EXPOSICIN MATERNO-INFANTIL VA PLACENTARIA A COMPUESTOS QUMICOS MEDIOAMBIENTALES CON ACTIVIDAD HORMONAL

Mara Jos Lpez Espinosa Facultad de Medicina Granada 2006

Desde los aos 40 hasta los 70, los compuestos organoclorados fueron ampliamente usados como insecticidas
A partir de entonces

Su uso se vio severamente restringido

POR QU?

COMPUESTOS ORGNICOS PERSISENTES (COPs)

Persistentes -en el medio ambiente Lipoflicos -almacenados en tejido graso Bioacumulables -altos niveles en biota, animales, humanos Txicos -carcinognicos, mutagnicos, teratgenicos Disruptores endocrinos

ENDOCRINE DISRUPTION

Un disruptor endocrino es una sustancia o mezcla exgena que altera la funcin o funciones del sistema endocrino, causando efectos adversos en salud en un organismo intacto, o su progenie o poblaciones o subpoblaciones

(European Workshop on the Impact of Endocrine Disrupters on Human Health and Wildlife, Weybridge 2-4/12/1996)

CMO ESTN LAS MADRES EXPUESTAS A COMPUESTOS ORGANOCLORADOS? Exposicin materna ocurre principalmente a travs de: - Dieta, - Agua, - Aire, - Polvo, - Suelo, - Lugar de trabajo.

BIOACUMULACIN EN TEJIDO ADIPOSO

CMO SE VE EL EMBRIN/FETO/RECIN NACIDO EXPUESTO A COMPUESTOS ORGANOCLORADOS? Durante el embarazo y la lactancia

La grasa del cuerpo se moviliza y las sustancias qumicas almacenadas en la grasa son movilizadas

Una proporcin de los residuos acumulados en el cuerpo de la mujer puede pasar a travs de la placenta al feto y a travs de la leche al recin nacido

Las funciones fisiolgicas inmaduras del feto y del beb hacen a estos grupos de edad ms vulnerables a los efectos dainos de los txicos

Los Nios deberan ser considerados un grupo ESPECIAL

Proyectos INMA: Infancia y Medio Ambiente (G03/176 ) Environmental Reproductive Health (QLRT-1999-01422 ) Nuheal and Ernest SCALE:Scientific, Children, Awareness, Legislation, Evaluation

HIPTESIS La exposicin prenatal en tero es cualitativa y cuantitativamente importante y esta exposicin durante el embarazo puede tener impacto en el recin nacido

OBJETIVOS
1 Valorar la exposicin a 17 pesticidas organoclorados mediante el anlisis de la placenta 2 Medir la actividad resultante de la mezcla de xenoestrgenos en la placenta 3 Investigar la asociacin entre la exposicin a organoclorados y variables maternas, paternas, del embarazo y del recin nacido

COHORTE
Una cohorte de mujeres embarazadas fue establecida con el objetivo de investigar exposicin crnica a disruptores endocrinos en Granada (2000-2002) Nmero de participantes: 668 consentimiento informado escrito mujeres dieron

Recogida de muestras: Sangre de madre, sangre de cordn y placenta Cuestionario: Incluye datos de residenica, ocupacin, medicacin, drogas, alcohol, tabaco, enfermedades, caractersticas reproductivas, dieta, cosmticos, entre otros

GRUPO DE ESTUDIO
Para el presente estudio, 308 mujeres dieron a luz varones sanos elegidos aleatoriamente de la cohorte - Edad media de las madres 32 aos (rango, 16-46 aos) -41.56% vivan en un rea rural (<10.000 habitantes) -49.67% haba completado estudios primarios (similar a la frecuencia en padres) -53.9% fueron multparas -Peso medio al nacer 3306.46g -72.5% nacieron de forma espontnea - Edad gestacional media 39 semanas y 3 das

PRIMER OBJETIVO:
Valorar la exposicin a 17 pesticidas organoclorados analizando la placenta

CHEMICAL ANALYSIS
1.- Extraccin de pesticidas organoclorados de la placenta con solventes orgnicos 2.- Uso de cromatografa lquida preparativa (HPLC) para la separacin de pesticidas organoclorados de estrgenos naturales

Elution

ANLISIS QUMICO
3.-Pesticidas organoclorados fueron determinados por: Cromatografa de gases con detector de captura de electrones (CG/DCE) (Varian 3350). Compuestos organoclorados (COs) DDT y metabolitos Metoxicloro Mirex Dieldrn, Aldrn, Endrn Lindano (HCH) Endosulfan-I, II y metabolitos Hexaclorobenceno 4.- Sustancias cofirmadas mediante: Cromatografa de gases con espectrometra de masas (CG/EM) (Saturn 2000 Varian).

