en nuestro caso), plaguicidas, antibiticos, esteroides, especies organometlicas e inorgnicas. Otro tipo de HPLC que tambin nos es vlido es el de fase reversa, en donde la fase estacionaria es apolar y la fase mvil tiene polaridad moderada (caso contrario al anterior). En este tipo de cromatografa se utiliza una fase estacionaria hidrofbica [como por ejemplo octadecilsilano qumicamente unido a partculas

porosas de slice de 3 y 10 m de dimetro: se suelen utilizar sustancias hidrofbicas con grupos funcionales octadecilo (C 18) u octilo (C 8)] y una fase mvil polar, frecuentemente una fase mvil parcial o totalmente acuosa. Las sustancias polares prefieren la fase mvil y eluyen primero.

De esta forma se conseguirn separar los diferentes componentes de la muestra (paracetamol y excipientes, o bien cido acetilsaliclico y excipientes). La interpretacin de los distintos picos cromatogrficos en base a su orden de aparicin y tiempos de retencin nos permitir elaborar un

estudio cualitativo. Si el mtodo usado fue el de fase normal, el analito menos polar ser el primero que se eluye y el ms polar el ltimo en elur. En este caso A sera el menos polar y C el ms polar.

Si el mtodo usado fue el de fase reversa, el analito ms polar ser el primero que se eluye y el ms apolar el ltimo en elur. En este caso C sera el ms polar y A el ms apolar.
El estudio cuantitativo del cromatograma se desarrollar en la prxima tarea.
Publicado por Gonzalo, Gabriela, Isabel, Adrin, Andrea en lunes, mayo 24, 2010 No hay comentarios:

sbado, 15 de mayo de 2010

PREPARACIN DE LA MUESTRA PARA EL ANLISIS

En esta tarea se han de determinar las etapas, por orden de realizacin, que se deberan utilizar para la preparacin de la muestra (en nuestro caso se corresponde con un preparado farmacutico con cido acetilsaliclico o paracetamol como principios activos). Recordemos que la realizacin del anlisis est precedida por una serie de pasos muy elaborados, tanto o ms que la medicin en s. Por lo general se distinguen los siguientes pasos:

Definir la problemtica analtica (el objeto de estudio). Realizar operaciones previas (toma de la muestra, preparacin de la muestra, eliminacin de interferencias, etc.).

Medicin del analito (anlisis en s). Clculos (adquisicin de datos). Anlisis e interpretacin de los resultados.

El punto que trataremos sobre estas lneas se corresponde con lapreparacin de la muestra. Al igual que nos ocurri en trabajos anteriores, nos encontramos con el problema de que se nos asign una muestra genrica: cualquier frmaco que contenga los analitos previamente citados, lo cual implica no slo que los excipientes que nos podamos encontrar (y por lo tanto las muestras) sean muy variables en funcin al laboratorio que las comercialice, sino que en funcin a cmo se presenten (comprimidos, supositorios, en suspensin lquida) el procedimiento de preparacin de la muestra podr ser diferente. Es por esto por lo que hemos decidido partir de una muestra slida, como por ejemplo un comprimido masticable de Termalgin 500 mg, en

donde adems de paracetamol como principio activo nos encontramos con una serie de excipientes: talco, povidona, almidn de maz, almidn de maz pregelatinizado, slice coloidal anhidra, celulosa microcristalina y cido esterico. Una vez seleccionado el objeto que se va a estudiar, hemos de caracterizarlo para saber cmo lo debemos tratar para su anlisis. Aunque podramos pensar que se trata de una mezcla homognea (ya que la industria farmacutica homogeniza muy bien la mezcla para separar la dosis exacta en cada comprimido) es difcil que lo sea ya que en el proceso de compresin se suele diferenciar esa mezcla. Concluimos, pues, que estamos ante un objeto heterogneo cuyas propiedades van cambiando de forma discreta a travs del mismo (esto

es lo que ocurre en la mayora de objetos a analizar en problemticas analticas reales).

Partiendo del objeto se ha de seleccionar la muestra, la cual ha de presentar una serie de caractersticas: - Representar fielmente las propiedades del objeto. - Presentar un tamao manejable. - Conservar sus propiedades durante el transporte y anlisis. - Transmitir la informacin requerida para resolver el problema. - Mantener las mismas propiedades del objeto en el momento del muestreo. En nuestro caso, el propio objeto en su totalidad (es decir, un comprimido de Termalgin 500 mg) cumple todas esas caractersticas, por lo que ya lo podramos considerar como nuestra muestra bruta. El siguiente paso consistira en obtener la muestra de laboratorio por reduccin directa de la muestra bruta, para lo cual estaran implicadas una serie de prcticas previas al trabajo en el laboratorio. Sin embargo, como el tamao que presenta ya es totalmente manejable (permite analizar al objeto en su totalidad) ya lo podramos considerar como nuestra muestra de laboratorio. De esta forma conseguimos evitar

una serie de pasos previos al laboratorio que s seran necesarios en el caso de otras muestras, pero no en el caso de la nuestra: - Reducir el tamao de la muestra mediante diferentes mecanismos. En nuestro caso la muestra ya presenta un tamao totalmente manejable, por lo que prescindiremos de este paso. - Mezclar las partculas de la muestra: a ms cantidad de la muestra a considerar, menos error. En nuestro caso, como la muestra es el objeto en su totalidad, este paso tampoco sera necesario y adems apenas cometeramos error ya que podremos hacer el anlisis de todo el contenido del frmaco, es decir, de todo el objeto. Una vez sealadas dichas aclaraciones sobre el trabajo previo al laboratorio podemos pasar ya al trabajo en laboratorio en s. Habr que tener en cuenta que el tratamiento de la muestra depender de diversos factores, entre ellos:

Su estado fsico (en nuestro caso slido). El tipo de matriz (en nuestro caso es un componente orgnico sinttico). El tipo de analito y su concentracin (en nuestro caso tenemos 500 mg de paracetamol en la muestra, por lo que se tratara de un componente macro).

Otro aspecto importante a tener en cuenta es que en todos los pasos se deben evitar errores sistemticos (de laboratorio) que originaran una variacin en la composicin qumica de la muestra, tales como:

La contaminacin de la muestra (es decir, que caiga en la muestra alguna sustancia que no tena). La prdida de analitos (por ejemplo, si hay que hacer algn trasvase, que no queden gotas por el camino, etc.).

Veamos, pues, cules seran los pasos que tendramos que llevar a cabo para el procesado de nuestra muestra en el laboratorio:

1) PULVERIZACIN: Los slidos pueden pulverizarse con un mortero, cuyo material depender de la dureza de la muestra a pulverizar. En nuestro caso podemos prescindir de un previo paso de trituracin con molino de discos o de bolas ya que nuestra muestra es pequea y de poca dureza con lo que es suficiente con el uso del mortero, el cual podr ser de porcelana o vidrio (si la muestra fuese dura, como muchos minerales, podramos usar un mortero de acero o gata). Al pulverizar conseguimos reducir el tamao de partcula, de tal forma que al poseer mayor rea superficial se disolver mejor. Habr que tener especial cuidado de evitar contaminaciones que puedan ser responsables de la aparicin de errores de tipo sistemtico: los morteros ms econmicos tienden a ser ms porosos y a rayarse con mayor facilidad, lo cual podra provocar contaminacin de la muestra con el material del mortero.

2) HOMOGENEIZACIN: Una vez pulverizada la muestra ser necesario homogeneizar el polvo obtenido. Para ello simplemente lo hacemos rodar sobre unahoja de papel satinado (muy liso y resbaladizo). Dado que es fcil de obtener mediante el uso del mortero el frmaco

totalmente desmenuzado en un polvo fino y homogneo, podemos prescindir del proceso de tamizado. 3) CONSERVACIN: Es probable que se desee conservar la muestra si no se quiere

analizar

de forma inmediata. Entonces, para evitar

que se produzca su degradacin o la prdida del analito, se deber almacenar y etiquetar en las condiciones ms favorables y encontenedores adecuados (si no es as, debido a factores fsicos como la temperatura, la exposicin a la luz o la naturaleza del contenedor se podran producir cambios en la muestra que alteraran los resultados). De igual modo, para garantizar una mnima variabilidad de los componentes de la muestra al mismo tiempo que se protege de la degradacin se debe almacenar en un contenedor que no contamine a la muestra ni adsorba analitos en sus paredes. La eleccin del material del contenedor depender del tipo de muestra: en nuestro caso, como se trata de una muestra orgnica (aunque sinttica) se usarn

preferentemente contenedores que no sean de plstico (ya que stos tambin son de naturaleza orgnica y podra haber interferencias) como frascos de cermica: cuarzo, cristal, porcelana 4) SECADO: Antes del anlisis, los slidos suelen secarse a 110C a presin atmosfrica a fin de eliminar el agua adsorbida. Adems, en el caso de que se quisiera almacenar, las muestras secas se conservan mejor. Por otra parte, en el caso de querer analizarla, la muestra de anlisis debe tener una composicin constante con respecto a la humedad que la impregna ya que sta puede afectar a operaciones posteriores. Al mismo tiempo, los resultados suelen expresarse en funcin del peso seco de la muestra.

Para secar nuestro homogeneizado en polvo de comprimido de paracetamol podramos usar unaestufa a unas temperaturas sobre los 100C. El secado se considerar completo cuando el peso de la muestra sea constante.

La utilizacin de liofilizadores no sera necesaria en este caso ya que no existe riesgo elevado de descomposicin o prdida del analito a esas temperaturas. Una vez seca, la muestra debe guardarse en un desecador para que no vuelva a adsorber humedad. Los desecadores contienen en su interior un desecante, como la slica gel, que adsorbe todo el agua. En funcin al color que tome el desecante sabremos que se ha captado ms o menos agua (cuando se hidrata la slica gel se vuelve de color rosa y para que siga funcionando habr que quitarle el agua: la ponemos en una estufa hasta que pierda la humedad, lo cual es fcil de saber ya que se vuelve de color azul).

