PRACTICA 03: CALIBRACION DE UN ESPECTROFOTOMETRO:

INTRODUCCION:
La palabra espectrofotmetro se deriva de la palabra latina spectrum, que significa imagen, y de la palabra griega phos o photos, que significa luz. El espectrofotmetro, construido mediante procesos avanzados de fabricacin, es uno de los principales instrumentos diagnsticos y de investigacin desarrollados por el ser humano. Utiliza las propiedades de la luz y su interaccin con otras sustancias, para determinar la naturaleza de las mismas. En general, la luz de una lmpara de caractersticas especiales es guiada a travs de un dispositivo que selecciona y separa luz de una determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que sale de la muestra es captada y comparada con la intensidad de la luz que incidi en la muestra y a partir de esto se calcula la transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentracin de la sustancia. El espectrofotmetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la concentracin de una sustancia en una solucin, permitiendo as la realizacin de anlisis cuantitativos.

 OBJETIVOS:
Esta prctica tiene por objetivo, calibrar la respuesta de un espectrofotmetro, utilizando el mtodo de adicin estndar.

FUNDAMENTO PARA EL USO DEL ESPECTROFOTOMETRO:

1. Efectuar la calibracin del espectrofotmetro, cada vez que se realiza el anlisis de un grupo de muestras. 2. Mantener cerrada la tapa del portamuestras durante el proceso de medicin, para asegurar una lectura adecuada. 3. Evitar reutilizar las cubetas desechables. 4. Utilizar nicamente cubetas de cuarzo, para efectuar anlisis por debajo de los 310 nm. 5. Evitar el uso de cubetas plsticas, si se utilizan solventes orgnicos. 6. Utilizar cristalera de boro silicato de alta calidad para preparar los estndares. Evitar el uso de cristalera de sodio xido de sodio siempre que sea posible, debido a que el contacto prolongado con los estndares puede permearla y, en consecuencia, producir resultados errneos. 7. Limpiar cuidadosamente las cubetas de vidrio despus de utilizarlas. Desechar aquellas que presenten rayones en la superficie pulida. 8. Utilizar en lo posible reactivos de alta calidad. Reactivos de baja calidad pueden causar contaminacin incluso en concentraciones muy bajas. Los diluyentes utilizados agua o solventes debern estar libres de impurezas. 9. Verificar que las muestras o estndares no se han desgasificado dentro de las cubetas. Este fenmeno produce burbujas sobre la superficie interna de las cubetas y errores en las lecturas. 10. Tener en cuenta, cuando se pretenda utilizar nuevos procedimientos, que no todas las sustancias cumplen con la ley de Beer. Efectuar pruebas de linealidad sobre el rango de concentraciones a ser utilizadas. Se recomienda preparar un

grupo de soluciones fuertes conocidas y verificar los Espectrofotmetro 11 resultados. Los fenmenos que afectan la ley de Beer son los siguientes: a) Las altas concentraciones por asociacin molecular de especies inicas. b) Variaciones en la hidratacin a bajas concentraciones producen cambios en la naturaleza de los iones complejos.

APARATOS Y REACTIVOS:
Espectrofotmetro de absorcin UV/Visible nico 2100. Solucin STOCK (800ug/Ml) de rojo legitimo en agua.

PROCEDIMIENTO:
Solucin STOCK transferir 10mg de rojo legitimo a una fiola de 25ml, disolver y llevar a volumen con agua destilada.

SOLUCION STOCK

Preparar una solucin PATRON de concentracin 20ug/ml. Para lo cual medir 1.25 ml de solucin STOCK y transferir cuantitativamente a fiola de 25 ml llevando a volumen con agua destilada, mezclar por agitacin (30 segundos).

SOLUCION PATRON

Transfiriendo

Enrasado ya con agua destilada

Preparar una solucin Muestra de concentracin 32 ug/mL.Para lo cual medir 2ml de solucin Stock y transferir cuantitativamente a fiola de 25ml, llevando a volumen con agua destilada, mezclar por agitacin (30segundos).

SOLUCION MUUESTRA

 Pipetear 5 alcuotas de 1ml de la solucin de MUESTRA en matraces aforados de 10ml.A cada uno adicionar exactamente 0,00; 0,50; 1.00; 1,50 y 2,00 m l de la solucin PATRON 20ug/Ml y aforar con agua destilada.

PRODUCTO FINAL CON LA SOLUCION MUESTRA YA ENRASADA CON EL AGUA DESTILADA

Luego llevar al espectrofotmetro.

 Registrar la observancia de cada una de estas soluciones a 507nm.

SOLUCION STOCK

SOLUCION PATRON

SOLUCION MUESTRA

RESULTADO FINAL DE TODAS LAS MUESTRAS

 ESQUEMA:
0,0ml

1ml de la solucin de MUESTRA en matraces aforados de 10ml

2ml

0,5ml

adicionar:

1ml

Sol. Muestra 32Ug/m l. 1,5ml 2,0ml

Rojo legitimo

10mg

25ml

1.25ML

Solucin Stock 400 ug/ml.

Abs.507nm

10mg Xmg X

25ml 1ml 0,4mg/ml

Sol. Patrn 20Ug/ml

Convertir:

0,4mg/ml
X X 1000 ug

1ug

400ug 1ml

1.25ml 25ml

=20UG/ML

400ug

UTILIZACIN DE DATOS
CALIBRACION METODO ADICION SOLUCION PATRON ML MUESTRA 1 2 3 4 5 1 1 1 1 1 ML SOLUCION PATRON 0 0.5 1 1.5 2 ABS 0.209 0.257 0.31 0.37 0.41

2.5 y = 0.0942x R = 0.1579

y = 0.0515x + 0.1567 Series1 Series2

1.5

Linear (Series2) Linear (Series2)

0.5

0 1 2 3 4 5

y=mx+b

m= pendiente b= intercepto

0.0515 0.1567

Concentracion = (Absorbancia - Intercepto) / pendiente y mx + b 0.0515x 0.1567

SACANDO CONCENTRACION EN FUNCION DE LA ABSORBANCIA ML MUESTRA 1 2 3 4 5 1 1 1 1 1 ML PATRON 0 0.5 1 1.5 2 ABS 0.209 0.257 0.31 0.37 0.41 Concentracion 1.015533981 1.947572816 2.976699029 4.141747573 4.918446602

CONCLUSIN:
A partir de esta prctica se utiliz rojo legtimo, se logr llevar a la prctica la ley de lambert beer ya que se conoci y utiliz una tcnica de aplicacin para lograr determinar la concentracin de una muestra de concentracin desconocida a partir de su absorbancia y su longitud de onda.

DISCUSIN:
En la solucin stock se torna un color rojizo encendido mientras que en la solucin patrn pierde color al igual en la solucin muestra en esta solucin su color se mantiene en un rojo descolorido demostrando que hay cambios apreciables .preparando las alcuotas en las fiolas de 10 ml la desdolarizacin es notable una vez obtenida las 5 muestras llevamos al espectrofotmetro para sacar los datos La solucin patrn o estndar puede emplearse para verificar la precisin y algunos errores a mayor muestras menos errores podemos obtener en el espectrofotmetro.