NMERO DE PESTICIDAS POR MUESTRA

50

Nmero de muestras

Number of samples

40

30

20

10

0 2 4 6 8 10 12 14

Media=7.61pesticidas/muestra DE=2.95

Number of pesticides per Nmero desample pesticidas

por

muestra

N=308

FRECUENCIA DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS EN PLACENTA (N=308)

100 90 80 70 60 Frecuencia Frequency (%) 50 (%) 40 30 20 10 0

92.7% 74.8% 62.1% 54.2%

Endos

DDTs

Drins Drinas

Others* Otros

Endos= E-I, E-II, E-lactona, E-eter, E-diol, E-sulfato DDTs=opDDT, ppDDT, opDDD, ppDDE Drinas= aldrn, endrn, dieldrn Otros= Lindano, metoxicloro, mirex, HCB

NIVELES DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS EN 308 PLACENTAS (ng/g placenta y ng/g lpido)

PESTICIDAS E- I E-II E-ETER E-LACTONA E-DIOL E-SULFATO ENDOS o,pDDT p,pDDT o,pDDD p,pDDE DDTs ALDRN ENDRN DIELDRIN HCB LINDANO MIREX METOXICLORO MEDIA (ng/g plac) 0.59 0.48 0.17 0.97 4.15 0.83 7.02 0.54 0.77 1.59 2.79 5.54 0.31 1.01 0.28 0.53 0.39 0.31 0.42 DE 1.28 1.20 0.41 3.43 5.02 2.25 8.33 0.84 1.46 3.10 3.77 5.68 0.83 1.98 0.93 1.16 0.51 0.76 1.31 MEDIA (ng/g lpido) 19.87 8.64 6.83 36.17 156.73 28.39 260.38 13.28 27.16 50.11 92.29 189.04 7.56 22.93 9.67 15.41 12.28 13.59 16.31 DE 50.07 35.55 23.34 183.19 298.77 70.01 471.48 34.08 92.93 132.13 155.76 277.83 32.24 66.70 37.16 46.46 31.87 64.15 71.85 MEDIANA (ng/g plac) 0.25 0 0.1 0 3.36 0.25 4.76 0.5 0 0 1.62 3.85 0 0 0 0 0.25 0 0 MEDIANA (ng/g lpido) 0.25 0 0.1 0 66.22 0.25 113.77 0.5 0 0 8.38 101.69 0 0 0 0 0.25 0 0

No hay demasiadas publicaciones a cerca de la presencia de pesticidas OC en la placenta

En las pasadas tres dcadas

India

Oriente Medio

USA

Europa

Saxena et al., 1980 Saxena et al., 1981

Polishuk et al., 1977

OLeary et al., 1970 Eckenhausen et al., 1981 Cooper et al., 2001 Hura et al., 1999 Reichrtova et al., 1999 Falcn et al., 2004 Shen et al., 2005 Cerrillo et al., 2005 Lpez-Espinosa et al., 2006

Siddiqui and Saxena, 1985 Siddiqui et al., 2003

p,pDDE

Media= 2.79 ng/g placenta = 92.29 ng/g lpido

Frecuencia= 92.7%

et al., 2005)

<
et al., 2004)

Finlandia (Shen
et al., 2005)

>
Espaa (Falcon
et al., 2004)

Finlandia (Shen Espaa (Falcon India (Siddiqui et

al., 2003)

DDTs

Media= 5.54 ng/g placenta = 189.04 ng/g lpido

Frecuencia= 97.7%

et al., 2005)

<
et al., 2004)

Finlandia (Shen
et al., 2005)

>
Espaa (Falcon
et al., 2004)

Finlandia (Shen Espaa (Falcon Rumana (Hura

et al., 2003)

SEGUNDO OBJETIVO:
Medir la actividad resultante de la mezcla de xenoestrgenos en la placenta

Biomarcadores de exposicin a mezclas de xenoestrgenos

CARGA ESTROGNICA TOTAL EFECTIVA (TEXB)

Muestras de placenta

E-Screen

YES

Va ms all de la cuantificacin de estrgenos medioambientales Mide la actividad biolgica resultante de xenoestrgenos