5) PESADO: Habr que saber la cantidad de muestra que se va a analizar para posteriormente ser capaces de hacer bien los clculos. Para ello usaremos una balanza y, en funcin a la precisin que requiera nuestro

anlisis, sta podr ser: De tipo granataria: precisin hasta la centsima o milsima de gramo (para pesos aproximados). Balanza analtica: como mnimo una precisin de dcimas de miligramo. Sera mejor usar este tipo de balanzas ya que es ms precisa (incluso estn cerradas mediante vidrios para que no afecten las corrientes de aire). Usemos la balanza que usemos la pesada podr ser directa (por adicin: se aade la cantidad en la balanza y se lee el resultado) oindirecta mediante el mtodo por diferencia (primero pesamos el contenido total, luego le sacamos a ste la cantidad con la que vamos a trabajar y luego pesamos lo que queda: habr que calcular la diferencia). De todas formas, en nuestro caso podemos pesar la muestra pulverizada entera (es decir, el comprimido entero) de tal forma que usaremos la pesada directa. 6) DISOLUCIN:

Una vez hechos todos los pasos anteriores, slo nos queda disolver la muestra para el anlisis de los constituyentes deseados (en la mayora de los procedimientos analticos la medida del analito en una muestra se realiza va disolucin). Es importante disolver toda la muestra o de lo contrario existir la duda de si se disolvi todo el analito de inters. En funcin a la naturaleza de la muestra y al tratamiento al que va a ser sometida posteriormente se usarn distintos mtodos para disolverla. El disolvente no debe adicionar ningn componente que luego modifique el anlisis y adems debe disolver a la muestra completamente. En nuestro caso podremos disolver la muestra por va hmeda usando agua como disolvente (la solubilidad del paracetamol en agua es de 1,4 g/100 ml a 20C). Al usar agua, no se llevarn a cabo reacciones qumicas. El hecho de emplear agua presenta una serie de ventajas: -No se suelen producir prdidas del analito. -No se producen ataques en las paredes del recipiente donde se produce la disolucin. -No existen riesgos para el analista. Si por ejemplo en vez de considerar un comprimido de paracetamol considerramos una aspirina efervescente, bastara con introducir sta en agua a temperatura ambiente gracias a las propiedades de la muestra. Se deben evitar otros mtodos de disolucin que puedan destruir la materia orgnica ya que nuestro analito presenta esa misma naturaleza. Para llevar a cabo la disolucin basta con aadir la muestra a un volumen determinado de agua en un vaso de precipitados u otro recipiente de laboratorio similar y agitar para facilitar el proceso. No hace falta usar recipientes cerrados ya que la prdida del analito es nula (el punto de ebullicin del paracetamol es superior a los 500C).

Publicado por Gonzalo, Gabriela, Isabel, Adrin, Andrea en sbado, mayo 15, 2010 No hay comentarios:

sbado, 24 de abril de 2010

VALIDACIN DE CIDO ACETILSALICLICO Y PARACETAMOL EN PREPARADOS FARMACUTICOS

1. INTRODUCCIN:

La validacin analtica consiste en comprobar que los procedimientos e instrumentos utilizados en los anlisis son seguros y fiables. Si los mtodos analticos no se validaran podran producirse valores falsos que comprometeran la calidad de los mismos.

En el desarrollo de un mtodo de validacin analtica es necesario considerar diferentes parmetros tales como la precisin (es decir, la determinacin sobre mltiples muestras del mismo parmetro varias veces, comprobando la coincidencia entre s) o laexactitud (es decir, la comparacin del resultado aceptado o real de la muestra con el obtenido en el resultado analtico o con la media de un conjunto de resultados).

A continuacin se hablar de diferentes mtodos y materiales que se pueden utilizar en el proceso de validacin de la determinacin de cido acetilsaliclico y paracetamol en preparados farmacuticos, seguido de un ejemplo en el que se calcula la exactitud y precisin de la determinacin de uno de esos analitos (paracetamol) en una muestra concreta.

2. MTODO PARA LA VALIDACIN DE CIDO ACETILSALICLICO EN PREPARADOS FARMACUTICOS:

2.1. INTRODUCCIN: Para realizar la determinacin de un analito en una muestra se emplea un mtodo oficial de anlisis. En nuestro caso queremos determinar la presencia de cido acetilsaliclico en preparados farmacuticos y para ello utilizaremos un mtodo de tipo experimental denominado Cromatografa Lquida de Alta Eficacia oHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC), una tcnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatogrfica. 2.2. CROMATROGRAFA LQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC): La HPLC es un tipo de cromatografa en columna muy utilizado en bioqumica y qumica analtica para la separacin y anlisis cuantitativo de una amplia variedad de mezclas, especialmente aquellas en las cuales sus componentes no son voltiles o son trmicamente inestables para ser separados por cromatografa de gases o en capa fina dado que esta tcnica evita el contacto con el aire y la luz.

El compuesto se hace pasar por la columna cromatogrfica a travs de la fase estacionaria (normalmente un cilindro con pequeas partculas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de un lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la columna (lo cual permite que los compuestos avancen ms rpidamente a travs de la columna acelerando el proceso). Los componentes de la muestra a analizar se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones con la fase estacionaria a medida que atraviesan la columna. El grado de retencin de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, as como de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil.

El objetivo es la separacin y determinacin cuantitativa del cido acetilsaliclico en nuestra muestra (frmaco analgsico) a travs de un calibrado con patrones. Los datos cromatogrficos sern procesados por un ordenador que contiene un programa de integracin.

MATERIAL:

El material de laboratorio necesario para este anlisis incluye los siguientes aparatos o instrumentos: - Cromatogrfo de lquidos de alta eficacia Perkin Elmer con detector UV-visible - Columna cromatogrfica C18 de 15 cm de longitud, 4.0 mm de dimetro interno y 5 m de tamao de partcula.
- Filtros para disolventes de 0.40 m. - 8 matraces aforados de 10 mL. - 2 matraces aforados de 100 mL. - 1 matraz aforado de 500 mL. - 1 matraz aforado de 1000 mL. - Pipeta graduada de 10 mL. - Pipeta graduada de 5 mL. REACTIVOS Y DISOLUCIONES: Los reactivos que requerimos son cido acetilsaliclico (slido), metanol, cido fosfrico y agua destilada. Con estos reactivos preparamos las siguientes disoluciones: -Disolucin de 500 mg/L de cido acetilsaliclico. Para ello pesamos una cantidad adecuada del analito para preparar 100 mL de disolucin y la disolvemos en metanol. -Fase mvil: mezcla de metanol/agua/cido fosfrico formada por 40% de metanol, 59.92% de agua y 0.08% de cido fosfrico. PROCEDIMIENTO: En primer lugar, para la obtencin del calibrado, se preparan disoluciones

patrn que contengan entre 20 y 100 g/mL de aspirina en la fase mvil. Se fija la longitud de onda de deteccin en 254 nm y el caudal en 1.0 mL/min. Una vez obtenidas las disoluciones del analito con la fase mvil se inyectan en el cromatgrafo de lquidos las mezclas preparadas y se registran las reas resultantes. Con esos datos se construye una curva de calibrado en la cual enfrentamos las reas de los picos cromatogrficos

con

la concentracin correspondiente en

cada caso. Esta curva se puede representar a travs de programas informticos del tipo hoja de clculo, donde adems se calculan las ecuaciones automticamente. RESULTADOS: Finalmente, concluiremos nuestro estudio con la determinacin de la concentracin de cido acetilsaliclico en la muestra de preparado farmacutico. Para ello se inyectan 20 l de muestra tres veces y se cuantifican los picos correspondientes a aspirina a partir de la curva de calibrado obtenida en el apartado anterior. El resultado se expresa como g de aspirina por mL de muestra.

Necesitaremos las ecuaciones de la curva de calibrado y el clculo de la regresin lineal o calidad de ajuste, as como tambin el clculo del intervalo de confianza y precisin.

3. MTODO PARA LA VALIDACIN DE PARACETAMOL EN PREPARADOS FARMACUTICOS: 3.1. INTRODUCCIN:

La Food and Drug Administration (FDA) establece laespectrofotometra UV como mtodo de referencia para la cuantificacin de paracetamol. Esta tcnica es el mtodo deanlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas ybiolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. La espectrofotometra UV usa haces de radiacin del espectro electromagntico en el rango UV de 80 a 400 nm (principalmente de 200 a 400 nm) y en el de la luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro.

En este trabajo vamos a validar el mtodo conductimtrico(basado en la diferente conductividad del sistema a distintos intervalos de tiempo debido a las diferentes concentraciones de solutos) teniendo en cuenta el mtodo de referencia para la validacin de calidad del paracetamol, valorando su exactitud, rapidez, precisin en el anlisis. 3.2. MATERIALES Y MTODOS:

Materia Prima:

- Paracetamol principio activo, Lote N0220436, origen Dinamarca.

- Comprimidos de paracetamol 500 mg, Lote N018, preparado por PLAMECOR.

Reactivos:

- Soluciones estndar de NaOH 0.130N y 0.036N.

- Hidrxido de amonio concentrado (26% p/p) p.a.

Equipos:

- Conductmetro Digital Prsec. Rango de lectura: 0,1 - 2 .105 S. Exactitud: 0,5%.

- Celda de titulacin de vidrio con encamisado p/ termostatizacin. Volumen til: 150 mL.

- Agitador magntico.

- Bureta de 25 mL con llave de tefln.

- Balanza analtica. 3.3. PROCEDIMIENTO DEL MTODO CONDUCTIMTRICO: Se estandariza el conductmetro utilizando distintas masas de la droga base llevndolas a un volumen final de 150 ml con agua destilada. Para los anlisis se parte, en cada caso, de una solucin homognea preparada a partir de 1 comprimido de paracetamol en 500 ml de agua destilada. Una alcuota de 150 mL, tericamenteequivalentes a 150 mg de paracetamol, se transfiere al vaso de valoracin y se adiciona un volumen dado de amonaco. Una vez

sumergidos los electrodos y la barra magntica se conecta el conductmetro. Se registra la conductancia despus de cada agregado del valorante (NaOH). Graficando el volumen de NaOH (mL) con respecto a la conductancia (L, en s) se localiza el punto final y se determina la masa de paracetamol presente en la muestra.

Como conclusiones del mtodo conductimtrico:

- Es lineal en el rango de 50 a 300 mg de paracetamol (es decir, puede dar lugar a resultados proporcionales a la concentracin del analito en la muestra). - Su precisin y exactitud son comparables con las del mtodo de referencia (Espectrofotomtrico UV). - Es simple y utiliza un equipo de bajo costo. - Aplicable para el anlisis de rutina de formulaciones farmacuticas sin interferencias de los excipientes comunes. - Es rpido y fcilmente automatizable.