ANLISIS BIOLGICO DE ESTROGENICIDAD

EL BIOENSAYO E-SCREEN

El bioensayo E-Screen compara la proliferacin de clulas de cncer de mama MCF-7 en cultivo tratadas con estradiol, extractos de placenta y clulas control (blancos)

Carga estrognica total efectiva (TEXB) Evaluacin cuantitativa de estrogenicidad Curva de estradiol dosis-resupuesta Equivalentes-estradiol (Eeq)/gramos de

placenta o gramos de lpido

Un mtodo de cromatografa lquida preparativa es usado para la separacin de pesticidas organoclorados de estrgenos naturales
Sustancia qumica Tiempo de Sustancia qumica retencin (min) 1,95 o,p-DDT 2,36 2,48 2,53 2,91 2,95 3,10 3,32 4,31 4,33 4,43 4,57 4,84 5,41 Endosulfan-diol Dibutil ftalato Cl3-BPA Cl2-BPA Endosulfan-lactona Cl-BPA Endosulfan-sulfato p-nonilfenol Esteres de estradiol 17- estradiol Bisfenol F Bisfenol A 4,4-hidroxibenzofenona Tiempo de retencin (min) 5,70 7,85 9,15 9,63 9,93 10,01 10,61 10,85 11,05 13,55 16,16 16,41 16,65 17,65

p,p-DDT 3,3,4,4,5-PCB BrNPAc BrNP1EOAc Endosulfan I Pentabromofenileter 4-bromodiphenileter Bis-(4-bromofenil)eter Cl4-BPA BrNP2EOAc Metoxicloro Endosulfan p, p-DDE o,p-DDD

alpha beta

Contenido de la Fraccin Alfa

Compuestos organoclorados Libre de hormonas endgenas Libre de hormonas sintticas

Contenido de la Fraccin Beta

Hormonas endgenas Productos farmacuticos Compuestos no organoclorados Fitoestrgenos

CARGA ESTROGNICA TOTAL EFECTIVA (TEXB). ESTROGENICIDAD MEDIBLE

TEXB- Fraccin alfa

No=28.6%

S=71.4%

E-SCREEN N=308

TEXB- Fraccin beta

No=15.3%

S=84.7%

VALORES ESTIMADOS DE CARGA ESTROGNICA TOTAL EFECTIVA (TEXB) PARA LA FRACCIN ALFA DE 308 PLACENTAS

TEXB-Fraccin Alfa E-SCREEN Media DE Mediana Max.

Eeq pM/mL Eeq pM/g plac. Eeq pM/g lipid.

6.18 3.84 177.07

13.41 9.73 398.60

0.80 0.47 17.73

91.63 111.50 3041.69

VALORES ESTIMADOS DE CARGA ESTROGNICA TOTAL EFECTIVA (TEXB) PARA LA FRACCIN BETA DE 308 PLACENTAS

TEXB-Fraccin Beta E-SCREEN Media DE Mediana Max.

Eeq pM/mL Eeq pM/g plac. Eeq pM/g lipid.

35.56 22.82

70.43 64.48

5.08 3.02 107.38

353.30 912.41 17588.6 2

1190.97 2603.31

TEXB-FRACCIN ALFA
Media= 3.84 Eeq pM/g placenta = 117.67 Eeq pM/g lpido Frecuencia= 71.4% Niveles y frecuencia TEXB-alfa en tejido adiposo
(Ibarluzea et al., 2004; Rivas et al., 2001; Fernandez et al., 2004)

La TEXB-fraccin alfa ha sido asociada con: - Incremento en el riesgo de cncer de mama (Ibarluzea et al., 2004) - Incremento en el riesgo de criptorquidismo (Olmos et al., 2006)

TERCER OBJETIVO:
Investigar la asociacin entre la exposicin a organoclorados y variables maternas, paternas, del embarazo y del recin nacido

MADRES
Edad

Media=31.91 aos DE=5.35 N=308

MADRES
Caractersticas antropomtricas
ndice de masa corporal Ganancia de peso

MediaDE=23.494.13Kg/m2 N=308

MediaDE=12.785.70 Kg N=308

MADRES
Caractersticas sociales y demogrficas.

Residencia

Nivel educacional

58.44% 53.40%

41.56% 29.00%

17.60%

MADRES
Caractersticas sociales y demogrficas.

Empleo

Exposicin ocupacional a sustancias qumicas

64.3% 88.30%

30.8%

11.70% 4.9%

MADRES
Hbito tabquico

72.40%

27.60%

MADRES
Caractersticas reproductivas.
Paridad Nmero de embarazos

53.90% 46.10%

MediaDE=1.760.94 embarazos N=308

FACTORES ASOCIADOS CON LA MAYOR PRESENCIA Y/O ABUNDANCIA DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS/TEXB EN LA PLACENTA MADRE Mayor edad Mayor IMC p,pDDT, TEXB-alfa p,pDDE, Endosulfanes y lindano p,pDDE, endrn, DDTs y lindano Menor nivel educativo Mayor exposicin laboral Primiparidad DDTs p,pDDE, Endosulfanes y metoxicloro p,pDDE y metoxicloro nmero de pesticidas, Endosulfanes y lindano Hbito tabquico

Menor ganancia de peso

PADRES
Caractersticas sociales y demogrficas. Edad Nivel educacional
59.60%

22.48% 17.92%

MediaDE=34.605.86 aos N=307

PADRES
Caractersticas sociales y demogrficas. Empleo Exposicin ocupacional

51.70% 83.39% 41.20%

7.10%

16.61%

FACTORES ASOCIADOS CON LA MAYOR PRESENCIA Y/O ABUNDANCIA DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS/TEXB ALFA EN LA PLACENTA

PADRE Mayor exposicin El trabajo manual Menor nivel educativo Lindano y aldrn p,pDDE y lindano nmero de pesticidas, lindano y HCB

RECIN NACIDO
Caractersticas antropomtricas.
Peso al nacer

Media=3306.46 g DE=452.06 N=308

RECIN NACIDO
Caractersticas antropomtricas.
ndice ponderal Permetro ceflico

MediaDE=25.714.28 g/cm3 N=125

MediaDE=34.801.29 cm N=108

RECIN NACIDO
Caractersticas del parto.
Edad gestacional Pequeo para la edad gestacional
93.30%

6.70%

MediaDE=39.381.49 semanas N=125

FACTORES ASOCIADOS CON LA MAYOR PRESENCIA Y/O ABUNDANCIA DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS/TEXB ALFA EN LA PLACENTA

CARACTERSICAS DEL EMBARAZO/PARTO /RECIN NACIDO

Peso normal a las semanas de gestacin o,pDDT, p,pDDT dieldrn, TEXB alfa Menor peso del nio Mayor peso del nio Menor ndice ponderal p,pDDE y Endosulfanes TEXB fraccin alfa Endosulfanes

CONCLUSIONES

1.La exposicin materno-infantil de la poblacin de estudio a compuestos qumicos contaminantes ambientales es importante tanto cuantitativa como cualitativamente. 2.El nmero medio de pesticidas por placenta es de 7.612.95 residuos de un total de 17 compuestos estudiados. 3.Los niveles medios y la frecuencia de aparicin son similares a las de otros estudios europeos.

4.Factores asociados con la mayor presencia y/o abundancia de pesticidas organoclorados en la placenta han resultado ser en lo que se refiere a la madre, su mayor edad, ndice de masa corporal y exposicin laboral; menor ganancia de peso y nivel educativo; primiparidad y hbito tabquico. 5. En lo referente al padre, una mayor exposicin, el trabajo manual y menor nivel educativo. 6. En lo que se refiere a las caractersticas del embarazo, parto y recin nacido, el peso normal a las semanas de gestacin, menor peso del nio y el menor ndice ponderal.

7. Mayor efecto estrognico del extracto tisular placentario (TEXB) se ha observado en madres mayores. Pero, al contrario de lo que ocurre para el pesticida ms frecuente y uno de los ms abundantes (p,pDDE), TEXB alfa se asocia con mayor peso del recin nacido y peso normal para la edad gestacional, coincidente con lo observado para pesticidas agonistas estrognicos. Esto sugiere un papel de la estrogenicidad del conjunto de xenoestrgenos acumulados en el desarrollo embrionario-fetal.

8. Las consecuencias sobre el desarrollo del nio de la exposicin a pesticidas organoclorados disruptores endocrinos estrognicos y antiandrognicos, no son bien conocidos, pero dado que la exposicin placentaria ocurre en momentos crticos del desarrollo embrionario y fetal, se pueden prever efectos importantes sobre el recin nacido.