4. CLCULO DE LA PRECISIN Y EXACTITUD DE LA DETERMINACIN DE PARACETAMOL EN COMPRIMIDOS DE 500mg MEDIANTE EL MTODO CONDUCTIMTRICO: Tomando estos datos como referencia:

PRECISIN: comparacin de varianzas mediante un test F de dos colas.

Podemos aceptar con un 95% de probabilidad que las varianzas del mtodo de referencia (espectrometra UV) y del mtodo a evaluar (conductimetra) son comparables. Como sabemos que las varianzas son comparables y como el mtodo de referencia es preciso afirmamos que el mtodo a evaluar (conductimetra) tambin es PRECISO. EXACTITUD: comparacin de medias.

Como las varianzas son comparables hacemos una varianza conjunta.

Podemos afirmar con un 95% de probabilidad que el mtodo a evaluar (conductimetra) es EXACTO porque damos por hecho que el mtodo de referencia (espectrometra UV) lo es.
Publicado por Gonzalo, Gabriela, Isabel, Adrin, Andrea en sbado, abril 24, 2010 1 comentario:

viernes, 26 de marzo de 2010

DETERMINACIN DE PARACETAMOL Y CIDO ACETILSALICLICO EN PREPARADOS FARMACUTICOS

1) IMPORTANCIA Y MOTIVO DE LA DETERMINACIN:

Tanto el cido acetilsaliclico como el paracetamol son importantes analgsicos, es decir, frmacos que alivian el dolor sin producir prdida de conciencia. Dentro de los analgsicos se puede distinguir a

los

opiceos (derivados del opio, como la

morfina y codena) y no opiceos (entre los que se encuentran el paracetamol y el cido acetilsaliclico, los dos analitos que trataremos en nuestro trabajo). La accin de estos analgsicos no opiceos se basa en la inhibicin de la sntesis de prostaglandinas (mediadores del dolor y de la inflamacin) en los tejidos perifricos. De ah que estas sustancias tengan unaenorme importancia sanitaria, ya que comercializadas como medicamentos y administradas al cuerpo humano ayudan a atenuar dolencias de distinta naturaleza: El cido acetilsaliclico, muy conocido bajo el nombre comercial de Aspirina, es el frmaco ms utilizado frente a la fieb

re, el dolor leve o moderado y la inflamacin. Adems, estudios recientes parecen indicar que su ingestin moderada puede reducir el riesgo de accidentes cardiovasculares y de cncer rectal. Sin embargo, su utilizacin no est exenta de peligro: los efectos adversos de la aspirina son principalmente gastrointestinales, es decir, lceras gstricas y sangrado estomacal, y en nios que padezcan gripe o varicela eleva el riesgo de padecer el sndrome de Reye (enfermedad caracterizada por la presencia de vmitos, aumento patolgico del tamao del hgado, sndrome confusional, somnolencia e incluso coma). El paracetamol tambin hace disminuir el dolor y la fiebre, pero no reduce la inflamacin como otros analgsicos. Presenta la ventaja de que no irrita la mucosa del estmago, pero una sobredosis puede provocar graves lesiones en el hgado.

El cido acetilsaliclico y el paracetamol forman parte de muchos frmacos con funcin genrica analgsica, ya sean solos o mezclados con otros componentes activos como la cafena, adems de excipientes. En este trabajo se propone ladeterminacin de ambos compuesto en preparados farmacuticos, lo cual no deja de ser relevante ya que es necesaria una cantidad mnima del principio activo en el frmaco para que ste cumpla con xito su funcin, pero una dosis inapropiada puede ser causante de efectos adversos tales como los

ya citados. 2) PROPIEDADES DE LOS ANALITOS DE ESTUDIO: Como ya hemos dicho, los dos analitos en que vamos a centrar nuestro trabajo son analgsicos no opiceos y actan a nivel del sistema nervioso perifrico. En cuanto a sus propiedades qumicas destacaremos: PARACETAMOL: - Frmula qumica: C8H9NO2.

- Tambin recibe el nombre de acetaminofeno (N-acetil-para-amonifenol para-acetil-aminofenol). - Es un cido dbil con un pKa=9.5 debido a su grupo hidroxilo aromtico. - Su peso molecular es bajo (151.7 uma). - Su punto de fusin es de 169C. - Tiene una densidad de 1.293 g/cm3. - Su solubilidad en agua a 20C es de 1.4g/100ml, aunque tambin es soluble en etanol, metanol y dimetilformamida. - Su sntesis consiste en una reaccin entre el p-aminofenol y el anhdrido actico producindose la acetilacin del p-aminofenol y obteniendo as el paracetamol y el cido actico.

 CIDO ACETILSALICLICO: - Frmula qumica: C6H4(OCOCH3)COOH.

- Tambin se llama acetilsalicilato (cido o-acetilsaliclico cido 2acetoxibenzoico). - Es un cido orgnico simple con un pka=3,5 a 25C. - Tiene un peso molecular de 180,16 uma. - Su punto de fusin es de 138C y el de ebullicin es de 140C. - Su densidad es de 1.40 g/cm3. - Tiene una solubilidad en agua a 20C de 1mg/ml. - Su sntesis consiste en una reaccin de esterificacin. El cido saliclico es tratado con anhdrido actico, lo que hace que el grupo alcohol del salicilato se convierta en un grupo acetilo. Este proceso produce el cido acetilsaliclico y el cido actico. Como catalizador de esta esterificacin casi siempre se usan pequeas cantidades de cido sulfrico y ocasionalmente cido fosfrico.

El motivo por el cual el paracetamol y el cido acetilsaliclico suprimen la produccin de prostaglandinas y, por consiguiente, la aparicin del dolor es porque producen una acetilacin (aaden un grupo acetilo) en un residuo de serina del sitio activo de la ciclooxigenasa, enzima imprescindible para la sntesis de esas molculas proinflamatorias. 3) PROPIEDADES DE LA MUESTRA: En cuanto a la muestra en la que se presentan dichos analit

os, se corresponde en principio a cualquier tipo de preparado farmacutico que los contenga. Es por esto por lo que en nuestro caso no podremos hablar de una nica muestra: se trata de una muesta genrica que en funcin al frmaco tendr diferente composicin y propiedades, aunque en general para cada uno de los principios activos (sustancia contenida en el medicamento con actividad farmacolgica, en nuestro caso paracetamol o cido acetilsaliclico, es decir, los analitos de la muestra) se corresponden unos determinados excipientes (sustancias que se incluyen junto al

principio activo para servirle de vehculo, posibilitar su preparacin, darle estabilidad, facilitar su absorcin, modificar sus propiedades organolpticas). Conclumos, pues, que nuestra muestra estar constituda por el analito junto a sus adecuados excipientes, pero dado que existe un gran nmero de laboratorios que comercializan dichos medicamentos como frmacos genricos los excipientes que podemos encontrar (y por lo tanto la muestra) son muy variables. Por otra parte, en funcin a cmo se presenten(comprimidos masticables, comprimidos o granulados efervescentes, en forma de supositorio, de suspensin lquida) dichos excipientes podrn ser unos u otros (por ejemplo, las formas efervescentes presentan bicarbonatos responsables de las burbujas que se generan), por lo que se nos plantea un amplio abanico de posibilidades en cuanto a la muestra de estudio.

De todos modos, se pueden generalizar una serie de excipientes que se suelen incluir junto a ambos principios activos. Comenzando por el cido acetilsaliclico, es de especial mencin la forma comercial Aspirina (probablemente la ms vendida en el mundo) en la que normalmente se encuentran los siguientes excipientes:

- Colorantes como el amarillo anaranjado S (E-110) o amarillo de quinolena (E- 104). - Conservantes y antioxidantes como el cido ascrbico (vitamina C, E200) o el citrato de sodio (E-331). - Estabilizantes y emulgentes como la celulosa en polvo (E-460 II) o el estearato de calcio (E-470 A). - Reguladores del pH y antiaglutinantes como el carbonato de sodio (E500) o el hidrogenocarbonato de sodio (E-500 I). - Edulcorantes como el aspartamo (E-951), el manitol (E-421) o el almidn de maz, (gelificante y espesante). - Aromatizantes muy variados tales como el aroma de zumo de mandarina o de naranja.

En cuanto

al paracetamol, los excipientes que

nos podemos encontrar en un comprimido masticable de Termalgin (que podra ser un buen ejemplo de una muestra donde se encuentra nuestro analito) son el talco, la povidona, el almidn de maz, el almidn de

maz pregelatinizado, la slice coloidal anhidra, la celulosa microcristalina y el cido esterico. 4) LEGISLACIN: NIVELES MXIMOS Y RECOMENDADOS DEL ANALITO EN LA MUESTRA A la hora de hablar de la legislacin que rige a estas sustancias, es necesario aclarar previamente que no encontramos demasiada informacin al respecto as que hemos decido mostrar algunos ejemplos que nos llamaron la atencin. Un caso muy llamativo fue el ocurrido en Gran Bretaa con respecto al paracetamol, en donde muchas personas se suicidaban y llegaban a los hospitales con autointoxicaciones desde leves hasta muy graves de este frmaco: un analgsico de fcil acceso, econmico y aparentemente inofensivo. Un ejemplo de ello se puede ver en este artculo de la publicacin inglesa The Lancet del ao 1973, del cual hemos aadido el enlace: http://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS01406736(73)90466-2/abstract Para regular estas situaciones se modific la legislacin con el fin de reducir las reservas de analgsicos en las casas y as evitar el peligro de sobredosis. El 16 de septiembre de 1998 empez a regir la ley que redujo el nmero de comprimidos de paracetamol por frasco a un mximo de 16 en los comercios no especializados, 32 en farmacias y 100 en circunstancias especiales y justificadas. Posteriormente se hicieron estudios para cuantificar el impacto de la ley en la poblacin y se vio que haba sido bastante positiva: - El nmero de muertes provocadas por autointoxicacin con

paracetamol descendi en un 21% tras la nueva legislacin que restringi el nmero de tabletas por envase. - El nmero de trasplantes hepticos realizados en individuos con grave insuficiencia heptica por sobredosis de paracetamol descendi en un 66%. - El nmero de autointoxicaciones no mortales con paracetamol descendi en un 11%. Con respecto al cido acetilsaliclico podramos mencionar uno de los muchos casos en los que diferentes agrupaciones ilegales tratan de vender falsos medicamentos nicamente para lucrarse. En este caso, se trata de una ley que trata de evitar precisamente ese fraude restringiendo la venta de frmacos comoAspirina exclusivamente en farmacias: http://latambmc.blogspot.com/2009/11/ya-no-se-podra-compraraspirina-o.html En cuanto a los niveles recomendados y mximos permitidos, hay que tener en cuenta que las dosis adecuadas de ambos principios activos pueden ser diferentes para cada paciente (vara en funcin al peso, edad). En el caso del paracetamol, hay distintas dosis ms frecuentemente recomendadas, aunque en funcin a las indicaciones que le haya dado el mdico a su paciente, stas pueden variar. Algunos ejemplos son: - De 325 a 650 mg cada 4 6 horas 1000 mg cada 6 cada 8 horas, hasta un mximo de 4000 mg al da. - De 600 a 650 mg cada 4 6 horas hasta un mximo de 4000 mg al da. - 1000 mg (1 vial) no ms de 4 veces al da.

- 15 mg por kilo de peso cada 4 6 horas sin exceder la dosis mxima de 4000 mg diarios. - No se recomienda administrar paracetamol intravenoso en pacientes que pesen menos de 33 kg. - Si el paciente padece una enfermedad grave del rin puede necesitar una dosis menor de paracetamol. En el caso del los niveles recomendados para el cido acetilsaliclico podemos comentar que, por lo general, en adultos y mayores de 12 aos se debe tomar 1 comprimido de 500 mg cada 4 6 horas, sin exceder en ningn caso de 8 comprimidos en 24 horas. 5) CONCENTRACIN NORMAL DEL ANALITO EN LA MUESTRA Y EJEMPLOS QUE RECOGEN DISTINTOS ASPECTOS YA TRATADOS: De nuevo, diferenciamos entre: PARACETAMOL: En Espaa existen comercializadas formas de administracin oral(cpsulas, comprimidos, comprimidos efervescentes, polvo efervescente en sobres, solucin y gotas), rectales (supositorios) y parenteral (solucin para perfusin intravenosa). Algunos de los paracetamoles que hay en el mercado segn distintas casas farmacuticas son:
PARACETAMOL ABEX Comp. 1 g PARACETAMOL ALTER EFG Granulado efervescente 1 g PARACETAMOL BELMAC Granulado para disolucin oral 1 g PARACETAMOL BELMAC Granulado para sol. oral 500 mg PARACETAMOL BELMAC Granulado para sol. oral 650 mg PARACETAMOL BENEL Comp. 650 mg PARACETAMOL BIOMENDI Sol. para perfusin 10 mg/ml

PARACETAMOL CINFA EFG Comp. recub. con pelcula 650 mg PARACETAMOL CINFA EFG Polvo efervescente 1 g PARACETAMOL CINFAMED EFG Comp. recub. con pelcula 650 mg PARACETAMOL CINFAMED EFG Polvo efervescente 1 g PARACETAMOL CODRAMOL Comp. 650 mg PARACETAMOL COMBIX Comp. 1 g PARACETAMOL DAVUR Granulado para sol. oral 1 g PARACETAMOL DAVUR Granulado para sol. oral 500 mg PARACETAMOL DAVUR Granulado para sol. oral 650 mg PARACETAMOL DERMOGEN Comp. 1 g PARACETAMOL DERMOGEN Comp. 650 mg PARACETAMOL EDIGEN Polvo efervescente 1g PARACETAMOL ERN EFG Sol. oral 100 mg/ml PARACETAMOL ESTEVE EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL FARLINE Polvo efervescente 1 g PARACETAMOL FARMALIDER Comp. 650 mg PARACETAMOL GAYOSO Polvo efervescente 1 g PARACETAMOL GELOS Comp. 500 mg PARACETAMOL GELOS EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL GES Sol. para perfusin 10 mg/ml PARACETAMOL KERN PHARMA Sol. oral en gotas 100 mg/ml PARACETAMOL KERN PHARMA EFG Comp. 1 g PARACETAMOL KERN PHARMA EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL KERN PHARMA EFG Granulado efervescente 1 g/sobre PARACETAMOL LIDERFEME Comp. 1 g PARACETAMOL LIDERFEME Comp. 650 mg PARACETAMOL MUNDOGEN FARMA EFG Comp. 500 mg PARACETAMOL MUNDOGEN FARMA EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL NORMON EFG Comp. 500 mg PARACETAMOL NORMON EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL PENSA Comp. 1 g PARACETAMOL PEREZ GIMENEZ Comp. 500 mg PARACETAMOL PEREZ GIMENEZ Polvo para sol. oral 1 g PARACETAMOL PHARMAGENUS EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL QUALIGEN Comp. 1 g PARACETAMOL QUALIGEN EFG Comp. efervescente 1 g

PARACETAMOL RIMAFAR Granulado para sol. oral 1 g PARACETAMOL RIMAFAR Granulado para sol. oral 500 mg PARACETAMOL RIMAFAR Granulado para sol. oral 650 mg PARACETAMOL SANDOZ Comp. 1 g PARACETAMOL SANDOZ EFG Comp. 500 mg PARACETAMOL SANDOZ EFG Comp. 650 mg PARACETAMOL SERRA Comp. 500 mg PARACETAMOL SERRA Gotas orales 10% PARACETAMOL STADA EFG Polvo efervescente 1 g PARACETAMOL TEVA Comp. 1 g PARACETAMOL TEVA Comp. 650 mg PARACETAMOL WINADOL Comp. 1 g PARACETAMOL WINADOL Comp. 650 mg PARACETAMOL WINTHROP Comp. 500 mg

Todos estos ejemplos de paracetamol vienen acompaados de su cantidad en la muestra (por ejemplo: 1 g, 500 mg, 10%...) adems de la forma de comercializacin (granulado efervescente, pastillas, sobres, gotas orales). La concentracin normal que observamos del analito en las distintas muestras est en un intervalo que oscila entre 0.5 y 1 gramos. Todos estos aspectos hasta ahora tratados sobre el paracetamol (efectos adversos, excipientes, dosis recomendadas, concentraciones normales) aparecen reunidos en el prospecto del frmaco correspondiente, as que nos pareci interesante visualizarlo en un caso real: Un ejemplo prctico de un tipo comercial de paracetamol es elGelocatil (distribuido por los Laboratorios Gelos) en cuyo prospecto se indica su composicin (paracetamol y excipientes) y el tipo de administracin (oral).

En la siguiente pgina del prospecto se advierte de que no se debe ingerir el frmaco o que se debe consultar previamente a un mdico en determinadas situaciones tales como ser alcohlico, estar embarazada o en periodo de lactancia, estar tomando otros medicamentos

Posteriormente se especifican las cantidades del frmaco recomendables diariamente (sin tener en cuenta las indicaciones de un profesional especializado) y lo que se debe hacer en el caso de haberlo ingerido en exceso.

 CIDO ACETILSALICLICO: El cido acetilsaliclico comercializado como Aspirina se puede presentar a la venta como: ASPIRINA ASPIRINA ASPIRINA ASPIRINA ASPIRINA Adultos Comp. 500mg Infantil Comp. 125mg Granulado 500ml Comp Efervescente 500mg C Comp.Coefervescente 400/240mg

ASPIRINA COMPLEX Granulado efervescente monodosis ASPIRINA MASTICABLE Comp.masticable 500mg ASPIRINA PLUS Comp. 500mg Todos estos ejemplos de Aspirina tambin vienen acompaados, cada uno, de la concentracin del analito en la muestra y del modo de toma: efervescente, comprimidos

La concentracin normal del analito (cido acetilsaliclico) en estas muestras tiene su mximo en 500 mg o ml tal y como se puede observar. Al igual que se ha hecho con el paracetamol, si vemos el prospecto de una caja de Aspirina aparecen tratados distintos aspectos ya vistos del cido acetilsaliclico. En este caso en cada muestra hay 500 mg de analito, adems de los correspondientes excipientes, remarcados en el prospecto.

Adems el folleto trae indicaciones, contraindicaciones, precauciones adems de la posologa donde brevemente se citan los niveles mximos de ingesta diaria del analito a esa concentracin:

6) PLANTEAMIENTO Y DESCRIPCIN DE LA PROBLEMTICA ANALTICA: INTOXICACIN POR PARACETAMOL 6.1. Descripcin del caso ficticio:

Se halla el cuerpo de un varn de 34 aos de edad en el

dormitorio de su domicilio en estado de semiinconsciencia. Es trasladado rpidamente en ambulancia al hospital ms cercano. Se le practica un lavado estomacal ya que se plantea una posible intoxicacin al haberse encontrado una caja vaca de paracetamol en pastillas de 1 gramo en dicho dormitorio. Posteriormente, el paciente ya consciente se recupera en el hospital a la espera de los resultados clnicos. 6.2. Definicin del problema: Las pruebas que se llevan a cabo consisten en determinar si la concentracin de paracetamol en el paciente es txica (es el principal objeto de estudio debido a los datos descritos por los mdicos del Samur). En primer lugar se realiza un anlisis de sangre. Tras 4 horas despus de la ingesta la concentracin plasmtica de paracetamol es mxima, y si la dosis ingerida por el paciente hubiese sido txica (y por tanto la causante del estado de semiinconsciencia) en dicho anlisis se debe observar una concentracin de paracetamol de aproximadamente 150mg/kg. Si la concentracin hallada fuese de 300 mg/kg estaramos ante un caso de hepatotoxicidad. 6.3. Anlisis y resultados: Tras obtener el anlisis del plasma sanguneo, se observa que los valores de paracetamol se encuentran en torno a 110-120 mg/kg, lo cual, teniendo en cuenta que han pasado ms de 4 horas, indica claramente que estamos ante un caso de intoxicacin por frmacos

analgsicos-antipirticos, cuyo componente principal es el paracetamol. Este ser eliminado progresivamente a travs del metabolismo heptico, ya que el hgado es su principal rgano diana. Durante el proceso metablico se genera un producto altamente txico (NAPQI) que se degrada a travs de un antdoto especfico (NAC).